CN110917255A - 一种抗子宫内膜炎新药的制备方法和用途 - Google Patents

一种抗子宫内膜炎新药的制备方法和用途 Download PDF

Info

Publication number
CN110917255A
CN110917255A CN201911353502.1A CN201911353502A CN110917255A CN 110917255 A CN110917255 A CN 110917255A CN 201911353502 A CN201911353502 A CN 201911353502A CN 110917255 A CN110917255 A CN 110917255A
Authority
CN
China
Prior art keywords
endometritis
group
preparation
resisting
uterus
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201911353502.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110917255B (zh
Inventor
杜成兴
杨迺嘉
赵启华
杨熟英
冯发进
霍昕
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
GUIZHOU PROVINCE KEHUI PHARMACEUTICAL FACTORY
Original Assignee
GUIZHOU PROVINCE KEHUI PHARMACEUTICAL FACTORY
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by GUIZHOU PROVINCE KEHUI PHARMACEUTICAL FACTORY filed Critical GUIZHOU PROVINCE KEHUI PHARMACEUTICAL FACTORY
Priority to CN201911353502.1A priority Critical patent/CN110917255B/zh
Publication of CN110917255A publication Critical patent/CN110917255A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110917255B publication Critical patent/CN110917255B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/75—Rutaceae (Rue family)
    • A61K36/756—Phellodendron, e.g. corktree
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/19—Acanthaceae (Acanthus family)
    • A61K36/195—Strobilanthes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/31—Brassicaceae or Cruciferae (Mustard family), e.g. broccoli, cabbage or kohlrabi
    • A61K36/315—Isatis, e.g. Dyer's woad
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/53—Lamiaceae or Labiatae (Mint family), e.g. thyme, rosemary or lavender
    • A61K36/539—Scutellaria (skullcap)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/70—Polygonaceae (Buckwheat family), e.g. spineflower or dock
    • A61K36/708—Rheum (rhubarb)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/71—Ranunculaceae (Buttercup family), e.g. larkspur, hepatica, hydrastis, columbine or goldenseal
    • A61K36/718—Coptis (goldthread)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
    • A61K2236/331—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using water, e.g. cold water, infusion, tea, steam distillation, decoction

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

本发明公开了一种抗子宫内膜炎新药的制备方法和用途，制备方法包括以下步骤：（1）按处方将黄柏、大黄、黄芩、板蓝根和黄连加水煎煮，得到煎液，过滤得到滤液，滤液浓缩得到浸膏；（2）加入95%乙醇使含醇量为30~70％，搅拌，静置，滤过，并回收乙醇，醇液浓缩得到稠膏；（3）在稠膏中加入辅料，混匀，干燥并做成制剂，得到抗子宫内膜炎新药制剂。本发明基于现有炎可宁片的处方，将处方中5种药材水煎煮后的浓缩液，进行工艺创新和提升，更有利于各种制剂的制备，可以整体提升该品种的质量。本发明的抗子宫内膜炎新药可作为一种新的针对妇科子宫内膜炎的治疗药物，有广阔的应用前景。

Description

一种抗子宫内膜炎新药的制备方法和用途
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种抗子宫内膜炎新药的制备方法和用途。
背景技术
炎可宁片，拼音名：YanKeNingPian，出自中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第七册(书页号：Z7-104，标准编号：WS3-B-1368-93)。其处方和制法如下：
处方：黄柏413.8g，大黄82.8g，黄芩310.3g，板蓝根310.3g，黄连20.7g。
制法：以上五味，黄连、大黄粉碎成细粉；黄芩、板蓝根加6倍量水煎煮三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.16～1.30(80℃)稠膏；黄柏加6倍量水煎煮三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至原生药量的1.5倍，加入乙醇使含醇量为70％，搅拌，静置，滤过，回收乙醇，浓缩至相对密度为1.16～1.25(80℃)稠膏，与上述粉末及稠膏混匀，干燥，制粒，压制成1000片，包糖衣，即得。
炎可宁片由五味中药黄柏、黄芩、板蓝根、黄连、大黄组成，具有清热泻火，消炎止痢的作用。现代用于治疗急性扁桃体炎，细菌性肺炎，急性结膜炎，中耳炎，疖痈瘰疬，急性乳腺炎，肠炎，细菌性痢疾及急性尿道感染。
由于炎可宁片处方的抗菌范围广，原工艺中黄柏单独水提醇沉后醇浸膏留用、黄芩、板蓝根合加水煎煮浓缩浸膏留用，黄连、大黄打粉留用，三部分留用物合并加入辅料制成片剂；本发明参考了炎可宁片的处方，对制法进行了工艺创新和提升，将处方中5种药材水煎煮后的浓缩液醇提，提高了有效成分的质量，更有利于各种制剂的制备，可以整体提升新药的质量。我们拟将其制备工艺进行改进提升，开发一种能增强机体抵抗病原体感染能力的抗子宫内膜炎新药。
妇科慢性炎症主要指的是妇女生殖器官的炎症，包括各种复杂原因引起的女性外阴炎、阴道炎、宫颈炎、盆腔炎。女性生殖系统经常会感染各种特殊炎症出现外阴瘙痒、灼热肿痛、阴道充血、白带豆渣样、白带量多、性交疼痛、尿频、尿急、尿痛、下腹坠胀等症状，往往反复发作，经久不愈，甚至导致其他恶性疾病的发生，严重损害妇女们的健康。因此，一定要对妇科炎症病因给予高度重视，采取科学的预防与治疗措施，防止肿瘤及其他疾病的发生。
慢性妇科炎症的发生机制：妇科炎症是女性常见的多发疾病，很多女性长期遭受妇科炎症给身心上带来的伤害，很多人都认为妇科炎症只有女性结婚后才会得，实际上并非如此，妇科炎症存在各个年龄段，以四十五到五十五周岁的女性为高发人群，这是因为这一年龄段的女性正处于更年期阶段，身体内的内分泌紊乱,阴道分泌物中的杀菌物质大量减少，细菌、病毒、病原微生物等通过阴道进入女性的体内。
子宫内膜炎是慢性妇科炎症的一种，致病原因是子宫黏膜发生黏液性或者化脓性炎症，为产后流产最常见的一种生殖器官疾病。根据病理过程和炎症性质分为急性黏液脓性子宫内膜炎、急性纤维蛋白子宫内膜炎、慢性卡他性子宫内膜炎、慢性脓性子宫内膜炎和隐性子宫内膜炎。本发明的抗子宫内膜炎新药可作为一种新的针对妇科子宫内膜炎的治疗药物，具有很高的临床价值，有广阔的应用前景。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种抗子宫内膜炎新药的制备方法和用途。
一种抗子宫内膜炎新药的制备方法，包括以下步骤：
(1)将黄柏、大黄、黄芩、板蓝根和黄连加水煎煮，得到煎液，过滤得到滤液，滤液浓缩得到浸膏；
(2)加入95％医用乙醇使浸膏含醇量为30～80％，搅拌，静置，滤过，并回收乙醇，醇液浓缩得到稠膏；
(3)在稠膏中加入辅料，混匀，干燥并做成制剂，得到抗子宫内膜炎新药制剂。
配方中：黄柏清热燥湿、泻火解毒；黄芩有清热燥湿、泻火、解毒、凉血止血的功效；黄连具有清热燥湿，泻火解毒的功效；板蓝根具有清热解毒，凉血利咽的功效；大黄具有泻下攻积，清热泻火，凉血解毒，逐瘀通经，利湿退黄的功效。
本发明基于现有炎可宁片的处方，对制备工艺进行了改进和提升，将5味中药材水煎煮后的浓缩液，再进行醇沉；本发明中采用95％医用乙醇处理浓缩液，使含醇量达到30～80％，回收乙醇，得到醇浓缩液稠膏，该稠膏的重量可为原来水煎煮后稠膏的10％，因弃掉了大量的醇沉淀，保留的有效成分重量变小，减少了药品每日服用量，更有利于各种制剂的制备和病人对药物的吸收，可以整体提升本发明中抗子宫内膜炎新药制剂的质量。
处方：黄柏413.8g、大黄82.8g、黄芩310.3g、板蓝根310.3g和黄连20.7g。
作为优选，所述步骤(1)中将黄柏、大黄、黄芩、板蓝根和黄连加水煎煮三次，每次2小时，合并每次的煎液。
作为优选，所述浸膏的密度为1～1.3g/cm-3(温度为60℃)。
作为优选，所述浸膏的密度为1.2g/cm-3(温度为60℃)。
作为优选，所述抗子宫内膜炎新药为胶囊剂、颗粒剂、片剂或咀嚼片。
本发明还提供了一种由上述的制备方法制备得到的抗子宫内膜炎新用途。
与现有技术相比，本发明的有益效果体现在：
本发明基于现有炎可宁片的处方，对制备工艺进行了工艺创新和提升，保留的有效成分重量变小，减少了药品每日服用量，更有利于各种制剂的制备，可以整体提升本发明中的抗子宫内膜炎新药制剂的质量。另外，本发明中的抗子宫内膜炎新用途可将本发明中的新药制剂作为一种新的抗子宫内膜炎新药，具有很高的临床价值。
附图说明
图1为各组大鼠子宫肉眼观察图；
图2为各组大鼠子宫肿胀度统计柱状图；
图3为各组大鼠子宫组织HE染色图(×100)；
图4为各组大鼠血清TNF-ɑ、IL-2含量统计柱状图；
图5为小鼠子宫组织肉眼观察结果；
图6为各组小鼠子宫肿胀度统计柱状图；
图7为各组小鼠子宫组织TNF-ɑ、IL-2含量统计柱状图；
图8为各组小鼠血清TNF-ɑ、IL-2含量统计柱状图。
具体实施方式
下面参考附图，通过实验例和实施例进一步说明本发明的有益效果。
实验例1
药理实验
将抗子宫内膜炎新药制剂进行药理实验，具体实验如下：
抗子宫内膜炎新药制剂(暂时命名为FYX)是贵州省科晖制药厂新开发的一种中药复方制剂，拟用于子宫内膜炎的临床治疗。前期研究发现该药具有良好的抗菌、抗炎作用。本课题将在前期研究的基础上，以苯酚胶浆诱导的大鼠子宫内膜炎模型及LPS诱导的小鼠子宫内膜炎模型为实验对象，观察FYX的抗子宫内膜炎作用，为FYX的抗子宫内膜炎作用的临床应用提供实验依据。
1.材料
1.1受试药物
FYX，棕色粉末，批号：20181018，拟用成人日用量为3.60g，由贵州省科晖制药厂提供。
1.2实验动物
Wistar大鼠，雌性，体重180～200g；KM小鼠，雌性，体重18～21g；均购自长沙市天勤生物技术有限公司，许可证号为SCXK(湘)2014-0011。动物均分笼饲养，每笼5只，由专人管理。动物房光线充足，通风良好。实验室环境温度18～25℃，相对湿度50～70％，实验室定期常规消毒。动物在这种环境中适应性饲养1周后用于实验。
1.3阳性药
妇科千金胶囊，株洲千金制药有限公司，批号：20180928，规格：0.4g/粒，临床日剂量6粒。
1.4主要仪器
精密电子称，AB104-S型，METTLER TOLEDO公司；离心机，80-2型，金坛市华峰仪器有限公司；Bullet Blender组织细胞破碎仪，美国Next Advance公司；显微镜，DM300型，德国莱卡公司；切片机，Leica RM2235型，德国莱卡公司。
1.5主要试剂
水合氯醛，天津致远化学试剂有限公司，批号：061101。阿拉伯树胶，天津科美欧化学试剂有限公司，批号：2018040。甘油，上海申博化工有限公司，批号：20121010。苯酚，国药集团化学药剂有限公司，批号090201。多聚甲醛，国药集团化学试剂有限公司，批号：20120614。Lipopolysaccharide(LPS),Absin公司，批号：1708S17157。白细胞介素2(IL-2)酶联免疫吸附测定试剂盒,Elabscience生物技术有限公司；肿瘤坏死因子-ɑ(TNF-ɑ)酶联免疫吸附测定试剂盒,Elabscience生物技术有限公司。
2.方法
2.1FYX对苯酚胶浆诱导的大鼠子宫内膜炎模型的影响
2.1.1苯酚胶浆的配制
配制30％苯酚胶浆的备用。配制方法[1]：取液化苯酚6mL、阿拉伯胶1.2g、甘油4.8mL，加少量蒸馏水混匀，最后加蒸馏水定容至20mL，制备成糊状物，备用。
2.1.2分组及给药
将60只体重180～200g雌性Wistar大鼠按体重随机分为6组：对照组、模型组、FYX高剂量组、FYX中剂量组、FYX低剂量组和妇科千金胶囊组，每组10只。对照组和模型组灌胃等容积(10mL/kg)蒸馏水，FYX高、中、低剂量组分别按0.96g/kg、0.48g/kg和0.24g/kg的剂量灌胃FYX。妇科千金胶囊组灌胃0.32g/kg妇科千金胶囊；每天给药1次，连续给药10天(术前给药7d，术后继续给药3d)。
2.1.3模型建立
于给药第7d的给药后2h，用8％水合氯醛0.4mL/100g腹腔注射麻醉各组动物，仰卧位固定，剃去腹部被毛，常规消毒、开腹、暴露子宫，于模型组、FYX高、中、低剂量组和妇科千金胶囊组大鼠的左侧子宫内缓慢注入30％苯酚胶浆，0.1mL/只，于对照组大鼠左侧子宫内缓慢注入生理盐水，0.1mL/只，注毕，分层关腹，消毒术区。待动物麻醉苏醒后，正常饲养，继续给药3天。
2.1.4样本采集
末次给药后24h，麻醉大鼠，心脏取血，取出的血液于室温下放置30min，3000rpm离心20min，小心取出上层血清，备用。取血后处死大鼠，仔细剖取各组大鼠子宫及卵巢组织。分离出的血清及子宫组织用于以下各项指标的检测。
2.1.5子宫组织肉眼观察
小心除去子宫上的脂肪组织，肉眼观察各组大鼠子宫，比较各组大鼠子宫大小、充血、水肿等情况。
2.1.6子宫肿胀度测定
肉眼观察后，去除卵巢，将左右两侧子宫剪开，用电子天平分别称取两侧子宫重量，按下列公式计算子宫肿胀度。
子宫肿胀度(mg)＝造模侧子宫质量(mg)-对照侧子宫质量(mg)
2.1.7子宫组织镜下观察
称重子宫后，固定在10％中性福尔马林中，并进行常规石蜡包埋、切片和HE染色,镜下观察各组大鼠子宫病理学改变。
2.1.8血清炎症因子检测
所取大鼠血清，采用酶联免疫法(ELISA)检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素2(IL-2)的含量。ELISA实验操作按相应说明书步骤进行。
2.2FYX对LPS诱导的小鼠子宫内膜炎模型的影响
2.2.1分组及给药
取昆明种小鼠60只，雌性，体重18～21g，按体重随机分成6组：对照组、模型组、FYX高剂量组、FYX中剂量组、FYX低剂量组和妇科千金胶囊组，每组10只。对照组和模型组灌胃等容积(10mL/kg)蒸馏水，FYX高、中、低剂量组分别按1.2g/kg、0.6g/kg和0.3g/kg的剂量灌胃FYX。妇科千金胶囊组灌胃0.4g/kg妇科千金胶囊；每天给药1次，连续给药7天。
2.2.2模型建立
于末次给药后2h，腹腔注射8％水合氯醛0.1mL/10g麻醉各组动物。将麻醉后小鼠仰卧位固定，剃去腹部被毛，常规消毒、开腹、暴露子宫，于模型组、FYX高、中、低剂量组和妇科千金胶囊组小鼠左侧子宫内缓慢注入5mg/mL的LPS，20μL/只，于对照组左侧子宫内缓慢注入等容积(20μL/只)生理盐水。注毕，分层关腹，消毒术区。术后放回笼中待动物苏醒。
2.2.3样本采集
注射LPS后24h，麻醉小鼠，心脏取血，取出的血液于室温下放置30min，3000rpm离心20min，小心取出上层血清，备用。取血后脱颈椎处死小鼠，仔细剖取各组小鼠的子宫及卵巢组织。分离出的血清及子宫组织用于以下各项指标的检测。
2.2.4子宫组织肉眼观察
仔细去除子宫上的脂肪组织，肉眼观察各组小鼠子宫，比较各组小鼠子宫大小、充血、肿胀等情况。
2.2.5子宫肿胀度测定
肉眼观察后，去除卵巢，将左右两侧子宫剪开，用电子天平分别称取两侧子宫重量，按下列公式计算子宫肿胀度。
子宫肿胀度(mg)＝造模侧子宫质量(mg)-对照侧子宫质量(mg)
2.2.6子宫组织炎症因子检测
子宫称重后，精密称取子宫组织100mg加入1.5mL epp管中，再于管中加入1ml生理盐水，每管加入1粒钢珠，置于Bullet Blender组织细胞破碎仪上匀浆10min。取出离心管，置于离心机内，3000rpm，离心15min，取上清，备用。
ELISA法检测组织匀浆上清液中TNF-α、IL-2的含量。ELISA实验操作按相应说明书步骤进行。
2.2.7血清炎症因子检测
所取各组小鼠血清，采用ELISA法检测血清中TNF-α、IL-2的含量。ELISA实验操作按相应说明书步骤进行。
2.3统计学方法
实验数据采用SPSS 21.0软件进行统计，计量资料以均数±标准差(x±s)表示，检测方差齐性，方差齐时，组间比较采用t检验，以P<0.05为有统计学意义。
3.结果
3.1FYX对苯酚胶浆诱导的大鼠子宫内膜炎模型的影响
3.1.1大鼠子宫组织肉眼观察结果
对剖取的各组大鼠子宫进行肉眼观察，可见：对照组大鼠子宫表面光滑，部分样本可见轻度肿胀，但左右两侧子宫肿胀程度基本一致，两侧子宫等大，未见子宫表面出现脓肿、坏死等表现。模型组大鼠左侧(造模侧)子宫明显充血、肿胀，部分样本可见局部脓肿或坏死；右侧(对照侧)子宫表面光滑，表现正常；模型组大鼠左侧子宫体积明显大于右侧。各给药组大鼠左侧(造模侧)子宫也存在充血、脓肿等表现，右侧(对照侧)子宫表面光滑，表现正常，左右两侧子宫比较，左侧(造模侧)略大于右侧(对照侧)；其中FYX高、中剂量组及妇科千金胶囊组左侧子宫充血、肿胀程度较模型组明显减轻，左右两侧子宫差距不及模型组明显。见附图1。
3.1.2大鼠子宫肿胀度测定结果
与对照组比较，模型组大鼠子宫肿胀度显著增大(P<0.01)；各给药组子宫肿胀度较模型组不同程度减小，其中FYX高、中剂量组及妇科千金胶囊组与模型组比较差异显著(P<0.05)。见表1、附图2。
表1各组大鼠子宫肿胀度
Figure BDA0002335285360000071
Tab 1 Swelling degree of uterus in eachgroup
Figure BDA0002335285360000072
Figure BDA0002335285360000073
注：##表示：与对照组比较P<0.01；*表示与模型组比较P<0.05。
3.1.3大鼠子宫组织镜下观察结果
取各组大鼠子宫组织制成石蜡切片，进行HE染色，光镜下观察显示：对照组：子宫壁分层清楚，子宫内膜基本完整，粘膜上皮细胞单层柱状排列，部分标本可见局部上皮细胞脱落，粘膜层间质细胞分布均匀，内膜腺体规整，肌纤维纹理清晰；部分标本存在少量炎细胞浸润。模型组：子宫壁各层分层不清楚，粘膜上皮细胞变性坏死，内膜脱落，宫腔扩张，宫腔内可见大量中性粒细胞坏死形成的脓细胞，子宫壁各层均有大量炎细胞浸润，出现明显的炎症表现。高剂量组：子宫分层基本清楚，粘膜上皮细胞有部分脱落，粘膜间质细胞及肌纤维细胞排列趋于正常，宫腔内可见脓细胞，子宫内膜可见少量变性坏死细胞，与模型组比较，炎细胞浸润明显减少。中剂量组：宫腔内可见脓细胞，子宫内膜细胞变性坏死，子宫内膜脱落，炎细胞浸润现象明显，但其炎症表现较模型组有所减轻。低剂量组：宫腔内可见大量脓细胞，粘膜上皮细胞变性坏死，子宫内膜脱落，大量炎细胞浸润子宫各层组织，与模型组比较炎症表现无明显改变。妇科千金胶囊组：子宫分层基本清楚，粘膜细胞及肌纤维细胞排列趋于正常，宫腔内可见脓细胞，子宫内膜可见少量变性坏死细胞，炎症表现较模型组有所减轻。见附图3。
3.1.4大鼠血清炎症因子检测结果
ELISA法检测各组大鼠血清中TNF-ɑ及IL-2含量显示，与对照组比较，模型组大鼠血清中TNF-ɑ含量明显升高(P<0.05)；与模型组比较，各给药组大鼠血清TNF-ɑ含量有所降低，其中FYX高剂量组、FYX中剂量组及妇科千金胶囊组降低更为明显，与模型组比较差异显著(P<0.05)。与对照组比较模型组大鼠血清中IL-2含量显著升高(P<0.01)；与模型组比较，各给药组大鼠血清IL-2含量降低，其中FYX高剂量组、FYX中剂量组及妇科千金胶囊组降低更为明显，与模型组比较差异显著(P<0.05)。见表2、附图4。
表2各组大鼠血清TNF-ɑ、IL-2含量
Figure BDA0002335285360000081
Figure BDA0002335285360000082
注：实验中所取的大鼠血清，部分样品出现了溶血现象，检测时去除了溶血样品，所以每组只检测了8个血清样品。
3.2FYX对LPS诱导的小鼠子宫内膜炎小鼠模型的影响
3.2.1小鼠子宫组织肉眼观察结果
肉眼观察各组小鼠子宫，可见对照组小鼠子宫表面光滑，两侧子宫表现相同、粗细相等，部分样本可见轻度肿胀，但左右两侧子宫肿胀程度一致，未见子宫表面出现红肿、脓点、坏死等表现。模型组小鼠左侧(造模侧)子宫局部扩张、充血、肿胀；右侧(对照侧)子宫表面光滑，表现正常；两侧子宫表现差异明显，左侧子宫管径明显粗于右侧。各给药组小鼠左侧子宫也存在肿胀、充血等表现，右侧(对照侧)子宫表面光滑，表现正常；左侧(造模侧)子宫略粗于右侧(对照侧)；其中FYX高、中剂量组及妇科千金胶囊组小鼠左侧子宫的肿胀充血表现较模型组有所减轻，左右两侧子宫的差异也不及模型组明显。见附图5。
3.2.2小鼠子宫肿胀度测定结果
各组小鼠子宫肿胀度计算结果显示，与对照组比较，模型组子宫肿胀度显著增大(P<0.01)；各给药组子宫肿胀度较模型组不同程度减小，其中FYX高剂量组和妇科千金胶囊组与模型组比较差异显著(P<0.05)。见表3、附图6。
表3各组小鼠子宫肿胀度
Figure BDA0002335285360000083
Figure BDA0002335285360000091
注：妇科千金胶囊组给药灌胃过程中因灌胃操作不当导致1只动物死亡，测试时该组为9只动物。3.3小鼠子宫组织炎症因子检测结果
ELISA法检测各组小鼠子宫组织匀浆上清液中TNF-ɑ及IL-2含量显示，与对照组比较，模型组小鼠子宫组织中TNF-ɑ含量明显升高(P<0.01)；与模型组比较，各给药组大鼠血清TNF-ɑ含量有所降低，其中FYX高、中剂量组及妇科千金胶囊组降低更为明显，与模型组比较差异显著(P<0.01，P<0.05)。与对照组比较模型组小鼠子宫组织中IL-2含量显著升高(P<0.01)；与模型组比较，各给药组小鼠子宫组织IL-2含量降低，其中FYX高、中剂量组及妇科千金胶囊组降低更为明显，与模型组比较差异显著(P<0.05)。见表4、附图7。
表4各组小鼠子宫组织TNF-ɑ、IL-2含量
Figure BDA0002335285360000092
Figure BDA0002335285360000093
。
3.4小鼠血清炎症因子检测结果
ELISA法检测各组小鼠血清中TNF-ɑ及IL-2含量显示，与对照组比较，模型组小鼠血清中TNF-ɑ含量明显升高(P<0.01)；与模型组比较，各给药组小鼠血清TNF-ɑ含量有所降低，其中FYX高剂量组、FYX中剂量组及妇科千金胶囊组降低更为明显，与模型组比较差异显著(P<0.05)。与对照组比较，模型组小鼠血清中IL-2含量显著升高(P<0.05)；与模型组比较，各给药组大鼠血清IL-2含量降低，其中FYX高、中剂量组及妇科千金胶囊组降低更为明显，与模型组比较差异显著(P<0.05)。见表5、附图8。
表5各组小鼠血清TNF-ɑ、IL-2含量
Figure BDA0002335285360000101
Figure BDA0002335285360000102
注：实验中所取的小鼠血清，部分样品出现了溶血现象，检测时去除了溶血样品；此外部分动物所取的血清量偏少，不能满足测量要求；故每组只检测了7个血清样品。
4.小结：
本研究成功建立了苯酚胶浆诱导的大鼠子宫内膜炎模型和LPS诱导的小鼠子宫内膜炎模型，并以这两种动物模型为对象，观察了FYX的抗子宫内膜炎作用。研究结果表明FYX能改善苯酚胶浆诱导的大鼠子宫内膜炎和LPS诱导的小鼠子宫内膜炎。
实验例2
急性毒性实验
抗子宫内膜炎新药制剂(暂时命名为FYX)是由贵州省科晖制药厂研发的新药品种，拟用于临床子宫内膜炎的治疗，本研究参照国家食品药品监督管理局2014年5月下发的《药物单次给药毒性研究技术指导原则》，对FYX的急性毒性进行了研究，旨在为FYX的进一步研究及临床安全使用提供试验依据。
1材料
1.1受试样品
FYX：棕褐色粉末，由贵州省科晖制药厂提供，批号：20181018，临用时用蒸馏水现配现用。
1.2试验动物
昆明种(KM种)小鼠，清洁级，体重18～22g，♀♂各半，购于长沙市天勤生物技术有限公司，动物合格证号：SCXK(湘)2014-0011。小鼠分笼饲养，每笼5只，由专人管理。动物室光照充足，通风和空调设备良好，实验室环境温度为18～25℃，相对湿度为50～70％，实验室按常规定期消毒。动物于该环境饲养3d后，用于实验。给药前禁食不禁水12h，给药后自由进食饮水。
1.3仪器
精密电子称，AB104-S型，METTLER TOLEDO公司。
2方法
2.1预实验
正式试验前先进行预试验。将粉末状FYX用适量蒸馏水调匀至糊状，用1ml注射器装上12号灌胃针头反复测试糊状样品通过12号灌胃针头的情况，根据情况调整样品浓度，使样品刚好能够通过灌胃针。当糊状样品浓度调整为0.65g/ml时，正好可以通过12号灌胃针头。
取♀性KM种小鼠8只，体重20～22g，禁食(不禁水)12h后，分别灌胃0.2ml、0.4ml、0.6ml和0.8ml浓度为0.65g/mL的FYX溶液(每个剂量灌胃2只小鼠)，以摸索FYX的致死剂量。结果8只小鼠均未出现死亡。又取6只♀性KM种小鼠，体重20～22g，禁食(不禁水)12h后，按0.4ml/10g体重给小鼠灌胃0.65g/ml FYX溶液。结果所有动物给药后均未出现死亡及其它异常反应情况，故而无法测定FYX对小鼠经口给药的半数致死量(LD50)及最大耐受量，则正式试验直接测定FYX对小鼠经口给药的最大给药量。
2.2正式试验
正式试验时，精确称取FYX 13g，加10ml蒸馏水调匀，转移至20ml容量瓶中，加蒸馏水至20ml刻度线，得到浓度为0.65g/ml的FYX溶液。
取雌性KM种小鼠，适应性饲养3天后进行正式试验。分组给药前将小鼠禁食(不禁水)12h，筛选出体重为18～20g的小鼠40只，随机分成2个组：对照组和FYX组，每组20只。对照组小鼠灌胃蒸馏水，FYX组小鼠灌胃0.65g/ml的FYX溶液，所有小鼠均按0.4ml/10g体重的给药容积一次性灌胃给药，给药后观察各组小鼠14天内出现的死亡及反应情况。若有小鼠死亡，立即对其进行解剖，并对其心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺、肾上腺及胃肠道进行肉眼病理观察。14天后，腹腔注射戊巴比妥钠溶液40mg/kg麻醉小鼠，然后脱颈椎处死。对各组小鼠进行大体解剖，取其脑、垂体、肺、气管、支气管、胸腺、心、主动脉、肝、脾、肾、肾上腺、输尿管、膀胱、胃肠道、子宫等各器官进行肉眼病理观察。并对重要器官(心、肝、脾、肺、肾、及脑)进行称重及拍照，根据各器官重量按下列公式计算各器官指数：
Figure BDA0002335285360000111
2.3统计学方法
实验数据采用SPSS 17.0进行统计，计量资料以(x±s)表示，检测方差齐时，组间比较采用t检验。
3结果
3.1实验周期内结果
对照组与FYX组小鼠给药后14天内均未出现死亡及其他明显异常，均未出现死亡，也未见其他异常。小鼠表现为呼吸平稳，活动自如，皮肤红润、无溃烂，被毛有光泽，无蓬松、竖毛现象，眼耳口鼻无异常分泌物，无突眼、瞳孔扩大或缩小，耳廓无充血或苍白，进食、饮水、大小便均未见异常。与对照组比较，FYX组小鼠体重增长均无明显差异(P>0.05)，见表6。
表6各组动物给药前后体重变化
Figure BDA0002335285360000121
注：两组间比较，P>0.05。
3.2小鼠处死后器官重量和指数结果
14天后处死两组动物，肉眼观察所有小鼠脑、垂体、肺、气管、支气管、胸腺、心、主动脉、肝、脾、肾、肾上腺、输尿管、膀胱、胃肠道、子宫等器官组织时，均未见两组小鼠各组织器官在体积、颜色及质地等各方面存在异常。与对照组比较，FYX组小鼠心、肝、脾、肺、脑及双肾重量及器官指数均无明显差异(P>0.05)。见表7。
表7各组动物器官重量及指数
Figure BDA0002335285360000122
注：两组间比较，P>0.05。
结果表明：FYX组小鼠按0.4ml/10g体重灌胃给予0.65g/ml FYX溶液，达到了能实现的给小鼠灌胃给药的最大剂量，并且给药后小鼠没有出现死亡及其他异常。据此，可折算出本次实验所测定的FYX对小鼠的经口给药的最大给药量为26g/kg。
4小结
综上所述，FYX给小鼠灌胃给药后，即使按照能够实现的最大给药剂量给药，小鼠仍然没有出现死亡及其他异常反应，测定的FYX对小鼠经口给药的最大给药量为：26g/kg，表明该样品无明显毒性。
实施例1
一种抗子宫内膜炎新药的制备方法和用途，包括以下步骤：
(1)将处方中黄柏413.8g、大黄82.8g、黄芩310.3g、板蓝根310.3g和黄连20.7g加水煎煮三次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成浸膏，浸膏密度为1.2g/cm-3(温度为60℃)，冷却，收率为48％；
(2)加入95％医用乙醇使含醇量为40％，搅拌，静置，滤过，回收乙醇，醇液浓缩成稠膏，收率为7.4％；
(3)以含活性化合物65mg的颗粒剂计，取步骤(2)中的稠膏65mg，分别加入糊精1935mg、蔗糖8000mg，按常规技术制成颗粒剂。
实施例2
一种抗子宫内膜炎新药的制备方法和用途，包括以下步骤：
(1)将处方中黄柏413.8g、大黄82.8g、黄芩310.3g、板蓝根310.3g和黄连20.7g加水煎煮三次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成浸膏，浸膏密度为1.2g/cm-3(温度为60℃)，冷却，收率为45％；
(2)加入95％医用乙醇使含醇量为50％，搅拌，静置，滤过，回收乙醇，醇液浓缩成稠膏，收率为7.1％；
(3)以含活性化合物65mg的胶囊剂计，取步骤(2)中的稠膏65mg分别加入玉米淀粉225mg、滑石粉6mg和磷酸氢钙4mg，按常规技术制成胶囊剂。
实施例3
一种抗子宫内膜炎新药的制备方法和用途，包括以下步骤：
(1)将处方中黄柏413.8g、大黄82.8g、黄芩310.3g、板蓝根310.3g和黄连20.7g加水煎煮三次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成浸膏，浸膏密度为1.2g/cm-3(温度为60℃)，冷却，收率为43％；
(2)加入95％医用乙醇使含醇量为70％，搅拌，静置，滤过，回收乙醇，醇液浓缩成稠膏，收率为7.1％；
(3)以含活性化合物65mg的片剂计，取步骤(2)中的稠膏65mg分别加入淀粉200mg、硬脂酸镁5mg和羧甲基淀粉钠30mg，按常规技术制成片剂。
实施例4
一种抗子宫内膜炎新药的制备方法和用途，包括以下步骤：
(1)将处方中黄柏413.8g、大黄82.8g、黄芩310.3g、板蓝根310.3g和黄连20.7g加水煎煮三次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成浸膏，浸膏密度为1.2g/cm-3(温度为60℃)，冷却，收率为49％；
(2)加入95％医用乙醇使含醇量为45％，搅拌，静置，滤过，回收乙醇，醇液浓缩成稠膏，收率为7.9％；
(3)以含活性化合物65mg的咀嚼片计，取步骤(2)中的稠膏65mg分别加入乳糖200mg、淀粉浆100mg、甘露醇60mg、山梨醇60mg、滑石粉15mg，按常规技术制成咀嚼片。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，任何未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims (8)

1.一种抗子宫内膜炎新药的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
将黄柏、大黄、黄芩、板蓝根和黄连加水煎煮，得到煎液，过滤得到滤液，滤液浓缩得到浸膏；
加入95%医用乙醇使浸膏含醇量为30~80％，搅拌，静置，滤过，并回收乙醇，醇液浓缩得到稠膏；
（3）在稠膏中加入辅料，混匀，干燥并做成制剂，得到抗子宫内膜炎新药制剂。
2.根据权利要求1所述的一种抗子宫内膜炎新药的制备方法，其特征在于：
所述步骤（1）中将黄柏、大黄、黄芩、板蓝根和黄连加水煎煮三次，每次2小时，合并每次的煎液。
3.根据权利要求1所述的一种抗子宫内膜炎新药的制备方法，其特征在于，所述黄柏为413.8g、大黄为82.8g、黄芩为310.3g、板蓝根为310.3g和黄连为20.7g。
4.根据权利要求1所述的一种抗子宫内膜炎新药的制备方法，其特征在于：
所述浸膏的密度为1~1.3g/cm-3（温度为60℃）。
5.根据权利要求3所述的一种抗子宫内膜炎新药的制备方法，其特征在于：
所述浸膏的密度为1.2g/cm-3（温度为60℃）。
6.根据权利要求1所述的一种抗子宫内膜炎新药的制备方法，其特征在于：所述抗子宫内膜炎新药为胶囊剂、颗粒剂、片剂或咀嚼片。
7.一种由权利要求1~6任一所述的制备方法得到的抗子宫内膜炎新药。
8.抗子宫内膜炎新药在作为抗子宫内膜炎药物中的应用。
CN201911353502.1A 2019-12-25 2019-12-25 一种抗子宫内膜炎新药的制备方法和用途 Active CN110917255B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911353502.1A CN110917255B (zh) 2019-12-25 2019-12-25 一种抗子宫内膜炎新药的制备方法和用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911353502.1A CN110917255B (zh) 2019-12-25 2019-12-25 一种抗子宫内膜炎新药的制备方法和用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110917255A true CN110917255A (zh) 2020-03-27
CN110917255B CN110917255B (zh) 2022-03-11

Family

ID=69860851

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201911353502.1A Active CN110917255B (zh) 2019-12-25 2019-12-25 一种抗子宫内膜炎新药的制备方法和用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110917255B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112076294A (zh) * 2020-10-15 2020-12-15 贵州省生物技术研究开发基地 一种促胃动力药物及其制备方法和用途

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1883601A (zh) * 2005-06-21 2006-12-27 杨次龄 一种治疗炎症的中药胶囊剂及制备方法
CN109568430A (zh) * 2019-01-18 2019-04-05 贵州省科晖制药厂 一种免疫增强剂的制备方法和应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1883601A (zh) * 2005-06-21 2006-12-27 杨次龄 一种治疗炎症的中药胶囊剂及制备方法
CN109568430A (zh) * 2019-01-18 2019-04-05 贵州省科晖制药厂 一种免疫增强剂的制备方法和应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
姜玲艳等: "正交试验法优选健胃清肠合剂的水提醇沉工艺", 《中国实验方剂学杂志》 *
武汉铁路局女职工委员会: "《女性健康10讲》", 31 January 2013, 中国铁道出版社 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112076294A (zh) * 2020-10-15 2020-12-15 贵州省生物技术研究开发基地 一种促胃动力药物及其制备方法和用途

Also Published As

Publication number Publication date
CN110917255B (zh) 2022-03-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2011000150A1 (zh) 一种治疗支气管炎的药物组合物及其制备方法
CN105535505A (zh) 一种制备治疗肝胆结石的药物组合物的方法
CN110917255B (zh) 一种抗子宫内膜炎新药的制备方法和用途
CN112587602B (zh) 一种止咳化痰的中药组合物、提取物及其制备方法和应用
CN103690782A (zh) 一种治疗更年期综合症的中药组合物、制备方法与质量检测方法
CN112294911A (zh) 一种治疗肺热咳嗽的中药组合物
CN103301271B (zh) 一种治疗咽炎的藏药及其制备方法
WO2020211088A1 (zh) 中药组合物及其用途
CN101019981B (zh) 一种中药制剂及其制备方法
CN111789913B (zh) 一种治疗蛋鸡输卵管炎的中药复方制剂及应用
CN100482266C (zh) 一种由肿节风和白花蛇舌草制成的药物组合物
CN107050359B (zh) 治疗慢性盆腔炎性疾病后遗症的壮药制剂及其制备方法
CN108815438B (zh) 一种祛痰的药物制剂
CN1308019C (zh) 一种治疗急慢性盆腔炎的中药组合物及制备方法
CN113018365A (zh) 一种复方龙血竭口腔溃疡药物组合物及其制备方法
Shan et al. Effects of Curculigo orchioides total glucosides in mouse perimenopause model of related organization and organs morphology
CN107308221B (zh) 飞扬肠胃炎胶囊在治疗盆腔炎性后遗症中的新用途
CN115025108B (zh) 一种用于治疗盆腔炎性疾病的药物组合物及其制备方法
CN108354998B (zh) 一种治疗盆腔炎的提取物及其制备方法
CN113876844B (zh) 一种用于治疗慢性气管炎的纯中药藏药及其制备方法和应用
CN102716424A (zh) 一种治疗乳癖的药物组合物及其制备方法和用途
CN112386671B (zh) 一种治疗间质性肺疾病的中药组合物及其应用
CN101279084B (zh) 治疗慢性盆腔炎的中药及其制备方法
WO2022253268A1 (zh) 一种治疗胆囊炎的中药组合物及其制备方法
CN104436052A (zh) 一种中药组合物的新用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB02 Change of applicant information
CB02 Change of applicant information

Address after: 551400 high tech industry planning area, Qingzhen City, Guiyang City, Guizhou Province

Applicant after: Guizhou Kehui Pharmaceutical Co.,Ltd.

Address before: 551400 high tech industry planning area, Qingzhen City, Guiyang City, Guizhou Province

Applicant before: GUIZHOU PROVINCE KEHUI PHARMACEUTICAL FACTORY

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant