CN1170811C - 支链氨基酸依赖性氨基转移酶的抑制剂及其在治疗糖尿病性视网膜病中的应用 - Google Patents

支链氨基酸依赖性氨基转移酶的抑制剂及其在治疗糖尿病性视网膜病中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及预防和治疗糖尿病性视网膜病的方法。该方法包括给动物，例如哺乳动物、特别是人以足以治疗视网膜的量施用式I、II和/或III所示支链氨基酸依赖性氨基转移酶(BCAT)途径抑制剂。本发明还涉及几种新的式(IV)BCAT途径抑制剂。在式(I-IV)中，n、m、X和R1-R13的定义同说明书所述。

Description

支链氨基酸依赖性氨基转移酶的抑制剂 及其在治疗糖尿病性视网膜病中的应用
                       发明背景
在美国，有超过一千四百万的人患有糖尿病。所有糖尿病患者都有发生视网膜并发症的危险。然而，患有I型糖尿病、即胰岛素依赖性糖尿病的患者所面临的发生严重视力损失的危险性比患有II型糖尿病、即非胰岛素依赖性糖尿病的患者要大。
视网膜病是视网膜的任一非炎性疾病。糖尿病性视网膜病是与任一类型糖尿病有关的任一视网膜病。
在糖尿病患者中，高血糖水平首先引起患者眼睛中的生长因子增多。该病理状况被称为“糖尿病性视网膜病前阶段”，并且如果不进行预防性治疗的话，可导致完全的糖尿病性视网膜病。
视网膜病将在某种程度上终生影响大多数糖尿病患者。当今，视网膜病是导致年龄在20-74岁之间的美国人失明的主要原因，并且预计在美国将损害大约三分之一糖尿病患者的视力。在美国，在糖尿病患者人群当中，每年新发生多至40000例失明(CDC，未公开出版的数据，1993)。糖尿病患者由于视网膜病而失明的可能性比一般人群高25倍。
糖尿病性视网膜病有两个阶段—一般首先发生的非增殖阶段、和增殖阶段。非增殖阶段也称为“背景糖尿病性视网膜病”，其特征是基底膜增厚、视网膜周皮细胞丧失、大血管异常、视网膜微内动脉瘤、视网膜出血(也称为“斑点”出血)、视网膜水肿、特别是糖尿病性斑点水肿、与视网膜缺血或不良视网膜灌注(即不良血管生成)有关的毛细血管封闭、以及软和硬的渗出物。增殖阶段估计影响着700,000美国人(Chen等人，J.Miss. State Med. Assoc.36(7)：201-208(1995))，其特征是从视网膜或遍及视网膜或视神经盘的内表面的视神经或到达玻璃体腔内的新血管生成和维管组织生长(即涉及神经胶质和纤维成分的瘢痕形成)。
增殖阶段可导致潮红性或新血管性青光眼。不论在哪个阶段都有可能发生斑点水肿，并且其与视网膜新血管生成的并发症一起是导致糖尿病相关性视力损失的两个主要视网膜原因。
虽然糖尿病性视网膜病的病理阶段已充分描述过，但是人们对作为糖尿病性视网膜病基础的分子事件知道的很少。这部分是由于根据给定个体，这种疾病会发展10-30年。
严格控制血糖和高血压以及糖尿病的眼睛筛分似乎有益于预防该疾病。目前的治疗由眼科医师定期检查、激光光致凝固法和玻璃体手术组成。
增厚或牵涉斑点中心的斑点水肿是用病灶性斑点光致凝固法进行治疗的。小的(直径小于50mu)低强度激光灼伤的靶区域是斑点的渗漏区域(Murphy，Amer. Family Physician 51(4)：785-796(1995))。如果斑点水肿持续的话，可能需要再次治疗。
患有严重-非常严重非增殖性视网膜病的患者和有高度增殖性视网膜病危险性的患者或者已经患有早期或晚期增殖性视网膜病的患者是用散射或全视网膜(panretinal)光致凝固法治疗。全视网膜光致凝固法包括1500-2000个激光灼伤，这些激光灼伤的直径为500mu，在视网膜的外周中间和外周部分(Murphy(1995)见上文)。
对于糖尿病小血管并发症的发展，得到最充分证明的生化机制是山梨醇途径。在山梨醇途径中，醛糖还原酶催化葡萄糖转化成山梨醇，和催化半乳糖转化成半乳糖醇。醛糖还原酶对葡萄糖的底物亲和力很低。因此，当葡萄糖浓度正常时，该途径没有活性。在高血糖期间，山梨醇途径变得有活性。对于视网膜周皮细胞，例如对于葡萄糖穿透不需要胰岛素的视网膜周皮细胞，该山梨醇途径的激活很重要。类似地，视网膜毛细血管细胞似乎含有大量醛糖还原酶(Ferris，Hospital Practice：79-89(May 15，1993))。
由于糖尿病性视网膜病的流行，需要对该疾病进行有效的预防和治疗。因此，本发明的主要目的是提供预防和治疗糖尿病性视网膜病的方法，包括在糖尿病性视网膜病前阶段，非增殖性糖尿病性视网膜病阶段和增殖性糖尿病性视网膜病阶段进行治疗。本发明的这个目的和其它目的可从本文提供的详细描述中清楚地看出。
                       发明概述
本发明涉及预防和治疗糖尿病性视网膜病的方法，包括在糖尿病性视网膜病前阶段，非增殖性糖尿病性视网膜病阶段和增殖性糖尿病性视网膜病阶段进行治疗。该方法包括施用支链氨基酸依赖性氨基转移酶途径抑制剂。支链氨基酸依赖性氨基转移酶途径(BCAT)抑制剂优选为式I、II和/或III化合物、或其可药用盐、酯、前药、或酰胺：
Figure C0080526700071
其中：
R9是H；烷基；环烷基；含有卤素、胺、烷氧基、环烷基、或羟基的取代烷基；烯丙基；炔基；链烷酰基；烷氧基烷酰基；磺酰基；苯基；苄基；或芳基烷基；
m和n独立地为1-3的整数；
R1-R8和R10-R14独立地为H、烷基、或取代烷基；且
X＝NR14、O或S。
这些化合物可具有一个或多个不对称碳原子，并且每个不对称中心可以是外消旋(R&S)或手性的(R或S)。
优选的化合物是定义如下的式I、II或III化合物：其中m和n是1；X是NR14；R9是H；R4是甲基；R4和R5是甲基；R8是甲基；R10是甲基；R7和R8是甲基；R4和R8是甲基；R1-R8和R10-R13是H；R9是烷基；R9是苄基；R14是烷基；R9是芳基烷基；R9是环烷基；R1-R8是H；R1-R8和R10-R11是H；R1-R2和R7-R8是H；或R2是甲基。
更优选的化合物是定义如下的式II化合物：其中R3是烷基，R1-R2和R4-R11以及R14是氢，m和n是1，且X是NR14；R3和R11是烷基，R1-R2和R4-R10以及R14是氢，m和n是1，且X是NR14；R3和R11是烷基，R1-R2和R4-R10以及R14是氢，m和n是1，R9是烷基；且X是NR14；和R1-R11和R14是氢，m和n是1，且X是O。
尤其优选的化合物选自：
(1-烯丙基氨基甲基环己基)乙酸；
(1-丙-2-炔基氨基甲基环己基)乙酸；
{1-[(2，2，2-三氟乙基氨基)甲基]环己基}乙酸；
{1-[(3，3，3-三氟丙基氨基)甲基]环己基}乙酸；
1α，3β，5β-(1-烯丙基氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸；
1α，3β，5β-(3，5-二甲基-1-丙-2-炔基氨基甲基环己基)乙酸；
1α，3β，5β-{3，5-二甲基-1-[(2，2，2-三氟乙基氨基)甲基]环己基}乙酸；
1α，3β，5β-{3，5-二甲基-1-[(3，3，3-三氟丙基氨基)甲基]环己基}乙酸；
反式-((1R，3R)-1-烯丙基氨基甲基-3-甲基环己基)乙酸；
反式-((1R，3R)-3-甲基-1-丙-2-炔基氨基甲基环己基)乙酸；
反式-{(1R，3R)-3-甲基-1-[(2，2，2-三氟乙基氨基)甲基]环己基}乙酸；
反式-{(1R，3R)-3-甲基-1-[(3，3，3-三氟丙基氨基)甲基]环己基}乙酸；
反式-{(1R，3R)-3-甲基-1-[(4，4，4-三氟丁基氨基)甲基]环己基}乙酸；
1α，3β，5β-{3，5-二甲基-1-[(4，4，4-三氟丁基氨基)甲基]环己基}乙酸；
1α，3β，5β-{1-[(环丙基甲基氨基)甲基]-3，5-二甲基环己基}乙酸；
反式-{(1R，3R)-1-[(环丙基甲基氨基)甲基]-3-甲基环己基}乙酸；
反式-((1R，3R)-3-甲基-1-甲基氨基甲基环己基)乙酸；
反式-((1R，3R)-1-乙基氨基甲基-3-甲基环己基)乙酸；
反式-((1R，3R)-3-甲基-1-丙基氨基甲基环己基)乙酸；
反式-((1R，3R)-1-丁基氨基甲基-3-甲基环己基)乙酸；
反式-((1R，3R)-1-羟基甲基-3-甲基环己基)乙酸；
1α，3β，5β-{1-[(羟基甲基氨基)甲基]-3，5-二甲基环己基}乙酸；
1α，3β，5β-(1-氨基甲基-3，5-二乙基环己基)乙酸，盐酸盐；
反式-(1R，3R)(1-氨基甲基-3-甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
(1-氨基甲基-2-甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
(1-氨基甲基-3，3-二甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
(±)-(反式)-(1-氨基甲基-3，4-二甲基环戊基)乙酸，盐酸盐；
(顺式/反式)-(3R)-(1-氨基甲基-3-甲基环戊基)乙酸，盐酸盐；
(+)-(反式)-(1-氨基甲基-3，4-二甲基环戊基)乙酸，盐酸盐；
(+)-(反式)-(1-氨基甲基-3，4-二甲基环戊基)乙酸，盐酸盐；
1α，3β，5β-(1-氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
1α，3β，5β-(3，5-二甲基-1-丙基氨基甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
1α，3β，5β-(1-乙基氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
1α，3β，5β-(1-苄基氨基甲基)-3，5-二甲基环己基]乙酸，盐酸盐；
1α，3β，5β-(1-二甲基氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
1α，3β，5β-(1-丁基氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
1α，3β，5β-{1-[(苄基甲基氨基)甲基]-3，5-二甲基环己基}乙酸，盐酸盐；
1α，3β，5β-(3，5-二甲基-1-甲基氨基甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
1α，3β，5β-[1-(乙酰基氨基甲基)-3，5-二甲基环己基]乙酸；
1α，3β，5β-(1-(异丁基氨基甲基)-3，5-二甲基环己基]乙酸，盐酸盐；
1α，3β，5β-[3，5-二甲基-1-(苯乙基氨基甲基)环己基]乙酸，盐酸盐；
1α，3β，5β-{3，5-二甲基-1-[(3-苯基丙基氨基)甲基]环己基}乙酸，盐酸盐；
{1-[(环丁基甲基氨基)甲基]环己基}乙酸，盐酸盐；
1α，3β，5β-(1-(异丙基氨基甲基)-3，5-二甲基环己基]乙酸，盐酸盐；
1-氨基甲基-1-环己烷乙酸；
1-氨基甲基-1-环戊烷乙酸；
1-氨基甲基-1-环戊烷乙酸，钠盐；
1-(羟基甲基)环己烷乙酸，钠盐；
{1-[(2-甲基丁基氨基)甲基]环己基}乙酸，盐酸盐；
{1-[(4，4，4-三氟丁基氨基)甲基]环己基}乙酸，盐酸盐；
(1-乙基氨基甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
{1-[(环丙基甲基氨基)甲基]环己基}乙酸，盐酸盐；
{1-[(2-羟基-1-甲基乙基氨基)甲基]环己基}乙酸，盐酸盐；
[1-(异丁基氨基甲基)环己基]乙酸，盐酸盐；
(1-丙基氨基甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
[1-(异丙基氨基甲基)环己基]乙酸，盐酸盐；
(1-环己基氨基甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
[1-(苄基氨基甲基)环己基]乙酸，盐酸盐；
((1R，3R)-3-甲基-1-丙基氨基甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
{1-[环戊基甲基氨基)甲基]环己基}乙酸，盐酸盐；
{1-[(环己基甲基氨基)甲基]环己基}乙酸，盐酸盐；
[1-(叔丁氧基羰基氨基甲基)环己基]乙酸；
[1-(乙酰基氨基甲基)环己基]乙酸；
((3R，5S)-1-环丁基氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
{(3R，5S)-3，5-二甲基-1-[(2-甲基丁基氨基)甲基]环己基}乙酸，盐酸盐；
{(3R，5S)-1-[(2-羟基-1-甲基乙基氨基)甲基]-3，5-二甲基环己基}乙酸，盐酸盐；
{(3R，5S)-1-[(2，2-二甲氧基乙基氨基)甲基]-3，5-二甲基环己基}乙酸，盐酸盐；
{(3R，5S)-1-[(环戊基甲基氨基)甲基]-3，5-二甲基环己基}乙酸，盐酸盐；
{(3R，5S)-1-[(环己基甲基氨基)甲基]-3，5-二甲基环己基}乙酸，盐酸盐；
((3R，5S)-1-环己基氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
((3R，5S)-1-羧基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸；
反式-((3R，5S)-1-羟基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
顺式-((3R，5S)-1-羟基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
(1-二甲基氨基甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
(1-丁基氨基甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
{1-[(2，2-二甲氧基乙基氨基)甲基]环己基}乙酸，盐酸盐；
(1-甲基氨基甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
{1-[(苄基甲基氨基)甲基]环己基}乙酸，盐酸盐；
[1-(苯乙基氨基甲基)环己基]乙酸，盐酸盐；
{1-[(3-苯基丙基氨基)甲基]环己基}乙酸，盐酸盐；
((3R，5S)-1-羟基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸，钠盐；
((3R，5S)-1-乙基氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
(1-氨基甲基-4-乙基环己基)乙酸，盐酸盐；
(1-氨基甲基-4-丙基环己基)乙酸，盐酸盐；
((3R，5S)-3，5-二甲基-1-丙基氨基甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
[(1R，3R)-1-(苄基氨基甲基)-3-甲基环己基]乙酸，盐酸盐；
{(1R，3R)-1-[(苄基甲基氨基)甲基]-3-甲基环己基]乙酸，盐酸盐；和
((1R，3R)-3-甲基-1-甲基氨基甲基环己基)乙酸，盐酸盐。
一些式I、II和III化合物是已知的。
美国专利4024175及其分案4087544公开了式A化合物：
其中R1是氢或低级烷基，且n是4、5或6。所公开的应用有：抗氨基硫脲诱导的痉挛的保护作用；抗卡地阿唑痉挛的保护作用；脑疾病、癫痫、衰弱发作、运动机能减退、和颅创伤；和脑功能改善。这些化合物可用于老年患者。这两篇专利引入本发明以作参考。
美国专利5563175及其各个分案公开了式B化合物或其可药用盐：
其中R1是具有1-6个碳原子的直链或支链烷基、苯基、或具有3-6个碳原子的环烷基；R2是氢或甲基；且R3是氢、或羧基。这些专利引入本发明以作参考。
本发明还公开了式IV新化合物、或其可药用盐、酯、前药、或酰胺：
其中
R1-R4是氢或烷基；
X是NR5或O；
R5是氢或烷基；
R6是氢、烷基、苄基、链烷酰基、烷氧基烷酰基、芳基烷基、烷氧基、环烷基、烯丙基、烷基环烷基、烷氧基、环烷基、烷基环烷基、三取代的卤代烷基，并且当R1-R4分别是氢时，则R6不是氢或甲基。
象式I、II和III化合物一样，本发明式IV化合物也可以预防和治疗糖尿病性视网膜病，包括在糖尿病性视网膜病前阶段，非增殖性糖尿病性视网膜病阶段和增殖性糖尿病性视网膜病阶段进行治疗。
优选的化合物是定义如下的式IV化合物：其中R2和R4是氢，且R1和R3是烷基；R2和R4是氢，且R1和R3是甲基；R1-R4是氢；R1是烷基，且R2-R4是氢；R1是甲基，且R2-R4是氢；R5是氢；X是NR6；X是O；R6是烷基；R6是苄基；R6是乙酰基；R6是苯基烷基；R6是环烷基；R6是三氟烷基；R6是烷基环烷基；R6是烷氧基；和R6是烯丙基。
其它优选的化合物是定义如下的式IV化合物，其中R2和R4是氢，且R1和R3是甲基；R1-R4是氢；R1是甲基，且R2-R4是氢；R5是氢，X是NR6；R6是烷基；R6是苄基；R6是乙酰基；R6是苯基烷基；R6是环烷基；R6是三氟烷基；R6是烷基环烷基；R6是烷氧基；和R6是烯丙基。
尤其优选的化合物选自：
(1-烯丙基氨基甲基环己基)乙酸；
(1-丙-2-炔基氨基甲基环己基)乙酸；
{1-[(2，2，2-三氟乙基氨基)甲基]环己基}乙酸；
{1-[(3，3，3-三氟丙基氨基)甲基]环己基}乙酸；
1α，3β，5β-(1-烯丙基氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸；
1α，3β，5β-(3，5-二甲基-1-丙-2-炔基氨基甲基环己基)乙酸；
1α，3β，5β-{3，5-二甲基-1-[(2，2，2-三氟乙基氨基)甲基]环己基}乙酸；
1α，3β，5β-{3，5-二甲基-1-[(3，3，3-三氟丙基氨基)甲基]环己基}乙酸；
反式-((1R，3R)-1-烯丙基氨基甲基-3-甲基环己基)乙酸；
反式-((1R，3R)-3-甲基-1-丙-2-炔基氨基甲基环己基)乙酸；
反式-{(1R，3R)-3-甲基-1-[(2，2，2-三氟乙基氨基)甲基]环己基}乙酸；
反式-{(1R，3R)-3-甲基-1-[(3，3，3-三氟丙基氨基)甲基]环己基}乙酸；
反式-{(1R，3R)-3-甲基-1-[(4，4，4-三氟丁基氨基)甲基]环己基}乙酸；
1α，3β，5β-{3，5-二甲基-1-[(4，4，4-三氟丁基氨基)甲基]环己基}乙酸；
1α，3β，5β-{1-[(环丙基甲基氨基)甲基]-3，5-二甲基环己基}乙酸；
反式-{(1R，3R)-1-[(环丙基甲基氨基)甲基]-3-甲基环己基}乙酸；
反式-((1R，3R)-3-甲基-1-甲基氨基甲基环己基)乙酸；
反式-((1R，3R)-1-乙基氨基甲基-3-甲基环己基)乙酸；
反式-((1R，3R)-3-甲基-1-丙基氨基甲基环己基)乙酸；
反式-((1R，3R)-1-丁基氨基甲基-3-甲基环己基)乙酸；
反式-((1R，3R)-1-羟基甲基-3-甲基环己基)乙酸；
1α，3β，5β-{1-[(羟基甲基氨基)甲基]-3，5-二甲基环己基}乙酸；
1α，3β，5β-(1-氨基甲基-3，5-二乙基环己基)乙酸，盐酸盐；
1α，3β，5β-(3，5-二甲基-1-丙基氨基甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
1α，3β，5β-(1-乙基氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
1α，3β，5β-(1-苄基氨基甲基)-3，5-二甲基环己基]乙酸，盐酸盐；
1α，3β，5β-(1-二甲基氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
1α，3β，5β-(1-丁基氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
1α，3β，5β-{1-[(苄基甲基氨基)甲基]-3，5-二甲基环己基}乙酸，盐酸盐；
1α，3β，5β-(3，5-二甲基-1-甲基氨基甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
1α，3β，5β-[1-(乙酰基氨基甲基)-3，5-二甲基环己基]乙酸；
1α，3β，5β-(1-(异丁基氨基甲基)-3，5-二甲基环己基]乙酸，盐酸盐；
1α，3β，5β-[3，5-二甲基-1-(苯乙基氨基甲基)环己基]乙酸，盐酸盐；
1α，3β，5β-{3，5-二甲基-1-[(3-苯基丙基氨基)甲基]环己基}乙酸，盐酸盐；
{1-[(环丁基甲基氨基)甲基]环己基}乙酸，盐酸盐；
1α，3β，5β-(1-(异丙基氨基甲基)-3，5-二甲基环己基]乙酸，盐酸盐；
{1-[(2-甲基丁基氨基)甲基]环己基}乙酸，盐酸盐；
{1-[(4，4，4-三氟丁基氨基)甲基]环己基}乙酸，盐酸盐；
(1-乙基氨基甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
{1-[(环丙基甲基氨基)甲基]环己基}乙酸，盐酸盐；
{1-[(2-羟基-1-甲基乙基氨基)甲基]环己基}乙酸，盐酸盐；
[1-(异丁基氨基甲基)环己基]乙酸，盐酸盐；
(1-丙基氨基甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
[1-(异丙基氨基甲基)环己基]乙酸，盐酸盐；
(1-环己基氨基甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
[1-(苄基氨基甲基)环己基]乙酸，盐酸盐；
((1R，3R)-3-甲基-1-丙基氨基甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
{1-[环戊基甲基氨基)甲基]环己基}乙酸，盐酸盐；
{1-[(环己基甲基氨基)甲基]环己基}乙酸，盐酸盐；
[1-(叔丁氧基羰基氨基甲基)环己基]乙酸；
[1-(乙酰基氨基甲基)环己基]乙酸；
((3R，5S)-1-环丁基氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
{(3R，5S)-3，5-二甲基-1-[(2-甲基丁基氨基)甲基]环己基}乙酸，盐酸盐；
{(3R，5S)-1-[(2-羟基-1-甲基乙基氨基)甲基]-3，5-二甲基环己基}乙酸，盐酸盐；
{(3R，5S)-1-[(2，2-二甲氧基乙基氨基)甲基]-3，5-二甲基环己基}乙酸，盐酸盐；
{(3R，5S)-1-[(环戊基甲基氨基)甲基]-3，5-二甲基环己基}乙酸，盐酸盐；
{(3R，5S)-1-[(环己基甲基氨基)甲基]-3，5-二甲基环己基}乙酸，盐酸盐；
((3R，5S)-1-环己基氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
((3R，5S)-1-羧基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸；
反式-((3R，5S)-1-羟基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
顺式-((3R，5S)-1-羟基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
(1-二甲基氨基甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
(1-丁基氨基甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
{1-[(2，2-二甲氧基乙基氨基)甲基]环己基}乙酸，盐酸盐；
(1-甲基氨基甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
{1-[(苄基甲基氨基)甲基]环己基}乙酸，盐酸盐；
[1-(苯乙基氨基甲基)环己基]乙酸，盐酸盐；
{1-[(3-苯基丙基氨基)甲基]环己基}乙酸，盐酸盐；
((3R，5S)-1-羟基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸，钠盐；
((3R，5S)-1-乙基氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
(1-氨基甲基-4-乙基环己基)乙酸，盐酸盐；
(1-氨基甲基-4-丙基环己基)乙酸，盐酸盐；
((3R，5S)-3，5-二甲基-1-丙基氨基甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
[(1R，3R)-1-(苄基氨基甲基)-3-甲基环己基]乙酸，盐酸盐；
{(1R，3R)-1-[(苄基甲基氨基)甲基]-3-甲基环己基]乙酸，盐酸盐；
和
((1R，3R)-3-甲基-1-甲基氨基甲基环己基)乙酸，盐酸盐。
本发明还涉及药物组合物，其中包含治疗有效量的一种或多种式IV化合物和可药用载体。
式II化合物，例如加巴喷丁可用于治疗多种病症，例如神经变性疾病(US 5084479)、抑郁症(US 5025035)、焦虑/恐慌(US5792796)、躁狂/两极性障碍(US 5510381)、抗炎性疾病(WO98158641)、胃肠道损伤(WO 99108670)、青光眼、和疼痛。因为式II和式IV化合物都能影响BCAT途径，和影响在每一上述适应征中所涉及的谷氨酸的合成，式IV化合物还可用于治疗这些适应症。因此，本发明还涉及式IV化合物在治疗各种或一种以上神经变性疾病(包括但不限于ALS、帕金森氏病、和阿耳茨海默氏病)、抑郁症、焦虑/恐慌、躁狂/两极性障碍、抗炎性疾病、青光眼、疼痛、或胃肠道损伤中的应用。
                        附图简述
附图1.表明视网膜中BCAT穿梭的图。其中突出显示了适当穿梭，并且该穿梭表明了神经胶质中的支链氨基酸如何能够将α-酮基戊二酸氨基转移以形成谷氨酸。BCKA产物越过小间隙(以灰色表示)扩散到神经元中，在神经元中通过经由BCATc与谷氨酸发生氨基转移作用而转化回支链氨基酸。缩写如下：BCAA＝支链氨基酸；GLU＝谷氨酸；GLN＝谷氨酰胺；Gln’ase＝谷氨酰胺酶；pyr＝丙酮酸；PC＝丙酮酸羧基酶，αKG＝α-酮基戊二酸，BCATm＝线粒体支链氨基转移酶；BCATc＝胞浆支链氨基转移酶；BCKA＝支链酮酸；GDH＝谷氨酸脱氢酶。
附图2.丙酮酸浓度对来自体内的视网膜将H14CO3掺合到谷氨酸+谷氨酰胺(A)和丙酮酸+乳酸(B)中的影响。将半侧视网膜在具有25mMH14CO3的标准条件下于37℃培养20分钟。培养基中的丙酮酸浓度为0.2或5mM。所示的值以平均值±SEM表示(n＝4，*p＜0.05)。缩写：gln+glu＝标记的谷氨酸+谷氨酰胺的总和；pyr+lact＝标记的丙酮酸+乳酸的总和。
附图3.在大鼠视网膜中BCAT同工酶的表达。如本文所述，使用ECL检测试剂盒进行组织提取、SDS-PAGE、和免疫印迹。使用免疫亲和纯化的大鼠抗-BCATc肽抗体(1∶1000)和人抗BCATm抗体(1∶1000)。
附图4.加巴喷丁(GBP)和支链氨基酸对来自体内的视网膜将H14CO3掺合到谷氨酸+谷氨酰胺中的影响。将半侧视网膜在具有25mM H14CO3和0.2mM丙酮酸的标准条件下于37℃培养20分钟。在一些情况下，培养基中含有加巴喷丁(1mM)，在其它情况下，培养基分别含有GBP(1mM)+所有三种支链氨基酸(0.2mM)。所示的值以在20分钟内掺入到谷氨酸+谷氨酰胺中的H14CO3的平均值±SEM表示(n＝4，*p＜0.001，**p＜0.01)。缩写：gln+glu＝标记的谷氨酸+谷氨酰胺的总和。
附图5.加巴喷丁(GBP)浓度对来自体内的视网膜将H14CO3掺合到谷氨酸+谷氨酰胺中的影响。条件类似于附图4的条件，但是GBP浓度不同。所示的值以平均值±SEM表示(n＝6-7，*p＜0.05)。缩写：GLN+GLU＝谷氨酸+谷氨酰胺的总和；LACT+TCA＝乳酸+TCA循环中间体的总和。
                       发明详述
本发明是基于下述发现：眼内注射谷氨酸会引起神经节细胞损失，这与早期糖尿病性视网膜病有关(Vorwerk等人。IOVS37：16 18-1624(1996))，支链氨基酸依赖性氨基转移酶途径的抑制剂例如加巴喷丁能有效地抑制谷氨酸合成，因此能预防糖尿病性视网膜病。因此本发明提供了预防和治疗糖尿病性视网膜病的方法，包括在糖尿病性视网膜病前阶段，非增殖性糖尿病性视网膜病阶段和增殖性糖尿病性视网膜病阶段进行治疗。“预防”是表示完全或部分保护个体不发生糖尿病性视网膜病、特别是糖尿病性斑点水肿。“治疗”是表示改善糖尿病性视网膜病，并完全或部分保护患者以使得糖尿病性视网膜病、特别是糖尿病性斑点水肿不进一步恶化。
本发明方法包括以能足够预防或治疗视网膜病的量施用支链氨基酸依赖性氨基转移酶途径抑制剂。在本发明方法中，可以使用任意支链氨基酸依赖性氨基转移酶途径抑制剂，只要其安全有效即可。在本文中，“支链氨基酸依赖性氨基转移酶(BCAT)抑制剂”是指能在该途径的任意和所有点影响支链氨基酸依赖性氨基转移酶途径的化合物，并且旨在包括所有这样的化合物。
BCAT抑制剂优选为上述式I、II和/或III化合物，或其可药用BCAT途径抑制类似物或其前药，或它们的可药用盐、酯、或酰胺。
除非另有说明，否则下述定义在本文中始终适用。
“烷基”是指具有1-10个碳原子(除非另有说明)的直链或支链烃基，包括例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、正己基等。
“卤素”包括氟、氯、溴、和碘。
“链烯基”是指具有2-6个碳原子和一个双键的直链和支链烃基，包括乙烯基、3-丁烯-1-基、2-乙烯基丁基、3-己烯-1-基等。
“炔基”是指具有2-6个碳原子和一个三键的直链和支链烃基，包括乙炔基、3-丁炔-1-基、丙炔基、2-丁炔-1-基、3-戊炔-1-基等。
“环烷基”是指单环或多环烃基，例如环丙基、环庚基、环辛基、环癸基、环丁基、金刚烷基、降蒎烷基、十氢萘基、降冰片烷基、环己基、和环戊基。这样的基团可以被基团例如羟基、酮基等取代。还包括其中有1-3个杂原子代替碳的环。这样的基团称为“杂环基”，是指携带至少一个选自O、S、或NR2的杂原子的环烷基，例如取代或未取代的环氧乙烷基、吡咯烷基、哌啶基、四氢呋喃、哌嗪基、酰基哌嗪基、吡咯烷基、和吗啉。
“烷氧基”是指通过氧键合的上述烷基，包括甲氧基、乙氧基、异丙氧基、叔丁氧基等。此外，烷氧基还包括聚醚例如-O-(CH2)2-O-CH3等。
“链烷酰基”是指通过羰基连接的烷基，即C1-C5-C(O)-。这样的基团包括甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、和异丁酰基。
“酰基”是指通过羰基键合的烷基或芳基(Ar)，即R-C(O)-。例如，酰基包括C1-C6链烷酰基，包括取代的链烷酰基，其中烷基部分可被NR4R5或羧基或杂环基取代。典型的酰基包括乙酰基、苯甲酰基等。
上述烷基、链烯基、烷氧基、和炔基可任选被取代，优选被1-3个选自下述的基团取代：NR4R5、苯基、取代苯基、硫代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、羟基、羧基、C1-C6烷氧基羰基、卤素、腈、环烷基、和5元或6元碳环或具有1或2个选自氮、取代氮、氧和硫的杂原子的杂环。“取代氮”是指携带C1-C6烷基或(CH2)nPh的氮，其中n为1、2或3。还包括全卤代或多卤代。
取代烷基的实例包括2-氨基乙基、五氯乙基、三氟甲基、2-二乙基氨基乙基、2-二甲基氨基丙基、乙氧基羰基甲基、3-苯基丁基、甲基硫基甲基、甲氧基甲基、3-羟基戊基、2-羧基丁基、4-氯丁基、3-环丙基丙基、五氟乙基、3-吗啉基丙基、哌嗪基甲基、和2-(4-甲基哌嗪基)乙基。
取代炔基的实例包括2-甲氧基乙炔基、2-乙基乙炔基、4-(1-哌嗪基)-3-(丁炔基)、3-苯基-5-己炔基、3-二乙基氨基-3-丁炔基、4-氯-3-丁炔基、4-环丁基-4-己烯基等。
代表性的取代烷氧基包括氨基甲氧基、三氟甲氧基、2-二乙基氨基乙氧基、2-乙氧基羰基乙氧基、3-羟基丙氧基、6-羧基己氧基等。
此外，取代的烷基、链烯基、和炔基的实例包括二甲基氨基甲基、羧基甲基、4-二甲基氨基-3-丁烯-1-基、5-乙基甲基氨基-3-戊炔-1-基、4-吗啉基丁基、4-四氢吡啶基丁基、3-咪唑烷-1-基丙基、4-四氢噻唑-3-基丁基、苯基甲基、3-氯苯基甲基等。
术语“Ar”和“芳基”是指取代和未取代的芳基。杂芳基具有4-9个环原子，其中有1-4个环原子独立地选自O、S和N。优选的杂芳基在5元或6元芳环中具有1或2个杂原子。芳基和杂芳基的定义中包括单环和二环芳香环系。典型的芳基和杂芳基包括苯基、3-氯苯基、2，6-二溴苯基、吡啶基、3-甲基吡啶基、苯并噻吩基、2，4，6-三溴苯基、4-乙基苯并噻吩基、呋喃基、3，4-二乙基呋喃基、萘基、4，7-二氯萘基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基等。
优选的芳基是苯基和被1、2或3个独立地选自下述的基团取代的苯基：烷基、烷氧基、巯基、烷硫基、羟基、羰基、氨基、式NR4R5胺、和T(CH2)mQR4或T(CH2)mCO2R4，其中m是1-6，T是O、S、NR4、N(O)R4、NR4R6Y、或CR4R5，Q是O、S、NR5、N(O)R5、或NR5R6Y，其中R4和R5如上所述，且R7是烷基或取代烷基，例如甲基、三氯乙基、二苯基甲基等。所述烷基和烷氧基可如上所述被取代。例如，代表性基团有羧基烷基、烷氧基羰基烷基、羟基烷基、羟基烷氧基、和烷氧基烷基。
符号“-”表示一个键。
术语“患者”是指包括人在内的所有动物。患者的实例包括人、牛、狗、猫、山羊、绵羊、和猪。
本发明化合物可以以非溶剂合物以及溶剂合物的形式存在，包括水合物形式。包括水合物形式在内的溶剂合物形式一般等同于非溶剂合物形式，并且包括在本发明范围内。
一些本发明化合物具有一个或多个手性中心，并且每个手性中心可以呈R(D)或S(L)构型。本发明包括所有对映体异构和异构体形式，及其适当混合物。
式I、II和III化合物能进一步形成可药用类似物，包括盐、酯、酰胺、和前药。本文所用术语“可药用盐、酯、酰胺、和前药”是指本发明化合物的羧酸盐、氨基酸加成盐、酯、酰胺、和前药，从合理的医用角度来看，它们适用于和患者的组织接触而不引起任何不适当的毒性、刺激、变态反应等，具有合理的有益/危险比例，能有效地实现其预期应用，并且可能的话，还包括本发明化合物的两性离子形式。术语“盐”是指本发明化合物的相对无毒性的无机酸或有机酸加成盐。这些盐可在化合物的最终分离和纯化期间在原位制得，或者通过将纯化的游离碱形式的化合物与合适的有机酸或无机酸单独反应，并分离出由此形成的盐来制得，包括但不限于式I、II和III化合物的酸加成盐和/或碱加成盐、溶剂合物和N-氧化物。本发明还提供了药物制剂，其中包含式I、II或III化合物和可药用载体、稀释剂或赋形剂。所有这些形式都包括在本发明范围内。
式I、II和III化合物的可药用酸加成盐包括用无机酸制成的盐，所述无机酸有例如盐酸、硝酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、磷酸等，和用有机酸制成的盐，所述有机酸有例如脂族一元羧酸和二元羧酸、苯基取代的链烷酸、羟基链烷酸、链烷二酸、芳族酸、脂族和芳族磺酸等。因此，这样的盐包括硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐酸、亚硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、乙酸盐、丙酸盐、辛酸盐、异丁酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐、苯基乙酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐等。还包括氨基酸盐例如精氨酸盐、葡萄糖酸盐、半乳糖醛酸盐等；参见例如Berge，等人的“Pharmaceutical Salts，”J.of Pharmaceutical Science，1977；66：1-19。
碱性化合物的酸加成盐可通过将游离碱形式的化合物与足量的所需酸以常规方式接触，以生成盐来制备。游离碱形式可这样再生出来：将盐形式与碱接触，并通过常规方法分离出游离碱。游离碱形式与其各自的盐形式在一些物理性质例如在极性溶剂中的溶解性方面多少有几分不同，但是对于本发明目的，盐与其各自的游离碱等同。
可药用碱加成盐是用金属或胺，例如碱金属和碱土金属氢氧化物、或有机胺形成的。用作阳离子的金属的实例有钠、钾、镁、钙等。合适的胺的实例有N，N′-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、N-甲基葡糖胺、和普鲁卡因；参见例如上文中的Berge等人的文献。
酸性化合物的碱加成盐可通过将游离酸形式的化合物与足量的所需碱以常规方式接触，以生成盐来制备。游离酸形式可这样再生出来：将盐形式与酸接触，并通过常规方法分离出游离酸。游离酸形式与其各自的盐形式在一些物理性质例如在极性溶剂中的溶解性方面多少有几分不同，但是对于本发明目的，盐与其各自的游离酸等同。
本发明化合物的可药用无毒酯的实例包括C1-C6烷基酯，其中所述烷基是直链或支链。可药用酯还包括C5-C7环烷基酯以及芳基烷基酯，例如但不限于苄基酯。C1-C4烷基酯是优选的。本发明化合物的酯可依据常规方法制得。
本发明化合物的可药用无毒酰胺的实例包括用氨、C1-C6烷基伯胺和C1-C6二烷基仲胺制得的酰胺，其中所述烷基是直链或支链。就仲胺而言，胺还可以是含有一个氮原子的5元或6元杂环的形式。用氨、C1-C3烷基伯胺和C1-C2二烷基仲胺制得的酰胺是优选的。本发明化合物的酰胺可依据常规方法制得。
术语“前药”是指在体内迅速转化、例如通过在血液中水解来转化以生成上式母化合物的化合物。T.Higuchi和V.Stella，“Pro-drugs as Novel Delivery Systems，Vol.14，of the A.C.S.Symposium Series，和Bioreversible Carriers in Drug Design，ed.Edward B.Roche，American Pharmaceutical Associationand Pergamon Press，1987中对前药作了充分论述，二者引入本发明以作参考。前药一般是这样的药物：进行过化学修饰，在其作用位点可能没有生物活性，但是可通过一个或多个酶作用或其它体内过程降解或转变成具有生物活性的母形式。
治疗有效量是指当施用时能改善疾病症状的式I、II或III化合物的量。
优选为式I、II和/或III化合物，式I、II和/或III的BCAT途径抑制类似物，式I、II和/或III的BCAT途径抑制前药，或它们可药用盐的BCAT抑制剂可依据本发明方法通过任意合适途径给药。合适的给药途径包括系统给药，例如口服或通过注射给药、局部、眼内、眼周(例如眼球筋膜下)、结膜下、视网膜下、脉络膜上、和眼球后给药。BCAT抑制剂的给药方式部分取决于视网膜病的治疗是预防性治疗还是治疗性治疗。为了治疗视网膜病，BCAT抑制剂的给药方式部分取决于视网膜病的病因。
例如，当糖尿病是视网膜病的主要病因时，一旦检查到糖尿病性视网膜病的症状，即预防性地施用BCAT抑制剂。为了预防性地治疗由糖尿病引起的视网膜病，优选系统施用，例如口服或通过注射施用BCAT抑制剂。为了治疗性地治疗非增殖性糖尿病性视网膜病，可系统施用，例如口服或通过注射或眼内给药来施用BCAT抑制剂。可通过例如眼内、局部、结膜下或眼周(例如眼球筋膜下)施用BCAT抑制剂来治疗性地治疗增殖性糖尿病性视网膜病。为了预防或治疗糖尿病性视网膜病，优选在通过手术将由于在增殖性糖尿病阶段的新血管生成期间所生成的瘢痕组织从眼睛中除去之前、期间或之后，眼内、局部、结膜下或眼周(例如眼球筋膜下)施用BCAT抑制剂。
优选一旦确定了动物，例如哺乳动物，尤其是人正处于视网膜病(预防性治疗)危险中或者已经开始发展视网膜病(治疗性治疗)，即尽可能早地施用BCAT抑制剂。治疗将部分取决于所用的特定BCAT抑制剂、BCAT抑制剂的给药量、给药途径、病因、以及如果有的话视网膜病的程度。
本领域技术人员应当理解，可采用能用于本发明方法中的BCAT抑制剂的合适的给药方法。虽然有一种以上的给药途径可用于施用特定的BCAT抑制剂，但是与另一途径相比，特定给药途径可提供更迅速和更有效的反应。因此，所描述的给药途径仅是举例说明，并决不是限制性的。
施用给动物、特别是人的剂量应当足以在合适的时间内在动物中产生所需反应。本领域技术人员应当理解，剂量取决于多种因素，包括所用特定BCAT抑制剂的强度、动物的年龄、种属、病症或疾病、和体重、以及将被或者事实上被视网膜病影响的视网膜的量。剂量还取决于给药途径、时间和频率，和施用特定BCAT抑制剂所可能发生的不利副作用的存在、性质、和程度，以及所需的生理作用。本领域技术人员应当理解，各种病症或疾病，特别是慢性病症或疾病可能需要采用多次给药的长期治疗。
合适的剂量和给药方案可通过本领域技术人员已知的常规范围确定技术来确定。一般用小于化合物最佳剂量的较小剂量开始治疗。然后，以很小的增量增加剂量直至在该剂量下达到最佳效果。在本发明方法中，如果系统给药的话，给药剂量一般为约1mg/kg/天-约100mg/kg/天、优选为约15mg/kg/天-约50mg/kg/天。对于眼内给药，剂量一般为总共约0.1mg-总共约5mg、优选为总共约0.5mg-总共约1mg。局部给药的优选浓度为100mu M。
在本发明方法中使用的组合物优选包含可药用载体和足以预防或治疗视网膜病的BCAT抑制剂。载体可以是任意常用载体，并且仅由化学物理方面的考虑例如溶解度和不与化合物反应以及给药途径限制。本领域技术人员应当理解，除了下述药物组合物以外，可将BCAT抑制剂配制成包含复合物例如环糊精包埋复合物、脂质体、微球、微胶囊等的聚合物组合物(参见例如美国专利4997652、5185152和5718922)。
BCAT抑制剂可以以可药用酸加成盐的形式配制。可用于药物组合物中的可药用酸加成盐的实例包括用无机酸例如盐酸、氢溴酸、磷酸、偏磷酸、硝酸和硫酸制成的盐，和用有机酸例如酒石酸、乙酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、富马酸、苯甲酸、乙醇酸、葡萄糖酸、琥珀酸、和芳基磺酸例如对甲苯磺酸制成的盐。
本文所描述的可药用赋形剂例如载体、辅料、赋形剂或稀释剂是本领域技术人员众所周知的，并且易于为公众所得。可药用载体优选为对于BCAT抑制剂是化学惰性的载体和在使用条件下没有任何有害副作用或毒性的载体。
赋形剂的选取部分取决于特定BCAT抑制剂、以及施用组合物所采用的特定方法。因此，对于本发明药物组合物，有众多合适的制剂。下述制剂仅是举例说明，而决不是限制性的。
依据本发明方法，注射剂是优选的。对于注射组合物，对有效药物载体的要求是本领域技术人员众所周知的(参见Pharmaceuticsand Pharmacy Practice，J.B.Lippincott Co.，Philadelphia，Pa.，Banker and Chalmers eds.，第238-250页(1982)，和ASHPHandbook on Injectable Drugs，Toissel，4th ed.，第622-630页(1986))。这样的注射组合物优选肌内、静脉内、或腹膜内给药。
局部施用制剂是本领域技术人员众所周知的。在本发明上下文中，这样的制剂适于施用在皮肤上。使用贴剂、角膜罩(参见例如美国专利5185152)、和眼用溶液(参见例如美国专利5710182)和膏剂例如滴眼剂也是本领域常识。
适于口服给药的制剂可包括：(a)液体溶液，例如溶于稀释剂如水、盐水、或橙汁中的有效量的化合物；(b)分别含有固体或颗粒形式的预定量活性成分的胶囊、小药囊、片剂、锭剂、和糖锭剂；(c)粉剂；(d)在适当液体中的悬浮剂；和(e)合适的乳剂。液体制剂可包含稀释剂例如水和醇如乙醇、苯甲醇、和聚乙二醇，其中加入或未加入可药用表面活性剂、悬浮剂、或乳化剂。胶囊剂型可以呈常规硬或软明胶壳类型，其中含有例如表面活性剂、润滑剂、和惰性稀释剂，例如乳糖、蔗糖、磷酸钙、和玉米淀粉。片剂可包含一种或多种乳糖、蔗糖、甘露醇、玉米淀粉、土豆淀粉、藻酸、微晶纤维素、阿拉伯胶、明胶、瓜尔胶、胶态二氧化硅、交联羧甲基纤维素钠、滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸锌、硬脂酸、和其它赋形剂、着色剂、稀释剂、缓冲剂、崩解剂、润湿剂、防腐剂、矫味剂、以及药物配伍赋形剂。锭剂可在矫味剂、通常是蔗糖和阿拉伯胶或西黄蓍胶中含有活性成分，和在惰性基质例如明胶和甘油、或蔗糖和阿拉伯胶中含有活性成分的软锭剂，以及除了活性成分以外还含有本领域已知赋形剂的乳剂、凝胶剂等。
口服施用的药物的有效性取决于药物越过粘膜上皮运输的效力及其在肠肝循环中的稳定性。非胃肠道给药后有活性、但是口服后活性较差的药物，或者血浆半衰期太短的药物可化学修饰成前药形式。
适于非胃肠道给药的制剂包括可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、和使得制剂与预定接受者血液等渗的溶质的水和非水等渗无菌注射液，和可含有悬浮剂、助溶剂、增稠剂、稳定剂、和防腐剂的水或非水无菌悬浮剂。本发明抑制剂可在处于药物载体中的生理可接受稀释剂中给药，所述稀释剂有例如无菌液体或液体混合物，包括水，盐水，葡萄糖水溶液，和相关的糖溶液，醇例如乙醇、异丙醇、或鲸蜡醇，二醇例如丙二醇或聚乙二醇，二甲亚砜，甘油酮缩醇例如2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-甲醇，醚例如聚(乙二醇)400，油，脂肪酸，脂肪酸酯或甘油三酯，或乙酰化脂肪酸甘油酯，其中加入或未加入可药用表面活性剂例如肥皂或洗涤剂，悬浮剂例如果胶、卡泊姆、甲基纤维素、羟丙基纤维素、或羧甲基纤维素，或乳化剂和其它药物辅料。可用于非胃肠道给药制剂中的油包括石油、动物、植物或合成油。油的具体实例包括花生油、豆油、芝麻油、棉子油、玉米油、橄榄油、凡士林、和矿物油。
适用于非胃肠道给药制剂的脂肪酸包括油酸、硬脂酸、和异硬脂酸。合适的脂肪酸酯的实例是油酸乙酯和肉豆蔻酸异丙酯。
适用于非胃肠道给药制剂的肥皂包括脂肪碱金属、铵、和三乙醇胺盐，合适的洗涤剂包括(a)阳离子洗涤剂例如二甲基二烷基铵卤化物、和烷基吡啶卤化物，(b)阴离子洗涤剂例如烷基、芳基和烯烃磺酸盐，烷基、烯烃、醚、和一甘油硫酸盐，和磺基琥珀酸盐，(c)非离子表面活性剂例如脂肪胺氧化物、脂肪酸链烷醇酰胺、和聚氧乙烯聚丙烯共聚物，(d)两性洗涤剂例如烷基-p-氨基丙酸盐、和2-烷基咪唑啉季铵盐，和(e)它们的混合物。
非胃肠道给药制剂一般在溶液中含有约0.5-约25％重量的活性成分。可使用防腐剂和缓冲剂。为了将在注射位点的刺激作用减至最小或消除该刺激作用，这样的组合物可含有一种或多种亲水亲油平衡值(HLB)为约12-17的非离子表面活性剂。
表面活性剂在非胃肠道给药制剂中的含量一般为约5％-约15％重量。合适的表面活性剂包括聚乙烯脱水山梨醇脂肪酸酯，例如脱水山梨醇一油酸酯、和氧化乙烯与通过将氧化丙烯和丙二醇缩合而形成的疏水基质的高分子量加成物。非胃肠道给药制剂可以在单位剂量或多剂量密封容器例如安瓿或小瓶中呈送，并且可以在冷冻干燥(冻干)条件下贮存，仅需要在临用前加入无菌液体赋形剂例如注射用水即可。临时的注射液和悬浮液可用如上所述的无菌粉剂、粒剂、和片剂制得。
这样的组合物可配制成眼内施用制剂、缓释制剂或装置(参见例如美国专利5378475)。例如，明胶、硫酸软骨素、或聚磷酸酯例如对苯二甲酸二(2-羟基乙基)酯(BHET)、或聚乳酸-乙醇酸(各种比例)可用于配制缓释制剂。可使用植入物(参见例如美国专利5440505、4853224和4997652)、装置(参见例如美国专利5554187、4863457、5098443和5725493)例如可植入装置如机械贮药库、眼内装置或具有眼内导管(例如直径为100mu-1mm)的眼外装置、或由如上所述的聚合组合物制成的植入物或装置。
本发明方法还可以涉及与其它药物活性化合物联合给药。“联合给药”是指在施用上述BCAT抑制剂之前、之后施用其它药物活性化合物，或者与BCAT抑制剂同时施用，例如与BCAT抑制剂在同一制剂或在隔开的制剂中施用。例如，可联合使用皮质类固醇例如强的松、甲基强的松、地塞米松或去炎松缩丙酮，或非甾体抗炎化合物例如布洛芬或氟比洛芬。同样，也可以联合使用维生素和无机物例如锌、抗氧化剂例如类胡萝卜素(例如叶黄素、类胡萝卜素样玉米黄质或黄体素)、和微量营养素。
制备式I-IV化合物的一般合成方案。
实施例1：反式-(1R，3R)(1-氨基甲基-3-甲基环己基)乙酸盐酸盐
Figure C0080526700281
Figure C0080526700291
           (i)EtO2CCH2CN，NH4Ac，AcOH，甲苯，120℃
           (ii)a.NaCN，EtOH(95％)，H2O，115℃，b.HCl(g)
           (iii)EtOH，HCl(g)，甲苯
           (iv)HCl，H2O
           (v)H2，EtOH/NH3，阮内Ni，30-50℃
           (vi)HCl，H2O，140℃
步骤i：2-氰基-((R)-3-甲基亚环己基)乙酸乙酯
将3-(R)-甲基环己酮(125mmol)、氰基乙酸乙酯(124mmol)、乙酸铵(12.5mmol)和冰醋酸(24mmol)的混合物在迪安斯榻克分水器中回流24小时。将该混合物冷却，并用水洗涤。用甲苯萃取该水洗涤液。将该甲苯萃取液与最初的有机层合并，用硫酸镁干燥，并将溶剂蒸发。通过Kugelrohr蒸馏纯化油状粗产物，获得了油状物(Bpt烘箱温度150-160℃)。收率：86％。
1HNMR(CDCl3)400MHzδ：1.01-1.05(3H，m)，1.17-1.32(1H，m)，1.35(3H，t，J＝7Hz)，1.42-2.30(6H，m)，2.98(1H，d，J＝13Hz)，3.74(1H，d，J＝13Hz)，4.27(2H，q，J＝7Hz)
MS(CI)m/z：208(MH+)
元素分析C12H17NO2
计算值：C 69.54 H 8.27 N 6.76；
实测值：C 69.44 H 8.22 N 6.76。
步骤ii：反式-(1R，3R)-1-氰基甲基-3-甲基环己烷甲腈
向NaCN(40mmol)在6mL水和160mL乙醇(95％)内的溶液中加入2-氰基-((R)-3-甲基亚环己基)乙酸乙酯(40mmol)。回流22小时后，将该冷却的溶液过滤，用HCl气体将滤液酸化，并再次过滤。除去溶剂，通过柱色谱法纯化油状粗产物，获得了浅黄色固体结晶。收率88％。
1HNMR(CDCl3)400MHzδ：0.90(1H，m)，0.98(3H，d，J＝6Hz)，1.11(1H，t，J＝12Hz)，1.38
(1H，dt，J＝4，9Hz)，1.60-1.90(4H，m)，2.07(2H，m)，2.68(2H，s)
MS(CI)m/z：163(MH+)
元素分析C10H14N2
计算值：C 74.04 H 8.70 N 17.27；
实测值：C 74.05 H 8.71 N 17.25。
步骤iii：反式-2-((1R，3R)-1-氰基-3-甲基环己基)亚氨乙酸乙酯
向反式-(1R，3R)-1-氰基甲基-3-甲基环己烷甲腈(6.2mmol)在30mL乙醇(无水)内的溶液中加入30mL无水甲苯。将该溶液在冰中冷却，同时用HCl气体饱和。然后将该塞住的溶液在室温放置24小时。除去溶剂，用乙醚研制该固体残余物，获得了沉淀，将其干燥，获得了白色固体结晶。收率50％。
Mp 118-120℃
1HNMR(DMSO)400MHzδ：0.8-0.89(1H，m)，0.91(3H，d，J＝6.3Hz)，1.06-1.12(1H，m)，1.24-1.35(1H，m)，1.37(3H，t，J＝7Hz)，1.41-1.95(6H，m)，3.02(2H，s)，4.49(2H，q，J＝7Hz)MS(CI)m/z：195(MH+)
元素分析C12H20N2O.1.08M HCl
计算值：C 58.19 H 8.58 N 11.31；
实测值：C 58.25 H 8.59 N 11.59。
步骤iv：反式-((1R，3R)-1-氰基-3-甲基环己基)乙酸乙酯
将反式-2-((1R，3R)-1-氰基-3-甲基环己基)亚氨乙酸乙酯(1.1mmol)溶于冰冷的水(40mL)中，用1N HCl将pH调节至pH 1.5。将该溶液在室温搅拌20小时。加入乙酸乙酯(30mL)，用水洗涤有机层，干燥，除去溶剂，获得了澄清的油状物。收率82％。
1HNMR(CDCl3)400MHzδ：0.78-0.90(1H，m)，0.93(3H，d，J＝6Hz)，0.97-1.00(1H，m)，1.23-1.25(1H，m)，1.29(3H，t，J＝7.2Hz)，1.59-1.80(4H，m)，2.05-2.08(2H，Br t)，2.54(2H，s)，4.20(2H，q，J＝7.2Hz)
MS(CI)m/z：210(MH+)
元素分析C12H19NO2
计算值：C 68.87 H 9.15 N 6.69；
实测值：C 68.87 H 9.11 N 6.90。
步骤v：反式-(5R，7R)-7-甲基-2-氮杂螺[4.5]癸-3-酮
在250mL Parr烧瓶内，将反式-((1R，3R)-1-氰基-3-甲基环己基)乙酸乙酯(8.9mmol)与预洗涤(依次用水和乙醇洗涤)的阮内镍一起溶于NH3/EtOH(7％，40mL)中。将该溶液在30℃、46psi压力下氢化24小时。将该冷却的溶液经由硅藻土垫过滤，用乙酸乙酯洗涤。从滤液中除去溶剂，获得了白色固体。收率30％。
Mp 92-98℃
1HNMR(DMSO)400MHzδ：0.75-0.82(1H，m)，0.84(3H，d，J＝6.4Hz)，0.88-0.94(1H，m)，1.14-1.19(1H，m)，1.20-1.50(2H，m)，1.50-1.63(4H，m)，1.91(2H，s)，3.03(2H，s)，7.42(1H，s)
MS(CI)m/z：168(MH+)
元素分析C10H17NO
计算值：C 71.81 H 10.25 N 8.37；
实测值：C 71.80 H 10.29 N 8.31。
步骤vi：反式-((1R，3R)-1-氨基甲基-3-甲基环己基)乙酸盐酸盐
将反式-(5R，7R)-7-甲基-2-氮杂螺[4.5]癸-3-酮(2.17mmol)溶于10M HCl(5mL)与水(5mL)的溶液中，将该混合物在大约140℃回流5小时。用10mL水和10mL DCM稀释该冷却的溶液，并用2×15mL DCM进一步洗涤水层。然后将水层减压干燥，获得了白色固体。收率76％。
Mp 148-155℃.[α]D＝-2.5(T＝20℃，c＝1，MeOH).一种异构体(RR)。
1HNMR(CDCl3) 400MHzδ：0.69-0.79(1H，m)，0.82(3H，d，J＝6Hz)，0.87-0.90(1H，m)，1.12-1.20(1H，dt，J＝4.5，13.3Hz)，1.34-1.50(3H，m)，1.60-1.63(3H，m)，2.30(2H，s)，3.01(2H，s)，7.93(3H，Br s)
MS(CI)m/z：186(MH+)
元素分析C10H19NO2.1.1 HCl
计算值：C 53.29 H 8.99 N 6.21；
实测值：C 53.23 H 8.99 N 6.45。
实施例2：(1-氨基甲基-2-甲基环己基)乙酸盐酸盐
       (i)EtO2CCH2CN，NH4Ac，AcOH，甲苯，120℃
       (ii)a.NaCN，EtOH(95％)，H2O，115℃，b，HCl(g)
       (iii)EtOH，HCl(g)，甲苯
       (iv)HCl，H2O
       (v) H2，EtOH/NH3，阮内Ni，30-50℃
       (vi)HCl，H2O，140℃
步骤i：2-氰基-(2-甲基亚环己基)乙酸乙酯
按照一般方法(实施例1)步骤i，使用(+/-)2-甲基环己酮(80mmol)、氰基乙酸乙酯(80mmol)、乙酸铵(8mmol)和冰醋酸(16mmol)进行反应，获得了澄清油状物。收率：76％。
1HNMR(CDCl3)400MHzδ：1.23(3H，dd，J＝7，10Hz)，1.35(3H，t，J＝7Hz)，1.55-1.82(5H，m)，1.93-2.05(1H，m)，2.17(1H，dt，J＝5，14Hz)，2.47(1H，dt，J＝5，9Hz)，2.92-2.97(1H，Brd，J＝15Hz)，3.30-3.35(1H，m)，3.81-3.86(1H，Br d，J＝15 Hz)，4.06-4.14(1H，m)，4.23-4.30(3H，dq，J＝1，6Hz)
MS(CI)m/z：208(MH+)
元素分析C12H17NO2
计算值：C 69.54 H 8.27 N 6.76；
实测值：C 69.26 H 8.26 N 6.66。
步骤ii：1-氰基甲基-2-甲基环己烷甲腈
按照一般方法(实施例1)步骤ii，使用2-氰基-(2-甲基亚环己基)乙酸乙酯(37mmol)、NaCN(37mmol)进行反应。通过柱色谱法(3∶1，庚烷∶乙酸乙酯)纯化固体粗产物，获得了澄清油状物。收率：76％。
1HNMR(CDCl3)400MHzδ：1.06(3H，d，J＝6.8Hz)，1.11(3H，d，J＝6.8Hz)，1.20-2.20(18H，m)，2.77(2H，dd，J＝16.8Hz)，2.63(2H，dd，J＝16.8Hz)
MS(CI)m/z：163(MH+)
元素分析C10H14N2.0.1 H2O
计算值：C 73.49 H 8.69 N 16.86；
实测值：C 73.24 H 8.73 N 17.08。
步骤iii：2-(1-氰基-2-甲基环己基)亚氨乙酸乙酯
按照一般方法(实施例1)步骤(iii)，使用1-氰基甲基-2-甲基环己烷甲腈(7.3mmol)进行反应，获得了白色固体。收率70％。
Mpt 107-114℃。
1HNMR(DMSO)400MHzδ：1.00-1.06(3H，2xt，J＝6.4Hz)，1.10-1.38(2H，m)，1.38(3H，t，J＝6.8Hz)，1.40-2.10(7H，m)，2.86，2.92，3.10，3.28(2H，4xd，J＝14，14.4，14.8，14Hz resp.)，4.48(2H，q，J＝6.8Hz)
MS(CI)m/z：209(MH+)
元素分析C12H20N2O.1.06 HCl
计算值：C 58.37 H 8.60 N 11.34；
实测值：C 58.15 H 8.63 N 11.60。
步骤iv：(1-氰基-2-甲基环己基)乙酸乙酯
按照一般方法(实施例1)步骤(iv)，使用2-(1-氰基-2-甲基环己基)亚氨乙酸乙酯(4.4mmol)进行反应，获得了澄清油状物。收率82％。
1HNMR(CDCl3)400MHzδ：1.03，1.09(3H，2xd，J＝7Hz)，1.27-1.30(3H，m)，1.32-2.00(8H，m)2.10-2.20(1H，m)，2.44，2.82(3H，2xd，J＝14.8Hz)，2.54(1H，m)，4.16-4.22(2H，m)
MS(CI)m/z：210(MH+)
元素分析C12H19NO2
计算值：C 68.87 H 9.15 N 6.69；
实测值：C 68.84 H 9.13 N 6.75。
步骤v：6-甲基-2-氮杂螺[4.5]癸-3-酮
按照一般方法(实施例1)步骤(v)，将(1-氰基-2-甲基环己基)乙酸乙酯(8.4mmol)在10℃、50psi压力下反应24小时。通过柱色谱法(乙酸乙酯)纯化该油状粗产物，获得了白色固体。收率34％。
Mp：85-90℃
1HNMR(CDCl3)400MHzδ：0.88-0.91(3H，dd，J＝4，6.8Hz)，1.41-1.78(9H，m)，2.00-2.30(2H，m)，3.06-3.23(2H，m)，7.27(1H，Br s)
MS(CI)m/z：168(MH+)
元素分析C10H17NO
计算值：C 71.81 H 10.24 N 8.37；
实测值：C 71.83 H 10.19 N 8.27。
步骤vi：(1-氨基甲基-2-甲基环己基)乙酸盐酸盐
按照一般方法(实施例1)步骤vi，将6-甲基-2-氮杂螺[4.5]癸-3-酮(2.5mmol)进行反应，获得了白色固体。收率42％。
Mp：108-110℃。
[α]D＝0(T＝20.5℃，C＝1，MeOH).两种非对映异构体3∶1
1HNMR(DMSO+D2O)400MHzδ：0.79，0.85(3H，2xd，J＝6.8Hz)，1.21-1.65(9H，m)，2.22，2.43(1H，2xd，J＝15Hz)，2.46，2.49(1H，2xd，J＝15Hz)，2.83-2.92(1H，2xd，J＝13.6Hz)，3.05，3.15(1H，2xd，J＝13.6Hz)。
MS(CI)m/z：186(MH+)
元素分析C10H19NO2.1.3 HCl
计算值：C 51.64 H 8.79 N 6.02；
实测值：C 51.66 H 8.91 N 6.16。
实施例3(1-氨基甲基-3，3-二甲基环己基)乙酸盐酸盐
Figure C0080526700351
            i)CuI，MeLi，NH4Cl，NH3，(92％)
            ii)NCCH2CO2Et，NH4OAc，AcOH，甲苯，(83％)
            iii)NaCN，EtOH，H2O，(57％)
            iv)HCl，EtOH，甲苯，(93％)
            v)H2，阮内Ni，EtOH，NH3，(84％)
            vi)HCl，H2O，(64％)
步骤i：3，3-二甲基环己酮
通过Pelletier，S.W.，Mody，N.V.，J.Org.Chem.，1976.41，1069描述的方法进行合成。
通过在氩气氛下将甲基锂(1.4M乙醚溶液，77.25mL，2.45mol)加到碘化铜(I)(8.8g，0.046mol)中来制备二甲基铜酸锂溶液。将该溶液冷却至0℃，在搅拌下滴加3-甲基环己烯-1-酮(5mL，0.044mol)，形成了深黄色沉淀。将该悬浮液在室温搅拌1小时，然后倒入氨水(100mL)和乙酸铵(约5g)的溶液中。分离各层，并用乙醚洗涤水层(3×50mL)。合并有机层，用饱和盐水(3×100mL)洗涤，干燥(硫酸镁)，真空除去溶剂，获得了深黄色液体。
1H NMR(400MHz.CDCl3)0.98(6H，s)，1.59(2H，m)，1.88(2H，m)，2.14(2H，m)，2.26(2H，m)。
1R(膜)νmaxcm-12956，1711(C＝O)，1457，1368，1292，1226，1076。
步骤ii：2-氰基-5，5-二甲基-3-丙基己-2-烯酸乙酯
向3，3-二甲基环己酮(4g，0.032mol)在甲苯(25mL)内的溶液中加入氰基乙酸乙酯(3.37mL，0.032mol，1eq.)、乙酸铵(0.24g，0.003mol，0.1eq.)、和乙酸(0.36mL，0.006mol，0.2eq.)。将该黄色溶液加热至回流，同时连接在迪安斯榻克分水器上，并继续加热直至在分水器中不再有冷凝水为止。冷却后，用水(3×25mL)洗涤该橙色溶液，并将有机层干燥(硫酸镁)。过滤并真空除去溶剂，获得了粗产物，为深橙色液体。通过Kugelrohr蒸馏进行纯化，获得了顺式和反式产物的混合物，为浅黄色液体，在4mbar压力下的沸点为160-170℃(5.83g，83％)。
1H NMR(400MHz.CDCl3)0.96(6H，s，2x Me)，0.99(6H，s，2x Me)，1.34(6H，m，2x酯的Me)，1.49(4H，m)，1.75(2H，quin，J 6.4)，1.82(2H，quin，J6.4)， 2.46(2H，s)，2.60(2H，t，J＝6.4Hz)，2.80(2H，s)，2.93(2H，t，J＝6.4Hz)，4.27(4H，m)。
MS(CI)z/e 222(M++1)
IR(膜)νmaxcm-1 2958，2870，2224(CN)，1731(C＝O)，1606(C＝C)，1277，1223。
元素分析C13H19O2N
计算值：C 70.56 H 8.65 N 6.32；
实测值：C 70.35 H 8.79 N 6.25。
步骤iii：1-氰基甲基-3，3-二甲基环己烷甲腈
向2-氰基-5，5-二甲基-3-丙基己-2-烯酸乙酯(1.26g，0.006mol)在乙醇(100mL)和水(4mL)内的溶液中加入氰化钠(0.28g，0.006mol，1eq.)。将该淡黄色溶液加热回流8小时，然后冷却，期间形成了黄白色沉淀。将该悬浮液真空过滤，用HCl气体将滤液酸化直至pH约为2。然后再次过滤该混合物，真空除去溶剂，获得了粗产物，为浅绿色固体。将粗产物吸附到二氧化硅上，通过快速柱色谱法纯化，用0-50％乙酸乙酯在庚烷中的混合物洗脱，获得了二腈，为无色固体(0.57g，57％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)0.99(3H，s，Me)，1.13(1H，td，J 13.2，4.2)，1.21(3H，s，Me)，1.32(2H，m)，1.54(1H，m)，1.82(3H，m)，2.15(1H，m)，2.65(2H，s，CH2CN)。
13C NMR(400MHz，CDCl3)19.61，25.17，30.79，31.18，33.77，34.79，35.37，37.92，46.26，115.06，122.19。
MS(CI)z/e 177(M++1)
IR(膜)νmxcm-12988，2937，2869，2237(2x CN)，1749，1456，1423，1369，1202，11801031，972。
元素分析C11H16N2
计算值：C 74.96 H 9.15 N 15.89；
实测值：C 75.08 H 9.32 N 15.80。
步骤iv：(1-氰基-3，3-二甲基环己基)乙酸乙酯：
在室温将1-氰基甲基-3，3-二甲基环己烷甲腈(0.50g，2.84mmol)溶于无水乙醇(20mL)中，然后冷却至0℃。将甲苯(20mL)加到该溶液中，然后以缓慢速度向其中通大约45分钟的HCl气体以将该反应混合物酸化。然后将烧瓶塞上，并在室温放置24小时。将该黄色溶液在乙酸乙酯与水之间分配，并分离各层。用乙酸乙酯(3×30mL)萃取水层，合并有机层，用饱和碳酸氢钠水溶液(3×50mL)、盐水(3×50mL)洗涤，干燥(硫酸镁)，减压除去溶剂，获得了浅黄色液体(0.59g，93％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)0.94(3H，s，Me)，1.16(3H，m)，1.21(3H，s，Me)，1.29(3H，t，J7.2，CH2CH3)，1.50(1H，m)，1.65(1H，dt，J 14.4，7.6)，1.84(1H，qt，J 13.3，3.2)，1.96(1H，dt，J 13.7，2.2)，2.16(1H，m)，2.48，(1H，d，J 15.6，C-2H)，2.54(1H，d，J 15.6，C-2H)，4.20(2H，q，J 7.2，CH2CH3)。
13C NMR(400MHz，CDCl3)14.21，19.65，25.42，31.03，34.04，34.14，36.08，38.44，46.14，46.80，61.02，123.67，169.00。
MS(CI)z/e 224(M++1)。
IR(膜)νmaxcm-1 2998，2937，2868，2234(CN)，1738(C＝O)，1457，1372，1217，1181，1154，1026。
元素分析C13H21NO2
计算值：C 69.92 H 9.48 N 6.27；
实测值：C 69.63 H 9.45 N 6.15。
步骤v：7，7-二甲基-2-氮杂螺[4.5]癸-3-酮：
使用阮内镍(约0.25g)作为催化剂，将(1-氰基-3，3-二甲基环己基)乙酸乙酯(0.5g，2.23mmol)在氨的乙醇溶液(60mL)中于50℃和50psi压力下氢化48小时。通过经由硅藻土过滤除去催化剂，真空除去溶剂，获得了绿色固体结晶。通过快速柱色谱法纯化，用0-100％乙酸乙酯在庚烷中的溶液洗脱，获得了纯的内酰胺，为无色固体(340mg，84％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)0.89(3H，s，Me)，0.92(3H，s，Me)，1.25(2H，m)，1.36(2H，m)，1.51(3H，m)，1.68(1H，s)，2.18(1H，d，J 16.4，CH2NH)，2.24(1 H，d，J 16.8，CH2NH)，3.15(2H，s，CH2CO)。
13C NMR(400MHz，CDCl3)19.16，29.88，30.36，31.28，36.57，39.05，39.61，44.58，49.54，54.79，177.72。
MS(CI)z/e 182(M++1)。
IR(膜)νmaxcm-1 3203，3100(NH)，2914，2860，1698(C＝O)，1486，1374，1317，1289，1257，1076。
元素分析C11H19NO
计算值：C 72.88 H 10.56 N 7.73；
实测值：C 72.38 H 10.47 N 7.56。
步骤vi：(1-氨基甲基-3，3-二甲基环己基)乙酸盐酸盐：
将7，7-二甲基-2-氮杂螺[4.5]癸-3-酮(0.3g，1.66mmol)溶于HCl(浓盐酸，5mL)和水(5mL)的混合物中，将所得无色溶液加热回流20小时。将该溶液冷却，然后在水与二氯甲烷之间分配，并分离各层。用二氯甲烷(3×20mL)洗涤水层，通过旋转蒸发除去水/HCl，获得了粗产物，为黄白色固体。用乙酸乙酯研制该固体，过滤产物，获得了(1-氨基甲基-3，3-二甲基环己基)乙酸盐酸盐，为无色固体(140mg，42％，64％按回收的原料计)。
1H NMR(400MHz，DMSO)0.90(3H，s，Me)，0.92(3H，s，Me)，1.15-1.49(8H，m)，2.45(2H，s，CH2CO2H)，2.90(2H，br.q，J 13.5，CH2NH3)，7.96(3H，br.s，NH3)，12.36(1H，br.s，OH)。
IR(膜)νmaxcm-1 2930，1728(C＝O). 1272，1123。
元素分析C11H22NO2Cl
计算值：C 56.04 H 9.41 N 5.94；
实测值：C 55.79 H 9.61 N 6.23。
实施例4：(±)-(反式)-(1-氨基甲基-3，4-二甲基环戊基)乙酸盐酸盐
Figure C0080526700381
试剂：(i)膦酸乙酸三乙酯，NaH；(ii)MeNO2，Bu4N+F-；(iii)H2，Ni；(iv)HCl
步骤i：合成(±)-(反式)-(3，4-二甲基亚环戊基)乙酸乙酯(4b)
将NaH(60％油悬浮液，737mg，18.42mmol)悬浮在无水四氢呋喃(50mL)中，并冷却至0℃。加入膦酸乙酸三乙酯(3.83mL，19.30mmol)，并将该混合物在0℃搅拌15分钟。然后加入在THF(10mL)中的酮(+/-)-(4a)(1.965g，17.54mmol)，将该混合物温热至室温。2小时后，将该混合物在乙醚(200mL)与水(150mL)之间分配。分离出有机相，用盐水洗涤，干燥(硫酸镁)，然后真空除去溶剂。通过快速色谱法(二氧化硅，乙酸乙酯∶庚烷1∶9)纯化残余物，获得了3.01g(94％)(4b)，为无色油状物。
1H NMR 400MHz(CDCl3)：δ1.01(3H，d，J＝6Hz)，1.03(3H，d，J＝6Hz)，1.26(3H，tJ＝7Hz)，1.49(2H，m)，2.07(1H，m)，2.24(1H，m)，2.61(1H，m)，4.13(2H，q，J＝7Hz)5.72(1H，s)。
MS(CI+)m/e：183(M+1)。
步骤ii：合成(±)-(反式)-(3，4-二甲基-1-硝基甲基环戊基)乙酸乙酯(4c)
将(±)-(反式)-(3，4-二甲基亚环戊基)乙酸乙酯(4b)(2.95g，16.2mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中，并在70℃与硝基甲烷(1.9mL，35.2mmol)和氟化四丁基铵(1.0M四氢呋喃溶液，22mL，22.0mmol)一起搅拌。6小时后，将该混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(50mL)稀释，并依次用2N HCl(30mL)和盐水(50mL)洗涤。收集有机相，干燥(硫酸镁)，并真空除去溶剂。通过快速色谱法(二氧化硅，乙酸乙酯∶庚烷1∶9)纯化残余物，获得了1.152g(29％)澄清油状物。
1H NMR 400MHz(CDCl3)：δ0.98(6H，d，J＝6Hz)，1.10-1.39(5H，m)，1.47(2H，m)、1.87(1H，m)，2.03(1H，m)，2.57(2H，ABq，J＝16，38Hz)，4.14(2H，q，J＝7Hz)，4.61(2H，ABq，J＝12，60Hz)。
MS(ES+)m/e：244(M+1)。
IR(膜)νcm-1：1186，1376，1549，1732，2956。
步骤iii：合成(±)-(反式)-7，8-二甲基螺[4.4]壬-2-酮(4d)
将(±)-(反式)-(3，4-二甲基-1-硝基甲基环戊基)乙酸乙酯(4c)(1.14g，4.7mmol)溶于甲醇(50mL)中，并在阮内镍催化剂存在下于氢气氛下(40psi)和30℃振摇。5小时后，通过经由硅藻土过滤除去催化剂。将溶剂真空除去，获得了746mg(95％)浅黄色油状物，该油状物在放置时会固化。
1H NMR 400MHz(CDCl3)：δ0.98(6H，d，J＝6Hz)，1.32(2H，m)，1.46(2H，m)，1.97(2H，m)，2.27(2H，ABq，J＝16，27Hz)，3.23(2H，s)，5.62(1H，br s)。
MS(ES+)m/e：168(M+1)。
IR(膜)νcm-1：1451，1681，1715，2948，3196。
步骤iv：合成(±)-(反式)-(1-氨基甲基-3，4-二甲基环戊基)乙酸盐酸盐(4)
将(±)-(反式)-7，8-二甲基螺[4.4]壬-2-酮(4d)(734mg，4.40mmol)在1，4-二氧杂环己烷(5mL)与6N HCl(15mL)的混合物中加热至回流。4小时后，将该混合物冷却至室温，用水(20mL)稀释，并用二氯甲烷(3×30mL)洗涤。收集水相，将溶剂真空除去。用乙酸乙酯研制该残余物，收集并干燥后，获得了675mg(69％)白色固体。
1H NMR 400MHz(d6-DMSO)：δ0.91(6H，d，J＝6Hz)，1.18(2H，m)，1.42(2H，m)，1.72(1H，m)，1.87(1H，m)，2.42(2H，ABq，J＝16，24Hz)，2.90(2H，ABq，J＝12,34Hz)，8.00(3H，br s)，12.34(1H，br s)。
MS(ES+)m/e：186(M+1游离碱)。
实施例5：(顺式/反式)-(3R)-(1-氨基甲基-3-甲基环戊基)乙酸盐酸盐(5)
试剂：(i)膦酸乙酸三乙酯，NaH；(ii)MeNO2，Bu4N+F-；(iii)H2，Ni；(iv)HCl
步骤i：合成(R)-(3-甲基亚环戊基)乙酸乙酯(5b)
将NaH(60％油悬浮液，1.86g，46.5mmol)悬浮在无水四氢呋喃(40mL)中，并冷却至0℃。加入膦酸乙酸三乙酯(9.69mL，48.8mmol)，并将该混合物在0℃搅拌15分钟。然后加入在THF(10mL)中的(R)-3-甲基环戊酮(5a)(5ml，46.5mmol)，将该混合物温热至室温。2小时后，将该混合物在乙醚(200mL)与水(150mL)之间分配。分离出有机相，用盐水洗涤，干燥(硫酸镁)，然后真空除去溶剂。通过快速色谱法(二氧化硅，乙酸乙酯∶庚烷1∶9)纯化残余物，获得了5.45g(70％)(2)，为无色油状物。
1H NMR 400MHz(CDCl3)：δ1.04(3H，m)，1.27(3H，t，J＝7Hz)，1.80-2.74(7H，m)，2.90-3.15(1H，m)，4.13(2H，q，J＝7Hz)，5.76(1H，s)。
MS(CI+)m/e：169(M+1)。
IR(膜)νcm-1：1205，1371，1653，1716，2955。
步骤ii：合成(顺式/反式)-(3R)-(3-甲基-1-硝基甲基环戊基)乙酸乙酯(5c)
将(R)-(3-甲基亚环戊基)乙酸乙酯(5b)(3.0g，17.8mmol)溶于四氢呋喃(20mL)中，并在70℃与硝基甲烷(1.92mL，35.6mmol)和氟化四丁基铵(1.0M四氢呋喃溶液，25mL，25.0mmol)一起搅拌。18小时后，将该混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(50mL)稀释，并依次用2N HCl(30mL)和盐水(50mL)洗涤。收集有机相，干燥(硫酸镁)，并真空除去溶剂。通过快速色谱法(二氧化硅，乙酸乙酯∶庚烷1∶9)纯化残余物，获得了2.00g(49％)澄清油状物。
1H NMR 400MHz(CDCl3)：δ1.02(3H，d，J＝6Hz)，1.08-1.37(5H，m)，1.59-2.17(5H，m)，2.64(2H，m)，4.15(2H，q，J＝7Hz)，4.64(2H，m)。
MS(ES+)m/e：230(M+1)。
IR(膜)νcm-1：1183，1377，1548，1732，2956。
步骤iii：合成(顺式/反式)-(7R)-7-甲基螺[4.4]壬-2-酮(5d)
将(顺式/反式)-(3R)-(3-甲基-1-硝基甲基环戊基)乙酸乙酯(5c)(1.98g，8.66mmol)溶于甲醇(50mL)中，并在阮内镍催化剂存在下于氢气氛下(40psi)和30℃振摇。18小时后，通过经由硅藻土过滤除去催化剂。将溶剂真空除去，通过快速色谱法(二氧化硅，乙酸乙酯∶庚烷1∶1)纯化残余物，获得了1.05g(79％)白色固体。
1H NMR 400MHz(CDCl3)：δ1.03(3H，m)，1.22(2H，m)，1.60-2.15(5H，m)，2.22(2H，m)，3.20和3.27(2H总共，2×s，顺式和反式)，6.18(1H，br s)。
MS(ES+)m/e：154(M+1)。
IR(膜)νcm-1：1695，2949，3231。
步骤iv：合成(顺式/反式)-(3R)-(1-氨基甲基-3-甲基环戊基)乙酸盐酸盐(5)
将(顺式/反式)-(7R)-7-甲基螺[4.4]壬-2-酮(5d)(746mg，4.88mmol)在1，4-二氧杂环己烷(5mL)与6N HCl(15mL)的混合物中加热至回流。4小时后，将该混合物冷却至室温，用水(20mL)稀释，并用二氯甲烷(3×30mL)洗涤。收集水相，将溶剂真空除去。用乙酸乙酯研制该残余物，获得了白色固体，收集并干燥。用乙酸乙酯/甲醇重结晶，收集并干燥后，获得了656mg(65％)(5)。
1H NMR 400MHz(d6-DMSO)：δ0.96(3H，m)，1.01-1.24(2H，m)，1.42-2.10(5H，m)，2.41和2.44(2H总共，2×s，顺式/反式)，2.94(2H，m)，7.96(3H，br s)，12.35(1H，br s)。
MS(ES+)m/e：172(M+1游离碱)。
实施例6：(+)-(反式)-(1-氨基甲基-3，4-二甲基环戊基)乙酸盐酸盐
试剂：(i)膦酸乙酸三乙酯，NaH；(ii)MeNO2，Bu4N+F-；(iii)H2，Ni；(iv)HCl
步骤i：合成(顺式)-(3，4-二甲基亚环戊基)乙酸乙酯(6b)
将NaH(60％油悬浮液，519mg，12.96mmol)悬浮在无水四氢呋喃(30mL)中，并冷却至0℃。加入膦酸乙酸三乙酯(2.68mL，13.5mmol)，并将该混合物在0℃搅拌15分钟。然后加入在THF(10mL)中的(3S，4R)-3，4-二甲基环戊酮(6a)(1.21g，10.80mmol)，将该混合物温热至室温。2小时后，将该混合物在乙醚(200mL)与水(150mL)之间分配。分离出有机相，用盐水洗涤，干燥(硫酸镁)，然后真空除去溶剂。通过快速色谱法(二氧化硅，乙酸乙酯∶庚烷5∶95)纯化残余物，获得了1.40g(71％)(2)，为无色油状物。
1H NMR 400MHz(CDCl 13)：δ0.84(3H，d，J＝6Hz)，0.91(3H，d，J＝6Hz)，1.26(3H，t，J＝7Hz)，2.01-2.95(6H，m)，4.13(2H，q，J＝7Hz)，5.76(1H，s)。
MS(CI+)m/e：183(M+1)。
IR(膜)νcm-1：1043，1125，1200，1658，1715，2959。
步骤ii：合成(反式)-(3，4-二甲基-1-硝基甲基环戊基)乙酸乙酯(6c)
将(顺式)-(3，4-二甲基亚环戊基)乙酸乙酯(6b)(1.384g，7.60mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中，并在70℃与硝基甲烷(0.82mL，15.2mmol)和氟化四丁基铵(1.0M四氢呋喃溶液，11.4mL，11.4mmol)一起搅拌。6小时后，将该混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(50mL)稀释，并依次用2N HCl(30mL)和盐水(50mL)洗涤。收集有机相，干燥(硫酸镁)，并真空除去溶剂。通过快速色谱法(二氧化硅，乙酸乙酯∶庚烷5∶95)纯化残余物，获得了0.837g(45％)澄清油状物。
1H NMR 400MHz(CDCl3)：δ0.91(6H，d，J＝6Hz)，1.21-1.39(5H，m)，1.98(2H，m)，2.18(2H，m)，2.64(2H，s)，4.15(2H，q，J＝7Hz)，4.61(2H，s)。
MS(ES+)m/e：244(M+1)。
IR(膜)νcm-1：1184，1377，1548，1732，2961。
步骤iii：合成(反式)-7，8-二甲基螺[4.4]壬-2-酮(6d)
将(反式)-(3，4-二甲基-1-硝基甲基环戊基)乙酸乙酯(6c)(0.83g，3.4mmol)溶于甲醇(30mL)中，并在阮内镍催化剂存在下于氢气氛下(40psi)和30℃振摇。4小时后，通过经由硅藻土过滤除去催化剂。将溶剂真空除去，获得了567mg(99％)浅黄色油状物，该油状物在放置时会固化。
1H NMR 400MHz(CDCl3)：δ0.89(6H，d，J＝6Hz)，1.38(2H，m)，1.91(2H，m)，2.10(2H，m)，2.32(2H，s)，3.18(2H，s)，5.61(1H，br s)。
MS(ES+)m/e：168(M+1)。
IR(膜)νcm-1：1304，1450，1699，2871，3186。
步骤iv：合成(反式)-(1-氨基甲基-3，4-二甲基环戊基)乙酸盐酸盐(6)
将(反式)-7，8-二甲基螺[4.4]壬-2-酮(6d)(563mg，4.40mmol)在1，4-二氧杂环己烷(5mL)与6N HCl(15mL)的混合物中加热至回流。4小时后，将该混合物冷却至室温，用水(20mL)稀释，并用二氯甲烷(3×30mL)洗涤。收集水相，将溶剂真空除去。用乙酸乙酯研制该残余物，获得了白色固体，收集并干燥。用乙酸乙酯/甲醇重结晶，收集并干燥后，获得了440mg(59％)产物。
1H NMR 400MHz(d6-DMSO)：δ0.84(6H，d，J＝6Hz)，1.21(2H，m)，1.81(2H，m)，2.06(2H，m)，2.47(2H，s)，2.89(2H，s)，7.94(3H，br s)，12.30(1H，br s)。
MS(ES+)m/e：186(M+1游离碱)。
实施例7：(+)-(反式)-(1-氨基甲基-3，4-二甲基环戊基)乙酸盐酸盐
Figure C0080526700451
试剂：(i)膦酸乙酸三乙酯，NaH；(ii)MeNO2，Bu4N+F-；(iii)H2，Ni；(iv) HCl
(3S，4S)-3，4-二甲基环戊酮(7a)在文献中是已知的，并且可通过在下述文献中描述的方法合成：Y.Kato，Chem.Pharm.Bull.，1966；14：1438-1439及其相关参考文献：
                                    W.C.M.C.Kokke，F.A.arkevisser，JOrg.Chem.，1974；39：1535；R.Baker，D.C.Billington，N.Eranayake，JCS Chem.Comm，1981：1234；K.Furuta，K.Iwanaga，H.Yamamoto，Tet.Lett.，1986；27：4507；G.Solladie.O.Lohse，Tet.Asymm.，1993；4：1547；A.Rosenquist，I.Kvarnstrom，S.C.T.Svensson，B.Classon，B.Samuelsson，Acta Chem，Scand.，1992；46：1127；E.J.Corcy，W.Su，Tet.Lett.，1988；29：3423；D.W.Knight，B.Ojhara，Tet.Lett.，1981；22：5101。
步骤i：合成(反式)-(3，4-二甲基亚环戊基)乙酸乙酯(7b)
在0℃、氮气氛下，用5分钟向氢化钠(1.3g，32.5mmol)在THF(60mL)内的悬浮液中加入膦酸乙酸三乙酯(6.5mL，32.7mmol)。搅拌10分钟后，加入(3S，4S)-3，4-二甲基环戊酮(7a)(约2.68g，约30mmol)在THF(2×10mL)中的溶液，移去冰浴。4小时后，通过倒入水(100mL)中来中止该反应，并用乙醚(400mL)萃取该混合物。用饱和盐水(100mL)洗涤有机相，干燥并真空浓缩。通过柱色谱法(10∶1庚烷∶乙酸乙酯)纯化残余物，获得了产物，为油状物(4.53g)(收率约为91％)。
1H NMR 400MHz(CDCl3)：δ1.01(3H，d，J＝6Hz)，1.03(3H，d，J＝6Hz)，1.26(3H，t，J＝7Hz)，1.49(2H，m)，2.07(1H，m)，2.24(1H，m)，2.61(1H，m)，4.13(2H，q，J＝7Hz)，5.72(1H，s)。
MS(CI+)m/e：183(M+1)。
步骤ii：合成(反式)-(3，4-二甲基-1-硝基甲基环戊基)乙酸乙酯(7c)
向(反式)-(3，4-二甲基亚环戊基)乙酸乙酯(7b)(4.24g，23.3mmol)在THF(15mL)内的溶液中加入TBAF(32mL 1M THF溶液，32mmol)，然后加入硝基甲烷(3mL)，将该反应在60℃加热8小时。冷却后，用乙酸乙酯(150mL)稀释该反应混合物，并依次用2N HCl(40mL)和饱和盐水(50mL)洗涤。通过柱色谱法(10∶1庚烷∶乙酸乙酯)纯化，获得了产物，为油状物(2.24g)(收率40％)。
1H NMR 400MHz(CDCl3)：δ0.98(6H，d，J＝6Hz)，1.10-1.39(5H，m)，1.47(2H，m)，1.87(1H，m)，2.03(1H，m)，2.57(2H，ABq，J＝16，38Hz)，4.14(2H，q，J＝7Hz)，
4.61(2H，ABq，J＝12，60Hz)。
MS(ES+)m/e：244(M+1)。
IR(膜)νcm-1：1186，1376，1549，1732，2956。
步骤iii：合成(+)-(反式)-(1-氨基甲基-3，4-二甲基环戊基)乙酸盐酸盐(7)
将(反式)-(3，4-二甲基-1-硝基甲基环戊基)乙酸乙酯(7c)(3.5g，14.4mmol)在甲醇(100mL)中的溶液在Ni海绵状物存在下于50℃和50psi压力下氢化4小时。滤除催化剂，真空浓缩，获得了2.53g内酰胺和氨基酯的2∶1混合物，经计算收率为96％，不用纯化直接使用。将该混合物(2.53g，13.8mmol)在二氧杂环己烷(15mL)和6N HCl(45mL)中加热回流(油浴＝110℃)4小时。冷却并用水(60mL)稀释后，用二氯甲烷(3×50mL)洗涤该混合物，然后真空浓缩。将所得油状物依次用乙酸乙酯和二氯甲烷洗涤，获得了有粘性的泡沫状物，将其干燥，获得了产物，为白色粉末(2.32g)(收率76％)。
αD(23℃)(H2O)(c＝1.002)＝+28.2°。
1H NMR 400MHz(d6-DMSO)：δ0.91(6H，d，J＝6Hz)，1.18(2H，m)，1.42(2H，m)，1.72(1H，m)，1.87(1H，m)，2.42(2H，ABq，J＝16，24Hz)，2.90(2H，ABq，J＝12，34Hz)，8.00(3H，br s)，12.34(1H，br s)。
MS(ES+)m/e：186(M+1游离碱)。
实施例8：1α，3β，5β-(1-氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸盐酸盐
Figure C0080526700471
步骤i：合成2-氰基-((3R，5S)-3，5-二甲基亚环己基)乙酸乙酯(8b)：
将顺式-3，5-二甲基环己酮(8a，15.78g，125.0mmol)溶于甲苯(150mL)中，并用乙酸铵(0.96g，0.099mmol)、乙酸(1.4mL，0.195mmol)、和氰基乙酸乙酯(14.04g，99.2mmol)处理。用迪安斯榻克分水器将该反应加热回流过夜，然后冷却至室温，并用水(3×50mL)洗涤。用甲苯(2×50mL)洗涤水层。合并有机层，用硫酸钠干燥，并浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，用5％乙酸乙酯/己烷洗脱，获得了22.0g(80％)所需产物，为澄清油状物。
MS：222.1(M+1 for C13H19N1O2)；油；TLC：SiO2，Rf 0.40(9∶1己烷/EtOAc)；元素分析(C13H19N1O2)(计算值)C：70.56，H：8.68，N：6.33(实测值)C：70.74，H：8.68，N：6.33.1H NMR(CDCl3)δ0.83-0.95(m，1H)，1.01(t，6H，J＝6.1Hz)，1.32(t，3H，J＝7.3Hz)，1.48-1.85(m，5H)，2.97-3.02(m，1H)，3.92(dd，1H，J＝12.2，2.2Hz)，4.24(q，2H，J＝7.1Hz)。
步骤ii：合成1α，3β，5β-1-氰基甲基-3，5-二甲基环己烷甲腈(8c)
将2-氰基-((3R，5S)-3，5-二甲基亚环己基)乙酸乙酯(8b，6.64g，30.0mmol)溶于乙醇(60mL)中，并加到NaCN(1.47g，30.0mmol)在乙醇/水(100mL/8mL)内的悬浮液中。将该反应加热回流过夜，然后冷却至室温，过滤，并真空浓缩，获得了澄清油状物，该油状物在真空下会固化。通过硅胶色谱法纯化残余物，用4∶1己烷/乙酸乙酯洗脱，获得了4.05g(77％)所需产物，为白色粘性固体。
MS：没有观察到M+1离子(C11H16N2)：油：TLC：SiO2，Rf0.31(4∶1己烷/EtOAc)；元素分析(C11H16N2)(计算值)C：74.96，H：9.15，N：15.89(实测值)C：74.81，H：9.25，N：15.65.1H NMR(CDCl3)δ 0.58(dd，1H，J＝24.9，12.2Hz)，0.96(d，6H，J＝6.6Hz)，1.03(t，2H，J＝12.9Hz)，1.75-1.90(m，3H)，2.01(d，2H，J＝11.5Hz)，2.65 (s，2H)。
步骤iii：合成1α，3β，5β-(1-氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸盐酸盐(8d)
将1α，3β，5β-1-氰基甲基-3，5-二甲基环己烷甲腈(8c，5.51g，31.26mmol)溶于乙醇(80mL)和甲苯(80mL)中，冷却至0℃，并用HCl气体饱和。将该溶液塞上，并在室温搅拌过夜，然后真空浓缩，获得了亚氨基酯粗产物，为白色固体。用乙醚(150mL)将该粗产物研制，并真空干燥，然后用水(100mL)和1N HCl(4mL)处理。将该反应在室温搅拌过夜，然后用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。合并有机层，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，用6∶1己烷/乙酸乙酯洗脱，获得了5.78g(83％)所需产物，为澄清油状物。
MS：224.1(M+1 for C13H21N1O2)；油；TLC：SiO2，Rf 0.32(6∶1己烷/EtOAc)；元素分析(C13H21N1O2)(计算值)C：69.92，H：9.48，N：6.27(实测值)C：70.03，H：9.45，N：6.30.1H NMR(CDCl3)δ0.53(dd，1H，J＝24.9，12.0Hz)，0.91(d，6H，J＝6.6Hz)，1.27(t，3H，J＝7.1Hz)，1.70-1.76(m，1H)，1.80-1.90(m，2H)，2.02(d，2H，J＝12.9Hz)，2.51(s，2H)，4.18(q，2H，J＝7.1Hz)。
步骤iv：合成5α，7β，9β-7，9-二甲基-2-氮杂螺[4.5]癸-3-酮(8e)
将1α，3β，5β-(1-氰基-3，5-二甲基环己基)乙酸乙酯(8d，5.82g，26.1mmol)溶于甲醇(150mL)中，用10％Rh/2％Pd/C(1.0g)处理，并在氢气氛下(50psi)振摇28小时。过滤该反应，并真空浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，用2∶3己烷/乙酸乙酯、乙酸乙酯、5％甲醇/乙酸乙酯进行梯度洗脱，获得了2.21g(47％)所需产物。
MS：182.0(M+1 for C11H19N1O1)；mp 116-118℃；TLC：SiO2，Rf 0.36(6％MeOH/CH2Cl2)；元素分析(C11H19N1O1)(计算值)C：72.88，H：10.56，N：7.73(实测值)C：72.84，H：10.67，N：7.63.1H NMR(CDCl3)δ0.49(dd，1H，J＝24.4，12.0Hz)，0.86-0.93(m，8H)，1.38-1.48(m，2 H)，1.60-1.71(m，3H)，2.09(s，2H)，3.16(s，2H)，5.79(br，1H)。
步骤v：合成1α，3β，5β-(1-氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸；盐酸盐(8)：
用6N HCl(19mL)处理5α，7β，9β-7，9-二甲基-2-氮杂螺[4.5]癸-3-酮(8e，0.52g，2.87mmol)，并加热回流过夜。将该反应冷却至室温，形成了白色沉淀。过滤出该固体，将滤液冷却至0℃，获得了第二批晶体，然后再次过滤。将固体合并，真空干燥，获得了0.46g(68％)所需产物。
MS：200.1(M+1 for C11H21N1O2)；mp 179-180℃；元素分析(C11H21N1O2.HCl)(计算值)C：56.04，H：9.41，N：5.94(实测值)C：56.16，H：9.42，N：5.73.1H NMR(CD3OD)δ0.46-0.53(m，1H)，0.77(t，1H，J＝12.5Hz)，0.85-0.91(m，7H)，1.55-1.67(m，5H)，2.11(d，2H，J＝13.4Hz)，2.36(s，2H)，2.44(s，1H)，3.14(s，2H)。
实施例9：1α，3β，5β-(3，5-二甲基-1-丙基氨基甲基环己基)乙酸；盐酸盐
Figure C0080526700501
将1α，3β，5β-(1-氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸；盐酸盐(8，1.0g，4.2mmol)溶于乙醇(100mL)中，用氢氧化钠溶液(1N，5mL)、丙醛(0.9mL，12.6mmol)、和10％Pd/C(0.3g)处理，并在氢气氛下(50psi)振摇3小时。将该反应混合物过滤，用HCl/乙醚(1M，10mL)处理，并真空浓缩。用热的异丙醇(100mL)处理该残余物，过滤出氯化钠，将该澄清溶液真空浓缩。用异丙醇/丙酮/己烷(14∶200∶225mL)将粗产物重结晶，真空干燥，获得了0.136g(12％)所需产物。
MS：242.1(M+1 for C14H27N1O2)；mp 178-180℃；元素分析(C14H27N1O2.HCl.0.27H2O)(计算值)C：59.48，H：10.18，N：4.95(实测值)C：59.53，H：10.21，N：4.78.1H NMR(CD3OD)δ0.52(dd，1H，J＝24.2，12.0Hz)，0.83-0.90(m，8H)，1.00(t，3H，J＝7.6Hz)，1.61-1.80(m，7H)，2.43(s，2H)，2.98(t，2H，J＝7.8Hz)，3.20(s，2H)。
实施例10：1α，3β，5β-(1-乙基氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸；盐酸盐
按照实施例9的方法合成实施例10化合物，只是用乙醛代替丙醛，并用乙酸乙酯/庚烷进行重结晶(收率30％)。
MS：228(M+1 for C15H29N1O2)；mp 188-190℃；1H NMR(DMSO)δ0.83(8H，br d)，1.24(3H，t，J＝7.1Hz)，1.60(6H，m)，2.38(d，s)，2.98(2H，m)，3.10(2H，br s)，8.33(2H，br s)，12.42(1H，br s)。
实施例11：1α，3β，5β-(1-苄基氨基甲基)-3，5-二甲基环己基]乙酸；盐酸盐
Figure C0080526700512
按照实施例9的方法合成实施例11化合物，只是用苯甲醛代替丙醛，并用乙醚进行重结晶(收率30％)。
MS：290.1(M+1 for C18H27N1O2)；mp 162-163℃；元素分析(C18H27N1O2.HCl.0.20H2O)(计算值)C：65.62，H：8.69，N：4.25(实测值)C：65.60，H：8.71，N：4.31. 1H NMR(CD3OD)δ0.48(dd，1H，J＝12.5Hz)，0.79-0.90(m，8H)，1.46(br，2H)，1.64(d，3H，J＝13.4Hz)，2.42(s，2H)，3.19(s，2H)，4.23(s，2H)，7.43-7.50(m，5H)。
实施例12：1α，3β，5β-(1-二甲基氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸；盐酸盐
将1α，3β，5β-(1-氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸；盐酸盐(8，0.20g，0.59mmol)在乙醇(15mL)、氢氧化钠溶液(1N，0.59mL)、和水(1mL)中的溶液用20％Pd/C(50mg)处理，并在氢气氛下(50psi)振摇15小时。将该反应混合物过滤，用1N HCl/乙醚(1mL)处理，并真空浓缩。将残余物溶于热的异丙醇(100mL)中，用丙酮(100mL)和乙醚(350mL)稀释，并冷却至0℃。过滤出该固体，真空干燥，获得了103 mg(收率70％)所需产物。
MS：228.1(M+1 for C12H23N1O2)；mp 195-196℃；元素分析(C12H23N1O2.HCl.0.41H2O)(计算值)C：57.58，H：9.97，N：5.16(实测值)C：57.73，H：9.71，N：4.91. 1H NMR(CD3OD)δ0.56(dd，1H，J＝24.4，12.0Hz)，0.89-0.92(m，8H)，1.59-1.75(m，8H)，2.51(s，2H)，2.95(s，6H)，3.44(s，2 )。
实施例13：1α，3β，5β-(1-丁基氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸；盐酸盐
Figure C0080526700522
按照实施例9的方法合成实施例13化合物，只是用丁醛代替丙醛(收率48％)。
MS：256.1(M+1 for C15H29N1O2)；mp 184-185℃；元素分析(C15H29N1O2.HCl)(计算值)C：61.73，H：10.36，N：4.80(实测值)C：61.71，H：10.21，N：4.72. 1H NMR(CD3OD)δ0.53(dd，1H，J＝24.4，12.0Hz)，0.86-0.99(m，11H)，1.37-1.47(m，2H)，1.60-1.75(m，7H)，2.43(s，2H)，3.02(t，2H，J＝8.1Hz)，3.20(s，2H)。
实施例14：1α，3β，5β-{1-[(苄基甲基氨基)甲基]-3，5-二甲基环己基}乙酸；盐酸盐
Figure C0080526700531
按照实施例9的方法合成实施例14化合物，只是使用N-苄基类似物(11)和甲醛作为原料，并使用PtO2作为催化剂以代替Pd/C(收率70％)。
MS：304.1(M+1 for C19H29N1O2)；mp 209-210℃；元素分析(C19H29N1O2.HCl.0.21H2O)(计算值)C：66.40，H：8.92，N：4.08(实测值)C；66.40，H：9.05，N：4.06. 1H NMR(CD3OD)δ0.51(dd，1H，J＝24.4，12.2Hz)，0.79-0.92(m，9H)，1.29(br，1H)，1.56-1.82(m，4H)，2.51(dd，2H，J＝18.8，16.3Hz)2.85(s，2H)，3.23-3.49(m，2H)，4.37(dd，2H，J＝31.7，12.7Hz)，7.45-7.54(m，5H)。
实施例15：1α，3β，5β-(3，5-二甲基-1-甲基氨基甲基环己基)乙酸；盐酸盐
Figure C0080526700532
将实施例14化合物(0.14g，1.21mmol)溶于95％乙醇(50mL)中，用氢氧化钠溶液(1N，1.21mmol)和20％Pd/C(0.1g)处理，并在氢气氛下(50psi)振摇45分钟。将该反应混合物过滤，用HCl/乙醚(1M，1mL)处理，并真空浓缩。用热的异丙醇处理该残余物，过滤出氯化钠，将该溶液真空浓缩。用异丙醇/丙酮/己烷(7∶150∶110mL)将粗产物重结晶，真空干燥，获得了0.189g(63％)所需产物。
MS：214.1(M+1 for C12H23N1O2)；mp 182-183℃：元素分析(C12H23N1O2.HCl)(计算值)C：57.70，H：9.68，N：5.61(实测值)C：57.47，H：9.58.N：5.35. 1H NMR(CD3OD)δ0.52(dd，1H，J＝24.4，12.2Hz)，0.84-0.98(m，8H)，1.57-1.72(m，5H)，2.38(s，2H)，2.72(s，3H)，3.21(s，2H)。
实施例16：1α，3β，5β-[1-(乙酰基氨基甲基)-3，5-二甲基环己基]乙酸
用水(10mL)和NaOH(0.56g，14.0mmol)处理实施例8化合物(0.5g，2.1mmol)，冷却至0℃，并用乙醛处理。将该反应在室温搅拌过夜，然后用乙酸乙酯(100mL)稀释，并用1N HCl(100mL)洗涤。用硫酸钠将有机层干燥，并真空浓缩。通过硅胶色谱法纯化粗产物，用4％甲醇/二氯甲烷洗脱，获得了0.138g(27％)所需产物，为油状物，其在真空下固化。
MS：242.1(M+1 for C13H23N1O3)；mp 122-124℃；元素分析(C13H23N1O3)(计算值)C：64.70，H：9.61，N：5.80(实测值)C：64.65，H：9.59，N：5.63.1H NMR(CD3OD)δ0.46.(dd，1H，J＝23.7，11.7Hz)，0.81-0.87(m，9H)，1.56(d，2H，J＝13.4Hz)，1.65-1.76(m，3H)，1.98(s，3H)，2.18(s，2H)，3.30(s，3H)。
实施例17：1α，3β，5β-[1-(异丁基氨基甲基)-3，5-二甲基环己基]乙酸盐酸盐
Figure C0080526700542
按照实施例9的方法合成实施例17化合物，只是用异丁醛代替丙醛(收率53％)。
MS：256(M+1 for C15H29N1O2)；mp 193-194℃；1H NMR(CD3OD)δ0.53(dd，1H，J＝24.3，12.5Hz)，0.81-0.90(m，2H)，0.89(d，6H，J＝6.4Hz)：1.03(d，6H，J＝6.8Hz)，1.57-1.71(m，5H)，2.09(m，1H)，2.49(s，2H).2.88(d，2H，J＝7.1Hz)，3.19(s，2H)。
实施例18：1α，3β，5β-[3，5-二甲基-1-(苯乙基氨基甲基)环己基]乙酸盐酸盐
按照实施例9的方法合成实施例18化合物，只是用苯乙醛代替丙醛(收率16％)。
MS：304(M+1 for C19H29N1O2)；mp 188-189℃：元素分析(C19H29N1O2.HCl)(计算值)C：67.14，H：8.90，N：4.12(实测值)C：66.94，H：8.91，N：3.98. 1H NMR(CD3OD)δ0.46(dd，1H，J＝24.6，12.3Hz)，0.81-0.91(m，8H)，1.58-1.72(m，5H)，2.50(s，2H)，3.04-3.08(m，2H)，3.26-3.30(m，4H)，7.23-7.75(m，5H)。
实施例19：1α，3β，5β-{3，5-二甲基-1-[(3-苯基丙基氨基)甲基]环己基}乙酸盐酸盐
Figure C0080526700552
按照实施例9的方法合成实施例19化合物，只是用苯基丙醛代替丙醛(收率50％)。
MS：318(M+1 for C20H31N1O2)；mp 171-172℃；元素分析(C20H31N1O2.HCl)(计算值)C：67.87，H：9.11，N：3.96(实测值)C：67.83，H：9.13，N：3.78. 1H NMR(CD3OD)δ0.53(dd，1H，J＝24.6，12.1Hz)，0.80-0.90(m，2H)，0.90(d，6H，J＝6.0Hz)，1.60-1.72(m，5H)，2.03-2.11(m，2H)，2.45(s，2H)，2.73(t，2H，J＝7.5Hz)，3.06(t，2H，J＝7.7Hz)，3.3(s，2H)，7.20-7.18(m，5H)。
实施例20：{1-[(环丁基甲基氨基)甲基]环己基}乙酸盐酸盐
Figure C0080526700561
按照实施例26的方法合成实施例20化合物，只是使用环丁酮代替2-甲基丁醛(收率70％)。
MS：226(M+1 for C13H23N1O2)；mp 176-177℃；元素分析(C13H23N1O2.HCl)(计算值)C：59.64，H：9.24，N：5.35(实测值)C：59.88，H：9.18，N：5.19. 1H NMR(CD3OD)δ1.16-1.60(br.，10H)，1.80-1.96(m，2H)，2.21-2.40(m，4H)，2.53(s，2H)，2.97(s，2H)，3.73(m，1H)。
实施例21：1α，3β，5β-(1-(异丙基氨基甲基)-3，5-二甲基环己基]乙酸盐酸盐
按照实施例9的方法合成实施例21化合物，只是用丙酮代替丙醛(收率50％)。
MS：242(M+1 for C14H27N1O2)；mp 206-207℃；1H NMR(CD3OD)δ0.53(dd，1H. J＝24.8，12.5Hz)，0.80-0.90(m，2H)，0.99(d，6H，J＝6.1Hz)，1.35(d，6H，J＝6.6Hz)，1.55-1.78(m，5H)，2.45(s，2H)，3.18(s.2H)，3.41(m，1H)。
实施例22 1-氨基甲基-1-环己烷乙酸于1978年5月2日报道在Satzinger等人的US 4087544中。
实施例23 1-氨基甲基-1-环戊烷乙酸于1978年5月2日报道在Satzinger等人的US 4087544中。
实施例24 1-氨基甲基-1-环戊烷乙酸的钠盐于1978年5月2日报道在Satzinger等人的US 4087544中。
实施例25 1-(羟基甲基)环己烷乙酸的钠盐于1960年报道在Satzinger等人的US 2960441中。
实施例26：合成{1-[(2-甲基丁基氨基)甲基]环己基}乙酸；盐酸盐
将(1-氨基甲基环己基)乙酸(实施例22，2.0g，11.7mmol)在乙醇(100mL)中的溶液用2-甲基丁醛(4mL，35.1mmol)和PtO2(0.5g)处理，并在氢气氛下(50psi)振摇2小时。将该反应混合物过滤，用1N HCl/乙醚(12mL)处理，真空浓缩，溶于热的异丙醇(10mL)中，用丙酮(600mL)稀释，冷却至0℃，并过滤，获得了1.58g(49％)所需产物。
MS：242.1(M+1 for C14H27N1O2)；mp 162-163℃；元素分析(C14H27N1O2.HCl)(计算值)C：60.52，H：10.16，N：5.04(实测值)C：60.41，H：10.26，N：4.95. 1H NMR(CD3OD)δ0.95(t，3H，J＝7.3Hz)，1.02(d，3H，J＝6.6Hz)，1.20-1.31(m，1H)，1.42-1.56(m，11H)，1.81-1.89(m，1H)，2.63(dd，2H，J＝18.3，16.1Hz)，2.82(dd，1H，J＝12.5，8.3Hz)，2.99(12.5，6.1Hz)，3.07(dd，2H，J＝25.6，12.9Hz)。
实施例27：{1-[(4，4，4-三氟丁基氨基)甲基]环己基}乙酸，；盐酸盐
按照实施例26的方法合成实施例27化合物，只是用4-三氟丁醛代替2-甲基丁醛(收率19％)。
MS：282.1(M+1 for C13H22N1O2F3)；mp：163-164℃；元素分析(C13H22N1O2F3.HCl.0.05H2O)(计算值)C：49.00，H：7.31，N：4.40(实测值)C：48.60，H：7.29，N：4.19. 1H NMR(CD3OD)δ1.40-1.54(m，11H)，1.96-2.04(m，2H)，2.26-2.38(m，2H)，2.57(s，2H)，3.09-3.13(m，4H)。
实施例28：(1-乙基氨基甲基环己基)乙酸盐酸盐
按照实施例26的方法合成实施例28化合物，只是用乙醛代替2-甲基丁醛(收率30％)。
MS：200.1(M+1 for C11H21N1O2)；mp：160-166℃；元素分析(C11H21N1O2.HCl.)(计算值)C：56.04，H：9.41，N：5.94(实测值)C：55.98，H：9.36，N：5.79. 1H NMR(CD3OD)δ1.31-1.54(m，13H)，2.54-2.56(m，2H)，3.06-3.13(m，4H)。
实施例29：{1-[(环丙基甲基氨基)甲基]环己基}乙酸盐酸盐
按照实施例26的方法合成实施例29化合物，只是用环丙烷甲醛代替2-甲基丁醛(收率62％)。
MS：226(M+1 for C13H23N1O2)；mp 177-178℃；元素分析(C13H23N1O2.HCl)(计算值)C：59.64，H：9.24，N：5.35(实测值)C：59.72，H：9.15，N：5.27. 1H NMR(CD3OD)δ0.50-0.56(m，2H)，0.71-0.74(m，2H)，1.05-1.30(m，1H)，1.42-1.54(m，10H)，2.52(s，2H)，2.94(d，2H，J＝7.3Hz)，3.10(s，2H)。
实施例30：{1-[(2-羟基-1-甲基乙基氨基)甲基]环己基}乙酸盐酸盐
Figure C0080526700591
按照实施例26的方法合成实施例30化合物，只是用1-羟基-2-丙酮代替2-甲基丁醛(收率60％)。
MS：230(M+1 for C12H23N1O3)；mp 164-165℃；元素分析(C12H23N1O3.HCl)(计算值)C：54.23，H：9.10，N：5.27(实测值)C：5423，H：9.01，N：5.18.1H NMR(CD3OD)δ1.30-1.32(m，3H)，1.44-1.55(m，10H)，2.60(s，2H)，3.11(m，2H)，3.28(br.，2H)，3.37(br.，1H)，3.57-3.61(m，1H)，3.78-3.81(m，1H)。
实施例31：[1-(异丁基氨基甲基)环己基]乙酸盐酸盐
Figure C0080526700592
按照实施例26的方法合成实施例31化合物，只是用环丙烷甲醛代替2-甲基丁醛(收率35％)。
MS：228(M+1 for C13H25N1O2)；mp 175-176℃；元素分析(C13H25N1O2.HCl)(计算值)C：59.19，H：9.93，N：5.51，(实测值)C：59.28，H：9.98，N：5.24. 1H NMR(CD3OD)δ1.03(d，6H，J＝6.9Hz)，1.37-1.60(m，10H)，2.10-2.17(m，1H)，2.63(s，2H)，2.87(d，2H，J＝7.4Hz)，3.07(s，2H)。
实施例32：(1-丙基氨基甲基环己基)乙酸盐酸盐
Figure C0080526700593
按照实施例26的方法合成实施例32化合物，只是用丙醛代替2-甲基丁醛。
MS：214.1(M+1 for C12H23N1O2)；mp：174-177℃；元素分析(C12H23N1O2.HCl)(计算值)C：57.70，H：9.69，N：5.61(实测值)C：57.55，H：9.77，N：5.48. 1H NMR(CD3OD)δ0.93(t，1H，J＝6.3Hz)，0.99-1.03(m，4H)，1.40-1.54(m，13H)，1.72-1.78(m，2H)，2.96-3.29(m，2H)。
实施例33：[1-(异丙基氨基甲基)环己基]乙酸盐酸盐
按照实施例26的方法合成实施例33化合物，只是用丙酮代替2-甲基丁醛。
MS：214.1(M+1 for C12H23N1O2)；mp：193-194℃；1H NMR(CD3OD)δ1.29-1.57(m18H)，2.59(s，2H)，3.07(s，2H)，3.38-3.42(m，1H)。
实施例34：(1-环己基氨基甲基环己基)乙酸盐酸盐
Figure C0080526700602
按照实施例26的方法合成实施例34化合物，只是用环己酮代替2-甲基丁醛。
MS：254(M+1 for C15H27N1O2)；mp 198-199℃；元素分析(C15H27N1O2.HCl)(计算值)C：62.12，H：9.74，N：4.83(实测值)C：62.18，H：9.84.N：4.75. 1H NMR(CD3OD)δ1.20-1.60(m，16H)，1.63-1.76(m，1H)，1.88(br.，2H)，2.13(br.，2H)，2.60(m.，2H)，3.09(m.，3H)。
实施例35：[1-(苄基氨基甲基)环己基]乙酸盐酸盐
按照实施例26的方法合成实施例35化合物，只是用苯甲醛代替2-甲基丁醛。
MS：262.0(M+1 for C16H23N1O2)；mp：125-135℃；1H NMR(CD3OD)δ1.38-1.49(m，11H)，2.55(s，2H)，3.07(s，2H)，4.23(s，2H)，7.43-7.49(m，5H)。
实施例36：((1R，3R)-3-甲基-1-丙基氨基甲基环己基)乙酸；盐酸盐
将((1R，3R)-1-氨基甲基-3-甲基环己基)乙酸盐酸盐(实施例1，1.1g，4.9mmol)溶于乙醇(95mL)中，并用1N NaOH(5mL)处理。加入丙醛(4.9mL)，然后加入10％Pd/C(0.5g)，并将该反应在氢气氛下(50psi)振摇15.75小时。将该反应混合物过滤，加入1M HCl的乙醚溶液(20mL)，过滤，并真空浓缩。然后将残余物溶于异丙醇(10mL)中，并用丙酮(600mL)重结晶。将固体过滤，把滤液过夜冷却，获得了第二批晶体。合并固体，获得了所需产物(0.78g，66％)。
MS：228.1(M+1 for C13H25NO2)；mp：179-179.5℃；元素分析(C13H25NO2.HCl)(计算值)C：59.19，H：9.93，N：5.31；(实测值)C：59.27，H：9.97，N：5.07.IR(KBr，cm-1)：2929(br1717，1188.1H NMR(CD3OD)δ0.84-1.03(m，8H)，1.12-1.17(m，1H) 1.46-1.79(m，8H)，2.43(s，2H)，3.00(t，2H，J＝7.8Hz)3.22(s，2H)。
实施例37：{1-[(环戊基甲基氨基)甲基]环己基}乙酸；盐酸盐
Figure C0080526700621
将(1-氨基甲基环己基)乙酸(3.0g，17.5mmol)溶于乙醇(45mL)中。加入环戊烷甲醛(5mL，3eq)，用PtO2(0.25g)处理该反应。将该反应在氢气氛下(50psi)振摇16.5小时。将该反应混合物过滤，加入1N HCl的乙醚溶液(20mL)，将该反应真空浓缩。用热的异丙醇和丙酮将残余物重结晶，获得了所需产物(2.32g，52％)。
MS：254.1(M+1 for C15H27NO2)；mp 172-173℃；元素分析(C15H27NO2.HCl)(计算值)C：62.16，H：9.74，N；4.83；(实测值)C：61.92，H：9.88，N：4.86.IR(KBr，cm-1)：2930，2854，2509，1689，1455，1211. 1H NMR(CD3OD)δ1.23-1.32(m，2H)，1.41-1.73(m，16H)，1.90(m，1H)，2.63(s，2H)，3.01(d，2H，J＝7.6Hz)，3.09(s，2H)
实施例38：{1-[(环己基甲基氨基)甲基]环己基}乙酸；盐酸盐
Figure C0080526700622
将(1-氨基甲基环己基)乙酸(3.0g，17.5mmol)溶于乙醇(45mL)中。加入环己烷甲醛(5mL，3eq)，用PtO2(0.25g)处理该反应。将该反应在氢气氛下(50psi)振摇16.5小时。将该反应混合物过滤，加入1N HCl的乙醚溶液(20mL)，将该反应真空浓缩。用热的异丙醇和乙醚将残余物重结晶，获得了所需产物(3.57g，67％)。
MS：268.1(M+1 for C16H29NO2)；mp 167.5-168℃；元素分析(C16H29NO2.HCl)(计算值)C：63.24，H：9.95，N：4.61；(实测值)C：63.14，H：10.01，N：4.45.IR(KBr，cm-1)：2926，2851，1718，1684. 1H NMR(CD3OD)δ1.03(m，1H)，1.20-1.85(m，20H)，2.63(s，2H)，2.88(d，2H，J＝6.8Hz)，3.07(s，2H)。
实施例39：[1-(叔丁氧基羰基氨基甲基)环己基]乙酸
将(1-氨基甲基环己基)乙酸(10.0g，58.4mmol)溶于THF(280mL)中，用1N NaOH(128.5mL)处理。将该反应冷却至0℃，并在剧烈搅拌下分批加入14.0g(1.1eq)二碳酸二叔丁酯。将该反应混合物温热至室温，并搅拌过夜。然后蒸发掉THF，用乙酸乙酯(3×50mL)洗涤水层。用KH2PO4(44g)将水层酸化，观察到有泡沫生成。泡沫逐渐被白色沉淀代替。将该混合物搅拌2小时，同时缓慢地加入KH2PO4(1g)。过滤出沉淀，并用水洗涤，获得了所需产物(15.2g，96％)。
MS：272.1(M+1 for C14H25NO4)；mp：181℃(dec)；元素分析(C14H25NO4)(计算值)C：59.52，H：9.36，N：4.76；(实测值)C：59.51，H：9.03，N：4.87.IR(KBr，cm-1)：3413，3054，2933(br)，1709，1666，1531，1248；1H NMR(CDCl3)δ1.27-1.58(m，19H)，2.29(s，2H)，3.12(d，2H，J＝6.8Hz)，4.97(br，1H)。
实施例40：[1-(乙酰基氨基甲基)环己基]乙酸
Figure C0080526700632
将(1-氨基甲基环己基)乙酸(2.0g，11.7mmol)溶于水(20mL)中，然后加入NaOH(3.1g，77.5mmol，6.6eq)和乙酸酐(1.8mL，19.3mmol，1.7eq)。将该反应在室温搅拌2天。加入1N HCl(125mL)，用乙酸乙酯(125mL)萃取该反应混合物。分离出有机层，用硫酸钠干燥，并真空浓缩。将残余物溶于水(100mL)中，用NaOH(0.12g)处理，并真空浓缩。通过快速色谱法纯化该样本，用6％甲醇/二氯甲烷洗脱，获得了所需产物(0.31g，12％)。
MS：214.1(M+1 C11H19NO3)；mp：107-108℃；元素分析(C11H19NO3)(计算值)C：61.95 H：8.98 N：6.57(实测值)C：61.96 H：9.03 N：6.54；TLC 0.316％ MeOH/CH2Cl2；IR(KBr，cm-1)：3286，3120，2932，24401714，1576，1419，1313，1208. 1H NMR(CDCl3)δ1.25-1.51(m，10H)，2.06(s，3H)，2.28(s，2H)，3.26-3.29(m，2H)，6.32(br，1H)。
实施例41：((3R，5S)-1-环丁基氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸；盐酸盐
将((3R，5S)-1-氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸盐酸盐(0.76g，3.2mmol)溶于乙醇(45mL)中，并用1N NaOH(3.2mL)处理。加入环丁酮(1mL，6eq)，然后加入PtO2(0.2g)。将该反应在氢气氛下(50psi)振摇16小时。然后将该反应混合物过滤，加入1N HCl的乙醚溶液(35mL)，并将该反应真空浓缩。将残余物溶于热的异丙醇(150mL)中，并过滤。然后向该溶液中加入已经冷却至0℃的丙酮(100mL)和乙醚(600mL)。将该溶液在0℃放置2小时，期间观察到了晶体。收集该晶体，并用乙醚和丙酮洗涤(0.38g，41％)。
MS：254.1(M+1 for C15H27NO2)；mp 200-201℃；元素分析(C15H27NO2.HCl)(计算值)C：62.16，H：9.74，N：4.83；(实测值)C：62.09，H：9.72，N：4.68.IR(KBr，cm-1)：2926，1720，1189. 1H NMR(CD3OD)δ 0.48-0.57(m，1H)，0.85-0.92(m，8H)，1.60-1.73(m，5H)，1.78-1.93(m，2H)，2.22-2.38(m，4H)，2.42(s，2H)，3.11(s，2H)，3.72-3.78(m，1H)。
实施例42：{(3R，5S)-3，5-二甲基-1-[(2-甲基丁基氨基)甲基]环己基}乙酸；盐酸盐
Figure C0080526700642
将((3R，5S)-1-氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸盐酸盐(1.0g，4.4mmol)溶于乙醇(47mL)中，并用1N NaOH(4.4mL)处理。加入异丁醛(1mL，3eq)，然后加入PtO2(0.17g)。将该反应在氢气氛下(50psi)振摇3小时。然后将该反应混合物过滤，加入1N HCl的乙醚溶液(10mL)，并将该反应真空浓缩。将残余物溶于热的异丙醇(100mL)中，并过滤。真空浓缩并用丙酮和己烷重结晶。收集晶体，并用己烷洗涤，获得了所需产物(0.89g，75％)。
MS：270.1(M+1 for C16H31NO2)：mp 171-173℃；元素分析(C16H31NO2.HCl)(计算值)C：62.82，H：10.54，N：4.58；(实测值)C：62.59，H：10.43，N：4.52.IR(KBr，cm-1)：2964(br)，1721，1485，1186，840.1H NMR(CD3OD)δ0.48-0.57(m，1H)，0.81-1.07(m，12H)，1.23-1.27(m，1H)，1.45-1.72(m，6H)，1.83-1.91(m，1H)，2.50(s，2H)，2.83(dd，1H，J＝8.3，12.5Hz)，3.00(dd，1H，J＝6.1，12.5Hz)，3.13-3.29(m，4H)。
实施例43：{(3R，5S)-1-[(2-羟基-1-甲基乙基氨基)甲基]-3，5-二甲基环己基}乙酸；盐酸盐
将((3R，5S)-1-氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸盐酸盐(1.0g，4.3mmol)溶于乙醇(45mL)中，并用1N NaOH(4.43mL)处理。加入1-羟基丙-2-酮(1mL，3eq)，然后加入PtO2(0.15g)。将该反应在氢气氛下(50psi)振摇82小时。加入PtO2(0.1g)和1-羟基丙-2-酮(1mL)，将该反应在氢气氛下再振摇24小时。然后将该反应混合物过滤，加入1N HCl的乙醚溶液(35mL)，并将该反应真空浓缩。将残余物溶于热的异丙醇(150mL)中，并过滤。真空浓缩，用热的异丙醇、丙酮、和乙醚重结晶。收集晶体，用乙醚洗涤，并干燥(0.30g，1.04mmol，24％)。
MS：258.1(M+1 for C14H27NO3)；mp 178-179℃；元素分析(C14H27NO3.HCl)(计算值)C：57.23，H：9.60，N：4.77；(实测值)C：56.77，H：9.39，N：4.45.IR(KBr，cm-1)：3349，2897，1704，1419，1194. 1H NMR(CD3OD)δ0.4-0.57(m，1H)，0.82-0.90(m，8H)，1.25-1.32(m，4H)，1.60-1.75(m，5H)，2.47(s，2H)，3.23(d，2H，J＝5.1Hz)，3.38(m，1H)，3.58(dd，1H，J＝12.0，7.1Hz)，3.79(dd，1H，J＝12.0，4.2Hz)
实施例44：{(3R，5S)-1-[(2，2-二甲氧基乙基氨基)甲基]-3，5-二甲基环己基}乙酸；盐酸盐
Figure C0080526700661
将((3R，5S)-1-氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸盐酸盐(1.0g，4.3mmol)溶于乙醇(47mL)中。加入乙二醛缩1，1-二甲醇(3.7mL，3.0eq)，然后加入PtO2(0.17g)。将该反应在氢气氛下(50psi)振摇3小时。然后将该反应混合物过滤，加入1N HCl的乙醚溶液(10mL)，并将该反应真空浓缩。将残余物溶于热的异丙醇(100mL)中，并过滤。将滤液浓缩，用丙酮和己烷将残余物重结晶，获得了所需产物(0.92g，75％)。
MS：288.1(M+1 for C15H29NO4)；mp 125℃(dec)；元素分析(C15H29NO4.HCl)(计算值)C：55.63，H：9.34，N：4.32；(实测值)C：55.29，H：9.48，N：4.18.IR(KBr，cm-1)：2949，1715，1457，1191，1134，1077. 1H NMR(CD3OD)δ0.47-0.56(m，1H)，0.81-0.90(m，8H)，1.59-1.71(m，5H)，2.46(s，2H)，3.18(d，2H，J＝5.1Hz)，3.26-3.29(m，2H)，3.45-3.47(m，6H)，4.73(t，1H，J＝5.1Hz)。
实施例45：{(3R，5S)-1-[(环戊基甲基氨基)甲基]-3，5-二甲基环己基}乙酸；盐酸盐
Figure C0080526700662
将((3R，5S)-1-氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸盐酸盐(1.0g，4.1mmol)溶于乙醇(45mL)中，并用1N NaOH(4.2mL)处理。加入环戊烷甲醛(1.5mL，3eq)，然后加入PtO2(0.2g)。将该反应在氢气氛下(50psi)振摇12小时。然后将该反应混合物过滤，加入1N HCl的乙醚溶液(35mL)，并将该反应真空浓缩。将残余物溶于热的异丙醇(150mL)中，并过滤。然后将该溶液真空浓缩，用热的异丙醇、丙酮、和乙醚重结晶。收集晶体，用乙醚和丙酮洗涤(0.40g，27％)。
MS：282.1(M+1 for C17H31NO2)；mp 187-188℃；元素分析(C17H31NO2.HCl)(计算值)C：64.23，H：10.15，N：4.41；(实测值)C：64.11，H：10.04，N：4.34.IR(KBr，cm-1)：2952，1720，1452，1185. 1H NMR(CD3OD)δ0.48-0.57(m，1H)，0.81-0.90(m，8H)，1.25-1.32(m，2H)1.60-1.71(m，9H)，1.89-1.93(m，2H)，2.25-2.29(m，1H)，2.49(s.2H)，3.01(d，2H，J＝7.6Hz)，3.20(s，2H)。
实施例46：{(3R，5S)-1-[(环己基甲基氨基)甲基]-3，5-二甲基环己基}乙酸；盐酸盐
将((3R，5S)-1-氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸盐酸盐(1.0g，4.2mmol)溶于乙醇(45mL)中，并用1N NaOH(4.3mL)处理。加入环己烷甲醛(1.5mL，3eq)，然后加入PtO2(0.15g)。将该反应在氢气氛下(50psi)振摇17小时。然后将该反应混合物过滤，加入1N HCl的乙醚溶液(35mL)，并将该反应真空浓缩。将残余物溶于热的异丙醇(150mL)中，并过滤。然后将该溶液真空浓缩，用热的异丙醇、丙酮、和乙醚重结晶。收集晶体，用乙醚和丙酮洗涤(0.46g，34％)。
MS：296.2(M+1 for C18H33NO2)；mp 176-177℃；元素分析(C18H33NO2.HCl)(计算值)C：65.13，H：10.32，N：4.22；(实测值)C：64.89，H：10.36，N：4.09.IR(KBr，cm-1)：2919，2851 1721，1453，1192.1H NMR(CD3OD)δ，0.48-0.57(m，1H)，0.81-0.90(m，8H)，1.00-1.36(m，5H)，1.60-1.71(m，11H)，2.49(s，2H)，2.88(d，2H，J＝6.8Hz)，3.18(s，2H)。
实施例47：((3R，5S)-1-环己基氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸；盐酸盐
Figure C0080526700681
将((3R，5S)-1-氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸盐酸盐(0.99g，4.2mmol)溶于乙醇(45mL)中，并用1N NaOH(4.2mL)处理。加入环己酮(1.5mL，3eq)，然后加入PtO2(0.2g)。将该反应在氢气氛下(50psi)振摇17小时。然后将该反应混合物过滤，加入1N HCl的乙醚溶液(35mL)，并将该反应真空浓缩。将残余物溶于热的异丙醇(150mL)中，并过滤。然后将该溶液真空浓缩，用热的异丙醇、丙酮、和乙醚重结晶。收集晶体，用乙醚和丙酮洗涤(0.33g，25％)。
MS：282.1(M+1 for C17H31NO2)；mp 210℃；元素分析(C17H31NO2.HCl)(计算值)C：64.23，H：10.15，N：4.41；(实测值)C：63.89，H：9.98，N：4.33.IR(KBr，cm-1)：2921，1691，1452，1216. 1H NMR(CD3OD)δ0.47-0.57(m，1H)，0.82-0.90(m，8H)，1.30-1.46(m，5H)，1.57-1.63(m，2H)，1.69(d，4H，J＝12.9Hz)，1.86(d，2H，J＝12.5Hz)2.13(d，2H，J＝10.3Hz)，2.46(s，2H)，3.04-3.10(m 1H)，3.21(s，2H)。
实施例48：((3R，5S)-1-羧基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸
步骤i：合成(8R，10S)-8，10-二甲基-2，4-二氧代-3-氮杂螺[5.5]十一烷-1，5-二甲腈；铵盐(48a)
将无水乙醇溶液(40mL)冷却至0℃，并用氨气饱和，然后用顺式-3，5-二甲基环己酮(5.0g，39.62mmol)和氰基乙酸乙酯(8.43mL，79.24mmol)处理。将该烧瓶塞上，温热至室温，并搅拌过夜。过滤出沉淀，用乙醚洗涤并真空干燥，获得了6.04g(59％)所需产物，为苍白色固体。
MS：260.1(M+1 for C14H17N3O2)；元素分析(C14H17N3O2.NH3.0.88H2O)(计算值)C：57.55，H：7.51，N：19.17(实测值)C：57.67，H：7.45，N：19.06：IR(KBr，cm-1)3298，2954，2172，1700，1575.1H NMR(CDCl3)δ0.46-0.50(m；1H)，0.82-1.17(m，11H)，1.65-1.98(m.3H)，3.58(dd，2H，J＝13.9，6.8Hz)。
步骤ii：合成实施例48
将(8R，10S)-8，10-二甲基-2，4-二氧代-3-氮杂螺[5.5]十一烷-1，5-二甲腈(48a，25.36g，97.8mmol)用浓硫酸(102mL)和水(30mL)处理。将该反应在150℃加热5小时，然后冷却至室温，并搅拌过夜。将该反应过滤，收集固体并溶于1N NaOH中。将该溶液过滤，然后用浓盐酸(40mL)将滤液酸化。收集沉淀，并在高度真空下干燥过夜。然后将该化合物溶于热的异丙醇(100mL)中，用水重结晶，获得了所需产物(13.21g，59％)。
MS：229.1(M+1 for C12H20O4)；元素分析(C12H20O4)(计算值)C：63.14，H：8.83；(实测值)C：63.36，H：8.92.IR(KBr，cm-1)：2950，2913，1698. 1H NMR(CD3OD)δ0.40-0.48(m，1H)，0.77-0.85(m，8H)1.57-1.77(m，5H)2.41(s，2H)，2.56(s，2H)。
实施例49：反式-((3R，5S)-1-羟基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸；盐酸盐
Figure C0080526700691
Figure C0080526700701
步骤i & ii：合成(顺式/反式)-(7S，9R)-7，9-二甲基-2-氧杂螺[4.5]癸-3-酮(49a)
(i)将二酸(48，6.36g，27.9mmol)悬浮在水(93mL)中，用氢氧化铵(3.5mL)和硝酸银(4.73g，27.9mmol)处理，并在室温搅拌20分钟。将该反应混合物过滤，用水将固体浆化3次，然后在黑暗条件下于50℃真空干燥2天，获得了6.41g二银盐，立即进行步骤(ii)。将该二银盐(1.24g，2.81mmol)置于琥珀色烧瓶中，用CCl4(50mL)和碘(0.72g，2.81mmol)处理，在75℃加热过夜。将该反应过滤，真空浓缩，通过硅胶色谱法纯化，用4∶1己烷/乙酸乙酯洗脱，获得了0.37g(72％)所需产物，为苍白色油状物(49a)。
MS：183.0(M+1 for C11H18O2)；元素分析(C11H18O2.0.05H2O)(计算值)C：72.13，H：9.96(实测值)C：71.77，H：9.69；IR(KBr，cm-1)3298，2954，2172，1700，1575，1450，1337. 1HNMR(CDCl3，～1∶1顺式/反式非对映异构体混合物)δ0.49-0.59(m，1H)，0.82-1.02(m，10H)，1.42-1.53(m，2H)，1.58-1.72(m，3H)，2.30(s，1H，一种异构体)，2.39(s，1H，其它异构体2)，3.96(s，1H，一种异构体)，4.10(s，1H，其它异构体)。
步骤iii：合成(顺式/反式)-N-苄基-2-((3R，5S)-1-羟基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酰胺(49b和49c)
将内酯(49a，0.85g，4.66mmol)溶于THF(18ml)中，用苄基胺(0.61mL，5.60mmol)处理，并加热回流2天。将该反应冷却至室温，用乙酸乙酯稀释，用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并真空浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，用1∶1己烷/乙酸乙酯洗脱，获得了0.79g(59％)所需产物，为澄清的油状物(顺式和反式异构体49b与49c的混合物)。
MS：290.1(M+1 for C18H27N1O2)；油：TLC：SiO2，Rf0.16(2∶1己烷/EtOAc)；元素分析(C18H27N1O2)(计算值)C：74.70，H：9.40，N：4.84(实测值)C：74.41，H：9.35，N：4.57。
步骤iv：分离49b和49c
通过制备HPLC(C18柱，用60％CH3CN/40％H2O洗脱5分钟，然后用45％CH3CN/55％H2O洗脱35分钟，所有流动相都含有0.05％TFA)分离顺式和反式异构体(49b和49c)的混合物。
反式异构体(49b)：RT＝23.600分钟，收量54mg。
                                    1H NMR(CDCl3)δ0.36-0.62(m，3H)，0.82(d，6H，J＝6.3Hz)，1.39-1.70(m，5H)，2.14(s，2H)，2.58(br，1H)，3.60(s，2H)，4.43(d，2H，J＝5.9Hz).5.97(br，1H)，7.26-7.37(m，5H)。
顺式异构体(49c)：RT＝25.828分钟，收量87mg。
                                    1H NMR(CDCl3)δ0.47-0.56(m，1H)，0.65(t，2H，J＝13.2Hz)，0.85(d，6H，J＝6.3Hz)，1.47-1.68(m，5H)，2.38(s，2H)，2.58(br，1H)，3.40(s，2H)，4.45(d，2H，J＝5.9Hz)，6.03(br，1H)，7.28-7.36(m，5H)。
步骤v：合成实施例49
通过HPLC获得N-苄基-2-(1-羟基甲基环己基)乙酰胺的反式异构体(49b，87mg，0.303mmol)，将其溶于5mL水中，并用24mgNaOH处理。将该反应加热回流3天。然后将其冷却至室温，用1N氢氧钠稀释，并用乙酸乙酯萃取。用浓盐酸(5mL)将水层酸化，然后用1N HCl稀释，并用乙酸乙酯萃取产物。用盐水洗涤有机层，并用硫酸钠干燥。将该溶液浓缩，获得了23mg(61％)所需产物。
MS：201(M+1 for C11H20O3)；1H NMR(CD3OD)δ0.48-0.57(m，1H). 0.88-1.00(m，8H)，1.40-1.49(m，2H)，1.68-1.70(m，3H)，2.28(s，2H)，4.11(s，2H)。
实施例50：顺式-((3R，5S)-1-羟基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸；盐酸盐
Figure C0080526700711
通过HPLC获得N-苄基-2-(1-羟基甲基环己基)乙酰胺的反式异构体(49c，87mg，0.303mmol)，将其溶于5mL水中，并用24mgNaOH处理。将该反应加热回流3天。然后将其冷却至室温，用1N氢氧化钠稀释，并用乙酸乙酯萃取。用浓盐酸(5mL)将水层酸化，然后用1N HCl稀释，并用乙酸乙酯萃取产物。用盐水洗涤有机层，并用硫酸钠干燥。将该溶液浓缩，获得了43mg(71％)所需产物。
MS：201.1(M+1 for C11H20O3)；1H NMR(CD3OD)δ0.48-0.57(m，1H)，0.88-0.96(m，8H)，1.42-1.50(m，2H)，1.59-1.69(m，3H)，2.37(s，2H)，3.94(s，2H)。
实施例51：(1-二甲基氨基甲基环己基)乙酸；盐酸盐
将(1-氨基甲基环己基)乙酸(0.51g，3.0mmol)溶于乙醇中，加入甲醛(3mL，2eq)。加入10％Pd/C(1.6g)，并将该反应在室温于760托的氢气压力下振摇12小时。然后用HCl处理该反应直至pH约为2，用丙酮和乙醚重结晶，获得了1.62g(87％)所需产物。
MS：200.1(M+1 for C11H21NO2)；mp：140-142℃；元素分析(C11H21NO2.HCl)(计算值)C：54.99，H：9.44 N：5.83；(实测值)C：54.90，H：9.36，N：6.22.1H NMR(CD3OD)δ1.421.59(m，10H)，2.63(s，2H)，2.96(s，6H)，3.26-3，29(m，2H)，
实施例52：(1-丁基氨基甲基环己基)乙酸；盐酸盐
将(1-氨基甲基环己基)乙酸(0.86g，5.0mmol)溶于乙醇(100mL)中，然后加入Pd/C(10％，0.86g)和丁醛(1.44g，3eq)。将该反应在760托的氢气压力下于室温进行反应直至反应完全。然后过滤、酸化、并浓缩。将残余物溶于异丙醇中，过滤，并用丙酮和乙醚重结晶，获得了终产物。
MS：228.1(M+1 for C13H25NO2)；mp：142-154℃；元素分析(C13H25NO2.HCl)(计算值)C：59.19，H：9.93，N：5.31；(实测值)C：58.85，H：9.86，N：5.05. 1H NMR(CD3OD)δ0.98(t，3H，J＝7.3Hz)，1.39-1.54(m，12H)，1.66-1.72(m，2H)，2.57(s，2H)，3.01(t，2H，J＝9.3Hz)，3.09(s，2H)。
实施例53：{1-[(2，2-二甲氧基乙基氨基)甲基]环己基}乙酸；盐酸盐
Figure C0080526700731
将(1-氨基甲基环己基)乙酸(2.0g，11.7mmol)溶于乙醇(100mL)中。加入乙二醛缩1，1-二甲醇(3.7mL，3.0eq)，用PtO2(0.5g)处理该反应。然后将该反应在氢气氛下(50psi)振摇4小时。将该反应混合物过滤，加入1N HCl的乙醚溶液(15mL)，并将该反应真空浓缩。用热的异丙醇(25mL)和丙酮(700mL)将残余物重结晶，获得了0.44g(52％)所需产物。
MS：260.1(M+1 for C13H25NO4)；mp 128-129℃；元素分析(C13H25NO2.HCl)(计算值)C：52.79，H：8.86，N：4.74；(实测值)C：52.84，H：8.94，N：4.67. IR(KBr，cm-1)：2926，1693，1457，1208，1087. 1H NMR(CD3OD)δ1.40-1.55(m，10H)，2.60(s，2H)，3.13(s，2H)，3.17(d，2H，J＝4.9Hz)，3.45(s，6H)，4.72(t，1H，J＝5.1Hz)
实施例54：(1-甲基氨基甲基环己基)乙酸；盐酸盐
Figure C0080526700732
将{1-[(苄基甲基氨基)甲基]环己基}乙酸盐酸盐(实施例55，4.1g，13.2mmol)溶于95％乙醇(250mL)中，加入10％Pd/C(0.86g)，并将该反应在760托的氢气压力下于室温振摇1小时。将该反应混合物过滤并浓缩，然后用丙酮和乙醚重结晶，获得了2.69g(92％)所需产物。
MS：186.0(M+1 for C10H19NO2)；mp：158-162℃；元素分析(C10H19NO2.HCl)(计算值)C：53.09，H：9.13，N：6.19；(实测值)C：53.14，H：8.96，N：6.34；1H NMR(CD3OD)δ1.42-1.54(m，10H)，2.50-2.53(m，2H)，2.71-2.74(m，3H)，3.09-3.11(m，2H)。
实施例55：{1-[(苄基甲基氨基)甲基]环己基}乙酸；盐酸盐
Figure C0080526700741
将[1-(苄基氨基甲基)环己基]乙酸盐酸盐(0.49g，1.7mmol)溶于乙醇(45mL)中，并用1N NaOH(1.8mL)处理。加入甲醛(1mL，5eq)，用PtO2(0.2g)处理该反应。将该反应在氢气氛下(50psi)振摇30小时。将该反应过滤，加入1N HCl的乙醚溶液(10mL)，并将该反应真空浓缩。获得了0.31g(1.14mmol，67％)所需产物。
MS：274.1(M-1 for C17H25NO2)；油；IR(KBr，cm-1)：3205，2930，2261，1684，1451，1198. HRMS：(计算值)276.1963(实测值)276.1973(M+1 for C17H25NO2)；1H NMR(CD3OD)δ1.33-1.63(m，13H)，2.28(s，2H)，3.06(s，2H)，4.40(s，2H)，7.21-7.34(m，5H)。
实施例56：[1-(苯乙基氨基甲基)环己基]乙酸；盐酸盐
Figure C0080526700742
将(1-氨基甲基环己基)乙酸(2.0g，11.7mmol)溶于乙醇(100mL)中。加入苯乙醛(4mL，3eq)，用10％Pd/C(0.5g)处理该反应。然后将该反应在氢气氛下(50psi)振摇3小时。将该反应过滤，加入1N HCl的乙醚溶液(20mL)，并将该反应真空浓缩。用热的异丙醇和乙醚将残余物重结晶，获得了0.15g(4.1％)所需产物。
MS：276.1(M+1 for C17H25NO2)；mp 182-183℃：元素分析(C17H25NO2.HCl)(计算值)C：64.54，H：8.46，N：4.43；(实测值)C：64.54，H：8.35，N：4.34.IR(KBr，cm-1)：2929，2855，2813，1693，1455，1220. 1H NMR(CD3OD)δ1.38-1.58(m，10H)，2.56(s，2H)，3.01-3.06(m，2H)，3.14(s，2H)，3.23-3.29(m，2H)，7.21-7.34(m，5H)
实施例57：{1-[(3-苯基丙基氨基)甲基]环己基}乙酸；盐酸盐
Figure C0080526700751
将(1-氨基甲基环己基)乙酸(2.00g，11.7mmol)溶于乙醇(100mL)中。加入3-苯基丙醛(4.6mL，3eq)，用10％Pd/C(0.5g)处理该反应。然后将该反应在氢气氛下(50psi)振摇3小时。将该反应过滤，加入1N HCl的乙醚溶液(20mL)，并将该反应真空浓缩。用热的异丙醇和乙醚将残余物重结晶，获得了0.46g(12％)所需产物。
MS：290.1(M+1 for C18H27NO2)；mp 168-169℃：元素分析(C18H27NO2.HCl)(计算值)C：66.34，H：8.66，N：4.40；(实测值)C：66.48，H：8.65，N：4.17.IR(KBr，cm-1)：2932，2854，1686，1454，1217.1H NMR(CD3OD)δ1.38-1.58(m，10H)，2.00-2.04(m，2H)，2.56(s，2H)，2.71(t，2H，J＝7.6Hz)3.01-3.08(m，4H)，7.21-7.34(m，5H)。
实施例58：((3R，5S)-1-羟基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸；钠盐
将(7S，9R)-7，9-二甲基-2-氧杂螺[4.5]癸-3-酮(49a，1.04g，5.71mmol)溶于水(25mL)中，并用NaOH(2.5g)处理。将该反应加热回流(115℃)4小时。然后将该溶液冷却至室温，用乙醚洗涤，并将水层真空浓缩，获得了固体(8g)。用1N乙酸洗涤该残余物，用乙酸乙酯提取，然后浓缩。用乙醇、甲醇、和己烷将残余物重结晶，获得了0.75g(3.75mmol，66％)产物。
MS：199.0(M-1 for C11H20O3)；HRMS：(计算值)199.1334(实测值)199.1333(M-1 forC11H20O3)；mp＞250℃；IR(KBr，cm-1)：2953，2910，1777，1706，1458，1168，1012。
实施例59：((3R，5S)-1-乙基氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸；盐酸盐
Figure C0080526700761
将((3R，5S)-1-氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸盐酸盐(59a，0.418g，1.8mmol，化合物59a是依据下述文献中的方法制得的：Bryans，J.Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters，1997，7(19)，2481)溶于乙醇(45mL)中，并用1N NaOH(1.8mL)处理。加入乙醛(0.5mL，3eq)，用PtO2(0.2g)处理该反应。然后将该反应在氢气氛下(50psi)振摇3小时。将该反应过滤，加入1N HCl的乙醚溶液(2mL)，并将该反应真空浓缩。将残余物溶于热的异丙醇(100mL)中并过滤。在0℃向滤液中加入己烷(100mL)，收集沉淀，获得了31mg(0.14mmol，8％)所需产物。
MS：228.1(M+1 for C13H25NO2)；mp 167-168℃；IR(KBr，cm-1)：2954(br)，2502，1685，1459，1223.元素分析(C13H25NO2.HCl)(计算值)C：56.60，H：9.98，N：5.11；(实测值)C：56.60，H：9.85，N：4.77.1H NMR(CD3OD)δ0.47-0.56(m，1H)，0.78-0.89(m，8H)，1.30-1.36(m，3H)，1.61-1.79(m，5H)，2.58(s，2H)，2.99-3.10(m，4H)。
实施例60：(1-氨基甲基-4-乙基环己基)乙酸；盐酸盐
Figure C0080526700762
步骤i：合成2-氰基-(4-乙基亚环己基)乙酸乙酯(60a)
将4-乙基环己酮(13.0g，103.0mmol)溶于甲苯(150mL)中，并用乙酸铵(0.79g，10.3mmol)、冰醋酸(1.2mmol)、和氰基乙酸乙酯(11.65g，103.0mmol)处理。用迪安斯榻克分水器将该反应加热回流56小时；然后将其冷却至室温，并用水(2×100mL)洗涤。用甲苯(2×150mL)回洗该水层。合并有机层，用硫酸镁干燥，并真空浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，用5∶1己烷/乙酸乙酯洗脱，获得了19.81g(87％)所需产物，为澄清的黄色油状物(60a)。
MS：222.1(M+1 for C13H19N1O2)；油；TLC：SiO2，Rf0.93(1∶1己烷/EtOAc)：IR(KBr，cm-1)：2931，2225，1728，1602，1233.1H NMR(CDCl3)δ0.82(t，3H，J＝7.4Hz)，1.11-1.38(m，7H)，1.39-1.45(m，1H)，1.90-2.09(m，3H)，2.20-2.28(m，1H)，2.91-2.98(m，1H)，3.75-3.79(m，1H))4.15-4.20(m，2H)。
步骤ii：合成顺式-1-氰基甲基-4-乙基环己烷甲腈(60b)
将2-氰基-(4-乙基亚环己基)乙酸乙酯(60a，16.57g，74.86mmol)溶于乙醇(100mL)中，并加入NaCN(3.67g，74.86mmol)在乙醇/水(300mL/16mL)中的悬浮液。将该反应加热回流过夜，然后冷却至室温，过滤以除去沉淀出的盐(4.58g)。将滤液真空浓缩，获得了澄清的高粘性黄色油状物。通过硅胶色谱法纯化该残余物，用16∶1己烷/乙酸乙酯洗脱，获得了11.82g(77％)(81％顺式与19％反式异构体的混合物)产物，为黄色油状物(60c)。
MS：没有观察到M+1离子(C11H16N2)；油；TLC：SiO2，Rf 0.55(2∶1己烷/EtOAc)；元素分析(C11H16N2)(计算值)C：74.96，H：9.15，N：15.89(实测值)C：74.84，H：8.97，N：15.74.IR(KBr，cm-1)：2934，2240，1453.1H NMR(CD3OD)δ0.90(t，3H，J＝7.6Hz)，1.18-1.47(m，7H)1.83-1.87(m，2H)2.07-2.10(m，2H)，2.85(s，2H)。
步骤iii：合成顺式-(1-氰基-4-乙基环己基)乙酸乙酯(60c)
将顺式-1-氰基甲基-4-乙基环己烷甲腈(60b，6.16g，34.95mmol)溶于乙醇(92mL)和甲苯(92mL)中，冷却至0℃，并用HCl气体饱和。将该溶液塞上，并在室温搅拌过夜。然后将其真空浓缩，获得了淡黄白色固体。用乙醚(200mL)研制该残余物，并真空干燥，然后用水(90mL)处理，并加入1N HCl(4mL)。将该反应在室温搅拌过夜，18小时后在溶液中观察到了有黄色油滴。用乙酸乙酯(3×100mL)萃取该化合物；合并有机层，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩。通过快速色谱法纯化残余物，用16∶1己烷/乙酸乙酯洗脱，获得了4.40g(56％)所需产物(60c)。
MS：224.1(M+1 for C13H21NO2)；油；TLC：SiO2，Rf 0.38(CH2Cl2)；元素分析(C13H21NO2)(计算值)C：69.92，H：9.48，N：6.27(实测值)C：69.97，H：9.49，N：6.17.IR(KBr，cm-1)：2930，2236，1736，1187.1H NMR(CD3OD)δ0.87-0.90(m，3H)，1.18-1.46(m，1.0H)，1.77-1.80(m，2H)，2.05-2.09(m，2H)，2.59(s，2H)，4.13-4.15(m，2H)。
步骤iv：8-乙基-2-氮杂螺[4.5]癸-3-酮(60d)
将顺式-(1-氰基-4-乙基环己基)乙酸乙酯(60c，2.7g，12.1mmol)溶于甲醇(250mL)中，用10％Rh/2％Pd/C(0.5g)处理，并在氢气氛下(50psi)振摇3小时。过滤该反应，真空浓缩，并通过硅胶色谱法纯化残余物，用3％甲醇/二氯甲烷洗脱，获得了1.13g(52％)所需产物，为白色固体(60d)。
MS：181.0(M+1 for C11H19N1O1)；mp 131-133℃：TLC：SiO2，Rf 0.22(4％MeOH/CH2Cl2)；元素分析(C11H18N1O1)(计算值)C：72.28，H：10.08，N：7.66 (实测值)C：72.66，H：10.45，N：7.26.IR(KBr，cm-1)：3197，2918，1680.1H NMR(CDCl3)δ0.83-0.97(m，5H)，1.06-1.23(m，3H)，1.31-1.39(m，2H)，1.63-1.67(m，4H)，2.09-2.11(m，2H)，3.15-3.17(m，2H)，5.73(br，1H)。
步骤v：合成实施例60
用浓盐酸(141mL)处理8-乙基-2-氮杂螺[4.5]癸-3-酮(60d，3.8g，21.1mmol)，并在110℃加热24小时。然后将该反应浓缩，并用热的异丙醇(20mL)和丙酮重结晶，获得了3.3g(16.6mmol，79％)产物。
MS：200.1(M+1 for C11H21NO2)；元素分析(C11H21NO2.HCl)(计算值)C：56.04，H：9.41，N：5.94；(实测值)C：56.06，H：9.46，N：5.88.IR(KBr，cm-1)：2916(br)，1698，1526，1281. 1HNMR(CD3OD)δ0.89(t，3H，J＝7.3Hz)，1.02-1.40(m，8H)，1.68(t，4H，J＝16.1Hz)，2.38(s，2H)，3.13(s，2H)。
实施例61：(1-氨基甲基-4-丙基环己基)乙酸；盐酸盐
步骤i：合成2-氰基-(4-丙基亚环己基)乙酸乙酯(61a)
将4-正丙基环己酮(14.0g，99.8mmol)溶于甲苯(145mL)中，并用乙酸铵(0.77g，9.98mmol)、冰醋酸(1.1mmol)、和氰基乙酸乙酯(11.3g，99.8mmol)处理。用迪安斯榻克分水器将该反应加热回流过夜；然后将其冷却至室温，并用水(2×200mL)洗涤。用甲苯(3×200mL)回洗该水层。合并有机层，用硫酸镁干燥，并真空浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，用8∶1己烷/乙酸乙酯洗脱，获得了21.58g(92％)所需产物，为澄清的黄色油状物(61a)。
MS：236.1(M+1 for C14H21NO2)；油；TLC：SiO2，Rf 0.57(8∶1己烷/EtOAc)；元素分析(C14H21NO2)(计算值)C：71.46，H：8.99，N：5.95(实测值)C：71.38，H：8.92，N：6.10.IR(KBr，cm-1)：2929，2225，1728，1603，1227. 1H NMR(CDCl3)δ0.83(t，3H，J＝7.3 Hz)，1.07-1.30(m，9H)，1.51-1.56(m，1H)，1.91-2.00(m，2H)，2.04-2.12(m，1H)，2.23-2.30(m，1H)，2.95-3.01(m，1H)，3.77-3.83(m，1H)，4.20(q，2H，J＝7.1Hz)。
步骤ii：合成顺式-1-氰基甲基-4-丙基环己烷甲腈(61b)
将2-氰基-(4-正丙基亚环己基)乙酸乙酯(61a，19.46g，82.70mmol)溶于乙醇(100mL)中，并加入NaCN(4.053g，82.70mmol)在乙醇/水(340mL/20mL)中的悬浮液。将该反应加热回流过夜，然后冷却至室温，过滤以除去沉淀出的盐。将滤液真空浓缩，获得了澄清的高粘性黄色油状物。将该油状物再溶于乙酸乙酯中，并用盐水(2×150mL)洗涤，用硫酸钠工作，并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化该残余物，用16∶1己烷/乙酸乙酯洗脱，获得了4.69g 61b(收率74％)。
MS：没有观察到M+1离子(C12H18N2)；油；TLC：SiO2，Rf 0.38(3∶1己烷/EtOAc)；元素分析(C12H18N2)(计算值)C：75.74，H：9.53，N：14.72(实测值)C：76.05，H：9.58，N：14.90.IR(KBr，cm-1)：2931，2239，1453，758.1H NMR(CDCl3)δ0.86(t，3H，J＝7.1Hz)，1.18-1.34(m，7H)，1.42-1.61(m，2H)，1.81-1.83(m，2H)，2.06-2.09(m，2H)，2.65(s，2H)。
步骤iii：合成顺式-(1-氰基-4-丙基环己基)乙酸乙酯(61c)
将顺式-1-氰基甲基-4-正丙基环己烷甲腈(61b，3.87g，20.34mmol)溶于乙醇(50mL)和甲苯(50mL)中，冷却至0℃，并用20分钟用HCl气体饱和。将该溶液塞上，并在室温搅拌过夜。然后将其真空浓缩，获得了淡黄白色固体。用乙醚(200mL)研制该残余物，并真空干燥，然后溶于水(80mL)中。加入1N HCl(4mL)。搅拌4小时后该反应混合物变澄清，将其继续在室温搅拌过夜。18小时后在溶液中观察到了黄色油滴。用乙酸乙酯(4×200mL)萃取该化合物；合并有机层，用盐水(2×200mL)洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩。通过快速色谱法纯化残余物，用19∶1己烷/乙酸乙酯洗脱，获得了3.27g(61c，68％)产物。
MS：238.1(M+1 for C13H21NO2)；油；TLC：SiO2，Rf0.38(CH2Cl2)；元素分析(C13H21NO2)(计算值)C：70.85，H：9.77，N：5.90(实测值)C：70.65，H：9.72，N：5.84 IR(KBr，cm-1)：2929，2236，1736，1185.1H NMR(CDCl3)δ0.85(t，3H，J＝7.1Hz)，1.9-1.55(m，10H)，1.71-1.74(m，2H)，2.08-2.10(m，2H)，2.59(s，2H)，4.16(q，2H，J＝7.1Hz)。
步骤iv：顺式-8-丙基-2-氮杂螺[4.5]癸-3-酮(61d)
将顺式-(1-氰基-4-丙基环己基)乙酸乙酯(61c，8.27g，34.8mmol)溶于甲醇(90mL)中，用三乙胺和10％Rh/2％Pd/C处理，并在氢气氛下(50psi)振摇55小时。过滤该反应，并真空浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，用5∶1己烷/乙酸乙酯洗脱，获得了6.41g(61d，94％)所需产物。
MS：196.1(M+1 for C12H21NO)；油；TLC：SiO2，Rf0.38(己烷/EtOAc)；元素分析(C12H21NO)(计算值)C：73.80，H：10.84，N：7.17；(实测值)C：73.86，H：10.76，N：7.11.IR(KBr，cm-1)：3192，2924，1704，1678.1H NMR(CDCl3)δ0.83-1.17(m，5H)，1.18-1.39(m，7H)，1.61 -1.65(m，2H)，1.71-1.74(m，2H)2.11(s，2H)，3.16(s，2H)，5.85(br，1H)。
步骤v：合成实施例61：(1-氨基甲基-4-丙基环己基)乙酸；盐酸盐
用浓盐酸(150mL)处理8-丙基-2-氮杂螺[4.5]癸-3-酮(61d，5.8g，29.75mmol)，并在115℃加热过夜。然后将该反应冷却至室温，观察到了沉淀。过滤，获得了3.47g白色沉淀，将滤液冷却，并再次过滤，总共获得了6.24g(99％)所需产物。
MS：214.1(M+1 for C12H23NO2)；mp 142-144℃；元素分析(C12H23NO2.HCl.0.86H2O)(计算值)C：58.91，H：9.83，N：5.72；(实测值)C：59.27，H：9.60，N：5.71. 1H NMR(CD3OD)δ0.86-0.90(m，3H)，0.97-1.41(m，10H)，1.61-1.75(m，4H)，2.37(s，2H)，3.13(s，2H)IR(KBr，cm-1)2919，1702，1525，1461，1188。
实施例62：((3R，5S)-3，5-二甲基-1-丙基氨基甲基环己基)乙酸；盐酸盐
将((3R，5S)-1-氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸盐酸盐(59a，0.50g，2.12mmol)溶于乙醇(45mL)中，并用1.8mL 1N NaOH处理。加入丙醛(0.5mL，3eq)，并用PtO2(0.2g)处理。然后将该反应在氢气氛下(50psi)振摇3小时。将该反应混合物过滤，加入1N HCl的乙醚溶液(5mL)，并将该反应真空浓缩。将残余物溶于热的异丙醇(100mL)中，并过滤。将滤液浓缩，用热的异丙醇(4mL)、乙醚(225mL)、和己烷(150mL)重结晶，获得了200mg(0.83mmol，39％)产物。
MS：242.1(M+1 for C14H27NO2)；IR(KBr，cm-1)：2952(br)，1686，1457，1218.元素分析(C14H27NO2 HCl 0.24H2O)(计算值)C：59.60，H：10.17，N：4.96；(实测值)C：59.68，H：10.09，N：4.64.1H NMR(CD3OD)δ0.48-0.57(m，1H)，0.78-1.05(m，11H)，1.61-1.78(m，7H)，2.60(s，2H)，2.93-3.00(m，4H)。
实施例63：[(1R，3R)-1-(苄基氨基甲基)-3-甲基环己基]乙酸；盐酸盐
Figure C0080526700821
将((1R，3R)-1-氨基甲基-3-甲基环己基)乙酸盐酸盐(实施例1，3.0g，13.5mmol)溶于乙醇(80mL)中，并用1N NaOH(14mL，1+当量)处理。加入苯甲醛(4.5mL)，然后加入10％Pd/C(1.0g)，并将该反应在氢气氛下(50psi)振摇2.75小时。将该反应混合物过滤，加入1M HCl的乙醚溶液(20mL)，并将该溶液真空浓缩。将残余物溶于热的异丙醇(100mL)中，过滤，并真空浓缩。然后将残余物溶于最小必需量的热异丙醇中，并从乙醚中重结晶。过滤出固体，将滤液冷却过夜，获得了第二批结晶。合并固体，获得了1.35g(36％)所需产物。
MS：276.1(M+1 for C17H25NO2)；HRMS：(计算值)276.1963(实测值)276.1962 (M+1 forC17H25NO2)；mp：157-158℃；IR(KBr，cm-1)：2932(br)，1691，1450，1201；元素分析(C17H25NO2HCl0.24H2O)(计算值)C：64.58，H：8.44，N：4.43；(实测值)C：64.57，H：8.44，N：4.28. 1H NMR(CD3OD)δ0.77-1.69(m，12H)，2.42(s，2H)，3.21(s，2H)，4.25(s，2H)，7.43-7.52(m，5H)。
实施例64：{(1R，3R)-1-[(苄基甲基氨基)甲基]-3-甲基环己基]乙酸；盐酸盐
Figure C0080526700822
将[(1R，3R)-1-(苄基氨基甲基)-3-甲基环己基]乙酸盐酸盐(实施例63，1.02g，3.27mmol)溶于乙醇(40mL)中，并用1NNaOH(3.3mL，1+当量)处理。加入甲醛(2.5mL)，然后加入PtO2(0.1g)，并将该反应在氢气氛下(50psi)振摇8小时。将该反应混合物过滤，加入1M HCl的乙醚溶液(10mL)，并将该溶液真空浓缩。将残余物溶于热的异丙醇(100mL)中，过滤，并真空浓缩。然后将残余物溶于最小必需量的热异丙醇中，并从乙醚和己烷中重结晶。收集固体，获得了0.704g(2.16mmol，66％)所需产物。
MS：290.1(C18H27NO2)；HRMS：290.2128(C18H27NO2)；mp：204-205℃；IR(KBr，cm-1)：2926(br)，1720，1457，1387，1203；1H NMR(CD3OD)δ0.82-0.98(m，5H)，1.24-1.91(m，7H)，2.38-2.58(m，2H)，2.91(d，3H，J＝11.2Hz)，3.43-3.54(m，2H)，4.33-4.49(m，2H)，7.50-7.56(m，5H)。
实施例65：((1R，3R)-3-甲基-1-甲基氨基甲基环己基)乙酸；盐酸盐
Figure C0080526700831
将{(1R，3R)-1-[(苄基甲基氨基)甲基]-3-甲基环己基]乙酸盐酸盐(实施例64，0.60g，1.84mmol)溶于乙醇(50mL)中。加入20％Pd/C(0.1g)，并将该反应在氢气氛下(50psi)振摇7分钟。将该反应混合物过滤，加入1M HCl的乙醚溶液(5mL)，并将该溶液真空浓缩。将残余物溶于热的异丙醇(100mL)中，过滤，并真空浓缩。然后将残余物溶于最小必需量的热异丙醇中，并从乙醚和己烷中重结晶。获得了0.15g(35％)所需产物，为晶体。
MS：200.1(M+1 for C11H21NO2)；HRMS：(计算值)200.1650，(实测值)200.1646(M+1 forC11H21NO2)；mp：160-161℃；IR(KBr，cm-1)：2925(br)，1719，1457；元素分析(C11H21NO2HCl0.40H2O)(计算值)C：54.38，H：9.46，N：5.77；(实测值)C：54.27，H：9.36，N：5.65.1H NMR(CD3OD)δ0.83-0.97(m，5H)，1.20-1.28(m，1H)1.42-1.74(m，6H)2.38(s，2H)，2.73(s，3H)，3.23(s，2H)。
实施例66：概述
使用新解剖的大鼠视网膜来自体内的模型，研究脑谷氨酸水平在神经组织中保持在正常限度内的机制。添补谷氨酸合成可能对于重新补足神经传递后在神经胶质中氧化的谷氨酸很重要。鉴定作为丙酮酸羧化和支链氨基酸氨基转移的通过该从头途径的速度控制点。为了测定谷氨酸合成与丙酮酸羧基酶活性之间的关系，测定作为介质丙酮酸函数的由H14CO3合成14C-谷氨酸+14C-谷氨酰胺。在丙酮酸从0.2提高到5mM后，14C-氨基酸的合成增加了66±15％。培养20分钟后，谷氨酰胺相对于H14CO3的比放射性表明在视网膜中有约30％的谷氨酰胺是源自碳酸氢盐固定。为了测定谷氨酸合成对作为氮来源的可利用支链氨基酸(BCAA)的依赖性，测定了神经元支链氨基转移酶(BCATc)的抑制作用。加巴喷丁(GBP)(1mM)—一种选择性神经元BCATc抑制剂将从H14CO3合成14C-谷氨酸+14C-谷氨酰胺抑制了31％，同时没有减慢H14CO3掺合到乳酸和柠檬酸循环中间体中。加入0.6mM BCAA逆转了谷氨酸从头合成的抑制。数据表明，丙酮酸羧基酶和支链氨基转移酶分担了视网膜中谷氨酸从头合成的速率控制，并且谷氨酸从头合成对于维持视网膜谷氨酸水平非常重要。
方法
实验动物
对于所有实验，都使用Sprague Dawley大鼠(200-400g)。将大鼠在12小时光照/黑暗循环下饲养，并让它们随意摄取食物和水。用戊巴比妥(IP)将大鼠麻醉后，摘出眼球，并在冰冷的缓冲液中解剖视网膜。
CO2固定
将新分离的半侧视网膜在含有下述组分的缓冲液A(pH 7.4)中于37℃预培养3分钟：118mM NaCl，4.7mM KCl，2.5mM CaCl2，1.2mM KH2PO4，1.17mM MgSO4，20mM HEPES，5mM葡萄糖，0.05mM NH4Cl和25mM NaH14CO3。该缓冲液中还含有丙酮酸(0.2或5mM)。在20ml小瓶中，用95％O2、5％CO2平衡1ml缓冲液和气相。通过加入10μCi/ml H14CO3来开始培养。然后立即将容器密闭起来。大多数培养持续20分钟，在一些预实验中，培养时间为10到60分钟不等。通过将半侧视网膜从缓冲液中取出并置于2％高氯酸中来终止反应。用高氯酸(终浓度为2％)将缓冲液单独酸化，并让未反应的14CO2从该酸化样本中扩散出来。
通过测定等分试样的培养基和组织样本中的放射性来确定产物(非挥发性碳14代谢物)的总量。按照在下述文献中描述的方法通过Dowex-1乙酸盐色谱法分离出提取物中的代谢物：Williamson，.J.R.，和Corkey，B.(1969)“Methods in Enzymology”，Vol.13，ed.Lowenstein，J.M.(Academic Press)pp 434-513，并通过闪烁计数定量测定。在大多数情况下，各代谢物C14数据以培养基+组织提取物的放射性之和表示。视网膜与培养基中14C-代谢物量的完全定量可见下文中的表I和II。
在进行评价丙酮酸对视网膜中H14CO3固定的影响期间收集未在结果和讨论部分中显示的数据。附图2表明只有丙酮酸对谷氨酸+谷氨酰胺之和与丙酮酸+乳酸之和有影响。表I提供了被H14CO3标记的所有代谢物及其区室化的值。
同样，在评价加巴喷丁的影响期间收集未在结果和讨论部分中显示的数据。因此，表II是在附图4中显示的数据的扩充，并提供了被H14CO3标记的所有代谢物及其区室化的值。
表I
条件 区室 Gln Glu Asp Lact TCA循环 总共
对照(0.2Pyr) 内 0.59±0.05 1.47±0.29 0.85±0.06 0.16±0.06 1.02±0.26 4.08±0.41
外 0.61±0.08 0.04±0.01 0.08±0.01 0.55±0.03 0 1.19±0.13
总和 1.20±0.09 1.51±0.29 0.93±0.08 0.71±0.06 1.02±0.26 5.27±0.45
+5.0Pyr 内 0.91±0.13 2.67±0.29 1.08±0.12 0.29±0.04 2.31±0.13 7.26±0.61
外 0.96±0.14 0.06±0.01 0.08±0.01 1.18±0.11 0 2.24±0.21
总和 1.87±0.23 2.73±0.28 1.16±0.12 1.47±0.13 2.31±0.13 9.50±0.74
表II
条件 区室 Gln Glu  Asp  Lact  TCA循环 总共
对照 内 0.440±0.032 1.477±0.097  0.634±0.038  0.080±0.008  1.096±0.105 3.715±0.266
外 0.551±0.036 0.008±0.001  0.070±0.003  0.478±0.030  0 1.117±0.075
总和 0.991±0.054 1.485±0.096  0.704±0.040  0.558±0.031  1.096±0.105 4.832±0.303
+GBP 内 0.389±0.026 1.324±0.025  0.549±0.019  0.089±0.006  1.514±0.103 3.902±0.122
外 0.545±0.024 0.008±0.002  0.035±0.003  0.516±0.030  0 1.066±0.028
总和 0.934±0.036 1.332±0.025  0.584±0.022  0.605±0.028  1.514±0.103 4.968±0.028
+GBP+BCAA 内 0.480±0.011 1.549±0.070  0.609±0.021  0.086±0.008  1.220±0.116 3.989±0.043
外 0.806±0.086 0.009±0.001  0.093±0.008  0.458±0.048  0 1.322±0.076
总和 1.286±0.082 1.558±0.070  0.702±0.016  0.5445±0.040  1.220±0.116 5.311±0.119
在本实施例中采用色谱法分离谷氨酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、和乳酸。柠檬酸循环中间体保留在Dowex柱上，并且估计样本中总计数与洗脱下来的计数之间的差异。关于该方法有效性的证据已在现有技术中报道过。在将样本进行色谱分离前，通过用过量NADH和乳酸脱氢酶处理样本来将样本中的14C-丙酮酸以化学计量方式转化成乳酸。因此，所报告的单个乳酸峰含有在乳酸和丙酮酸中的所有碳14。为了测定视网膜样本中谷氨酸和谷氨酰胺比活性，使用下述标准酶方法通过荧光分析测定谷氨酸的质量：Patel，M.S.(1989)inNeuromethods：Carbohydrate and Energy Metabolism，Vol II，eds.Boulton，A.A和Baker G.D.(The Humana Press，Inc.)pp309-340。通过色谱法与谷氨酸分离开之后，通过上述发光测定法测定谷氨酰胺的质量。使用酶测定法，通过荧光分析测定ATP和磷酸肌酸。
使用DC蛋白测定(Bio-Rad，Richmond，CA，USA)测定视网膜蛋白。每一半侧视网膜含有约0.4mg蛋白。
丙酮酸羧基酶测定
测定新鲜的全脑和切下的视网膜样本中的丙酮酸羧基酶活性。使用Patel，M.S.(1989)in Neuromethods：Carbohydrate andEnergy Metabolism，Vol II，eds. Boulton，A.A和Baker G.D.(The Humana Press，Inc.)pp 309-340中描述的方法，该方法包括测定在超声处理过的组织中在最佳条件下的14CO2固定。
蛋白质印迹
按照Patel，M.S.(1989)in Neuromethods：Carbohydrateand Energy Metabolism，Vol II，eds.Boulton，A.A和BakerG.D.(The Humana Press，Inc.)pp 309-340中描述的方法，使用10％凝胶，进行SDS-PAGE。为了进行免疫印迹，将蛋白转移到Immobilon P膜上。用5％BSA将该膜阻断，并与免疫亲和纯化的兔子抗大鼠BCATc肽抗体(1∶1000稀释)或免疫亲和纯化的兔子抗人BCATm肽抗体(1∶1000稀释)一起培养。依据制造商的使用说明(Amersham，Arlington Heights，IL，USA)，使用ECL系统目测检验免疫反应性蛋白带。
计算和统计学分析
数据通过测定特定代谢物中dpm/mg并除以培养基HCO3的比活性而报告在正文和附图中。因此对于所有给定代谢物，数据都是以H14CO3的nmol/mg蛋白报告的。
结果是以平均值±平均值的标准误差报告的。通过成对t-检验和p＜0.05判断统计学显著性。独立测定次数(n)显示在附图和和表图例中。
结果
视网膜和全脑中丙酮酸羧基酶水平类似
Patel证实了丙酮酸羧基酶是成年啮齿动物脑中的主要CO2固定酶。为了判断在视网膜中是否也是如此，在37℃比较新大脑皮质与视网膜超声物中的丙酮酸羧基酶活性。新大脑皮质水平(2.9±0.1nmol固定的H14CO4/分钟/mg)与超声视网膜组织中的水平(3.4±0.4nmol固定的H14CO4/分钟/mg)类似，这表明丙酮酸羧基酶在视网膜中的活性与在全脑中的活性一样。
14CO2固定和14C-谷氨酸出现的速率是视网膜中丙酮酸水平的函数
在预实验中，如方法部分中所述，将视网膜与0.2mM丙酮酸培养10、20、40、和60分钟。监测总的14CO2以及ATP和磷酸肌酸水平。随着时间的延长，ATP和磷酸肌酸的水平保持恒定，这表明在整个期间氧合作用与pH控制是充分的。总的CO2固定(5.50±0.14nmol/mg蛋白)在20-40分钟出现峰值，但是在10分钟时已经达到最大值的76％(4.2±0.1nmol/mg)。因为ATP(20±0.2nmol/mg)和磷酸肌酸(16±1.1nmol/mg)水平很高，并且不随时间改变，所以该峰值表明CO2固定速率是恒定的，但是非挥发性碳14产物连续分解成CO2+H2O，从而在20分钟内产生了接近稳态的谷氨酸和谷氨酰胺比放射性水平。
为了评价丙酮酸羧化对谷氨酸合成的控制，将视网膜与0.2或5mM丙酮酸在培养基中培养，并分析细胞内和细胞外的代谢物。在0.2mM丙酮酸存在下，在20分钟内固定的总14CO2为5.27±0.45nmolH14CO3/mg，而在5mM丙酮酸存在下固定的总14CO2为9.50±0.74nmolH14CO3/mg。附图2表明，将未标记的丙酮酸从0.2提高至5mM，增加了14C-谷氨酸与14C-谷氨酰胺之和(从1.74±0.19增加到2.90±0.31nmol/mg，p＜0.005)。附图2还表明，较高水平丙酮酸的培养增加了14C-乳酸+14C-丙酮酸的值。因此，在稳定态，将丙酮酸浓度从0.2提高至5mM，使得掺入到谷氨酸和谷氨酰胺中的H14CO3增加了66％，而提高丙酮酸浓度使得掺入到丙酮酸和乳酸中的H14CO3增加了111％。循环到丙酮酸和乳酸中的碳14代表着经由丙酮酸羧基酶、苹果酸酶和磷酸烯醇丙酮酸羧酸激酶的神经胶质再循环，并且首次证实了在完整神经组织中的活性柠檬酸循环脱羧。
这些数据表明，增加经由丙酮酸羧基酶的通量可引起视网膜谷氨酸从头合成的增加。同时丙酮酸循环有几分更大程度的增加。总的谷氨酰胺合成大部分是源自丙酮酸羧化
通过测定与含H14CO3的培养基一起培养的视网膜组织中的谷氨酰胺比放射性评价了丙酮酸羧化作为在神经传递期间从视网膜神经末梢释放的谷氨酸的补充源的重要性。视网膜中有固定比例的谷氨酰胺合成源自由神经元释放并被Müller神经胶质摄取的未标记的谷氨酸。余者来自从丙酮酸和14CO2添补合成的神经胶质α-酮基戊二酸。因此，相对于H14CO3比放射性的谷氨酰胺比放射性可提供源自添补合成的谷氨酰胺比例的最小值。丙酮酸羧基酶在神经胶质中的产物是[1，4-14C]-酮丁二酸。1位和4位都被标记，这是因为首先掺入到酮丁二酸4-C位上的碳14通过酮丁二酸与对称富马酸的平衡而在1位与4位之间随机分配。标记的酮丁二酸与丙酮酸缩合以形成柠檬酸，然后柠檬酸异构化成异柠檬酸。[1，4-14C]-异柠檬酸被氧化，并被异柠檬酸脱氢酶脱羧，形成[5-14C]α-酮戊二酸。因此，根据标记在酮丁二酸中的随机分配程度，添补合成的α-酮戊二酸大约具有一半的初始底物H14CO3的比放射性。对于从[5-14C]α-酮戊二酸合成的谷氨酰胺也是如此。
测定在与0.2mM丙酮酸和H14CO3培养10、20、40和60分钟的视网膜组织提取物中的谷氨酰胺比放射性。仅报告组织谷氨酰胺(不报告培养基)。在10-60分钟，组织中的谷氨酰胺比放射性保持恒定。培养20分钟后，组织中谷氨酰胺的质量为4.50±0.44nmol/mg，其比放射性为1970±115dpm/nmol或0.158±0.009dpm/nmol碳酸氢盐比活性。这表明约32％的谷氨酰胺是通过添补合成和丙酮酸羧基酶生成的。
视网膜谷氨酸的比放射性(269±8dpm/nmol)低于谷氨酰胺的比放射性，并且在10-60分钟时间内也保持恒定。其仅为谷氨酰胺比活性的14％。这意味着在神经元中，在添补合成方面，谷氨酸代谢转换速度很快。然而，因为神经元谷氨酸转换不能补足在神经传递期间损失的谷氨酸碳骨架，所以添补途径在维持神经元谷氨酸水平方面特别重要。本数据清楚地表明，添补途径提供了大比例(约32％)的谷氨酸补充所需的谷氨酰胺。
视网膜谷氨酸和谷氨酰胺的合成部分取决于支链氨基酸的氨基转移作用
最近在星形胶质细胞培养物中进行的谷氨酸合成研究表明，α-酮戊二酸转化成谷氨酸可能是谷氨酸添补合成中的速度控制步骤。有几组研究已表明，谷氨酸的α-氨基不能作为氨被提供，因此必须通过α-酮戊二酸与另一种氨基酸的氨基转移作用被提供：Kanamori，K.，Ross，B.D.，和Kondrat，R.W.(1998)J.Neurochem.70，1304-1315，Laemmli，U.K.(1970)Nature 227，680-885，包括我们自己的Haberg，A.，Qu，H.，Bakken，I.J.，Sande，L.M.，White，L.R.，Haraldseth，O.，Unsgard，G.，Assley，J.，Sonnewald，U.(1998)Dev.Neurosci.20.389-398。支链氨基酸可能是氮供体，因为它们可以有效地越过血脑和血视网膜屏障。Hutson与同事提出，涉及支链氨基酸与两种BCAT同工酶—一种在神经元胞质溶胶中(BCATc)，另一种在神经胶质线粒体中(BCATm)—的神经元与神经胶质之间的氮穿梭也可以提供所需的氮：Huston，S.M.，Berkich，D.，Down，P.，Xu，B.，Aschner，M.，和LaNoue，K.F.(1998)J.Neurochem.71，863-874。依据该假定的穿梭，神经元BCATc通过提供在神经元中再生的BCAA来辅助神经胶质BCAEm将α-酮戊二酸转化成谷氨酸(参见附图1)。
作为研究BCAT同工酶在视网膜中谷氨酸从头合成中的作用的第一个步骤，使用BCATm和BCATc特异性抗体进行免疫印迹分析以测定BCAT同工酶是否在大鼠视网膜中表达。如附图3所示，BCATc和BCATm都在视网膜中表达，并且表达水平与在全脑匀浆中检测到的水平相差不大。因此，新解剖的大鼠视网膜是可用于检测神经元与神经胶质之间氮穿梭概念的合适的完整神经系统。
亮氨酸类似物加巴喷丁(GBP)是能抑制BCATc但不抑制BCATm的神经活性药物：Su，T.-Z.，Lunney，E.，Campbell，G.，Oxender，D.L.(1995)J.Neurochem.64，2125-2131。经证实GBP能抑制新解剖的大鼠视网膜中的亮氨酸合成(数据未提供)。然后在来自体内的大鼠视网膜中测定了GBP对从H14CO3合成14C-谷氨酸+14C-谷氨酰胺的影响。如附图4所示，1mM GBP将14C-谷氨酸+14C-谷氨酰胺的形成减少至对照值的71％(2.26±0.05对3.18±0.12nmol/mg，p＜0.001)。分别加入200μM亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸将该抑制作用逆转至对照值的89％(2.84±1.15nmol/mg，p＜0.01对仅GBP)。GBP对ATP或磷酸肌酸没有任何影响，这意味着GBP不损害视网膜生物能过程。由于存在1mM GBP，掺入到乳酸和柠檬酸循环中间体中的碳14的少量增加是不显著的(从1.93±0.06增加到2.12±0.13)。掺入到所有代谢物中的标记物的量如表II所示。
还进行了其它实验以研究GBP的剂量/反应特性。将新解剖的视网膜在含有0、0.2、1、或5mM GBP的缓冲液A中培养20分钟。如附图5所示，将GBP浓度增加1mM不能显著提高对从H14CO3合成14C-谷氨酸+14C-谷氨酰胺的抑制的程度。GBP对柠檬酸循环中间体、乳酸和丙酮酸的形成没有任何影响(附图5)。这支持了下述观点：即GBP抑制谷氨酸合成的位点是BCAT介导的α-酮戊二酸向谷氨酸的转化。
讨论
所述研究评价了维持CNS谷氨酸水平的机制。以前的研究表明，谷氨酰胺合酶是视网膜和海马维持神经元谷氨酸水平所必需的：Su.T.-Z.，Lunney，E.，Campbell，G.，Oxender，D.L.(1995)J.Neurochem.64，2125-2131。免疫细胞化学测定表明，90％或更多的视网膜和全脑谷氨酸在神经元中，并且将谷氨酰胺合酶抑制90分钟能将神经元谷氨酸贮存消耗至可忽略不计的水平：Ottersen，O.P.，Zhang，N.，和Walberg，F.(1992)Neurosci.46，519-534。这证实了谷氨酰胺合酶是维持神经元谷氨酸所必需的。虽然谷氨酸可在神经元中由α-酮戊二酸合成，但是缺乏丙酮酸羧基酶或另一种添补酶会阻碍α-酮基戊二酸的补充，并因此妨碍了除经由谷氨酰胺酶合成谷氨酰胺的神经元内网谷氨酸合成。
在该实施例中，通过将切下来的视网膜与H14CO3一起培养，并测定14C-谷氨酰胺和14C-谷氨酸的出现和比放射性研究了谷氨酰胺合成的来源和控制。与存在0.2mM丙酮酸相比，在5mM丙酮酸存在下合成更多的14C-谷氨酰胺。这意味着丙酮酸羧基酶活性影响谷氨酰胺合成的速率。然而，观察到的下述事实证实了该控制缺乏灵敏性：当丙酮酸浓度从0.2mM增加至5mM时，丙酮酸羧基酶流量的增加程度(80.3％)没有直接转化成14C-谷氨酸+14C-谷氨酰胺的等量增加(69.0％)。该控制的柔曲性是由柠檬酸循环脱羧和丙酮酸再循环决定的。在视网膜组织中的总H14CO3固定的丙酮酸依赖性与在分离的星形胶质细胞培养物中观察到的结果相似：Gamberino，W.C.，Berkich，D.A.，Lynch，C.J.，Xu，B.，和LaNoue，K.F.(1997)J.Neurochem.69，2312-2325。然而，在不能再生出用于将α-酮戊二酸进行氨基转移作用的内源性BCAA的星形胶质细胞中，丙酮酸引起的CO2固定增加没有转化成14C-谷氨酸与14C-谷氨酰胺水平的增加。相反，碳14仅积聚在柠檬酸循环中间体和“再循环的”丙酮酸中。
在本文报告的视网膜研究中，谷氨酰胺在稳定态的比放射性是碳酸氢盐比放射性的0.158。因为大约一半掺入到草乙酸中的14C保留在α-酮戊二酸中，该结果表明大约32％谷氨酰胺来自14HCO3。这是首次直接评价在神经元组织中添补对谷氨酰胺合成的贡献。现有技术已经对此进行了间接评价，并包括在将13C葡萄糖(3-5，11-13)灌注到完整脑中后，通过NMR光谱分析示踪同位素(isotopomer)。使用这些NMR方法研究丙酮酸羧化对谷氨酰胺合成的贡献所获得的结果比本实施例所获得的结果要低，并且为不到1％(3)-5-10％(4，5)-20-25％：Shank，R.P.，Bennet，G.S.，Freytag，S.O.，和Campbell，G.L.(1985)Brain Res.329，364-367，Griffen，J.L.，Rae，C.，Radda，G.K.，和Matthews，P.M.(1999)Biochim.Biophys.Acta1450，297-307，主要取决于所用数学模型的初始假定值。本实施例的结果表明，对于视网膜功能和可能对于全脑功能，神经胶质丙酮酸羧化与柠檬酸循环中间体向谷氨酸和谷氨酰胺的转化可能非常重要。
观察到GBP缓慢地将柠檬酸循环中间体转化成谷氨酰胺和谷氨酸，这强烈地表明神经元通过BCATc合成BCAA是达到α-酮戊二酸胺化成谷氨酸的最佳速率所必需的。其参与该过程的合理方案如附图1所示。
结果证实了GBP抑制了由H14CO3合成14C-谷氨酸和14C-谷氨酰胺，该结果与所述穿梭机制相一致。该假定还给GBP的抗癫痫作用提供了可能解释：Taylor，C.P.，Gee，N.S.，Su.T.Z.，Kocsis，J.D.，Welty，D.F.，Brown，J.P.，Dooley，D.J.，Boden，P.，Singh，L.，(1998)Epilepsy Res.29，233-249。实际上，降低谷氨酸合成是GBP和抗癫痫碳酸酐酶抑制剂的共同作用：Hazen，S.A.，Waheed，A.，Sly，W.S.，LaNoue，K.F.，Lynch，C，J.(1997)Dev.Neurosci.19，162-171。而且，Maple Syrup UrineDisease—支链酮基酸脱氢酶基因突变引起的遗传疾病如果不治疗的话就会在患者中引起高血清BCAA和随后的神经功能异常：Chuang，D.I.和Shih，V.E.(1995)in The Metabolic Basis ofInherited Disease，eds. Schriver，C.R.，Beaudet，A.L.，Sly，S.，和Vaile，D.(McGraw-Hill)pp.1239-1277，该神经异常可能与谷氨酸合成的异常调控有关。最后，在谷氨酸合成期间涉及氮穿梭的机制必须按照GBP在神经病疼痛和神经变性治疗中的效力作进一步研究：Ottersen，O.P.，Zhang，N.，和Walberg，F.(1992)Neurosci.46，519-534；Chuang.D.I.和Shih，V.E.(1995)inThe Metabolic Basis of Inherited Disease，eds.Schriver，C.R.，Beaudet，A.L.，Sly，S.，和Vaile，D.(McGraw-Hill)pp.1239-1277，Rothset in，J.D.和Kuncl，R.W.(1995)J.Neurochem.65，643-651。
实施例67
酶制备：将冷冻的大鼠脑在冰上融解，并切成细片。向每片脑中加入5ml等渗缓冲液[含有亮抑蛋白酶肽、胃蛋白酶抑制剂和PMSF的225mM甘露醇，75mM蔗糖，5mM MOPS(pH7.1)，1mM EDTA，1mMEGTA，1mM DTT]。将样本在Potters均化器(B.Bran BiotechInternational)中以500rpm均化10次冲程，然后以800rpm均化10次冲程。将该均化物在具有JA-20转轴的Beckman J2-M1离心机中以19000rpm离心1小时。用透析缓冲液(225mM甘露醇，75mM蔗糖，5mM MOPS(pH 7.1)，1mM EDTA，1mM EGTA，和1mM DTT)将上清液透析24小时，期间至少换3次透析液。将所得酶在-80℃贮存以进一步测定。
测定BCAT：将该反应在1.5mL Eppendorf管中，以含有50mMTris-HCl(pH8.3)，25μM[14C]L-亮氨酸，10mM 2-氧代戊二酸，15μM磷酸吡哆醛，1mM DTT和酶的100μl体积进行。将该反应混合物溶液稀释10倍。在室温(22℃)培养10分钟后，通过加入100μl 15mM对硝基苯基肼在2M HCl中的溶液来终止反应。几分钟后，加入1mL以甲苯为基质的闪烁液体(在1升甲苯中的4.5g PPO和0.5g二MSB)，塞上该管，并用Vortex混合器充分混合。然后将管以13500rpm离心10分钟(Eppendorf离心器5415C)。从每个管中取出600μl有机层置于闪烁瓶中，然后加入10mL用于计数的闪烁鸡尾酒。
实施例# rBCATc IC50(uM)
1 146
2 1136
3 1660
4 2515
 5  2934
 6  2620
 7  2165
 8  74
 9  120
 10  121
 11  1387
 12  1490
 13  ＞10,000
 14  8592
 15  82
 16  1319
 17  ＞10,000
 18  --
 19  --
 20  469
 21  169
 22  389
 23  2121
 24  942
 25  170
 26  8592
 27  1553
 28  181
 29  391
 30  2250
 31  908
 32  243
 33  1018
 34  3218
 35  1768
  36   --
  37   1193
  38   2618
  39   933
  40   3800
  41   363
  42   669
  43   2079
  44   2728
  45   1331
  46   1129
  47   15580
  48   8530
  49   84
  50   842
  51   ＞10,000
  52   2516
  53   3340
  54   217
  55   9242
  56   --
  57   --
  58   179
  59   3370
  60   11530
  61   114
  62   4216
  63   --
  64   --
  65   --

Claims (8)

1.式IV化合物、或其可药用盐、酯、前药或酰胺：
Figure C008052670002C1
其中
R1-R4是氢或烷基；
X是NR5或O；
R5是氢或烷基；
R6是烷基、苄基、芳基烷基、烷氧基、环烷基、烯丙基、烷基环烷基、三取代的卤代烷基，并且当R1-R4分别是氢时，则R6不是甲基。
2.权利要求1的化合物，其中R2和R4是氢，且R1和R3是烷基；R1-R4是氢；R1是烷基，且R2-R4是氢；R5是氢；X是NR5；X是O；R6是烷基；R6是苄基；R6是苯基烷基；R6是环烷基；R6是三氟烷基；R6是烷基环烷基；R6是烷氧基；和R6是烯丙基。
3.权利要求1的化合物，其中R2和R4是氢，且R1和R3是甲基；R1-R4是氢；R1是甲基，且R2-R4是氢；R5是氢；X是NR5；R6是烷基；R6是苄基；R6是苯基烷基；R6是环烷基；R6是三氟烷基；R6是烷基环烷基；R6是烷氧基；和R6是烯丙基。
4.权利要求1的化合物，其中R2和R4是氢，且R1和R3是甲基；R1-R4是氢。
5.权利要求1的化合物，其中所述化合物选自：
1α，3β，5β-(3，5-二甲基-1-丙基氨基甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
1α，3β，5β-(1-乙基氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
1α，3β，5β-(1-苄基氨基甲基)-3，5-二甲基环己基]乙酸，盐酸盐；
1α，3β，5β-(1-二甲基氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
1α，3β，5β-(1-丁基氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
1α，3β，5β-{1-[(苄基甲基氨基)甲基]-3，5-二甲基环己基}乙酸，盐酸盐；
1α，3β，5β-(3，5-二甲基-1-甲基氨基甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
1α，3β，5β-[1-(异丁基氨基甲基)-3，5-二甲基环己基]乙酸，盐酸盐；
1α，3β，5β-[3，5-二甲基-1-(苯乙基氨基甲基)环己基]乙酸，盐酸盐；
1α，3β，5β-{3，5-二甲基-1-[(3-苯基丙基氨基)甲基]环己基}乙酸，盐酸盐；
{1-[(环丁基甲基氨基)甲基]环己基}乙酸，盐酸盐；
1α，3β，5β-[1-(异丙基氨基甲基)-3，5-二甲基环己基]乙酸，盐酸盐；
{1-[(4，4，4-三氟丁基氨基)甲基]环己基}乙酸，盐酸盐；
(1-乙基氨基甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
{1-[(环丙基甲基氨基)甲基]环己基}乙酸，盐酸盐；
[1-(异丁基氨基甲基)环己基]乙酸，盐酸盐；
(1-丙基氨基甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
[1-(异丙基氨基甲基)环己基]乙酸，盐酸盐；
(1-环己基氨基甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
[1-(苄基氨基甲基)环己基]乙酸，盐酸盐；
((1R，3R)-3-甲基-1-丙基氨基甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
{1-[环戊基甲基氨基)甲基]环己基}乙酸，盐酸盐；
{1-[(环己基甲基氨基)甲基]环己基}乙酸，盐酸盐；
((3R，5S)-1-环丁基氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
{(3R，5S)-3，5-二甲基-1-[(2-甲基丁基氨基)甲基]环己基}乙酸，盐酸盐；
{(3R，5S)-1-[(2，2-二甲氧基乙基氨基)甲基]-3，5-二甲基环己基}乙酸，盐酸盐；
{(3R，5S)-1-[(环戊基甲基氨基)甲基]-3，5-二甲基环己基}乙酸，盐酸盐；
{(3R，5S)-1-[(环己基甲基氨基)甲基]-3，5-二甲基环己基}乙酸，盐酸盐；
((3R，5S)-1-环己基氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
(1-丁基氨基甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
{1-[(2，2-二甲氧基乙基氨基)甲基]环己基}乙酸，盐酸盐；
{1-[(苄基甲基氨基)甲基]环己基}乙酸，盐酸盐；
[1-(苯乙基氨基甲基)环己基]乙酸，盐酸盐；
{1-[(3-苯基丙基氨基)甲基]环己基}乙酸，盐酸盐；
((3R，5S)-1-乙基氨基甲基-3，5-二甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
((3R，5S)-3，5-二甲基-1-丙基氨基甲基环己基)乙酸，盐酸盐；
[(1R，3R)-1-(苄基氨基甲基)-3-甲基环己基]乙酸，盐酸盐；
{(1R，3R)-1-[(苄基甲基氨基)甲基]-3-甲基环己基]乙酸，盐酸盐；或
((1R，3R)-3-甲基-1-甲基氨基甲基环己基)乙酸，盐酸盐。
6.权利要求1的化合物及其可药用盐、酯、前药、或酰胺在制备用于治疗糖尿病性视网膜病的药物中的用途。
7.权利要求1的化合物及其可药用盐、酯、前药、或酰胺在制备用于抑制患者中支链氨基酸依赖性氨基转移酶的药物中的用途。
8.权利要求1的化合物及其可药用盐、酯、前药、或酰胺在制备用于治疗神经变性疾病、抑郁症、焦虑、恐慌、躁狂、两极性障碍、抗炎性疾病、青光眼、疼痛、或胃肠道损伤的药物中的用途。
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