CN112940094A - 一种耐铝相关基因GsERF1及其编码蛋白与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种耐铝相关基因GsERF1及其编码蛋白与应用。本发明提供的蛋白，命名为蛋白GsERF1，为如下(1)或(2)：(1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(2)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由(1)衍生的蛋白质。本发明的基因GsERF1对大豆抵抗铝胁迫具有积极作用。经过实验证明，将该基因超表于拟南芥中，可提高转基因拟南芥的的主根相对伸长率，同时增加脯氨酸含量，说明该蛋白可以为培育具有较强耐铝能力的转基因植物的研究奠定基础。
Description
技术领域
本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种耐铝相关基因GsERF1及其编码蛋白与应用。
背景技术
铝的毒性是限制酸性土壤作物生产的主要因素，酸性土壤约占世界可耕地的40％，潜在可耕地的70％。在土壤pH值低于5.0时，铝会以离子的形式存在，Al3+溶解到土壤中，强烈抑制根系生长和功能，从而降低作物产量。然而，在一个物种内，植物物种和品种之间的抗铝毒性能力有很大的差异。为了在酸性土壤中生存，一些植物物种或品种已经进化出了较高水平的耐受机制。在我国南方，野生大豆长期生长在酸性土壤中，很可能形成较强的耐铝性。因此野生大豆是改良大豆的重要资源，在改良大豆抗逆性中起着重要的作用(Zeng Q,Yang C,Ma Q,et al..Identification of wild soybean miRNAs and theirtarget genes responsive to aluminum stress.Bmc Plant Biology,2012,12(1):182.)。ERF转录因子(乙烯反应因子)是AP2/ERF超家族的一个亚家族，AP2/ERF超家族可根据AP2/ERF结构域的数量分为AP2、ERF、RAV三个大类。ERF家族蛋白包含一个AP2/ERF结构域，该结构域由高度保守58-60个氨基酸组成，这些氨基酸可与多个顺式作用元件的结合，这些顺式作用元件包括GCC盒和DRE/CRT等，这个结构域是ERF家族基因的主要功能区域。乙烯反应因子(ERF)蛋白是植物特有的AP2/ERF转录因子超家族成员，不仅在植物生长发育中起着重要的作用，且在胁迫反应中也起到重要作用(Scarpeci T E,Frea V S,Zanor M I,et al..Overexpression ofAtERF019 delays plant growth and senescence andimproves drought tolerance in Arabidopsis[J].Journal of Experimental Botany,2016:w429.)。
研究发现，ERF转录因子在植物应对非生物胁迫中具有重要的作用。拟南芥的AtERF105是的一种新型冷调节转录因子基因，对拟南芥的抗冻性和冷适应能力有重要贡献(Bolt S,Zuther E,Zintl S,et al..ERF105 is a transcription factor gene ofArabidopsis thaliana required for freezing tolerance and cold acclimation[J].Plant,Cell&Environment,2017,40(1):108-120.)；过表达野生大豆的GsERF71的转基因拟南芥对NaHCO3或KHCO3胁迫的耐受性明显高于野生型拟南芥，表明GsERF71能增强机体对碱性胁迫的耐受性(Yu Y,Duan X,Ding X,et al..A novel AP2/ERF familytranscription factor from Glycine soja,GsERF71,is a DNA binding protein thatpositively regulates alkaline stress tolerance in Arabidopsis[J].PlantMolecular Biology,2017,94(4-5):509-530.)。
因此，从野生大豆中筛选、鉴定并克隆与耐铝相关的基因具有重要的意义。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种蛋白。
本发明提供的蛋白，命名为蛋白GsERF1，为如下(1)或(2)：
(1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(2)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由(1)衍生的蛋白质。
编码上述蛋白的核酸分子也是本发明保护的范围。
上述核酸分子是如下1)-3)中任一种的DNA分子：
1)编码区为序列表中序列1所示的DNA分子；
2)在严格条件下与1)限定的DNA序列杂交且编码具有相同功能蛋白质的DNA分子；
3)与1)限定的DNA序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性且编码具有相同功能蛋白质的DNA分子。
含有上述核酸分子的重组载体、表达盒或重组菌也是本发明保护的范围。
上述蛋白、上述核酸分子或上述的重组载体、表达盒或重组菌在调控植物耐逆性中的应用也是本发明保护的范围。
上述蛋白、上述核酸分子或上述的重组载体、表达盒或重组菌在培育高耐逆性植物中的应用也是本发明保护的范围。
上述应用中，所述耐逆性为耐重金属性；
和/或，所述耐重金属性为对铝的耐受性。
本发明另一个目的是提供一种培育耐逆性提高的转基因植物的方法。
本发明提供的方法，为如下1)或2)：
1)所述的方法包括如下步骤：提高目的植物中上述蛋白的含量和/或活性，得到转基因植物；
2)所述的方法包括如下步骤：提高目的植物中编码上述蛋白的核酸分子的表达，得到转基因植物；
所述转基因植物的耐受性高于所述目的植物。
上述方法中，所述提高目的植物中上述蛋白的含量和/或活性，或，提高目的植物中编码上述蛋白的核酸分子的表达，均通过上述核酸分子导入目的植物实现。
上述方法中，所述耐逆性为耐重金属性；
和/或，所述耐重金属性为对铝的耐受性。
所述转基因植物的对铝的耐受性高于所述目的植物，具体体现：在铝胁迫下，与目的植物相比，转基因植物对铝的耐受性体现在铝胁迫下根长增加和/或叶片中脯氨酸含量增加。
本发明的有益效果如下：
(1)本发明所供的野生大豆耐铝相关基因GsERF1在铝胁迫条件下野生大豆材料BW69中表达显著上调，且在根部差异表达倍数较高。利用蘸花法拟南芥转化系统将携带有本发明GsERF1的植物表达载体(pTF101.1-GsERF1)转化拟南芥并获得三个独立的转化株系(OX-3,4和6)。与对照相比过表达GsERF1的转基因拟南芥的主根相对伸长率较对照显著增加；在转基因拟南芥的根中脯氨酸含量显著增加，说明GsERF1在大豆耐铝中具有重要的作用。
(2)本发明所供的大豆耐铝相关基因GsERF1，位于大豆第9号染色体，读码框长度为369bp，编码122个氨基酸；利用任何一种引导外源基因在植物中表达的载体，将本发明GsERF1基因导入植物细胞，可获得耐铝能力显著提高的转基因植株。
(3)使用野生大豆耐铝相关基因GsERF1重组植物表达载体时，在其转录起始核苷酸前加上任何一种增强型启动子或者组成型启动子，如花椰菜花叶病毒病35S启动子、玉米的泛素启动子，它们可单独使用或者与其它植物启动子结合使用；另外为了便于对转基因植物或者细胞的筛选，可对所有植物表达载体进行加工，可以加入在植物中表达可以产生颜色变化的酶基因或者发光化合物基因(荧光素酶基因、GUS基因等)、具有抗性的抗生素标记物(壮观霉素、卡那霉素等)或者是抗化学试剂标记基因(抗草甘膦基因、抗除草剂基因等)。从转基因植物安全性考虑，可以不加任何选择性标记基因，直接在铝胁迫中筛选转化植株。
(4)本发明基因GsERF1可通过如下方式导入宿主中：将本发明基因GsERF1插入植物表达载体中，通过农杆菌导入宿主。携带本发明基因GsERF1的表达载体可通过使用Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、显微注射、电导、农杆菌介导等常规生物学方法转化植物细胞或组织。
(5)本发明的基因GsERF1对大豆抵抗铝胁迫具有积极作用。经过实验证明，将该基因超表于拟南芥中，可提高转基因拟南芥的的主根相对伸长率，同时增加脯氨酸含量，说明该蛋白可以为培育具有较强耐铝能力的转基因植物的研究奠定基础。
附图说明
图1为GsERF1基因在野生大豆材料BW69中受到铝诱导表达情况；(A)GsERF1基因在不同时间铝胁迫处理下的表达情况；(B)GsERF1基因在不同浓度铝胁迫处理下的表达情况；(C)GsERF1基因在不同组织受到铝胁迫处理的表达情况。
图2为GsERF1基因拟南芥材料在铝处理条件下验证其参与耐铝胁迫图；(A)对照拟南芥材料(WT)和三个转基因株系材料(#3,#4和#6)在0，50，100和150μM铝处理条件下的表型图；(B)对照拟南芥材料(WT)和三个转基因株系材料(OX-3,4和6)在0，50，100和150μM铝处理条件下的相对伸长率；(C)对照拟南芥材料(WT)和三个转基因株系材料(#3,#4和#6)在25μM铝处理条件下的脯氨酸含量。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施方法和实施例中所使用的术语，除非特殊说明，一般具有本领域的普通技术人员通常理解的含义。
下述实施方法中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规实验方法。所用到的引物，均在首次出现时标明，其后所用相同引物，均与首次标明的内容相同。
下面结合具体的制备实施例和应用实施例，并参照数据进一步详细的描述本发明。应理解这些实施例只是举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明范围。
野生大豆材料BW69(耐铝野生大豆资源)记载于文献Zeng,QY.,Yang,CY.,Ma,QB.et al.Identification of wild soybean miRNAs and their target genesresponsive to aluminum stress.BMC Plant Biol 12,182(2012).https://doi.org/10.1186/1471-2229-12-182，公众可从申请人处获得。
pTF101.1载体记载于文献“Wang M,Sun S,Wu C,et al.Isolation andcharacterization of the brassinosteroid receptor gene(GmBRI1)from Glycine max[J].International journal of molecular sciences,2014,15(3):3871-3888，中，公众可从申请人处获得。
下面实施例中的含有25μM AlCl3的浓度为0.5mM的CaCl2水溶液由0.5mM的CaCl2、25μM AlCl3和水组成。
实施例1、大豆耐铝相关基因GsERF1的克隆及表达量
一、大豆耐铝相关基因GsERF1的克隆
用植物总RNA提取试剂盒(TR02，GeneMark)提取野生大豆材料BW69(耐铝野生大豆资源)根部总RNA，经1％琼脂糖电泳检测其完整性。
将总RNA反转录得到cDNA，cDNA的合成参照PrimeScriptTMRT reagent Kit withgDNA Eraser试剂盒说明书操作。
设计如下引物：
序列3：5’-ATGGAGAAAGAGAGAGGAGAG-3’
序列4：5’-TTAGTCTTCGTTATTCCTTC-3’
以上述cDNA为模板，用序列3和序列4所示的引物进行PCR扩增，得到PCR扩增产物。
上述PCR扩增的体系为按照以下组分顺序配置的PCR反应液(50μl体系)：2×Phanta Max Buffer(25μl),ddH2O(19μl),dNTP Mix(1μl),序列3引物(2μl),序列4引物(2μl),cDNA(1μl),Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase(1μl)。
上述PCR扩增的程序为：在Applied 
2720热循环仪上设定以下程序：95℃预变性3分钟，95℃变性15秒，51℃退火15秒，72℃延伸1分钟，共35个循环；然后72℃彻底延伸5分钟；4℃保存。
将上述PCR扩增产物参照普通DNA产物纯化试剂盒(DP204，天根)纯化回收，纯化回收产物连接pLB载体(pLB零背景快速连接试剂盒，天根)，转化大肠杆菌TOP10，挑取单菌落摇菌测序。
测序结果为：该PCR产物具有序列表中序列1所示的核苷酸，该核苷酸命名为基因GsERF1，该基因编码的蛋白命名为蛋白GsERF1，该蛋白的氨基酸序列为序列表中序列2。
二、大豆耐铝相关基因GsERF1的荧光定量PCR分析
1、总RNA提取和cDNA反转录
大豆耐铝品种BW69植株的根部进行如下不同条件处理：
无铝对照处理：植株的根部浸泡在pH4.3且浓度为0.5mM CaCl2水溶液中培养0,1,2,4,8,12和24小时后进行取样；
铝胁迫处理：植株的根部浸泡在pH4.3且含有25μM AlCl3的浓度为0.5mM的CaCl2水溶液中培养0,1,2,4,8,12和24小时后分别进行取样；
不同浓度铝处理：植株的根部分别浸泡在pH4.3且含有不同浓度AlCl3的浓度为0.5mM的CaCl2水溶液中24小时后进行取样；AlCl3的不同浓度分别为0、25、50、75和100μM。
将上述各种处理取样后的样品进行总RNA提取和cDNA反转录，方法同上述一。
2、扩增
针对GsERF1基因序列设计荧光定量PCR引物为
序列5：qGsERF1-F 5’-CAAATTCTTCTACTAAGGGAAATGG-3’
序列6：qGsERF1-R 5’-GTCTTCGTTATTCCTTCTCTTCTC-3’
内参基因选择GmActin3，引物序列如下
序列7：qACT3-F 5’-GCACCACCGGAGAGAAAATA-3’
序列8：qACT3-R 5’-GTGCACAATTGATGGACCAG-3’
以上述1的cDNA为模板，用上述引物qGsERF1-F和qGsERF1-R进行荧光定量PCR扩增；
上述荧光定量PCR扩增按照以下组分顺序配置反应体系(25μl)：SYBR Premix ExTaq II(12.5μl)，引物(1μl),cDNA(2μl)和ddH2O(8.5μl)。
上述荧光定量PCR扩增按照以下程序使用美国BIO-RAD CFX96实时荧光定量PCR仪进行PCR反应：94℃(3分钟)，94℃(10秒)，55℃(10秒)，72℃(30秒)共40个循环，后接溶解曲线分析程序。
在EXCEL中采用2^-△△Ct方法进行基因表达量的计算分析。
结果如图1所示，(A)GsERF1基因在不同时间铝胁迫处理下的表达情况；(B)GsERF1基因在不同浓度铝胁迫处理下的表达情况；(C)GsERF1基因在不同组织受到铝胁迫处理的表达情况，R1代表根尖0-1cm，R2代表代表根尖1-2cm，S代表茎，L代表叶片；可以看出，基因GsERF1在根部受到铝诱导表达显著上调，且在处理后6小时时候达到峰值，但不受pH的诱导差异表达。
实施例2、转GsERF1拟南芥的获得
一、转GsERF1拟南芥
1、重组载体的获得
重组植物表达载体pTF101.1-GsERF1为将序列1所示的GsERF1基因替换pTF101.1载体的Xba I和Sac I酶切位点位点间的片段得到的质粒，且GsERF1全长序列正向插入到的CaMV35S启动子后。
2、重组菌
用Bio-rad电击转化仪将重组载体pTF101.1-GsERF1转入农杆菌EHA105(BioVector NTCC Inc.)中，得到重组农杆菌EHA105/pTF101.1-GsERF1，利用序列5和序列6引物对想PCR扩增，126bp为阳性重组菌。
3、转GsERF1拟南芥
通过农杆菌GV3101介导的蘸花法转化拟南芥(Zhang X,Henriques R,Lin S S,etal.Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana using thefloral dip method[J].NATURE PROTOCOLS,2006,1(2):641-646.)，具体如下：
(1)种植野生型拟南芥(拟南芥col-0)，待拟南芥第一次抽苔并长出小花苞时剪去主苔，等侧苔长出快要开花时准备侵染。
(2)将构建好的重组农杆菌EHA105/pTF101.1-GsERF1培养到OD600约0.6-0.8时，4500rpm，离心10min收集菌体。
(3)重悬液的配置：二分之一的MS液体培养基加30％的蔗糖，并调pH为5.8。
(4)将菌体用重悬液重悬起来，加入0.02％的silliweet-77，上下颠倒混匀。
(5)将拟南芥的花苞侵入悬浊液中，侵染2min即可。
(6)将侵染完成的拟南芥外面套一个保鲜袋，保湿。暗培养一天后，放于培养室正常培养，直至种子收获。
(7)收获后播种于营养土上，利用除草剂不断筛选至T3代。
共获得三个独立的转基因株系#3,#4和#6命名为T3转GsERF1拟南芥。
二、荧光定量PCR扩增
提取T3转GsERF1拟南芥株系#3,#4和#6的幼嫩叶片部位的RNA，反转录得到cDNA，用序列5和序列6引物对PCR扩增。以野生型拟南芥为对照。
结果，得到条带大小为126bp为阳性转基因植株，T3转GsERF1拟南芥株系#3,#4和#6均得到条带大小为126bp，均为阳性转基因植株。
三、转GsERF1拟南芥耐铝实验研究
1、铝胁迫处理
铝胁迫处理(AL)：
(1)在获得独立转基因株系以后，分别将种子种植野生型拟南芥和T3代转GsERF1拟南芥#3,#4和#6于pH5.8的二分之一MS培养基固体平板上，种子需经过10％的次氯酸钠水溶液消毒10min后点播于平板之上。后将平板用胶带密封放于4°，三天后转移至培养箱正常培养。
(2)配置不同浓度的铝处理培养基，将抽滤过后不同浓度的AlCl3水溶液加入灭菌的pH为4.5的培养基(无磷酸二氢钾的1/2Hogland培养基，如下)中，倒平板，得到铝处理培养基，AlCl3的浓度分别为0、50，100和150μM。
表1为无磷酸二氢钾的1/2Hogland培养基配方
(3)待(1)处理的幼苗长至1-2cm时，挑取长势一致的幼苗移入(2)得到的不同浓度的铝处理培养基上，两周观看表型差异，取样，拍照记录。
无铝对照处理(CK)：与铝胁迫处理(AL)区别如下：待(1)处理的幼苗长至1-2cm时，挑取长势一致的幼苗移入pH为4.5的无磷酸二氢钾的1/2Hogland培养基上，两周观看表型差异，取样，拍照记录。
2、检测
1)根长
培养前后用刻度尺测量各个处理不同株系根长，培养后的根长-培养前的根长为24h的伸长量；再计算主根相对伸长率，其中根相对伸长率计算公式为(铝处理的伸长量)/(对照处理的伸长量)×100％。
结果如图2A和2B所示，可以看出，T3代转GsERF1拟南芥#3,#4和#6这3个转基因株系与野生型拟南芥相比在对照条件下根长无明显差别，但在铝胁迫处理下转基因株系的根长明显长于对照(图2A，每幅图中从左到右依次为野生型拟南芥WT、T3代转GsERF1拟南芥#3,#4和#6)；3个转基因株系的主根相对伸长率也显著高于对照(图2B)，说明在大豆中过表达GsERF1可以在短期铝胁迫处理下提高拟南芥对铝的耐受性。
四、转GsERF1拟南芥铝胁迫下脯氨酸含量的测定
1、样品的准备
将野生型拟南芥和T3代转GsERF1拟南芥#3,#4和#6于pH5.8以相同的方式种植在营养土上。待生长3周左右，分别向土里浇灌25μM AlCl3水溶液(pH4.5)一周之后，取叶片测脯氨酸含量，以衡量植株受到的铝胁迫程度，记作25μM Al处理。
以浇灌不含AlCl3的水(pH4.5)为对照。
2、脯氨酸含量的测定
1)试剂的配置
3％磺基水杨酸：取3g的磺基水杨酸溶解于蒸馏水中，在100ml的容量瓶中进行定容。
6M磷酸：取8.2ml的浓磷酸，然后加蒸馏水定容至20ml。
2)5％酸性茚三酮显色液：使用天平称取1.25g茚三酮，用冰醋酸和6M磷酸以30ml:20ml混合作为溶剂，先在烧杯中溶解，然后在50ml的容量瓶中进行定容。
脯氨酸标准溶液：取10mg脯氨酸，溶解于蒸馏水中，然后在100ml的容量瓶中进行定容，即浓度为100μg/ml脯氨酸溶液，后吸取10ml的100μg/ml的脯氨酸溶液，加蒸馏水定容至100ml就成为浓度为10μg/ml的脯氨酸标准溶液。
3)脯氨酸标准曲线的配置
a.取6支带塞试管分别标记后按下表2加入各试剂充分混合均匀，然后于沸水中加热30min。
b.然后取出放在试管架上冷却至室温。冷却后分别向各管中加入4ml甲苯，充分震荡，放在试管架上静置，待分层后，吸取上层甲苯层溶液(以0号管为对照)，在波长520nm下比色。
c.以脯氨酸含量为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线(y＝0.02294x-0.00150；R2＝0.99942)。
表2为脯氨酸标准液的配制
4)样品测定
a.脯氨酸提取：取0.2g叶片，剪碎并放入带盖试管中，吸取5ml的3％磺基水杨酸溶液加入到试管中，盖紧管盖，于沸水浴中浸提20min。
b.沸水浸提后取出试管放于管架上冷却至室温，再用滤纸过滤于新的试管中，再分别吸取上清液2ml到一个新试管中，然后分别加入2ml冰乙酸和2ml显色液，充分混合后，于沸水浴中加热30min，取出放在试管架上冷却至室温。吸取4ml甲苯加入到混合液中充分震荡，以萃取红色物质，静置分层后吸取甲苯层在波长520nm下进行比色(用甲苯作对照)。
c.从标准曲线中查出脯氨酸浓度，计算样品中脯氨酸含量。
结果如图2C所示，可以看出，T3代转GsERF1拟南芥#3,#4和#6在对照条件下与野生型拟南芥脯氨酸含量无明显差别，但是在铝胁迫条件下转基因株系的脯氨酸含量显著高于野生型拟南芥。
SEQUENCE LISTING
<110>华南农业大学
<120>一种耐铝相关基因GsERF1及其编码蛋白与应用
<160> 8
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 369
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 1
atggagaaag agagaggaga ggaagaagtg aagtaccgtg gagtgagaaa gaggccatgg 60
ggtaagttcg gagcagagat cagagaccca acaaaaccta cgggaaggca atggttaggg 120
acatttgaca ctgctgaaga agctgctaga gcttatgatc gtgcagccat tgctttgagg 180
ggtgctcttg caatccttaa ttttcctcat gagttccatt ttcatctccc ttttatatta 240
tcaaattctt ctactaaggg aaatggaagt tcttttgata aggaagttat tgagttagag 300
tatttggatg acaaggtgtt ggaagagctt cttgagttag aagagaagag aaggaataac 360
gaagactaa 369
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<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<400> 2
Met Glu Lys Glu Arg Gly Glu Glu Glu Val Lys Tyr Arg Gly Val Arg
1 5 10 15
Lys Arg Pro Trp Gly Lys Phe Gly Ala Glu Ile Arg Asp Pro Thr Lys
20 25 30
Pro Thr Gly Arg Gln Trp Leu Gly Thr Phe Asp Thr Ala Glu Glu Ala
35 40 45
Ala Arg Ala Tyr Asp Arg Ala Ala Ile Ala Leu Arg Gly Ala Leu Ala
50 55 60
Ile Leu Asn Phe Pro His Glu Phe His Phe His Leu Pro Phe Ile Leu
65 70 75 80
Ser Asn Ser Ser Thr Lys Gly Asn Gly Ser Ser Phe Asp Lys Glu Val
85 90 95
Ile Glu Leu Glu Tyr Leu Asp Asp Lys Val Leu Glu Glu Leu Leu Glu
100 105 110
Leu Glu Glu Lys Arg Arg Asn Asn Glu Asp
115 120
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<212> DNA
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atggagaaag agagaggaga g 21
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caaattcttc tactaaggga aatgg 25
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gtcttcgtta ttccttctct tctc 24
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<213> Artificial sequence
<400> 8
gtgcacaatt gatggaccag 20
Claims (10)
1.一种蛋白，为如下(1)或(2)：
(1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(2)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由(1)衍生的蛋白质。
2.编码权利要求1所述蛋白的核酸分子。
3.根据权利要求2所述的核酸分子，其特征在于：
所述核酸分子是如下1)-3)中任一种的DNA分子：
1)编码区为序列表中序列1所示的DNA分子；
2)在严格条件下与1)限定的DNA序列杂交且编码具有相同功能蛋白质的DNA分子；
3)与1)限定的DNA序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性且编码具有相同功能蛋白质的DNA分子。
4.含有权利要求2或3所述核酸分子的重组载体、表达盒或重组菌。
5.权利要求1所述蛋白、权利要求2或3所述核酸分子或权利要求4所述的重组载体、表达盒或重组菌在调控植物耐逆性中的应用。
6.权利要求1所述蛋白、权利要求2或3所述核酸分子或权利要求4所述的重组载体、表达盒或重组菌在培育高耐逆性植物中的应用。
7.根据权利要求5或6所述的应用，其特征在于：所述耐逆性为耐重金属性；
和/或，所述耐重金属性为对铝的耐受性。
8.一种培育耐逆性提高的转基因植物的方法，为如下1)或2)：
1)所述的方法包括如下步骤：提高目的植物中权利要求1所述蛋白的含量和/或活性，得到转基因植物；
2)所述的方法包括如下步骤：提高目的植物中编码权利要求1所述蛋白的核酸分子的表达，得到转基因植物；
所述转基因植物的耐受性高于所述目的植物。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：
所述提高目的植物中权利要求1所述蛋白的含量和/或活性，或，提高目的植物中编码权利要求1所述蛋白的核酸分子的表达，均通过权利要求2或3所述核酸分子导入目的植物实现。
10.根据权利要求8或9所述的方法，其特征在于：
所述耐逆性为耐重金属性；
和/或，所述耐重金属性为对铝的耐受性。
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