CN109806204A - 一种青梅花的发酵提取工艺 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种青梅花的发酵提取工艺。本发明工艺中，酵母菌能够协助富集发酵液中的黄酮类物质，提升产品的抗衰作用；明串珠菌有效将青梅花中的多糖分解成低聚糖或者单糖，制造更多的活性末端，利于活性表达；乳酸菌产生大量酸性物质，能够起到美白、去除角质的作用；蛋白酶酶解，能够减少大分子蛋白在体系中所占的比例。本发明的青梅花发酵工艺，增加了青梅花提取物的透皮吸收性能，强化了美白及抗氧化功能的表达，降低了青梅花的致敏风险。

Description

一种青梅花的发酵提取工艺

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种青梅花的发酵提取工艺。

背景技术

青梅花提取物的主要成分为酚酸(绿原酸)、有机酸和黄酮等多种植物次生代谢产物。其中，酚酸(绿原酸)，具有良好的抗氧化、清除自由基作用，比维生素C、维生素E和咖啡酸有更强的自由基清除效果；绿原酸对透明质酸酶有特殊的抑制作用，透明质酸是皮肤的主要组成成分；在真皮层，透明质酸和硫酸皮肤素、硫酸软骨素等粘多糖形成网状聚合体，具有高度的水合能力，柔韧且富有弹性；绿原酸类化合物具有抗氧化作用，可以保护胶原蛋白不受活性氧等自由基的破坏，并能有效防止紫外线对人体皮肤的伤害作用。有机酸，主要包括苹果酸、柠檬酸、琥珀酸等，可以加快老化角质脱落，促进表皮细胞分化，促进屏障脂质、天然保湿因子合成，成就细腻、润透的肌肤纹理。黄酮类化合物，除了能直接清除自由基外，还可以通过与体内一些氧化酶结合，影响其构型、构象，抑制酶的活性，从而抑制自由基的生成。

但是，由于传统提取方法的限制，青梅花的提取多采用水提或者醇提，影响了青梅花功能活性的表达，尤其是美白和抗氧化功能，

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种青梅花的发酵提取工艺。

本发明提供一种青梅花的发酵提取工艺，步骤如下：

(1)取干燥后的青梅花经破壁处理后灭菌，加入蒸馏水；其中，破壁后青梅花与蒸馏水的重量比为1:(20-30)；

(2)向步骤(1)中继续加入乳酸菌、明串珠菌、酵母菌，在20-40℃条件下进行复合厌氧发酵12h-72h，得发酵产物；其中，破壁后青梅花与乳酸菌、明串珠菌、酵母菌的重量比为1：(10-15)：(10-15)：(10-15)；

(3)采用蛋白酶对步骤(2)的发酵产物进行水解，在30-50℃条件下酶解1h-6h；其中，蛋白酶与发酵产物的重量比为(1-5)：100；

(4)将酶解后的发酵产物减压蒸发到破壁后青梅花重量的3-5倍，继续加入防腐剂，搅拌均匀，得青梅花提取物；其中，防腐剂与破壁后青梅花的重量比为(2-5):1000。

其中，所述的防腐剂为苯氧乙醇。

本发明的有益效果是：

1、本发明工艺中，酵母菌能够协助富集发酵液中的黄酮类物质，提升产品的抗衰作用；明串珠菌有效将青梅花中的多糖分解成低聚糖或者单糖，制造更多的活性末端，利于活性表达；乳酸菌产生大量酸性物质，能够起到美白、去除角质的作用；蛋白酶酶解，能够减少大分子蛋白在体系中所占的比例。

2、本发明的青梅花发酵工艺，增加了青梅花提取物的透皮吸收性能，强化了美白及抗氧化功能的表达，降低了青梅花的致敏风险；将所得青梅花提取物与其他辅料复配制得的护肤品(如化妆水、面膜、膏霜、乳液、卸妆液、洗发水、护发素、沐浴露、身体乳、防晒霜、牙膏、牙片、洗手液、护手霜、按摩膏等)，能够帮助皮肤保湿，减少皮肤氧化，延缓皮肤衰老，减少皮肤黑色素生成，同时温和刺激性小。

附图说明

图1为实施例1和对比例1-3所得青梅花提取物的酪氨酸酶抑制活性对照；

图2为空白对照组(a)、模型对照组(b)、应用例1样品组(c)和应用例2样品组(d)作用于小鼠的皮肤衰老状态。

具体实施方式

以下结合实例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。

实施例1

一种青梅花的发酵提取工艺，步骤如下：

(1)取干燥后的青梅花经破壁处理后灭菌，加入蒸馏水；其中，破壁后青梅花与蒸馏水的重量比为1:20；

(2)向步骤(1)中继续加入乳酸菌、明串珠菌、酵母菌，在30℃条件下进行复合厌氧发酵12h，得发酵产物；其中，破壁后青梅花与乳酸菌、明串珠菌、酵母菌的重量比为1：10：10：10；

(3)采用蛋白酶对步骤(2)的发酵产物进行水解，在30℃条件下酶解1h；其中，蛋白酶与发酵产物的重量比为1：100；

(4)将酶解后的发酵产物减压蒸发到破壁后青梅花重量的3倍，继续加入苯氧乙醇，搅拌均匀，得青梅花提取物；其中，苯氧乙醇与破壁后青梅花的重量比为1：500。

所得青梅花提取物的特性指标为：

①外观：

形态：发酵清液或干粉；

色泽：淡黄色；

气味：原料植物特征香气；

②基本理化指标：

电导率≤800μS/cm(液态)；

pH值:4～7；

③卫生指标：

菌落总数≤1000个/mL；

霉菌、酵母菌≤100个/mL；大肠杆菌等致病菌不得检出；

砷≤4mg/kg、铅≤10mg/kg、汞≤1mg/kg；

④特征指标：

绿原酸≥10mg/mL；黄酮≥10mg/mL。

实施例2

一种青梅花的发酵提取工艺，步骤如下：

(1)取干燥后的青梅花经破壁处理后灭菌，加入蒸馏水；其中，破壁后青梅花与蒸馏水的重量比为1:30；

(2)向步骤(1)中继续加入乳酸菌、明串珠菌、酵母菌，在20℃条件下进行复合厌氧发酵48h，得发酵产物；其中，破壁后青梅花与乳酸菌、明串珠菌、酵母菌的重量比为1：15：15：15；

(3)采用蛋白酶对步骤(2)的发酵产物进行水解，在40℃条件下酶解3h；其中，蛋白酶与发酵产物的重量比为3:100；

(4)将酶解后的发酵产物减压蒸发到破壁后青梅花重量的4倍，继续加入苯氧乙醇，搅拌均匀，得青梅花提取物；其中，苯氧乙醇与破壁后青梅花的重量比为3：1000。

实施例3

一种青梅花的发酵提取工艺，步骤如下：

(1)取干燥后的青梅花经破壁处理后灭菌，加入蒸馏水；其中，破壁后青梅花与蒸馏水的重量比为1:25；

(2)向步骤(1)中继续加入乳酸菌、明串珠菌、酵母菌，在40℃条件下进行复合厌氧发酵72h，得发酵产物；其中，破壁后青梅花与乳酸菌、明串珠菌、酵母菌的重量比为1：12：12：12；

(3)采用蛋白酶对步骤(2)的发酵产物进行水解，在50℃条件下酶解6h；其中，蛋白酶与发酵产物的重量比为5：100；

(4)将酶解后的发酵产物减压蒸发到破壁后青梅花重量的5倍，继续加入苯氧乙醇，搅拌均匀，得青梅花提取物；其中，苯氧乙醇与破壁后青梅花的重量比为5：1000。

对比例1

一种青梅花的发酵提取工艺，步骤如下：

(1)取干燥后的青梅花经破壁处理后灭菌，加入蒸馏水；其中，破壁后青梅花与蒸馏水的重量比为1:20；

(2)向步骤(1)中继续加入乳酸菌，在30℃条件下进行复合厌氧发酵72h，得发酵产物；其中，破壁后青梅花与乳酸菌重量比为1：10；

(3)采用蛋白酶对步骤(2)的发酵产物进行水解，在30℃条件下酶解4h；其中，蛋白酶与发酵产物的重量比为5：100；

(4)将酶解后的发酵产物减压蒸发到破壁后青梅花重量的3倍，继续加入苯氧乙醇，搅拌均匀，得青梅花提取物；其中，苯氧乙醇与破壁后青梅花的重量比为5：1000。

对比例2

一种青梅花的发酵提取工艺，步骤如下：

(1)取干燥后的青梅花经破壁处理后灭菌，加入蒸馏水；其中，破壁后青梅花与蒸馏水的重量比为1:20；

(2)向步骤(1)中继续加入明串珠菌，在30℃条件下进行复合厌氧发酵72h，得发酵产物；其中，破壁后青梅花与明串珠菌的重量比为1：10；

(3)采用蛋白酶对步骤(2)的发酵产物进行水解，在30℃条件下酶解4h；其中，蛋白酶与发酵产物的重量比为5：100；

(4)将酶解后的发酵产物减压蒸发到破壁后青梅花重量的3倍，继续加入苯氧乙醇，搅拌均匀，得青梅花提取物；其中，苯氧乙醇与破壁后青梅花的重量比为5：1000。

对比例3

一种青梅花的发酵提取工艺，步骤如下：

(1)取干燥后的青梅花经破壁处理后灭菌，加入蒸馏水；其中，破壁后青梅花与蒸馏水的重量比为1:20；

(2)向步骤(1)中继续加入明串珠菌，在25℃条件下进行复合厌氧发酵72h，得发酵产物；其中，破壁后青梅花与明串珠菌的重量比为1：10；

(3)采用蛋白酶对步骤(2)的发酵产物进行水解，在30℃条件下酶解4h；其中，蛋白酶与发酵产物的重量比为5：100；

(4)将酶解后的发酵产物减压蒸发到破壁后青梅花重量的3倍，继续加入苯氧乙醇，搅拌均匀，得青梅花提取物；其中，苯氧乙醇与破壁后青梅花的重量比为5：1000。

取实施例1、对比例1-3所得青梅花提取物进行酪氨酸酶抑制活性测试，见图1，实施例1对酪氨酸酶的活性抑制效果明显优于对比例1-3。

将实施例1所得青梅花提取物应用于制备护肤品。

应用例1

一种含青梅花发酵提取物的护肤霜，其组分按照重量百分比包括如下组分：二(月桂酰胺谷氨酰胺)赖氨酸钠1％、十六十八醇3％、低芥酸菜籽油5％、十一碳烯酸庚酯5％、季戊四醇己二酸酯/癸酸酯/辛酸酯/庚酸酯5％、甘油辛酸酯0.1％、二丙二醇2％、甘油2％、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物0.3％、辛酰羟肟酸0.1％、实施例1的青梅花提取物6％和余量的水。

应用例2

一种含青梅花发酵提取物的护肤乳，其组分按照重量百分比包括如下组分：聚甘油-10山嵛酸酯/二十烷二酸酯1.5％、三羟甲基丙烷三辛酸酯/三癸酸酯3％、丙二醇二苯甲酸酯3％、植物甾醇/辛基十二醇月桂酰谷氨酸酯1％、甘油二硬脂酸酯/氢化松脂酸酯1％、甘油辛酸酯0.1％、甲基丙二醇2％、丁二醇2％、汉生胶0.2％、辛酰羟肟酸0.1％、实施例1的青梅花提取物6％和余量的水。

抗氧化、抗衰老评价

选用8周龄健康昆明雌性小鼠，体重20g左右(由济南朋悦实验动物繁育有限公司提供)，分为空白对照组(不含青梅花发酵提取物)、模型对照组和样品组(应用例1和应用例2)，空白对照组、模型对照组、应用例1样品组和应用例2样品组，每组10只。

模型对照组与样品组，每日颈背部皮下注射D-半乳糖(120mg/kg)制备亚急性衰老小鼠模型，连续注射10天，于第11天开始，在继续注射D-半乳糖的同时，对小鼠背部去毛；

空白对照组，注射同等体积生理盐水；连续注射10天，于第11天开始，继续注射生理盐水的同时，对小鼠背部去毛；

分别涂抹不同配方产品(浓度20mg/mL，200μL/只)，样品组分别涂抹应用例1和应用例2的护肤乳；空白对照组与模型对照组涂抹同体积的不含青梅花发酵提取物的乳液。继续连续注射D-半乳糖和造模30天。

实验结束后，对实验鼠进行眼球取血并离心获得血清，测定血清中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和丙二醛(MDA)活性，见表1。

VG染色:小鼠切片复水后用Weigert苏木素染液染色10min,再用自来水冲洗数分钟，用0.5％的乙醇溶液快速分色，在自来水下冲洗数分钟至溶液变成蓝色，继续用蒸馏水冲洗，用VG染液染色3min，分别用95％的酒精和100％的酒精各脱水5min,在二甲苯中透明过夜后用中性树胶封固。

表1

由表1可见，与模型对照组相比，应用例1样品组和应用例2样品组能有效提升SOD的含量和CAT的活性，减少MDA的积累，衰老是机体自由基代谢失去平衡的结果，随着年龄增长，氧自由基产生增多，而机体清除能力下降，SOD、CAT酶等活性降低，自由基过剩，并与机体细胞中不饱和脂肪酸结合产生MDA等有害化合物，引起机体产生癌变。上述试验结果说明，添加青梅花发酵提取物的产品能够有效起到皮肤抗氧化的作用，有助于延缓小鼠肌肤衰老。

由图2可以看出，经过老化模型后，小鼠皮肤角质层变薄，且皮肤中的胶原纤维断裂、缺失，质地变得疏松；而涂抹应用例1和应用例2的小鼠皮肤，其胶原分布和角质层状态明显优于模型对照组，说明含有青梅花发酵提取物的产品能够改善小鼠皮肤状态，延缓小鼠皮肤衰老。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种青梅花的发酵提取工艺，其特征在于，步骤如下：

(1)取干燥后的青梅花经破壁处理后灭菌，加入蒸馏水；其中，破壁后青梅花与蒸馏水的重量比为1:(20-30)；

(2)向步骤(1)中继续加入乳酸菌、明串珠菌、酵母菌，在20-40℃条件下进行复合厌氧发酵12h-72h，得发酵产物；其中，破壁后青梅花与乳酸菌、明串珠菌、酵母菌的重量比为1：(10-15)：(10-15)：(10-15)；

(3)采用蛋白酶对步骤(2)的发酵产物进行水解，在30-50℃条件下酶解1h-6h；其中，蛋白酶与发酵产物的重量比为(1-5)：100；

(4)将酶解后的发酵产物减压蒸发到破壁后青梅花重量的3-5倍，继续加入防腐剂，搅拌均匀，得青梅花提取物；其中，防腐剂与破壁后青梅花的重量比为(2-5):1000。

2.根据权利要求1所述的发酵提取工艺，其特征在于，所述的防腐剂为苯氧乙醇。