CN116726067B - 一种自组装微沉淀组合物及其皮肤用凝胶、制备方法和应用 - Google Patents
一种自组装微沉淀组合物及其皮肤用凝胶、制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116726067B CN116726067B CN202310906972.6A CN202310906972A CN116726067B CN 116726067 B CN116726067 B CN 116726067B CN 202310906972 A CN202310906972 A CN 202310906972A CN 116726067 B CN116726067 B CN 116726067B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- self
- composition
- assembled
- gel
- filtering
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 92
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 title claims abstract description 49
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 27
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 44
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 40
- 235000006200 Glycyrrhiza glabra Nutrition 0.000 claims abstract description 32
- 241001071795 Gentiana Species 0.000 claims abstract description 28
- 241000202807 Glycyrrhiza Species 0.000 claims abstract description 19
- 235000001453 Glycyrrhiza echinata Nutrition 0.000 claims abstract description 19
- 235000017382 Glycyrrhiza lepidota Nutrition 0.000 claims abstract description 19
- 229940010454 licorice Drugs 0.000 claims abstract description 19
- 239000000469 ethanolic extract Substances 0.000 claims abstract description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 53
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical group CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 25
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 25
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 23
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 22
- LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N glycyrrhizinic acid Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O[C@@H]1O[C@@H]1C([C@H]2[C@]([C@@H]3[C@@]([C@@]4(CC[C@@]5(C)CC[C@@](C)(C[C@H]5C4=CC3=O)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)CC1)(C)C)C(O)=O)[C@@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N 0.000 claims description 17
- 244000303040 Glycyrrhiza glabra Species 0.000 claims description 13
- 235000011477 liquorice Nutrition 0.000 claims description 13
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 12
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 12
- 229940015975 1,2-hexanediol Drugs 0.000 claims description 10
- CDQSJQSWAWPGKG-UHFFFAOYSA-N butane-1,1-diol Chemical compound CCCC(O)O CDQSJQSWAWPGKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 229960001617 ethyl hydroxybenzoate Drugs 0.000 claims description 10
- 235000010228 ethyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000004403 ethyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 claims description 10
- NUVBSKCKDOMJSU-UHFFFAOYSA-N ethylparaben Chemical compound CCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 NUVBSKCKDOMJSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 claims description 10
- FHKSXSQHXQEMOK-UHFFFAOYSA-N hexane-1,2-diol Chemical compound CCCCC(O)CO FHKSXSQHXQEMOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 10
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 9
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 9
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 claims description 7
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 claims description 5
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 claims description 4
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 claims description 4
- 239000003906 humectant Substances 0.000 claims description 4
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 3
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 claims description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 2
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 claims description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 abstract description 15
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 abstract description 11
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 abstract description 8
- 238000009826 distribution Methods 0.000 abstract description 7
- 101000997832 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase JAK2 Proteins 0.000 abstract description 6
- 108010017324 STAT3 Transcription Factor Proteins 0.000 abstract description 6
- 102100033444 Tyrosine-protein kinase JAK2 Human genes 0.000 abstract description 6
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 abstract description 5
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 abstract description 5
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 abstract description 4
- 102000004495 STAT3 Transcription Factor Human genes 0.000 abstract 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 40
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 30
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 13
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 12
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 10
- VYZAHLCBVHPDDF-UHFFFAOYSA-N Dinitrochlorobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(Cl)C([N+]([O-])=O)=C1 VYZAHLCBVHPDDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 6
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 238000001338 self-assembly Methods 0.000 description 6
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 5
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 5
- 102100024040 Signal transducer and activator of transcription 3 Human genes 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 5
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 5
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 101800005151 Cholecystokinin-8 Proteins 0.000 description 4
- 102400000888 Cholecystokinin-8 Human genes 0.000 description 4
- DUAGQYUORDTXOR-GPQRQXLASA-N Gentiopicrin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](C=C)C2=CCOC(=O)C2=CO1 DUAGQYUORDTXOR-GPQRQXLASA-N 0.000 description 4
- DUAGQYUORDTXOR-WULZUDSJSA-N Gentiopicrin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)[C@H]1[C@@H](C=C)C=2C(C(=O)OCC=2)=CO1 DUAGQYUORDTXOR-WULZUDSJSA-N 0.000 description 4
- VTAJIXDZFCRWBR-UHFFFAOYSA-N Licoricesaponin B2 Natural products C1C(C2C(C3(CCC4(C)CCC(C)(CC4C3=CC2)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)C2C(C)(C)CC1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1O VTAJIXDZFCRWBR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- LPLVUJXQOOQHMX-UHFFFAOYSA-N glycyrrhetinic acid glycoside Natural products C1CC(C2C(C3(CCC4(C)CCC(C)(CC4C3=CC2=O)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)C2C(C)(C)C1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1O LPLVUJXQOOQHMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000001685 glycyrrhizic acid Substances 0.000 description 4
- 229960004949 glycyrrhizic acid Drugs 0.000 description 4
- UYRUBYNTXSDKQT-UHFFFAOYSA-N glycyrrhizic acid Natural products CC1(C)C(CCC2(C)C1CCC3(C)C2C(=O)C=C4C5CC(C)(CCC5(C)CCC34C)C(=O)O)OC6OC(C(O)C(O)C6OC7OC(O)C(O)C(O)C7C(=O)O)C(=O)O UYRUBYNTXSDKQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000019410 glycyrrhizin Nutrition 0.000 description 4
- 229940069445 licorice extract Drugs 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- 206010040882 skin lesion Diseases 0.000 description 4
- 231100000444 skin lesion Toxicity 0.000 description 4
- KAZSKMJFUPEHHW-UHFFFAOYSA-N (2E)-3-[5-(1,1-dimethyl-2-propenyl)-4-hydroxy-2-methoxyphenyl]-1-(4-hdyroxyphenyl)-2-propen-1-one Natural products COC1=CC(O)=C(C(C)(C)C=C)C=C1C=CC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 KAZSKMJFUPEHHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 3
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 3
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 3
- IUCVKTHEUWACFB-UHFFFAOYSA-N Licochalcone A Natural products COC1=CC=C(C(C)(C)C=C)C=C1C=CC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 IUCVKTHEUWACFB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KAZSKMJFUPEHHW-DHZHZOJOSA-N Licochalcone A Chemical compound COC1=CC(O)=C(C(C)(C)C=C)C=C1\C=C\C(=O)C1=CC=C(O)C=C1 KAZSKMJFUPEHHW-DHZHZOJOSA-N 0.000 description 3
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 3
- 239000012296 anti-solvent Substances 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 231100000321 erythema Toxicity 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 3
- BANXPJUEBPWEOT-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-Pentadecane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(C)C BANXPJUEBPWEOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 description 2
- 108010044012 STAT1 Transcription Factor Proteins 0.000 description 2
- 102100029904 Signal transducer and activator of transcription 1-alpha/beta Human genes 0.000 description 2
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 229910003460 diamond Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000007803 itching Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000012088 reference solution Substances 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- NTBYINQTYWZXLH-UHFFFAOYSA-N 1,2-dichloro-4-nitrobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(Cl)C(Cl)=C1 NTBYINQTYWZXLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PQUXFUBNSYCQAL-UHFFFAOYSA-N 1-(2,3-difluorophenyl)ethanone Chemical group CC(=O)C1=CC=CC(F)=C1F PQUXFUBNSYCQAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940043268 2,2,4,4,6,8,8-heptamethylnonane Drugs 0.000 description 1
- GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 6,7-dimethyl-3-[[methyl-[2-[methyl-[[1-[3-(trifluoromethyl)phenyl]indol-3-yl]methyl]amino]ethyl]amino]methyl]chromen-4-one;dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.C=1OC2=CC(C)=C(C)C=C2C(=O)C=1CN(C)CCN(C)CC(C1=CC=CC=C11)=CN1C1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 206010012442 Dermatitis contact Diseases 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 208000007514 Herpes zoster Diseases 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 108010087230 Sincalide Proteins 0.000 description 1
- 206010040844 Skin exfoliation Diseases 0.000 description 1
- ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N Tin Chemical compound [Sn] ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004115 adherent culture Methods 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012675 alcoholic extract Substances 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000003266 anti-allergic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000010609 cell counting kit-8 assay Methods 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 208000010247 contact dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000002951 depilatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000035618 desquamation Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- BBKFSSMUWOMYPI-UHFFFAOYSA-N gold palladium Chemical compound [Pd].[Au] BBKFSSMUWOMYPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- KUVMKLCGXIYSNH-UHFFFAOYSA-N isopentadecane Natural products CCCCCCCCCCCCC(C)C KUVMKLCGXIYSNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 230000037311 normal skin Effects 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 238000010926 purge Methods 0.000 description 1
- 238000003762 quantitative reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 230000037380 skin damage Effects 0.000 description 1
- 229940047670 sodium acrylate Drugs 0.000 description 1
- 238000010025 steaming Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/51—Gentianaceae (Gentian family)
- A61K36/515—Gentiana
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
- A61K36/484—Glycyrrhiza (licorice)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/14—Esters of carboxylic acids, e.g. fatty acid monoglycerides, medium-chain triglycerides, parabens or PEG fatty acid esters
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Botany (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Cosmetics (AREA)
Abstract
本发明一种自组装微沉淀组合物及其皮肤用凝胶、制备方法和应用，属于制药技术领域。所述自组装微沉淀组合物的制备包括：制备龙胆水煎煮溶液、制备甘草水煎煮溶液、制备甘草药渣的醇提液和制备自组装微沉淀组合物。本发明具有以下优点：粒径分布较为均一，体系较为稳定；其平均粒径为100～800nm，PDI为0.05‑0.40，电位绝对值为20～60mV；SEM显示其形态为球形；皮肤用凝胶具有较好的生物相容性，凝胶中的中药微沉淀组合物可通过调控IL‑6/JAK2/STAT3信号通路，从而抑制炎性细胞增殖。
Description
技术领域
本发明属于制药技术领域，具体涉及一种自组装微沉淀组合物及其皮肤用凝胶、制备方法和应用。
背景技术
皮炎发病率高，主要表现为红斑、潮红、脱屑等损害，自觉瘙痒，严重影响患者的正常生活。临床治疗多以激素及免疫抑制类药物为主，不良反应明显且患者极易产生耐受性，从而导致皮肤病反复发作，中药在治疗皮肤病方面有较好的应用前景。
近年来，在中医理论指导下常以龙胆泻肝汤化裁方治疗带状疱疹、接触性皮炎、急性湿疹等，获得了显著的治疗效果。其中君药龙胆，对于多种致病菌都有不同程度的抑制作用，抗过敏和抗炎作用显著。佐使药物甘草在各皮肤用经典方剂中广泛使用，甘草具有解毒，调和诸药，祛风止痒的功效。皮炎湿敷散为空军特色医学中心的军队医疗机构制剂，由龙胆、甘草两味药材组成，具有清热燥湿，抗敏止痒的功效，用于各种皮炎的治疗。
由于散剂有效成分难以溶出释放，中药难溶性成分生物利用度差，易损失，转移率低。长期以来，研究者们尝试应用多种制剂技术来解决这些难题，大量证据显示中药水煎煮过程形成的自组装体是决定其性质的关键因素，它的形成不仅能够促进活性成分的吸收及靶组织分布，还表现出更强的生物活性。但传统的水煎煮过程，往往只能提取部分水溶性成分，难溶性成分不易提取和保留；且水煎煮形成的自组装体易受多种因素影响，产率低，稳定性较差。
发明内容
本团队首次构建基于反溶剂法的新型自组装微沉淀关键技术，获得的新型自组装微沉淀组合物可提高有效成分的经皮渗透能力，使药物到达皮肤更深层，前期实验证明，该组合物凝胶在体内外均具有较好的生物活性，因此，该技术对中药新药的开发应用具有重要意义。
本发明的第一个目的在于公开了一种自组装微沉淀组合物及其制备方法。
本发明第二个目的在于公开了上述自组装微沉淀组合物皮肤用凝胶及其制备方法。
本发明第三个目的在于公开了上述自组装微沉淀组合物的应用和自组装微沉淀组合物皮肤用凝胶的应用。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
一种自组装微沉淀组合物，其特征在于，所述自组装微沉淀组合物通过下述方法制备：
(1)、按照重量比为龙胆：甘草＝2.5：1称取原料龙胆和甘草；
(2)、取龙胆，加水浸泡0.5h，煎煮0.5～2h，过滤，重复煎煮0.5～2h，过滤，滤液合并，备用；
(3)、取甘草，加水浸泡0.5h，煎煮0.5～2h，过滤，重复煎煮0.5～2h，过滤，滤液合并，药渣备用；
(4)、取步骤(3)中甘草水煎煮剩余的药渣，加80％乙醇，提取0.5～2h，过滤，备用；
(5)、将步骤(4)制备的甘草药渣醇提液缓慢加入到步骤(2)制备的龙胆水煎液和步骤(3)制备的甘草水煎液中，混合后旋蒸快速除醇，得到0.25g生药/mL的混合提取液，即得自组装微沉淀组合物。
上述技术方案所述的自组装微沉淀组合物，其中：自组装微沉淀组合物平均粒径为100～800nm，PDI为0.05-0.40，电位绝对值为20～60mV；SEM显示其形态为球形。
一种自组装微沉淀组合物的制备方法，其中，所述制备方法为自组装微沉淀技术，自组装微沉淀技术是基于反溶剂沉淀法，将适当浓度的中药醇提溶液加入至水煎煮液中，控制条件，使形成自组装微沉淀。
上述技术方案所述的制备方法，其中，所述方法包括以下步骤：
(1)、按照重量比为龙胆：甘草＝2.5：1称取原料龙胆和甘草；
(2)、取龙胆，加水浸泡0.5h，煎煮0.5～2h，过滤，重复煎煮0.5～2h，过滤，滤液合并，备用；
(3)、取甘草，加水浸泡0.5h，煎煮0.5～2h，过滤，重复煎煮0.5～2h，过滤，滤液合并，药渣备用；
(4)、取步骤(3)中甘草水煎煮剩余的药渣，加80％乙醇，提取0.5～2h，过滤，备用；
(5)、将步骤(4)制备的甘草药渣醇提液缓慢加入到步骤(2)制备的龙胆水煎液和步骤(3)制备的甘草水煎液中，混合后旋蒸快速除醇，得到0.25g生药/mL的混合提取液，即得自组装微沉淀组合物。
一种自组装微沉淀组合物皮肤用凝胶，其中：自组装微沉淀组合物皮肤用凝胶由以下重量百分数的组分组成：自组装微沉淀组合物含量为30～50％；凝胶保湿剂为丙二醇和甘油，含量各为20～30％；增稠剂为丙烯酸钠/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物/异十六烷/聚山梨醇酯-80(SEPINEO P600)含量为3～5％；丁二醇含量为3～5％；羟苯乙酯含量为0.5～1％和1,2-己二醇含量为1～1.5％；
所述有效成分为上述技术方案所述的自组装微沉淀组合物。
上述技术方案所述自组装微沉淀组合物皮肤用凝胶的制备方法，其中：所述制备方法包括下述步骤：
(1)、根据上述技术方案的方法制备自组装微沉淀组合物；
(2)、称取以下重量百分数的原料：30～50％的自组装微沉淀组合物、3～5％的SEPINEO P600、3～5％的丁二醇、20～30％的甘油、20～30％的丙二醇、0.5～1％的羟苯乙酯和1～1.5％的1,2-己二醇；
(3)、取自组装微沉淀组合物、SEPINEO P600和丁二醇于烧杯中，在80℃条件下，以100-300r/min的转速，1000-1500rpm的均质条件下，均质搅拌20min，再加入甘油和丙二醇，持续均质搅拌20min，将温度降至65℃，继续以100～300r/min的转速加入羟苯乙酯和1,2-己二醇，均质搅拌10min，使混合均匀，分装，即得自组装微沉淀组合物皮肤用凝胶。
上述技术方案所述的自组装微沉淀组合物或自组装微沉淀组合物皮肤用凝胶在制备治疗皮肤病药物中的应用。
上述技术方案所述的应用，其中：所述皮肤病为特应性皮炎。
上述技术方案所述的应用，其中：所述应用为通过调控IL-6/JAK2/STAT3信号通路，从而抑制炎性细胞增殖。
传统方式将醇提取液直接除醇，浓缩，进一步制备，整个过程中难溶性成分不稳定而析出，转移率极低；本发明改变了传统方式，采用基于反溶剂沉淀法的自组装微沉淀技术，将适当浓度的中药醇提溶液加入至水煎煮液中，控制条件，使形成自组装微沉淀；具体的技术是将甘草水提液、龙胆水提液与醇提液混合，温度升高使药物在混合溶剂中的溶解度变大，促使比表面积大的小粒子溶解；同时对药材醇提液、水提液生药浓度、混合加入方式等条件进行控制，旋蒸混合液，快速挥发乙醇，微粒来不及附着在已有粒子表面生长，便会析出很多独立的小粒子，得到一个多分散的微沉淀组合物体系，即为自组装微沉淀组合物。
本发明具有以下有益效果：
1、本发明制备的自组装微沉淀组合物粒径分布较为均一，体系较为稳定；其平均粒径为100～800nm，PDI为0.05-0.40，电位绝对值为20～60mV；SEM显示其形态为球形。
2、本发明的自组装微沉淀组合物皮肤用凝胶具有较好的生物相容性，凝胶中的中药微沉淀组合物可通过调控IL-6/JAK2/STAT3信号通路，从而抑制炎性细胞增殖。
附图说明：
1、图1为是自组装微沉淀组合物的表征图，其中A为扫描电镜、透射电镜图片；B为粒径分布结果图。
2、图2为CCK8增殖实验结果图，其中A为CCK8检测不同提取物的细胞毒性；B为不同提取物对10ng/mLTNF-α/IFN-γ诱导的HaCaT炎性细胞增殖抑制作用。
3、图3为RT-PCR检测相关mRNA表达图；PCR检测结果表明甘草水提液、甘草醇提物、龙胆水提物、自组装微沉淀组合物可显著降低炎症细胞JAK2、STAT1、STAT3、IL-6的mRNA的表达。
4、图4为试验例3中给药组的给药方法图。
5、图5为各组特应性皮炎模型小鼠皮损情况；其中：A.空白组；B.模型组；C.阳性药组；自组装微沉淀组合物凝胶低浓度(D)、中浓度(E)、高浓度(F)组。
具体实施方式：
为使本发明的技术方案便于理解，以下结合具体实施例对本发明一种自组装微沉淀组合物及其皮肤用凝胶、制备方法和应用作进一步的说明。
实施例1：自组装微沉淀组合物的制备：
自组装微沉淀的制备采用经典的反溶剂沉淀法，即将适当浓度的中药醇提溶液加入至水煎煮液中，控制条件，使形成自组装微沉淀组合物，具体操作步骤如下：
(1)、称取原料龙胆1428.5g和甘草571.4g；
(2)、取龙胆，加水浸泡0.5h，煎煮0.5～2h，过滤，重复煎煮0.5～2h，过滤，滤液合并，备用；
(3)、取甘草，加水浸泡0.5h，煎煮0.5～2h，过滤，重复煎煮0.5～2h，过滤，滤液合并，药渣备用；
(4)、取步骤(3)中甘草水煎煮剩余的药渣，加80％乙醇，提取0.5～2h，过滤，备用；
(5)、将步骤(4)制备的甘草药渣醇提液缓慢加入到步骤(2)制备的龙胆水煎液和步骤(3)制备的甘草水煎液中，混合后旋蒸快速除醇，得到0.125～0.25g生药/mL的混合提取液，即得自组装微沉淀组合物。
实施例2：自组装微沉淀组合物制备工艺的确定：
具体的混合方式筛选方案如下：
①甘草水提液+甘草醇提液混合，回收乙醇，加入龙胆水提液浓缩至浓度为0.125g生药/mL的自组装微沉淀中药组合物；
②甘草水提液+甘草醇提液+龙胆水提液混合，回收乙醇，继续浓缩至浓度为0.125g生药/mL的自组装微沉淀中药组合物；
③甘草醇提液回收乙醇，与甘草水提液、龙胆水提液进行混合浓缩至浓度为0.125g生药/mL的自组装微沉淀中药组合物。
表2混合方式的筛选结果
结果如表2所示，由表2可知，方案②直接将甘草水提液+甘草醇提液+龙胆水提液混合，回收乙醇，获得的自组装微沉淀中药组合物粒径最小，制剂最稳定。
实施例3：混合提取液生药浓度筛选：
按实施例2中方案②的混合方式，将处方量的三种提液混合，旋蒸快速除醇，分别浓缩至0.125、0.25、0.5g生药/mL的混合提取液，比较混合提取液的粒径和凝胶的外观性状，对混合提取液生药浓度进行筛选。
表3生药浓度筛选结果
结果如表3所示，根据表3结果可知将处方量的三种提取液直接混合，旋蒸快速除醇，得到0.25g生药/mL的混合提取液，粒径较小，且溶液稳定，无沉淀，故以此生药浓度进行凝胶的制备。
实施例4：自组装微沉淀组合物皮肤用凝胶的制备：
(1)、根据实施例1的方法制备自组装微沉淀组合物；
(2)、称取以下重量的原料：800g的自组装微沉淀组合物、80g的SEPINEO P600、80g的丁二醇、500g的甘油、500g的丙二醇、14g的羟苯乙酯和28g的1,2-己二醇；
(3)、取自组装微沉淀组合物、SEPINEO P600和丁二醇于烧杯中，在80℃条件下，以100-300r/min的转速，1000-1500rpm的均质条件下，均质搅拌20min，再加入甘油和丙二醇，持续均质搅拌20min，将温度降至65℃，继续以100～300r/min的转速加入羟苯乙酯和1,2-己二醇，均质搅拌10min，使混合均匀，分装，即得自组装微沉淀组合物皮肤用凝胶。
实施例5：自组装微沉淀组合物皮肤用凝胶的制备：
本实施例的制备步骤与实施例4相同，区别仅在于各原料的重量：700g的自组装微沉淀组合物、70g的SEPINEO P600、90g的丁二醇、450g的甘油、550g的丙二醇、12g的羟苯乙酯和28g的1,2-己二醇。
实施例6：自组装微沉淀组合物皮肤用凝胶的制备：
本实施例的制备步骤与实施例4相同，区别仅在于各原料的重量：900g的自组装微沉淀组合物、90g的SEPINEO P600、70g的丁二醇、600g的甘油、400g的丙二醇、18g的羟苯乙酯和22g的1,2-己二醇。
实施例7：自组装微沉淀组合物皮肤用凝胶的含量测定：
(1)、HPLC法测定龙胆苦苷含量：
仪器与试药：
LCMS-2010EV高效液相色谱仪，日本岛津公司；甲醇为色谱纯；其他试剂为分析纯。
色谱条件：
色谱柱：Diamonsil(2)-C18色谱柱(4.6×250mm,5μm)；预柱：GL-CARTRIDGE C18柱；流动相：乙腈-0.2％磷酸水(15:85)；流速：1.0mL/min；检测波长：270nm；柱温：30℃；进样量：10μL。
对照品溶液的制备：取龙胆苦苷对照品适量，精密称定，加70％乙醇溶液制成1mL含0.28mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取实施例4制备的凝胶样品适量，置25mL容量瓶中，加入70％乙醇溶液适量，超声将其溶解，加70％乙醇溶液定容至刻度，摇匀、滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
测定法分别精密吸取龙胆苦苷对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
(2)、HPLC方法测定甘草酸、甘草查尔酮A：
色谱柱：Diamonsil(2)-C18色谱柱(4.6×250mm,5μm)；预柱为GL-CARTRIDGE C18柱；流动相A：乙腈，流动相B：0.05％磷酸溶液；流速：1.0mL/min；进样量：20μL；检测波长：250nm/370nm；柱温：30℃；按下表中的规定进行梯度洗脱。
表1梯度洗脱表
对照品溶液的制备:取甘草酸、甘草查尔酮A对照品适量，精密称定，加70％甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液，即得对照品溶液。
供试品溶液制备：取实施例4制备的凝胶样品适量，置25mL容量瓶中，加入70％乙醇溶液适量，超声将其溶解，加70％乙醇溶液定容至刻度，摇匀、滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
测定法分别精密吸取甘草酸对照品溶液与供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
(3)、上述方法对凝胶样品的含量测定结果重复性好、准确度高，可用于凝胶样品的含量测定。最终确定每支凝胶(20g)中含有主要有效成分的量分别为：甘草酸不少于10mg，甘草查尔酮A不少于0.7mg，龙胆苦苷不少于40mg。
以下通过具体试验例来说明本发明所具有的有益效果：
试验例1：自组装微沉淀组合物的表征：
一、取实施例1制备的自组装微沉淀组合物，加蒸馏水稀释20倍，采用纳米粒度仪测定粒径与PDI，重复测定3次，取平均值；
二、对实施例1制备的自组装微沉淀组合物，加蒸馏水稀释20倍，用电位仪(上海中晨数字技术设备有限公司的JS94K2电位仪)测定自组装微沉淀组合物的电位；
三、SEM观察自组装微沉淀组合物的形态，将样品用蒸馏水稀释20倍后滴在锡纸上，然后在20mA电流下用金钯导电层溅射镀膜1min，并在10kV的加速激励电压下进行观察。
自组装微沉淀组合物的粒径分布、形态分析如图1所示(图1为是自组装微沉淀组合物的表征，其中A为扫描电镜、透射电镜图片，B为粒径分布结果图)。由图1可知，SEM显示其形态为球形，自组装微沉淀组合物粒径分布较为均一，体系较为稳定。其平均粒径为100～800nm，PDI为0.05-0.40，电位绝对值为20～60mV(该数据可间接反应微沉淀组合物的稳定性，结果表明该微沉淀组合物分散体系的稳定性良好)。
试验例2：自组装微沉淀组合物细胞药效学研究：
1、细胞：HaCaT细胞
2、试剂与器材：DMEM培养基、高灭活胎牛血清、青链霉素混合液、CCK-8试剂盒。
3、实验方法：
(1)、CCK8增殖实验：
取生长状态良好且处于对数生长期的HaCaT细胞，接种于96孔板，每个孔细胞密度保持在1×104个，将96孔板置于37℃，5％CO2恒温培养箱中进行贴壁培养。以不同浓度梯度甘草水提物(GW：1600、800、400、200、100、50、25、12.5、6.25μg/mL)、甘草醇提物(GA：800、400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.125μg/mL)、龙胆水提物(RW：2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125μg/mL)，自组装微沉淀组合物(SAM：3200、1600、800、400、200、100、50、25、12.5μg/mL)分别作用于诱导的HaCaT炎症细胞24h。
(2)、PCR法检测HaCaT细胞炎症相关细胞因子的表达水平：
取对数生长期HaCaT细胞，接种于6孔板中，待细胞完全贴壁后，加入不同药物(GW：50、100μg/mL，GA：12.5、25μg/mL，RW：6.25、12.5μg/mL，SAM：400、800μg/mL)处理24h。收集细胞，加入Trizol试剂提取总RNA。反转录制备cDNA，除去培养基，PBS洗1次，除去PBS，每组加入1mLTrizol后放置于冰面，轻摇使Trizol试剂充分接触5min。RT-qPCR检测TNF-a、IL-6等在细胞中的的mRNA的表达，采用2-△△CT法计算mRNA相对表达量。
4、实验结果：CCK8结果表明，四种不同浓度药物细胞生物相容性较好，结果见图2A。细胞增殖实验表明，不同浓度药物可显著抑制TNF-α和IFN-γ诱导的HaCaT炎症细胞的增殖，结果见图2B。
PCR结果表明，三种提取物及自组装微沉淀组可显著抑制JAK2、STAT1、STAT3、IL-6表达(图3)，以上结果表明其通过调控IL-6/JAK2/STAT3通路抑制TNF-α和IFN-γ诱导的HaCaT炎症细胞增殖。
试验例3：自组装微沉淀组合物皮肤用凝胶(以下称：自组装微沉淀组合物凝胶)抗特应性皮炎的药效学研究：
1、动物：雄性BALB/c小鼠48只，SPF级，8周龄，体重25-30g。
2、试剂与器材：2,4－二硝基氯苯(DNCB)(美国Sigma公司，批号:2508193)；IL-6、TNF-α的水平和酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒。
3、实验方法：
(1)、模型建立与给药：
将经检疫合格的SPF级BALB/c小鼠，随机分组，每组6只，分别为空白组；DCNB模型组；自组装微沉淀组合物凝胶组(1、2、4g·kg-1以生药量计，下同)；地塞米松乳膏阳性对照组(1.0g·kg-1)。
小鼠经两天适应性喂养后，在实验前一天使用脱毛膏脱去背部毛发(约2cm×2cm面积)。1d和4d模型组和各给药组于背部脱毛区涂抹含5％2，4-二硝基氯苯(DNCB)的基质溶液(丙酮∶橄榄油溶液＝3:1配制)100μL。空白对照组小鼠相应部位涂抹等体积空白基质溶液。空白组涂抹等量基质、给药组：方法见图4。前期高剂量的DNCB刺激后小鼠背部皮肤出现水肿、红斑、结痂，后期0.5％DNCB刺激后出现暗红斑及鳞屑，表明小鼠造模成功。
(2)、相关指标观察：(一)小鼠皮炎评分：观察皮肤组织病理形态学变化。(二)皮肤组织中IL-6、TNF-α等因子检测：称取创面皮肤及正常组皮肤500mg，用0.5mLpH为7.4的PBS匀浆后,在4℃,12000r/min条件下离心20min。收集上清用ELISA试剂盒检测。
4、实验结果：
各组小鼠背部皮损情况比较：各组小鼠第28天皮损情况见图5。由图5可知，模型组与正常组小鼠相比，背部皮肤大面积泛红增厚，表明造模成功。阳性药组虽红肿破损消失，但皮肤出现明显皱缩，自组装微沉淀组合物凝胶组小鼠皮损显著改善，且随着给药浓度增大，治疗效果越明显。
表4为各组小鼠皮损组织中炎症因子IL-6、TNF-α的含量。由表可知，与正常组相比，模型组小鼠的炎症因子含量均显著增加(P<0.05)，说明造模成功。除低剂量组的IL-6、TNF-α含量外，其余各给药组炎症因子含量与模型组相比，差异均具有统计学意义。
表4不同组对炎症小鼠主要炎症因子分泌的影响(X±SD，n＝8)
注：与空白组比较，*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01
以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何形式上和实质上的限制，凡熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用以上所揭示的技术内容，而作出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时，凡依据本发明的实质技术对以上实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变，均仍属于本发明的技术方案的范围内。
Claims (5)
1.一种自组装微沉淀组合物，其特征在于，所述自组装微沉淀组合物通过下述方法制备：
（1）、按照重量比为龙胆：甘草=2.5：1称取原料龙胆和甘草；
（2）、取龙胆，加水浸泡0.5 h，煎煮 0.5～2 h，过滤，重复煎煮0.5～2 h，过滤，滤液合并，备用；
（3）、取甘草，加水浸泡 0.5 h，煎煮 0.5～2 h，过滤，重复煎煮0.5～2 h，过滤，滤液合并，药渣备用；
（4）、取步骤（3）中甘草水煎煮剩余的药渣，加80%乙醇，提取0.5～2 h，过滤，备用；
（5）、将步骤（4）制备的甘草药渣醇提液缓慢加入到步骤（2）制备的龙胆水煎液和步骤（3）制备的甘草水煎液中，混合后旋蒸快速除醇，得到0.25g生药/mL的混合提取液，即得自组装微沉淀组合物；自组装微沉淀组合物平均粒径为100～800nm，PDI为0.05-0.40，电位绝对值为20～60 mV；SEM 显示其形态为球形。
2.权利要求1所述自组装微沉淀组合物的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
（1）、按照重量比为龙胆：甘草=2.5：1称取原料龙胆和甘草；
（2）、取龙胆，加水浸泡0.5 h，煎煮 0.5～2 h，过滤，重复煎煮0.5～2 h，过滤，滤液合并，备用；
（3）、取甘草，加水浸泡 0.5 h，煎煮 0.5～2 h，过滤，重复煎煮0.5～2 h，过滤，滤液合并，药渣备用；
（4）、取步骤（3）中甘草水煎煮剩余的药渣，加80%乙醇，提取0.5～2 h，过滤，备用；
（5）、将步骤（4）制备的甘草药渣醇提液缓慢加入到步骤（2）制备的龙胆水煎液和步骤（3）制备的甘草水煎液中，混合后旋蒸快速除醇，得到0.25g生药/mL的混合提取液，即得自组装微沉淀组合物。
3.一种自组装微沉淀组合物皮肤用凝胶，其特征在于：自组装微沉淀组合物皮肤用凝胶由以下重量百分数的组分组成：有效成分为权利要求1所述的自组装微沉淀组合物，含量为30～50%；凝胶保湿剂为丙二醇和甘油，含量各为20～30 %；增稠剂为SEPINEO P600，含量为3～5%；丁二醇含量为3～5%；羟苯乙酯含量为0.5～1 %和1,2-己二醇含量为1～1.5 %。
4.权利要求3所述自组装微沉淀组合物皮肤用凝胶的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括下述步骤：
（1）、根据权利要求2的方法制备自组装微沉淀组合物；
（2）、称取以下重量百分数的原料：30～50%的自组装微沉淀组合物、3～5%的SEPINEOP600、3～5%的丁二醇、20～30 %的甘油、20～30 %的丙二醇、0.5～1 %的羟苯乙酯和1～1.5%的1,2-己二醇；
（3）、取自组装微沉淀组合物、SEPINEO P600和丁二醇于烧杯中，在80℃条件下，以100-300 r/min的转速，1000-1500 rpm的均质条件下，均质搅拌20 min，再加入甘油和丙二醇，持续均质搅拌20 min，将温度降至65℃，继续以100～300 r/min的转速加入羟苯乙酯和1,2-己二醇，均质搅拌10 min，使混合均匀，分装，即得自组装微沉淀组合物皮肤用凝胶。
5.权利要求1所述的自组装微沉淀组合物或权利要求3所述的自组装微沉淀组合物皮肤用凝胶在制备治疗皮肤病药物中的应用；所述皮肤病为特应性皮炎。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310906972.6A CN116726067B (zh) | 2023-07-24 | 2023-07-24 | 一种自组装微沉淀组合物及其皮肤用凝胶、制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310906972.6A CN116726067B (zh) | 2023-07-24 | 2023-07-24 | 一种自组装微沉淀组合物及其皮肤用凝胶、制备方法和应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116726067A CN116726067A (zh) | 2023-09-12 |
| CN116726067B true CN116726067B (zh) | 2024-04-16 |
Family
ID=87913542
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310906972.6A Active CN116726067B (zh) | 2023-07-24 | 2023-07-24 | 一种自组装微沉淀组合物及其皮肤用凝胶、制备方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116726067B (zh) |
Citations (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR970005288A (ko) * | 1995-07-10 | 1997-02-19 | 성재갑 | 유용성 감초추출물을 안정화시킨 지질 액정겔 및 이를 함유하는 화장료 조성물 |
| CN1895451A (zh) * | 2006-06-23 | 2007-01-17 | 徐新盛 | 一种治疗荨麻疹、湿疹的药物组合物及其制备工艺 |
| CN1947739A (zh) * | 2005-10-10 | 2007-04-18 | 广州中医药大学第二附属医院 | 一种治疗皮肤瘙痒症、慢性湿疹的中药组合物及其制备方法 |
| KR100863267B1 (ko) * | 2008-01-15 | 2008-10-15 | 재단법인서울대학교산학협력재단 | 허브 추출물을 포함하는 피부 상태 개선용 조성물 |
| JP2018070511A (ja) * | 2016-10-31 | 2018-05-10 | 株式会社 資生堂 | 液状皮膚外用組成物 |
| TWI673103B (zh) * | 2018-10-19 | 2019-10-01 | 國立清華大學 | 可注射型自組裝微球凝膠、其用途及可注射型自組裝微球凝膠的製備方法 |
| CN113368018A (zh) * | 2020-03-10 | 2021-09-10 | 盈妆生物科技(上海)有限公司 | 抗炎祛痘组合物及其制备方法 |
| WO2021203419A1 (zh) * | 2020-04-10 | 2021-10-14 | 鲁南厚普制药有限公司 | 一种治疗皮炎或湿疹的中药组合物 |
| CN114259512A (zh) * | 2021-12-10 | 2022-04-01 | 兰州大学 | 甘草药渣提取物抑菌凝胶的制备方法及应用 |
| CN114848615A (zh) * | 2022-05-18 | 2022-08-05 | 天津大学 | 和厚朴酚小分子自主装纳米粒及制备方法 |
| CN114948859A (zh) * | 2022-05-11 | 2022-08-30 | 中国人民解放军空军特色医学中心 | 一种治疗泛发性皮炎的中药组合物皮肤用凝胶剂及其制备方法和应用 |
| CN114983840A (zh) * | 2022-05-26 | 2022-09-02 | 广东嘉丹婷日用品有限公司 | 一种可抵御外界刺激的皮肤屏障修护组合物 |
| CN115154408A (zh) * | 2022-05-12 | 2022-10-11 | 中国人民解放军空军特色医学中心 | 一种丹参酮提取物微乳水凝胶新型纳米载药体系及其制备方法和应用 |
| CN116115528A (zh) * | 2022-12-14 | 2023-05-16 | 广州市科能化妆品科研有限公司 | 一种舒缓修护保湿组合物及其应用和制备方法 |
| CN117338691A (zh) * | 2023-11-24 | 2024-01-05 | 华观(宁波)生物科技有限公司 | 控油组合物及其制备方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20210299081A1 (en) * | 2020-03-25 | 2021-09-30 | Molecular Infusions, Llc | Solid cannabinoid formulation for oral administration |
-
2023
- 2023-07-24 CN CN202310906972.6A patent/CN116726067B/zh active Active
Patent Citations (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR970005288A (ko) * | 1995-07-10 | 1997-02-19 | 성재갑 | 유용성 감초추출물을 안정화시킨 지질 액정겔 및 이를 함유하는 화장료 조성물 |
| CN1947739A (zh) * | 2005-10-10 | 2007-04-18 | 广州中医药大学第二附属医院 | 一种治疗皮肤瘙痒症、慢性湿疹的中药组合物及其制备方法 |
| CN1895451A (zh) * | 2006-06-23 | 2007-01-17 | 徐新盛 | 一种治疗荨麻疹、湿疹的药物组合物及其制备工艺 |
| KR100863267B1 (ko) * | 2008-01-15 | 2008-10-15 | 재단법인서울대학교산학협력재단 | 허브 추출물을 포함하는 피부 상태 개선용 조성물 |
| JP2018070511A (ja) * | 2016-10-31 | 2018-05-10 | 株式会社 資生堂 | 液状皮膚外用組成物 |
| TWI673103B (zh) * | 2018-10-19 | 2019-10-01 | 國立清華大學 | 可注射型自組裝微球凝膠、其用途及可注射型自組裝微球凝膠的製備方法 |
| CN113368018A (zh) * | 2020-03-10 | 2021-09-10 | 盈妆生物科技(上海)有限公司 | 抗炎祛痘组合物及其制备方法 |
| WO2021203419A1 (zh) * | 2020-04-10 | 2021-10-14 | 鲁南厚普制药有限公司 | 一种治疗皮炎或湿疹的中药组合物 |
| CN114259512A (zh) * | 2021-12-10 | 2022-04-01 | 兰州大学 | 甘草药渣提取物抑菌凝胶的制备方法及应用 |
| CN114948859A (zh) * | 2022-05-11 | 2022-08-30 | 中国人民解放军空军特色医学中心 | 一种治疗泛发性皮炎的中药组合物皮肤用凝胶剂及其制备方法和应用 |
| CN115154408A (zh) * | 2022-05-12 | 2022-10-11 | 中国人民解放军空军特色医学中心 | 一种丹参酮提取物微乳水凝胶新型纳米载药体系及其制备方法和应用 |
| CN114848615A (zh) * | 2022-05-18 | 2022-08-05 | 天津大学 | 和厚朴酚小分子自主装纳米粒及制备方法 |
| CN114983840A (zh) * | 2022-05-26 | 2022-09-02 | 广东嘉丹婷日用品有限公司 | 一种可抵御外界刺激的皮肤屏障修护组合物 |
| CN116115528A (zh) * | 2022-12-14 | 2023-05-16 | 广州市科能化妆品科研有限公司 | 一种舒缓修护保湿组合物及其应用和制备方法 |
| CN117338691A (zh) * | 2023-11-24 | 2024-01-05 | 华观(宁波)生物科技有限公司 | 控油组合物及其制备方法 |
Non-Patent Citations (11)
| Title |
|---|
| 中医药治疗特应性皮炎研究进展;周芳;李萍;;上海中医药杂志;20081010(第10期);第83-86页 * |
| 健脾润肤汤对特应性皮炎脾虚证面部皮肤生理指标的影响;朱慧婷;尚宝令;李伯华;孙丽蕴;周冬梅;姜春燕;周涛;曲剑华;;时珍国医国药;20170420(第04期);第895-897页 * |
| 异甘草酸镁对人表皮角质形成细胞炎症因子的产生和外周血白细胞趋化功能的影响;李新宇;唐美育;徐兰芳;郑家润;;抗感染药学;20131121(第04期);第267-270页 * |
| 清热除湿汤对NC/Nga小鼠特应性皮炎的作用研究;蒙玉娇;李宁飞;翟春艳;底婷婷;赵京霞;王燕;张璐;张蕾;李萍;;中华中医药杂志;20180501(第05期);第380-384页 * |
| 甘草内生菌代谢物的抗炎作用;杨志军;邓毅;曼琼;杨秀娟;杨延泽;;中国现代应用药学;20180522(第05期);第15-19页 * |
| 甘草-马齿苋配伍对特应性皮炎的免疫调节作用及其机制研究;杨富金;李敏;高燕妮;江雪;刘毅;;中国民族民间医药;20190415(第07期);第15-20页 * |
| 芍药甘草汤自组装纳米粒的分离、表征及抗小鼠银屑病的研究;秦祉剑，等;中国中药杂志;20221227;第48卷(第8期);第2116-2125页 * |
| 荷叶碱自组装纳米粒的制备与评价;但凡;姜维;徐彩菊;樊洁敏;吴平谷;蒋益虹;;精细化工;20200716(第10期);第138-144页 * |
| 载葛根素聚乙烯亚胺/海藻酸钠自组装纳米粒的制备及性能研究;赵庭;贾运涛;张良珂;;中草药;20170912(第17期);第76-81页 * |
| 龙胆泻肝汤在皮肤科的应用;孙丹;闫小宁;;中国医学文摘(皮肤科学);20170415(第02期);第219-227页 * |
| 龙胆泻肝汤对变应性接触性皮炎模型小鼠Treg/Th17细胞平衡调节作用的实验研究;刘颖;李忻红;马贤德;关洪全;;中华中医药学刊;20160810(第08期);第1812-1815页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN116726067A (zh) | 2023-09-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR20230009449A (ko) | 신종 코로나 바이러스 폐렴 치료용 중약 조성물, 그의 제조방법, 검출방법 및 그 용도 | |
| KR20060069349A (ko) | 마데카소시드 및 터미놀로시드가 풍부한 센텔라 아시아티카추출물의 제조 방법 | |
| CN113577125B (zh) | 一种具有抗炎作用的五味甘露软膏剂及其制备方法 | |
| CN106860500B (zh) | 低毒雷公藤新多苷、其制备方法及其应用 | |
| CN116726067B (zh) | 一种自组装微沉淀组合物及其皮肤用凝胶、制备方法和应用 | |
| CN113633608A (zh) | 一种抗hpv病毒多酚缓释脂质纳米粒凝胶及其制备方法 | |
| EP3738581A1 (en) | Rectal mucosal administration preparation of pulsatilla chinensis (bge.) regel saponin b4 and preparation method therefor | |
| EP2845624B1 (en) | Mucoadhesive devil's claw extracts (harpagophytum procumbens) and uses thereof | |
| CN100464745C (zh) | 乙酰半胱氨酸或其药用盐和细辛脑的药物组合物 | |
| CN102198120B (zh) | 紫草萘醌类化合物的医药用途 | |
| CN101485779B (zh) | 一种治疗银屑病的药物组合物及制备方法和质量检测方法 | |
| CN109913407B (zh) | 脂肪来源间充质干细胞类外泌体的制备方法及应用 | |
| CN112451558A (zh) | 牛大力醇提物在制备降糖或降脂药物、保健品中的应用 | |
| CN101332216A (zh) | 杏香兔耳风总酚酸提取物及其制备方法 | |
| CN1463711A (zh) | 一种复方丹参胶囊及制备方法 | |
| CN111991442A (zh) | 一种辛鹅挥发油微乳制剂及其制备方法和用途 | |
| CN110917255A (zh) | 一种抗子宫内膜炎新药的制备方法和用途 | |
| Li et al. | Effect of traditional Chinese herbal Bu-Wang-San on synaptic plasticity in ovariectomised rats | |
| CN115671123B (zh) | 威灵仙皂苷在制备降嘌呤药物中的应用 | |
| CN117137905B (zh) | 野马追倍半萜内酯类化合物在制备用于预防/治疗银屑病的药物中的应用 | |
| CN109589330A (zh) | 冬青苷b在制备治疗炎症性肠病的药物的应用 | |
| Wu et al. | Identification of potential quality markers of Zishen Yutai pill based on spectrum–effect relationship analysis | |
| WO2020061874A1 (zh) | 人参皂甙ck用于制备治疗中重度寻常型银屑病口服药物中的应用 | |
| CN113546116B (zh) | 一种具有降压功效的中药提取物的制备方法 | |
| AU2021105462A4 (en) | Use of fructus corni nano-powder in resisting type 2 diabetes mellitus |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |