CN117121906B - 血液保存液及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种血液保存液及其制备方法和用途。针对现有血液保存液抗凝血的效果有待提高，抗凝血时间短的问题，本发明提供了一种血液保存液，组成包括：灯盏花素与葛根素按重量比1:5~20混合而得。本发明全新的血液保存液，在添加该成分后可有效改善血液样本保存时间和血细胞的完整性，解决了因样本保存条件不佳导致的淋巴细胞分离纯化效率过低的问题。本发明的血液保存液，将凝血血样的比例降低到2%以下，相比现有的血液保存液，降低了90%，取得了显著的进步。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种血液保存液及其制备方法和用途。
背景技术
疾病的细胞与基因治疗是一种新型的治疗方式，其主要是通过NK细胞与CIK细胞体外扩增培养技术，以人血液样本中的淋巴细胞作为原材料经体外扩增培养后再通过静脉回输至人体的方式从而达到治疗目的。在细胞与基因治疗中，为了获得活力好的NK细胞，需要将采集的血液进行保存，以避免凝血。目前的血液保存液的组成中，主要包括以下种类：
（1）枸橼酸钠：国际上常用的抗凝剂，枸橼酸钠与血浆中钙离子结合形成不易电离的可溶性络合物，血液不凝结；（2）葡萄糖：红细胞代谢主要能量来源；（3）腺嘌呤：红细胞对腺嘌呤的需要是特异的，延长血液在4℃的保存时间；（4）磷酸二氢钠：防止红细胞聚集，为红细胞能量代谢提供磷酸盐；（5）枸橼酸：与枸橼酸钠形成缓冲对，调节和稳定溶液pH。
然而，在采集血样时，由于血样采集供应链的不完善或者保存条件不佳，即使使用了血液保存液有时候血样也会出现凝固的现象，每100份血样中约有20-25份出现凝血现象，占比高达20%以上。血液凝固会导致将血液中的各种细胞群按密度梯度分离提纯的效率降低，成本增加，阻碍了血液中各细胞分离的技术发展。
目前，急需开发一种抗凝血功能更好，抗凝血时间更长的血液保存液，亟待开发。
发明内容
本发明要解决的技术问题为：现有血液保存液抗凝血的效果有待提高，抗凝血时间短的问题。
本发明解决上述技术问题的技术方案为：提供了一种血液保存液，组成包括：
灯盏花素与葛根素按重量比1:5~20混合而得。
优选的，上述血液保存液中，所述的灯盏花素与葛根素重量比为1:10。
其中，上述血液保存液中，所述的灯盏花素纯度为≥98%。
其中，上述血液保存液中，所述的葛根素纯度HPLC≥98%。
其中，上述血液保存液中，还包括血液保存液Ⅲ。
进一步的，所述的血液保存液Ⅲ的组成包括：枸橼酸、枸橼酸钠、磷酸二氢钠、葡萄糖和腺嘌呤。
进一步的，所述的血液保存液Ⅲ的组成包括：每1000ml中含有枸橼酸3.27g、枸橼酸钠26.3g、磷酸二氢钠2.22g、葡萄糖31.9g和腺嘌呤0.275g。
其中，上述血液保存液中，所述的灯盏花素为20mg，葛根素为200mg。
进一步的，上述血液保存液中，所述的灯盏花素为20mg，葛根素为200mg，血液保存液Ⅲ 为1000ml。
本发明还提供了一种上述血液保存液的制备方法，将灯盏花素和葛根素溶解于血液保存液Ⅲ中，混匀即可。
本发明还提供了一种灯盏花素与葛根素按重量比1:10混合而得的混合物在制备抗凝血产品中的用途。
本发明的有益效果为：
本发明提供了一种血液保存液，除常规的血液保存液Ⅲ以外，还包括了灯盏花素与葛根素按重量比1:10混合而得的混合物。本发明全新的血液保存液，在添加该成分后可有效改善血液样本保存时间和血细胞的完整性，解决了因样本保存条件不佳导致的淋巴细胞分离纯化效率过低的问题。本发明的血液保存液，将凝血血样的比例降低到2%以下，相比现有的血液保存液，降低了90%，取得了显著的进步。
具体实施方式
本发明在现有的血液保存液里添加灯盏花素、葛根素植物中药成分，改良后的血液保存液具有更好的抗凝血、抗血小板功能。
灯盏花素：中文名称灯盏花素，分子式C15H24N2O，灯盏花素是从菊科植物短亭飞蓬的干燥全草中提取的有效成分。本发明的研究发现：灯盏花素能显著延长凝血时间（CT）、凝血酶原时间（PT），抑制血小板第3因子（PF3）活性，缩短优球蛋白溶解时间，其抗凝血作用可能是通过影响PF3和凝血因子V而实现的。临床灯盏花注射液的研究表明，其具有扩张微血管、抗缺血缺氧、抑制血小板聚集、降低血液黏度等作用。
葛根素：中文名称葛根素，又称葛根黄素，是从中药葛根中分离的具有扩冠作用的异黄酮类衍生物，目前已可人工合成。葛根素可显著延长PT、活化部分凝血活酶时间（APTT），并降低ADP诱导的血小板最大聚集率，从而有效改善血液高凝状态。
经实验验证，2-8℃条件下单独添加灯盏花素或者葛根素均能有效延长凝血时间，较未添加前抗凝血时间延长30-35d。本发明将两种中药成分结合一起，按照1:5、1:10、1:15、1:20比例，最终1:10比例血液保存液抗凝血时间最优（灯盏花素20mg，葛根素200mg）溶于1000ml血液保存液Ⅲ中，抗凝血时间将延长30-35d。
下面将通过实施例对本发明的具体实施方式做进一步的解释说明，但不表示将本发明的保护范围限制在实施例所述范围内。
实施例中采用的血液细胞采集自中山市博爱医院，已经中山市博爱医院医学伦理协会批准。
实施例中的灯盏花素购自成都普瑞法科技开发有限公司，葛根素购自上海源叶生物科技有限公司，血液保存液Ⅲ购自山东威高集团医用高分子制品股份有限公司，其余试剂和原料均为普通市售产品。
实施例 采用本发明的血液保存液保存血液
实施例和对比例的血液保存液的组成分别如下表1所示。
表1 不同组成的血液保存液
将30支试管编号，分为6组，每组5支试管，分别装0.5ml的如表1所示的血液保存液。静脉采血135ml，按每支试管4.5ml的量加入刚采集好的血液样品（血液与血液保存液添加的体积比为9:1）。
血液流入试管中开始计时，放入2-8℃恒温冷链箱中，每隔24h将试管倾斜，直至将试管倾斜血液不流动为止，计时，即为凝血时间。
血液流入试管中开始计时，每支试管每隔10d取0.5ml血液，离心（参数800g，5min）取血浆送检凝血4项，检测血液在保存过程中各项功能指标是否正常。
各实施例和对比例的凝血时间如下表2所示。
表2 采用不同血液保存液的凝血时间
分别采用实施例1和对比例3的血液保存液保存收集的血液，每100份血液样品中，30d时间内采用实施例1的血液保存液，有2份样品凝血；采用对比例3的血液保存液样品中，有25份样品凝血。
Claims (5)
1.血液保存液，其特征在于，所述血液保存液组成为：灯盏花素为20mg，葛根素为200mg，血液保存液Ⅲ 为1000ml，所述血液保存液Ⅲ的组成为：枸橼酸、枸橼酸钠、磷酸二氢钠、葡萄糖和腺嘌呤；每1000ml中含有枸橼酸3.27g、枸橼酸钠26.3g、磷酸二氢钠2.22g、葡萄糖31.9g和腺嘌呤0.275g。
2.根据权利要求1所述的血液保存液，其特征在于：所述的灯盏花素纯度为≥98%。
3.根据权利要求1所述的血液保存液，其特征在于：所述的葛根素纯度HPLC≥98%。
4.权利要求1-3任一项所述的血液保存液的制备方法，其特征在于：将灯盏花素和葛根素溶解于血液保存液Ⅲ中，混匀即可。
5.权利要求1所述的血液保存液在血液保存中的用途。
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