CN100394177C - 阿司匹林铜高效液相色谱测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及阿司匹林铜高效液相色谱测定方法，采用包含有紫外检测器的液相色谱仪和十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，特点是其流动相为甲醇∶水∶四氢呋喃∶冰醋酸＝45∶52.5∶2.5∶0.5，检测波长为276nm。采用本发明测定方法分析阿司匹林铜纯度，具有被分析样品溶解速度快，时效高，分析过程中样品分离彻底，分析结果重现性良好的特点。

Description

阿司匹林铜高效液相色谱测定方法

技术领域

本发明涉及阿司匹林铜高效液相色谱测定方法。

背景技术

色谱分析因其具有快捷、灵敏、分离度高的特点，常应用于药物分离和定量分析研究工作中，是药物纯度分析的重要方法之一，是药典所要求的纯度检测必不可少的方法。

阿司匹林铜[Cu(ASA)₂]₂是一种新型阿司匹林衍生物，具有比阿司匹林更高的抗炎抗血栓效果，且毒副作用小，是一种很有发展前途的抗炎抗血栓新药，已列入国家“九·五”攻关项目中进行研究和开发，目前已基本完成临床研究工作。与其研究开发相匹配，[Cu(ASA)₂]₂现行纯度分析方法和杂质测定方法是高效液相色谱内标法。采用该方法时，需将已知量的标准物加入到样品中，以比较标准物与待测物的峰面积并进行定量。其分析流程采用高效液相色谱仪、紫外检测器和十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，其色谱分析条件以苯甲酸为内标物，乙腈为样品溶剂，甲醇∶含0.08％磷酸的水溶液∶乙腈＝55∶45∶5为流动相，其检测波长为235nm。该分析方法存在以下不足之处：①由于内标物的引入，导致样品成分在分析过程中复杂化，从而加大了样品中各成分之间的分离难度。②由于样品在乙腈中溶解度较低，溶解速率缓慢，因此，样品溶解过程费时费力。③流动相中引入磷酸，有助于阿司匹林铜稳定，但酸度过高或过低均会造成阿司匹林铜分解，直接影响样品中各成分的分离度Rs是否符合要求Rs≥1.5。因此高效液相色谱内标法流动相中的0.08％磷酸浓度精确度要求极为苛刻。这给流动相的配制带来一定的难度，不易操作。

发明内容

本发明目的在于提供一种阿司匹林铜[Cu(ASA)₂]₂高效液相色谱测定方法。该方法具有如下特点：样品溶解速度快，时效高；被分析物中各成分间分离彻底；流动相的配制操作简单；分析方法稳定、适应性强。

采用以下技术环节实现上述发明目的。其分析仪器为包含有紫外检测器的液相色谱仪和十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，其流动相为甲醇∶水∶四氢呋喃∶冰醋酸＝45∶52.5∶2.5∶0.5，检测波长为276nm。

为提高阿司匹林铜的溶解度，选用冰醋酸为阿司匹林铜溶剂。

阿司匹林铜极易与溶剂发生配位取代反应，释放出阿司匹林。因此，对阿司匹林铜的含量分析实际上是分析阿司匹林含量。阿司匹林铜主要杂质和降解产物水杨酸铜也发生同样的配位取代反应释放出水杨酸。此外，阿司匹林铜的性状与阿司匹林十分相似，极易水解，生成水杨酸铜。酸则有显著的抑制水解作用，同时阿司匹林在pH＝1～2环境中稳定性好。因此，选用阿司匹林和水杨酸作为测定阿司匹林铜和水杨酸铜的对照品，并采用冰醋酸作为样品溶剂。

阿司匹林铜及其所含杂质水杨酸铜在235nm出现强吸收1.88AU，276nm出现弱吸收0.68AU。醋酸在235nm处也有很强的吸收，在色谱图上反映为有较强的色谱峰，而且严重拖尾至阿司匹林铜色谱峰，干扰阿司匹林铜的分析，但在276nm处吸收明显降低，在色谱图上醋酸色谱峰与阿司匹林铜的色谱峰分离完全。因此，选择276nm为检测波长，并提高阿司匹林铜的浓度，以为满足杂质的检出。

与内标法相比，本发明测定方法流动相在分析过程中不影响阿司匹林铜分离度，并且简化了流动相的配制过程。阿司匹林铜在乙腈中的浓度约为0.2g/1，在冰醋酸中＞1.5g/l，因此与乙腈相比，阿司匹林铜更易溶解于冰醋酸中，从而可大大缩短实际分析中样品的溶解时间，提高了时效。与内标法相比，本发明测定方法的样品中各成分的分离度Rs≥3，样品分离彻底，有助于准确测定待测物的含量。本发明测定方法，由于样品在冰醋酸中溶解度高，且20小时内不发生变化，因此稳定性好，分析结果重现性好，适应性强。

本发明采用冰醋酸为样品溶剂，在25℃下，C₁₈柱(5μm，Φ4.0×250mm)，甲醇∶水∶四氢呋喃∶冰醋酸＝45∶52.5∶2.5∶0.5为流动相，UV-275nm，进样量10-15μl下检测，其色谱图约于20分钟内记录完毕，分离度Rs≥3，完全满足阿司匹林铜及其杂质的含量测定。

本发明分别考察了对阿司匹林铜谱测定方法有重要影响的几个条件：流动相、检测波长、样品溶剂等，并考察了阿司匹林ASA、水杨酸SA的回归方程、相关系数及最小检出限和测量物的精确度与回收率。其中，精确度是向已知浓度样品中加入一定量标样，按上述色谱条件及实验方法测定。利用增量法计算回收率。精密度是于已知浓度样品中加入一定量标样，平行测定6次。所得阿司匹林铜回收率98.47％～99.70％，精密度0.75％；水杨酸铜回收率98.00％～101.59％，精密度0.48％。考察结果分别列于表1～6中。

此外，发明人还考察了本发明分析方法对阿司匹林铜胶囊制剂的适应性。其测量结果见表7～9。结果表明，原料药测定方法适于其胶囊测定。

表8，日内误差：采用纯度99.70％阿司匹林铜原料药，按胶囊配方配成阿司匹林铜胶囊，取100mg精密称定置10ml容量瓶中用冰醋酸定容，分别配制成浓度：10.012、10.031、10.028g/l样品溶液。分上午、中午、下午取样分析，阿司匹林铜的含量分别是99.58～99.92％、99.01～100.41％、98.84～100.16％，相对标准偏差RSD为0.59％，n＝9。

表9，日间误差：采用纯度99.70％阿司匹林铜原料药，按胶囊配方配成阿司匹林铜胶囊，取100mg精密称定置10ml的容量瓶中用冰醋酸定容，分别配制成浓度：10.038、9.948、9.843g/l样品溶液，间隔一天取样分析，阿司匹林铜的含量分别是99.59～100.41％、98.67～99.76％、99.42～99.83％，相对标准偏差RSD为0.44％，n＝9。

阿司匹林铜胶囊制剂中的辅料包括淀粉、微晶纤维素和乳糖这三种白色粉末。按照胶囊配方制得不含阿司匹林铜的空白辅料胶囊，取空白辅料100mg置10ml的容量瓶中，按供试品溶液溶解过程溶解得白色混浊液，过滤，取滤液15μl注入色谱仪，按照上述分析方法测定。结果表明，辅料在整个分析过程中均不出峰，制剂辅料不干扰供试品分析。

取十粒阿司匹林铜胶囊，去壳取内容物，充分混合后取约100mg，精密称定，置10ml的容量瓶中用冰醋酸定容，在室温下超声溶解至沉淀为白色，过滤沉淀，取滤液15μl注入仪，记录阿司匹林、杂质水杨酸峰面积，计算阿司匹林、水杨酸、阿司匹林铜和水杨酸铜含量。表7测定了三批阿司匹林铜胶囊的含量。

具体实施方式

仪器与试剂：

岛津LC-10Avp仪、大连依利特公司Spherisorb型C18柱。分析纯甲醇、美国Fish公司色谱纯四氢呋喃、分析纯阿司匹林、山东新华制药厂纯度＞99.5％水杨酸、分析纯冰醋酸。

色谱条件：

以冰醋酸为样品溶剂，在25℃下，C₁₈柱(5μm，Φ4.0×250mm)，甲醇∶水∶四氢呋喃∶冰醋酸＝45∶52.5∶2.5∶0.5为流动相，UV-276nm下检测，控制进样量介于10-15μl范围内。

测定方法：

取阿司匹林铜样品15mg，精密称定，用冰醋酸定容于10ml容量瓶中，超声溶解得供试品溶液。

取阿司匹林对照品14mg，精密称定，用冰醋酸定容于10ml容量瓶中，采用与供试品相同条件超声溶解得阿司匹林标准液。

取水杨酸对照品7.5mg，精密称定，用冰醋酸定容于25ml容量瓶中，超声溶解后取1ml用冰醋酸定容于10ml容量瓶中。

在上述条件下，各取15μl进样，记录峰面积，按外标法计算阿司匹林ASA及水杨酸SA含量。用下式得[Cu(ASA)₂]₂、[Cu(SA)₂]₂含量：

M₁＝m₁/84.9      M₂＝m₂/81.5

其中M₁、M₂分别为[Cu(ASA)₂]₂、[Cu(SA)₂]₂的含量；m₁、m₂分别为ASA、SA的含量。

表1ASA、SA回归方程、相关系数及最小检出限

由表1的测量结果，ASA、SA的相关系数r接近于1，说明本发明分析方法线性相关；ASA、SA的检出限分别为0.198、0.328μg/ml，即阿司匹林铜、水杨酸铜的检出限为0.233、0.386μg/ml。

表2阿司匹林铜在各种溶剂中的行为

表3流动相选择

表4阿司匹林铜、水杨酸铜回收率

表5精确度测定结果

表6阿司匹林铜原料药测定

表7阿司匹林铜胶囊测定结果

表8阿司匹林铜胶囊日内测定误差

表9阿司匹林铜胶囊日间测定误差

Claims (1)

1.阿司匹林铜高效液相色谱测定方法，分析仪器为包含有紫外检测器的液相色谱仪和十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，其特征含有以下步骤：

(1)取阿司匹林铜样品，用冰醋酸定容于容量瓶中，超声溶解得供试品溶液；

(2)取阿司匹林对照品，用冰醋酸定容于容量瓶中，超声溶解得阿司匹林标准液；

(3)取水杨酸对照品，用冰醋酸定容于容量瓶中，超声溶解后用冰醋酸定容于容量瓶中；

(4)在25℃下，甲醇∶水∶四氢呋喃∶冰醋酸＝45∶52.5∶2.5∶0.5为流动相，UV-276nm下检测，控制进样量介于10-15μl范围内，记录峰面积，按外标法计算阿司匹林ASA及水杨酸SA含量，用下式得[Cu(ASA)₂]₂、[Cu(SA)₂]₂含量：

M₁＝m₁/84.9    M₂＝m₂/81.5

其中M₁、M₂分别为[Cu(ASA)₂]₂、[Cu(SA)₂]₂的含量；m₁、m₂分别为ASA、SA的含量。