CN117384972B - 一种利用酵母菌发酵提升松花粉抗氧化活性的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于食品生物加工技术领域,涉及一种利用酵母菌发酵提升松花粉抗氧化活性的方法,包括松花粉培养基制备、酵母菌的接种及发酵得到发酵产物。本发明通过酵母菌进行发酵产生纤维素酶、糖苷酶等,破坏酚类成分与细胞壁、纤维素等大分子的结合,增加破壁松花粉的多酚得率,进而提升破壁松花粉的抗氧化能力,提高松花粉的利用价值和利用程度,增加松花粉发酵产品的竞争力;酵母菌具有易培养、代谢旺盛、简单易得等优势;与米根霉发酵相比,酵母菌是一种应用范围更广、产量更大、可以用于保健食品的益生菌;与茯苓菌发酵相比,对总酚及抗氧化的提升幅度更高。
Description
技术领域
本发明属于食品生物加工技术领域,尤其涉及一种利用酵母菌发酵提升松花粉抗氧化活性的方法。
背景技术
松花粉是我国药食同源花粉品种,是松科植物马尾松(Pinus massoniana Lamb.)或同属数种植物的雄性生殖细胞,富含多种活性物质,包括多酚、甾醇、多糖等,具有广阔的开发应用前景,受到保健品行业的关注。然而,许多小分子活性物质与淀粉、纤维素等生物大分子物质以结合状态存在,使其实际生物利用度不高,难以被机体吸收利用。发酵法一方面可利用微生物生长过程中分泌的各种蛋白酶、纤维素酶和糖苷酶等酶破坏活性小分子与生物大分子的连接,使小分子活性物质从结合态向游离态转变,提高其中小分子生物活性物质的水平,另一方面还可以通过生物转化来提高活性成分含量,最终能提升其相应的生物活性。
酵母菌在食品、酿造、医疗保健、生物工程等行业中都有广泛的应用。酵母菌发酵产物为纯生物产品,不含任何化学性成分,可消化率高、价格低廉。因此,本发明拟采用酵母菌发酵松花粉,用于提升其中的酚类组分水平,从而提升其抗氧化活性。
发明内容
本发明针对上述现有技术,提供一种利用酵母菌发酵提升松花粉抗氧化活性的方法,具体的技术方案如下:
一种利用酵母菌发酵提升松花粉抗氧化活性的方法,包括如下步骤:
(1)取破壁松花粉溶于去离子水中,搅拌均匀,得到松花粉培养基;
(2)调整步骤(1)中的松花粉培养基的pH值,pH值调整为5~6;
(3)向步骤(2)中的松花粉培养基中加入葡萄糖;
(4)将步骤(3)中的松花粉培养基沸水浴加热至中心温度达到80~90℃,置于80~90℃水浴中保温30min,保温时间到后立即冰水降温至室温;
(5)向步骤(4)的松花粉培养基中加入酵母菌液,在28~30℃、180~200r/min条件下发酵1-10d,得到发酵产物。
本发明采用酵母菌发酵松花粉,用于提升松花粉中的酚类组分水平,从而提升其抗氧化活性。酵母发酵可以基于其产生的丰富的酶类,将结合态多酚转化为游离态多酚,并通过莽草酸途径将葡萄糖转化为酚类成分,进而提高发酵松花粉的抗氧化活性,在提升天然食品原料中的高质量和高活性成分的同时,做到无毒无残留。同时有研究表明可通过酿酒酵母发酵增加产物的抗氧化及抗炎成分,通过乳酸克鲁维酵母提高多酚含量。
进一步地,所述酵母菌为酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae CICC®1002、乳酸克鲁维酵母Kluyveromyces lactis CICC®1572或酿酒酵母Saccharomyces cerevisiaeCICC®1905。
进一步地,所述步骤(1)中,所述破壁松花粉与所述去离子水的重量比为1:20。
进一步地,所述步骤(2)中,采用4mol/LNaOH和/或4mol/LHCl调节pH值。
进一步地,所述步骤(3)中,所述葡萄糖的质量分数为1-3%;优选2%。
进一步地,所述步骤(5)中,所述酵母菌菌液与松花粉培养基的体积比为1:1-15,优选1:10,其中酵母菌菌液的浓度为1×107cfu/mL。
本发明的有益效果为:
本发明是一种利用酵母菌进行发酵提升破壁松花粉中具有抗氧化活性的酚类组分水平及其抗氧化活性的新工艺,通过发酵产生纤维素酶、糖苷酶等,破坏酚类成分与细胞壁、纤维素等大分子的结合,增加破壁松花粉的多酚得率,并通过生物转化提供活性成分含量,进而提升破壁松花粉的抗氧化能力,提高松花粉的利用价值和利用程度,增加松花粉发酵产品的竞争力。
酵母菌具有易培养、代谢旺盛、简单易得等优势;与米根霉发酵相比,酵母菌是一种应用范围更广、产量更大、可以用于保健食品的益生菌;与茯苓菌发酵相比,本发明对总酚及抗氧化的提升幅度更高。
具体实施方式
以下结合实例对本发明的原理和特征进行描述,所举实例只用于解释本发明,并非用于限定本发明的范围。
实施例1:
一种利用酵母菌发酵提升松花粉抗氧化活性的方法,条件优化实验:
1.发酵菌种优化:
(1)取破壁松花粉溶于去离子水中,搅拌均匀,其中,破壁松花粉与去离子水的重量比为1:20,得到松花粉培养基;
(2)采用4mol/LNaOH和4mol/LHCl调整步骤(1)中的松花粉培养基的pH值,pH值调整为5;
(3)将步骤(2)中的松花粉培养基沸水浴加热至中心温度达到85℃,置于85℃水浴中保温30min,保温时间到后立即冰水降温至室温;
(4)分别按接种量为10%的菌种比例接种酿酒酵母Saccharomyces cerevisiaeCICC®1002、紫色红曲Monascus purpureus CICC®40224,在30℃、200r/min条件下发酵4d,得到发酵产物;
(5)将发酵产物保存于-20℃;
以未发酵的松花粉水提物为对照,实验结束后,测定并比较发酵前后的总酚含量和ABTS自由基清除能力,见表1。
表1发酵菌种优化结果表
由表1可知,酵母菌发酵后总酚和抗氧化能力显著提升,且明显优于紫色红曲,酵母菌发酵对总酚的提升效果更好。为了更好的提升发酵松花粉的生理活性,同时考虑到酵母菌具有生长周期短、发酵能力强、易进行大规模培养等优点,因此选择采用酵母菌发酵。
2.发酵接菌量优化:
(1)取破壁松花粉溶于去离子水中,搅拌均匀,其中,破壁松花粉与去离子水的重量比为1:20,得到松花粉培养基;
(2)调整步骤(1)中的松花粉培养基的pH值,pH值调整为5;
(3)将步骤(2)中的松花粉培养基沸水浴加热至中心温度达到85℃,置于85℃水浴中保温30min,保温时间到后立即冰水降温至室温;
(4)分别按接种量为1%、5%、10%、15%的菌种比例接种酿酒酵母Saccharomycescerevisiae CICC®1002,在30℃、200r/min条件下发酵5d,得到发酵产物;
(5)将发酵产物保存于-20℃;
以未发酵的松花粉水提物为对照,实验结束后,测定并比较发酵前后的总酚含量和ABTS自由基清除能力,见表2。
表2发酵菌种优化结果表
由表2可知,在接菌量为10%时总酚含量和ABTS自由基清除能力提升最显著,因此选用接菌量为10%用于发酵。
3.外源葡萄糖添加量优化:
(1)取破壁松花粉溶于去离子水中,搅拌均匀,其中,破壁松花粉与去离子水的重量比为1:20,得到松花粉培养基;
(2)调整步骤(1)中的松花粉培养基的pH值,pH值调整为5;
(3)分别向松花粉培养基中加入质量分数0%、1%、2%、3%的葡萄糖;
(4)将步骤(3)中的松花粉培养基沸水浴加热至中心温度达到85℃,置于85℃水浴中保温30min,保温时间到后立即冰水降温至室温;
(5)按接种量为10%的菌种比例接种酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae CICC®1002,在30℃、200r/min条件下发酵5d,得到发酵产物;
(6)将发酵产物保存于-20℃;
以未发酵的松花粉水提物为对照,实验结束后,测定并比较发酵前后的总酚含量和ABTS自由基清除能力,见表3。
表3外源葡萄糖添加量优化结果表
由表3可知,随着外源葡萄糖添加量的升高,总酚含量和ABTS自由基清除能力上升,在外源葡萄糖添加量为2%时总酚含量和ABTS自由基清除能力提升最显著,考虑到提升效果和降低成本与能耗,因此选用外源葡萄糖添加量为2%用于发酵。
实施例2
一种利用酵母菌发酵提升松花粉抗氧化活性的方法,步骤如下:
(1)取破壁松花粉溶于去离子水中,搅拌均匀,其中,破壁松花粉与去离子水的重量比为1:20,得到松花粉培养基;
(2)调整步骤(1)中的松花粉培养基的pH值,pH值调整为5;
(3)向松花粉培养基中加入质量分数为2%的葡萄糖;
(4)将步骤(3)中的松花粉培养基沸水浴加热至中心温度达到85℃,置于85℃水浴中保温30min,保温时间到后立即冰水降温至室温;
(5)按接种量为10%的菌种比例接种酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae CICC®1002,在30℃、200r/min条件下发酵1d,得到发酵产物;
(6)将发酵产物保存于-20℃;
本实施例中松花粉发酵液的总酚含量可达3.55mg/g松花粉,对照组为2.17mg/g松花粉;ABTS自由基清除能力42.85μmol/g松花粉,对照组为32.55μmol/g松花粉。发酵后的花粉总酚含量和抗氧化能力显著增加。
实施例3
一种利用酵母菌发酵提升松花粉抗氧化活性的方法,步骤如下:
(1)取破壁松花粉溶于去离子水中,搅拌均匀,其中,破壁松花粉与去离子水的重量比为1:20,得到松花粉培养基;
(2)调整步骤(1)中的松花粉培养基的pH值,pH值调整为5;
(3)向松花粉培养基中加入质量分数为2%的葡萄糖;
(4)将步骤(3)中的松花粉培养基沸水浴加热至中心温度达到85℃,置于85℃水浴中保温30min,保温时间到后立即冰水降温至室温;
(5)按接种量为10%的菌种比例接种酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae CICC®1002,在30℃、200r/min条件下发酵7d,得到发酵产物;
(6)将发酵产物保存于-20℃;
本实施例中松花粉发酵液的总酚含量可达4.47mg/g松花粉,对照组为2.17mg/g松花粉;ABTS自由基清除能力61.71μmol/g松花粉,对照组为32.55μmol/g松花粉。发酵后的花粉总酚含量和抗氧化能力显著增加。
实施例4
一种利用酵母菌发酵提升松花粉抗氧化活性的方法,步骤如下:
(1)取破壁松花粉溶于去离子水中,搅拌均匀,其中,破壁松花粉与去离子水的重量比为1:20,得到松花粉培养基;
(2)调整步骤(1)中的松花粉培养基的pH值,pH值调整为5;
(3)向松花粉培养基中加入质量分数为2%的葡萄糖;
(4)将步骤(3)中的松花粉培养基沸水浴加热至中心温度达到85℃,置于85℃水浴中保温30min,保温时间到后立即冰水降温至室温;
(5)按接种量为10%的菌种比例接种酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae CICC®1905,在30℃、200r/min条件下发酵5d,得到发酵产物;
(6)将发酵产物保存于-20℃;
以未发酵的松花粉水提物为对照,实验结束后,测定并比较发酵前后的总酚含量和ABTS自由基清除能力。
本实施例中松花粉发酵液的总酚含量可达4.20mg/g松花粉,对照组为2.17mg/g松花粉;ABTS自由基清除能力51.83μmol/g松花粉,对照组为32.55μmol/g松花粉。发酵后的花粉总酚含量和抗氧化能力显著增加。
实施例5
一种利用酵母菌发酵提升松花粉抗氧化活性的方法,步骤如下:
(1)取破壁松花粉溶于去离子水中,搅拌均匀,其中,破壁松花粉与去离子水的重量比为1:20,得到松花粉培养基;
(2)调整步骤(1)中的松花粉培养基的pH值,pH值调整为5;
(3)向松花粉培养基中加入质量分数为2%的葡萄糖;
(4)将步骤(3)中的松花粉培养基沸水浴加热至中心温度达到85℃,置于85℃水浴中保温30min,保温时间到后立即冰水降温至室温;
(5)按接种量为10%的菌种比例接种乳酸克鲁维酵母Kluyveromyces lactis CICC®1572,在30℃、200r/min条件下发酵3d,得到发酵产物;
(6)将发酵产物保存于-20℃;
本实施例中松花粉发酵液的总酚含量可达4.97mg/g松花粉,对照组为2.17mg/g松花粉;ABTS自由基清除能力59.61μmol/g松花粉,对照组为32.55μmol/g松花粉。发酵后的花粉总酚含量和抗氧化能力显著增加。
以上所述仅为本发明的较佳实施例,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种利用酵母菌发酵提升松花粉抗氧化活性的方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)取破壁松花粉溶于去离子水中,搅拌均匀,得到松花粉培养基;
(2)调整步骤(1)中的松花粉培养基的pH值,pH值调整为5~6;
(3)向步骤(2)中的松花粉培养基中加入葡萄糖溶液;
(4)将步骤(3)中的松花粉培养基沸水浴加热至中心温度达到80~90℃,置于80~90℃水浴中保温30min,保温时间到后立即冰水降温至室温;
(5)向步骤(4)的松花粉培养基中加入酵母菌液,在28~30℃、180~200r/min条件下发酵1-10d,得到发酵产物;
所述酵母菌为酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae CICC®1002、乳酸克鲁维酵母Kluyveromyces lactis CICC®1572或酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae CICC®1905。
2.根据权利要求1所述的利用酵母菌发酵提升松花粉抗氧化活性的方法,其特征在于,所述步骤(1)中,所述破壁松花粉与所述去离子水的重量比为1:20。
3.根据权利要求1所述的利用酵母菌发酵提升松花粉抗氧化活性的方法,其特征在于,所述步骤(2)中,采用4mol/LNaOH和/或4mol/LHCl调节pH值。
4.根据权利要求1所述的利用酵母菌发酵提升松花粉抗氧化活性的方法,其特征在于,所述步骤(3)中,所述葡萄糖的质量分数为1-3%。
5.根据权利要求4所述的利用酵母菌发酵提升松花粉抗氧化活性的方法,其特征在于,所述步骤(3)中,所述葡萄糖的质量分数为2%。
6.根据权利要求1所述的利用酵母菌发酵提升松花粉抗氧化活性的方法,其特征在于,所述步骤(5)中,所述酵母菌菌液与松花粉培养基的体积比为1:1-15,所述酵母菌菌液的浓度为1×107 cfu/mL。
7.根据权利要求6所述的利用酵母菌发酵提升松花粉抗氧化活性的方法,其特征在于,所述步骤(5)中,所述酵母菌菌液与松花粉培养基的体积比为1:10。
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