CN107417779A - 一种植物耐铝相关蛋白GmGRPL及其编码基因与应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种植物耐铝相关蛋白GmGRPL及其编码基因与应用。本发明提供的蛋白质，命名为GmGRPL蛋白，是如下(a)或(b)：(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物耐铝性相关的由序列1衍生的蛋白质。编码所述GmGRPL蛋白的基因(GmGRPL基因)也属于本发明的保护范围。本发明提供的GmGRPL蛋白及其编码基因能够降低铝毒害下铝在根系的积累，减轻铝毒害对大豆根系伸长抑制，从而提高大豆的耐铝性，提升逆境下大豆的生产能力，为创制耐铝大豆品种奠定基础。

Description

一种植物耐铝相关蛋白GmGRPL及其编码基因与应用

技术领域

本发明涉及一种植物耐铝相关蛋白GmGRPL及其编码基因与应用。

背景技术

铝(Al)是地壳中含量最为丰富的金属元素之一。土壤中Al通常以难溶性的硅酸盐或氧化铝的形式存在，一般对植物和环境没有毒害。但当土壤pH值降到5.0以下时，难溶性的Al将以离子态(Al³⁺)释放到土壤溶液中，产生铝毒害。铝毒害植物的最初反应就是抑制植株根系的伸长，从而抑制植物根系对水分和养分的吸收，导致作物减产。近年来，由于环境恶化造成的酸雨沉降以及农业生产中大量酸性化肥的施用，加剧了土壤的酸化，使酸性土壤的面积和酸化程度进一步扩大和加重，进而导致铝等金属离子毒害对作物生产的影响越来越突出，这一问题在我国南方大豆产区尤为严重。

大豆耐铝相关基因的获得可为大豆耐铝育种提供新的候选基因，对有效降低逆境对大豆生长发育的影响，提高大豆品种的抗逆能力，提升大豆生产能力具有积极的促进作用。

发明内容

本发明的目的是提供一种植物耐铝相关蛋白GmGRPL及其编码基因与应用。

本发明提供的蛋白质，获自大豆，命名为GmGRPL蛋白，是如下(a)或(b)：

(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物耐铝性相关的由序列1衍生的蛋白质。

为了使(a)中的GmGRPL蛋白便于纯化和检测，可在由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1所示的标签。

表1 标签的序列

标签	残基	序列
			Poly-Arg	5-6(通常为5个)	RRRRR
Poly-His	2-10(通常为6个)	HHHHHH
			FLAG	8	DYKDDDDK
Strep-tag II	8	WSHPQFEK
			c-myc	10	EQKLISEEDL

上述(b)中的GmGRPL蛋白可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。上述(b)中的GmGRPL蛋白的编码基因可通过将序列表中序列2所示的DNA序列中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变，和/或在其5′端和/或3′端连上表1所示的标签的编码序列得到。

编码所述GmGRPL蛋白的基因(GmGRPL基因)也属于本发明的保护范围。

所述GmGRPL基因为如下(1)-(3)中任一所述的DNA分子：

(1)编码区如序列表中序列2所示的DNA分子；

(2)在严格条件下与(1)限定的DNA序列杂交且编码与植物耐铝性相关蛋白的DNA分子；

(3)与(1)或(2)限定的DNA序列具有90％以上同源性且编码与植物耐铝性相关蛋白的DNA分子。

上述严格条件可为用0.1×SSPE(或0.1×SSC)，0.1％SDS的溶液，在DNA或者RNA杂交实验中65℃下杂交并洗膜。

含有所述GmGRPL基因的重组表达载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌也属于本发明的保护范围。

可用现有的植物表达载体构建含有GmGRPL基因的重组表达载体。所述植物表达载体包括双元农杆菌载体和可用于植物微弹轰击的载体等。使用GmGRPL基因构建重组表达载体时，可在其转录起始核苷酸前加上任何一种增强型、组成型、组织特异型或诱导型启动子，它们可单独使用或与其它的植物启动子结合使用；此外，使用GmGRPL基因构建重组表达载体时，还可使用增强子，包括翻译增强子或转录增强子，这些增强子区域可以是ATG起始密码子或邻接区域起始密码子等，但必需与编码序列的阅读框相同，以保证整个序列的正确翻译。所述翻译控制信号和起始密码子的来源是广泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻译起始区域可以来自转录起始区域或结构基因。为了便于对转基因植物细胞或植物进行鉴定及筛选，可对所用植物表达载体进行加工，如加入在植物中表达可产生颜色变化的酶或发光化合物的基因、具有抗性的抗生素标记物或是抗化学试剂标记基因等。从转基因植物的安全性考虑，也可不加入任何筛选基因，直接通过逆境胁迫进行筛选。

所述重组表达载体具体可为将PTF载体的Xba Ⅰ和Sac Ⅰ酶切位点之间的小片段取代为序列表的序列2的自5′端第1-513位核苷酸所示的DNA分子得到的重组质粒。所述PTF载体为序列表中序列3所示的环状质粒。

所述重组表达载体具体可为将PGFPGUS载体的Xba Ⅰ和Sac Ⅰ酶切位点之间的小片段取代为序列表的序列2的自5′端第1-513位核苷酸所示的DNA分子得到的重组质粒。所述PGFPGUS载体为序列表中序列4所示的环状质粒。

本发明还保护GmGRPL蛋白或GmGRPL基因在调控植物耐铝性中的应用。

本发明还保护一种培育转基因植物的方法(方法甲)，是将GmGRPL基因导入目的植物中，得到转基因植物；所述转基因植物耐铝性高于所述目的植物。

所述“耐铝性高于所述目的植物”具体可体现为铝胁迫时根长大于目的植物和/或铝含量低于目的植物和/或铝附着量低于目的植物。

所述方法甲中，所述GmGRPL基因可以通过以上任一所述重组表达载体导入目的植物。所述重组表达载体可通过Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、显微注射、电导、农杆菌介导等常规生物学方法转化到植物细胞或组织中。

本发明还保护一种提高植物耐铝性的方法(方法乙)，包括如下步骤：提高目的植物中GmGRPL蛋白的活性和/或表达量，得到耐铝性提高的植物。

所述方法甲或所述方法乙中，所述目的植物可为单子叶植物或双子叶植物。所述双子叶植物可为被子植物。

所述被子植物可为豆目植物。所述豆目植物可为豆科植物。所述豆科植物可为大豆属植物。所述大豆属植物具体可为大豆，例如栽培大豆Williams 82。

所述被子植物可为山柑目植物。所述山柑目植物可为十字花科植物。所述十字花科植物可为拟南芥属植物。所述拟南芥属植物具体可为拟南芥，例如Columbia型拟南芥。

本发明还保护所述GmGRPL蛋白或GmGRPL基因在植物育种中的应用。

本发明还保护所述方法甲或所述方法乙在植物育种中的应用。

所述育种的目的为选育耐铝性高的植物。

以上任一所述植物可为单子叶植物或双子叶植物。所述双子叶植物可为被子植物。

所述被子植物可为豆目植物。所述豆目植物可为豆科植物。所述豆科植物可为大豆属植物。所述大豆属植物具体可为大豆，例如栽培大豆Williams 82。

所述被子植物可为山柑目植物。所述山柑目植物可为十字花科植物。所述十字花科植物可为拟南芥属植物。所述拟南芥属植物具体可为拟南芥，例如Columbia型拟南芥。

本发明提供了一种物耐铝相关蛋白GmGRPL，GmGRPL能够降低铝毒害下铝在根系的积累，减轻铝毒害对大豆根系伸长抑制，从而提高大豆的耐铝性，提升逆境下大豆的生产能力，为创制耐铝大豆品种奠定基础。

附图说明

图1为过表达PTF-GmGRPL拟南芥T1植株PCR检测。

图2为铝胁迫下过表达PTF-GmGRPL拟南芥和野生型根系的表型。

图3为铝胁迫下过表达PTF-GmGRPL拟南芥和野生型的根长。

图4为铝胁迫下过表达PTF-GmGRPL拟南芥和野生型的相对根长。

图5为大豆发状根的转化流程。

图6为过表达PGFPGUS-GmGRPL大豆阳性发状根GFP检测。

图7为铝胁迫下过表达PGFPGUS-GmGRPL大豆发状根和对照中的Al含量。

图8为铝胁迫下过表达PGFPGUS-GmGRPL大豆发状根和对照的Eriochrome CyanineR染色。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

栽培大豆Williams 82：参考文献：许硕.野生大豆盐胁迫相关microRNA的功能分析[D].中国农业科学院,2011.；公众可以从中国农业科学院作物科学研究所获得。

Columbia型拟南芥：参考文献：郭晓丽.Columbia型拟南芥愈伤组织培养研究[J].河南农业科学,2009(1):42-44.；公众可以从中国农业科学院作物科学研究所获得。

PTF载体：序列表中序列3所示的环状质粒。

PGFPGUS载体：序列表中序列4所示的环状质粒。

根癌农杆菌GV3101：参考文献：赵湛,李文生.不同根癌农杆菌菌株类型对木霉菌遗传转化效率的影响[J].北方园艺,2006(3):14-15.；公众可以从中国农业科学院作物科学研究所获得。

MS盐：Phyto Tech，目录号：M524。

MS有机：Phyto Tech，目录号：M533。

B5有机：Phytotech公司，目录号：G219。

B5盐：Phytotech公司，目录号：G768。

1/2MS液体培养基由溶剂和溶剂组成；所述溶质及其在1/2MS液体培养基中的浓度为：MS盐2.165g/L，蔗糖50g/L，MS有机1ml/L；所述溶剂为水。YEP液体培养基的pH为5.8。

1/2MS固体培养基由溶剂和溶剂组成；所述溶质及其在1/2MS固体培养基中的浓度为：MS盐2.165g/L，蔗糖30g/L，琼脂7g/L，MS有机1ml/L；所述溶剂为水。YEP液体培养基的pH为5.8。

YEP液体培养基由溶剂和溶剂组成；所述溶质及其在YEP液体培养基中的浓度为：NaCl 5g/L，酵母提取物5g/L，胰蛋白胨10g/L；所述溶剂为水。YEP液体培养基的pH为7.0。

萌发培养基由溶剂和溶剂组成；所述溶质及其在萌发培养基中的浓度为：B5盐3.1g/L，蔗糖20g/L，琼脂7g/L，B5有机1ml/L；所述溶剂为水。发芽培养基的pH为5.8。

共培养培养基由溶剂和溶剂组成；所述溶质及其在共培养培养基中的浓度为：MS盐0.43g/L，2-吗啉乙磺酸3.9g/L，蔗糖30g/L，琼脂7g/L，B5有机1ml/L，二硫苏糖醇150mg/L，乙酰丁香酮0.02g/L；所述溶剂为水。共培养培养基的pH为5.4。

诱导液体培养基由溶剂和溶剂组成；所述溶质及其在诱导液体培养基中的浓度为：MS盐2.165g/L，蔗糖30g/L，MS有机1ml/L，头孢霉素250mg/L，羧苄青霉素钠250mg/L；所述溶剂为水。诱导培养基的pH为5.8。

诱导固体培养基由溶剂和溶剂组成；所述溶质及其在诱导固体培养基中的浓度为：MS盐2.165g/L，蔗糖30g/L，琼脂7g/L，MS有机1ml/L，头孢霉素250mg/L，羧苄青霉素钠250mg/L；所述溶剂为水。诱导培养基的pH为5.8。

实施例1、GmGRPL蛋白及其编码基因的获得

以栽培大豆Williams 82为研究材料，经过大量序列分析与功能验证，发现一个耐铝相关蛋白，将其命名为GmGRPL蛋白，如序列表的序列1所示。将编码GmGRPL蛋白的基因命名为GmGRPL基因(位于大豆基因组17号染色体)，开放阅读框如序列表的序列2所示。

实施例2、GmGRPL过表达载体的构建

1、提取栽培大豆Williams 82根系基因组DNA。

2、以步骤1得到的基因组DNA为模板，采用引物F-Xba Ⅰ和引物R-Sac Ⅰ组成的引物对进行PCR扩增，回收约520bp的PCR扩增产物。

F-Xba Ⅰ：5′-TCTAGAATGGGTTCCAAAACTCGCTC-3′；

R-Sac Ⅰ：5′-GAGCTCTTAAGCACATTGGAAATCACG-3′。

F-Xba Ⅰ和R-Sac Ⅰ中，下划线分别标注Xba Ⅰ和Sac Ⅰ酶切位点。

3、用限制性内切酶Xba Ⅰ和Sac Ⅰ双酶切步骤2的PCR扩增产物，回收酶切产物。

4、用限制性内切酶Xba Ⅰ和Sac Ⅰ双酶切PTF载体，回收约10000bp的载体骨架。

5、用限制性内切酶Xba Ⅰ和Sac Ⅰ双酶切PGFPGUS载体，回收约12000bp的载体骨架。

6、将步骤3得到的酶切产物和步骤4得到的载体骨架连接，得到重组表达载体PTF-GmGRPL。根据测序结果，对重组表达载体PTF-GmGRPL进行结构描述如下：将PTF载体的Xba Ⅰ和Sac Ⅰ酶切位点之间的小片段取代为了序列表的序列2的自5′端第1-513位核苷酸所示的双链DNA分子。

7、将步骤3得到的酶切产物和步骤5得到的载体骨架连接，得到重组表达载体PGFPGUS-GmGRPL。根据测序结果，对重组表达载体PGFPGUS-GmGRPL进行结构描述如下：将PGFPGUS载体的Xba Ⅰ和Sac Ⅰ酶切位点之间的小片段取代为了序列表的序列2的自5′端第1-513位核苷酸所示的双链DNA分子。

实施例3、过表达GmGRPL拟南芥的获得及耐铝性的研究

一、转基因植株的获得

1、将实施例2得到的重组表达载体PTF-GmGRPL导入根癌农杆菌GV3101，得到重组农杆菌。

2、将步骤1得到的重组农杆菌接种于1/2MS液体培养基中，28℃、200rpm震荡培养，得到OD_600nm＝0.4-0.6的重组农杆菌菌液，向重组农杆菌菌液中加入silwet L-77，得到侵染液(silwet L-77在侵染液中的体积百分比为0.5％)。

3、取开花期的Columbia型拟南芥，每周进行一次侵染，直至收获T₁代种子。

每次侵染的步骤均为：置于步骤2得到的侵染液中浸泡1min，浸泡后遮光过夜，第二天恢复正常培养(光照16h/黑暗8h)。

4、将步骤3得到的T₁代种子接种至含有8mg/L草甘膦的1/2MS固体培养基上，4℃培养3天(光照16h/黑暗8h)，然后置于22℃培养箱中培养(光照16h/黑暗8h)，筛选出能够正常生长的植株，将生长2周的植株从培养基中移栽到土壤基质中继续生长，直至收获T₂代种子。由T₂代种子长成的植株为T₂代植株。提取T₂代植株的基因组DNA，以基因组DNA为模板，采用引物F-Xba Ⅰ和引物R-Sac Ⅰ组成的引物对进行进行PCR检测。采用重组表达载体PTF-GmGRPL作为阳性对照。采用Columbia型拟南芥的基因组DNA作为阴性对照。

如果得到约520bp的扩增产物、待测植株为转基因阳性植株，如果没有得到所述扩增产物、待测植物为非转基因植株(部分检测结果如图1所示。图1中，M为D2000 plus DNAmaker，CK+为阳性对照，CK-为阳性对照，泳道1-13为随机选取的T₁代植株)。

将经过鉴定为转基因阳性的T₁代植株继续培养，在T₃代得到转基因纯合株系。

5、采用PTF载体代替重组表达载体PTF-GmGRPL，按照步骤1-4进行操作，得到转空载体株系。

二、耐铝性研究

待测植株为：Columbia型拟南芥(WT)、T₃转基因纯合株系(OX-6、OX8)植株和转空载体株系植株。

将待测植株的种子播种在含不同AlCl₃(0、2、4、6和8μM)浓度的1/2MS固体培养基中，垂直生长9天，用尺子量根长，记录拍照并对根长和相对根长进行统计。

相对根长的计算方法为：铝处理下的根长/0μM铝处理下的根长×100％。

每个株系选取5株植株进行实验。实验重复三次。

结果如图2所示。结果表明，在正常生长条件下(0μM AlCl₃)转基因拟南芥根长要长于野生型。在不同浓度AlCl₃处理后，转基因拟南芥和野生型植株的根长都受到抑制，但是转基因拟南芥植株的根长要长于野生型(图3)，相对根长也高于野生型(图4)。说明GmGRPL能够减轻铝毒害对根系伸长的影响。

实施例4、过表达GmGRPL大豆发状根耐铝性的研究

一、过表达GmGRPL大豆发状根的获得

1、将实施例2得到的重组表达载体PGFPGUS-GmGRPL导入发根农杆菌K599，得到重组农杆菌。

2、将步骤1得到的重组农杆菌接种于YEP液体培养基(含卡那霉素50mg/L)，28℃、200rmp震荡培养，得到OD_600nm＝0.6-0.8的重组农杆菌菌液(图5e)。

3、挑选无病虫害的栽培大豆Williams 82种子置于培养皿中，将培养皿放入干燥器中，在干燥器的烧杯中加入100ml次氯酸钠，再沿烧杯中加入4ml浓盐酸，关闭干燥器，灭菌16-18h(图5a和图5b)。

4、将步骤3消毒后的种子接种于萌发培养基中，接种时应保持种脐与培养基平面垂直，接种完成后盖好皿盖，不需封口，25℃培养5天(光照18h/黑暗6h)(图5c和图5d)。

5、完成步骤4后，用无菌手术刀和镊子从培养基中切取大豆子叶节，保留子叶带0.5cm的胚轴，尽量去除残留的种皮，将其放入培养皿盖中。用手术刀沿大豆子叶下胚轴纵切开，尽量去除子叶节处残留的幼芽，用手术刀在下胚轴的切口面上轻而均匀地划伤8-10道伤口，将划伤后的子叶立即投入步骤2得到的重组农杆菌菌液中，浸泡30min(图5f)。

6、将步骤5浸泡好的子叶转移到共培养培养基中，22℃暗培养5天(图5g和图5f)。

7、完成步骤6后，取子叶，采用发根诱导培养基浸泡清洗子叶3-4次，前几次每次浸泡清洗5min，最后一次浸泡清洗30min(图5i和图5j)。

8、完成步骤7后，将子叶按照下胚轴向下的取向斜插入发根诱导固体培养基中，盖好皿盖，用封口膜密封皿口，25℃培养10天(16h光照/黑暗8h)(图5k和图5l)，对长出的发状根进行GFP检测，检测呈阳性的发状根用于后续试验(图6)。

9、采用PGFPGUS载体替代重组表达载体PGFPGUS-GmGRPL，按照步骤1-8进行操作，得到转空载体发状根。

10、采用发根农杆菌K599替代重组农杆菌，按照步骤2-8进行操作，得到对照发状根。

二、耐铝性研究

待测材料(每组8个)：对照发状根、转空载体发状根和阳性过表达GmGRPL发状根(OX-GmGRPL)。

将待测材料在含有不同浓度(0，100μM)AlCl₃的0.5mM CaCl₂溶液(pH4.5)中浸泡处理24h后，测定发状根中Al含量并进行Eriochrome Cyanine R染色。

Al含量的测量方法为：称取0.5g(准至0.0001g)发状根，置于50ml聚四氟乙烯内胆中，加入5ml硝酸(优级纯)和2ml过氧化氢(优级纯)，室温静置4h，然后加盖密闭放入微波消解仪中消解。消解完后冷却至室温，移入50ml PET瓶中，以水稀释定重至25g(准至0.0001g)，混匀，作为供试品溶液。取供试品溶液和标准系列溶液(GBW080219)进行等离子体质谱测定。

ICP—MS测定工作条件：射频功率1500W，氩气流速：等离子气流量15.0L/min，辅助气流量1.0L/min，载气流量1.0L/min，采样深度7.5mm，采样锥孔径1.0mm，截取锥孔径0.4mm，雾化室温度2℃，蠕动泵速0.1rps。试液提升率为1.0ml/min。

Eriochrome Cyanine R染色：将发状根用无菌水冲洗3遍，然后放入0.01％(质量百分比)Eriochrome Cyanine R水溶液中浸泡10min，然后用无菌水冲洗至不掉色，拍照并观察。

Eriochrome Cyanine R染色可以用来表示Al在根系表面附着的多少。

结果如图7和图8所示。结果表明，在铝毒害下(100μM AlCl₃)，过表达GmGRPL的发状根中Al含量低于对照。Eriochrome Cyanine R染色后，过表达GmGRPL的发状根的颜色根对照比较浅，也说明Al在过表达GmGRPL的发状根表面附着的量要低于对照。转空载体发状根与对照发状根的检测结果无显著性差异。

上述结果表明，GmGRPL能够提高大豆根系的耐铝性。

<110> 中国农业科学院作物科学研究所

<120> 一种植物耐铝相关蛋白GmGRPL及其编码基因与应用

<160> 4

<210> 1

<211> 170

<212> PRT

<213> 大豆（Glycine max (Linn.) Merr.）

<400> 1

Met Gly Ser Lys Thr Arg Ser Phe Leu Ala Leu Phe Leu Thr Ile Asn

1 5 10 15

Ile Leu Phe Phe Ala Leu Ala Ser Ala Cys Gly Thr Cys Pro Ser Pro

20 25 30

Lys Pro Arg His Asn Lys His Lys Pro Val Lys Pro Ser Pro Ser Gly

35 40 45

Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly

50 55 60

Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser

65 70 75 80

Gly Gly Ser Ser Thr Ser Cys Pro Arg Asp Ala Leu Lys Leu Gly Val

85 90 95

Cys Ala Asn Val Leu Asn Gly Leu Leu Asn Val Thr Leu Gly Gln Pro

100 105 110

Pro Val Thr Pro Cys Cys Ser Leu Leu Asn Gly Leu Val Asp Leu Glu

115 120 125

Ala Ala Val Cys Leu Cys Thr Ala Leu Arg Ala Asn Ile Leu Gly Ile

130 135 140

Asn Leu Asn Leu Pro Ile Ser Leu Ser Leu Leu Leu Asn Val Cys Ser

145 150 155 160

Arg Gln Val Pro Arg Asp Phe Gln Cys Ala

165 170

<210> 2

<211> 513

<212> DNA

<213> 大豆（Glycine max (Linn.) Merr.）

<400> 2

atgggttcca aaactcgctc tttccttgct cttttcctca cgatcaacat tctcttcttt 60

gcccttgcct ctgcctgcgg gacatgccct agccctaagc caaggcataa taagcacaag 120

cctgttaagc caagtccttc aggtggctca ggtggttcgg gtggttcagg aggctctggt 180

ggttcaggtg gctctggtgg ttcaggtggt tctggtggtt caggtggctc gggtggttca 240

ggtggctcaa gtacctcttg ccctcgtgac gcactcaaac taggagtgtg tgccaatgtg 300

ctaaacgggt tgttgaacgt gactttaggt caaccaccag ttaccccttg ttgctccctc 360

ctcaatggtc ttgttgatct tgaagctgca gtgtgccttt gcactgccct tagggcaaac 420

attttgggca tcaacctcaa ccttccaatc tcactcagct tgcttctcaa tgtttgctca 480

aggcaagtcc cacgtgattt ccaatgtgct taa 513

<210> 3

<211> 10823

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223>

<400> 3

agtactttaa agtactttaa agtactttaa agtactttga tccaacccct ccgctgctat 60

agtgcagtcg gcttctgacg ttcagtgcag ccgtcttctg aaaacgacat gtcgcacaag 120

tcctaagtta cgcgacaggc tgccgccctg cccttttcct ggcgttttct tgtcgcgtgt 180

tttagtcgca taaagtagaa tacttgcgac tagaaccgga gacattacgc catgaacaag 240

agcgccgccg ctggcctgct gggctatgcc cgcgtcagca ccgacgacca ggacttgacc 300

aaccaacggg ccgaactgca cgcggccggc tgcaccaagc tgttttccga gaagatcacc 360

ggcaccaggc gcgaccgccc ggagctggcc aggatgcttg accacctacg ccctggcgac 420

gttgtgacag tgaccaggct agaccgcctg gcccgcagca cccgcgacct actggacatt 480

gccgagcgca tccaggaggc cggcgcgggc ctgcgtagcc tggcagagcc gtgggccgac 540

accaccacgc cggccggccg catggtgttg accgtgttcg ccggcattgc cgagttcgag 600

cgttccctaa tcatcgaccg cacccggagc gggcgcgagg ccgccaaggc ccgaggcgtg 660

aagtttggcc cccgccctac cctcaccccg gcacagatcg cgcacgcccg cgagctgatc 720

gaccaggaag gccgcaccgt gaaagaggcg gctgcactgc ttggcgtgca tcgctcgacc 780

ctgtaccgcg cacttgagcg cagcgaggaa gtgacgccca ccgaggccag gcggcgcggt 840

gccttccgtg aggacgcatt gaccgaggcc gacgccctgg cggccgccga gaatgaacgc 900

caagaggaac aagcatgaaa ccgcaccagg acggccagga cgaaccgttt ttcattaccg 960

aagagatcga ggcggagatg atcgcggccg ggtacgtgtt cgagccgccc gcgcacgtct 1020

caaccgtgcg gctgcatgaa atcctggccg gtttgtctga tgccaagctg gcggcctggc 1080

cggccagctt ggccgctgaa gaaaccgagc gccgccgtct aaaaaggtga tgtgtatttg 1140

agtaaaacag cttgcgtcat gcggtcgctg cgtatatgat gcgatgagta aataaacaaa 1200

tacgcaaggg gaacgcatga aggttatcgc tgtacttaac cagaaaggcg ggtcaggcaa 1260

gacgaccatc gcaacccatc tagcccgcgc cctgcaactc gccggggccg atgttctgtt 1320

agtcgattcc gatccccagg gcagtgcccg cgattgggcg gccgtgcggg aagatcaacc 1380

gctaaccgtt gtcggcatcg accgcccgac gattgaccgc gacgtgaagg ccatcggccg 1440

gcgcgacttc gtagtgatcg acggagcgcc ccaggcggcg gacttggctg tgtccgcgat 1500

caaggcagcc gacttcgtgc tgattccggt gcagccaagc ccttacgaca tatgggccac 1560

cgccgacctg gtggagctgg ttaagcagcg cattgaggtc acggatggaa ggctacaagc 1620

ggcctttgtc gtgtcgcggg cgatcaaagg cacgcgcatc ggcggtgagg ttgccgaggc 1680

gctggccggg tacgagctgc ccattcttga gtcccgtatc acgcagcgcg tgagctaccc 1740

aggcactgcc gccgccggca caaccgttct tgaatcagaa cccgagggcg acgctgcccg 1800

cgaggtccag gcgctggccg ctgaaattaa atcaaaactc atttgagtta atgaggtaaa 1860

gagaaaatga gcaaaagcac aaacacgcta agtgccggcc gtccgagcgc acgcagcagc 1920

aaggctgcaa cgttggccag cctggcagac acgccagcca tgaagcgggt caactttcag 1980

ttgccggcgg aggatcacac caagctgaag atgtacgcgg tacgccaagg caagaccatt 2040

accgagctgc tatctgaata catcgcgcag ctaccagagt aaatgagcaa atgaataaat 2100

gagtagatga attttagcgg ctaaaggagg cggcatggaa aatcaagaac aaccaggcac 2160

cgacgccgtg gaatgcccca tgtgtggagg aacgggcggt tggccaggcg taagcggctg 2220

ggttgtctgc cggccctgca atggcactgg aacccccaag cccgaggaat cggcgtgagc 2280

ggtcgcaaac catccggccc ggtacaaatc ggcgcggcgc tgggtgatga cctggtggag 2340

aagttgaagg ccgcgcaggc cgcccagcgg caacgcatcg aggcagaagc acgccccggt 2400

gaatcgtggc aagcggccgc tgatcgaatc cgcaaagaat cccggcaacc gccggcagcc 2460

ggtgcgccgt cgattaggaa gccgcccaag ggcgacgagc aaccagattt tttcgttccg 2520

atgctctatg acgtgggcac ccgcgatagt cgcagcatca tggacgtggc cgttttccgt 2580

ctgtcgaagc gtgaccgacg agctggcgag gtgatccgct acgagcttcc agacgggcac 2640

gtagaggttt ccgcagggcc ggccggcatg gccagtgtgt gggattacga cctggtactg 2700

atggcggttt cccatctaac cgaatccatg aaccgatacc gggaagggaa gggagacaag 2760

cccggccgcg tgttccgtcc acacgttgcg gacgtactca agttctgccg gcgagccgat 2820

ggcggaaagc agaaagacga cctggtagaa acctgcattc ggttaaacac cacgcacgtt 2880

gccatgcagc gtacgaagaa ggccaagaac ggccgcctgg tgacggtatc cgagggtgaa 2940

gccttgatta gccgctacaa gatcgtaaag agcgaaaccg ggcggccgga gtacatcgag 3000

atcgagctag ctgattggat gtaccgcgag atcacagaag gcaagaaccc ggacgtgctg 3060

acggttcacc ccgattactt tttgatcgat cccggcatcg gccgttttct ctaccgcctg 3120

gcacgccgcg ccgcaggcaa ggcagaagcc agatggttgt tcaagacgat ctacgaacgc 3180

agtggcagcg ccggagagtt caagaagttc tgtttcaccg tgcgcaagct gatcgggtca 3240

aatgacctgc cggagtacga tttgaaggag gaggcggggc aggctggccc gatcctagtc 3300

atgcgctacc gcaacctgat cgagggcgaa gcatccgccg gttcctaatg tacggagcag 3360

atgctagggc aaattgccct agcaggggaa aaaggtcgaa aaggtctctt tcctgtggat 3420

agcacgtaca ttgggaaccc aaagccgtac attgggaacc ggaacccgta cattgggaac 3480

ccaaagccgt acattgggaa ccggtcacac atgtaagtga ctgatataaa agagaaaaaa 3540

ggcgattttt ccgcctaaaa ctctttaaaa cttattaaaa ctcttaaaac ccgcctggcc 3600

tgtgcataac tgtctggcca gcgcacagcc gaagagctgc aaaaagcgcc tacccttcgg 3660

tcgctgcgct ccctacgccc cgccgcttcg cgtcggccta tcgcggccgc tggccgctca 3720

aaaatggctg gcctacggcc aggcaatcta ccagggcgcg gacaagccgc gccgtcgcca 3780

ctcgaccgcc ggcgcccaca tcaaggcacc ctgcctcgcg cgtttcggtg atgacggtga 3840

aaacctctga cacatgcagc tcccggagac ggtcacagct tgtctgtaag cggatgccgg 3900

gagcagacaa gcccgtcagg gcgcgtcagc gggtgttggc gggtgtcggg gcgcagccat 3960

gacccagtca cgtagcgata gcggagtgta tactggctta actatgcggc atcagagcag 4020

attgtactga gagtgcacca tatgcggtgt gaaataccgc acagatgcgt aaggagaaaa 4080

taccgcatca ggcgctcttc cgcttcctcg ctcactgact cgctgcgctc ggtcgttcgg 4140

ctgcggcgag cggtatcagc tcactcaaag gcggtaatac ggttatccac agaatcaggg 4200

gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa ggccagcaaa aggccaggaa ccgtaaaaag 4260

gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc cgcccccctg acgagcatca caaaaatcga 4320

cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa gataccaggc gtttccccct 4380

ggaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg accctgccgc ttaccggata cctgtccgcc 4440

tttctccctt cgggaagcgt ggcgctttct catagctcac gctgtaggta tctcagttcg 4500

gtgtaggtcg ttcgctccaa gctgggctgt gtgcacgaac cccccgttca gcccgaccgc 4560

tgcgccttat ccggtaacta tcgtcttgag tccaacccgg taagacacga cttatcgcca 4620

ctggcagcag ccactggtaa caggattagc agagcgaggt atgtaggcgg tgctacagag 4680

ttcttgaagt ggtggcctaa ctacggctac actagaagga cagtatttgg tatctgcgct 4740

ctgctgaagc cagttacctt cggaaaaaga gttggtagct cttgatccgg caaacaaacc 4800

accgctggta gcggtggttt ttttgtttgc aagcagcaga ttacgcgcag aaaaaaagga 4860

tctcaagaag atcctttgat cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa cgaaaactca 4920

cgttaaggga ttttggtcat gcatgatata tctcccaatt tgtgtagggc ttattatgca 4980

cgcttaaaaa taataaaagc agacttgacc tgatagtttg gctgtgagca attatgtgct 5040

tagtgcatct aacgcttgag ttaagccgcg ccgcgaagcg gcgtcggctt gaacgaattt 5100

ctagctagac attatttgcc gactaccttg gtgatctcgc ctttcacgta gtggacaaat 5160

tcttccaact gatctgcgcg cgaggccaag cgatcttctt cttgtccaag ataagcctgt 5220

ctagcttcaa gtatgacggg ctgatactgg gccggcaggc gctccattgc ccagtcggca 5280

gcgacatcct tcggcgcgat tttgccggtt actgcgctgt accaaatgcg ggacaacgta 5340

agcactacat ttcgctcatc gccagcccag tcgggcggcg agttccatag cgttaaggtt 5400

tcatttagcg cctcaaatag atcctgttca ggaaccggat caaagagttc ctccgccgct 5460

ggacctacca aggcaacgct atgttctctt gcttttgtca gcaagatagc cagatcaatg 5520

tcgatcgtgg ctggctcgaa gatacctgca agaatgtcat tgcgctgcca ttctccaaat 5580

tgcagttcgc gcttagctgg ataacgccac ggaatgatgt cgtcgtgcac aacaatggtg 5640

acttctacag cgcggagaat ctcgctctct ccaggggaag ccgaagtttc caaaaggtcg 5700

ttgatcaaag ctcgccgcgt tgtttcatca agccttacgg tcaccgtaac cagcaaatca 5760

atatcactgt gtggcttcag gccgccatcc actgcggagc cgtacaaatg tacggccagc 5820

aacgtcggtt cgagatggcg ctcgatgacg ccaactacct ctgatagttg agtcgatact 5880

tcggcgatca ccgcttcccc catgatgttt aactttgttt tagggcgact gccctgctgc 5940

gtaacatcgt tgctgctcca taacatcaaa catcgaccca cggcgtaacg cgcttgctgc 6000

ttggatgccc gaggcataga ctgtacccca aaaaaacagt cataacaagc catgaaaacc 6060

gccactgcgc cgttaccacc gctgcgttcg gtcaaggttc tggaccagtt gcgtgacggc 6120

agttacgcta cttgcattac agcttacgaa ccgaacgagg cttatgtcca ctgggttcgt 6180

gcccgaattg atcacaggca gcaacgctct gtcatcgtta caatcaacat gctaccctcc 6240

gcgagatcat ccgtgtttca aacccggcag cttagttgcc gttcttccga atagcatcgg 6300

taacatgagc aaagtctgcc gccttacaac ggctctcccg ctgacgccgt cccggactga 6360

tgggctgcct gtatcgagtg gtgattttgt gccgagctgc cggtcgggga gctgttggct 6420

ggctggtggc aggatatatt gtggtgtaaa caaattgacg cttagacaac ttaataacac 6480

attgcggacg tttttaatgt actgaattaa cgccgaattg ctctagcatt cgccattcag 6540

gctgcgcaac tgttgggaag ggcgatcggt gcgggcctct tcgctattac gccagctggc 6600

gaaaggggga tgtgctgcaa ggcgattaag ttgggtaacg ccagggtttt cccagtcacg 6660

acgttgtaaa acgacggcca gtgccaagct aattcgcttc aagacgtgct caaatcacta 6720

tttccacacc cctatatttc tattgcactc ccttttaact gttttttatt acaaaaatgc 6780

cctggaaaat gcactccctt tttgtgtttg tttttttgtg aaacgatgtt gtcaggtaat 6840

ttatttgtca gtctactatg gtggcccatt atattaatag caactgtcgg tccaatagac 6900

gacgtcgatt ttctgcattt gtttaaccac gtggatttta tgacatttta tattagttaa 6960

tttgtaaaac ctacccaatt aaagacctca tatgttctaa agactaatac ttaatgataa 7020

caattttctt ttagtgaaga aagggataat tagtaaatat ggaacaaggg cagaagattt 7080

attaaagccg cggtaagaga caacaagtag gtacgtggag tgtcttaggt gacttaccca 7140

cataacataa agtgacatta acaaacatag ctaatgctcc tatttgaata gtgcatatca 7200

gcatacctta ttacatatag ataggagcaa actctagcta gattgttgag cagatctcgg 7260

tgacgggcag gaccggacgg ggcggtaccg gcaggctgaa gtccagctgc cagaaaccca 7320

cgtcatgcca gttcccgtgc ttgaagccgg ccgcccgcag catgccgcgg ggggcatatc 7380

cgagcgcctc gtgcatgcgc acgctcgggt cgttgggcag cccgatgaca gcgaccacgc 7440

tcttgaagcc ctgtgcctcc agggacttca gcaggtgggt gtagagcgtg gagcccagtc 7500

ccgtccgctg gtggcggggg gagacgtaca cggtcgactc ggccgtccag tcgtaggcgt 7560

tgcgtgcctt ccaggggccc gcgtaggcga tgccggcgac ctcgccgtcc acctcggcga 7620

cgagccaggg atagcgctcc cgcagacgga cgaggtcgtc cgtccactcc tgcggttcct 7680

gcggctcggt acggaagttg accgtgcttg tctcgatgta gtggttgacg atggtgcaga 7740

ccgccggcat gtccgcctcg gtggcacggc ggatgtcggc cgggcgtcgt tctgggctca 7800

tggtagatcc cccgttcgta aatggtgaaa attttcagaa aattgctttt gctttaaaag 7860

aaatgattta aattgctgca atagaagtag aatgcttgat tgcttgagat tcgtttgttt 7920

tgtatatgtt gtgttgagaa ttaattctcg aggtcctctc caaatgaaat gaacttcctt 7980

atatagagga agggtcttgc gaaggatagt gggattgtgc gtcatccctt acgtcagtgg 8040

agatatcaca tcaatccact tgctttgaag acgtggttgg aacgtcttct ttttccacga 8100

tgctcctcgt gggtgggggt ccatctttgg gaccactgtc ggtagaggca tcttgaacga 8160

tagcctttcc tttatcgcaa tgatggcatt tgtaggagcc accttccttt tccactatct 8220

tcacaataaa gtgacagata gctgggcaat ggaatccgag gaggtttccg gatattaccc 8280

tttgttgaaa agtctcaatt gccctttggt cttctgagac tgtatctttg atatttttgg 8340

agtagacaag tgtgtcgtgc tccaccatgt tatcacatca atccacttgc tttgaagacg 8400

tggttggaac gtcttctttt tccacgatgc tcctcgtggg tgggggtcca tctttgggac 8460

cactgtcggc agaggcatct tcaacgatgg cctttccttt atcgcaatga tggcatttgt 8520

aggagccacc ttccttttcc actatcttca caataaagtg acagatagct gggcaatgga 8580

atccgaggag gtttccggat attacccttt gttgaaaagt ctcaattgcc ctttggtctt 8640

ctgagactgt atctttgata tttttggagt agacaagtgt gtcgtgctcc accatgttga 8700

cctgcaggca tgcaagcttg catgcctgca ggtccccaga ttagcctttt caatttcaga 8760

aagaatgcta acccacagat ggttagagag gcttacgcag caggtctcat caagacgatc 8820

tacccgagca ataatctcca ggaaatcaaa taccttccca agaaggttaa agatgcagtc 8880

aaaagattca ggactaactg catcaagaac acagagaaag atatatttct caagatcaga 8940

agtactattc cagtatggac gattcaaggc ttgcttcaca aaccaaggca agtaatagag 9000

attggagtct ctaaaaaggt agttcccact gaatcaaagg ccatggagtc aaagattcaa 9060

atagaggacc taacagaact cgccgtaaag actggcgaac agttcataca gagtctctta 9120

cgactcaatg acaagaagaa aatcttcgtc aacatggtgg agcacgacac acttgtctac 9180

tccaaaaata tcaaagatac agtctcagaa gaccaaaggg caattgagac ttttcaacaa 9240

agggtaatat ccggaaacct cctcggattc cattgcccag ctatctgtca ctttattgtg 9300

aagatagtgg aaaaggaagg tggctcctac aaatgccatc attgcgataa aggaaaggcc 9360

atcgttgaag atgcctctgc cgacagtggt cccaaagatg gacccccacc cacgaggagc 9420

atcgtggaaa aagaagacgt tccaaccacg tcttcaaagc aagtggattg atgtgatatc 9480

tccactgacg taagggatga cgcacaatcc cactatcctt cgcaagaccc ttcctctata 9540

taaggaagtt catttcattt ggagagaaca cgggggactc tagaatgaag atggtcatcg 9600

ttctcgtcgt gtgcctggct ctgtcagctg ccagcgcctc tgcaatgcag atgccctgcc 9660

cctgcgcggg gctgcagggc ttgtacggcg ctggcgccgg cctgacgacg atgatgggcg 9720

ccggcgggct gtacccctac gcggagtacc tgaggcagcc gcagtgcagc ccgctggcgg 9780

cggcgcccta ctacgccggg tgtgggcaga cgagcgccat gtaccagccg ctccggcaac 9840

agtgctgcca acagcagatg aggatgatgg acgtgcagtc cgtcgcgcag cagctgcaga 9900

tgatgatgca gcttgagcgt gccgctgccg ccagcagcag cctgtacgag ccagctctga 9960

tgcagcagca gcagcagctg ctggcagccc agggtctcaa ccccatggcc atgatgatgg 10020

cgcagaacat gccggccatg ggtggactct accagtacca gtaccagctg cccagctacc 10080

gcaccaaccc ctgtggcgtc tccgctgcca ttccgcccta ctactgagag ctcgaatttc 10140

cccgatcgtt caaacatttg gcaataaagt ttcttaagat tgaatcctgt tgccggtctt 10200

gcgatgatta tcatataatt tctgttgaat tacgttaagc atgtaataat taacatgtaa 10260

tgcatgacgt tatttatgag atgggttttt atgattagag tcccgcaatt atacatttaa 10320

tacgcgatag aaaacaaaat atagcgcgca aactaggata aattatcgcg cgcggtgtca 10380

tctatgttac tagatcggga attcgtaatc atgtcatagc tgtttcctgt gtgaaattgt 10440

tatccgctca caattccaca caacatacga gccggaagca taaagtgtaa agcctggggt 10500

gcctaatgag tgagctaact cacattaatt gcgttgcgct cactgcccgc tttccagtcg 10560

ggaaacctgt cgtgccagct gcattaatga atcggccaac gcgcggggag aggcggtttg 10620

cgtattggag cttgagcttg gatcagattg tcgtttcccg ccttcagttt aaactatcag 10680

tgtttgacag gatatattgg cgggtaaacc taagagaaaa gagcgtttat tagaataatc 10740

ggatatttaa aagggcgtga aaaggtttat ccgttcgtcc atttgtatgt gcatgccaac 10800

cacagggttc ccctcgggat caa 10823

<210> 4

<211> 13505

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223>

<400> 4

catggtagat ctgagggtaa atttctagtt tttctccttc attttcttgg ttaggaccct 60

tttctctttt tatttttttg agctttgatc tttctttaaa ctgatctatt ttttaattga 120

ttggttatgg tgtaaatatt acatagcttt aactgataat ctgattactt tatttcgtgt 180

gtctatgatg atgatgatag ttacagaacc gacgaactag tctgtacccg atcaacaccg 240

agacccgtgg cgtcttcgac ctcaatggcg tctggaactt caagctggac tacgggaaag 300

gactggaaga gaagtggtac gaaagcaagc tgaccgacac tattagtatg gccgtcccaa 360

gcagttacaa tgacattggc gtgaccaagg aaatccgcaa ccatatcgga tatgtctggt 420

acgaacgtga gttcacggtg ccggcctatc tgaaggatca gcgtatcgtg ctccgcttcg 480

gctctgcaac tcacaaagca attgtctatg tcaatggtga gctggtcgtg gagcacaagg 540

gcggattcct gccattcgaa gcggaaatca acaactcgct gcgtgatggc atgaatcgcg 600

tcaccgtcgc cgtggacaac atcctcgacg atagcaccct cccggtgggg ctgtacagcg 660

agcgccacga agagggcctc ggaaaagtca ttcgtaacaa gccgaacttc gacttcttca 720

actatgcagg cctgcaccgt ccggtgaaaa tctacacgac cccgtttacg tacgtcgagg 780

acatctcggt tgtgaccgac ttcaatggcc caaccgggac tgtgacctat acggtggact 840

ttcaaggcaa agccgagacc gtgaaagtgt cggtcgtgga tgaggaaggc aaagtggtcg 900

caagcaccga gggcctgagc ggtaacgtgg agattccgaa tgtcatcctc tgggaaccac 960

tgaacacgta tctctaccag atcaaagtgg aactggtgaa cgacggactg accatcgatg 1020

tctatgaaga gccgttcggc gtgcggaccg tggaagtcaa cgacggcaag ttcctcatca 1080

acaacaaacc gttctacttc aagggctttg gcaaacatga ggacactcct atcaacggcc 1140

gtggctttaa cgaagcgagc aatgtgatgg atttcaatat cctcaaatgg atcggcgcca 1200

acagcttccg gaccgcacac tatccgtact ctgaagagtt gatgcgtctt gcggatcgcg 1260

agggtctggt cgtgatcgac gagactccgg cagttggcgt gcacctcaac ttcatggcca 1320

ccacgggact cggcgaaggc agcgagcgcg tcagtacctg ggagaagatt cggacgtttg 1380

agcaccatca agacgttctc cgtgaactgg tgtctcgtga caagaaccat ccaagcgtcg 1440

tgatgtggag catcgccaac gaggcggcga ctgaggaaga gggcgcgtac gagtacttca 1500

agccgttggt ggagctgacc aaggaactcg acccacagaa gcgtccggtc acgatcgtgc 1560

tgtttgtgat ggctaccccg gagacggaca aagtcgccga actgattgac gtcatcgcgc 1620

tcaatcgcta taacggatgg tacttcgatg gcggtgatct cgaagcggcc aaagtccatc 1680

tccgccagga atttcacgcg tggaacaagc gttgcccagg aaagccgatc atgatcactg 1740

agtacggcgc agacaccgtt gcgggctttc acgacattga tccagtgatg ttcaccgagg 1800

aatatcaagt cgagtactac caggcgaacc acgtcgtgtt cgatgagttt gagaacttcg 1860

tgggtgagca agcgtggaac ttcgcggact tcgcgacctc tcagggcgtg atgcgcgtcc 1920

aaggaaacaa gaagggcgtg ttcactcgtg accgcaagcc gaagctcgcc gcgcacgtct 1980

ttcgcgagcg ctggaccaac attccagatt tcggctacaa gaacgctagc catcaccatc 2040

accatcacgt gtgaattggt gaccagctcg aatttccccg atcgttcaaa catttggcaa 2100

taaagtttct taagattgaa tcctgttgcc ggtcttgcga tgattatcat ataatttctg 2160

ttgaattacg ttaagcatgt aataattaac atgtaatgca tgacgttatt tatgagatgg 2220

gtttttatga ttagagtccc gcaattatac atttaatacg cgatagaaaa caaaatatag 2280

cgcgcaaact aggataaatt atcgcgcgcg gtgtcatcta tgttactaga tcgggaatta 2340

aactatcagt gtttgacagg atatattggc gggtaaacct aagagaaaag agcgtttatt 2400

agaataacgg atatttaaaa gggcgtgaaa aggtttatcc gttcgtccat ttgtatgtgc 2460

atgccaacca cagggttccc ctcgggatca aagtactttg atccaacccc tccgctgcta 2520

tagtgcagtc ggcttctgac gttcagtgca gccgtcttct gaaaacgaca tgtcgcacaa 2580

gtcctaagtt acgcgacagg ctgccgccct gcccttttcc tggcgttttc ttgtcgcgtg 2640

ttttagtcgc ataaagtaga atacttgcga ctagaaccgg agacattacg ccatgaacaa 2700

gagcgccgcc gctggcctgc tgggctatgc ccgcgtcagc accgacgacc aggacttgac 2760

caaccaacgg gccgaactgc acgcggccgg ctgcaccaag ctgttttccg agaagatcac 2820

cggcaccagg cgcgaccgcc cggagctggc caggatgctt gaccacctac gccctggcga 2880

cgttgtgaca gtgaccaggc tagaccgcct ggcccgcagc acccgcgacc tactggacat 2940

tgccgagcgc atccaggagg ccggcgcggg cctgcgtagc ctggcagagc cgtgggccga 3000

caccaccacg ccggccggcc gcatggtgtt gaccgtgttc gccggcattg ccgagttcga 3060

gcgttcccta atcatcgacc gcacccggag cgggcgcgag gccgccaagg cccgaggcgt 3120

gaagtttggc ccccgcccta ccctcacccc ggcacagatc gcgcacgccc gcgagctgat 3180

cgaccaggaa ggccgcaccg tgaaagaggc ggctgcactg cttggcgtgc atcgctcgac 3240

cctgtaccgc gcacttgagc gcagcgagga agtgacgccc accgaggcca ggcggcgcgg 3300

tgccttccgt gaggacgcat tgaccgaggc cgacgccctg gcggccgccg agaatgaacg 3360

ccaagaggaa caagcatgaa accgcaccag gacggccagg acgaaccgtt tttcattacc 3420

gaagagatcg aggcggagat gatcgcggcc gggtacgtgt tcgagccgcc cgcgcacgtc 3480

tcaaccgtgc ggctgcatga aatcctggcc ggtttgtctg atgccaagct ggcggcctgg 3540

ccggccagct tggccgctga agaaaccgag cgccgccgtc taaaaaggtg atgtgtattt 3600

gagtaaaaca gcttgcgtca tgcggtcgct gcgtatatga tgcgatgagt aaataaacaa 3660

atacgcaagg ggaacgcatg aaggttatcg ctgtacttaa ccagaaaggc gggtcaggca 3720

agacgaccat cgcaacccat ctagcccgcg ccctgcaact cgccggggcc gatgttctgt 3780

tagtcgattc cgatccccag ggcagtgccc gcgattgggc ggccgtgcgg gaagatcaac 3840

cgctaaccgt tgtcggcatc gaccgcccga cgattgaccg cgacgtgaag gccatcggcc 3900

ggcgcgactt cgtagtgatc gacggagcgc cccaggcggc ggacttggct gtgtccgcga 3960

tcaaggcagc cgacttcgtg ctgattccgg tgcagccaag cccttacgac atatgggcca 4020

ccgccgacct ggtggagctg gttaagcagc gcattgaggt cacggatgga aggctacaag 4080

cggcctttgt cgtgtcgcgg gcgatcaaag gcacgcgcat cggcggtgag gttgccgagg 4140

cgctggccgg gtacgagctg cccattcttg agtcccgtat cacgcagcgc gtgagctacc 4200

caggcactgc cgccgccggc acaaccgttc ttgaatcaga acccgagggc gacgctgccc 4260

gcgaggtcca ggcgctggcc gctgaaatta aatcaaaact catttgagtt aatgaggtaa 4320

agagaaaatg agcaaaagca caaacacgct aagtgccggc cgtccgagcg cacgcagcag 4380

caaggctgca acgttggcca gcctggcaga cacgccagcc atgaagcggg tcaactttca 4440

gttgccggcg gaggatcaca ccaagctgaa gatgtacgcg gtacgccaag gcaagaccat 4500

taccgagctg ctatctgaat acatcgcgca gctaccagag taaatgagca aatgaataaa 4560

tgagtagatg aattttagcg gctaaaggag gcggcatgga aaatcaagaa caaccaggca 4620

ccgacgccgt ggaatgcccc atgtgtggag gaacgggcgg ttggccaggc gtaagcggct 4680

gggttgtctg ccggccctgc aatggcactg gaacccccaa gcccgaggaa tcggcgtgac 4740

ggtcgcaaac catccggccc ggtacaaatc ggcgcggcgc tgggtgatga cctggtggag 4800

aagttgaagg ccgcgcaggc cgcccagcgg caacgcatcg aggcagaagc acgccccggt 4860

gaatcgtggc aagcggccgc tgatcgaatc cgcaaagaat cccggcaacc gccggcagcc 4920

ggtgcgccgt cgattaggaa gccgcccaag ggcgacgagc aaccagattt tttcgttccg 4980

atgctctatg acgtgggcac ccgcgatagt cgcagcatca tggacgtggc cgttttccgt 5040

ctgtcgaagc gtgaccgacg agctggcgag gtgatccgct acgagcttcc agacgggcac 5100

gtagaggttt ccgcagggcc ggccggcatg gccagtgtgt gggattacga cctggtactg 5160

atggcggttt cccatctaac cgaatccatg aaccgatacc gggaagggaa gggagacaag 5220

cccggccgcg tgttccgtcc acacgttgcg gacgtactca agttctgccg gcgagccgat 5280

ggcggaaagc agaaagacga cctggtagaa acctgcattc ggttaaacac cacgcacgtt 5340

gccatgcagc gtacgaagaa ggccaagaac ggccgcctgg tgacggtatc cgagggtgaa 5400

gccttgatta gccgctacaa gatcgtaaag agcgaaaccg ggcggccgga gtacatcgag 5460

atcgagctag ctgattggat gtaccgcgag atcacagaag gcaagaaccc ggacgtgctg 5520

acggttcacc ccgattactt tttgatcgat cccggcatcg gccgttttct ctaccgcctg 5580

gcacgccgcg ccgcaggcaa ggcagaagcc agatggttgt tcaagacgat ctacgaacgc 5640

agtggcagcg ccggagagtt caagaagttc tgtttcaccg tgcgcaagct gatcgggtca 5700

aatgacctgc cggagtacga tttgaaggag gaggcggggc aggctggccc gatcctagtc 5760

atgcgctacc gcaacctgat cgagggcgaa gcatccgccg gttcctaatg tacggagcag 5820

atgctagggc aaattgccct agcaggggaa aaaggtcgaa aaggtctctt tcctgtggat 5880

agcacgtaca ttgggaaccc aaagccgtac attgggaacc ggaacccgta cattgggaac 5940

ccaaagccgt acattgggaa ccggtcacac atgtaagtga ctgatataaa agagaaaaaa 6000

ggcgattttt ccgcctaaaa ctctttaaaa cttattaaaa ctcttaaaac ccgcctggcc 6060

tgtgcataac tgtctggcca gcgcacagcc gaagagctgc aaaaagcgcc tacccttcgg 6120

tcgctgcgct ccctacgccc cgccgcttcg cgtcggccta tcgcggccgc tggccgctca 6180

aaaatggctg gcctacggcc aggcaatcta ccagggcgcg gacaagccgc gccgtcgcca 6240

ctcgaccgcc ggcgcccaca tcaaggcacc ctgcctcgcg cgtttcggtg atgacggtga 6300

aaacctctga cacatgcagc tcccggagac ggtcacagct tgtctgtaag cggatgccgg 6360

gagcagacaa gcccgtcagg gcgcgtcagc gggtgttggc gggtgtcggg gcgcagccat 6420

gacccagtca cgtagcgata gcggagtgta tactggctta actatgcggc atcagagcag 6480

attgtactga gagtgcacca tatgcggtgt gaaataccgc acagatgcgt aaggagaaaa 6540

taccgcatca ggcgctcttc cgcttcctcg ctcactgact cgctgcgctc ggtcgttcgg 6600

ctgcggcgag cggtatcagc tcactcaaag gcggtaatac ggttatccac agaatcaggg 6660

gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa ggccagcaaa aggccaggaa ccgtaaaaag 6720

gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc cgcccccctg acgagcatca caaaaatcga 6780

cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa gataccaggc gtttccccct 6840

ggaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg accctgccgc ttaccggata cctgtccgcc 6900

tttctccctt cgggaagcgt ggcgctttct catagctcac gctgtaggta tctcagttcg 6960

gtgtaggtcg ttcgctccaa gctgggctgt gtgcacgaac cccccgttca gcccgaccgc 7020

tgcgccttat ccggtaacta tcgtcttgag tccaacccgg taagacacga cttatcgcca 7080

ctggcagcag ccactggtaa caggattagc agagcgaggt atgtaggcgg tgctacagag 7140

ttcttgaagt ggtggcctaa ctacggctac actagaagga cagtatttgg tatctgcgct 7200

ctgctgaagc cagttacctt cggaaaaaga gttggtagct cttgatccgg caaacaaacc 7260

accgctggta gcggtggttt ttttgtttgc aagcagcaga ttacgcgcag aaaaaaagga 7320

tctcaagaag atcctttgat cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa cgaaaactca 7380

cgttaaggga ttttggtcat gcattctagg tactaaaaca attcatccag taaaatataa 7440

tattttattt tctcccaatc aggcttgatc cccagtaagt caaaaaatag ctcgacatac 7500

tgttcttccc cgatatcctc cctgatcgac cggacgcaga aggcaatgtc ataccacttg 7560

tccgccctgc cgcttctccc aagatcaata aagccactta ctttgccatc tttcacaaag 7620

atgttgctgt ctcccaggtc gccgtgggaa aagacaagtt cctcttcggg cttttccgtc 7680

tttaaaaaat catacagctc gcgcggatct ttaaatggag tgtcttcttc ccagttttcg 7740

caatccacat cggccagatc gttattcagt aagtaatcca attcggctaa gcggctgtct 7800

aagctattcg tatagggaca atccgatatg tcgatggagt gaaagagcct gatgcactcc 7860

gcatacagct cgataatctt ttcagggctt tgttcatctt catactcttc cgagcaaagg 7920

acgccatcgg cctcactcat gagcagattg ctccagccat catgccgttc aaagtgcagg 7980

acctttggaa caggcagctt tccttccagc catagcatca tgtccttttc ccgttccaca 8040

tcataggtgg tccctttata ccggctgtcc gtcattttta aatataggtt ttcattttct 8100

cccaccagct tatatacctt agcaggagac attccttccg tatcttttac gcagcggtat 8160

ttttcgatca gttttttcaa ttccggtgat attctcattt tagccattta ttatttcctt 8220

cctcttttct acagtattta aagatacccc aagaagctaa ttataacaag acgaactcca 8280

attcactgtt ccttgcattc taaaacctta aataccagaa aacagctttt tcaaagttgt 8340

tttcaaagtt ggcgtataac atagtatcga cggagccgat tttgaaaccg cggtgatcac 8400

aggcagcaac gctctgtcat cgttacaatc aacatgctac cctccgcgag atcatccgtg 8460

tttcaaaccc ggcagcttag ttgccgttct tccgaatagc atcggtaaca tgagcaaagt 8520

ctgccgcctt acaacggctc tcccgctgac gccgtcccgg actgatgggc tgcctgtatc 8580

gagtggtgat tttgtgccga gctgccggtc ggggagctgt tggctggctg gtggcaggat 8640

atattgtggt gtaaacaaat tgacgcttag acaacttaat aacacattgc ggacgttttt 8700

aatgtactga attaacgccg aattaattcg ggggatctgg attttagtac tggattttgg 8760

ttttaggaat tagaaatttt attgatagaa gtattttaca aatacaaata catactaagg 8820

gtttcttata tgctcaacac atgagcgaaa ccctatagga accctaattc ccttatctgg 8880

gaactactca cacattatta tggagaaact cgagcttgtc gatcgacaga tccggtcggc 8940

atctacttta cttgtacagc tcgtccatgc cgagagtgat cccggcggcg gtcacgaact 9000

ccagcaggac catgtgatcg cgcttctcgt tggggtcttt gctcagggcg gactgggtgc 9060

tcaggtagtg gttgtcgggc agcagcacgg ggccgtcgcc gatgggggtg ttctgctggt 9120

agtggtcggc gagctgcacg ctgccgtcct cgatgttgtg gcggatcttg aagttcacct 9180

tgatgccgtt cttctgcttg tcggccatga tatagacgtt gtggctgttg tagttgtact 9240

ccagcttgtg ccccaggatg ttgccgtcct ccttgaagtc gatgcccttc agctcgatgc 9300

ggttcaccag ggtgtcgccc tcgaacttca cctcggcgcg ggtcttgtag ttgccgtcgt 9360

ccttgaagaa gatggtgcgc tcctggacgt agccttcggg catggcggac ttgaagaagt 9420

cgtgctgctt catgtggtcg gggtagcggc tgaagcactg cacgccgtag gtgaaggtgg 9480

tcacgagggt gggccagggc acgggcagct tgccggtggt gcagatgaac ttcagggtca 9540

gcttgccgta ggtggcatcg ccctcgccct cgccggacac gctgaacttg tggccgttta 9600

cgtcgccgtc cagctcgacc aggatgggca ccaccccggt gaacagctcc tcgcccttgc 9660

tcaccatatc tcattgcccc ccgggatctg cgaaagctcg agagagatag atttgtagag 9720

agagactggt gatttcagcg tgtcctctcc aaatgaaatg aacttcctta tatagaggaa 9780

ggtcttgcga aggatagtgg gattgtgcgt catcccttac gtcagtggag atatcacatc 9840

aatccacttg ctttgaagac gtggttggaa cgtcttcttt ttccacgatg ctcctcgtgg 9900

gtgggggtcc atctttggga ccactgtcgg cagaggcatc ttgaacgata gcctttcctt 9960

tatcgcaatg atggcatttg taggtgccac cttccttttc tactgtcctt ttgatgaagt 10020

gacagatagc tgggcaatgg aatccgagga ggtttcccga tattaccctt tgttgaaaag 10080

tctcaatagc cctttggtct tctgagactg tatctttgat attcttggag tagacgagag 10140

tgtcgtgctc caccatgtta tcacatcaat ccacttgctt tgaagacgtg gttggaacgt 10200

cttctttttc cacgatgctc ctcgtgggtg ggggtccatc tttgggacca ctgtcggcag 10260

aggcatcttg aacgatagcc tttcctttat cgcaatgatg gcatttgtag gtgccacctt 10320

ccttttctac tgtccttttg atgaagtgac agatagctgg gcaatggaat ccgaggaggt 10380

ttcccgatat taccctttgt tgaaaagtct caatagccct ttggtcttct gagactgtat 10440

ctttgatatt cttggagtag acgagagtgt cgtgctccac catgttggca agctgctcta 10500

gccaatacgc aaaccgcctc tccccgcgcg ttggccgatt cattaatgca gctggcacga 10560

caggtttccc gactggaaag cgggcagtga gcgcaacgca attaatgtga gttagctcac 10620

tcattaggca ccccaggctt tacactttat gcttccggct cgtatgttgt gtggaattgt 10680

gagcggataa caatttcaca caggaaacag ctatgaccat gattacgaat tcccgatcta 10740

gtaacataga tgacaccgcg cgcgataatt tatcctagtt tgcgcgctat attttgtttt 10800

ctatcgcgta ttaaatgtat aattgcggga ctctaatcat aaaaacccat ctcataaata 10860

acgtcatgca ttacatgtta attattacat gcttaacgta attcaacaga aattatatga 10920

taatcatcgc aagaccggca acaggattca atcttaagaa actttattgc caaatgtttg 10980

aacgatcggg gaaattcgag ctcgtggcag tggaaaaggg gggtttctga gcaggcaaag 11040

tagtacacgg tggactccaa caaacgacca gataagaata ttgaaggaac tttactacaa 11100

caatggaatt agatccccga gtgcagagca gattcagagg atctctgcta ggctgaggca 11160

gtacggtaag attgaaggca agaatgtctt ttattggttc cagaaccaca aagctcgaga 11220

aaggcagaag aaaaggttca cttggggaat tccagaagca acctcatgga aatgatgagg 11280

taaggtttca tactcttgcc tcttcttacg gctttctgtg tcttcactgt aagtttctat 11340

gatttgagcc accaatatat atgctctggt gtgctgagtt atgtttatct ggtcacgctt 11400

agtgggtaaa attatgctta ttttagcata aactttaatg agattaggtt ttgtatcaca 11460

ccgatcttta gttgtttagt aagatgacag aaattcttgg taaaacactc taaatcgtct 11520

tctttagtga agttttcctt agagtagcat aaattttggc ttttttcttg atggttgaat 11580

aaggtggcac ttgttggtat gagactttat tgagagtcat attaagctgg gtaccccaag 11640

tgaacctttt cttctgcctt tctcgagctt tgtggttctg gaaccaataa aagacattct 11700

tgccttcaat cttaccgtac tgcctcagcc tagcagagat cctctgaatc tgctctgcac 11760

tcggggatct aattccattg ttgtagtaaa gttccttcaa tattcttatc tggtcgtttg 11820

ttggagtcca ccgtgtacta ctttgcctgc tcagaaaccc cccttttcca ctgccactct 11880

agagtccccc gtgttctctc caaatgaaat gaacttcctt atatagagga agggtcttgc 11940

gaaggatagt gggattgtgc gtcatccctt acgtcagtgg agatatcaca tcaatccact 12000

tgctttgaag acgtggttgg aacgtcttct ttttccacga tgctcctcgt gggtgggggt 12060

ccatctttgg gaccactgtc ggcagaggca tcttcaacga tggcctttcc tttatcgcaa 12120

tgatggcatt tgtaggagcc accttccttt tccactatct tcacaataaa gtgacagata 12180

gctgggcaat ggaatccgag gaggtttccg gatattaccc tttgttgaaa agtctcaatt 12240

gccctttggt cttctgagac tgtatctttg atatttttgg agtagacaag tgtgtcgtgc 12300

tccaccatgt tgacgaagat tttcttcttg tcattgagtc gtaagagact ctgtatgaac 12360

tgttcgccag tctttacggc gagttctgtt aggtcctcta tttgaatctt tgactccatg 12420

gcctttgatt cagtgggaac taccttttta gagactccaa tctctattac ttgccttggt 12480

ttgtgaagca agccttgaat cgtccatact ggaatagtac ttctgatctt gagaaatata 12540

tctttctctg tgttcttgat gcagttagtc ctgaatcttt tgactgcatc tttaaccttc 12600

ttgggaaggt atttgatttc ctggagatta ttgctcgggt agatcgtctt gatgagacct 12660

gctgcgtaag cctctctaac catctgtggg ttagcattct ttctgaaatt gaaaaggcta 12720

atctggggac ctgcaggcat gcaagcttgg cactggccgt cgttttacaa cgtcgtgact 12780

gggaaaaccc tggcgttacc caacttaatc gccttgcagc acatccccct ttcgccagct 12840

ggcgtaatag cgaagaggcc cgcaccgatc gcccttccca acagttgcgc agcctgaatg 12900

gcgaatgcta gagcagcttg agcttggatc agattgtcgt ttcccgcctt cagtttagct 12960

tcatggagtc aaagattcaa atagaggacc taacagaact cgccgtaaag actggcgaac 13020

agttcataca gagtctctta cgactcaatg acaagaagaa aatcttcgtc aacatggtgg 13080

agcacgacac acttgtctac tccaaaaata tcaaagatac agtctcagaa gaccaaaggg 13140

caattgagac ttttcaacaa agggtaatat ccggaaacct cctcggattc cattgcccag 13200

ctatctgtca ctttattgtg aagatagtgg aaaaggaagg tggctcctac aaatgccatc 13260

attgcgataa aggaaaggcc atcgttgaag atgcctctgc cgacagtggt cccaaagatg 13320

gacccccacc cacgaggagc atcgtggaaa aagaagacgt tccaaccacg tcttcaaagc 13380

aagtggattg atgtgatatc tccactgacg taagggatga cgcacaatcc cactatcctt 13440

cgcaagaccc ttcctctata taaggaagtt catttcattt ggagagaaca cgggggactc 13500

ttgac 13505

Claims (10)

1.一种蛋白质，是如下(a)或(b)：

(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物耐铝性相关的由序列1衍生的蛋白质。

2.编码权利要求1所述蛋白质的基因。

3.如权利要求2所述的基因，其特征在于：所述基因为如下(1)-(3)中任一所述的DNA分子：

(1)编码区如序列表中序列2所示的DNA分子；

(2)在严格条件下与(1)限定的DNA序列杂交且编码与植物耐铝性相关蛋白的DNA分子；

(3)与(1)或(2)限定的DNA序列具有90％以上同源性且编码与植物耐铝性相关蛋白的DNA分子。

4.含有权利要求2或3所述基因的重组表达载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。

5.权利要求1所述蛋白质，或，权利要求2或3所述基因，在调控植物耐铝性中的应用。

6.一种培育转基因植物的方法，是将权利要求2或3所述基因导入目的植物中，得到转基因植物；所述转基因植物耐铝性高于所述目的植物。

7.一种提高植物耐铝性的方法，包括如下步骤：提高目的植物中权利要求1所述蛋白质的活性和/或表达量，得到耐铝性提高的植物。

8.如权利要求6或7所述的方法，其特征在于：所述目的植物为双子叶植物。

9.权利要求1所述蛋白质，或，权利要求2或3所述基因，或，权利要求6至8任一所述方法，在植物育种中的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于：所述育种的目的为选育耐铝性高的植物。