CN106916818A - 一种干旱诱导型启动子、其制备方法、重组表达载体及转化子 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种干旱诱导型启动子、其制备方法、重组表达载体及转化子，属于植物基因工程技术领域。所述干旱诱导型启动子的序列如序列表中SEQ ID NO.1所示。所述方法包括：提取植物的基因组DNA；将所述基因组DNA通过如序列表中SEQ ID NO:2所示的上游引物和SEQ ID NO:3所示的下游引物进行PCR扩增，得到PCR扩增产物，即所述干旱诱导型启动子。所述干旱诱导型植物的重组表达载体包括：上述的干旱诱导型启动子。所述转化子包括上述的干旱诱导型启动子。本发明实施例提供的pBdDREB启动子具有高效干旱诱导活性。

Description

一种干旱诱导型启动子、其制备方法、重组表达载体及转化子

技术领域

本发明涉及植物基因工程技术领域，特别涉及一种干旱诱导型启动子、其制备方法、重组表达载体及转化子。

背景技术

干旱是限制植物生长发育的重要因子，严重的干旱灾害会造成农作物大面积的受损及减产。随着全球水资源日益匮乏和自然灾害的日趋严重，农作物的抗旱性研究显得愈来愈重要。近年来水资源短缺严重制约着我国农业的发展，因此培育对干旱胁迫耐受性较高的农作物新品种显得越发紧迫。

干旱可诱导植物体内相关基因表达，其转录调节的主要机制之一是与逆境胁迫有关的转录因子与靶基因上游启动子中关键的顺式调控元件特异结合，从而增强启动子的活性，提高目的基因的表达。启动子是控制基因表达的重要调控元件，控制着外源基因表达的起始、表达部位及表达强度。

在实现本发明的过程中，发明人发现现有技术至少存在以下问题：

现有的诱导型启动子虽然能够只在植株受到合适的诱导信号时才会表达，从而将外源基因的表达对植株的负面影响降至最小，但是现有的适用于干旱胁迫的诱导型启动子甚少，这限制了农作物抗旱育种基因资源的选择。

发明内容

为了解决现有技术中适用于干旱胁迫的诱导型启动子甚少的问题，本发明实施例提供了一种干旱诱导型启动子、其制备方法、重组表达载体及转化子。所述技术方案如下：

一方面，本发明实施例提供了一种干旱诱导型启动子，所述干旱诱导型启动子的序列如序列表中SEQ ID NO.1所示。

另一方面，本发明实施例提供了一种制备上述的干旱诱导型启动子的方法，所述方法包括：

提取植物的基因组DNA；

将所述基因组DNA通过如序列表中SEQ ID NO:2所示的上游引物和SEQ ID NO:3所示的下游引物进进行PCR扩增，得到PCR扩增产物，即所述干旱诱导型启动子。

具体地，所述PCR扩增的反应体系包括：4.8μl ddH₂O、10μl 2×Prime Star GCBuffer、2μl浓度为2.5mM的dNTP mix、1μl浓度为10μM的所述上游引物、1μl浓度为10μM的所述下游引物、0.2μl Takara Prime Star Taq酶和1μl所述基因组DNA。

具体地，所述PCR扩增的程序为：98℃预变性5min；98℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸85s，扩增20个循环，每次循环结束后退火温度均增加0.5℃；98℃变性30s，65℃退火90s，72℃延伸85s，扩增15个循环；72℃延伸6min。

又一方面，本发明实施例提供了一种干旱诱导型植物重组表达载体，所述干旱诱导型植物重组表达载体包括报告基因和终止子，所述干旱诱导型植物的重组表达载体还包括：如序列表中SEQ ID NO.1所示的干旱诱导型启动子。

具体地，所述重组表达载体的选择标记为潮霉素抗性。

具体地，所述终止子为胭脂碱合成酶终止子。

优选地，所述表达载体以pCAMBIA1381为骨架载体。

具体地，所述报告基因为β-葡萄糖苷酸酶基因。

又一方面，本发明实施例提供了一种转化子，所述转化子包括上述的干旱诱导型启动子。

本发明实施例提供的技术方案带来的有益效果是：本发明实施例提供的启动子命名为pBdDREB启动子，该pBdDREB启动子具有高效干旱诱导活性，可用于植物耐旱转基因，且该pBdDREB启动子为诱导型启动子，该启动子驱动的目标基因只有在植株受到合适的诱导信号时才会表达，从而将外源基因的表达对植株的负面影响降至最小，且pBdDREB启动子能够避免打破植物原有的代谢水平，避免增加植物的代谢负担，本发明实施例提供的pBdDREB启动子增加了农作物抗旱育种基因资源的选择，本发明实施例提供的制备方法能够高效快速地制备干旱诱导型启动子；同时，含有pBdDREB启动子的重组表达载体和转化子均可用于植物耐旱基因工程的育种改良。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明实施例一提供的PCR扩增产物电泳图；

图2是本发明实施例二提供的植物表达载体后酶切鉴定电泳图；

图3是本发明实施例二提供的重组表达载体的结构示意图；

图4是本发明实施例二提供的转化农杆菌后的阳性检测电泳图，图中，M为DNAMarkerⅢ，1至3为3个单克隆，4为阳性对照pCAMBIA1381-pBdD REB-GUS重组表达载体；

图5是本发明实施例二提供的转基因烟草的PCR扩增产物电泳图，图中，Marker为DNA MarkerⅢ，1为野生型烟草，2为阳性对照pCAMBIA1381-pBd DREB-GUS重组表达载体，3至8为转基因烟草T0代单株；

图6是本发明实施例二提供的野生型和转基因烟草植物的幼苗在干旱胁迫下GUS活性检测结果，其中，WT表示野生型，pBdDREB表示转基因烟草；

图7是本发明实施例二提供的野生型和转基因烟草植物的叶片在干旱胁迫下GUS活性检测结果，其中，WT表示野生型，pBdDREB表示转基因烟草。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明实施方式作进一步地详细描述。

实施例一

本发明实施例提供了一种干旱诱导型启动子，该干旱诱导型启动子的序列如序列表中SEQ ID NO.1所示，命名为pBdDREB启动子。

下面简单介绍一下制备pBdDREB启动子的方法，具体如下：

提取二穗短柄草的基因组DNA，利用CTAB(Hexadecyltrimethylammoniumbromide，十六烷基三甲基溴化铵)法(具体操作方法见Murray&Thompson,1980)提取正常生长的二穗短柄草叶片的基因组DNA，并用超微量核酸蛋白测定仪Q5000检测提取的基因组DNA的质量与浓度，并将提取的基因组DNA的浓度稀释至50～100ng/μl作为pBdDREB启动子的模板。

将模板通过如序列表中SEQ ID NO:2所示的上游引物和序列表中SEQ ID NO:3所示的下游引物进行PCR(Polymerase Chain Reaction，聚合酶链式反应简称)扩增。

表1为PCR扩增的反应体系

试剂	体积(μl)
			4.8
2×Prime Star GC Buffer	10
		dNTP mix(2.5mM)	2
上游引物(10μM)	1
		下游引物(10μM)	1
Takara Prime Star Taq酶	0.2
		模板	1

PCR扩增的反应体系共20μl。将表1中的PCR扩增的反应体系按照如下PCR反应程序进行扩增：

PCR扩增的程序为：98℃预变性5min；98℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸85s，扩增20个循环，每次循环结束后退火温度增加0.5℃；98℃变性30s，65℃退火30s，72℃延伸85s，扩增15个循环；72℃延伸6min。

PCR扩增结束后，得到PCR扩增产物(即pBdDREB启动子)，吸取10μl PCR扩增产物进行浓度为1％的琼脂糖凝胶电泳检测，电泳检测结果见图1。将和目标条带大小一致的PCR扩增产物与T载体连接，在本实施例中，T载体为pEASY-Blunt Cloning Vector(购置于北京全式金生物技术有限公司)。由于本实施例中PCR反应体系使用的酶为Takara Prime StarTaq酶，使得PCR扩增产物为平末端，因此，用平末端的T载体与PCR扩增产物进行连接，PCR扩增产物与T载体的体积比可以为4:1，具体地，在本实施例中取4μl PCR扩增产物和1μlT载体，连接PCR扩增产物和T载体的具体操作按照试剂盒说明书进行，得到连接产物。

利用pEASY-Blunt Cloning Vector试剂盒(购置北京全式金生物技术有限公司)，该试剂盒包括大肠杆菌感受态细胞Trans1-T1，将连接产物通过热激法转入大肠杆菌感受态细胞Trans1-T1中，具体操作方法见pEASY-Blunt Cloning Vector试剂盒的说明书，将转入大肠杆菌感受态细胞Trans1-T1的连接产物涂布于含有100mg/L卡那霉素的LB(Luria-Bertani)平板培养基上，其中1L的LB平板培养基含有10g胰蛋白胨、5g酵母提取物、10g氯化钠和15g琼脂(pH值：7.4)，挑取LB平板培养基上的8个单克隆分别进行菌落PCR检测，该PCR检测的扩增程序及反应体系与制备pBdDREB启动子的扩增程序及反应体系完全一致，扩增产物经浓度为1％的琼脂糖电泳检测，并选取与预期大小一致的3个阳性单克隆进行测序，测序结果显示扩增序列均与SEQ ID NO:1完全吻合。将测序的3个阳性单克隆分别进行扩繁，以获得大量的启动子产物，然后用质粒小提试剂盒(购于天根生化科技有限公司)对这些单克隆进行提取，其提取过程按照质粒小提试剂盒的说明书进行，用超微量核酸蛋白测定仪Q5000进行质粒浓度测定，测得3个阳性单克隆质粒的浓度分别为256ng/ul，330ng/ul和280ng/ul，将其命名为pBdDREB-T重组质粒。

实施例二

本发明实施例提供了一种干旱诱导型植物的重组表达载体，该干旱诱导型植物的重组表达载体包括目的基因、报告基因、表达载体和本发明实施例一中提供的干旱诱导型启动子。其中，目的基因为干旱诱导型启动子，表达载体为植物双元表达载体，如选用pCAMBIA1381、pBI121、pCAMBIA1301或pCAMBIA1304作为骨架载体，具体地，在本实施例中表达载体可以以pCAMBIA1381为骨架载体。其中，PCAMBIA1381表达载体包括胭脂碱合成酶终止子，其选择标记为潮霉素抗性。

下面简单介绍一下干旱诱导型植物的重组表达载体的构建方法，具体如下：将pBdDREB-T重组质粒经EcoRⅠ和HindⅢ进行双酶切，得到第一酶切产物，将表达载体pCAMBIA1381经EcoRⅠ和HindⅢ进行双酶切，得到第二酶切产物，其中EcoRⅠ和HindⅢ均购置于NEB公司，将第一酶切产物进行浓度为1％的琼脂糖凝胶电泳，得到带有启动子片段的凝胶，通过凝胶回收试剂盒回收启动子片段，将第二酶切产物进行浓度为1％的琼脂糖凝胶电泳，得到含有GUS基因的pCAMBIA1381表达载体的片段的凝胶，通过凝胶回收试剂盒回收含有GUS基因的pCAMBIA1381表达载体的片段，采用T4DNA连接酶(购置于NEB公司)将回收的启动子片段和含有GUS基因的pCAMBIA1381表达载体的片段进行连接，得到连接产物，即pCAMBIA1381:pBdDREB重组质粒，再次采用pE ASY-Blunt Cloning Vector试剂盒中的大肠杆菌受态细胞Trans1-T1，然后将pC AMBIA1381:pBdDREB重组质粒转化至大肠杆菌受态细胞Trans1-T1内，具体操作按照pEASY-Blunt Cloning Vector试剂盒的说明书进行，得到转化产物，将转化产物培养于含有100mg/L卡那霉素(kan)的LB平板培养基中，在LB平板培养基上挑取单克隆进行PCR阳性检测，该PCR阳性检测的扩增程序及反应体系与制备pBdDREB启动子的扩增程序及反应体系完全一致，扩增产物经浓度为1％的琼脂糖电泳检测，然后挑取条带大小符合预期的一个单克隆利用质粒小提中量试剂盒(天根生化科技(北京)有限公司)进行质粒提取，质粒提取步骤见质粒小提中量试剂盒说明书，将提取的质粒进行双酶切鉴定，双酶切反应体系见表2，并于37℃的PCR仪器上酶切半个小时，然后进行浓度为1％的琼脂糖电泳鉴定，电泳鉴定结果如图2所示，重组质粒酶切出了与预期大小一致的两条带，由此可见，该克隆的质粒即为构建成功的重组表达载体pCAMBIA1 381-pBdDREB-GUS，其重组表达载体的结构示意图如图3所示。将构建成功的重组表达载体pCAMBIA1381-pBdDREB-GUS采用冻融法转入EHA105chemica lly competent cell(上海士峰生物科技有限公司)提供的农杆菌感受态细胞EHA105中，具体操作见EHA105chemically competent cell的说明书，得到转化产物，并将转化产物培养于含有50mg/L卡那霉素和50mg/L利福平的LB平板培养基中，在LB平板培养基上挑取单克隆进行PCR阳性检测，该PCR阳性检测的扩增程序及反应体系与制备pBdDREB启动子的扩增程序及反应体系完全一致，同时，采用pCAMBIA1381-pBdDREB-GUS重组表达载体作为阳性对照，并将所得的扩增产物进行浓度为1％的琼脂糖凝胶电泳阳性检测，其阳性检测结果如图4所示，每个单克隆均能扩增出预期大小的目标条带，证明该单克隆为正确的阳性菌株，即农杆菌转入的转化子，该转化子将用于后续植物材料的转化。

表2为pCAMBIA1381-pBdDREB-GUS重组表达载体双酶切反应体系

利用pBdDREB启动子驱动GUS报告基因在烟草中表达，具体方法如下：

转基因受体材料的准备：在本实施例中选择的受体材料为烟草，将本氏烟草的种子均匀撒播于含有营养土的花盆中，置于25℃培养室(培养条件：12h光照和12h黑暗交替培养)中进行种子萌发，同时覆盖保鲜膜以保持营养土的湿度，待幼苗出土一周后逐步去掉保鲜膜，对于长势好的幼苗可以先去掉保鲜膜，两周后可将幼苗进行移栽。

烟草叶片的消毒与预培养：待幼苗长至2个月大时，选取生长状况良好的烟草幼苗的嫩叶片，将其置于超净台上干净的烧杯中，先用浓度为75％的乙醇浸泡叶片45s，再用浓度为2.5％的次氯酸钠溶液浸泡叶片8～10min，期间不断晃动烧杯使叶片充分消毒，然后将叶片用无菌水清洗5次，每次清洗3min左右。最后用无菌滤纸吸去叶片表面上的水分，并用无菌刀片将叶片切成约0.5×0.5cm²的小块，切块时注意要避开叶脉，将切好的叶片块平铺于烟草共培养培养基上，25℃黑暗条件下预培养3天。其中，烟草共培养培养基包括：MS(Murashige and Skoog)基本培养基(购置于Sigma公司，且购买时为固体粉末，1L烟草共培养培养基加入4.4g MS基本培养基的固体粉末)、浓度为2mg/L的6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)、浓度为0.2mg/L的萘乙酸(NAA)、浓度为8g/L的琼脂(Agar)和浓度为30g/L的蔗糖，且pH值为5.8。

农杆菌菌液侵染烟草叶片：将农杆菌转入的转化子在LB固体平板培养基上进行划线，其中，固体平板培养基含有浓度为50mg/L的卡那霉素，于28℃黑暗条件下培养1天，得到划线菌落，取适量菌落重悬于50ml MS液体培养基中，使菌液浓度达到0.6OD以用于转化，然后在超净台上用镊子把预培养3天的叶片放于农杆菌菌液中浸泡10min，用于侵染，期间不断晃动。在侵染完成后将叶片取出放在无菌滤纸上，以便充分吸干叶片上残留的农杆菌菌液，然后再将侵染后的叶片均匀平铺于含有一层无菌滤纸的烟草共培养培养基上，于25℃黑暗条件下培养3天。

将黑暗条件下培养3天的叶片转移到分化培养基(分化培养基包括：MS基本培养基(1L分化培养基加入4.4g MS基本培养基的固体粉末)、浓度为2mg/L的6-BA、浓度为0.2mg/L的NAA、浓度为500mg/L的羧苄青霉素(Carbenicillin，Cb)、浓度为40mg/L的潮霉素(Hygromycin)、浓度为8g/L的Agar和浓度为30g/L的蔗糖，pH值为5.8)上进行分化，待分化幼芽长到1cm左右时，将其切下转入含有10mg/L潮霉素和250mg/L羧苄青霉素的MS基本培养基中进行生根培养。一般培养2周后外植体可生根，待外植体根系发达后移栽至营养小钵中，提取其基因组DNA，并利用如序列表中SEQ ID NO:4所示的上游引物和SEQ ID NO:5所示的下游引物进行PCR扩增，用于阳性苗检测，同时，采用pCAMBIA1381-pBdDREB-GUS重组表达载体作为阳性对照，其检测结果如图5所示，扩增出的目标条带大小为535bp，与实际相符，即转基因后的烟草叶片中含有pBdDREB启动子。其中，PCR扩增的反应体系如表1所示；PCR扩增程序为：98℃预变性5min；98℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s，扩增30个循环。

活性鉴定：取适量转基因烟草T0代种子(由T0代植株培育而成)和野生型种子分别置于2ml离心管中(本实施例中分别选取150颗种子左右)，用自来水浸泡1～2h使种子全部沉于离心管的底部，并用自来水洗涤2～3次以去除种子中的杂质。然后在超净台上将浸泡后种子转移至无菌的2ml离心管中，并用浓度为70％的乙醇消毒50s，再用浓度为1％的次氯酸钠溶液消毒6～8min，然后用无菌水洗涤3～5次(注意在整个消毒与洗涤的过程中要不断晃动离心管)。由于pCAMBIA1381:pBdDREB重组质粒上含有潮霉素选择标记的基因，所以，本实施例通过潮霉素选择具有潮霉素抗性的转基因植株。将消毒后的T0代转基因种子播种于含有50mg/L潮霉素的MS基本培养基上，将野生型烟草种子播种于MS基本培养基上，于25℃条件下12h光照与12h黑暗交替生长。约6-10天种子萌发。继续培养至两周大时，将一部分转基因幼苗与野生型幼苗分别放到含有300mM的甘露醇MS基本培养基中处理6天，用于模拟干旱环境，然后将未处理的烟草幼苗与经过干旱处理的烟草幼苗分别进行GUS活性检测；将另一部分转基因幼苗与野生型幼苗移栽至营养小钵中培养一个月后，进行控水干旱处理，同样对处理前和相应处理时间点的材料(大苗)进行GUS活性检测，以确定pBdDREB启动子是否具有干旱诱导活性。

GUS活性检测按照以下操作步骤进行：分别取干旱处理好的植物材料和未经干旱处理的植物材料，本发明实施例选择的植物材料为叶片和植株幼苗，使GUS染液(购自于武汉华纳汉庆生物科技有限公司)充分浸没植物材料，然后抽真空10min，使GUS染液充分渗透植物材料后，再于37℃染色24小时。在37℃条件下用浓度为95％的乙醇进行脱色处理。参见图6和图7，结果显示：野生型烟草的叶片和植株幼苗在干旱胁迫前后均不能被GUS染液染成蓝色，转入pBdDREB启动子后的转基因烟草的叶片和植株幼苗在处理前，GUS染色没有变蓝；而干旱处理6d后经GUS染色使叶片和植株幼苗均明显变蓝，其中，图6和图7均为调整成灰白底色后的图片，深色部位为GUS染色部位。这表明pBdDREB启动子是受干旱胁迫诱导表达的，且pBdDREB启动子具有高效干旱诱导活性，可用于植物耐旱转基因研究中。

本发明实施例提供的启动子命名为pBdDREB启动子，该pBdDREB启动子具有高效干旱诱导活性，可用于植物耐旱转基因，且该pBdDREB启动子为诱导型启动子，该启动子驱动的目标基因只有在植株受到合适的诱导信号时才会表达，从而将外源基因的表达对植株的负面影响降至最小，且pBdDREB启动子能够避免打破植物原有的代谢水平，避免增加植物的代谢负担，本发明实施例提供的pBdDREB启动子增加了农作物抗旱育种基因资源的选择，本发明实施例提供的制备方法能够高效快速地制备干旱诱导型启动子；同时，含有pBdDREB启动子的重组表达载体和转化子均可用于植物耐旱基因工程的育种改良。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

序列表

<110> 江汉大学

<120> 一种干旱诱导型启动子、其制备方法、重组表达载体及转化子

<160> 5

<170>PatentIn version 3.4

<210> 1

<211> 1510

<212>DNA

<213>人工序列

<400> 1

cagccttgtt gtctccgtta gttgccgcat gtgctttttc catttacact ctcctttggg 60

ccaaaaccat ccttctactg gagatgattt cattaatagt actctctctc tgatcatgtc 120

acttcatcgc ttttctccac ggccaccacg ggctataacc ttccttgctt tggtgaattt 180

gcacttccat atgtgtgtga tcattgagct taatcttctc cccggtcctc cgttctcacc 240

acaaccaccg gattctcctt ctggttttga gggctcgacg gctatagggg acgatgattg 300

tgcggttatt tgatggaaat aattgcagcc gtgttgcttg ttggtctctg gagttgctat 360

gagctgatca aatgttgtgt cctggagtca tttctgtgct gtcctaaggc atttgtgcgg 420

ccatcatcag caccctcctt tgctcgttgc ctgattcgtt tgataatacc acgaccggtg 480

ctgcacattg agcctccttg cggcagctta gcctatgtat gcattggatt gctttctcgt 540

tgttgtatag taaccatgta cttaggtttt atgttttttc ttgtgttctt gctccggcga 600

gatgtacttt gaggaatata tattcaggtg gggagactcc ccgagactcc cccccccccc 660

caccccacct tcccaccttc ccagagtaga cgagggtttg tgtgtttgac tcctggaggc 720

atttggaggg ggggaaaaca tgccctcgct cattttatca acccacctca ccttaccatg 780

cgatgcctgc atgtcgtgtt tcgtaatcaa gccgggctca gacttcttgg tatttggttc 840

tgttaatcag gataagttgt tagcggtcaa agaaattttt tggatggttt cccaagcatt 900

aatcgtctcg cgtcctgcac aagtgtctgt atataccgaa gaggtgtgcc gtcaacctga 960

agaagcatat tctgccctat accgaaacac acaaggagaa ctttatattt aatctatttt 1020

tatcagggaa tacaaccatc atccaatgat tcacttcaga gctttggttg tgtacattca 1080

acacctgcat gacgcatatg ttcttgcttc tctatagtgg agttttcttt gcctccgccg 1140

gagaggagaa agcaaactcg aaaaaaagaa aacatccgtc ccttacttcc tttgggggcc 1200

cctctccagt ccaggggctg ggcgagtgga gcccaaaggc cacgcctaga agccgccttt 1260

gctcaacgct gcatttcctc acgcgtcgct tatcaccacc tgtccttccc tggttggccc 1320

ttacaccgcc ccaacctctc tctccgcgtt acccaaagct ataaaagagc acactccaca 1380

caccagagtt actgaactcc tcggctcaaa ctcaaatttc ctcgcaaagt cgcaatccgg 1440

cctccaccgc actccagctc aagctaaacc aaacaaagcc agcagcaacc ccaaattaaa 1500

cttcatggcc 1510

<210> 2

<211> 29

<212>DNA

<213>人工序列

<400> 2

cggaattcca gccttgttgt ctccgttag 29

<210> 3

<211> 29

<212>DNA

<213>人工序列

<400> 3

cccaagcttg gccatgaagt ttaatttgg 29

<210> 4

<211> 21

<212>DNA

<213>人工序列

<400> 4

tgattgatga aactgctgct g 21

<210> 5

<211> 21

<212>DNA

<213>人工序列

<400> 5

acatatccag ccatgcacac t 21

Claims (10)

1.一种干旱诱导型启动子，其特征在于，所述干旱诱导型启动子的序列如序列表中SEQID NO.1所示。

2.一种制备如权利要求1所述的干旱诱导型启动子的方法，其特征在于，所述方法包括：

提取植物的基因组DNA；

将所述基因组DNA通过如序列表中SEQ ID NO:2所示的上游引物和SEQ ID NO:3所示的下游引物进行PCR扩增，得到PCR扩增产物，即所述干旱诱导型启动子。

3.根据权利要求2所述的制备干旱诱导型启动子的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系包括：4.8μl ddH₂O、10μl 2×Prime Star GC Buffer、2μl浓度为2.5mM的dNTPmix、1μl浓度为10μM的所述上游引物、1μl浓度为10μM的所述下游引物、0.2μl TakaraPrime Star Taq酶和1μl所述基因组DNA。

4.根据权利要求2所述的制备干旱诱导型启动子的方法，其特征在于，所述PCR扩增的程序为：98℃预变性5min；98℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸85s，扩增20个循环，每次循环结束后退火温度均增加0.5℃；98℃变性30s，65℃退火90s，72℃延伸85s，扩增15个循环；72℃延伸6min。

5.一种干旱诱导型植物的重组表达载体，所述干旱诱导型植物的重组表达载体包括报告基因和终止子，其特征在于，所述干旱诱导型植物的重组表达载体还包括：如序列表中SEQ ID NO.1所示的干旱诱导型启动子。

6.根据权利要求5所述的干旱诱导型植物的重组表达载体，其特征在于，所述终止子为胭脂碱合成酶终止子。

7.根据权利要求5所述的干旱诱导型植物的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体的选择标记为潮霉素抗性。

8.根据权利要求5所述的干旱诱导型植物的重组表达载体，其特征在于，所述表达载体以pCAMBIA1381为骨架载体。

9.根据权利要求5所述的干旱诱导型植物的重组表达载体，其特征在于，所述报告基因为β-葡萄糖苷酸酶基因。

10.一种转化子，其特征在于，所述转化子包括如权利要求1所述的干旱诱导型启动子。