CN111040982A - 一种酿酒酵母促进剂及其制备方法和应用工艺 - Google Patents

Abstract

本发明涉及微生物培养技术领域，特别涉及酿酒酵母促进剂及其制备方法和应用工艺。本发明的酿酒酵母促进剂由以下重量份的原料组成：酸性蛋白酶70‑99份，植酸酶0.5‑15份，赖氨酸0.1‑5份，甘油1‑15份，山梨酸钾0.1‑5份，酸性蛋白酶抑制剂0.1‑5份和缓冲体系0.1‑5份。本发明通过提供一种酿酒酵母促进剂，在酒母培养和酒精发酵过程中对酵母的正相关作用，包括改变酵母的形态，提高酵母数量和芽生率；降低发酵终了的残总糖和残还原糖，提高发酵终了发酵醪的酒份。

Description

一种酿酒酵母促进剂及其制备方法和应用工艺

【技术领域】

本发明微生物培养技术领域，特别涉及一种酿酒酵母促进剂及其制备方法和应用工艺。

【背景技术】

酿酒酵母是重要的工业微生物之一，酿酒酵母现已经广泛应用于食品、制药和饲料等领域。食品行业中活性干酵母用于制作面包和馒头；性状优良的酿酒酵母用于酿造啤酒、白酒和葡萄酒；制作酵母天然调味品、酵母蛋白肽等。在生物制药行业，废酵母泥用于转化生产1,6-二磷酸果糖和三磷酸核苷；酵母高密度发酵提取谷胱甘肽、麦角固醇等活性物质。饲料行业利用废酵母泥生产培养微生物的酵母浸膏和酵母提取物，同时酵母菌是用于配制畜类、鱼虾、珍贵毛皮动物的理想蛋白质原料。而，将酵母应用于乙醇和酿酒行业，不仅可以加快发酵速度、还可以提高乙醇的产量。但发酵过程中，随着发酵液里的乙醇浓度增加，高浓度乙醇对酿酒酵母细胞有毒害作用，主要表现在对细胞形态和细胞生理活动影响两个方面。

申请人发现，解决上述问题，可通过添加酵母促进剂在酒母培养和酒精发酵过程中对改变酵母的形态，提高酵母耗糖速度，降低发酵终了的残总糖和残还原糖；提高发酵终了的酒份；但目前酵母促进剂品种少，且均为固体制剂，菌落总数与发酵所要求的菌落总数相去甚远，配方不合理效果差，且添加困难，需要先用水溶解再添加，容易造成二次染菌。

本方案旨在开发一种配方合理、效果显著、菌落总数控制在低于发酵环境要求的最低水平、添加方便的新型液体酵母促进剂，以利大生产条件下规模化推广应用。

【发明内容】

有鉴于此，本发明目的在于通过提供一种酵母促进剂，在酒母培养和酒精发酵过程中对酵母的正相关作用，包括改变酵母的形态，提高酵母数量和芽生率；降低发酵终了的残总糖和残还原糖；提高发酵终了发酵醪的酒份。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种酿酒酵母促进剂，该酿酒酵母促进剂由以下重量份的原料组成：酸性蛋白酶70-99份，植酸酶0.5-15份，赖氨酸0.1-5份，甘油1-15份，山梨酸钾0.1-5份，酸性蛋白酶抑制剂0.1-5 份和缓冲体系0.1-5份。

上述组成酿酒酵母促进剂的原料均是通过市售产品获得的食品级产品，其中，选用的酸性蛋白酶在pH3.5-5.0，温度28-45℃条件下，原酶活力≥100000u/ml；选用的植酸酶在pH3.5-5.0，温度28-45℃条件下，原酶活力≥50000u/ml；选用的赖氨酸纯度≥98％；选用的甘油(丙三醇) 纯度≥98％。

本发明中，进一步地，所述酿酒酵母促进剂由以下重量份的原料组成：酸性蛋白酶70份，植酸酶10份，赖氨酸5份，甘油13份，山梨酸钾0.1份，酸性蛋白酶抑制剂0.5份和缓冲体系1.4份。

本发明中，进一步地，所述缓冲体系为氢氧化钠和碳酸氢钠中的一种或它们的任意组合。

本发明中，进一步地，所述酸性蛋白酶抑制剂为EDTA-二钠，其纯度≥99.0％。

本发明中，进一步地，所述赖氨酸、酸性蛋白酶、植酸酶均为液体型制剂。

本申请还提供一种酿酒酵母促进剂的制备方法，该制备方法包括以下步骤：

(1)在酸性蛋白酶中加入EDTA-二钠，将二者混合搅拌溶解25-35min，得到混合液A，备用；

(2)在混合液A中加入植酸酶，在转速为80-120r/min的条件下搅拌25-35min，得到混合液B，备用；

(3)在混合液B中加入赖氨酸，在转速为80-120r/min的条件下搅拌25-35min，得到混合液C，备用；

(4)将氢氧化钠和山梨酸钾按照1:1的比例混合，将二者溶解于温度不低于80℃的水中，得到混合液D，其中，水的用量为氢氧化钠和山梨酸钾总质量的1.2-1.8倍；将混合液D静置 55-65min后，在混合液D中加入甘油和碳酸氢钠，接着将所有原料于转速为80-120r/min的条件下搅拌25-35min，即得酿酒酵母促进剂成品。

本发明中，进一步地，以重量份数计，所述酿酒酵母促进剂的组成原料为：酸性蛋白酶溶液70份，植酸酶溶液10份，赖氨酸溶液5份，酸性蛋白酶抑制剂0.5份，甘油13份，缓冲体系1.4份，山梨酸钾0.1份；所述缓冲体系由0.1重量份的氢氧化钠和1.3重量份的碳酸氢钠组成。

本申请还提供一种酿酒酵母促进剂的应用工艺，主要应用于以谷物、薯类和糠蜜为原料的酒精发酵生产，其添加量为1600mL/t。

本申请还提供一种酿酒酵母促进剂的应用工艺，主要应用于以谷物、薯类和糠蜜为原料的酒精发酵生产，其添加量为发酵原料总重量的百分比为0.01％-0.5％。

本发明中，进一步地，所述酿酒酵母促进剂应用于酒精发酵生产的添加方式为分步添加，具体分为以下步骤：

1)在酿酒酵母的活化期，其添加量为发酵总原料重量的0.001-0.1％，添加方式为用水将所述酿酒酵母促进剂稀释20倍后添加；

2)在酿酒酵母的扩培期，其添加量为发酵总原料重量的0.001-0.01％，添加方式为用水将所述酿酒酵母促进剂稀释20倍后添加；

3)在酿酒酵母的主发酵期，其添加量为发酵总原料重量的0.001-0.5％，添加方式为用水将所述酿酒酵母促进剂稀释20倍后添加。

本发明的原料来源如下：

酸性蛋白酶购自沧州夏盛酶生物技术有限公司；植酸酶购自郑州彩虹生物科技有限公司；赖氨酸购自上海冠导生物工程有限公司；甘油购自广州卓越化工有限公司，山梨酸钾购自河南云航轩生物科技有限公司，酸性蛋白酶抑制剂购自青岛大伟生物工程有限公司；碳酸氢钠购自桐柏博源新型化工有限公司；氢氧化钠购自广州市刺水科技有限公司。

本发明具有以下有益效果：

1.本发明的酿酒酵母促进剂中，各个组分相互配合，可协同增效作用，有效提高酵母数量和芽生率；降低发酵终了的残总糖和残还原糖；提高发酵终了发酵醪的酒份。

2.本发明的酿酒酵母促进剂以酸性蛋白酶和植酸酶为主要原料，以赖氨酸、甘油、山梨酸钾、酸性蛋白酶抑制剂和缓冲体系为固定酶分子的助剂，原料中的酸性蛋白酶主要是把发酵原料中的高分子蛋白降解成酿酒酵母可利用的低分子肽(a-AN即a-氨基氮)；植酸酶主要是把发酵原料中的抗营养因子植酸分解成磷酸根和钾、鈣、镁等离子，还有为酵母提供生长素的肌醇，同时可释放出一定量的淀粉－蛋白质络合物，使酵母的营养环境更趋合理；酸性蛋白酶和植酸酶结合，可以极大地改善酵母的营养环境，使酵母发芽快，菌体健壮，数量多，代谢旺盛，最终的目标产物产量高。

3.除了原料组成外，申请人经过多年的生物培养工作经验发现，在常规条件下，液体制剂型的酸性蛋白酶和植酸酶会发生消解反应，也就是酸性蛋白酶会分解植酸酶(植酸酶分子本身也是一种酶蛋白)，使其失去活性，本发明旨在通过添加合适的固定酶分子助剂，配合科学的制备方法解决二者之间在液态条件下不发生消解反应的可能性；再次，固体制剂菌落总数含量高是酵母发酵过程中存在的固有问题，本发明将促进剂制备成液体制剂，液体制剂在添加方式上相比固体制剂而言，无需溶解，直接添加到发酵罐即可，省去了溶解和二次染菌的麻烦；因此，本发明同时解决了二次杂菌和液体制剂型的酸性蛋白酶和植酸酶会发生消解反应的技术问题；且，该酵母促进剂在糖蜜酒精生产中完全替代酵母营养盐，大幅度降低发酵废水中氨氮的含量，降低污水处理难度和成本。

【具体实施方式】

下面的实施例可以帮助本领域的技术人员更全面地理解本发明，但不可以以任何方式限制本发明。

实施例1：

本实施例提供了一种酿酒酵母促进剂，该酿酒酵母促进剂由以下重量份的原料组成：酸性蛋白酶99份，植酸酶0.5份，赖氨酸0.1份，甘油1份，山梨酸钾2份，酸性蛋白酶抑制剂 0.1份和缓冲体系0.1份。其中，赖氨酸、酸性蛋白酶、植酸酶均为液体型制剂；缓冲体系由氢氧化钠和碳酸氢钠按照质量比为1:10的比例组成组成；酸性蛋白酶抑制剂为EDTA-二钠，其纯度≥99.0％。

本实施例还提供一种酿酒酵母促进剂的制备方法，该制备方法包括以下步骤：

(1)在酸性蛋白酶中加入EDTA-二钠，将二者混合搅拌溶解25min，得到混合液A，备用；

(2)在混合液A中加入植酸酶，在转速为80r/min的条件下搅拌25min，得到混合液B，备用；

(3)在混合液B中加入赖氨酸，在转速为80r/min的条件下搅拌25min，得到混合液C，备用；

(4)将氢氧化钠和山梨酸钾按照1:1的比例混合，将二者溶解于温度不低于80℃的水中，得到混合液D，其中，水的用量为氢氧化钠和山梨酸钾总质量的1.2倍；将混合液D静置55min 后，在混合液D中加入甘油和碳酸氢钠，接着将所有原料于转速为80r/min的条件下搅拌25min，即得酿酒酵母促进剂成品。

本实施例还提供上述酿酒酵母促进剂的应用，用于以谷物、薯类和糠蜜为原料的酒精发酵生产，其添加量为发酵原料总重量的百分比为0.01％％。

上述酿酒酵母促进剂应用于酒精发酵生产的添加方式为分步添加，具体分为以下步骤：

1)在酿酒酵母的活化期，其添加量为发酵总原料重量的0.001％，添加方式为用水将所述酿酒酵母促进剂稀释20倍后添加；

2)在酿酒酵母的扩培期，其添加量为发酵总原料重量的0.001％，添加方式为用水将所述酿酒酵母促进剂稀释20倍后添加；

3)在酿酒酵母的主发酵期，其添加量为发酵总原料重量的0.008％，添加方式为用水将所述酿酒酵母促进剂稀释20倍后添加。

实施例2：

本实施例提供了一种酿酒酵母促进剂，该酿酒酵母促进剂由以下重量份的原料组成：酸性蛋白酶70份，植酸酶10份，赖氨酸5份，甘油13份，山梨酸钾0.1份，酸性蛋白酶抑制剂 0.5份和缓冲体系1.4份。其中，赖氨酸、酸性蛋白酶、植酸酶均为液体型制剂；缓冲体系由氢氧化钠和碳酸氢钠按照质量比为1:13的比例组成；酸性蛋白酶抑制剂为EDTA-二钠，其纯度≥99.0％。

本实施例还提供一种酿酒酵母促进剂的制备方法，该制备方法包括以下步骤：

(1)在酸性蛋白酶中加入EDTA-二钠，将二者混合搅拌溶解30min，得到混合液A，备用；

(2)在混合液A中加入植酸酶，在转速为100r/min的条件下搅拌30min，得到混合液B，备用；

(3)在混合液B中加入赖氨酸，在转速为100r/min的条件下搅拌30min，得到混合液C，备用；

(4)将氢氧化钠和山梨酸钾按照1:1的比例混合，将二者溶解于温度不低于80℃的水中，得到混合液D，其中，水的用量为氢氧化钠和山梨酸钾总质量的1.5倍；将混合液D静置60min 后，在混合液D中加入甘油和碳酸氢钠，接着将所有原料于转速为100r/min的条件下搅拌30min，即得酿酒酵母促进剂成品。

本实施例还提供上述酿酒酵母促进剂的应用，用于以谷物、薯类和糠蜜为原料的酒精发酵生产，其添加量为发酵原料总重量的百分比为0.1％。

上述酿酒酵母促进剂应用于酒精发酵生产的添加方式为分步添加，具体分为以下步骤：

1)在酿酒酵母的活化期，其添加量为发酵总原料重量的0.03％，添加方式为用水将所述酿酒酵母促进剂稀释20倍后添加；

2)在酿酒酵母的扩培期，其添加量为发酵总原料重量的0.03％，添加方式为用水将所述酿酒酵母促进剂稀释20倍后添加；

3)在酿酒酵母的主发酵期，其添加量为发酵总原料重量的0.04％，添加方式为用水将所述酿酒酵母促进剂稀释20倍后添加。

实施例3：

本实施例提供了一种酿酒酵母促进剂，该酿酒酵母促进剂由以下重量份的原料组成：酸性蛋白酶80份，植酸酶15份，赖氨酸3份，甘油15份，山梨酸钾5份，酸性蛋白酶抑制剂5份和缓冲体系5份。其中，赖氨酸、酸性蛋白酶、植酸酶均为液体型制剂；缓冲体系由氢氧化钠和碳酸氢钠按照质量比为1:5的比例组成；酸性蛋白酶抑制剂为EDTA-二钠，其纯度≥99.0％。

本实施例还提供一种酿酒酵母促进剂的制备方法，该制备方法包括以下步骤：

(1)在酸性蛋白酶中加入EDTA-二钠，将二者混合搅拌溶解35min，得到混合液A，备用；

(2)在混合液A中加入植酸酶，在转速为120r/min的条件下搅拌35min，得到混合液B，备用；

(3)在混合液B中加入赖氨酸，在转速为120r/min的条件下搅拌35min，得到混合液C，备用；

(4)将氢氧化钠和山梨酸钾按照1:1的比例混合，将二者溶解于温度不低于80℃的水中，得到混合液D，其中，水的用量为氢氧化钠和山梨酸钾总质量的1.8倍；将混合液D静置65min 后，在混合液D中加入甘油和碳酸氢钠，接着将所有原料于转速为120r/min的条件下搅拌35min，即得酿酒酵母促进剂成品。

本实施例还提供上述酿酒酵母促进剂的应用，用于以谷物、薯类和糠蜜为原料的酒精发酵生产，其添加量为发酵原料总重量的百分比为0.5％。

上述酿酒酵母促进剂应用于酒精发酵生产的添加方式为分步添加，具体分为以下步骤：

1)在酿酒酵母的活化期，其添加量为发酵总原料重量的0.1％，添加方式为用水将所述酿酒酵母促进剂稀释20倍后添加；

2)在酿酒酵母的扩培期，其添加量为发酵总原料重量的0.01％，添加方式为用水将所述酿酒酵母促进剂稀释20倍后添加；

3)在酿酒酵母的主发酵期，其添加量为发酵总原料重量的0.39％，添加方式为用水将所述酿酒酵母促进剂稀释20倍后添加。

实施例4

本实施例提供了一种酿酒酵母促进剂，该酿酒酵母促进剂由以下重量份的原料组成：酸性蛋白酶70份，植酸酶10份，赖氨酸5份，甘油13份，山梨酸钾0.1份，酸性蛋白酶抑制剂 0.5份和缓冲体系1.4份。其中，赖氨酸、酸性蛋白酶、植酸酶均为液体型制剂；缓冲体系由氢氧化钠和碳酸氢钠按照质量比为1:13的比例组成；酸性蛋白酶抑制剂为EDTA-二钠，其纯度≥99.0％。

本实施例还提供一种酿酒酵母促进剂的制备方法，该制备方法包括以下步骤：

(1)在酸性蛋白酶中加入EDTA-二钠，将二者混合搅拌溶解30min，得到混合液A，备用；

(2)在混合液A中加入植酸酶，在转速为100r/min的条件下搅拌30min，得到混合液B，备用；

(3)在混合液B中加入赖氨酸，在转速为100r/min的条件下搅拌30min，得到混合液C，备用；

(4)将氢氧化钠和山梨酸钾按照1:1的比例混合，将二者溶解于温度不低于80℃的水中，得到混合液D，其中，水的用量为氢氧化钠和山梨酸钾总质量的1.5倍；将混合液D静置60min 后，在混合液D中加入甘油和碳酸氢钠，接着将所有原料于转速为100r/min的条件下搅拌30min，即得酿酒酵母促进剂成品。

本实施例还提供上述酿酒酵母促进剂的应用，用于以谷物、薯类和糠蜜为原料的酒精发酵生产，其添加量为1600mL/t。

效果验证

试验一：通过酵母促进剂与酸性蛋白酶对照，研究本申请酿酒酵母促进剂对酒母培养和酒精发酵过程的影响：

申请人于2017年8月16日-2017年8月24日在孟州市某酒精有限公司-酒精车间10万吨生产线进行该试验；设备条件为：酒母活化罐80m³/罐(一备一用)；酒母增值罐240m³1#-3#；发酵罐900m³12组，平均以3组发酵罐为批次进行分割发酵。

试验过程以及试剂的添加步骤为：

第一组：

①在酒母活化3小时后开始补糖，同时添加15kg本发明实施例2中的酿酒酵母促进剂；

②保持罐内30℃，通风培养5小时后化验并向各酒母增值罐串料，4个酒母增值罐液位平衡后开始添加糖化醪同时向各罐均匀添加85kg本发明实施例2中的酿酒酵母促进剂；

③酒母增值罐液位达到要求后2.5小时化验酸度、细胞、牙生率、挥发酸；

④继续培养5小时后打入发酵罐依次进行分割发酵，然后每12小时进行酸度、外观糖、还原糖、细胞、牙生率、死亡率、挥发酸等进行化验，直至出罐。

第二组：

①在酒母活化3小时后开始补糖，同时添加15kg酸性蛋白酶；

②保持罐内30℃，通风培养5小时后化验并向各酒母增值罐串料，4个酒母增值罐液位平衡后开始添加糖化醪同时向各罐均匀添加85kg酸性蛋白酶；

③酒母增值罐液位达到要求后2.5小时化验酸度、细胞、牙生率、挥发酸；

④继续培养5小时后打入发酵罐依次进行分割发酵，然后每12小时进行酸度、外观糖、还原糖、细胞、牙生率、死亡率、挥发酸等进行化验，直至出罐。

注：上述酸性蛋白酶购自沧州夏盛酶生物技术有限公司

除以上限定外，两组的操作工艺等其他条件均相同。

记录第一组和第二组培养终了数据，如表1所示：

表1使用本申请酿酒酵母促进剂和使用酸性蛋白酶数据对比

通过表1中第一组和第二组的试验数据对比可知：

①在使用本发明酿酒酵母促进剂的投料外观糖锤度低于使用酸性蛋白酶0.38°Bx，的情况下，酒份相对提高了0.26％(v/v)，即在投料锤度下降1.5％的条件下，酒精产量在对比原外观糖基础上反而增加了1.8％；

②使用酸性蛋白酶的最终还原糖为0.31，使用本发明酿酒酵母促进剂的最终还原糖为 0.29，降低0.02；

③使用本发明酿酒酵母促进剂挥发酸高于酸性蛋白酶0.06，升高了30％；酸度低于酸性蛋白酶1.34，降低了11.85％。

二者经济效益对比分析：

使用本发明酿酒酵母促进剂平均酒份14.71％(v/v)，比酸性蛋白酶平均酒份14.45(v/v) 增加0.26％(v/v)，即每罐增产95.5％(v/v)的酒精：0.26％*0.8094*900*100/95.5＝1.983吨即使酒精价格按最低行情时的4000元/吨计算，每罐多产出酒精折合人民币价值：1.983吨*4000 元/吨＝7932元试用期间累计投料12罐，则用本发明酿酒酵母促进剂产生的增加值为：7932 元/罐*12罐＝95184元，扣除本发明酿酒酵母促进剂成本(按市场平均价格25元/公斤计)： 95184元-450公斤*25元/公斤＝83934元投入产出比为：83934/9000＝1：9.326。

综合试验一以及经济效益对比，可知，申请人生产的酿酒酵母促进剂，有效提高了酵母发酵率，通过改善酵母繁殖、代谢的营养环境使酵母生长繁殖达到比较理想的状态，抑制了杂菌繁殖，降低了发酵液中的酸度，从而提高了发酵原料转化率，经济效益十分显著。

试验二：通过酵母促进剂与空白组对照，研究本申请酿酒酵母促进剂对酒精发酵的促进效果，并确定最优添加工艺。

申请人于2018年5月-2018年6月在广西某生物质有限公司工程技术研究中心进行该试验；仪器设备：分析天平(Mettler AL204)、分析天平(Mettler PL4002)、pH计 (S40)、摇床(ZHWY-2102)、液相色谱(戴安U3000)、离心机(L-530)、显微镜(CX21-310)、电炉(1000W)、水浴锅(HH-8)等。原辅材料：安琪超级酿酒高活性酵母、尿素、隆科特糖化酶、青霉素、乐酵酵母促进剂。试剂：0.25％葡萄糖、0.5％次甲基蓝指示剂、斐林甲乙液、 20％氢氧化钠、20％盐酸、65％硫酸。

根据表2设计方案添加辅料进行酒母培养试验，培养得到的酒母醪用于发酵试验，五组发酵辅料如表3所示。

表2酒母培养辅料添加表

表3发酵辅料添加表

试验步骤：(1)酒母培养：取车间二冷水稻液化醪，检测固形物含量，然后调节pH至4.0，分装至5个三角瓶，然后按表1分别添加辅料，摇匀后用纱布封口，置于29℃、120rpm恒温摇床中培养12h，得到成熟酒母醪，检测酵母生长情况；(2)发酵：取车间二冷水稻液化醪，检测固形物含量，然后调节pH至4.4，分装至10个三角瓶(每组两个平行样)，按表2添加辅料和酒母醪，摇匀后用纱布封口后称重，于33℃恒培养箱中发酵72h，检测发酵效果，共进行了3批次重复试验，三批次化学检测结果平均值如下表4所示：

表4各组化学检测结果平均值

通过表4分析，得到以下结论：1.添加促进剂不超过1600mL/t的组别酵母数、出芽率和死亡率基本和空白没有区别，促进剂添加量达到2000mL/t时，酵母数明显降低，分析原因可能是促进剂中的营养物质含量过高会抑制酵母的生长；2.添加促进剂和空白试验组的残糖基本没有差别，酸度、挥发酸也基本一致；3.失重来看，空白组的失重稍高一点，但区别不是很大；酒份是促进剂添加量为2000mL/t水稻的试验组最高12.44％，促进剂添加量为1200mL/t的试验组最低。

分别对上述五组进行了3批次重复试验，三批次液相检测结果，并取平均值，记录数据如表5所示：

表5各组液相检测结果

从表5可看出，空白组的残糖含量相对低一点，其他甘油、乙酸、乳酸等指标基本无差别；产酒则是添加促进剂的试验组均比空白组产酒量高，最高是添加1600mL/t水稻的试验组，酒分12.86％，产酒量比空白组高2.06％。

淀粉出酒率和淀粉利用率分析综合检测结果计算分析，得到发酵的淀粉出酒率和淀粉利用率如表6所示：

表6五组发酵的淀粉出酒率和淀粉利用率

通过表6可看出，添加乐酵促进剂的试验组淀粉出酒率和淀粉利用率均比不添加的空白组高，最高的是添加1600mL/t水稻的试验组，淀粉出酒率51.63％，淀粉利用率90.92％，比空白组高2.13％。

试验三：比较酿酒酵母促进剂物态对杂菌的影响：

第八组：本发明实施例2所述酿酒酵母促进剂；

第九组：酿酒酵母促进剂的原料组成以及制备方法与第八组相同，区别仅在于其为固态粉末状。

比较采用上述两组酿酒酵母促进剂对杂菌的影响，二者的使用方法为实施例2所述的使用方法，发酵终了后检测发酵物的杂菌含量，并记录数据如表7所示：

表7两组杂菌情况对比

根据表7可知，第八组的杂菌数比第九组的少，这是由于液态酿酒酵母促进剂有效防止二次染菌的产生。

试验四：研究使用/未使用本申请的酵母促进剂对糖蜜发酵酒精的影响

该试验为2018年11月5日--2018年11月14日，由广西乐酵生物科技有限公司在广西海盈酒精有限责任公司进行的运用试验。主要分为以下两组：

第十组：改组为使用促进剂组，申请人于2018年11月5日中班由酸化配料开始投放本申请酵母促进剂，考虑期间混合物料影响真实数据对比，2018年11月8日后开始对乐酵酵母促进剂发酵成熟醪数据跟踪，即2018年11月8日00：00开始开始计算截至2018年11月17日晚20：00分结束。

第十一组：改组为未使用促进剂组，原工艺成熟醪取自2018年10月26日至2018年11 月7日，由酒精车间进行统计并计算出平均值。

上述两组数据对比：

残糖：第十组残糖为2.61％，第十一组残糖为2.69％，第十组残糖相对于第十一组下降 0.08％；降幅百分比2.97％；

含酒份：第十组含酒份为11.16％，第十一组含酒份为10.62％，第十组含酒份相对于第十一组上升了0.54％；增幅百分比5.08％。

综合以上试验结果来看，在使用促进剂过程中，在原料全糖份低、非发酵性糖份高的劣势情况下，广西乐酵生物有限公司生产的酿酒酵母促进剂通过其有效成分的优势，平衡酵母营养成份。改善酵母繁殖、代谢的营养环境使酵母生长繁殖达到比较理想的状态，将糖蜜中的葡聚糖、淀粉、麦芽多糖等有效转化为酵母所需的可发酵性单糖，最终使糖份利用率达到最大化。

综合上述试验，本申请的酿酒酵母促进剂同时解决：1.液体制剂型的酸性蛋白酶和植酸酶会发生消解反应，二者之间在液态条件下不发生消解反应的可能性；2.克服固体制剂菌落总数含量高的固有问题；再次，液体制剂在添加方式上相比固体制剂而言，无需溶解，直接添加到发酵罐即可，省去了溶解和二次染菌的麻烦。

上述说明是针对本发明较佳可行实施例的详细说明，但实施例并非用以限定本发明的专利申请范围，凡本发明所提示的技术精神下所完成的同等变化或修饰变更，均应属于本发明所涵盖专利范围。

Claims (10)

1.一种酿酒酵母促进剂，其特征在于，该酿酒酵母促进剂由以下重量份的原料组成：酸性蛋白酶70-99份，植酸酶0.5-15份，赖氨酸0.1-5份，甘油1-15份，山梨酸钾0.1-5份，酸性蛋白酶抑制剂0.1-5份和缓冲体系0.1-5份。

2.根据权利要求1所述的酿酒酵母促进剂，其特征在于，所述酿酒酵母促进剂由以下重量份的原料组成：酸性蛋白酶70份，植酸酶10份，赖氨酸5份，甘油13份，山梨酸钾0.1份，酸性蛋白酶抑制剂0.5份和缓冲体系1.4份。

3.根据权利要求1所述的酿酒酵母促进剂，其特征在于，所述缓冲体系为氢氧化钠和碳酸氢钠中的一种或它们的任意组合。

4.根据权利要求1所述的酿酒酵母促进剂，其特征在于，所述酸性蛋白酶抑制剂为EDTA-二钠，其纯度≥99.0％。

5.根据权利要求1所述的酿酒酵母促进剂，其特征在于，所述赖氨酸、酸性蛋白酶、植酸酶均为液体型制剂。

6.根据权利要求1-5任一项所述的一种酿酒酵母促进剂的制备方法，其特征在于，该制备方法包括以下步骤：

(1)在酸性蛋白酶中加入EDTA-二钠，将二者混合搅拌溶解25-35min，得到混合液A，备用；

(2)在混合液A中加入植酸酶，在转速为80-120r/min的条件下搅拌25-35min，得到混合液B，备用；

(3)在混合液B中加入赖氨酸，在转速为80-120r/min的条件下搅拌25-35min，得到混合液C，备用；

(4)将氢氧化钠和山梨酸钾按照1:1的比例混合，将二者溶解于温度不低于80℃的水中，得到混合液D，其中，水的用量为氢氧化钠和山梨酸钾总质量的1.2-1.8倍；将混合液D静置55-65min后，在混合液D中加入甘油和碳酸氢钠，接着将所有原料于转速为80-120r/min的条件下搅拌25-35min，即得酿酒酵母促进剂成品。

7.根据权利要求6所述的一种酿酒酵母促进剂的制备方法，其特征在于，以重量份数计，所述酿酒酵母促进剂的组成原料为：酸性蛋白酶溶液70份，植酸酶溶液10份，赖氨酸溶液5份，酸性蛋白酶抑制剂0.5份，甘油13份，缓冲体系1.4份，山梨酸钾0.1份；所述缓冲体系由0.1重量份的氢氧化钠和1.3重量份的碳酸氢钠组成。

8.一种酿酒酵母促进剂的应用工艺，该酿酒酵母促进剂为权利要求1-7所述的促进剂，其特征在于，所述酿酒酵母促进剂应用于以谷物、薯类和糠蜜为原料的酒精发酵生产，其添加量为1600mL/t。

9.一种酿酒酵母促进剂的应用工艺，该酿酒酵母促进剂为权利要求1-7所述的促进剂，其特征在于，所述酿酒酵母促进剂应用于以谷物、薯类和糠蜜为原料的酒精发酵生产，其添加量为发酵原料总重量的百分比为0.01％-0.5％。

10.根据权利要求9所述的一种酿酒酵母促进剂的应用工艺，其特征在于，所述酿酒酵母促进剂应用于酒精类发酵生产的添加方式为分步添加，具体分为以下步骤：

1)在酿酒酵母的活化期，其添加量为发酵总原料重量的0.001-0.1％，添加方式为用水将所述酿酒酵母促进剂稀释20倍后添加；

2)在酿酒酵母的扩培期，其添加量为发酵总原料重量的0.001-0.01％，添加方式为用水将所述酿酒酵母促进剂稀释20倍后添加；

3)在酿酒酵母的主发酵期，其添加量为发酵总原料重量的0.001-0.5％，添加方式为用水将所述酿酒酵母促进剂稀释20倍后添加。