CN116694675B - 大豆GmGST基因在提高植物抗铝毒胁迫中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供大豆GmGST基因在提高植物抗铝毒胁迫中的应用，属于植物育种技术领域。本发明的目的是为了增强植物抵御铝毒胁迫，提供大豆基因调控植物适应酸铝胁迫以及促进植物生长的应用。本发明的GmGST基因对大豆抵抗铝毒胁迫具有积极作用，GmGST基因的序列如SEQ ID NO.1所示，GmGST编码基因能够降低铝毒害下铝含量在根尖的积累量，减轻铝毒害对大豆根系伸长抑制，从而提高大豆的耐铝性，提高逆境下大豆的生产能力，为创制耐铝大豆品种奠定基础。
Description
技术领域
本发明植物育种技术领域，具体涉及大豆GmGST基因在提高植物抗铝毒胁迫中的应用。
背景技术
酸性土壤是指pH值低于5.5的土壤，全球30％的耕地是酸性土壤，约占世界潜在可耕地面积的50％，并且随着过度耕作和过度使用氮肥，土壤正在进一步酸化。铝是酸性土壤限制植物生长和农作物产量的主要因素，铝毒主要作用于根尖过渡区，与细胞壁、细胞膜、细胞内靶点结合产生毒害。由于植物不能像动物那样移动，为了生存，许多植物进化出多种应对铝胁迫的解毒机制，充分研究挖掘植物的潜力，并加以利用和改良是解决酸性土壤铝毒害的途径和策略。因此，本领域迫切需要开展调控抗铝毒相关基因的功能研究，以便解决酸性土壤铝毒害。
发明内容
本发明的目的是为了增强植物铝毒胁迫，提供大豆基因调控植物适应酸铝胁迫以及促进植物生长的应用。
本发明提供一种GmGST蛋白质在提高植物抗铝毒胁迫中的应用，所述GmGST蛋白质序列如SEQ ID NO.2所示。
GmGST基因在提高植物抗铝毒胁迫中的应用，所述GmGST基因序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明提供一种含有GmGST基因的超表达植株在提高植物抗铝毒胁迫中的应用。
本发明提供一种含有GmGST基因的重组载体在提高植物抗铝毒胁迫中的应用。
本发明提供一种含有GmGST基因的重组微生物细胞在提高植物抗铝毒胁迫中的应用。
进一步地限定，植物为双子叶植物或单子叶植物。
进一步地限定，所述植物为拟南芥或大豆。
本发明提供一种培育抗铝毒胁迫的植株的方法，所述的方法如下：
(1)扩增SEQ ID NO.1所示的基因序列，将基因序列插入到表达载体；
(2)将步骤(1)获得的载体导入到农杆菌中，利用农杆菌转入到大豆中得到转基因大豆；
(3)鉴定步骤(2)获得的转基因大豆得到阳性转基因大豆。
进一步地限定，步骤(1)中所述的表达载体是pB7WG2。
本发明提供一种提高植物抗铝毒能力的方法，将大豆的GmGST基因在大豆中超表达获得大豆转基因植株，用AlCl3水溶液处理大豆转基因的幼苗。
有益效果：(1)本发明所供的大豆耐铝相关基因GmGST在铝胁迫条件下东农50大豆材料中表达显著上调。利用农杆菌介导的大豆子叶节转化系统将携带有本发明GmGST的植物表达载体(pB7WG2-GmGST:GmGST)转化大豆并获得三个独立的转化株系(ox1,3和4)。与对照相比过表达GmGST的转基因大豆的主根相对伸长率较对照相比显著增加；在转基因大豆的根尖中积累更少的铝离子。说明GmGST在大豆耐铝中具有重要的作用。
(2)本发明所供的大豆耐铝相关基因GmGST，利用任何一种引导外源基因在植物中表达的载体，将本发明GmGST基因导入植物细胞，显著提高的转基因植株的耐铝能力。
(3)使用大豆耐铝相关基因GmGST重组植物表达载体时，在其转录起始核苷酸前加上任何一种增强型启动子或者组成型启动子，如花椰菜花叶病毒病35S启动子、玉米的泛素启动子，它们可单独使用或者与其它植物启动子结合使用；另外为了便于对转基因植物或者细胞的筛选，可对所有植物表达载体进行加工，可以加入在植物中表达可以产生颜色变化的酶基因或者发光化合物基因(荧光素酶基因、GUS基因等)、具有抗性的抗生素标记物(壮观霉素、卡那霉素等)或者是抗化学试剂标记基因(抗草铵膦基因、抗除草剂基因等)。从转基因植物安全性考虑，可以不加任何选择性标记基因，直接在铝胁迫中筛选转化植株。
(4)本发明基因GmGST可通过如下方式导入宿主中：将本发明基因GmGST插入植物表达载体中，通过农杆菌导入宿主。携带本发明基因GmGST的表达载体可通过使用Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、显微注射、电导、农杆菌介导等常规生物学方法转化植物细胞或组织。
(5)本发明的基因GmGST对大豆抵抗铝胁迫具有积极作用。经过实验证明，将该基因过表达于大豆中，在铝胁迫处理下，可增强转基因大豆的主根的相对伸长率，并减少根尖铝离子的积累，说明该蛋白可以为培育具有较强耐铝能力的转基因植物的研究奠定基础。
附图说明
图1是载体构建流程图。
图2是GmGST:GmGST转基因大豆试纸条检测。其中，WT为大豆品种东农50，ox-1；ox-3和ox-4为T0代GmGST:GmGST转基因大豆。
图3是GmGST:GmGST转基因大豆T0代PCR检测。其中，M是marker(DL2000分子量标准)，1-3是T0代GmGST:GmGST转基因大豆。
图4是GmGST:GmGST转基因大豆草铵膦抗性检测。其中，WT为大豆品种东农50，ox-1；ox-3和ox-4为T0代GmGST:GmGST转基因大豆。
图5是GmGST:GmGST转基因大豆T1代PCR检测。
图6是植株中GmGST表达量分析。
图7是不同铝浓度下GmGST:GmGST转基因大豆和野生型东农50大豆幼苗主根长度表型分析。
图8是不同铝浓度下对GmGST:GmGST转基因大豆和野生型东农50大豆幼苗主根长度的抑制作用分析。
图9是GmGST:GmGST转基因大豆和野生型东农50根尖苏木精染色。
图10是GmGST:GmGST转基因大豆和野生型东农50根尖铝含量。
图11是铝胁迫下地上部分的表型鉴定。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施方法和实施例中所使用的术语，除非特殊说明，一般具有本领域的普通技术人员通常理解的含义。
下述实施方法中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规实验方法。所用到的引物，均在首次出现时标明，其后所用相同引物，均与首次标明的内容相同。
下面结合具体的制备实施例和应用实施例，并参照数据进一步详细的描述本发明。应理解这些实施例只是举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明范围。
大豆材料东农50记载于如下文献中：Yu JIN，Juanjuan QU，Guangming REN，LeiDONG.Effects of Transgenic DREB Soybean Dongnong50 on the Diversity of SoilAmmonia-oxidizing Bacteria.Agricultural Science&Technology.2013，14(7):988-992.在下文中，大豆品种东农50简称为东农50。
pB7WG2载体为invitrogen公司的产品。
下面实施例中的含有25μΜAlCl3的浓度为0.5mM的CaCl2水溶液由0.5mM的CaCl2、25μΜAlCl3和水组成；50μΜAlCl3的浓度为0.5mM的CaCl2水溶液由0.5mM的CaCl2、50μΜAlCl3和水组成。
实施例1、蛋白质GmGST的编码基因(GmGST基因)的克隆
1、提取大豆东农50基因组DNA。
2、以步骤1得到的基因组DNA为模板,根据GmGST(Glyma.09G094500)序列设计引物，利用GST-F(5-TGGAGCTCGGTACCCGGGAAATTCCATATCTGGGTAG-3，SEQ ID NO.4)和GST-R(5-GATCCTGGGATCCCCGAACTCGTATTATATTTTTCTCTT-3，SEQ ID NO.5)引物进行PCR反应，扩增启动子和GmGST基因片段，反应体系如表1：
表1PCR反应体系
PCR反应程序为:98℃3min；98℃10s；53℃60s；72℃18s。
3、完成步骤2后，提取pENTRY-FLAG载体质粒，Sma I限制性内切酶酶切及回收，In-Fusion无缝连接将GST基因组片段重组到Sma I酶切的pENTRY-FLAG载体上，得到重组质粒GmGST-pENTRY-FLAG。
实验例2、转GmGST基因大豆的获得及鉴定
一、重组质粒pB7WG2-GmGST的构建
重组质粒pB7WG2-GmGST的构建过程图谱见图1。
1、提取栽培大豆东农50根系基因组DNA。
2、以步骤1获得的东农50DNA为模板，利用GST-F(5-TGGAGCTCGGTACCCGGGAAATTCCATATCTGGGTAG-3)和GST-R(5-GATCCTGGGATCCCCGAACTCGTATTATATTTTTCTCTT-3)引物进行PCR反应，扩增启动子(SEQ ID NO.3)和GST基因(SEQ ID NO.1)片段。
3、完成步骤2后，提取pENTRY-FLAG载体质粒，Sma I限制性内切酶酶切及回收，In-Fusion无缝连接将GST基因组片段重组到Sma I酶切的pENTRY-FLAG载体上，得到重组质粒GmGST-pENTRY-FLAG。
4、完成步骤3后，将重组质粒GmGST-pENTRY-FLAG通过LR反应重组到pB7WG2(去35s)载体上，得到重组质粒pB7WG2-GmGST。
二、EHA105/pB7WG2-GmGST的获得
电击法转化农杆菌EHA105农杆菌感受态细胞，含有抗生素(50mg/L Spec，25mg/LRif和100mg/L Str)的固体LB培养基上筛选，将得到的重组农杆菌命名为EHA105/pB7WG2-GmGST。
三、T3代转GmGST基因大豆的阳性植株的获得
1、T0代拟转GmGST基因大豆的获得
采用农杆菌介导的大豆子叶节遗传转化法(记载于如下文献中Olhoft P M，Donovan C M，Somers D A.Soybean(Glycine max)transformation using maturecotyledonar node explants[J].Methodsin Molecular Biology，2006，343(12)：385)，将步骤二获得的EHA105/pB7WG2-GmGST转至大豆品种东农50中，获得T0代转GmGST基因大豆。具体步骤如下：
(1)取大豆品种东农50的种子，先用氯气灭菌16h，然后无菌水浸泡12h，得到吸涨的大豆。
(2)完成步骤(1)后，取吸涨的大豆，去皮，将2个子叶分开，用刀片在子叶节附近轻划出伤口，然后将其放入农杆菌重悬液中侵染30min。
农杆菌重悬液的制备方法如下：取步骤二获得的重组农杆菌的单克隆，加入20mLYEP液体培养基，28℃、200rpm震荡培养，得到OD600nm值为0.5左右的菌液1；将菌液1接种至200mL YEP液体培养基，28℃、200rpm震荡培养，得到OD600nm值为1.6-2.0的菌液2；取菌液2，室温、5000rpm离心10min，收集沉淀；取沉淀，用液体浸染培养基重悬，得到OD600nm值为0.8的农杆菌重悬液。
液体浸染培养基的溶质及其浓度为0.321g/L B5培养基(GamborgB-5BasalMedium)，30g/L蔗糖，3.9g/L MES，1.67mg/L 6-BA，0.25mg/L GA3和0.04g/L AS；溶剂为水；pH值为5.4。
(3)完成步骤(2)后，取大豆子叶，先用滤纸吸干重悬液，然后置于固体共培养培养基，25℃光照培养5天。
固体共培养培养基的溶质及其浓度为0.321g/L B5培养基，30g/L蔗糖，3.9g/LMES，1.67mg/L 6-BA，0.25mg/L GA3，0.04g/L AS，0.4g/L L-Cys，0.15g/L DTT，0.5％(w/v)琼脂粉；溶剂为水；pH值为5.4。
(4)完成步骤(3)后，将大豆子叶转移至丛生芽诱导培养基，25℃、光暗交替培养(16h光照培养/8h暗培养)28天。
丛生芽诱导培养基的溶质及其浓度为0.321g/L B5培养基，30g/L蔗糖，0.59g/LMES，1.67mg/L 6-BA，200mg/L Cef，200mg/L Tim，5mg/L草铵膦和0.75％(w/v)琼脂粉；溶剂为水；pH值为5.4。
(5)完成步骤(4)后，先从大豆子叶上切下丛生芽，然后将该丛生芽转移至丛生芽伸长培养基，25℃、光暗交替培养(16h光照培养/8h暗培养)至丛生芽中再生的植株伸长至2cm。
丛生芽伸长培养基的溶质及其浓度为4.43g/L MS，30g/L蔗糖，0.59g/L MES，0.5mg/LGA3，1mg/L ZR，1mg/L Asp，0.1mg/L IAA，200mg/L Cef，200mg/L Tim，3mg/L草铵膦和0.75％(w/v)琼脂；溶剂为水；pH值为5.6。
(6)完成步骤(5)后，将丛生芽中再生的植株从基部切下，然后转移至生根培养基，25℃、光暗交替培养(16h光照培养/8h暗培养)，得到T0代拟转GmGST基因大豆。
生根培养基的溶质及其浓度为0.321g/L B5培养基，20g/L蔗糖，3.9g/L MES，1mg/LIBA和0.8％(w/v)琼脂粉；溶剂为水；pH值为5.6。
2、T0代转GmGST基因大豆的鉴定
(1)分别取大豆品种东农50的植株或T0代转GmGST基因大豆的植株，采用免疫胶体金试纸条(Artron公司的产品)检测是否有BAR蛋白的表达(具体步骤参考免疫胶体金试纸条的说明书)。有BAR蛋白的表达即为T0代转GmGST基因大豆。
部分检测结果图2(WT为大豆品种东农50，ox-1、ox-3和ox-4为T0代转GmGST基因大豆)。
(2)提取T0代转GmGST基因大豆植株的叶片的基因组DNA并以其作为模板，采用GST-检测F(5-TTGGTGAAGAGTTGGCAAATAA-3，SEQ ID NO.6)和GST-检测R(5-TATGGAACGTCAGTGGAGCATT-3，SEQ ID NO.7)组成的引物对其进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；然后进行如下判断：如果某PCR扩增产物中含有约1500bp的DNA片段，则该PCR扩增产物对应的T0代转GmGST基因大豆植株再次被鉴定为T0代转GmGST基因大豆植株(图3)。
3、T1代转GmGST基因大豆的获得和鉴定
(1)待T0代转GmGST基因大豆成熟后采收，自交，得到T1代转GmGST基因大豆。
(2)将大豆品种东农50和T1代转GmGST基因大豆的种子播种于温室，当三出复叶完全展开后，通过在叶片上划线，一半涂抹浓度为120mg/L的草铵膦水溶液，一半不做处理来进行抗性鉴定。具有草铵膦抗性的植株既为T1代转GmGST基因大豆的阳性植株。
部分鉴定结果见图4(WT为大豆品种东农50，ox-1、ox-3和ox-4为T1代转GmGST基因大豆的阳性植株)。
(3)提取T1代转GmGST基因大豆的阳性植株的DNA并以其作为模板，采用GST-检测F和GST-检测R对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物(图5)，至T3代转GmGST基因大豆植株。
四、转GmGST大豆耐铝实验研究
1、GmGST表达量分析
通过qRT-PCR对GmGST基因的表达模式进行分析。
以GmActin4作为内参，引物序列为：GmActin4-F：GTGTCAGCCATACTGTCCCCATTT，SEQID NO.8；GmActin4-R：GTTTCAAGCTCTTGCTCGTAATCA，SEQ ID NO.9；
GmGST引物序列为：GmGST-F：GGCTCAATGTCTCAAACAATCT；GmGST-R：TTGGAAGACGATGAGTACACCC。
结果表明转基因GmGST大豆的GmGST表达量显著高于WT植株。在WT植株中，25μΜAlCl3处理酸性铝胁迫后，GmGST基因均上调，且36h时上调幅度显著(图6)。
2、铝胁迫处理
选择饱满一致的T3代转GmGST大豆3个株系ox-1、ox-3、ox-4和野生型大豆东农50的种子于蛭石中萌发培养，将培养4天的大豆幼苗在0.5mM CaCl2溶液(PH 4.5)中预培养24h，然后转移到含0、25和50μΜAlCl3的0.5mM CaCl2溶液(PH 4.5)的0.7L塑料容器中培养24h。分别在0h和24h测定不同大豆幼苗的主根长度。初步根系生长表型分析表明，铝胁迫对GmGST转基因大豆和WT的根系生长有抑制作用，且在0、25和50μΜ铝浓度下，GmGST转基因大豆较WT根系生长的抑制作用较小(图7)。
在25μM AlCl3处理1天后，WT、GmGST-ox-1、GmGST-ox-3和GmGST-ox-4的主根相对伸长率分别为50.44％、83.46％、82.70％和82.43％；在50μM AlCl3处理1天后，WT、GmGST-ox-1、GmGST-ox-3和GmGST-ox-4的主根相对伸长率分别为33.39％、57.82％、55.46％和57.35％。GmGST参与铝胁迫对主根生长的抑制，该基因的过表达可以减缓这种抑制(图8)。
主根相对伸长率计算如下:[(铝处理24h的主根长度-铝处理0h的主根长度)/(未处理24h的主根长度-未处理0h的主根长度)]×100％。每个处理测量10～20根。
3、苏木精染色
为了评估表面结合铝的数量，收集T3代WT和GmGST转基因株系经25μΜ铝处理6h后的根尖(2cm)进行苏木精染色。制备苏木精染色液(0.2％苏木精染色液，0.02％碘酸钠)，用苏木精染色液对根进行染色30分钟，然后用蒸馏水清洗30分钟，将苏木精染色液从根表面去除。从图9可以观察到，未经处理的毛状根根尖几乎没有苏木精染色，说明毛状根根尖没有损伤或损伤不明显。相比之下，铝处理的毛状体根尖在苏木精染色后出现不同程度的颜色加深，说明铝胁迫破坏了毛状根，而对照WT毛状根比过表达GmGST转基因株系毛状根染色更深。
接着我们对大豆根尖进行铝含量的测定，取24h AlCl3处理的大豆根尖(2cm)，105℃，10min；85℃恒温烘干，使用电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)(IRIS-Advantage,Thermo Elemental,MA,USA)测定大豆根尖的铝含量。参考文献：Sun QB,ShenRF,Zhao XQ,Chen RF,Dong XY.Phosphorus enhances Al resistance in Al-resistantLespedeza bicolor but not in Al-sensitive L.cuneata under relatively high Alstress.Ann Bot.2008,102:795-804.结果进一步证明，GmGST转基因大豆的铝离子在其根尖的积累量比野生型要少，受到的铝胁迫也更小(图10，表1)。
表1铝胁迫下大豆根系的铝含量。
t检验；*：P<0.05，**：P<0.01，t test
4、铝胁迫下表型的鉴定
为了研究GmGST对铝胁迫下大豆的影响，进一步评估转GmGST大豆对铝的敏感性，我们观察了GmGST转基因大豆与野生型大豆的地上表型差异(图11)。
我们将WT和转GmGST大豆在pH为4.5，含0或25μΜAlCl3的0.5mM CaCl2溶液中培养。每3天更换一次溶液，观察30天的表型变化，发现在无铝处理条件下，转基因株系和受体对照地上部分长势没有明显差异。长时间铝处理后的大豆植株均表现出生长发育缓慢、叶片发黄，但转基因大豆植株叶片发黄速度弱于受体对照东农50，进一步说明了GmGST基因可以提升大豆植株的耐铝性。
结果表明，铝胁迫处理下GmGST转基因大豆可以增强大豆对铝毒性的抗性。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
SEQ ID NO.1:GmGST编码基因序列
atggctcaat gtctcaaaca atctaatcgt aggcatggac aaaaaagaac aagagggctc
acacaactaa gaggtcgatg gaatataatt tgtaatgttg tgcccaagtt tgttgggtgt
tacacacatg tcgttcagag aaggaaaagc aaaagctcga atgaggacat caaagatttt
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tcaacaacat cgacggtcca cccaattgga aaaaagtcaa caaaaaggaa aaacaaagaa
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gaaagaatga gtaagatgga tgagttggtc aaggctagaa atgagcaaaa caaggtggag
gagatgaaga tcatacaact caaggatcat gaaatgttat gcaacatgat aagagaaaaa
tataatacga gttag；
SEQ ID NO.2：GmGST氨基酸序列
MAQCLKQSNRRHGQKRTRGLTQLRGRWNIICNVVPKFVGCYTHVVQRRKSKSSNEDIKDFLFGVYSSSSNSETPTSYAHDSTTSTVHPIGKKSTKRKNKEKHAKSSTKDAQFIALQQQHKERMSKMDELVKARNEQNKVEEMKIIQLKDHEMLCNMIREKYNTS*
启动子序列SEQ ID NO.3：
tggaggagat tattaggtcc gagccataag agtgtcatgg attcagatag gtaatgaaccttacatgggg ttttatttct taatagactatagccttcat gttttactag gagtgaacca ctagtttttaaccttaaaaa taagaacaat agaaatgctg ataatttttt gctgcttttggttctttttt attttttggaacatggatca tctaatgcta ctttgctcat ccaattttga gtcagcactt atacttgcacgcatccttgggttggattcg tcacaggaaa tcttgagcca gagacttaaa gcatctttag cagtaggcttgtcacagttc ataacacaga cgaactcacccttgtcgcgt ttgaccactg cagcaccaaa ggagttcgacacatcggaca aacggttcat caccatgaat gcgatcgtaggaatagaaaa ttaatttatg tcaattgtaaatagcaatgg agaagaagag ggaaaataat cgtaaacaat ttggaggaaa accccaaatgaaccaacaggaacaaagaaa accatggaca aacaacaaat caaaccacca aatcttatat taaaggatcaattcaaactgatagccaaac tcaacaatga aatagaaaat taaaaatcaa tcccaaaatg ataaaaaaaaatcacaattg caaacccaaa attataaccattacaacaac ataaaagagg attaaaaaga gggaaattccatatctgggt aggaggcttc tggttgcacg atagtgttta tggtgaagcaaatctaggtc atggaagtgtgtggtggtgt gatggtgtct gtggcagtgc taatttgggt tgtggagtcc tccattctgcatcatcttcaatgttatggg caaaagataa atgcatgtga tcttcgaggc aggcttggtt attttccctttggagagttg ttgttagagt gaaaaaaataagagattgaa agtggcacag ttgttgggga agagagaatgactcgcgcta tggttgcatg catctagtga tctagattat gagtctccatggtaggtggt tggagcctccatggggaatg gattatagcc tcctatgtca gacagtgaga gtgaattggg ggtttcggatttgggccctttggttgttca tgagaatttt gaaagagaaa ggtaaaggga tttgactttt attttagtcaatttagtgga tttaatgagg tggagtatgagtttgagaaa aaggccaaaa gtgaaaataa tgagaatgaaatattgaaag taaaaaaaaa aaaatcagtt tacattgaaa gaatagtatttgtggaatga ctactacctattgcagtgac tgtttgctac ttctactagt aaaaatggaa catttcctat ttttaattgtcagaagctacaagtttttac gattgcaata aattaatata gtcttgaaat ggtatatatt gagtttgcaaggaagcaaac ttgcacaatc tattcagtattcaaaataga ggatatgtaa cttgaaataa atggtataaattgacttatt attattattt tgtttttgtt tcatatttaa atggatccaagtcaatttaa tgatttcttcaattattgta tgcaaaatta tcaatcttct actaatcaaa attctcaaaa tcaaccttattttcaagtctcaaccatcac taaacaactc cacattcaat tttatgtaaa atatcaacct ccttccatcgaaaattttca aaatcctcaa tttgttcaaatgtttccacc accatgttat aggcctacaa tgggtactagtggtgtagaa cccactaatg atgagcttga atcaccgacc gagtccatgactactcaatt ttcataattttttactcaaa ttgggataga taatatcaca cttgatgaag aagggagtcg tggaaagaaaagacaatgagtcaaatgatt tgtgaatgag gatattcttc aaattaaagc。
Claims (8)
1.GmGST蛋白质在提高植物抗铝毒胁迫中的应用，其特征在于，所述GmGST蛋白质序列如SEQ ID NO.2所示；所述植物为大豆。
2.GmGST基因在提高植物抗铝毒胁迫中的应用，其特征在于，所述GmGST基因序列如SEQID NO.1所示；所述植物为大豆。
3.含有GmGST基因的超表达植株在提高植物抗铝毒胁迫中的应用；所述植物为大豆。
4.含有GmGST基因的重组载体在提高植物抗铝毒胁迫中的应用；所述植物为大豆。
5.含有GmGST基因的重组微生物细胞在提高植物抗铝毒胁迫中的应用；所述植物为大豆。
6.一种培育抗铝毒胁迫的植株的方法，其特征在于，所述的方法如下：
(1)扩增SEQ ID NO.1所示的基因序列，将基因序列插入到表达载体；
(2)将步骤(1)获得的载体导入到农杆菌中，利用农杆菌转入到大豆中得到转基因大豆；
(3)鉴定步骤(2)获得的转基因大豆得到阳性转基因大豆。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的表达载体是pB7WG2。
8.一种提高植物抗铝毒能力的方法，其特征在于，将大豆的GmGST基因在大豆中超表达获得大豆转基因植株，用AlCl3水溶液处理大豆转基因的幼苗。
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