CN117343171B - 一种抗bsa的兔单克隆抗体及其应用 - Google Patents
一种抗bsa的兔单克隆抗体及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117343171B CN117343171B CN202211354964.7A CN202211354964A CN117343171B CN 117343171 B CN117343171 B CN 117343171B CN 202211354964 A CN202211354964 A CN 202211354964A CN 117343171 B CN117343171 B CN 117343171B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- seq
- amino acid
- cdr
- acid sequence
- sequence shown
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 title claims abstract description 37
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 18
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 10
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 5
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 3
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 claims description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 42
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 claims 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 abstract description 56
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 abstract description 56
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 abstract description 14
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 7
- 238000002823 phage display Methods 0.000 abstract description 6
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 abstract description 4
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 abstract description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 2
- 229940127554 medical product Drugs 0.000 abstract description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 abstract description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 abstract description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 abstract description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 abstract description 2
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 86
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 25
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 23
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 5
- 238000004091 panning Methods 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 230000006651 lactation Effects 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 3
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- NVKAWKQGWWIWPM-ABEVXSGRSA-N 17-β-hydroxy-5-α-Androstan-3-one Chemical compound C1C(=O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CC[C@H]21 NVKAWKQGWWIWPM-ABEVXSGRSA-N 0.000 description 2
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.NCC(O)=O IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 206010002199 Anaphylactic shock Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000251730 Chondrichthyes Species 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 241000283977 Oryctolagus Species 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 238000010009 beating Methods 0.000 description 1
- 238000013357 binding ELISA Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0684—Cells of the urinary tract or kidneys
- C12N5/0686—Kidney cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2800/00—Nucleic acids vectors
- C12N2800/10—Plasmid DNA
- C12N2800/106—Plasmid DNA for vertebrates
- C12N2800/107—Plasmid DNA for vertebrates for mammalian
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/76—Assays involving albumins other than in routine use for blocking surfaces or for anchoring haptens during immunisation
- G01N2333/765—Serum albumin, e.g. HSA
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明涉及一种抗BSA的兔单克隆抗体及其应用，属于抗体技术领域。本发明的抗BSA的兔单克隆抗体或其抗原结合部分，其特异性地结合BSA，所述单克隆抗体或其抗原结合部分包含重链可变区VH和轻链可变区VL，所述重链可变区包括重链CDR‑H1、CDR‑H2和CDR‑H3，所述轻链可变区包括轻链CDR‑L1、CDR‑L2和CDR‑L3。该抗体可用于检测牛奶等食品中的牛血清白蛋白（BSA），检测并去除细胞培养上清、组织工程医疗产品、疫苗中残留的微量BSA。本发明通过噬菌体展示技术获得了靶向BSA的兔单克隆抗体，该抗体能够以高亲和力特异性识别BSA。
Description
技术领域
本发明涉及一种抗BSA的兔单克隆抗体及其应用，属于生物技术领域。
技术背景
牛血清白蛋白(BSA)是牛血清中的一种球蛋白，包含607个氨基酸残基，其分子量为66.446kDa并且其等电点为4.7，目前生物制品生产普遍采用牛血清作为细胞培养的主要成分，但是由于它对人体是一种异源蛋白，注射后可能会引发过敏性休克等不良反应，目前已经有报道的过敏成分主要是牛血清白蛋白(Bovine serum albumin，BSA)和牛血清IgG(Bovine immunoglobulin G，B-IgG)，为了有效控制过敏原含量，《中国药典》第三部中规定疫苗中牛血清白蛋白残留量不得超过50ng/mL，但是现有的检验工序繁杂，检验时间较长，检验时间过长容易减低生物制品的活性，难以满足需求，因此如何能够快速准确地检验并去除用牛血清培养的细胞溶液中的BSA，对于提高细胞生物制品的生物安全性具有重要作用。
抗体(Antibody,Ab)即免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)作为可以特异性识别某一个蛋白(抗原)的分子，除了在疾病预防和治疗方面的作用强大之外，其作为检测工具在检验、科学研究方面的用途也不言而喻。目前，国内外用于检测生物制品中BSA含量的检测试剂中用到的抗体多为多克隆抗体(兔源)，与兔单抗相比，兔多抗虽然制备周期短、亲和力稍强的优点外，其缺点也非常明显，如单批次制备量有限，并且对于单批次效果好的抗体不能长期获得；批间差异性太大；组分相对复杂，质量控制较难把控。应用兔单克隆抗体检测并去除生物制品中的BSA具有广阔的应用前景。
发明内容
本发明的主要目的是：提供一种抗BSA的兔单克隆抗体，能特异性识别BSA。同时，还提供该抗体的应用。
本发明解决其技术问题的技术方案如下：
在本发明的第一方面，提供了一种抗BSA的兔单克隆抗体或其抗原结合部分，其特异性地结合BSA。
所述单克隆抗体或其抗原结合部分包含重链可变区VH和轻链可变区VL，所述重链可变区包括重链CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述轻链可变区包括轻链CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，所述单克隆抗体或其抗原结合部分的六种CDR的氨基酸序列选自下列五组中任意一组：
(1)氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示的CDR-H1，氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示的CDR-H2，氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示的CDR-H3，氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示的CDR-L1，氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示的CDR-L2，氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示的CDR-L3；
(2)氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示的CDR-H1，氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示的CDR-H2，氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示的CDR-H3，氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示的CDR-L1，氨基酸序列如SEQ ID NO:15所示的CDR-L2，氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示的CDR-L3；
(3)氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示的CDR-H1，氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示的CDR-H2，氨基酸序列如SEQ ID NO:21所示的CDR-H3，氨基酸序列如SEQ ID NO:22所示的CDR-L1，氨基酸序列如SEQ ID NO:23所示的CDR-L2，氨基酸序列如SEQ ID NO:24所示的CDR-L3；
(4)氨基酸序列如SEQ ID NO:27所示的CDR-H1，氨基酸序列如SEQ ID NO:28所示的CDR-H2，氨基酸序列如SEQ ID NO:29所示的CDR-H3，氨基酸序列如SEQ ID NO:30所示的CDR-L1，氨基酸序列如SEQ ID NO:31所示的CDR-L2，氨基酸序列如SEQ ID NO:32所示的CDR-L3；
(5)氨基酸序列如SEQ ID NO:35所示的CDR-H1，氨基酸序列如SEQ ID NO:36所示的CDR-H2，氨基酸序列如SEQ ID NO:37所示的CDR-H3，氨基酸序列如SEQ ID NO:38所示的CDR-L1，氨基酸序列如SEQ ID NO:39所示的CDR-L2，氨基酸序列如SEQ ID NO:40所示的CDR-L3。
进一步地，
所述单克隆抗体或其抗原结合部分的重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列选自下列五组中任意一组：
(1)重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；
(2)重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示，和轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示；
(3)重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示，和轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示；
(4)重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:25所示，和轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:26所示；
(5)重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:33所示，和轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:34所示。
在本发明的第二方面，提供了包含编码第一方面所述的抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列。
优选地，所述的抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列选自如SEQ IDNO:41-45所示核苷酸序列中的任意一个。
在本发明的第三方面，提供了含有第二方面所述核酸的哺乳系统表达载体。
优选地，所述哺乳细胞表达载体为pCDNA3.4。
在本发明的第四方面，提供了含有第三方面所述表达载体的宿主细胞。
优选地，所述宿主细胞为HEK293。
在本发明的第五方面，提供了一种能够用于去除BSA残留的试剂盒，含有第一方面所述抗BSA的兔单克隆抗体。
优选地，所述的试剂盒，其用于双抗夹心ELISA或双抗夹心免疫胶体金层析技术定量检测细胞培养液中的BSA。
本发明还提供应用所述抗BSA兔单抗的双抗夹心ELISA定量检测Vero细胞培养上清中BSA的用途。
本发明还提供应用所述抗BSA的兔单抗的双抗夹心免疫胶体金层析技术定性检测Vero细胞培养上清中BSA的用途。
本发明中涉及的术语，定义如下：
“重链CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3”依次表示：重链互补决定区的CDR1、CDR2和CDR3。
“轻链CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3”依次表示：轻链互补决定区的CDR1、CDR2和CDR3。
“单链抗体”：单链抗体(single-chain variable fragment，scFv)是由抗体重链的可变区与轻链的可变区在一段肽链的连接下构成的小分子。
本发明具有如下技术效果：
1)本发明通过噬菌体展示技术获得了靶向BSA的兔单克隆抗体，该抗体亲和力KD(M)为7.65E-10，能够以高亲和力特异性识别BSA。
2)本发明的抗体可用于检测牛奶等食品中的牛血清白蛋白(BSA)，检测并去除细胞培养上清、组织工程医疗产品、疫苗中残留的微量BSA。
附图说明
图1为实施例1中ELISA检测每轮淘选富集噬菌体对BSA的结合情况图。
图2为实施例2的哺乳系统表达载体示意图。
图3为实施例2的哺乳系统表达的兔单抗的电泳检测图。
图4为实施例3的哺乳系统表达的兔单抗的结合ELISA结果图。
图5为实施例4的哺乳系统表达的兔单抗的去除细胞培养液中BSA效果鉴定(BLI)。
图6为实施例3的哺乳系统表达的兔单抗的亲和力检测BLI曲线图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细描述。但是本发明不限于所给出的例子。所用方法如无特别说明均为常规方法，所用试剂和材料如无特别说明均为市售品，厂家及货号详见下表：
| 物料名称 | 厂家 | 货号 |
| 牛血清白蛋白 | 生工 | 9048-46-8 |
| 酶标板 | 康宁 | 3590 |
| Anti-M13Antibody(HRP) | sino biological | 11973-MM05T-H |
| Goat Anti-rabbit IgG-HRP | Jackson | 111-035-008 |
| Pro A生物传感器 | Probelife | 20-5006 |
实施例1筛选抗BSA的兔单克隆抗体
以牛血清白蛋白为抗原免疫日本大耳白兔，构建库容为4.05x109的ScFv免疫库，应用噬菌体展示技术从中筛淘抗BSA的全抗。
采用固相淘选的方法，将10ug/mL BSA包被到ELISA板条上，每孔100uL，4℃过夜包被。PBST洗三遍，每孔加入200uL 2％无蛋白封闭液，37℃封闭1小时。PBST洗三遍后加入噬菌体展示库(约有2x1012 CFU)，37℃孵育1小时。吸出未结合的噬菌体，PBST洗10遍。每孔加100uL的甘氨酸-盐酸(PH＝2.2)溶液，37℃反应5分钟，轻轻吹打板孔将吸附的噬菌体洗脱下来，然后加入Tris-HCl(PH＝8.8)溶液中和至中性。洗脱的噬菌体感染对数生长期的TG1细胞，扩增回收后的噬菌体，用于下一轮淘选。
经过三轮淘选后，用Phage-ELISA进行验证是否特异性富集。将2ug/mL BSA包被到ELISA板条上，4℃过夜包被。PBST洗三遍后用2％无蛋白封闭液37℃封闭1小时。PBST洗5遍后加入三轮淘选的噬菌体展示库，首孔约1x1012CFU，4倍梯度稀释，末孔空白，37℃结合1小时。PBST洗5遍后加入HRP标记的小鼠抗M13的二抗，37℃孵育1小时。PBST洗5遍后加TMB显色液，室温避光显色5-10分钟，最后用2M硫酸终止显色，用酶标仪读取450nm波长下的吸光值并做Phage-ELISA结合曲线。
ELISA检测结果如图1所示，以辅助噬菌体为阴性对照，在三轮富集后，噬菌体群对BSA的亲和力逐轮升高。
对每轮富集的噬菌体单克隆进行抗原结合分析，具体过程为：
用每轮富集的噬菌体库感染TG1细胞，第一轮随机挑取264个单克隆，第二轮随机挑取440个单克隆，第三轮随机挑取616个单克隆，扩增并回收噬菌体。将2ug/mL BSA包被到ELISA板条上，4℃过夜包被。PBST洗三遍后用2％无蛋白封闭液37℃封闭1小时。将1320个扩增后的单克隆噬菌体以及阴性对照辅助噬菌体分别以1:1比例与含2％无蛋白封闭液的PBST溶液室温孵育1小时，将孵育好的噬菌体加到封闭好的酶标板中，37℃孵育1小时。PBST洗5遍后加入HRP标记的小鼠抗M13的二抗，37℃孵育1小时。PBST洗5遍后加TMB室温避光显色5-10分钟，最后用2M硫酸终止显色，用酶标仪读取450nm波长下的吸光值，吸光值在阴性对照两倍以上且OD450＞0.5的为阳性克隆。结果过表明1320个单克隆噬菌体中有个418个识别BSA的阳性克隆，对这418个阳性克隆进行测序分析。将互补区CDR1、CDR2、CDR3序列相同的克隆视为同一克隆株，而序列不同的株视为不同克隆株，最后分析得到5个Uniquesequence。
得到的五种抗BSA的抗体，编号a、b、c、d和e。重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列信息，如表1-2所示。
表1抗BSA的兔单克隆抗体的CDRs氨基酸序列信息
| 抗体编号 | 重链可变区VH的CDR 1-3 | 轻链可变区VL的CDR 1-3 |
| a | SEQ ID NO:3-5 | SEQ ID NO:6-8 |
| b | SEQ ID NO:11-13 | SEQ ID NO:14-16 |
| c | SEQ ID NO:19-21 | SEQ ID NO:22-24 |
| d | SEQ ID NO:27-29 | SEQ ID NO:30-32 |
| e | SEQ ID NO:35-37 | SEQ ID NO:38-40 |
表2抗BSA的兔单克隆抗体的可变区氨基酸序列信息
| 抗体编号 | 重链可变区VH | 轻链可变区VL |
| a | SEQ ID NO:1 | SEQ ID NO:2 |
| b | SEQ ID NO:9 | SEQ ID NO:10 |
| c | SEQ ID NO:17 | SEQ ID NO:18 |
| d | SEQ ID NO:25 | SEQ ID NO:26 |
| e | SEQ ID NO:33 | SEQ ID NO:34 |
。
表1和表2中的具体序列如下：
SEQ ID NO:1抗体a的VH氨基酸序列
QSVEESGGRLVTPGGSLTLTCTVSGIDLNLYAMGWVRQAPGKGLEVIGIISNTGGTYYASWAKGRFTISKSSSTTVDLKLTSLTTEDTATYFCARDRHFGDITLGGFDPWGPGTLVTVSS
SEQ ID NO:2抗体a的VL氨基酸序列
AAVMTQTPASVSEPVGGTVTIKCQASQSIGSNLAWYQQKPGQPPKLLIYAASNLASGVPSRFKGSGSGTEFTLTISGVECADAATYYCQQGYSTNNIDNIFGGGTELEIS
SEQ ID NO:3抗体a的CDR-H1氨基酸序列
LYAMG
SEQ ID NO:4抗体a的CDR-H2氨基酸序列
IISNTGGTYYASWAKG
SEQ ID NO:5抗体a的CDR-H3氨基酸序列
DRHFGDITLGGFDP
SEQ ID NO:6抗体a的CDR-L1氨基酸序列
QASQSIGSNLA
SEQ ID NO:7抗体a的CDR-L2氨基酸序列
AASNLAS
SEQ ID NO:8抗体a的CDR-L3氨基酸序列
QQGYSTNNIDNI
SEQ ID NO:9抗体b的VH氨基酸序列
QEQLVESGGRLVTPGGSLTLTCTVSGIDLNLYAMGWVRQAPGKGLEVIGIISNTDGTYYASWAKGRFTISKSSSTTVDLKLTSLTTEDTATYFCARDRHFGDITLGGFDPWGPGTLVTISS
SEQ ID NO:10抗体b的VL氨基酸序列
DVVMTQTPSSVSAAVGGTVTINCQASQSISNWLAWYQQKPGQRPKLLIYRTSTLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVECADAATYYCQQGYSSSNIDNAFGGGTELEIS
SEQ ID NO:11抗体b的CDR-H1氨基酸序列
LYAMG
SEQ ID NO:12抗体b的CDR-H2氨基酸序列
IISNTDGTYYASWAKG
SEQ ID NO:13抗体b的CDR-H3氨基酸序列
DRHFGDITLGGFDP
SEQ ID NO:14抗体b的CDR-L1氨基酸序列
QASQSISNWLA
SEQ ID NO:15抗体b的CDR-L2氨基酸序列
RTSTLAS
SEQ ID NO:16抗体b的CDR-L3氨基酸序列
QQGYSSSNIDNA
SEQ ID NO:17抗体c的VH氨基酸序列
QSVEESGGRLVTPGGSLTLTCTVSGIDLSSYAMGWVRQAPGKGLEYIGIISNTGGTYYASWAKGRFTISKSSSTTVDLKLTSLTTEDTATYFCARDRHFGDITLGGFDPWGPGTLVTVSS
SEQ ID NO:18抗体c的VL氨基酸序列
AAVMTQTPASVEAAVGGTVTIKCQASQSISTALAWYQQKPGQPPKLLIYRASTLASGVPSRFKGSGSGTEFTLTISGVQCDDAATYYCAGGYSSSSDNAFGGGTELEIS
SEQ ID NO:19抗体c的CDR-H1氨基酸序列
SYAMG
SEQ ID NO:20抗体c的CDR-H2氨基酸序列
IISNTGGTYYASWAKG
SEQ ID NO:21抗体c的CDR-H3氨基酸序列
DRHFGDITLGGFDP
SEQ ID NO:22抗体c的CDR-L1氨基酸序列
QASQSISTALA
SEQ ID NO:23抗体c的CDR-L2氨基酸序列
RASTLAS
SEQ ID NO:24抗体c的CDR-L3氨基酸序列
AGGYSSSSDNA
SEQ ID NO:25抗体d的VH氨基酸序列
QEQLKESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFDLSSYAMGWFRQAPGKGLEYIGFIGSGGYAYYANWAKGRFTISRTSTTVDLKMTSLTIEDTATYFCTRYAGDSSSGYYFDLWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:26抗体d的VL氨基酸序列
AAVMTQTPSSVSEPVGGTVTIKCQASQSIYNYLSWYQQKPGQRPNLLIYRTSTLASGVSSRFSGSGSGTQFTLTITGVQCDDAATYYCQQGYDSSNVDNAFGGGTELEIS
SEQ ID NO:27抗体d的CDR-H1氨基酸序列
SYAMG
SEQ ID NO:28抗体d的CDR-H2氨基酸序列
FIGSGGYAYYANWAKG
SEQ ID NO:29抗体d的CDR-H3氨基酸序列
YAGDSSSGYYFDL
SEQ ID NO:30抗体d的CDR-L1氨基酸序列
QASQSIYNYLS
SEQ ID NO:31抗体d的CDR-L2氨基酸序列
RTSTLAS
SEQ ID NO:32抗体d的CDR-L3氨基酸序列
QQGYDSSNVDNA
SEQ ID NO:33抗体e的VH氨基酸序列
QSVKESGGRLVTPGGSLTLTCTVSGIDLSSYAMGWVRQAPGKGLEYIGIISNTGGTYYANWAKGRFTISKTSSTTVDLKLTSLTTEDTATYFCARDRHFGDITLGGFDPWGPGTLVTVSS
SEQ ID NO:34抗体e的VL氨基酸序列
AQVLTQTPASVEAAVGGTVTIKCQASQSIGGSLAWYQQKPGQPPKLLIYYASTLASGVPSRFKGSGSRTQFTLTISDVQCDDAATYYCAGGYSPISDNTFGGGTELEIS
SEQ ID NO:35抗体e的CDR-H1氨基酸序列
SYAMG
SEQ ID NO:36抗体e的CDR-H2氨基酸序列
IISNTGGTYYANWAKG
SEQ ID NO:37抗体e的CDR-H3氨基酸序列
DRHFGDITLGGFDP
SEQ ID NO:38抗体e的CDR-L1氨基酸序列
QASQSIGGSLA
SEQ ID NO:39抗体e的CDR-L2氨基酸序列
YASTLAS
SEQ ID NO:40抗体e的CDR-L3氨基酸序列
AGGYSPISDNT
实施例2抗BSA的兔单克隆抗体的哺乳系统表达纯化
以实验例1中，噬菌体展示技术筛选得到的阳性SCFv克隆为模板，通过PCR手段将scfv抗体的重链可变区及轻链可变区分别与human IgG1恒定区片段连接，并克隆至pcDNA3.4载体中，如图2所示。将轻链与重链组合后共转染不哺乳动物细胞，进行表达纯化，转染及纯化方法如下。
取对数生长期细胞稀释至1.5×106个/mL，用1mL培养液稀释质粒，混匀，为溶液1，另外取1mL培养液稀释60uL转染试剂，混匀，为溶液2，将溶液2加入溶液1中，混匀，37℃孵育15分钟后，将混合转染液逐滴加入细胞液中，边摇边加，放至摇床培养，表达一周，收集上清，8000rpm离心5min。用20mL1xPBS，1mL/min的流速平衡层析柱，1mL/min的流速上样，20mL1xPBS，1mL/min的流速洗杂，用柠檬酸缓冲液(PH3.4)洗脱，流速1mL/min，分管收集，每管约500uL。共收集10管，使用NanoDrop仪器读取280nm吸光度值。将高浓度蛋白吸至透析袋放1XPBS的烧杯中透析。收集纯化好的抗体其还原条件下的SDS-PAGE结果如图3。
纯化得到的五个含有可变区和恒定区的完整抗体a、b、c、d和e，可变区的氨基酸序列信息对应实施例1的表2。
实施例3哺乳系统表达的兔单克隆抗体的结合ELSIA和亲和力检测(BLI)
用ELISA对实施例2制备的兔单克隆抗体进行验证。将2ug/mL BSA包被到ELISA板条，4℃过夜，2％无蛋白封闭液37℃封闭1小时，将实施例2中抗BSA兔单克隆抗体稀释至10ug/mL作为首孔浓度，3倍梯度稀释，末孔为空白，37℃孵育1小时，PBST洗板5次后拍干，用Goat anti-Rabbit IgG，HRP做二抗，37℃孵育1小时，PBST洗板5次后拍干。每孔加100uLTMB室温避光反应5-10分钟，用2M硫酸终止显色，用酶标仪读取450nm波长下的吸光值。
结果如图4所示，a、b、c、d、e均可与BSA结合，其EC50见表3。
表3 5个表达抗体的EC50
从表3可以看出：a、b、c、d、e共5个抗体均与BSA有结合，根据EC50的值分析，d抗体EC50值最小，故进一步采用BLI的方法检测d抗体与BSA的亲和力。
根据抗体分子量，用0.05％PBST将d体稀释至100nM(d抗体分子量144KDa100nM＝14.4ug/ml)，终体积2ml；根据抗原分子量，用0.05％PBST将抗原BSA稀释至500nM(BSA为66.5KDa,500nM＝33.25ug/ml)，然后将BSA以500nM为起始浓度，进行1/3梯度稀释。将稀释后的抗原抗体加入到96孔样品板中，板排布，见表4,在MAX板中加入0.05％PBST,250ul/孔，加8个孔(1列)，然后将ProteinA生物传感器放入到装有0.05％PBST的max板中。将已经加样的样品板和已经放入生物传感器的MAX板放入生物膜层干涉技术分析仪的样本仓内，注意样品板置于A板位，MAX板置于B板位。关上样本仓门，打开电脑桌面“鲨鱼头”标志软件，右击，选择“add a new K assacy”，进入K程序界面。在K程序界面设置参数：buffer 120S；load 120s；buffer 120s；结合300s；解离600s，点击K程序界面“start”键，开始运行程序。待程序运行结束后，点击“binding curve Fit”拟合曲线，得到亲和力KD值。
表4 BLI检测样品板排布
| 1 | 2 | 3 | 4 | |
| A | 0.05％PBST | d抗体-100nM | 0.05％PBST | BSA-500nM |
| B | 0.05％PBST | d抗体-100nM | 0.05％PBST | BSA-166nM |
| C | 0.05％PBST | d抗体-100nM | 0.05％PBST | BSA-56nM |
| D | 0.05％PBST | d抗体-100nM | 0.05％PBST | BSA-18.5nM |
| E | 0.05％PBST | d抗体-100nM | 0.05％PBST | Buffer |
BLI亲和力检测曲线图如图6所示，其KD(M)见表5。
表5 d抗体亲和力检测KD(M)
实施例4哺乳系统表达的兔单克隆抗体去除细胞培养液中的BSA
将实施例2制备的兔单克隆抗体d以10ug/ml的终浓度加入到细胞培养液中，室温孵育1h，以使细胞培养液中残留BSA与兔单克隆抗体充分结合，然后采用ProteinA纯化柱去除细胞培养液中的兔单克隆抗体，收集过柱后的细胞培养液，以达到去除细胞培养液中残留BSA的目的。
为验证兔单克隆抗体去除细胞培养液中残留BSA的效果，采用BLI的方法同步对细胞培养液(处理前)和细胞培养液(处理后)同步进行检测，检测方法为ProteinAprobe→BSA兔单克隆抗体→细胞培养液(处理前/处理后)，检测结果发现细胞培养液(处理后)的BSA残留量减少，几乎无BSA残留，结合曲线图见图5。
结论：BSA兔单克隆抗体可用于去除BSA残留。
以上仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效变换，或直接或间接运用在其它相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
Claims (8)
1.一种抗BSA的兔单克隆抗体或其抗原结合部分，其特异性地结合BSA， 所述单克隆抗体或其抗原结合部分包含重链可变区VH和轻链可变区VL，所述重链可变区包括重链CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述轻链可变区包括轻链CDR-L1、CDR- L2和CDR- L3，
其特征在于，所述单克隆抗体或其抗原结合部分的六种CDR的氨基酸序列选自下列五组中任意一组：
(1)氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示的CDR-H1，氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示的CDR-H2，氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示的CDR-H3，氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示的CDR-L1，氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示的CDR-L2，氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示的CDR-L3；
(2) 氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示的CDR-H1，氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示的CDR-H2，氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示的CDR-H3，氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示的CDR-L1，氨基酸序列如SEQ ID NO:15所示的CDR-L2，氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示的CDR-L3；
(3) 氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示的CDR-H1，氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示的CDR-H2，氨基酸序列如SEQ ID NO:21所示的CDR-H3，氨基酸序列如SEQ ID NO:22所示的CDR-L1，氨基酸序列如SEQ ID NO:23所示的CDR-L2，氨基酸序列如SEQ ID NO:24所示的CDR-L3；
(4) 氨基酸序列如SEQ ID NO:27所示的CDR-H1，氨基酸序列如SEQ ID NO:28所示的CDR-H2，氨基酸序列如SEQ ID NO:29所示的CDR-H3，氨基酸序列如SEQ ID NO:30所示的CDR-L1，氨基酸序列如SEQ ID NO:31所示的CDR-L2，氨基酸序列如SEQ ID NO:32所示的CDR-L3；
(5) 氨基酸序列如SEQ ID NO:35所示的CDR-H1，氨基酸序列如SEQ ID NO:36所示的CDR-H2，氨基酸序列如SEQ ID NO:37所示的CDR-H3，氨基酸序列如SEQ ID NO:38所示的CDR-L1，氨基酸序列如SEQ ID NO:39所示的CDR-L2，氨基酸序列如SEQ ID NO:40所示的CDR-L3。
2.根据权利要求1所述BSA的兔单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于，所述单克隆抗体或其抗原结合部分的重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列选自下列五组中任意一组：
(1)重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO:2所示；
(2)重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示，和轻链可变区的氨基酸序列如SEQID NO:10所示；
(3)重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示，和轻链可变区的氨基酸序列如SEQID NO:18所示；
(4)重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:25所示，和轻链可变区的氨基酸序列如SEQID NO:26所示；
(5)重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:33所示，和轻链可变区的氨基酸序列如SEQID NO:34所示。
3.一种核酸分子，其包含编码如权利要求1-2中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列。
4.一种含有如权利要求3所述核酸的哺乳系统表达载体。
5.一种含有权利要求4所述载体的宿主细胞。
6.一种试剂盒，其能用于去除BSA残留，其特征在于，含有如权利要求1-2任一项所述抗BSA的兔单抗。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，其用于双抗夹心ELISA或双抗夹心免疫胶体金层析技术定量检测BSA。
8.如权利要求1-2中任一项所述的抗体或其抗原结合片段在用于去除BSA残留中的应用。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211354964.7A CN117343171B (zh) | 2022-11-01 | 2022-11-01 | 一种抗bsa的兔单克隆抗体及其应用 |
| PCT/CN2023/075810 WO2024093042A1 (zh) | 2022-11-01 | 2023-02-14 | 一种抗bsa的兔单克隆抗体及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211354964.7A CN117343171B (zh) | 2022-11-01 | 2022-11-01 | 一种抗bsa的兔单克隆抗体及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN117343171A CN117343171A (zh) | 2024-01-05 |
| CN117343171B true CN117343171B (zh) | 2024-03-19 |
Family
ID=89354562
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211354964.7A Active CN117343171B (zh) | 2022-11-01 | 2022-11-01 | 一种抗bsa的兔单克隆抗体及其应用 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN117343171B (zh) |
| WO (1) | WO2024093042A1 (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106749670A (zh) * | 2017-01-22 | 2017-05-31 | 北京东方百泰生物科技有限公司 | 抗pcsk9单克隆抗体 |
| CN114369160A (zh) * | 2021-12-28 | 2022-04-19 | 恺佧生物科技(上海)有限公司 | 结合抗繆勒氏管激素amhn二聚体蛋白的高亲和力兔单抗 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS608228A (ja) * | 1983-06-28 | 1985-01-17 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | モノクロ−ナル抗体 |
| CN108341870B (zh) * | 2018-01-02 | 2021-04-02 | 北京大学 | 一种抗bsa纳米抗体、其生产方法及应用 |
| CN111057148B (zh) * | 2019-12-06 | 2021-06-18 | 南京融捷康生物科技有限公司 | 针对牛血清白蛋白bsa的单域抗体及其衍生蛋白 |
| CN111018985B (zh) * | 2019-12-06 | 2021-06-18 | 南京融捷康生物科技有限公司 | 针对牛血清白蛋白bsa的单域抗体的应用 |
| CN112694531A (zh) * | 2020-03-30 | 2021-04-23 | 天津昂赛细胞基因工程有限公司 | 一种bsa单抗制备方法 |
| CN113667014B (zh) * | 2020-05-15 | 2023-01-10 | 上海百英生物科技有限公司 | 一种抗bsa纳米抗体及应用 |
| CN114591430B (zh) * | 2022-05-10 | 2022-08-12 | 翌圣生物科技(上海)股份有限公司 | Bsa单克隆抗体及其应用、含有抗体的bsa检测试剂盒 |
-
2022
- 2022-11-01 CN CN202211354964.7A patent/CN117343171B/zh active Active
-
2023
- 2023-02-14 WO PCT/CN2023/075810 patent/WO2024093042A1/zh unknown
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106749670A (zh) * | 2017-01-22 | 2017-05-31 | 北京东方百泰生物科技有限公司 | 抗pcsk9单克隆抗体 |
| CN114369160A (zh) * | 2021-12-28 | 2022-04-19 | 恺佧生物科技(上海)有限公司 | 结合抗繆勒氏管激素amhn二聚体蛋白的高亲和力兔单抗 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN117343171A (zh) | 2024-01-05 |
| WO2024093042A1 (zh) | 2024-05-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN113004412B (zh) | 胃蛋白酶原i单克隆抗体及其应用 | |
| CN110885374B (zh) | 一种抗降钙素原的高亲和力纳米抗体及其应用 | |
| CN117624358B (zh) | Aβ1-40特异性抗体及其在阿尔茨海默症辅助诊断试剂盒的应用 | |
| CN111196851B (zh) | 针对人抗缪勒管激素的特异性抗体及其应用 | |
| CN113045666B (zh) | 胃蛋白酶原ii单克隆抗体及其应用 | |
| CN113045646B (zh) | 抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体 | |
| CN109336973A (zh) | 抗转铁蛋白抗体及其用途 | |
| CN116333111B (zh) | 靶向Aβ40重组抗体、靶向Aβ42重组抗体与检测Aβ40和/或Aβ42的试剂盒 | |
| CN117343171B (zh) | 一种抗bsa的兔单克隆抗体及其应用 | |
| WO2020134374A1 (zh) | 抗恶性疟原虫hrp-ii抗体 | |
| WO2023193376A1 (zh) | 半夏凝集素蛋白酶联免疫Elisa试剂盒及应用 | |
| CN116120459A (zh) | 一种抗人IgE纳米抗体及其制备方法和应用 | |
| US20210380719A1 (en) | Rabbit antibodies to human immunoglobulins g | |
| CN117304327B (zh) | 一种抗山羊IgG的兔单克隆抗体及其应用 | |
| CN109776681B (zh) | 一种抗免疫球蛋白Fc段的重链抗体及其应用 | |
| CN112646029B (zh) | 成熟脑源性神经营养因子的抗体及其应用和诊断试剂盒 | |
| CN117264072B (zh) | 一种抗sn38单抗及其应用 | |
| CN117683121B (zh) | 抗水痘-带状疱疹病毒抗体及其应用 | |
| CN112574305B (zh) | 针对前体脑源性神经营养因子的抗体及其应用 | |
| WO2022218277A1 (zh) | 一种抗fgf21羧基末端的抗体及其应用 | |
| CN116693682B (zh) | 抗Tau蛋白抗体及其制备方法和用途 | |
| JP7366411B2 (ja) | ヒトαディフェンシンＨＤ５を検出する方法及びキット、並びにこれらにおいて用いられる抗体 | |
| WO2024051096A1 (zh) | 一种抗cd40纳米抗体及其制备方法与应用 | |
| CN117567606A (zh) | 靶向神经丝蛋白轻链重组抗体与检测神经丝蛋白轻链的试剂盒 | |
| CN116003615A (zh) | 一种抗卡利普多的单克隆抗体及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |