CN109806190A - 一种松花粉的发酵提取工艺 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种松花粉的发酵提取工艺。本发明工艺中，酵母菌能够协助富集发酵液中的黄酮类物质，提升产品的抗衰作用；明串珠菌有效将松花粉中的多糖分解成低聚糖或者单糖，制造更多的活性末端，利于活性表达；乳酸菌产生大量酸性物质，能够起到美白、去除角质的作用；蛋白酶酶解，能够减少大分子蛋白在体系中所占的比例。本发明的松花粉发酵工艺，增加了松花粉提取物的透皮吸收性能，强化了美白及抗氧化功能的表达，降低了松花粉的致敏风险。

Description

一种松花粉的发酵提取工艺

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种松花粉的发酵提取工艺。

背景技术

自古松花粉就是食疗、美容之珍品，其在护肤品上的应用具有悠久历史，清《本草从新》记载松花粉“善糁诸痘疮伤损并湿烂不痂”。现代科学研究表明，松花粉含有多种维生素、蛋白质、氨基酸、脂肪等营养成分，被誉为“超级微型营养库”。

传统松花粉的提取工艺中，溶剂多采用水提或者醇提的方式，作为一种保健食品或者化妆品的研究方式，由于溶剂中的蛋白、多糖等物质种类较丰富，具有致敏风险，且透皮吸收功能较差。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种松花粉的发酵提取工艺。

本发明提供一种松花粉的发酵提取工艺，步骤如下：

(1)取干燥后的松花粉经破壁处理后灭菌，加入蒸馏水；其中，破壁后松花粉与蒸馏水的重量比为1:(20-30)；

(2)向步骤(1)中继续加入乳酸菌、明串珠菌、酵母菌，在20-40℃条件下进行复合厌氧发酵12h-72h，得发酵产物；其中，破壁后松花粉与乳酸菌、明串珠菌、酵母菌的重量比为1：(10-15)：(10-15)：(10-15)；

(3)采用蛋白酶对步骤(2)的发酵产物进行水解，在30-50℃条件下酶解1h-8h；其中，蛋白酶与发酵产物的重量比为(1-5)：100；

(4)将酶解后的发酵产物减压蒸发到破壁后松花粉重量的3-5倍，继续加入防腐剂，搅拌均匀，得松花粉提取物；其中，防腐剂与破壁后松花粉的重量比为(2-5):1000。

其中，所述的防腐剂为苯氧乙醇。

本发明的有益效果是：

1、本发明工艺中，酵母菌能够协助富集发酵液中的黄酮类物质，提升产品的抗衰作用；明串珠菌有效将松花粉中的多糖分解成低聚糖或者单糖，制造更多的活性末端，利于活性表达；乳酸菌产生大量酸性物质，能够起到美白、去除角质的作用；蛋白酶酶解，能够减少大分子蛋白在体系中所占的比例。

2、本发明的松花粉发酵工艺，增加了松花粉提取物的透皮吸收性能，强化了美白及抗氧化功能的表达，降低了松花粉的致敏风险。

附图说明

图1为空白对照组(a)、模型对照组(b)、应用例1样品组(c)和应用例2样品组(d)作用于小鼠的皮肤衰老状态。

具体实施方式

以下结合实例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。

实施例1

一种松花粉的发酵提取工艺，步骤如下：

(1)取干燥后的松花粉经破壁处理后灭菌，加入蒸馏水；其中，破壁后松花粉与蒸馏水的重量比为1:20；

(2)向步骤(1)中继续加入乳酸菌、明串珠菌、酵母菌，在30℃条件下进行复合厌氧发酵12h，得发酵产物；其中，破壁后松花粉与乳酸菌、明串珠菌、酵母菌的重量比为1：10：15：15；

(3)采用蛋白酶对步骤(2)的发酵产物进行水解，在30℃条件下酶解1h,其中，蛋白酶与发酵产物的重量比为1：100；

(4)将酶解后的发酵产物减压蒸发到破壁后松花粉重量的3倍，继续加入苯氧乙醇，搅拌均匀，得松花粉提取物；其中，苯氧乙醇与破壁后松花粉的重量比为1：500。

实施例2

一种松花粉的发酵提取工艺，步骤如下：

(1)取干燥后的松花粉经破壁处理后灭菌，加入蒸馏水；其中，破壁后松花粉与蒸馏水的重量比为1:25；

(2)向步骤(1)中继续加入乳酸菌、明串珠菌、酵母菌，在25℃条件下进行复合厌氧发酵40h，得发酵产物；其中，破壁后松花粉与乳酸菌、明串珠菌、酵母菌的重量比为1：15：12：12；

(3)采用蛋白酶对步骤(2)的发酵产物进行水解，在38℃条件下酶解4h,其中，蛋白酶与发酵产物的重量比为3：100；

(4)将酶解后的发酵产物减压蒸发到破壁后松花粉重量的4倍，继续加入苯氧乙醇，搅拌均匀，得松花粉提取物；其中，苯氧乙醇与破壁后松花粉的重量比为3：1000。

实施例3

一种松花粉的发酵提取工艺，步骤如下：

(1)取干燥后的松花粉经破壁处理后灭菌，加入蒸馏水；其中，破壁后松花粉与蒸馏水的重量比为1:30；

(2)向步骤(1)中继续加入乳酸菌、明串珠菌、酵母菌，在40℃条件下进行复合厌氧发酵68h，得发酵产物；其中，破壁后松花粉与乳酸菌、明串珠菌、酵母菌的重量比为1：13：10：10；

(3)采用蛋白酶对步骤(2)的发酵产物进行水解，在50℃条件下酶解7h,其中，蛋白酶与发酵产物的重量比为5：100；

(4)将酶解后的发酵产物减压蒸发到破壁后松花粉重量的5倍，继续加入苯氧乙醇，搅拌均匀，得松花粉提取物；其中，苯氧乙醇与破壁后松花粉的重量比为5：1000。

将实施例1所得松花粉提取物应用于制备护肤品。

应用例1

一种含松花粉提取物的护肤霜，其组分按照重量百分比包括如下组分：二(月桂酰胺谷氨酰胺)赖氨酸钠1％、十六十八醇3％、低芥酸菜籽油5％、十一碳烯酸庚酯5％、季戊四醇己二酸酯/癸酸酯/辛酸酯/庚酸酯5％、甘油辛酸酯0.1％、二丙二醇2％、甘油2％、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物0.3％、辛酰羟肟酸0.1％、实施例1的松花粉提取物6％和余量的水。

应用例2

一种含松花粉提取物的护肤乳，其组分按照重量百分比包括如下组分：聚甘油-10山嵛酸酯/二十烷二酸酯1.5％、三羟甲基丙烷三辛酸酯/三癸酸3％、丙二醇二苯甲酸酯3％、植物甾醇/辛基十二醇月桂酰谷氨酸酯1％、甘油二硬脂酸酯/氢化松脂酸酯1％、甘油辛酸酯0.1％、甲基丙二醇2％、丁二醇2％、汉生胶0.2％、辛酰羟肟酸0.1％、实施例1的松花粉提取物6％和余量的水。

抗氧化、抗衰老评价

选用8周龄健康昆明雌性小鼠，体重20g左右(由济南朋悦实验动物繁育有限公司提供)，分为空白对照组(不含松花粉发酵提取物)、模型对照组和样品组(应用例1和应用例2)，空白对照组、模型对照组、应用例1样品组和应用例2样品组，每组10只。

模型对照组与样品组，每日颈背部皮下注射D-半乳糖(120mg/kg)制备亚急性衰老小鼠模型，连续注射10天，于第11天开始，在继续注射D-半乳糖的同时，对小鼠背部去毛；

空白对照组，注射同等体积生理盐水；连续注射10天，于第11天开始，继续注射生理盐水的同时，对小鼠背部去毛；

分别涂抹不同配方产品(浓度20mg/mL，200μL/只)，样品组分别涂抹应用例1和应用例2的护肤乳；空白对照组与模型对照组涂抹同体积的不含青梅花发酵提取物的乳液。继续连续注射D-半乳糖和造模30天。

实验结束后，对实验鼠进行眼球取血并离心获得血清，测定血清中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和丙二醛(MDA)活性，见表1。

VG染色:小鼠切片复水后用Weigert苏木素染液染色10min,再用自来水冲洗数分钟，用0.5％的乙醇溶液快速分色，在自来水下冲洗数分钟至溶液变成蓝色，继续用蒸馏水冲洗，用VG染液染色3min，分别用95％的酒精和100％的酒精各脱水5min,在二甲苯中透明过夜后用中性树胶封固。

表1

由表1可见，与模型对照组相比，应用例1样品组和应用例2样品组能有效提升SOD的含量和CAT的活性，减少MDA的积累，衰老是机体自由基代谢失去平衡的结果，随着年龄增长，氧自由基产生增多，而机体清除能力下降，SOD、CAT酶等活性降低，自由基过剩，并与机体细胞中不饱和脂肪酸结合产生MDA等有害化合物，引起机体产生癌变。上述试验结果说明，添加松花粉发酵提取物的产品能够有效起到皮肤抗氧化的作用，有助于延缓小鼠肌肤衰老。

由图1可以看出，经过老化模型后，小鼠皮肤角质层变薄，且皮肤中的胶原纤维断裂、缺失，质地变得疏松；而涂抹应用例1和应用例2的小鼠皮肤，其胶原分布和角质层状态明显优于模型对照组，说明含有松花粉发酵提取物的产品能够改善小鼠皮肤状态，延缓小鼠皮肤衰老。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种松花粉的发酵提取工艺，其特征在于，步骤如下：

(1)取干燥后的松花粉经破壁处理后灭菌，加入蒸馏水；其中，破壁后松花粉与蒸馏水的重量比为1:(20-30)；

(2)向步骤(1)中继续加入乳酸菌、明串珠菌、酵母菌，在20-40℃条件下进行复合厌氧发酵12h-72h，得发酵产物；其中，破壁后松花粉与乳酸菌、明串珠菌、酵母菌的重量比为1：(10-15)：(10-15)：(10-15)；

(3)采用蛋白酶对步骤(2)的发酵产物进行水解，在30-50℃条件下酶解1h-8h；其中，蛋白酶与发酵产物的重量比为(1-5)：100；

(4)将酶解后的发酵产物减压蒸发到破壁后松花粉重量的3-5倍，继续加入防腐剂，搅拌均匀，得松花粉提取物；其中，防腐剂与破壁后松花粉的重量比为(2-5):1000。

2.根据权利要求1所述的发酵提取工艺，其特征在于，所述的防腐剂为苯氧乙醇。