CN109566602A

CN109566602A - 一种红细胞保存液及保存装置

Info

Publication number: CN109566602A
Application number: CN201910006119.2A
Authority: CN
Inventors: 周杰锋; 王德明
Original assignee: Ningbo Ai Jie Ning Ning Biotechnology Co Ltd
Current assignee: Ningbo Ai Jie Ning Ning Biotechnology Co Ltd
Priority date: 2019-01-04
Filing date: 2019-01-04
Publication date: 2019-04-05

Abstract

本发明涉及一种红细胞保存液，由包括如下组分制备得到：腺嘌呤0.2‑0.6mg/ml、葡萄糖20‑50mg/ml、枸橼酸钠5‑15mg/ml、磷酸二氢钠0.02‑0.06mg/ml、抗凝剂1.0‑3.0mg/ml，膜保护剂5‑20mg/ml；其中抗凝剂选自EDTA‑3K和EDDHA盐中一种或多种；本发明降低了红细胞保存过程中自身的凝集性，延长红细胞保存时间，减少红细胞溶血现象的出现。

Description

一种红细胞保存液及保存装置

技术领域

本发明涉及输血检验技术领域，尤其涉及一种红细胞保存液及保存装置。

背景技术

输血前的血型血清学实验是保证输血安全最基础也是最为重要的实验项目。血型血清学实验离不开抗原抗体反应。目前，血型血清学中所用到的抗体试剂由于生产纯化便利，早已大量商品化、标准化。而作为反应体系中另外一个必不可少的成分则是红细胞，其作为试剂所面临的问题就要复杂得多。首先红细胞原料必须来自于人体，无法用其他来源的物质替代，其次红细胞寿命较短，在体内平均寿命为120天。因此试剂红细胞的生产和保存一直是实验室研究人员普遍关注的问题，尤其针对一些稀有血型红细胞，在人群中出现频率低，且不易鉴定，不易收集。再加上不能长时间保存，对血型血清学相关实验的顺利开展都有很大的制约作用。

红细胞液态保存时,血液中氧的亲和性逐渐增长而携氧量减少。细胞死亡的信号来自于细胞膜的改变，如:累积的损害使膜脆性增加；抗原暴露后结合免疫球蛋白,使红细胞被巨噬细胞吞噬。目前最常见的红细胞保存方法是将红细胞悬浮于红细胞保存液中，4℃冷藏，这样保存的优点在于可以减缓红细胞的代谢速度，保护红细胞在体外保存时结构和功能的完整性，从而延长其保存时间，减少红细胞的浪费。目前的红细胞保存液国内外一般应用ACD保存液、CPD保存液等，这些保存液可以对红细胞的保存时间有所延长，但在一个月后就出现红细胞的褐化及溶血。

发明内容

针对背景技术中存在的问题，本发明提供一种红细胞保存液，延长红细胞的保存时间，降低红细胞的溶血率。

为了实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：

一种红细胞保存液，由包括如下组分制备得到：腺嘌呤0.2-0.6mg/ml、葡萄糖20-50mg/ml、枸橼酸钠5-15mg/ml、磷酸二氢钠0.02-0.06mg/ml、抗凝剂1.0-3.0mg/ml，膜保护剂5-20mg/ml。

作为本发明的优选，一种红细胞保存液，包括如下组分制备得到：腺嘌呤0.3-0.5mg/ml、葡萄糖30-40mg/ml、枸橼酸钠8-12mg/ml、磷酸二氢钠0.03-0.05mg/ml、抗凝剂1.5-2.0mg/ml，膜保护剂8-15mg/ml.

进一步的，所述的抗凝剂选择EDTA-3K和EDDHA盐中一种或多种，所述的膜保护剂选择山梨醇、鼠李糖、海藻糖中一种或多种。

进一步的，其中抗凝剂为EDTA-3K，膜保护剂为山梨醇和海藻糖。

进一步的，所述的山梨醇和海藻糖的质量比为1:2~2:1。

作为实施方式，一种红细胞保存液，包括如下组分制备得到：腺嘌呤0.4mg/ml、葡萄糖30mg/ml、枸橼酸钠10mg/ml、磷酸二氢钠0.04mg/ml、EDTA-3K含量为2.0 mg/ml，山梨醇含量为6 mg/ml，山海藻糖含量为6 mg/ml。

进一步的，红细胞保存液，其中抗凝剂为EDTA-3K和EDDHA–Na，膜保护剂为鼠李糖。

进一步的，EDTA-3K和EDDHA–Na的质量比为1:1~4:1。

作为实施方式，一种红细胞保存液，包括如下组分制备得到：腺嘌呤0.6mg/ml、葡萄糖40mg/ml、枸橼酸钠6mg/ml、磷酸二氢钠0.02mg/ml、EDTA-3K含量1.5 mg/ml，EDDHA–Na含量为0.8 mg/ml，鼠李糖含量为10mg/ml。

本领域技术人员可以同样可以理解，本申请可以用于采血袋、血液标本保存盒、血液检测仪器中的容器部件。

本发明红细胞保存剂，申请人基于EDDHA中多种价键提供的独特螯合性能以及与血液/试剂中其他成分良好的兼容性申请人以部分EDDHA–Na替换常用抗凝剂EDTA-3K；基于鼠李糖、海藻糖对细胞低毒和高盐条件下良好的张力和表面活性剂性能，选用山梨醇、海藻糖、鼠李糖的膜保护剂。实验证明上述策略制成的红细胞保存液能实现优异的保护效果，降低了红细胞保存过程中自身的凝集性，延长红细胞保存时间，减少红细胞溶血现象的出现。

具体实施方式

实施例1：

按以下成分和含量配置红细胞保存液：

腺嘌呤0.4mg/ml、葡萄糖30mg/ml、枸橼酸钠10mg/ml、磷酸二氢钠0.04mg/ml、EDTA-3K含量为2.0 mg/ml，山梨醇含量为6 mg/ml，山海藻糖含量为6 mg/ml。

用无RNase酶活的纯净水配置得到1000ml红细胞保存液。

实施例2：

按以下成分和含量配置红细胞保存液：

腺嘌呤0.6mg/ml、葡萄糖40mg/ml、枸橼酸钠6mg/ml、磷酸二氢钠0.02mg/ml、EDTA-3K含量1.5 mg/ml，EDDHA–Na含量为0.8 mg/ml，鼠李糖含量为10mg/ml。

用无RNase酶活的纯净水配置得到1000ml红细胞保存液。

对比例

GMA红细胞保存液配置：

腺嘌呤1.8mmol/L、葡萄糖111 mmol/L、甘露醇80 mmol/L、柠檬酸钠14 mmol/L、6水氯化镁1.02 mmol/L、氯化钠23.32 mmol/L、磷酸二氢钾1.9 mmol/L、12水磷酸氢钠1.0 mmol/L。

配置得到1000mlGMA红细胞保存液。

实验1：

实验前的准备

1、洗涤红细胞的制备：

将5份新鲜的A型健康人的红细胞吸出血清后混合，加入2～3倍体积的氧化钠注射液，吹打混匀，置于离心机中3000rpm离心5min，将离心好的A型红细胞试管取出，吸去上清液及附着在红细胞表层的白细胞、血小板等成分，再加入2～3倍体积的氧化钠注射液，混匀后在离心机中3000rpm离心5min，并重复两遍。在第4次离心后，吸出绝大多数上清液，留下压积红细胞备用。均放于4℃冰箱冷藏保存。

、红细胞悬液的制备

将洗好的红细胞吸出100μl到已加入9.9mL实施例1、实施例2和实施例3制备得到的红细胞保存液的滴管瓶中，配制出10mL1％的不同保存液保存的红细胞悬液各2瓶，其中一瓶用于检测，另一瓶静置观察。

游离血红蛋白浓度测定：

红细胞主要由红细胞膜和大量的血红蛋白组成，当红细胞膜破裂时，膜表面抗原被破坏，血红蛋白逸出，发生溶血现象。所以游离血红蛋白浓度可以作为红细胞体外保存效果的质量指标之一。

血红蛋白具有过氧化酶作用，可以使过氧化氢分解产生新生态氧，新生态氧氧化联苯胺为蓝色或绿色的衍生物，在酸性条件下颜色变为黄绿色，吸收峰在435nm处。根据吸光度与已知浓度的血红蛋白的吸光度进行比较，可求得其浓度。

冰乙酸溶解邻甲联苯胺0.1g，加蒸馏水至50mL，配制为0.2％的邻甲联苯胺溶液，4℃保存；吸取3.67mL30％的过氧化氢，加蒸馏水至100mL，配制为1％的过氧化氢溶液，每次实验都新鲜配制；吸取冰乙酸溶液50mL，加蒸馏水至500mL，配制为10％的冰乙酸溶液；称取0.02g牛血红蛋白溶于1mL生理盐水中，配制为20mg/mL的血红蛋白储备液，用时稀释为200mg/L的血红蛋白标准液。

向测定管内加入待测上清液20μl，空白管加入双蒸水20μl，标准管加入200mg/L的血红蛋白标准液20μl。再向上述各管中加入0.2％邻甲联苯胺溶液1mL，然后加入1％过氧化氢溶液1mL，混匀放置10min后，各管加入10％冰乙酸溶液10mL，于紫外可见分光光度计，波长为435nm，空白管标零测定吸光度。

游离血红蛋白浓度(mg/L)＝测定管吸光度/标准管吸光度×200(mg/L)

测定结果见表1：

表1各红细胞悬液在不同保存期的血红蛋白浓度

注“*”表示几乎看不见红细胞时的血红蛋白浓度。

按照国家标准GB18469-2012《全血及成分血质量要求》，洗涤红细胞储存末期溶血率应小于红细胞总量的0.8％，即游离血红蛋白浓度小于880mg/L。那么，从表1得知实施例1红细胞悬液的保存期至少为24周，而实施例2保存的红细胞的保存期也至少可以达到24周；而实施例3的GMA红细胞保存液保存期不足8周。

Claims

1.一种红细胞保存液，其特征在于由包括如下组分制备得到：腺嘌呤0.2-0.6mg/ml、葡萄糖20-50mg/ml、枸橼酸钠5-15mg/ml、磷酸二氢钠0.02-0.06mg/ml、抗凝剂1.0-3.0mg/ml，膜保护剂5-20mg/ml。

2.根据权利要求1所述的一种红细胞保存液，其特征在于包括如下组分制备得到：腺嘌呤0.3-0.5mg/ml、葡萄糖30-40mg/ml、枸橼酸钠8-12mg/ml、磷酸二氢钠0.03-0.05mg/ml、抗凝剂1.5-2.0mg/ml，膜保护剂8-15mg/ml。

3.根据权利要求1所述的一种红细胞保存液，其特征在于所述的抗凝剂选择EDTA-3K和EDDHA盐中一种或多种，所述的膜保护剂选择山梨醇、鼠李糖、海藻糖中一种或多种。

4.根据权利要求3所述的一种红细胞保存液，其特征在于其中抗凝剂为EDTA-3K，膜保护剂为山梨醇和海藻糖。

5.根据权利要求4所述的一种红细胞保存液，其特征在于所述的山梨醇和海藻糖的质量比为1:2~2:1。

6.根据权利要求4所述的一种红细胞保存液，其特征在于包括如下组分制备得到：腺嘌呤0.4mg/ml、葡萄糖30mg/ml、枸橼酸钠10mg/ml、磷酸二氢钠0.04mg/ml、EDTA-3K含量为2.0mg/ml，山梨醇含量为6 mg/ml，山海藻糖含量为6 mg/ml。

7.根据权利要求3所述的一种红细胞保存液，其特征在于其中抗凝剂为EDTA-3K和EDDHA–Na，膜保护剂为鼠李糖。

8.根据权利要求7所述的一种红细胞保存液，其特征在于EDTA-3K和EDDHA–Na的质量比为1:1~4:1。

9.根据权利要求6所述的一种红细胞保存液，其特征在于包括如下组分制备得到：腺嘌呤0.6mg/ml、葡萄糖40mg/ml、枸橼酸钠6mg/ml、磷酸二氢钠0.02mg/ml、EDTA-3K含量1.5mg/ml，EDDHA–Na含量为0.8 mg/ml，鼠李糖含量为10mg/ml。

10.一种红细胞保存装置，该装置包括权利要求1~9任意一项权利要求所述的红细胞保存液，红细胞保存液保存于采血袋、血液标本保存盒、血液检测仪器中的容器部件中。