CN112587602B - 一种止咳化痰的中药组合物、提取物及其制备方法和应用 - Google Patents
一种止咳化痰的中药组合物、提取物及其制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种止咳化痰的中药组合物、提取物及其制备方法和应用。所述中药组合物的组成为：前胡4‑6份、白前4‑6份、陈皮2‑4份、桔梗2‑3份、甘草1‑3份、紫菀3‑6份、制半夏2‑4份；所述提取物的制备方法为：前胡、陈皮加入80％‑90％乙醇溶液回流提取1‑2h，共提取1‑3次，得前胡、陈皮醇提物；桔梗、紫菀、制半夏加入50％‑60％乙醇溶液回流提取1‑2h，共提取1‑3次，得桔梗、紫菀、制半夏；白前、甘草加水煎煮2‑3h，共煎煮2次，得白前、甘草水提物；将各提取物混合，即得。本发明研究了所述中药组合物及提取物的止咳、祛痰作用，证实其疗效明显，因此可用于制备治疗咳嗽和/或咳痰的药物。
Description
技术领域
本发明涉及中药领域，具体地说，涉及一种止咳化痰的中药组合物、提取物及其制备方法和应用。
背景技术
咳嗽是一种呼吸道常见症状，是因气管、支气管黏膜或胸膜受炎症、异物、物理或化学性刺激引起。咳嗽常伴有咳痰、发热、胸痛、咯血、打喷嚏、流涕、咽部不适、气促等临床表现，这些临床表现因导致咳嗽的原发疾病不同而有所差异。急性支气管炎、慢性支气管炎、肺气肿等是引起咳嗽的常见原发疾病。
中医药治疗咳嗽效果确切，毒副作用小，被广泛接受。现有技术报道了大量经典古方和验方。如清代程钟龄《医学心悟》记载止嗽散主治“诸般咳嗽”，该方由桔梗、荆芥、紫菀、百部、白前、甘草、陈皮七味药组成，方中紫菀和百部，专于止咳化痰，桔梗开宣肺气，白前降气化痰，荆芥疏风解表，祛在表之余邪，陈皮理气化痰，甘草调和诸药，合桔梗利咽止咳。共奏宣利肺气，疏风止咳之功效。主治风邪犯肺导致的咳嗽咽痒，咳痰不爽，或微有恶风发热，舌苔薄白，脉浮缓。临床用于治疗上呼吸道感染，喉源性咳嗽、过敏性咳嗽、支气管炎、百日咳等属表邪未尽，肺气失宣者。专利文献CN106310064A，公开日2017.01.11，公开了一种治疗咳嗽的中药组合物，所述中药组合物的各个组分如下：百部、杏仁、前胡、陈皮、款冬花、全瓜蒌、麦冬、紫苏、荆芥、防风、黄芩、法半夏、桔梗、旋复花、石膏、贝母、款冬花、甘草、天竺黄、海浮石、竹沥、紫菀、葶苈子、白前、白果、桑白皮、蒲公英、枇杷叶、连翘、金银花、白芍。期刊文献(张静,张纾难,王雪京,等.苏黄止咳胶囊治疗感冒后咳嗽临床观察[J].辽宁中医药大学学报,2015,017(001):107-110.)公开了观察苏黄止咳胶囊治疗感冒后咳嗽(风咳证，风邪犯肺)临床的有效性，安全性及独特性，采用随机密闭信封法，以西药镇咳药可愈糖浆为对照组，纳入西医诊断符合感冒后咳嗽，中医诊断符合风咳证风邪犯肺患者，通过观察患者疗效自评，临床咳嗽疗效，中医症状疗效，咳嗽自测评分及安全性指标，对两组进行疗效评价及安全性评价，结果表明两组临床疗效评价差异无统计学意义，苏黄止咳胶囊治疗组的中医症状疗效评价和患者疗效自评及咳嗽自测评分优于可愈糖浆治疗组。
然而，目前未见如本申请的止咳化痰效果显著的中药组合物及其提取物。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种止咳化痰的中药组合物、提取物及其制备方法和应用。
第一方面，本发明提供了一种止咳化痰的中药组合物，所述中药组合物由以下重量份配比的原料药制成：前胡4-6份、白前4-6份、陈皮2-4份、桔梗2-3份、甘草1-3份、紫菀3-6份、制半夏2-4份。
优选地，所述中药组合物由以下重量份配比的原料药制成：前胡5份、白前5份、陈皮3份、桔梗2.5份、甘草2份、紫菀4.5份、制半夏3份。
第二方面，本发明提供了一种止咳化痰的中药提取物，所述中药提取物通过以下方法制备而成：
(a)称取如上任一所述的中药组合物；
(b)将前胡、陈皮粉碎，加入5-10倍体积的80％-90％乙醇溶液在80℃下回流提取1-2h，共提取1-3次，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩，得到前胡、陈皮醇提物；
(c)将桔梗、紫菀、制半夏粉碎，加入5-10倍体积的50％-60％乙醇溶液在80℃下回流提取1-2h，共提取1-3次，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩，得到桔梗、紫菀、制半夏醇提物；
(d)将白前、甘草粉碎，加入8-10倍体积水煎煮2-3h，过滤，药渣按相同方法再煎煮一次，合并两次滤液，减压浓缩，得到白前、甘草水提物；
(e)将所述前胡、陈皮醇提物，桔梗、紫菀、制半夏醇提物以及白前、甘草水提物混合均匀，即得。
第三方面，本发明提供了如上任一所述的中药组合物，或所述的中药提取物在制备治疗咳嗽和/或咳痰的药物中的应用。
优选地，所述药物用于治疗因呼吸道感染或非感染因素引起的咳嗽和/或咳痰。
更优选地，所述药物用于治疗急性支气管炎、慢性支气管炎或肺气肿引起的咳嗽和/或咳痰。
第四方面，本发明提供了如上所述的中药提取物的制备方法，包括以下步骤：
(a)称取各原料药；
(b)将前胡、陈皮粉碎，加入5-10倍体积的80％-90％乙醇溶液在80℃下回流提取1-2h，共提取1-3次，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩，得到前胡、陈皮醇提物；
(c)将桔梗、紫菀、制半夏粉碎，加入5-10倍体积的50％-60％乙醇溶液在80℃下回流提取1-2h，共提取1-3次，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩，得到桔梗、紫菀、制半夏醇提物；
(d)将白前、甘草粉碎，加入8-10倍体积水煎煮2-3h，过滤，药渣按相同方法再煎煮一次，合并两次滤液，减压浓缩，得到白前、甘草水提物；
(e)将所述前胡、陈皮醇提物，桔梗、紫菀、制半夏醇提物以及白前、甘草水提物混合均匀，即得。
第五方面，本发明提供了一种止咳化痰的中药复方制剂，所述中药复方制剂由如上任一所述的中药组合物制成，或以所述的中药提取物为活性成分制成。
优选地，所述中药复方制剂的剂型为颗粒剂、胶囊剂、片剂、合剂、糖浆剂或口服液。
本发明优点在于：
1、本发明中药组合物为临床验方。方中，前胡味辛、苦，性稍寒，独归肺经，具辛散苦降之功，能宣肺散风清热、降气化痰宽胸，可用治风热感冒、肺热咳嗽、痰多黄稠、胸闷不舒、气急、恶呕等。《本经逢源》谓：“其功长于下气，故能治痰热咳嗽，痞膈诸痰，气下则火降，痰亦降矣，为痰气之药”。白前，味辛、苦、微温，入肺经，有降气、化痰之功好，本品长于泻肺气，盖气消痰自消、咳嗽自止，故为肺家咳嗽之要药。二者相伍，白前走里，清肺降气，祛痰止咳；前胡走表，宣散风热，降气消痰；白前重在降气，前胡偏于宣肺，二药一宣一降，肺之宣肃功能复常，使一身之气得以升降出入如常，有助于机体正气的恢复。陈皮，气香，味辛、苦，性温，入脾、肺经，具有“理气健脾，燥湿化痰”的功效，主要用于治疗胸脘胀满，食少吐泻，咳嗽多痰。甘草性味甘平，归肺、脾、胃经，具有补中益气、保肝解毒、祛痰止咳、调和药性、缓急止痛等功效，明·张介宾撰《本草正》对其评价曰：“甘草，味至甘，得中和之味，有调补之攻，故毒药得之解其毒，刚药得之和其性，表药得之助其外，峻药得之缓其速。桔梗最早见于《神农本草经》：“味辛，微温。”，《本草汇言》云：“咳嗽乃痰火之邪，郁在肺中，宜桔梗以开之。桔梗主利肺气，通咽膈，宽中理气，开郁行痰之要药也。凡咳嗽痰喘，非此不除，以其有顺气豁痰之功。”。汉《神农本草经》记载：紫菀苦降甘润不燥，入肺经而善于疏利肺经气血，有润肺下气，化痰止咳之良效，故主咳逆上气，胸中寒结气证。为治疗咳喘主要药，不论外感、内伤，还是属寒、属热，皆可应用。尤以风寒外束，肺气壅实的咳痰喘多用之最宜。本品有润肺之效，故可治之。半夏性辛，温，归脾、胃、入肺经，能燥湿化痰，善治寒痰、湿痰犯肺所致咳喘诸证。与陈皮相伍，佐以甘草，则可燥湿化痰，理气止咳。
本方中前胡为君药，宣肺化痰，白前、紫苑为臣药，助力宣肺、化痰止咳，陈皮、桔梗为佐药，开肺气化痰，平定化痰湿，甘草、半夏为使药，甘草调和诸药，半夏与陈皮相伍，佐以甘草，则可燥湿化痰，理气止咳。
我们通过小鼠氨水引咳法、小鼠气管酚红排泌法证实其有显著的止咳化痰的作用，并通过急性支气管炎动物实验证实可显著降低动物血清IL-8和TNF-α含量，减轻炎症反应。
2、本发明中药组合物配伍合理，止咳化痰功效显著强于其他中药组方。
3、本发明进一步研究了中药组合物的提取物，显著提升了疗效，为其复方开发奠定了基础。
附图说明
图1.紫外光灯(365nm)下提取物中橙皮苷的薄层鉴别。⑤，⑥：橙皮苷对照品；⑦，⑨：提取物；⑧，⑩：提取物空白(缺陈皮)。
图2.紫外光灯(365nm)下提取物中白花前胡甲素的薄层鉴别。①，②，③：提取物；④，⑤：对照品白花前胡甲素；⑥，⑦，⑧：提取物阴性(缺前胡)。
具体实施方式
下面对本发明提供的具体实施方式作详细说明。
实施例1本发明的中药组合物(一)
按重量份分别称取前胡4份、白前6份、陈皮2份、桔梗3份、甘草1份、紫菀6份、制半夏2份，粉碎。
实施例2本发明的中药组合物(二)
按重量份分别称取前胡6份、白前4份、陈皮4份、桔梗2份、甘草3份、紫菀3份、制半夏4份，粉碎。
实施例3本发明的中药组合物(三)
按重量份分别称取前胡4份、白前4份、陈皮4份、桔梗3份、甘草1份、紫菀3份、制半夏4份，粉碎。
实施例4本发明的中药组合物(四)
按重量份分别称取前胡6份、白前6份、陈皮4份、桔梗2份、甘草1份、紫菀3份、制半夏2份，粉碎。
实施例5本发明的中药组合物(五)
按重量份分别称取前胡4份、白前4份、陈皮2份、桔梗2份、甘草1份、紫菀3份、制半夏2份，粉碎。
实施例6本发明的中药组合物(六)
按重量份分别称取前胡6份、白前5份、陈皮2份、桔梗3份、甘草2份、紫菀6份、制半夏2份，粉碎。
实施例7本发明的中药组合物(七)
按重量份分别称取前胡6份、白前5份、陈皮2份、桔梗2份、甘草1份、紫菀3份、制半夏2份，粉碎。
实施例8本发明的中药组合物(八)
按重量份分别称取前胡6份、白前5份、陈皮2份、桔梗2份、甘草1份、紫菀3份、制半夏2份，粉碎。
实施例9本发明的中药组合物(九)
按重量份分别称取前胡4份、白前6份、陈皮2份、桔梗3份、甘草2份、紫菀6份、制半夏2份，粉碎。
实施例10本发明的中药组合物(十)
按重量份分别称取前胡5份、白前5份、陈皮3份、桔梗2.5份、甘草2份、紫菀4.5份、制半夏3份，粉碎。
实施例11本发明的中药提取物(一)
制备方法如下：
(a)称取实施例1-10任一所述的中药组合物；
(b)将前胡、陈皮混合，加入8倍体积的85％乙醇溶液在80℃下回流提取2h，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至浸膏，得前胡、陈皮醇提物；
(c)将桔梗、紫菀、制半夏混合，加入8倍体积的50％乙醇溶液在80℃下回流提取2h，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至浸膏，得桔梗、紫菀、制半夏醇提物；
(d)将白前、甘草混合，加入8倍体积水煎煮2h，过滤，滤渣按相同方法再提取一次，合并两次滤液，50℃减压浓缩至清膏，得白前、甘草水提物；
(e)将所述前胡、陈皮醇提物，桔梗、紫菀、制半夏醇提物以及白前、甘草水提物混合均匀，即得。
实施例12本发明的中药提取物(二)
制备方法如下：
(a)称取实施例1-10任一所述的中药组合物；
(b)将前胡、陈皮混合，加入10倍体积的80％乙醇溶液在80℃下回流提取1.5h，共提取2次，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至浸膏，得前胡、陈皮醇提物；
(c)将桔梗、紫菀、制半夏混合，加入5倍体积的60％乙醇溶液在80℃下回流提取1h，共提取3次，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至浸膏，得桔梗、紫菀、制半夏醇提物；
(d)将白前、甘草混合，加入10倍体积水煎煮2h，过滤，滤渣按相同方法再提取一次，合并两次滤液，50℃减压浓缩至清膏，得白前、甘草水提物；
(e)将所述前胡、陈皮醇提物，桔梗、紫菀、制半夏醇提物以及白前、甘草水提物混合均匀，即得。
实施例13本发明的中药提取物(三)
制备方法如下：
(a)称取实施例1-10任一所述的中药组合物；
(b)将前胡、陈皮混合，加入5倍体积的90％乙醇溶液在80℃下回流提取1.5h，共提取3次，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至浸膏，得前胡、陈皮醇提物；
(c)将桔梗、紫菀、制半夏混合，加入10倍体积的50％乙醇溶液在80℃下回流提取1.5h，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至浸膏，得桔梗、甘草、紫菀醇提物；
(d)将白前、甘草混合，加入8倍体积水煎煮2h，过滤，滤渣按相同方法再提取一次，合并两次滤液，50℃减压浓缩至清膏，得白前、甘草水提物；
(e)将所述前胡、陈皮醇提物，桔梗、紫菀、制半夏醇提物以及白前、甘草水提物混合均匀，即得。
实施例14本发明的中药提取物(四)
制备方法如下：
(a)称取实施例1-10任一所述的中药组合物；
(b)将前胡、陈皮混合，加入8倍体积的80％乙醇溶液在80℃下回流提取2h，共提取3次，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至浸膏，得前胡、陈皮醇提物；
(c)将桔梗、紫菀、制半夏混合，加入10倍体积的50％乙醇溶液在80℃下回流提取1h，共提取2次，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至浸膏，得桔梗、紫菀、制半夏醇提物；
(d)将白前、甘草混合，加入8倍体积水煎煮3h，过滤，滤渣按相同方法再提取一次，合并两次滤液，50℃减压浓缩至清膏，得白前、甘草水提物；
(e)将所述前胡、陈皮醇提物，桔梗、紫菀、制半夏醇提物以及白前、甘草水提物混合均匀，即得。
实施例15本发明的中药提取物(五)
制备方法如下：
(a)称取实施例1-10任一所述的中药组合物；
(b)将前胡、陈皮混合，加入8倍体积的85％乙醇溶液在80℃下回流提取1h，共提取2次，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至浸膏，得前胡、陈皮醇提物；
(c)将桔梗、紫菀、制半夏混合，加入8倍体积的55％乙醇溶液在80℃下回流提取2h，共提取2次，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至浸膏，得桔梗、紫菀、制半夏醇提物；
(d)将白前、甘草混合，加入8倍体积水煎煮2.5h，过滤，滤渣按相同方法再提取一次，合并两次滤液，50℃减压浓缩至清膏，得白前、甘草水提物；
(e)将所述前胡、陈皮醇提物，桔梗、紫菀、制半夏醇提物以及白前、甘草水提物混合均匀，即得。
实施例16本发明的中药提取物(六)
制备方法如下：
(a)称取实施例1-10任一所述的中药组合物；
(b)将前胡、陈皮混合，加入8倍体积的80％乙醇溶液在80℃下回流提取2h，共提取3次，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至浸膏，得前胡、陈皮醇提物；
(c)将桔梗、紫菀、制半夏混合，加入10倍体积的50％乙醇溶液在80℃下回流提取1h，共提取2次，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至浸膏，得桔梗、紫菀、制半夏醇提物；
(d)将白前、甘草混合，加入8倍体积水煎煮2.5h，过滤，滤渣按相同方法再提取一次，合并两次滤液，50℃减压浓缩至清膏，得白前、甘草水提物；
(e)将所述前胡、陈皮醇提物，桔梗、紫菀、制半夏醇提物以及白前、甘草水提物混合均匀，即得。
实施例17本发明中药复方制剂糖浆剂
取实施例11-16任一所述的中药提取物，加入尼泊金乙酯、苯甲酸和单糖浆，制成糖浆剂。
实施例18本发明中药复方制剂合剂/口服液
取实施例11-16任一所述的中药提取物，加适当水、乙醇、饴糖，制成合剂或口服液。
实施例19本发明中药复方制剂片剂/胶囊剂
取实施例11-16任一所述的中药提取物，加入硬脂酸镁、淀粉、糊精，真空干燥，粉碎制粒，压制成片剂或填充装胶囊。
实施例20本发明中药复方制剂颗粒剂
取实施例11-16任一所述的中药提取物，加适当淀粉、糊精、微晶纤维素，制粒，干燥，整粒，得20g颗粒，分装10g/袋。
实施例21本发明中药组合物及提取物的止咳作用研究
本实验采用氨水引咳法研究本发明中药组合物的3种提取物及另一种中药提取物的止咳作用。
1动物
健康昆明小鼠，雌雄各半，体重20±2g，实验期间小鼠自由进食、饮水，室温控制在25±5℃。
2药物
中药提取物E1，按照实施例15的方法制备，其中原料药组成如实施例10所述。
中药提取物E2，制备方法如下：(a)称取实施例10所述的中药组合物；(b)将前胡、陈皮、桔梗混合，加入8倍体积的85％乙醇溶液在80℃下回流提取1h，共提取2次，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至浸膏，得前胡、陈皮、桔梗醇提物；(c)将紫菀、制半夏混合，加入8倍体积的55％乙醇溶液在80℃下回流提取2h，共提取2次，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至浸膏，得紫菀、制半夏醇提物；(d)将白前、甘草混合，加入8倍体积水煎煮2.5h，过滤，滤渣按相同方法再提取一次，合并两次滤液，50℃减压浓缩至清膏，得白前、甘草水提物；(e)将所述前胡、陈皮、桔梗醇提物，紫菀、制半夏醇提物以及白前、甘草水提物混合均匀，即得。
中药提取物E3，制备方法如下：(a)称取实施例10所述的中药组合物；(b)加入8倍体积的85％乙醇溶液在80℃下回流提取2h，共提取2次，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至浸膏，即得。
中药提取物E4，制备方法如下：(a)按重量份分别称取百部5份、白前5份、陈皮3份、桔梗2.5份、甘草2份、紫菀4.5份、制半夏3份，粉碎；(b)将百部、陈皮混合，加入8倍体积的85％乙醇溶液在80℃下回流提取1h，共提取2次，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至浸膏，得百部、陈皮醇提物；(c)将桔梗、紫菀、制半夏混合，加入8倍体积的55％乙醇溶液在80℃下回流提取2h，共提取2次，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至浸膏，得桔梗、紫菀、制半夏醇提物；(d)将白前、甘草混合，加入8倍体积水煎煮2.5h，过滤，滤渣按相同方法再提取一次，合并两次滤液，50℃减压浓缩至清膏，得白前、甘草水提物；(e)将所述百部、陈皮醇提物，桔梗、紫菀、制半夏醇提物以及白前、甘草水提物混合均匀，即得。
阳性对照药：磷酸可待因。
3动物分组及给药
实验前1d将小鼠置于容积为1L的钟罩内，以超声喷雾器喷入28％氨水，挑选潜伏期小于2min的敏感小鼠，随机分为6组，分别为空白对照组(给予等体积生理盐水)、磷酸可待因组(30mg/kg)、中药提取物E1组(3g生药/kg)、中药提取物E2组(3g生药/kg)、中药提取物E3组(3g生药/kg)和中药提取物E4组(3g生药/kg)，每组8只。采用灌胃方式给药，给药体积为20ml/kg，每天1次，连续7天。末次给药后1.5h将小鼠逐个放入氨蒸气饱和(恒压喷放浓氨雾20s，等待30s后即可)的钟罩内。观察并记录各组小鼠的咳嗽潜伏期(由放入玻璃罩内开始至产生咳嗽的时间为潜伏期，以s计)和从开始咳嗽计时3min内咳嗽(典型咳嗽是小鼠腹肌收缩，同时张大嘴，有咳声)的次数。
4统计学方法
采用SPSS 23.0软件分析。计量资料用t检验及方差分析，以均数±标准差
表示，当P<0.05时表明差异有统计学意义。
5结果
咳嗽潜伏期统计结果(表1)表明，与空白对照组比较，各给药组小鼠的咳嗽潜伏期均显著延长(P＜0.01或P＜0.05)；与阳性药磷酸可待因组相比，中药提取物E1组与其差异不具有统计学意义(P>0.05)，而中药提取物E2组、中药提取物E3组和中药提取物E4组与其差异均具有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05)；与中药提取物E1组比较，中药提取物E2组、中药提取物E3组和中药提取物E4组的咳嗽潜伏期均短于中药提取物E1组，差异具有统计学意义(P＜0.01)；与中药提取物E4组比较，中药提取物E2组和中药提取物E3组的咳嗽潜伏期均长于中药提取物E4组，差异具有统计学意义(P＜0.01)。
咳嗽次数统计结果(表1)表明，与空白对照组比较，各给药组小鼠的3min内咳嗽次数显著减少(P＜0.01或P＜0.05)；与阳性药磷酸可待因组相比，中药提取物E1组、中药提取物E2组和中药提取物E3组与其差异不具有统计学意义(P>0.05)，而中药提取物E4组与其差异具有统计学意义(P＜0.01)；与中药提取物E1组比较，中药提取物E2组、中药提取物E3组和中药提取物E4组的咳嗽次数均多于中药提取物E1组，差异具有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05)；与中药提取物E4组比较，中药提取物E2组和中药提取物E3组的咳嗽次数均少于中药提取物E4组，差异具有统计学意义(P＜0.05)。
结果提示，本发明中药组合物其配伍更为合理，起到更加显著的镇咳作用，本发明中药提取物采用特殊工艺制备，提取物的镇咳效果最好。
表1不同提取物对氨水引咳小鼠的镇咳作用
注：与空白对照组比较，*P<0.05，**P<0.01；与磷酸可待因组比较，#P<0.05，##P<0.01；与中药提取物E1组比较，△P<0.05，△△P<0.01；与中药提取物E4组比较，▲P<0.05，▲▲P<0.01。
实施例22本发明中药组合物及提取物的祛痰作用研究
1动物
健康昆明小鼠，雌雄各半，体重20±2g，实验期间小鼠自由进食、饮水，室温控制在25±5℃。
2药物
中药提取物E1，按照实施例15的方法制备，其中原料药组成如实施例10所述。
中药提取物E2，制备方法如下：(a)称取实施例10所述的中药组合物；(b)将前胡、陈皮、桔梗混合，加入8倍体积的85％乙醇溶液在80℃下回流提取1h，共提取2次，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至浸膏，得前胡、陈皮、桔梗醇提物；(c)将紫菀、制半夏混合，加入8倍体积的55％乙醇溶液在80℃下回流提取2h，共提取2次，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至浸膏，得紫菀、制半夏醇提物；(d)将白前、甘草混合，加入8倍体积水煎煮2.5h，过滤，滤渣按相同方法再提取一次，合并两次滤液，50℃减压浓缩至清膏，得白前、甘草水提物；(e)将所述前胡、陈皮、桔梗醇提物，紫菀、制半夏醇提物以及白前、甘草水提物混合均匀，即得。
中药提取物E3，制备方法如下：(a)称取实施例10所述的中药组合物；(b)加入8倍体积的85％乙醇溶液在80℃下回流提取2h，共提取2次，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至浸膏，即得。
中药提取物E4，制备方法如下：(a)按重量份分别称取百部5份、白前5份、陈皮3份、桔梗2.5份、甘草2份、紫菀4.5份、制半夏3份，粉碎10；(b)将百部、陈皮混合，加入8倍体积的85％乙醇溶液在80℃下回流提取1h，共提取2次，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至浸膏，得百部、陈皮醇提物；(c)将桔梗、紫菀、制半夏混合，加入8倍体积的55％乙醇溶液在80℃下回流提取2h，共提取2次，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至浸膏，得桔梗、紫菀、制半夏醇提物；(d)将白前、甘草混合，加入8倍体积水煎煮2.5h，过滤，滤渣按相同方法再提取一次，合并两次滤液，50℃减压浓缩至清膏，得白前、甘草水提物；(e)将所述百部、陈皮醇提物，桔梗、紫菀、制半夏醇提物以及白前、甘草水提物混合均匀，即得。
阳性对照药：氯化铵片。
3动物分组及给药
将小鼠随机分为6组，分别为空白对照组(给予等体积生理盐水)、氯化铵组(1.0g/kg)、中药提取物E1组(3g生药/kg)、中药提取物E2组(3g生药/kg)、中药提取物E3组(3g生药/kg)和中药提取物E4组(3g生药/kg)，每组8只。采用灌胃方式给药，给药体积为20ml/kg，每天1次，连续7天。末次给药后1h，给予0.25％酚红溶液(0.25mL/10g)腹腔注射，30min后脱颈椎处死，手术分离小鼠气管。用1mL注射器吸取0.5mL 5％NaHCO3，推注入气管，反复连续推抽3次灌洗呼吸道，洗出液收集于试管中，重复3次，收集4次的灌洗液于546nm波长处测定吸光度(A)值。与酚红标准曲线比较，求出其酚红量。
4统计学方法
采用SPSS 23.0软件分析。计量资料用t检验及方差分析，以均数±标准差
表示，当P<0.05时表明差异有统计学意义。
5结果
小鼠气管酚红排泌量统计结果(表2)表明，与空白对照组比较，各给药组小鼠的酚红排泌量均显著增加(P＜0.01或P＜0.05)；与阳性药氯化铵组相比，中药提取物E1组酚红排泌量显著多于阳性药氯化铵组(P<0.05)，中药提取物E2组、中药提取物E3组的酚红排泌量与阳性药氯化铵组相比差异无统计学意义(P>0.05)，中药提取物E4组的酚红排泌量显著少于氯化铵组(P＜0.05)；与中药提取物E1组比较，中药提取物E2组、中药提取物E3组和中药提取物E4组的酚红排泌量均显著少于中药提取物E1组(P＜0.01或P＜0.05)；与中药提取物E4组比较，中药提取物E2组、中药提取物E3组的酚红排泌量均显著多于中药提取物E4组(P＜0.05)。
表2不同提取物对小鼠气管酚红排泌量的影响
注：与空白对照组比较，*P<0.05，**P<0.01；与氯化铵组比较，#P<0.05；与中药提取物E1组比较，△P<0.05，△△P<0.01；与中药提取物E4组比较，▲P<0.05。
实施例23本发明中药组合物及提取物对大鼠急性支气管炎的作用研究1动物
SD大鼠60只，体重200±20g，雌雄各半。
2药物
中药提取物E1，按照实施例15的方法制备，其中原料药组成如实施例10所述。
中药提取物E2，制备方法如下：(a)称取实施例10所述的中药组合物；(b)将前胡、陈皮、桔梗混合，加入8倍体积的85％乙醇溶液在80℃下回流提取1h，共提取2次，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至浸膏，得前胡、陈皮、桔梗醇提物；(c)将紫菀、制半夏混合，加入8倍体积的55％乙醇溶液在80℃下回流提取2h，共提取2次，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至浸膏，得紫菀、制半夏醇提物；(d)将白前、甘草混合，加入8倍体积水煎煮2.5h，过滤，滤渣按相同方法再提取一次，合并两次滤液，50℃减压浓缩至清膏，得白前、甘草水提物；(e)将所述前胡、陈皮、桔梗醇提物，紫菀、制半夏醇提物以及白前、甘草水提物混合均匀，即得。
中药提取物E3，制备方法如下：(a)称取实施例10所述的中药组合物；(b)加入8倍体积的85％乙醇溶液在80℃下回流提取2h，共提取2次，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至浸膏，即得。
中药提取物E4，制备方法如下：(a)按重量份分别称取百部5份、白前5份、陈皮3份、桔梗2.5份、甘草2份、紫菀4.5份、制半夏3份，粉碎10；(b)将百部、陈皮混合，加入8倍体积的85％乙醇溶液在80℃下回流提取1h，共提取2次，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至浸膏，得百部、陈皮醇提物；(c)将桔梗、紫菀、制半夏混合，加入8倍体积的55％乙醇溶液在80℃下回流提取2h，共提取2次，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至浸膏，得桔梗、紫菀、制半夏醇提物；(d)将白前、甘草混合，加入8倍体积水煎煮2.5h，过滤，滤渣按相同方法再提取一次，合并两次滤液，50℃减压浓缩至清膏，得白前、甘草水提物；(e)将所述百部、陈皮醇提物，桔梗、紫菀、制半夏醇提物以及白前、甘草水提物混合均匀，即得。
阳性对照药：急支糖浆，太极集团重庆涪陵制药厂有限公司生产。
3动物分组及给药
将48只大鼠置于烟室中，用20支香烟加锯末面10g混合烟熏30min，上、下午各1次，持续15d。造模后随机分为6组，分别为：模型对照组(给予等体积生理盐水)、急支糖浆组(15ml/kg)、中药提取物E1组(5g生药/kg)、中药提取物E2组(5g生药)、对照中药提取物二(5g生药)和中药提取物E4组(5g生药)，每组8只。采用灌胃方式给药，给药体积为15ml/kg，每天1次，连续5天。另设空白对照组大鼠，给予等体积生理盐水。末次给药后1h，股动脉取血，分离血清，采用Elisa试剂盒测定血清中IL-8和TNF-α含量。
4统计学方法
采用SPSS 23.0软件分析。计量资料用t检验及方差分析，以均数±标准差
表示，当P<0.05时表明差异有统计学意义。
5结果
大鼠血清IL-8和TNF-α含量检测结果(表3)表明，模型对照组大鼠相比于空白对照组大鼠的血清IL-8和TNF-α含量均显著升高(P＜0.01)，表明造模成功。与模型对照组相比，各给药组大鼠的血清IL-8水平均显著降低(P＜0.01)；中药提取物E1组、中药提取物E2组和中药提取物E3组大鼠的血清IL-8水平均显著低于急支糖浆组(P＜0.01或P＜0.05)，中药提取物E4组的IL-8含量显著高于急支糖浆组(P＜0.01)；中药提取物E1组大鼠的血清IL-8水平显著低于中药提取物E2组、中药提取物E3组和中药提取物E4组(P＜0.01或P＜0.05)；中药提取物E2组和中药提取物E3组大鼠的血清IL-8水平显著低于中药提取物E4组(P＜0.01)。与模型对照组相比，各给药组大鼠的TNF-α均显著降低(P＜0.01)；中药提取物E1组和中药提取物E2组大鼠的血清TNF-α水平均显著低于急支糖浆组(P＜0.01或P＜0.05)，中药提取物E3组和中药提取物E4组的TNF-α含量与急支糖浆组比较无统计学差异(P>0.05)；中药提取物E1组大鼠的血清TNF-α水平显著低于中药提取物E2组、中药提取物E3组和中药提取物E4组(P＜0.01或P＜0.05)；中药提取物E2组和中药提取物E3组大鼠的血清TNF-α显著低于中药提取物E4组(P＜0.01)。
表3不同提取物对大鼠血清IL-8和TNF-α含量的影响
注：与空白对照组比较，**P<0.01；与模型对照组比较，##P<0.01；与急支糖浆组比较，△P<0.05，△△P<0.01；与中药提取物E1组比较，▲P<0.05，▲▲P<0.01；与中药提取物E4组比较，☆☆P<0.01。
实施例24本发明中药组合物及提取物活性成分鉴别
本实验初步鉴定了本发明中药组合物及提取物的活性成分橙皮苷和白花前胡甲素。
1陈皮的薄层鉴别
(1)方法
取以实施例10的配方并按照实施例15的制备方法制得的中药提取物20ml，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30ml，合并提取液，蒸干，残渣加无水乙醇1ml溶解，作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品，用无水乙醇制成每1ml含0.4mg的溶液，作为对照品溶液。再取缺陈皮的阴性样品20ml，照供试品溶液的制备方法，自“用乙酸乙酯振摇提取2次”起，制备阴性样品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各2-5μl，分别点于同一用0.5％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(100:17:13)为展开剂，展至约5cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(20:10:1:1)的上层溶液为展开剂，展至约10cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外灯(365nm)下检视。
(2)结果
供试品色谱中，在与对照品相应的位置上，显示相同颜色的荧光斑点，而阴性对照未见干扰(图1)。
2前胡的薄层鉴别
(1)方法
取以实施例10的配方并按照实施例15的制备方法制得的中药提取物20ml，加石油醚(60-90℃)轻微振摇提取2次，每次30ml，分取石油醚液，挥干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液。另取白花前胡甲素对照品，用甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。再取缺前胡的阴性样品20ml，照供试品溶液的制备方法，自“加石油醚(60-90℃)轻微振摇提取2次”起，制备阴性样品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2-5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60-90℃)-乙酸乙酯(3:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(365nm)下检视。
(2)结果
供试品色谱中，在与对照品相应的位置上，显示相同颜色的荧光斑点，而阴性对照未见干扰(图2)。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。
Claims (8)
1.一种止咳化痰的中药提取物，其特征在于，所述中药提取物通过以下方法制备而成：
（a）按重量份配比称取原料药：前胡4-6份、白前4-6份、陈皮2-4份、桔梗2-3份、甘草1-3份、紫菀3-6份、制半夏2-4份；
（b）将前胡、陈皮粉碎，加入5-10倍体积的80%-90%乙醇溶液在80℃下回流提取1-2h，共提取1-3次，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩，得到前胡、陈皮醇提物；
（c）将桔梗、紫菀、制半夏粉碎，加入5-10倍体积的50%-60%乙醇溶液在80℃下回流提取1-2h，共提取1-3次，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩，得到桔梗、紫菀、制半夏醇提物；
（d）将白前、甘草粉碎，加入8-10倍体积水煎煮2-3h，过滤，药渣按相同方法再煎煮一次，合并两次滤液，减压浓缩，得到白前、甘草水提物；
（e）将所述前胡、陈皮醇提物，桔梗、紫菀、制半夏醇提物以及白前、甘草水提物混合均匀，即得。
2.根据权利要求1所述的中药提取物，其特征在于，步骤a中，按重量份配比称取原料药：前胡5份、白前5份、陈皮3份、桔梗2.5份、甘草2份、紫菀4.5份、制半夏3份。
3.权利要求1或2所述的中药提取物在制备治疗咳嗽和/或咳痰的药物中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述药物用于治疗因呼吸道感染或非感染因素引起的咳嗽和/或咳痰。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述药物用于治疗急性支气管炎、慢性支气管炎或肺气肿引起的咳嗽和/或咳痰。
6.权利要求1或2所述的中药提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（a）称取各原料药；
（b）将前胡、陈皮粉碎，加入5-10倍体积的80%-90%乙醇溶液在80℃下回流提取1-2h，共提取1-3次，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩，得到前胡、陈皮醇提物；
（c）将桔梗、紫菀、制半夏粉碎，加入5-10倍体积的50%-60%乙醇溶液在80℃下回流提取1-2h，共提取1-3次，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩，得到桔梗、紫菀、制半夏醇提物；
（d）将白前、甘草粉碎，加入8-10倍体积水煎煮2-3h，过滤，药渣按相同方法再煎煮一次，合并两次滤液，减压浓缩，得到白前、甘草水提物；
（e）将所述前胡、陈皮醇提物，桔梗、紫菀、制半夏醇提物以及白前、甘草水提物混合均匀，即得。
7.一种止咳化痰的中药复方制剂，其特征在于，所述中药复方制剂以 权利要求1或2所述的中药提取物为活性成分制成。
8.根据权利要求7所述的中药复方制剂，其特征在于，所述中药复方制剂的剂型为颗粒剂、胶囊剂、片剂、合剂或 糖浆剂。
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