CN116602412A - 一种抗便秘组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种抗便秘组合物及其制备方法和应用。本发明以桑椹、枸杞、黑芝麻、桑叶、黄豆、莲藕、甘薯等为原料，对桑椹、枸杞、黑芝麻进行特定工艺的超高压、酶解和微波等处理，对桑叶、黄豆、莲藕、甘薯进行特定工艺的酶解、碱解等处理，能够有效提取其中具有抗便秘功效的特定低聚糖和低聚肽成分。以所提取获得的低聚糖和低聚肽成分作为活性成分，能够有效提高排便量、促进肠道蠕动、刺激肠内短链脂肪酸的产生、抑制肠内腐败菌的生长、增加肠内有益菌的丰度、提高体内胃动素的水平，进而恢复肠道功能，改善便秘症状。同时由于本发明的各活性成分均来源于天然产物提取物，安全性更好，充分实现了对农作物的高效利用，具有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于天然产物应用领域，尤其涉及一种抗便秘组合物及其制备方法和应用。
背景技术
便秘作为一种与肠道相关的慢性疾病，临床表现为排便困难、排便频率低、排便不尽等症状。随着生活节奏的加快，便秘的发病率越来越高。据统计，世界便秘发病率达14％，老年群体发病率达36％。长期便秘存在潜在健康风险，增加了机体患肠易激综合征、结肠直肠癌甚至帕金森病的可能。研究表明，顽固性便秘患者粪样中双歧杆菌属、乳酸杆菌属、拟杆菌属、梭菌属、链球菌属等优势菌群数量显著下降，短链脂肪酸的含量也显著减少，且便秘程度越高，短链脂肪酸的含量越低。
植物资源中提取的多糖、多肽等活性成分，如桑椹多糖、枸杞多糖、桑叶多肽和黄豆多肽具有润肠通便、抗炎和降血糖等作用，但其分子量过大在水中溶解度有限，制约了其使用范围，所以把大分子多糖和多肽水解成分子量较小的低聚糖和低聚肽，可以拓宽其应用领域。目前现有工艺提取的植物资源低聚糖和低聚肽，只是对植物资源进行简单的粉碎混合，或进行浸提、蒸煮，其活性低聚糖和低聚肽成分难以提取，不能很好地发挥治疗便秘作用。因此，利用植物资源成分进行精炼提取，制备一种高效提取、效果稳定、能促进肠道蠕动及抗便秘的活性组合物，具有巨大的市场潜力。
发明内容
本发明的目的在于解决现有技术中所存在的问题，从而提供了一种抗便秘组合物及其制备方法，通过采用特定的工艺步骤从桑椹、枸杞、黑芝麻、桑叶、黄豆、莲藕、甘薯中提取特定的低聚糖和低聚肽作为活性成分，可以有效促进肠道功能恢复、改善便秘状况，安全性好，同时充分实现了对农作物的高效利用，具有广阔的应用前景。
为达到上述目的，本发明是通过如下手段得以实现的：
本发明第一方面提供了一种抗便秘组合物，包含低聚糖和低聚肽；所述低聚糖的分子量为1-10kDa，所述低聚肽的分子量为1-10kDa；
所述低聚糖通过如下方法制备得到：
(1.1)取桑椹、枸杞和黑芝麻进行粉碎，随后于超高压条件下进行处理；
(1.2)超高压处理后进行水提处理，随后将提取液浓缩至1/4体积后，加入乙醇进行醇沉，回收乙醇收集沉淀并进行冷冻干燥，得到多糖混合物；
(1.3)取步骤(1.2)得到的多糖混合物溶解于水中，先加入维生素C进行一次降解反应，随后再加入H2O2进行二次降解反应；
(1.4)对步骤(1.3)反应后的产物进行酶解处理；酶解完成后进行微波处理，离心取上清后进行膜分离，冷冻干燥即得；
所述低聚肽通过如下方法制备得到：
(2.1)取桑叶、黄豆、莲藕和甘薯置于水中进行磨浆，随后进行酶解处理；
(2.2)酶解处理完成后，调节溶液pH值进行碱解处理，随后调节pH至中性并进行膜分离；
(2.3)高压均质后喷雾干燥即得。
作为优选地，步骤(1.1)中所述桑椹、枸杞和黑芝麻的质量比为5：3：2。
作为优选地，步骤(1.1)中所述超高压处理的条件为：压力100MPa，时间10-20min。
作为优选地，步骤(1.2)中所述水提处理的条件为：温度70-80℃，时间6h。
作为优选地，步骤(1.2)中醇沉的条件为：时间24h，所加入乙醇的浓度为95％，所加入乙醇的体积为提取液浓缩后体积的3倍。
作为优选地，步骤(1.3)中所述一次降解反应的条件为：温度35℃，时间20min。
作为优选地，步骤(1.3)中所述二次降解反应的条件为：温度30℃，时间1h。
作为优选地，步骤(1.3)中所述多糖混合物与水的质量体积比为1：5-15；最优选地，所述多糖混合物与水的质量体积比为1：10。
应理解的是，在无特别说明的情况，本发明上下文中所述“质量体积比”应按照本领域的常规方式进行理解，即固体物质的质量(单位为g)与液体体积(单位为mL)的比值，例如当“多糖混合物与水为1:8”时，如若多糖混合物的添加量为1g，则水的添加量为8mL。
作为优选地，步骤(1.3)中所述维生素C的浓度为5mmol/L，体积为所述水的10-50％；所述H2O2的浓度为5mmol/L，体积为所述水的10-50％。
作为优选地，步骤(1.4)中所述酶解处理具体为：先采用β-甘露聚糖酶40-50℃下酶解3h，再采用葡聚糖氧化酶30-50℃下酶解20min。
作为优选地，步骤(1.4)中所述微波处理的条件为：功率800W，时间2min，微波处理可以有效降低低聚糖的粘度。
作为优选地，步骤(1.4)中所述膜分离具体为：上清先通过分子量为10kDa的超滤膜分离，去除大分子物质，取流出液；然后再通过分子量为1kDa超滤膜分离，取截留液。此目的为获得1-10kDa的低聚糖。
作为优选地，步骤(2.1)中所述桑叶、黄豆、莲藕和甘薯的质量比为5:2:1:2。
作为优选地，步骤(2.1)中磨浆时桑叶、黄豆、莲藕和甘薯与水的质量比为1：15。
作为优选地，步骤(2.1)中所述酶解处理具体为：先采用木瓜蛋白酶40-55℃下酶解1h，再采用α-淀粉酶30-50℃下酶解3h。
作为优选地，步骤(2.2)中所述碱解处理的条件为：pH值10.5，温度40-70℃，时间5h。
作为优选地，步骤(2.2)中所述膜分离具体为：溶液先通过分子量为10kDa的超滤膜分离，去除大分子物质，取流出液；然后再通过分子量为1kDa超滤膜分离，取截留液。此目的为获得1-10kDa的低聚肽。
作为优选地，所述组合物中还含有功能性和/或非功能性辅料。
作为优选地，所述功能性和/或非功能性辅料选自填充剂、崩解剂、润滑剂、抗氧化剂、着色剂、抑菌剂、螯合剂中的一种或多种。
本发明第二方面提供了一种抗便秘组合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)取桑椹、枸杞和黑芝麻进行粉碎，随后于超高压条件下进行处理；
(2)超高压处理后进行水提处理，随后将提取液浓缩至1/4体积后，加入乙醇进行醇沉，回收乙醇收集沉淀并进行冷冻干燥，得到多糖混合物；
(3)取步骤(2)得到的多糖混合物溶解于水中，先加入维生素C进行一次降解反应，随后再加入H2O2进行二次降解反应；
(4)对步骤(3)反应后的产物进行酶解处理；酶解完成后进行微波处理，离心取上清后进行膜分离，冷冻干燥即得低聚糖；
(5)取桑叶、黄豆、莲藕和甘薯置于水中进行磨浆，随后进行酶解处理；
(6)酶解处理完成后，调节溶液pH值进行碱解处理，随后调节pH至中性并进行膜分离；
(7)高压均质后喷雾干燥即得低聚肽；
(8)将步骤(4)得到的低聚糖与步骤(7)得到的低聚肽充分混合即得。
作为优选地，步骤(1.1)中所述桑椹、枸杞和黑芝麻的质量比为5：3：2。
作为优选地，步骤(1)中所述超高压处理的条件为：压力100MPa，时间10-20min。
作为优选地，步骤(2)中所述水提处理的条件为：温度70-80℃，时间6h。
作为优选地，步骤(2)中醇沉的条件为：时间24h，所加入乙醇的浓度为95％，所加入乙醇的体积为提取液浓缩后体积的3倍。
作为优选地，步骤(3)中所述一次降解反应的条件为：温度35℃，时间20min。
作为优选地，步骤(3)中所述二次降解反应的条件为：温度30℃，时间1h。
作为优选地，步骤(3)中所述多糖混合物与水的质量体积比为1：5-15；最优选地，所述多糖混合物与水的质量体积比为1：10。
作为优选地，步骤(3)中所述维生素C的浓度为5mmol/L，体积为所述水的10-50％；所述H2O2的浓度为5mmol/L，体积为所述水的10-50％。
作为优选地，步骤(4)中所述酶解处理具体为：先采用β-甘露聚糖酶40-50℃下酶解3h，再采用葡聚糖氧化酶30-50℃下酶解20min。
作为优选地，步骤(4)中所述微波处理的条件为：功率800W，时间2min，微波处理可以有效降低低聚糖的粘度。
作为优选地，步骤(4)中所述膜分离具体为：上清先通过分子量为10kDa的超滤膜分离，去除大分子物质，取流出液；然后再通过分子量为1kDa超滤膜分离，取截留液。此目的为获得1-10kDa的低聚糖。
作为优选地，步骤(5)中所述桑叶、黄豆、莲藕和甘薯的质量比为5:2:1:2。
作为优选地，步骤(5)中磨浆时桑叶、黄豆、莲藕和甘薯与水的质量比为1：15。
作为优选地，步骤(6)中所述酶解处理具体为：先采用木瓜蛋白酶40-55℃下酶解1h，再采用α-淀粉酶30-50℃下酶解3h。
作为优选地，步骤(6)中所述碱解处理的条件为：pH值10.5，温度40-70℃，时间5h。
作为优选地，步骤(6)中所述膜分离具体为：溶液先通过分子量为10kDa的超滤膜分离，去除大分子物质，取流出液；然后再通过分子量为1kDa超滤膜分离，取截留液。此目的为获得1-10kDa的低聚肽。
作为优选地，步骤(8)中所述低聚糖与低聚肽按照质量为1：1进行混合。
作为优选地，步骤(8)中任选地还混合有功能性和/或非功能性辅料。
作为优选地，所述功能性和/或非功能性辅料选自填充剂、崩解剂、润滑剂、抗氧化剂、着色剂、抑菌剂、螯合剂中的一种或多种。
本发明第三方面提供了上述抗便秘组合物在制备促进肠道蠕动及抗便秘的产品中的应用。
作为优选地，所述产品选自食品、保健品中的一种或多种。
本发明制备得到抗便秘组合物包含特定的低聚糖、低聚肽作为活性成分，其不可被人体所消化吸收，可对肠道菌群进行调节，使其重新达到平衡状态，且可选择性地刺激结肠中部分有益微生物的生长代谢从而维持机体健康。本发明的活性低聚糖、低聚肽能够一方面为调节肠内菌群比例，改善菌群代谢特征。低聚糖和低聚肽等在肠内可定向增加有益菌的丰度，增加其种间竞争力，从而促进肠内微生物发酵，加快肠内内容物的分解，促进肠道蠕动，软化粪便，达到缓解便秘的效果。另一方面，低聚糖和低聚肽等活性成分通过上调机体短链脂肪酸产量，调控代谢通路。低聚糖、低聚肽可刺激肠内益生菌产生短链脂肪酸，从而降低肠道环境pH，抑制肠内腐败菌的生长，增加肠内有益菌的丰度，平衡肠道菌群，达到治疗机体便秘的目的。
本发明相对于现有的技术，具有如下有益效果：
本发明以桑椹、枸杞、黑芝麻、桑叶、黄豆、莲藕、甘薯等为原料，对桑椹、枸杞、黑芝麻进行特定工艺的超高压、酶解和微波等处理，对桑叶、黄豆、莲藕、甘薯进行特定工艺的酶解、碱解等处理，能够有效提取其中具有抗便秘功效的特定低聚糖和低聚肽成分。以所提取获得的低聚糖和低聚肽成分作为活性成分，能够有效提高排便量、促进肠道蠕动、刺激肠内短链脂肪酸的产生、抑制肠内腐败菌的生长、增加肠内有益菌的丰度、提高体内胃动素的水平，进而恢复肠道功能，改善便秘症状。同时由于本发明的各活性成分均来源于天然产物提取物，安全性更好，充分实现了对农作物的高效利用，具有广阔的应用前景。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下参照实施例对本发明作进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。除非另有定义，下文中所使用的所有专业术语与本领域技术人员通常理解的含义相同。本文中所使用的专业术语只是为了描述具体实施例的目的，并不是旨在限制本发明的保护范围。
实施例1
一种抗便秘组合物，其制备方法包括如下步骤：
(1)取桑椹、枸杞和黑芝麻按照5：3：2的质量比进行混合后进行粉碎，随后于100MPa超高压条件下处理15min；
(2)超高压处理后于75℃水提处理6h，随后将提取液浓缩至1/4体积后，加入3倍体积95％乙醇醇沉24h，回收乙醇收集沉淀并进行冷冻干燥，得到多糖混合物；
(3)取1g步骤(2)得到的多糖混合物溶解于10mL水中，先加入3mL浓度为5mmol/L的维生素C于35℃进行一次降解反应20min，随后再加入3mL浓度为5mmol/L的H2O2于30℃下进行二次降解反应1h；
(4)对步骤(3)反应后的产物先采用β-甘露聚糖酶45℃下酶解3h，再采用葡聚糖氧化酶40℃下酶解20min；酶解完成后进行微波处理2min，微波功率为800W，离心取上清；将上清先通过分子量为10kDa的超滤膜分离，去除大分子物质，取流出液；然后再通过分子量为1kDa超滤膜分离，取截留液，获得1-10kDa的低聚糖；
(5)取桑叶、黄豆、莲藕和甘薯按照5：2：1：2的质量比进行混合后置于15倍质量的水中进行磨浆，随后采用木瓜蛋白酶50℃下酶解1h，再采用α-淀粉酶40℃下酶解3h；
(6)酶解处理完成后，调节溶液pH值为10.5，于55℃下碱解处理5h，随后调节pH至中性；随后将溶液先通过分子量为10kDa的超滤膜分离，去除大分子物质，取流出液；然后再通过分子量为1kDa超滤膜分离，取截留液；
(7)高压均质后喷雾干燥即得分子量为1-10kDa的低聚肽；
(8)将步骤(4)得到的低聚糖与步骤(7)得到的低聚肽按照1：1的质量比进行充分混合即得。
实施例2
一种抗便秘组合物，其制备方法包括如下步骤：
(1)取桑椹、枸杞和黑芝麻按照5：3：2的质量比进行混合后进行粉碎，随后于100MPa超高压条件下处理20min；
(2)超高压处理后于80℃水提处理6h，随后将提取液浓缩至1/4体积后，加入3倍体积95％乙醇醇沉24h，回收乙醇收集沉淀并进行冷冻干燥，得到多糖混合物；
(3)取1g步骤(2)得到的多糖混合物溶解于15mL水中，先加入1.5mL浓度为1.5mmol/L的维生素C于35℃进行一次降解反应20min，随后再加入5mL浓度为5mmol/L的H2O2于30℃下进行二次降解反应1h；
(4)对步骤(3)反应后的产物先采用β-甘露聚糖酶50℃下酶解3h，再采用葡聚糖氧化酶50℃下酶解20min；酶解完成后进行微波处理2min，微波功率为800W，离心取上清；将上清先通过分子量为10kDa的超滤膜分离，去除大分子物质，取流出液；然后再通过分子量为1kDa超滤膜分离，取截留液，获得1-10kDa的低聚糖；
(5)取桑叶、黄豆、莲藕和甘薯按照5：2：1：2的质量比进行混合后置于15倍质量的水中进行磨浆，随后采用木瓜蛋白酶55℃下酶解1h，再采用α-淀粉酶50℃下酶解3h；
(6)酶解处理完成后，调节溶液pH值为10.5，于70℃下碱解处理5h，随后调节pH至中性；随后将溶液先通过分子量为10kDa的超滤膜分离，去除大分子物质，取流出液；然后再通过分子量为1kDa超滤膜分离，取截留液；
(7)高压均质后喷雾干燥即得分子量为1-10kDa的低聚肽；
(8)将步骤(4)得到的低聚糖与步骤(7)得到的低聚肽按照1：1的质量比进行充分混合即得。
实施例3
一种抗便秘组合物，其制备方法包括如下步骤：
(1)取桑椹、枸杞和黑芝麻按照5：3：2的质量比进行混合后进行粉碎，随后于100MPa超高压条件下处理10min；
(2)超高压处理后于70℃水提处理6h，随后将提取液浓缩至1/4体积后，加入3倍体积95％乙醇醇沉24h，回收乙醇收集沉淀并进行冷冻干燥，得到多糖混合物；
(3)取1g步骤(2)得到的多糖混合物溶解于5mL水中，先加入2.5mL浓度为5mmol/L的维生素C于35℃进行一次降解反应20min，随后再加入2.5mL浓度为5mmol/L的H2O2于30℃下进行二次降解反应1h；
(4)对步骤(3)反应后的产物先采用β-甘露聚糖酶40℃下酶解3h，再采用葡聚糖氧化酶30℃下酶解20min；酶解完成后进行微波处理2min，微波功率为800W，离心取上清；将上清先通过分子量为10kDa的超滤膜分离，去除大分子物质，取流出液；然后再通过分子量为1kDa超滤膜分离，取截留液，获得1-10kDa的低聚糖；
(5)取桑叶、黄豆、莲藕和甘薯按照5：2：1：2的质量比进行混合后置于15倍质量的水中进行磨浆，随后采用木瓜蛋白酶40℃下酶解1h，再采用α-淀粉酶30℃下酶解3h；
(6)酶解处理完成后，调节溶液pH值为10.5，于40℃下碱解处理5h，随后调节pH至中性；随后将溶液先通过分子量为10kDa的超滤膜分离，去除大分子物质，取流出液；然后再通过分子量为1kDa超滤膜分离，取截留液；
(7)高压均质后喷雾干燥即得分子量为1-10kDa的低聚肽；
(8)将步骤(4)得到的低聚糖与步骤(7)得到的低聚肽按照1：1的质量比进行充分混合即得。
对比例1
一种抗便秘组合物，其制备方法包括如下步骤：
(1)取桑椹、枸杞和黑芝麻按照5：3：2的质量比进行混合后进行粉碎，于75℃水提处理6h，随后将提取液浓缩至1/4体积后，加入3倍体积95％乙醇醇沉24h，回收乙醇收集沉淀并进行冷冻干燥，得到多糖混合物；
(2)取1g步骤(1)得到的多糖混合物溶解于10mL水中，先加入3mL浓度为5mmol/L的维生素C于35℃进行一次降解反应20min，随后再加入3mL浓度为5mmol/L的H2O2于30℃下进行二次降解反应1h；
(3)对步骤(2)反应后的产物先采用β-甘露聚糖酶45℃下酶解3h，再采用葡聚糖氧化酶40℃下酶解20min；酶解完成后进行微波处理2min，微波功率为800W，离心取上清；将上清先通过分子量为10kDa的超滤膜分离，去除大分子物质，取流出液；然后再通过分子量为1kDa超滤膜分离，取截留液，获得1-10kDa的低聚糖；
(4)取桑叶、黄豆、莲藕和甘薯按照5：2：1：2的质量比进行混合后置于15倍质量的水中进行磨浆，随后采用木瓜蛋白酶50℃下酶解1h，再采用α-淀粉酶40℃下酶解3h；
(5)酶解处理完成后，调节溶液pH值为10.5，于55℃下碱解处理5h，随后调节pH至中性；随后将溶液先通过分子量为10kDa的超滤膜分离，去除大分子物质，取流出液；然后再通过分子量为1kDa超滤膜分离，取截留液；
(6)高压均质后喷雾干燥即得分子量为1-10kDa的低聚肽；
(7)将步骤(3)得到的低聚糖与步骤(6)得到的低聚肽按照1：1的质量比进行充分混合即得。
对比例2
一种抗便秘组合物，其制备方法包括如下步骤：
(1)取桑椹、枸杞和黑芝麻按照5：3：2的质量比进行混合后进行粉碎，随后于100MPa超高压条件下处理15min；
(2)超高压处理后于75℃水提处理6h，随后将提取液浓缩至1/4体积后，加入3倍体积95％乙醇醇沉24h，回收乙醇收集沉淀并进行冷冻干燥，得到多糖混合物；
(3)取1g步骤(2)得到的多糖混合物溶解于10mL水中，先加入3mL浓度为5mmol/L的维生素C于35℃进行一次降解反应20min，随后再加入3mL浓度为5mmol/L的H2O2于30℃下进行二次降解反应1h；
(4)对步骤(3)反应后的产物进行微波处理2min，微波功率为800W，随后采用β-甘露聚糖酶45℃下酶解3h，再采用葡聚糖氧化酶40℃下酶解20min；酶解完成后离心取上清；将上清先通过分子量为10kDa的超滤膜分离，去除大分子物质，取流出液；然后再通过分子量为1kDa超滤膜分离，取截留液，获得1-10kDa的低聚糖；
(5)取桑叶、黄豆、莲藕和甘薯按照5：2：1：2的质量比进行混合后置于15倍质量的水中进行磨浆，随后采用木瓜蛋白酶50℃下酶解1h，再采用α-淀粉酶40℃下酶解3h；
(6)酶解处理完成后，调节溶液pH值为10.5，于55℃下碱解处理5h，随后调节pH至中性；随后将溶液先通过分子量为10kDa的超滤膜分离，去除大分子物质，取流出液；然后再通过分子量为1kDa超滤膜分离，取截留液；
(7)高压均质后喷雾干燥即得分子量为1-10kDa的低聚肽；
(8)将步骤(4)得到的低聚糖与步骤(7)得到的低聚肽按照1：1的质量比进行充分混合即得。
对比例3
一种抗便秘组合物，其制备方法包括如下步骤：
(1)取桑椹、枸杞和黑芝麻按照5：3：2的质量比进行混合后进行粉碎，随后于100MPa超高压条件下处理15min；
(2)超高压处理后于75℃水提处理6h，随后将提取液浓缩至1/4体积后，加入3倍体积95％乙醇醇沉24h，回收乙醇收集沉淀并进行冷冻干燥，得到多糖混合物；
(3)取1g步骤(2)得到的多糖混合物溶解于10mL水中，先加入3mL浓度为5mmol/L的维生素C于35℃进行一次降解反应20min，随后再加入3mL浓度为5mmol/L的H2O2于30℃下进行二次降解反应1h；
(4)对步骤(3)反应后的产物先采用β-甘露聚糖酶45℃下酶解3h，再采用葡聚糖氧化酶40℃下酶解20min；酶解完成后离心取上清；将上清先通过分子量为10kDa的超滤膜分离，去除大分子物质，取流出液；然后再通过分子量为1kDa超滤膜分离，取截留液，获得1-10kDa的低聚糖；
(5)取桑叶、黄豆、莲藕和甘薯按照5：2：1：2的质量比进行混合后置于15倍质量的水中进行磨浆，随后采用木瓜蛋白酶50℃下酶解1h，再采用α-淀粉酶40℃下酶解3h；
(6)酶解处理完成后，调节溶液pH值为10.5，于55℃下碱解处理5h，随后调节pH至中性；随后将溶液先通过分子量为10kDa的超滤膜分离，去除大分子物质，取流出液；然后再通过分子量为1kDa超滤膜分离，取截留液；
(7)高压均质后喷雾干燥即得分子量为1-10kDa的低聚肽；
(8)将步骤(4)得到的低聚糖与步骤(7)得到的低聚肽按照1：1的质量比进行充分混合即得。
对比例4
一种抗便秘组合物，其制备方法包括如下步骤：
(1)取桑椹、枸杞和黑芝麻按照5：3：2的质量比进行混合后进行粉碎，随后于100MPa超高压条件下处理15min；
(2)超高压处理后于75℃水提处理6h，随后将提取液浓缩至1/4体积后，加入3倍体积95％乙醇醇沉24h，回收乙醇收集沉淀并进行冷冻干燥，得到多糖混合物；
(3)取1g步骤(2)得到的多糖混合物溶解于10mL水中，先加入3mL浓度为5mmol/L的维生素C于35℃进行一次降解反应20min，随后再加入3mL浓度为5mmol/L的H2O2于30℃下进行二次降解反应1h；
(4)对步骤(3)反应后的产物先采用β-甘露聚糖酶45℃下酶解3h，再采用葡聚糖氧化酶40℃下酶解20min；酶解完成后进行微波处理2min，微波功率为800W，离心取上清；将上清先通过分子量为10kDa的超滤膜分离，去除大分子物质，取流出液；然后再通过分子量为1kDa超滤膜分离，取截留液，获得1-10kDa的低聚糖；
(5)取桑叶、黄豆、莲藕和甘薯按照5：2：1：2的质量比进行混合后置于15倍质量的水中进行磨浆，随后采用葡聚糖酶50℃下酶解1h，再采用糖化酶40℃下酶解3h；
(6)酶解处理完成后，调节溶液pH值为10.5，于55℃下碱解处理5h，随后调节pH至中性；随后将溶液先通过分子量为10kDa的超滤膜分离，去除大分子物质，取流出液；然后再通过分子量为1kDa超滤膜分离，取截留液；
(7)高压均质后喷雾干燥即得分子量为1-10kDa的低聚肽；
(8)将步骤(4)得到的低聚糖与步骤(7)得到的低聚肽按照1：1的质量比进行充分混合即得。
对比例5
一种抗便秘组合物，其制备方法包括如下步骤：
(1)取桑椹、枸杞和黑芝麻按照5：3：2的质量比进行混合后进行粉碎，随后于100MPa超高压条件下处理15min；
(2)超高压处理后于75℃水提处理6h，随后将提取液浓缩至1/4体积后，加入3倍体积95％乙醇醇沉24h，回收乙醇收集沉淀并进行冷冻干燥，得到多糖混合物；
(3)取1g步骤(2)得到的多糖混合物溶解于10mL水中，先加入3mL浓度为5mmol/L的维生素C于35℃进行一次降解反应20min，随后再加入3mL浓度为5mmol/L的H2O2于30℃下进行二次降解反应1h；
(4)对步骤(3)反应后的产物先采用β-甘露聚糖酶45℃下酶解3h，再采用葡聚糖氧化酶40℃下酶解20min；酶解完成后进行微波处理2min，微波功率为800W，离心取上清；将上清先通过分子量为10kDa的超滤膜分离，去除大分子物质，取流出液；然后再通过分子量为1kDa超滤膜分离，取截留液，获得1-10kDa的低聚糖；
(5)取桑叶、黄豆、莲藕和甘薯按照5：2：1：2的质量比进行混合后置于15倍质量的水中进行磨浆；
(6)调节溶液pH值为10.5，于55℃下碱解处理5h，随后调节pH至中性；随后将溶液先通过分子量为10kDa的超滤膜分离，去除大分子物质，取流出液；然后再通过分子量为1kDa超滤膜分离，取截留液；
(7)高压均质后喷雾干燥即得分子量为1-10kDa的低聚肽；
(8)将步骤(4)得到的低聚糖与步骤(7)得到的低聚肽按照1：1的质量比进行充分混合即得。
对比例6
一种抗便秘组合物，其制备方法包括如下步骤：
(1)取桑椹、枸杞和黑芝麻按照5：3：2的质量比进行混合后进行粉碎，随后于100MPa超高压条件下处理15min；
(2)超高压处理后于75℃水提处理6h，随后将提取液浓缩至1/4体积后，加入3倍体积95％乙醇醇沉24h，回收乙醇收集沉淀并进行冷冻干燥，得到多糖混合物；
(3)取1g步骤(2)得到的多糖混合物溶解于10mL水中，先加入3mL浓度为5mmol/L的维生素C于35℃进行一次降解反应20min，随后再加入3mL浓度为5mmol/L的H2O2于30℃下进行二次降解反应1h；
(4)对步骤(3)反应后的产物先采用β-甘露聚糖酶45℃下酶解3h，再采用葡聚糖氧化酶40℃下酶解20min；酶解完成后进行微波处理2min，微波功率为800W，离心取上清；将上清先通过分子量为10kDa的超滤膜分离，去除大分子物质，取流出液；然后再通过分子量为1kDa超滤膜分离，取截留液，获得1-10kDa的低聚糖；
(5)取桑叶、黄豆、莲藕和甘薯按照5：2：1：2的质量比进行混合后置于15倍质量的水中进行磨浆，调节溶液pH值为10.5，于55℃下碱解处理5h，随后调节pH至中性；
(6)随后采用木瓜蛋白酶50℃下酶解1h，再采用α-淀粉酶40℃下酶解3h；随后将酶解液先通过分子量为10kDa的超滤膜分离，去除大分子物质，取流出液；然后再通过分子量为1kDa超滤膜分离，取截留液；
(7)高压均质后喷雾干燥即得分子量为1-10kDa的低聚肽；
(8)将步骤(4)得到的低聚糖与步骤(7)得到的低聚肽按照1：1的质量比进行充分混合即得。
验证例1
取4-5周龄的雌性Balb/c小鼠，按照本领域的常规方法进行便秘模型的造模；将造模成功的小鼠随机分为9组，记为组1-组9，每组10只。其中组1-组9分别给予实施例1-3以及对比例1-6制备得到的抗便秘组合物，给药剂量为100mg/kg，给药体积为1mL/100g(小鼠体重)，给药方式为灌胃给药，连续给药10天；另设一空白对照组组10，不进行造模处理，且正常饮食。末次给药后，每只小鼠单独饲养，自由饮食和进食，观察并记录每组10只小鼠12h内排便重量，结果如下表1所示。
表1各组小鼠排便情况
粪便重量值越高，说明治疗便秘的效果越好。由上述结果可知，经本发明实施例抗便秘组合物治疗后的小鼠粪便重量远远高于其他各对比例组小鼠，甚至接近于空白对照组，几乎恢复至正常，说明本发明抗便秘组合物能够有效促进排便功能。
在给药结束后，对各组小鼠禁食处理16h(饮水不受限)，随后对各组小鼠经口给予剂量为10mg/kg的复方地芬诺酯；给药30min后，对各组小鼠给予相应受试物的墨汁，并在25min后颈椎脱臼处死小鼠，解剖剪取幽门至下端盲肠处小肠并轻拉平铺至直线，测量所剪取的小肠长度(及小肠总长度)及幽门到活性炭运动前端的长度(及墨汁推进长度)，按照如下公式计算墨汁推进率：
实验结果如下表2所示。
表2各组小鼠墨汁推进率情况
由上述结果可知，本发明实施例制备得到的抗便秘组合物能够有效促进小肠蠕动，恢复便秘后小肠功能，且效果显著优于其他各对照组。
进一步地，取各组小鼠的粪便，采用气相色谱质谱联用法对其进行短链脂肪酸含量的检测，具体步骤如下：取0.3g粪便样品加入2.0mL磷酸水溶液(1：3)，涡旋匀浆2min，加入乙醚萃取10min，0℃条件下，4000r/min离心20min，取上清；再加入1.0mL乙醚萃取10min，以同样条件再次离心20min；将两次萃取液合并挥发至1.0mL以内，进样分析，并以乙酸、丙酸、丁酸的含量作为总短链脂肪酸浓度。检测结果如下表3所示。
表3实施例1-3和对比例1-6对小鼠粪便短链脂肪酸含量的影响
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由上述结果可知，本发明实施例可以有效促进小鼠肠道代谢产生乙酸、丙酸和丁酸，效果明显优于对比例。原因在于本发明实施例制备的抗便秘组合物可刺激肠内益生菌产生乙酸、丙酸和丁酸等短链脂肪酸，从而降低肠道环境pH，抑制肠内腐败菌的生长，增加肠内有益菌的丰度，平衡肠道菌群，达到治疗机体便秘的目的。
验证例2
招募360名年龄在18-40岁之间的功能性便秘患者，所招募患者最近3个月内至少出现2个如下症状：(1)每周的排便次数少于3次；(2)至少有25％的排便性状呈块状及硬便，不用泻药很少见松散便；(3)至少25％的排便自觉费力。功能性便秘的诊断标准参照《罗马III》。将受试者随机分为9组，分别给予本发明实施例1-3以及对比例1-6制备得到的抗便秘组合物，口服给药，2g/次，2次/天，分别于早饭前和晚饭后服用，连续治疗2周，期间停用其他通便药。效果判断标准为：显效：治疗后大便次数及形状均恢复正常；无效：大便次数及形状均无显著改善。试验结果如下表4所示。
表4实施例1-3和对比例1-6对功能性便秘的效果改善情况
由上述结果可知，实施例组受试者显效率明显高于各组对比例。这表面本发明实施例制备的抗便秘组合物具有较好的抗便秘、润肠通便的效果。
进一步地，采集各组受试者治疗前后的血清样本，采用ELISA检测其血清胃动素。结果如下表5所示。
表5治疗前后各组胃动素变化情况
胃动素作为消化道激素之一，具有增加结肠运动的作用。当血液中胃动素水平升高时，能够加速肠道蠕动，使肠内容物通过加快，是改善便秘的指标之一。由上述结果可知，治疗前各组血清胃动素水平差异不大，而经治疗后各组血清胃动素水平均有提高，且本发明实施例1组明显高于其他各对比例组。说明摄入本发明实施例制备得到的抗便秘组合物，能显著提高体内胃动素的水平，进而改善便秘情况。
以上具体实施方式部分对本发明所涉及的分析方法进行了具体的介绍。应当注意的是，上述介绍仅是为了帮助本领域技术人员更好地理解本发明的方法及思路，而不是对相关内容的限制。在不脱离本发明原理的情况下，本领域技术人员还可以对本发明进行适当的调整或修改，上述调整和修改也应当属于本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种抗便秘组合物，包含低聚糖和低聚肽；其特征在于，所述低聚糖的分子量为1-10kDa，所述低聚肽的分子量为1-10kDa；
所述低聚糖通过如下方法制备得到：
(1.1)取桑椹、枸杞和黑芝麻进行粉碎，随后于超高压条件下进行处理；
(1.2)超高压处理后进行水提处理，随后将提取液浓缩至1/4体积后，加入乙醇进行醇沉，回收乙醇收集沉淀并进行冷冻干燥，得到多糖混合物；
(1.3)取步骤(1.2)得到的多糖混合物溶解于水中，先加入维生素C进行一次降解反应，随后再加入H2O2进行二次降解反应；
(1.4)对步骤(1.3)反应后的产物进行酶解处理；酶解完成后进行微波处理，离心取上清后进行膜分离，冷冻干燥即得；
所述低聚肽通过如下方法制备得到：
(2.1)取桑叶、黄豆、莲藕和甘薯置于水中进行磨浆，随后进行酶解处理；
(2.2)酶解处理完成后，调节溶液pH值进行碱解处理，随后调节pH至中性并进行膜分离；
(2.3)高压均质后喷雾干燥即得。
2.根据权利要求1所述的抗便秘组合物，其特征在于，步骤(1.1)中所述超高压处理的条件为：压力100MPa，时间10-20min。
3.根据权利要求1所述的抗便秘组合物，其特征在于，步骤(1.4)中所述酶解处理具体为：先采用β-甘露聚糖酶40-50℃下酶解3h，再采用葡聚糖氧化酶30-50℃下酶解20min。
4.根据权利要求1所述的抗便秘组合物，其特征在于，步骤(1.4)中所述微波处理的条件为：功率800W，时间2min。
5.根据权利要求1所述的抗便秘组合物，其特征在于，步骤(2.1)中所述酶解处理具体为：先采用木瓜蛋白酶40-55℃下酶解1h，再采用α-淀粉酶30-50℃下酶解3h。
6.根据权利要求1所述的抗便秘组合物，其特征在于，步骤(2.2)中所述碱解处理的条件为：pH值10.5，温度40-70℃，时间5h。
7.根据权利要求1-6任一项所述的抗便秘组合物，其特征在于，所述抗便秘组合物中还含有功能性和/或非功能性辅料。
8.一种抗便秘组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)取桑椹、枸杞和黑芝麻进行粉碎，随后于超高压条件下进行处理；
(2)超高压处理后进行水提处理，随后将提取液浓缩至1/4体积后，加入乙醇进行醇沉，回收乙醇收集沉淀并进行冷冻干燥，得到多糖混合物；
(3)取步骤(2)得到的多糖混合物溶解于水中，先加入维生素C进行一次降解反应，随后再加入H2O2进行二次降解反应；
(4)对步骤(3)反应后的产物进行酶解处理；酶解完成后进行微波处理，离心取上清后进行膜分离，冷冻干燥即得低聚糖；
(5)取桑叶、黄豆、莲藕和甘薯置于水中进行磨浆，随后进行酶解处理；
(6)酶解处理完成后，调节溶液pH值进行碱解处理，随后调节pH至中性并进行膜分离；
(7)高压均质后喷雾干燥即得低聚肽；
(8)将步骤(4)得到的低聚糖与步骤(7)得到的低聚肽充分混合即得。
9.根据权利要求1-7任一项所述的抗便秘组合物在制备促进肠道蠕动及抗便秘的产品中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述产品选自食品、保健品中的一种或多种。
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2023
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