CN113546116B - 一种具有降压功效的中药提取物的制备方法 - Google Patents

一种具有降压功效的中药提取物的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开提供了一种具有降压功效的中药提取物的制备方法及其产品，涉及中药技术领域，本发明将牛膝和钩藤配伍合用，提取其中降压生物活性的成分，试验表明，本发明制备的中药提取物具有与西药氯沙坦钾片相当的降压效果，可以明显降低SHR大鼠的SBP和DBP，能不同程度的改善心、肾、胸主动脉的病理性变化，在对高血压导致的受损器官的逆转以及并发症的防治方面具有有益效果，且安全无毒副作用。

Description

一种具有降压功效的中药提取物的制备方法
技术领域
本发明涉及中药技术领域，更具体的说是涉及一种具有降压功效的中药提取物的制备方法。
背景技术
高血压是一种慢性疾病，是目前心脑血管病首要危险因素，我国高血压的发病率不断升高，市场对安全有效的天然降压药物的需求较大，开展抗高血压的相关研究具有重要的社会价值。
目前对于高血压的治疗大部分依靠西药治疗，西药降压以扩张血管为主，而血管在不断的扩张过程中弹性变弱并硬化，造成长期使用西药降压药的人容易引起血管硬化和破裂，并导致脑血管栓塞、中风等疾病，因此，西药虽可满足一般的降压要求但也有明显的副作用，不适合长久使用。中药治疗方法具有作用相对温和、起效持久的特点，但是目前的中药普遍存在着提取的中药功效成分含量低，药效与西药存在差距。
因此，提供一种有效提取降压中药功效成分的制备方法及其产品是本领域技术人员亟需解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种具有降压功效的中药提取物的制备方法。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种具有降压功效的中药提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备牛膝提取物：
牛膝切碎，加入乙醇，加热回流提取提取至少2次，合并提取液，回收乙醇并浓缩，干燥，得提取物I；
合并药渣，挥去乙醇，加入水，煎煮至少2次，煎液合并过滤并浓缩至相对密度1.10-1.20，加入乙醇沉淀，收集沉淀物，干燥，得提取物II；
将提取物I和提取物II混合均匀，得牛膝提取物；
(2)制备钩藤提取物：
将钩藤粉碎，加入乙醇，加热回流提取至少2次，合并提取液，回收乙醇并浓缩，干燥，得钩藤提取物；
其中钩藤与牛膝的质量比为1:1；
(3)合并所述牛膝提取物和所述钩藤提取物，混合均匀，得具有降压功效的中药提取物。
传统中医理论中，肝肾亏虚、肝阳上亢、血瘀痰滞是高血压的主要病因之一。钩藤可平肝潜阳、息风定惊，牛膝补肝肾、引血下行、活血化瘀、利尿通淋，二者配伍合用，补益肝肾，平肝熄风，活血利水，可有效针对高血压的中医病因，实现标本兼治。牛膝含有甾酮、皂苷和多糖等化学成分，利用牛膝甾酮和皂苷易溶于乙醇溶液，多糖易溶于水的性质，先用乙醇溶液提取，药渣加水煎煮，以充分提取牛膝中的有效成分。钩藤中含有生物碱和黄酮等化学成分，具有较好的醇溶性，故利用乙醇进行提取，本发明将牛膝和钩藤配伍合用，提取其中降压生物活性的提取物，试验表明，本发明制备的中药提取物具有与西药氯沙坦钾片相当的降压效果。
优选的：步骤(1)所述乙醇的加入量为牛膝质量的5.5-6.5倍，且乙醇的浓度为65-75％vol，每次加热回流0.8-1.2h.
更优选的，步骤(1)所述乙醇的加入量为牛膝质量的6倍，且乙醇的浓度为70％vol，每次加热回流1h。
优选的：步骤(1)所述水的加入量为所述牛膝质量的5.5-6.5倍，每次煎煮1.8-2.2h。
更优选的，步骤(1)所述水的加入量为所述牛膝质量的6倍，每次煎煮2h。
作为本发明优选的技术方案：步骤(1)所述加入乙醇沉淀的操作具体为：加乙醇至浓缩物料中使含醇量为25％vol，静置24h，离心除去沉淀，上清液继续加乙醇使溶液含醇量为75％vol，静置24h，离心，收集此次沉淀物。低浓度乙醇沉淀出的成分为大分子杂质，如粘液质、淀粉、粗蛋白等，先用低浓度乙醇将杂质除去，再用高浓度乙醇将多糖成分进行沉淀，可使提取物质纯度更高，功效突出。
优选的：步骤(2)所述乙醇的加入量为钩藤质量的7.5-8.5倍，且乙醇的浓度为65-75％vol，每次加热回流1.8-2.2h。
更优选的，步骤(2)所述乙醇的加入量为钩藤质量的8倍，且乙醇的浓度为70％vol，每次加热回流2h。
作为本发明优选的技术方案：步骤(1)所述牛膝切碎至绿豆粒大小，粉碎过细会出现过滤困难；步骤(2)所述钩藤质地坚硬，尽量粉碎即可。
本发明的另一目的，是提供上述制备方法所得的具有降压功效的中药提取物。
作为本发明优选的技术方案：所述中药提取物，含甾酮以β-蜕皮甾酮计，不低于10mg/g，含皂苷以人参皂苷Ro计，不低于100mg/g，含生物碱以钩藤碱计，不低于5mg/g，含多糖以葡萄糖计，不低于250mg/g。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种具有降压功效的中药提取物的制备方法及其产品，本发明将牛膝和钩藤配伍合用，提取其中降压生物活性的成分，试验表明，本发明制备的中药提取物具有与西药氯沙坦钾片相当的降压效果，可以明显降低SHR大鼠的SBP和DBP，能不同程度的改善心、肾、胸主动脉的病理性变化。与模型组比较，各给药组血清中的ACE、AngII含量降低，ACE2、Ang(1-7)含量升高，但是，由于心脏和肾脏中Mas蛋白表达没有明显趋势，表明本发明中药提取物的降压作用主要通过抑制ACE-AngⅡ-AT1R轴过度激活实现。同时，本发明中药提取物在对高血压导致的受损器官的逆转以及并发症的防治方面具有有益效果，且安全无毒副作用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1附图为本发明SHR大鼠治疗8周后心肌组织学变化(HE，×400)示意图，其中A为WKY组、B为模型组、C为氯沙坦组、D为高剂量组、E为中剂量组、F为低剂量组；
图2附图为本发明SHR大鼠治疗8周后肾脏组织学变化(HE，×400)示意图，其中A为WKY组、B为模型组、C为氯沙坦组、D为高剂量组、E为中剂量组、F为低剂量组；
图3附图为本发明SHR大鼠治疗8周后胸主动脉组织学变化(EVG，×400)示意图，其中A为WKY组、B为模型组、C为氯沙坦组、D为高剂量组、E为中剂量组、F为低剂量组；
图4附图为本发明大鼠心肌组织和肾组织AT1R蛋白表达水平电泳图；其中图4A50kDa对应肾脏AT1R水平，图4A 42kDa对应肾脏β-actin水平；图4B 50kDa对应心脏AT1R水平，图4B 42kDa对应心脏β-actin水平；
图5附图为本发明和大鼠心肌组织和肾组织Mas蛋白表达水平电泳图；其中图5A37kDa对应肾脏Mas水平，图5A 42kDa对应肾脏β-actin水平；图5B 37kDa对应心脏Mas水平，图5B 42kDa对应心脏β-actin水平。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
(1)制备牛膝提取物：
3kg牛膝切碎，加入6倍量的70％vol乙醇，加热回流提取2次，每次1h，合并提取液，回收乙醇并浓缩，干燥，得提取物I；
药渣挥去乙醇，加入牛膝6倍量的水，煎煮2次，每次2h，煎液合并过滤并浓缩至相对密度1.10-1.20，加入乙醇使醇含量为25％vol，静置24h，离心，上清液继续加乙醇使溶液含醇量为75％vol，离心，此沉淀物干燥，得提取物II；
将提取物I和提取物II混合均匀，得牛膝提取物；
(2)制备钩藤提取物：
3kg钩藤粉碎，加入8倍量的70％乙醇，加热回流提取2次，每次2h，合并提取液，回收乙醇并浓缩，干燥，得钩藤提取物；
(3)合并所述牛膝提取物和所述钩藤提取物，混合均匀，得具有降压功效的中药提取物。
对比例1
(1)制备牛膝提取物：
3kg牛膝切碎，加入6倍量的50％vol乙醇，加热回流提取1次，提取0.5h，回收乙醇并浓缩，干燥，得提取物I；
药渣挥去乙醇，加入牛膝6倍量的水，煎煮1次，0.5h，煎液过滤并浓缩至相对密度1.10-1.20，加入乙醇使醇含量为25％vol，静置24h，离心，上清液继续加乙醇使溶液含醇量为75％vol，离心，此沉淀物干燥，得提取物II；
将提取物I和提取物II混合均匀，得牛膝提取物；
(2)制备钩藤提取物：
3kg钩藤粉碎，加入6倍量的90％乙醇，加热回流提取3次，每次2h，合并提取液，回收乙醇并浓缩，干燥，得钩藤提取物；
(3)合并所述牛膝提取物和所述钩藤提取物，混合均匀，得具有降压功效的中药提取物。
对比例2
(1)制备牛膝提取物：
3kg牛膝切碎，加入8倍量的70％vol乙醇，加热回流提取1次，提取1h，回收乙醇并浓缩，干燥，得提取物I；
药渣挥去乙醇，加入6倍量的水，煎煮1次，1h，煎液过滤并浓缩至相对密度1.10-1.20，加入乙醇使醇含量为25％vol，静置24h，离心，上清液继续加乙醇使溶液含醇量为75％vol，离心，此沉淀物干燥，得提取物II；
将提取物I和提取物II混合均匀，得牛膝提取物；
(2)制备钩藤提取物：
3kg钩藤粉碎，加入10倍量的90％乙醇，加热回流提取1次，提取1h，回收乙醇并浓缩，干燥，得钩藤提取物；
(3)合并所述牛膝提取物和所述钩藤提取物，混合均匀，得具有降压功效的中药提取物。
对比例3
(1)制备牛膝提取物：
3kg牛膝切碎，加入10倍量的50％vol乙醇，加热回流提取2次，每次1h，合并提取液，回收乙醇并浓缩，干燥，得提取物I；
药渣挥去乙醇，加入6倍量的水，煎煮1次，3h，煎液过滤并浓缩至相对密度1.10-1.20，加入乙醇使醇含量为25％vol，静置24h，离心，上清液继续加乙醇使溶液含醇量为75％vol，离心，此沉淀物干燥，得提取物II；
将提取物I和提取物II混合均匀，得牛膝提取物；
(2)制备钩藤提取物：
3kg钩藤粉碎，加入6倍量的50％乙醇，加热回流提取1次，提取0.5h，回收乙醇并浓缩，干燥，得钩藤提取物；
(3)合并所述牛膝提取物和所述钩藤提取物，混合均匀，得具有降压功效的中药提取物。
效果例1
测定实施例1和对比例1-9牛膝提取物中和钩藤提取物的功效成分，含量结果见表1。
牛膝中总甾酮、总皂苷含量和总多糖含量的测定方法：
总甾酮的测定：精密称取实施例1和对比例1-3样品50mg，置25mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密称取β-蜕皮甾酮对照品4.26mg，加甲醇溶解并定容至10mL，得浓度为0.426mg/mL的对照品溶液。精密吸取0.1～1.0mL对照品溶液，置5mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度。以β-蜕皮甾酮为对照，甲醇为空白溶液，采用紫外分光光度法在242nm波长下进行含量测定，计算实施例1和对比例1-9样品溶液中总甾酮的含量。
总皂苷的测定：精密称取人参皂苷Ro对照品5.15mg，加甲醇溶解并定容至10mL，得浓度为0.515mg/mL的对照品溶液。吸取上述总甾酮测定的供试品溶液400μL，挥干溶剂，加新鲜配制的5％香草醛冰醋酸0.2mL，高氯酸0.8mL，摇匀，置60℃水浴中反应15min，取出冰浴10min，加冰醋酸5mL，摇匀，紫外分光光度法在544nm波长下进行含量测定，计算实施例1和对比例1-9样品溶液中总皂苷的含量。
总多糖的测定：称量提取物II的重量。
钩藤中功效成分以绿原酸为主，还含有异钩藤碱、钩藤碱、去氢毛钩藤碱、毛钩藤碱、喜果苷等，这些成分含量用高效液相色谱发法进行测定。
色谱条件：色谱柱：
Figure BDA0003169707060000072
2.6μm C18100A色谱柱(100mm×4.6nm，2.6μm)；流动相：乙腈(A)-0.1％磷酸水(含3mmol/LC4MimCl)(B)，梯度洗脱(0～2.5min，10％A；2.5～4min，10％A→15％A；4～5min，15％A；5～9min，15％A→20％A；9～14min，20％A；14～15min，20％A→25％A；15～27min，25％A；27～28min，25％A→10％A；28～30min，10％A)；流速：0.8mL/min；柱温：35℃；进样量：10μL。
混合对照品溶液的制备：精密称取绿原酸、异钩藤碱、钩藤碱、去氢毛钩藤碱、毛钩藤碱、喜果苷对照品适量，加甲醇溶解并配制成每1mL分别含绿原酸0.164mg、异钩藤碱0.00804mg、钩藤碱0.017mg、去氢毛钩藤碱0.0372mg、毛钩藤碱0.0139mg、喜果苷0.012mg的混合溶液。
表1
Figure BDA0003169707060000071
采用紫外分光光度法进行测定，提取物中含甾酮以β-蜕皮甾酮计，不低于10mg/g，含皂苷以人参皂苷Ro计，不低于100mg/g，含生物碱以钩藤碱计，不低于5mg/g，含多糖以葡萄糖计，不低于250mg/g。
效果例2
急性毒性试验-最大耐受量(MTD)实验
1、试验方法：
取小鼠(实验前禁食不禁水12h)随机分为空白组、牛膝多糖组(实施例1中提取物II)、牛膝甾酮皂苷组(实施例1中提取物I)、钩藤提取物组(实施例1钩藤提取物)，每组20只，雌雄各半。给药组分别按最大浓度，以30mL/kg灌胃给药，一天两次，中间间隔4h。空白组给予等量蒸馏水。观察小鼠的活动状态、毛发、饮食、二便和死亡情况等指标，连续观察14d。
2、结果处理
结果以均值±标准差表示，采用统计软件SPSS21.0进行组间比较和独立样本t检验分析，P<0.05表示差异有统计学意义。
3、结果
3.1小鼠MTD测定结果
按照30mL/kg对小鼠灌胃给药两次，结果显示牛膝多糖、牛膝甾酮皂苷和钩藤总碱组小鼠无死亡情况出现，故不对小鼠进行半数致死量测定。《中国药典》载牛膝和钩藤口服用量分别为5～12g和3～12g，因此本研究以12g作为牛膝和钩藤的成人(50kg)最大日用量，根据MTD倍数公式计算得各组药物与人MTD值的倍数关系(表2)。
MTD倍数＝(小鼠平均耐受药量/小鼠平均体重)×(成人平均体重/成人每日用量)
表2MTD测定结果(n＝20，
Figure BDA0003169707060000081
)
Figure BDA0003169707060000082
Figure BDA0003169707060000091
3.2一般情况观察
给药后空白组及各给药组小鼠活动正常，14d内未见有小鼠死亡。牛膝多糖组小鼠0～4h内均有不同程度的腹泻，肛门处粘有糊状粪便，给药后第二天粪便恢复正常；牛膝甾酮皂苷组小鼠0～4h内部分小鼠出现轻微腹泻；钩藤提取物组无明显不良反应。14d内各组小鼠毛发净白有光泽，饮食饮水均无异常。
3.3牛膝-钩藤提取物对小鼠体重的影响
实验期间每日于固定时间段称量小鼠体重。与空白组相比，牛膝多糖组、牛膝甾酮皂苷组第二天体重有显著性差异(P<0.05)，第三天起体重正常增长，钩藤提取物组无显著性差异，提示牛膝-钩藤提取物对小鼠体重无明显影响，本发明中药提取物安全可靠。
效果例3
降压活性试验
为研究本发明制备的中药提取物的降压效果，以实施例1所得中药提取物与沙坦类降压西药进行比较，确定其降压活性。
1试验药物：实施例1所得中药提取物、氯沙坦钾片[Merck SharP Dohme Limited(C.K.)，批号：T023363]。
2试验动物：12周龄SPF级雄性WKY大鼠10只，购自北京维通利华实验动物有限公司。许可证号：SCXK(京)：2016-0006，动物合格证号：NO.110011201108057573。12周龄SPF级雄性SHR大鼠50只，购自北京维通利华实验动物有限公司。许可证号：SCXK(京)：2016-0006，动物合格证号：NO.110011201108057438。
3试验方法：
3.1将12周龄雄性SHR大鼠(自发性高血压大鼠品系)50只和WKY大鼠(为SHR的正常血压对照组动物，为高血压大鼠的对照品系)10只，适应性喂养一周后将SHR大鼠随机分为5组，每组10只，实验期间大鼠每日灌胃一次，连续8周。
(1)WKY对照组
(2)模型组(空白SHR)
(3)氯沙坦组(剂量为5.25mg/kg/d)
(4)实施例1中药提取物高剂量组(剂量为4g/kg/d)
(5)实施例1中药提取物中剂量组(剂量为2g/kg/d)
(6)实施例1中药提取物低剂量组(剂量为1g/kg/d)
3.2大鼠血压测定
正式实验前一周对大鼠进行适应性血压测定训练，测定前将大鼠固定，待大鼠适应稳定后于清醒状态下测定各组大鼠的HR、DBP和SBP，连续测量三次取平均值。灌胃前后于每周一上午测定大鼠血压和体重并及时更改给药量。
3.3大鼠脏器指数采集
末次给药后禁食不禁水12h,10％水合氯醛麻醉，腹主动脉取血，打开大鼠胸腔摘取心脏，称重，剪下左心室，称重为左室重量(left ventricularmass，LVM)，心脏重量与体重比值称为心脏指数(cardiac index，CI)，左室重量与体重比值称为左心室指数(leftventricularmass index，LVMI)。摘取双侧肾脏称重，肾脏与体重比值称为肾脏指数(renalindex，RI)。
3.4组织形态学观察
心脏：由左心室中部切取心室上部分放入多聚甲醛中固定留待后续进行形态学检查；心尖部放入冷冻管，-80℃保存。
肾脏：左肾放入多聚甲醛中固定留待后续进行形态学检查；右肾放入冷冻管中，-80℃保存；
血管：取胸主动脉，多聚甲醛固定留待后续进行形态学检查。
3.5血清ACE、AngⅡ、ACE2、Ang(1-7)、AGT、ALD、REN水平测定：按照ELISA试剂盒说明书操作。
3.6心肌组织和肾组织AT1R和Mas蛋白表达水平测定
取冻存于-80℃的心肌组织和肾组织，加入250μL细胞裂解液(RIPA：PMSF＝100:1)，用样品冷冻研磨仪研磨成匀浆(55Hz，30s)。匀浆液14000r/min离心20min，取上清液。重复离心一次以除去沉淀。收集离心后的上清液，分装，按照BCA蛋白定量试剂盒测定心肌组织和肾组织的蛋白浓度。
4数据处理
结果以均值±标准差表示，采用统计软件SPSS21.0进行组间比较和独立样本t检验分析，P<0.05表示差异有统计学意义。
4.1对SHR大鼠体重和血压的影响
表3大鼠体重变化(n＝10，x±s)
Figure BDA0003169707060000111
表4大鼠体重变化(n＝10，x±s)
Figure BDA0003169707060000112
注：与WKY组比较，△为P<0.05，△△为P<0.01；与模型组比较，*为P<0.05，**为P<0.01。
可见，给药前后各组大鼠体重稳定增长，均无显著差异(P>0.05)，表明实施例1中药提取物对SHR大鼠体重无显著影响。
表5对SHR大鼠SBP的影响(n＝10，x±s)
Figure BDA0003169707060000113
表6对SHR大鼠SBP的影响(n＝10，x±s)
Figure BDA0003169707060000114
Figure BDA0003169707060000121
注：与WKY组比较，△为P<0.05，△△为P<0.01；与模型组比较，*为P<0.05，**为P<0.01。
表7对SHR大鼠DBP的影响(n＝10，x±s)
Figure BDA0003169707060000122
表8对SHR大鼠DBP的影响(n＝10，x±s)
Figure BDA0003169707060000123
注：与WKY组比较，△为P<0.05，△△为P<0.01；与模型组比较，*为P<0.05，**为P<0.01。
结果可见，与WKY组比较，SHR大鼠的SBP、DBP明显升高(P<0.01)。与模型组比较，灌胃一周后氯沙坦组SBP、DBP显著下降(P<0.01)，灌胃两周后各给药组的SBP显著下降(P<0.05或0.01)，灌胃三周后各给药组的DBP显著下降(P<0.05或0.01)。
4.2对SHR大鼠主要脏器的影响
表9SHR大鼠主要脏器指数(n＝10，
Figure BDA0003169707060000124
)
Figure BDA0003169707060000125
Figure BDA0003169707060000131
注：与WKY组比较，△为P<0.05，△△为P<0.01；与模型组比较，*为P<0.05，**为P<0.01。
与WKY组比较，SHR大鼠的RI、CI和LVMI均明显增加(P<0.05或0.01)，与模型组比较，各给药组的RI、CI、LVMI均有所降低，但无统计学意义(P>0.05)。
4.3对SHR大鼠心、肾和血管组织学的影响
SHR大鼠心肌HE染色结果如附图1所示，WKY组心肌细胞结构完整，间隙大小正常，分布均匀，细胞核清晰可见。与WKY组比较，模型组心肌细胞肥大，间隙明显增大，排列紊乱，细胞核染色加深。各给药组和氯沙坦组大鼠细胞间的排列紧密度升高，心肌病理损伤有不同程度改善。
SHR大鼠肾脏HE染色结果如附图2所示，WKY组大鼠肾小球无病理变化。与WKY组比较，模型组大鼠肾小球体积缩小及局灶性硬化，炎性细胞浸润，肾间质有空泡出现。各给药组和氯沙坦组大鼠肾组织病理性改变明显减轻。
SHR大鼠胸主动脉EVG染色如附图3所示，WKY组大鼠血管弹性膜排列整齐且层次清晰，内膜较为光滑，中膜无增厚现象。与WKY组比较，模型组大鼠血管弹性膜层数增加且排列紊乱，内膜粗糙不平，中膜明显增厚。各给药组和氯沙坦组组织病理学改变较模型组明显减轻。
4.4对SHR大鼠AGT、ALD、REN的影响
表10对SHR大鼠血清AGT、ALD、REN的影响(n＝10，x±s)
Figure BDA0003169707060000132
注：与WKY组比较，△为P<0.05，△△为P<0.01；与模型组比较，*为P<0.05，**为P<0.01。
与WKY组比较，模型组的AGT、ALD、REN均显著升高(P<0.01)，与模型组比较，除临床中剂量组外，其余给药组的AGT水平均显著降低；各给药组的ALD、REN水平明显下降，差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。
4.5对SHR大鼠ACE-AngⅡ-AT1R轴的影响
表11对SHR大鼠血清ACE、AngII的影响(n＝10，
Figure BDA0003169707060000141
)
Figure BDA0003169707060000142
注：与WKY组比较，△为P<0.05，△△为P<0.01；与模型组比较，*为P<0.05，**为P<0.01。
与WKY组比较，模型组的ACE、AngII水平显著升高(P<0.05或P<0.01)，与模型组比较，氯沙坦组、高、低剂量组的ACE含量显著降低(P<0.01)；中剂量组的AngII含量显著降低(P<0.05)；中剂量组有降低ACE含量的趋势，氯沙坦组、高、低剂量组有降低AngII含量的趋势，但无统计学意义(P>0.05)。
表12对SHR大鼠AT1R蛋白表达的影响(n＝10，x±s)
Figure BDA0003169707060000143
注：与WKY组比较，△为P<0.05，△△为P<0.01；与模型组比较，*为P<0.05，**为P<0.01。
与WKY组比较，模型组大鼠肾脏和心脏中的AT1R蛋白表达水平显著升高(P<0.05或P<0.01)；与模型组比较，高、中、低剂量组、配伍高、低剂量组的肾脏和氯沙坦组、高、中剂量组的心脏AT1R蛋白表达水平显著下降(P<0.05或P<0.01)，氯沙坦组的肾脏和低剂量组的心脏AT1R蛋白表达有下降趋势，但无显著性差异(P>0.05)。BCA蛋白定量试剂盒测定心肌组织和肾组织中AT1R蛋白浓度电泳图参见附图4。
4.6对SHR大鼠ACE2-Ang(1-7)-Mas轴的影响
表13对SHR大鼠血清ACE2、Ang(1-7)的影响(n＝10，
Figure BDA0003169707060000151
)
Figure BDA0003169707060000152
注：与WKY组比较，△为P<0.05，△△为P<0.01；与模型组比较，*为P<0.05，**为P<0.01。
与WKY组比较，模型组的ACE2、Ang(1-7)含量显著降低(P<0.01)，与模型组比较，中、低剂量组的ACE2含量显著升高(P<0.05或P<0.01)；中、低剂量组的Ang(1-7)含量显著升高(P<0.05)；氯沙坦组，高剂量组的ACE2含量有升高的趋势，氯沙坦组、高剂量组有升高Ang(1-7)含量的趋势，但均无统计学意义(P>0.05)。
表14对SHR大鼠Mas蛋白表达的影响(n＝10，
Figure BDA0003169707060000153
)
Figure BDA0003169707060000154
注：与WKY组比较，△为P<0.05，△△为P<0.01；与模型组比较，*为P<0.05，**为P<0.01。
与WKY组比较，模型组大鼠肾脏Mas蛋白表达水平显著升高(P<0.01)，心脏Mas蛋白表达水平有升高趋势，但无差异显著性(P>0.05)；与模型组比较，低剂量组大鼠肾脏中Mas蛋白表达水平显著下降(P<0.05)，氯沙坦组、高、中剂量组大鼠心脏中Mas蛋白表达水平升高；氯沙坦组、高、中高剂量组肾脏中的Mas蛋白表达水平和高、低剂量组心脏中Mas蛋白表达水平均有下降趋势，但差异不具有统计学意义。BCA蛋白定量试剂盒测定心肌组织和肾组织中Mas蛋白浓度电泳图参见附图5。
综合以上试验结果可知，模型组大鼠的血压明显高于WKY组，说明模型成立。灌胃给药后，不同剂量的牛膝-钩藤提取物都可以明显降低SHR大鼠的SBP和DBP，其降压趋势与西药氯沙坦钾片相似。与模型组比较，各给药组血清中的ACE、AngII含量降低，ACE2、Ang(1-7)含量升高，但是，由于心脏和肾脏中Mas蛋白表达没有明显趋势，表明本发明中药提取物的降压作用主要通过抑制ACE-AngⅡ-AT1R轴过度激活实现。同时，本发明中药提取物能不同程度的改善心、肾、胸主动脉的病理性变化，表明本发明中药提取物在对高血压导致的受损器官的逆转以及并发症的防治方面具有有益效果，且安全无毒副作用。
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (3)

1.一种具有降压功效的中药提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
制备牛膝提取物：
牛膝切碎，加入乙醇，加热回流提取至少2次，所述乙醇的加入量为牛膝质量的5.5-6.5倍，且乙醇的浓度为65-75%vol，每次加热回流0.8-1.2h；合并提取液，回收乙醇并浓缩，干燥，得提取物I；
合并药渣，挥去乙醇，加入水，煎煮至少2次，所述水的加入量为所述牛膝质量的5.5-6.5倍，每次煎煮1.8-2.2h；煎液合并过滤并浓缩至相对密度1.10-1.20，加入乙醇沉淀，收集沉淀物，干燥，得提取物II；其中，所述加入乙醇沉淀的操作具体为：加乙醇至浓缩物料中使含醇量为25 %vol，静置24 h，离心除去沉淀，上清液继续加乙醇使溶液含醇量为75 %vol，静置24 h，离心，收集沉淀物；
将提取物I和提取物II混合均匀，得牛膝提取物；
制备钩藤提取物：
将钩藤粉碎，加入乙醇，加热回流提取至少2次，所述乙醇的加入量为钩藤质量的7.5-8.5倍，且乙醇的浓度为65-75%vol，每次加热回流1.8-2.2h；合并提取液，回收乙醇并浓缩，干燥，得钩藤提取物；
其中钩藤与牛膝的质量比为1:1；
合并所述牛膝提取物和所述钩藤提取物，混合均匀，得具有降压功效的中药提取物。
2.一种具有降压功效的中药提取物，其特征在于，根据权利要求1所述制备方法制备得到。
3.根据权利要求2所述的中药提取物，其特征在于，含甾酮以β-蜕皮甾酮计，不低于10mg/g，含皂苷以人参皂苷Ro计，不低于100mg/g，含生物碱以钩藤碱计，不低于5mg/g，含多糖以葡萄糖计，不低于250mg/g。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102641357A (zh) * 2012-05-07 2012-08-22 孙志强 一种治疗高血压的药物及其制备方法
CN106620041A (zh) * 2017-01-28 2017-05-10 刘伟咚 上古中医血压、血糖及心血管病调治方剂与康复方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102641357A (zh) * 2012-05-07 2012-08-22 孙志强 一种治疗高血压的药物及其制备方法
CN106620041A (zh) * 2017-01-28 2017-05-10 刘伟咚 上古中医血压、血糖及心血管病调治方剂与康复方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
药浴足部治疗高血压病疗效观察;高林高;《中医外治杂志》;19950617(第03期);第43页 *

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