CN115327003B - 一种氧化氯吡格雷有关物质的检测方法 - Google Patents
一种氧化氯吡格雷有关物质的检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115327003B CN115327003B CN202210964667.8A CN202210964667A CN115327003B CN 115327003 B CN115327003 B CN 115327003B CN 202210964667 A CN202210964667 A CN 202210964667A CN 115327003 B CN115327003 B CN 115327003B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- acetonitrile
- clopidogrel
- related substances
- mobile phase
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 32
- 239000000126 substance Substances 0.000 title claims abstract description 30
- 239000005552 B01AC04 - Clopidogrel Substances 0.000 title claims abstract description 14
- 229960003009 clopidogrel Drugs 0.000 title claims abstract description 14
- GKTWGGQPFAXNFI-HNNXBMFYSA-N clopidogrel Chemical compound C1([C@H](N2CC=3C=CSC=3CC2)C(=O)OC)=CC=CC=C1Cl GKTWGGQPFAXNFI-HNNXBMFYSA-N 0.000 title description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims abstract description 63
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 60
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 21
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 11
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims abstract description 9
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 4
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 42
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 claims description 13
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 claims description 13
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims description 11
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 6
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 claims description 5
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 claims description 5
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 claims description 4
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims description 3
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 claims description 2
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 28
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 20
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 15
- 229940126062 Compound A Drugs 0.000 description 12
- NLDMNSXOCDLTTB-UHFFFAOYSA-N Heterophylliin A Natural products O1C2COC(=O)C3=CC(O)=C(O)C(O)=C3C3=C(O)C(O)=C(O)C=C3C(=O)OC2C(OC(=O)C=2C=C(O)C(O)=C(O)C=2)C(O)C1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 NLDMNSXOCDLTTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 12
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 10
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 10
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 9
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000010812 external standard method Methods 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 3
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000001738 genotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000012088 reference solution Substances 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- RWOLDZZTBNYTMS-SSDOTTSWSA-N (2r)-2-(2-chlorophenyl)-2-hydroxyacetic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)C1=CC=CC=C1Cl RWOLDZZTBNYTMS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- 125000004182 2-chlorophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(Cl)=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- JXRGUPLJCCDGKG-UHFFFAOYSA-N 4-nitrobenzenesulfonyl chloride Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(S(Cl)(=O)=O)C=C1 JXRGUPLJCCDGKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000244987 Daiswa polyphylla Species 0.000 description 1
- 101000783577 Dendroaspis angusticeps Thrombostatin Proteins 0.000 description 1
- 101000783578 Dendroaspis jamesoni kaimosae Dendroaspin Proteins 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 229940127218 antiplatelet drug Drugs 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009194 climbing Effects 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 1
- IEMGWBMVQLVHEY-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-(3-amino-6,7-dihydro-5h-cyclopenta[b]pyridin-7-yl)acetate Chemical compound NC1=CN=C2C(CC(=O)OCC)CCC2=C1 IEMGWBMVQLVHEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000025 genetic toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 231100000024 genotoxic Toxicity 0.000 description 1
- QWXYZCJEXYQNEI-OSZHWHEXSA-N intermediate I Chemical compound COC(=O)[C@@]1(C=O)[C@H]2CC=[N+](C\C2=C\C)CCc2c1[nH]c1ccccc21 QWXYZCJEXYQNEI-OSZHWHEXSA-N 0.000 description 1
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 239000000106 platelet aggregation inhibitor Substances 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/74—Optical detectors
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
Abstract
本发明涉及药物检测分析领域，具体涉及一种(7aS,2'S)‑2‑氧‑氯吡格雷基毒杂质的检测方法。本发明的(7aS,2'S)‑2‑氧‑氯吡格雷有关物质检测方法采用高效液相色谱法，操作步骤包括：（1）取(7aS,2'S)‑2‑氧‑氯吡格雷，溶剂稀释后，得供试品溶液；（2）将供试品溶液注入高效液相色谱仪中；色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，酸性水溶液、乙腈和醇的混合溶液为流动相，检测波长251±2nm，流速为0.8～1.5ml/min。本发明提供的检测方法专属性好、灵敏度和准确度高，适合用于(7aS,2'S)‑2‑氧‑氯吡格雷的药品注册质量研究。
Description
技术领域
本发明涉及药物检测分析领域，具体涉及一种(7aS, 2'S)-2-氧-氯吡格雷有关物质的检测方法。
背景技术
(7aS, 2'S)-2-氧-氯吡格雷（以下用“化合物A”表示），为氯吡格雷在人体的代谢产物，是一款活性更高且更安全的血小板聚集抑制剂，其化学名为：（S）-2-（2-氯苯基）-2-（（S）-2-氧代-2,6,7,7a-四氢噻吩[3,2-c]并吡啶-5（4H）基）乙酸甲酯：
。
目前化合物A的制备工艺主要为专利CN104245707A报道的路线，以R-(-)-邻氯扁桃酸（SM1）为起始物料，经甲酯化后生成中间体I，与对硝基苯磺酰氯(SM2)缩合生成关键中间体II，再经取代、提纯生成目标化合物A。大致反应路线如下：
。
由上述中间体Ⅱ的合成工艺可知，SM2的残留与各醇类试剂反应可能产生杂质M2Z3、M2Z4、M2Z5、M2Z9，结构如下：
。
该系列化合物属于3类杂质，具有导致基因毒性风险，一旦流入样品将影响成品安全，因此样品质量控制需要增加这些基毒杂质。对于化合物A的基毒杂质目前未见报道，也没有相关质量研究方面信息。因此，开发适合分析化合物A基因杂质的质量研究方法，提高药物质量监控可靠度，是目前该药物质量研究非常重视的亟待解决的技术问题。
发明内容
为解决(7aS, 2'S)-2-氧-氯吡格雷的质量控制需求，本发明提供一种(7aS, 2'S)-2-氧-氯吡格雷有关物质的检测方法。
本发明提供的(7aS, 2'S)-2-氧-氯吡格雷有关物质检测方法，采用高效液相色谱法，至少能够检测大部分杂质，包括但不限于杂质M2Z3、M2Z4、M2Z5和M2Z9。
本发明提供一种(7aS, 2'S)-2-氧-氯吡格雷有关物质检测方法，所述方法采用高效液相色谱法，操作步骤包括：
（1）取(7aS, 2'S)-2-氧-氯吡格雷，溶剂稀释后，得供试品溶液；
（2）将供试品溶液注入高效液相色谱仪中，采用色谱条件检测即可。
在某些实施方式中，上述色谱条件包含：
固定相：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；
流动相：酸性水溶液、乙腈和醇的混合溶液；
检测波长251±2nm。
在某些实施方式中，上述溶剂包含乙腈或醇。
在某些实施方式中，上述流动相中酸性水溶液、乙腈和醇的体积比为45～55：45～39：10～6。
在某些实施方式中，上述酸性水溶液的pH值为1.0～6.0；优选3.0～5.0。
在某些实施方式中，上述酸性水溶液的pH调节剂包含磷酸、盐酸、硫酸、冰醋酸或甲酸。
在某些实施方式中，上述醇包含甲醇、乙醇、丙醇或异丙醇。
在某些实施方式中，上述流动相为水（pH1.0～6.0）、乙腈和异丙醇的混合溶液，且体积比为45～55：45～39：10～6。
在某些实施方式中，上述流动相为水（pH1.0～6.0）、乙腈和异丙醇的混合溶液，且体积比为48～50：42～44：7～9。
在某些实施方式中，上述流动相的酸性水溶液pH值为2.0～6.0。
在某些实施方式中，上述色谱条件的流速为0.5～2.0ml/min；优选0.8～1.5ml/min。
在某些实施方式中，上述色谱条件的柱温为0～40℃；优选10～35℃。
在某些实施方式中，上述有关物质包含基毒杂质；优选地，上述基毒杂质包含M2Z3、M2Z4、M2Z5和M2Z9中的一种或多种。
在某些实施方式中，上述供试品溶液的色谱图中，如果有基毒杂质，单个基毒杂质不超过62.5ppm。
在某些实施方式中，上述供试品溶液的色谱图中，如果有基毒杂质，按外标法以峰面积计算，单个基毒杂质不超过62.5ppm。
在某些实施方式中，上述供试品溶液的色谱图中，如果有基毒杂质，所述基毒杂质的总和不超过200ppm。
有益效果：本发明的(7aS, 2'S)-2-氧-氯吡格雷有关物质检测方法各峰的峰型好，各峰之间分离度均大于1.5，分离度良好，方法专属性好、灵敏度和准确度高，符合质量分析检测要求，适合本品的基毒杂质有关物质质量研究。
附图说明
图1：系统适用性溶液色谱图。
具体实施方式
下面将结合实验例和实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的各例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。各例中未注明的具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为通过市购获得的常规产品。
化合物A在乙腈中溶解，在甲醇中微溶，在水中几乎不溶。以下实验例和实施例所用的化合物A工作对照品（批号：201113-D，纯度99.6%）和供试品（批号：39201001）均来源于成都施贝康生物医药科技有限公司，杂质M2Z3、M2Z4、M2Z5和M2Z9对照品均来源于成都施贝康生物医药科技有限公司，纯度均97%以上。
M2Z3、M2Z4、M2Z5和M2Z9属于3类基毒杂质，无阈值证据，根据ICH M7法规规定，为可接受其风险的摄入量为1.5μg/天，化合物A的临床剂量约为6mg/天，按最大爬坡剂量为24mg/天，通过TTC方法计算出杂质的控制限度为62.5ppm（即1.5μg/24mg）。
实验例1：化合物A有关物质检测方法的方法学考察
⒈各种对照品溶液和供试品溶液的配制
供试品溶液：取样品（化合物A，批号：39201001）适量，加乙腈溶解并定量稀释制成每1ml中约含20mg的溶液。
对照品溶液：取杂质M2Z3、M2Z4、M2Z5和M2Z9适量，用乙腈溶解并定量稀释制成每1ml中各约含1.5μg的混合溶液。
系统适用性溶液：取杂质M2Z3、M2Z4、M2Z5和M2Z9适量，用乙腈溶解并定量稀释制成每1ml约含15μg的溶液，作为杂质储备液；取化合物A适量，加入精密量取的杂质储备液1ml，用乙腈溶解并定量稀释制成每1ml中M2Z3、M2Z4、M2Z5和M2Z9各约含1.5μg、化合物A约含20mg的混合溶液。
说明：上述溶液还可以使用包含甲醇、乙醇、丙醇或异丙醇溶解配制，以及其他可以溶解本品的溶剂。
⒉色谱条件
（1）波长的选择
紫外吸收光谱，分别取M2Z3、M2Z4、M2Z5及M2Z9适量，加乙腈溶解并稀释制成每1ml中含M2Z3、M2Z4、M2Z5、M2Z9各约0.01mg的溶液，照紫外-可见分光光度法（《中国药典》2020年版通则0401）在400～200nm波长范围内扫描测定，结果见表1-1。
通过以上实验数据表明，M2Z3、M2Z4、M2Z5及M2Z9在251nm±2nm波长处均有最大吸收。因此选择251nm作为杂质的检测波长。
（2）色谱条件的筛选与优化
因本品的结构与中间体Ⅱ相似，因此我们在现有技术（CN111943958A）披露的方法基础上进行了筛选，筛选结果见下表1-2。
根据筛选的结果，最终确定了化合物A遗传毒性杂质M2Z3、M2Z4、M2Z5及M2Z9检测的色谱条件：
色谱柱：C18色谱柱 250*4.6mm，5µm；
流动相：水（pH3.8）-乙腈-异丙醇（49：43：8）；
检测波长：251nm；
柱温：20℃；
流速：1.0ml/min；
进样量：10µl。
（3）柱温考察
在上述筛选色谱条件基础上，在其他条件不变的情况下，选择四种色谱柱温度进行试验，柱温1（0℃）、柱温2（10℃）、柱温3（30℃）、柱温4（40℃）。采用上述四种条件，分别对系统适用性溶液进样检测，采集色谱图。
结果说明：四种柱温条件下，峰型均好，主峰与各杂质均能达到良好的分离，杂质峰之间也能达到良好的分离，各峰分离度均大于1.5，且测得的已知杂质含量及杂质个数无明显变化。表明柱温对有关物质测定结果无影响。
（4）流速考察
在上述筛选色谱条件基础上，在其他条件不变的情况下，选择五种色谱流速进行试验，流速1（0.5ml/min）、流速2（0.8ml/min）、流速3（1.0ml/min）、流速4（1.5ml/min）、流速5（2.0ml/min）。采用上述五种条件，分别对系统适用性溶液进样检测，采集色谱图。
结果说明：五种流速条件下，峰型均好，主峰与各杂质均能达到良好的分离，杂质峰之间也能达到良好的分离，各峰分离度均大于1.5，且测得的已知杂质含量及杂质个数无明显变化。表明流速对有关物质测定结果无影响。
（5）色谱柱型号考察
在上述筛选色谱条件基础上，在其他条件不变的情况下，选择三种不同色谱型号：型号1： C18柱，250*4.6mm，5µm，型号2：C18柱，250*4.6mm，3.5µm，型号3：C18柱，250*3.0mm，3.0µm，分别对系统适用性溶液进样检测，采集色谱图。
结果说明：三种型号条件下，峰型均好，主峰与各杂质均能达到良好的分离，杂质峰之间也能达到良好的分离，各峰分离度均大于1.5，且测得的已知杂质含量及杂质个数无明显变化。表明C18柱的型号对有关物质测定结果无影响。此外，本发明人基本尝试过常见的C18柱，都能满足分离度大于1.5，且各峰型良好，证明本发明的色谱方法不受柱子型号和品牌的影响。
（6）流动相水相pH的选择
在上述筛选色谱条件基础上，在其他条件不变的情况下，选择七种流动相的pH进行试验，pH1（1.0）、pH2（2.0）、pH3（3.0）、pH4（4.0）、pH5（5.0）、pH6（6.0）、pH7（7.0），pH调节剂采用磷酸、盐酸、硫酸、冰醋酸或甲酸的任意一种。采用上述条件，分别对系统适用性溶液进样检测，采集色谱图。
结果说明：前六种pH值条件下，无论采用何种pH调节剂，峰型均好，主峰与各杂质均能达到良好的分离，杂质峰之间也能达到良好的分离，各峰分离度均大于1.5，且测得的已知杂质含量及杂质个数无明显变化。但pH7.0的中性条件下，部分杂质无法有效分离或部分杂质峰的峰型不对称。表明酸性流动相pH值对有关物质测定结果无影响。
实验例2：方法验证
本实验下所用溶液及其配制同实验例1，色谱条件如下：
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水（磷酸调节pH值至3.8）-乙腈-异丙醇（49：43：8）为流动相；检测波长为251nm；柱温20℃；流速为1.0ml/min；进样体积10μl。
⒈专属性
取各溶液在拟定的色谱条件下检测，试验结果见表2-1，系统适用性溶液的色谱图见附图1。
以上试验结果表明，在拟定的色谱条件下，各色谱峰均能达到基线分离，溶剂峰及供试品中的杂质峰对被检测峰无干扰，表明拟定色谱条件专属性良好。此外，本色谱条件还能有效分离如下结构的异构体杂质P1Z2，保留时间为15.519min，分离度为7.5，峰型良好。
⒉检测线、定量限
取M2Z3、M2Z4、M2Z5及M2Z9适量，用乙腈稀释制成一定浓度的对照品溶液，当峰高约为基线噪音的3倍，即信噪比约等于3:1时，为M2Z3、M2Z4、M2Z5及M2Z9的检测限；当峰高约为基线噪音的10倍，即信噪比约等于10:1时，为M2Z3、M2Z4、M2Z5及M2Z9的定量限。结果见表2-2。
以上结果表明本品杂质检查拟定的进样浓度为20mg/ml，进样量为10μl，绝对进样量为200000ng，远大于M2Z3、M2Z4、M2Z5及M2Z9的检测限浓度的100000倍，表明拟定的进样浓度能够保证各杂质的有效检出。
⒊线性及范围
取M2Z3、M2Z4、M2Z5及M2Z9适量，精密称定，加乙腈稀释制成相当于限度浓度5%、10%、20%、50%、80%、100%、150%、200%的对照品溶液。照拟定的色谱条件，取线性溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图。以进样浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，结果见表2-3。
以上试验结果表明M2Z3浓度在0.0843μg/ml～3.3734μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系；M2Z4浓度在0.0766μg/ml～3.0622μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系；M2Z5浓度在0.0775μg/ml～3.0997μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系；及M2Z9浓度在0.0794μg/ml～3.1779μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系。
⒋精密度
取100%限度浓度对照品溶液，连续进样6次，记录色谱图，考察进样精密度，其结果见表2-4。
以上结果显示，连续进样6次，M2Z3峰面积RSD为0.27%，M2Z4峰面积RSD为0.32%，M2Z5峰面积RSD为0.44%，M2Z9峰面积RSD为0.42%，满足液相色谱测定的精密度要求。
⒌耐用性
为了验证拟定的色谱条件发生微小变动时，测定结果的准确性不受影响的程度，对拟定色谱条件的耐用性进行了考察。
取加入M2Z3、M2Z4、M2Z5及M2Z9限度浓度的供试品溶液，按拟定条件进行测定。试验条件包括柱温变化±5℃、流速变化±0.2ml/min、流动相各组分体积比变化±2、流动相中水相的pH值变化±2，以及变化不同型号色谱柱。
试验结果表明，当流速、柱温、色谱柱及流动相发生微小变动时，M2Z3、M2Z4、M2Z5及M2Z9均能达到良好的分离，表明拟定方法耐用性好。
⒍回收率
为了验证方法的准确性，采用了加样回收的方式进行考察。
取M2Z3、M2Z4、M2Z5及M2Z9杂质对照品适量，按拟定方法制备供试品溶液，在供试品溶液中分别加入限度浓度10%、50%、100%的杂质对照品溶液后进样测定，计算回收率。试验结果见表2-5、表2-6。
以上试验结果表明，9份样品中，M2Z3回收率在98.03%～101.46%之间，平均回收率为：99.8%，RSD为1.17%；M2Z4回收率在99.51%～102.18%之间，平均回收率为：100.9%，RSD为0.79%；M2Z5回收率在96.13%～100.99%之间，平均回收率为：99.0%，RSD为1.52%；M2Z9回收率在102.18%～104.97%之间，平均回收率为：103.7%，RSD为0.89%；满足相关技术要求，表明拟定色谱条件准确度良好。
⒎重现性试验
由不同实验室的分析人员测定同一批样品，考察测定结果的接近程度。试验结果表明，12份样品M2Z3、M2Z4、M2Z5、M2Z9均未检出；表明拟定的杂质测定方法重现性良好。
实施例1：有关物质测定1（流动相各组分体积比为45:45:10）
各溶液配制和色谱条件同实验例2，其中色谱条件流动相的各溶剂体积比由49：43：8改为45:45:10，其他条件不变。
测定法：将各溶液注入色谱系统，采集色谱图。
实施例2：有关物质测定2（流动相各组分体积比为55:39:6）
各溶液配制和色谱条件同实验例2，其中色谱条件流动相的各溶剂体积比由49：43：8改为55:39:6，其他条件不变。
测定法：将各溶液注入色谱系统，采集色谱图。
实施例3：有关物质测定3（流动相pH为1.0）
各溶液配制和色谱条件同实验例2，其中色谱条件流动相的pH由3.8改为1.0，其他条件不变。
测定法：将各溶液注入色谱系统，采集色谱图。
实施例4：有关物质测定4（流动相pH为6.0）
各溶液配制和色谱条件同实验例2，其中色谱条件流动相的pH由3.8改为6.0，其他条件不变。
测定法：将各溶液注入色谱系统，采集色谱图。
实施例5：有关物质测定5（流动相pH调节剂为盐酸）
各溶液配制和色谱条件同实验例2，其中色谱条件流动相的pH调节剂由磷酸改为盐酸，其他条件不变。
测定法：将各溶液注入色谱系统，采集色谱图。
实施例6：有关物质测定6（流动相pH调节剂为冰醋酸）
各溶液配制和色谱条件同实验例2，其中色谱条件流动相的pH调节剂由磷酸改为冰醋酸，其他条件不变。
测定法：将各溶液注入色谱系统，采集色谱图。
实施例7：有关物质测定7（流动相中醇类为甲醇）
各溶液配制和色谱条件同实验例2，其中色谱条件流动相的溶剂种类中的醇由异丙醇改为甲醇，其他条件不变。
测定法：将各溶液注入色谱系统，采集色谱图。
实施例8：有关物质测定8
各溶液配制和色谱条件同实验例2，其中流速由原来的1.0ml/min改为2.0ml/min，其他条件不变。
测定：将各溶液注入色谱系统，采集色谱图。
实施例9：有关物质测定9
各溶液配制和色谱条件同实验例2，其中流速由原来的1.0ml/min改为0.5ml/min，其他条件不变。
测定：将各溶液注入色谱系统，采集色谱图。
数据统计和总结：汇总实验例2“专属性项下”和“重现性试验样品”以及上述实施例1～9的各色谱图，统计峰面积、保留时间和分离度，结果显示：（1）各系统适用性溶液色谱图中：各峰的峰型好，各主峰与杂质峰以及杂质峰与杂质峰之间的分离度位于1.5～15.0之间，均大于1.5，各峰之间分离度较好，表明各方法专属性好，符合质量分析要求。（2）各供试品溶液的色谱图中：各主峰化合物A，按外标法以峰面积计算，各含量与实验例2的差值均在0.1%以内；杂质M2Z3、M2Z4、M2Z5和M2Z9均未检出，异构体杂质P1Z2均有检出，且按自身对照法以峰面积计算，各含量相较于实验例2的差值在0.1%以内，表明拟定的杂质测定方法准确度高、重现性良好。据此可以确定本品的质量控制标准，如果样品中有基毒杂质，按外标法以峰面积计算，单个基毒杂质不超过62.5ppm，基毒杂质的总和不超过200ppm。
Claims (8)
1.一种(7aS, 2'S)-2-氧-氯吡格雷及其有关物质的检测方法，其特征在于，所述方法采用高效液相色谱法，操作步骤包括：
取(7aS, 2'S)-2-氧-氯吡格雷，溶剂稀释后，得供试品溶液；
将供试品溶液注入高效液相色谱仪中，采用色谱条件检测即可；
系统适用性溶液：取有关物质适量，用乙腈溶解并定量稀释制成杂质储备液；取(7aS,2'S)-2-氧-氯吡格雷适量，加入精密量取的杂质储备液，用乙腈溶解并定量稀释制成混合溶液；
将系统适用性溶液注入高效液相色谱仪中，采取色谱条件检测即可；
所述色谱条件包含：
固定相：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；
流动相：酸性水溶液、乙腈和醇的混合溶液；
检测波长251±2nm；
所述流动相中酸性水溶液、乙腈和醇的体积比为45～55：45～39：10～6；
所述有关物质包含基毒杂质；所述基毒杂质包含M2Z3、M2Z4、M2Z5和M2Z9中的一种或多种；
所述M2Z3、M2Z4、M2Z5和M2Z9的结构分别如下：
。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述溶剂包含乙腈或醇。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述酸性水溶液的pH值为1.0～6.0。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述酸性水溶液的pH调节剂包含磷酸、盐酸、硫酸、冰醋酸或甲酸。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述醇包含甲醇、乙醇、丙醇或异丙醇。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相为水（pH1.0～6.0）、乙腈和异丙醇的混合溶液，且体积比为45～55：45～39：10～6。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述供试品溶液的色谱图中，如果有基毒杂质，单个基毒杂质不超过62.5ppm。
8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述供试品溶液的色谱图中，如果有基毒杂质，所述基毒杂质的总和不超过200ppm。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210964667.8A CN115327003B (zh) | 2022-08-12 | 2022-08-12 | 一种氧化氯吡格雷有关物质的检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210964667.8A CN115327003B (zh) | 2022-08-12 | 2022-08-12 | 一种氧化氯吡格雷有关物质的检测方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115327003A CN115327003A (zh) | 2022-11-11 |
| CN115327003B true CN115327003B (zh) | 2024-03-12 |
Family
ID=83924658
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210964667.8A Active CN115327003B (zh) | 2022-08-12 | 2022-08-12 | 一种氧化氯吡格雷有关物质的检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115327003B (zh) |
Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2012123958A1 (en) * | 2011-02-14 | 2012-09-20 | Cadila Healthcare Limited | Highly pure salts of clopidogrel free of genotoxic impurities |
| CN103308636A (zh) * | 2013-04-28 | 2013-09-18 | 山东信立泰药业有限公司 | 一种D-(+)-α-(2-噻吩乙胺基)-α-(2-氯苯基)乙酸甲酯或其盐的质量控制方法及其在氯吡格雷生产中的应用 |
| CN104245707A (zh) * | 2011-06-27 | 2014-12-24 | Ipca实验室有限公司 | 抗血栓化合物 |
| CN106324114A (zh) * | 2015-06-30 | 2017-01-11 | 天津药物研究院有限公司 | 一种复方制剂中硫酸氢氯吡格雷特定杂质的检测方法 |
| CN108760940A (zh) * | 2018-08-03 | 2018-11-06 | 安徽省金楠医疗科技有限公司 | 一种硫酸氢氯吡格雷检测方法 |
| CN111943958A (zh) * | 2019-05-17 | 2020-11-17 | 成都施贝康生物医药科技有限公司 | 四氢噻吩并吡啶化合物的b晶型及制法、组合物和应用 |
| CN112067723A (zh) * | 2020-09-18 | 2020-12-11 | 北京华亘安邦科技有限公司 | 药物中对甲苯磺酸酯的uplc-ms检测方法 |
| WO2021070200A2 (en) * | 2019-10-08 | 2021-04-15 | Ipca Laboratories Limited | Stable compositions of (7as,2's)-2-oxoclopidogrel and its pharmaceutical salts |
| CN114113346A (zh) * | 2020-08-25 | 2022-03-01 | 石药集团恩必普药业有限公司 | 一种达比加群酯原料药或制剂中对甲苯磺酸乙酯、对甲苯磺酸异丙酯的检测方法 |
| CN114441651A (zh) * | 2020-10-30 | 2022-05-06 | 康普药业股份有限公司 | 一种分离苯磺酸氨氯地平基因毒性杂质方法 |
-
2022
- 2022-08-12 CN CN202210964667.8A patent/CN115327003B/zh active Active
Patent Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2012123958A1 (en) * | 2011-02-14 | 2012-09-20 | Cadila Healthcare Limited | Highly pure salts of clopidogrel free of genotoxic impurities |
| CN104245707A (zh) * | 2011-06-27 | 2014-12-24 | Ipca实验室有限公司 | 抗血栓化合物 |
| CN103308636A (zh) * | 2013-04-28 | 2013-09-18 | 山东信立泰药业有限公司 | 一种D-(+)-α-(2-噻吩乙胺基)-α-(2-氯苯基)乙酸甲酯或其盐的质量控制方法及其在氯吡格雷生产中的应用 |
| CN106324114A (zh) * | 2015-06-30 | 2017-01-11 | 天津药物研究院有限公司 | 一种复方制剂中硫酸氢氯吡格雷特定杂质的检测方法 |
| CN108760940A (zh) * | 2018-08-03 | 2018-11-06 | 安徽省金楠医疗科技有限公司 | 一种硫酸氢氯吡格雷检测方法 |
| CN111943958A (zh) * | 2019-05-17 | 2020-11-17 | 成都施贝康生物医药科技有限公司 | 四氢噻吩并吡啶化合物的b晶型及制法、组合物和应用 |
| WO2021070200A2 (en) * | 2019-10-08 | 2021-04-15 | Ipca Laboratories Limited | Stable compositions of (7as,2's)-2-oxoclopidogrel and its pharmaceutical salts |
| CN114113346A (zh) * | 2020-08-25 | 2022-03-01 | 石药集团恩必普药业有限公司 | 一种达比加群酯原料药或制剂中对甲苯磺酸乙酯、对甲苯磺酸异丙酯的检测方法 |
| CN112067723A (zh) * | 2020-09-18 | 2020-12-11 | 北京华亘安邦科技有限公司 | 药物中对甲苯磺酸酯的uplc-ms检测方法 |
| CN114441651A (zh) * | 2020-10-30 | 2022-05-06 | 康普药业股份有限公司 | 一种分离苯磺酸氨氯地平基因毒性杂质方法 |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| ( S) -2-氧氯吡格雷的合成新方法;王添艳等;中国药物化学杂志;第30卷(第7期);416-418, 427 * |
| Identification and characterization of a principal oxidation impurity in clopidogrel drug substance and drug product;Mohan, A 等;ScienceDirect(第47期);183-189 * |
| LC-MS/MS法检测盐酸鲁拉西酮中磺酸酯基因毒杂质;龚心实;张斐;董静;刁旭;李薇;杭太俊;;药学与临床研究;21(第03期);235-238 * |
| LC-MS测定醋酸甲羟孕酮中对甲苯磺酸甲酯及对甲苯磺酸乙酯的含量;芦飞;邢珊珊;王咏;;中国现代应用药学;35(第05期);657-659 * |
| LC-QQQ-MS/MS 分析苯磺酸氨氯地平中痕量苯磺酸酯类基因毒性杂质;曹琳等;中国现代应用药学;第37卷(第11期);1296-1300 * |
| UHPLC-MS法测定2种硫酸氢氯吡格雷晶型中的基因毒性杂质对甲苯磺酸甲酯;钱建钦;张云峰;王建;陈悦;;药物分析杂志;37(第11期);1994-1999 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN115327003A (zh) | 2022-11-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107607632A (zh) | 顶空气相色谱法测定银杏叶提取物中残留溶剂的方法 | |
| CN113125611A (zh) | 叶酸中杂质6-甲酰蝶呤含量的检测方法 | |
| CN115327003B (zh) | 一种氧化氯吡格雷有关物质的检测方法 | |
| CN113219089B (zh) | 一种柱后衍生-液相色谱检测尿素的方法 | |
| CN114137120A (zh) | 一种雷帕霉素药物支架中有关物质的检测方法 | |
| CN107976489B (zh) | 一种测定普瑞巴林中残留吡啶的方法 | |
| CN115327005B (zh) | 一种氧化氯吡格雷有关物质的检测方法 | |
| CN115656394A (zh) | 一种氧化氯吡格雷有关物质的检测方法 | |
| CN115327004B (zh) | 一种氧化氯吡格雷粗品的检测方法 | |
| CN101592638A (zh) | 卷烟主流烟气中有害酚的分离检测方法 | |
| CN115327006B (zh) | 一种氧化氯吡格雷异构体的检测方法 | |
| CN112630349B (zh) | 一种Cangrelor中间体杂质的HPLC检测方法 | |
| CN115598267B (zh) | 一种格列齐特中潜在遗传毒性杂质的分析方法 | |
| CN112611819B (zh) | 一种苯磷硫胺原料及其制剂中有关物质的测定方法 | |
| CN111175413B (zh) | 一种磺丁基倍他环糊精钠原料或其制剂中4-氯丁醇醋酸酯含量的检测方法 | |
| CN116754705B (zh) | 一种醋酸及醋酸根含量的检测方法 | |
| CN113092622B (zh) | 一种检测样品中酚类杂质含量的前处理方法 | |
| CN112595793B (zh) | 一种基于苯酚测定的地龙注射液检测方法 | |
| CN115453025B (zh) | 一种水合氯醛的有关物质检测方法 | |
| CN114755344B (zh) | 测定鼠麴草提取物中二咖啡酰奎宁酸含量的方法 | |
| CN113376294A (zh) | 枸橼酸托法替布中氰基乙酸乙酯的分析方法 | |
| CN114216985A (zh) | 一种异山梨醇中硫酸二异丙酯的检验方法 | |
| CN114609277A (zh) | 一种复方乙酰水杨酸片的含量测定方法 | |
| CN115436541A (zh) | 一种水合氯醛的含量检测方法 | |
| CN118150745A (zh) | 一种同时测定莱博雷生原料药中多类基因毒性杂质的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |