CN116602411A - 一种调节肠道菌群的组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种调节肠道菌群的组合物及其制备方法和应用。本发明以桑椹、火龙果、香蕉、桑叶、黑豆和芡实等为原料,对桑椹、火龙果、香蕉进行特定工艺的两次酶解、超声等处理,对、桑叶、黑豆、芡实进行特定工艺的酶解、酸解等处理,能够有效提取其中具有调节肠道菌群的特定低聚糖和低聚肽成分。以所提取获得的低聚糖和低聚肽成分作为活性成分,能够有效恢复体内乳酸菌及双歧杆菌水平、刺激肠内短链脂肪酸的产生、平衡肠道内菌群、降低体内IL‑6炎症因子水平,进而恢复肠道功能,改善腹泻症状。同时由于本发明的各活性成分均来源于天然产物提取物,安全性更好,充分实现了对农作物的高效利用,具有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于天然产物应用领域,尤其涉及一种调节肠道菌群的组合物及其制备方法和应用。
背景技术
人类肠道中的微生物数量是人体细胞的10倍,这些庞大的微生物组成了一个复杂生态群落,该生态群落健康状况可直接影响宿主生理的许多方面,包括食物摄入、维生素的产生和疾病的发病机制等。大量研究表明,肠道微生物与宿主健康有关,有益微生物的活动可以增强肠道上皮保障功能、减少炎症反应、调节免疫反应。
植物资源的多糖、多肽等活性成分,如桑椹多糖、香蕉多糖、桑叶多肽和黑豆多肽具有降血糖、抗炎等作用,在一系列慢性疾病例如癌症、2型糖尿病、高血脂、心血管疾病和肥胖症等中应用广泛。但传统的多糖、多肽由于分子量过大在水中溶解度有限,制约了其使用范围,所以把大分子多糖和多肽水解成分子量较小的低聚糖和低聚肽,可以拓宽其应用领域。目前现有工艺提取的植物资源低聚糖和低聚肽,只是对植物资源进行简单的粉碎混合,或进行浸提、蒸煮,其活性低聚糖和低聚肽成分难以提取,不能很好地发挥调节肠道菌群作用。因此,利用植物资源成分进行精炼提取,制备一种高效提取、效果稳定、能调节肠道菌群的活性组合物显得尤为重要。
发明内容
本发明的目的在于解决现有技术中所存在的问题,从而提供了一种调节肠道菌群及其制备方法,通过采用特定的工艺步骤从桑椹、火龙果、香蕉、桑叶、黑豆和芡实中提取特定的低聚糖和低聚肽作为活性成分,可以有效恢复体内乳酸菌及双歧杆菌水平、刺激肠内短链脂肪酸的产生、平衡肠道内菌群、降低体内IL-6炎症因子水平,进而恢复肠道功能,改善腹泻症状,安全性好,同时充分实现了对农作物的高效利用,具有广阔的应用前景。
为达到上述目的,本发明是通过如下手段得以实现的:
本发明第一方面提供了一种调节肠道菌群的组合物,包含低聚糖和低聚肽;所述低聚糖的分子量为5-20kDa,所述低聚肽的分子量为5-20kDa;
所述低聚糖通过如下方法制备得到:
(1.1)取桑椹、火龙果和香蕉进行粉碎后加入水搅拌均匀,随后加入果胶素酶进行一次酶解处理;
(1.2)酶解完成后进行水提处理,随后将提取液浓缩至1/3体积,加入乙醇进行醇沉,回收乙醇收集沉淀并进行冷冻干燥,得到多糖混合物;
(1.3)取步骤(1.2)得到的多糖混合物溶解于水中,先加入H2O2进行一次降解反应,随后再加入维生素C进行二次降解反应;
(1.4)对步骤(1.3)反应后的产物进行二次酶解处理;二次酶解完成后加入水进行超声处理,离心取上清后进行膜分离,冷冻干燥即得;
所述低聚肽通过如下方法制备得到:
(2.1)取桑叶、黑豆和芡实置于水中进行磨浆,随后进行酶解处理;
(2.2)酶解处理完成后,调节溶液pH值进行酸解处理,随后调节pH至中性并进行膜分离;
(2.3)高压均质后喷雾干燥即得。
作为优选地,步骤(1.1)中所述桑椹、火龙果和香蕉的质量比为5:2:3。
作为优选地,步骤(1.1)中所述一次酶解的条件为:温度40-60℃,时间10min。
作为优选地,步骤(1.1)中加入水的质量为桑椹、火龙果和香蕉总质量的1-2倍。
作为优选地,步骤(1.2)中所述水提处理的条件为:温度80-90℃,时间5h。
作为优选地,步骤(1.2)中所述醇沉的条件为:时间24h,所加入乙醇的浓度为95%,所加入乙醇的体积为提取液浓缩后体积的3倍。
作为优选地,步骤(1.3)中所述一次降解反应的条件为:温度30℃,时间10min。
作为优选地,步骤(1.3)中所述二次降解反应的条件为:温度40℃,时间30min。
作为优选地,步骤(1.3)中所述多糖混合物与水的质量体积比为1:10-30;最优选地,所述多糖混合物与水的质量体积比为1:20。
应理解的是,在无特别说明的情况,本发明上下文中所述“质量体积比”应按照本领域的常规方式进行理解,即固体物质的质量(单位为g)与液体体积(单位为mL)的比值,例如当“多糖混合物与水为1:15”时,如若多糖混合物的添加量为1g,则水的添加量为15mL。
作为优选地,步骤(1.3)中所述H2O2的浓度为10mmol/L,体积为所述水的1-2倍;所述维生素C的浓度为10mmol/L,体积为所述水的0.1-0.5倍。
作为优选地,步骤(1.4)中所述二次酶解处理具体为:先采用糖化酶35-55℃下酶解3-5h,再采用葡聚糖酶40-60℃下酶解0.5-1h。
作为优选地,步骤(1.4)中所述超声处理的条件为:功率800W,时间10min,超声处理可以有效降低低聚糖的粘度。
作为优选地,步骤(1.4)中所述膜分离具体为:上清先通过分子量为20kDa的超滤膜分离,去除大分子物质,取流出液;然后再通过分子量为5kDa超滤膜分离,取截留液。此目的为获得5-20kDa的低聚糖。
作为优选地,步骤(2.1)中所述桑叶、黑豆和芡实的质量比为5:3:2。
作为优选地,步骤(2.1)中磨浆时桑叶、黑豆和芡实与水的质量比为1:10。
作为优选地,步骤(2.1)中所述酶解处理具体为:先采用α-淀粉酶30-50℃下酶解2h,再采用中性蛋白酶40-60℃下酶解3-4h。
作为优选地,步骤(2.2)中所述酸解处理的条件为:pH值3.5,温度50-80℃,时间4h。
作为优选地,步骤(2.2)中所述膜分离具体为:溶液先通过分子量为20kDa的超滤膜分离,去除大分子物质,取流出液;然后再通过分子量为5kDa超滤膜分离,取截留液。此目的为获得5-20kDa的低聚肽。
作为优选地,所述组合物中还含有功能性和/或非功能性辅料。
作为优选地,所述功能性和/或非功能性辅料选自填充剂、崩解剂、润滑剂、抗氧化剂、着色剂、抑菌剂、螯合剂中的一种或多种。
本发明第二方面提供了一种调节肠道菌群的组合物的制备方法,包括如下步骤:
(1)取桑椹、火龙果和香蕉进行粉碎后加入水搅拌均匀,随后加入果胶素酶进行一次酶解处理;
(2)酶解完成后进行水提处理,随后将提取液浓缩至1/3体积,加入乙醇进行醇沉,回收乙醇收集沉淀并进行冷冻干燥,得到多糖混合物;
(3)取步骤(2)得到的多糖混合物溶解于水中,先加入H2O2进行一次降解反应,随后再加入维生素C进行二次降解反应;
(4)对步骤(3)反应后的产物进行二次酶解处理;二次酶解完成后加入水进行超声处理,离心取上清后进行膜分离,冷冻干燥即得低聚糖;
(5)取桑叶、黑豆和芡实置于水中进行磨浆,随后进行酶解处理;
(6)酶解处理完成后,调节溶液pH值进行酸解处理,随后调节pH至中性并进行膜分离;
(7)高压均质后喷雾干燥即得低聚肽;
(8)将步骤(4)得到的低聚糖与步骤(7)得到的低聚肽充分混合即得。
作为优选地,步骤(1)中所述桑椹、火龙果和香蕉的质量比为5:2:3。
作为优选地,步骤(1)中所述一次酶解的条件为:温度40-60℃,时间10min。
作为优选地,步骤(1)中加入水的质量为桑椹、火龙果和香蕉总质量的1-2倍。
作为优选地,步骤(2)中所述水提处理的条件为:温度80-90℃,时间5h。
作为优选地,步骤(2)中所述醇沉的条件为:时间24h,所加入乙醇的浓度为95%,所加入乙醇的体积为提取液浓缩后体积的3倍。
作为优选地,步骤(3)中所述一次降解反应的条件为:温度30℃,时间10min。
作为优选地,步骤(3)中所述二次降解反应的条件为:温度40℃,时间30min。
作为优选地,步骤(3)中所述多糖混合物与水的质量体积比为1:10-30;最优选地,所述多糖混合物与水的质量体积比为1:20。
作为优选地,步骤(3)中所述H2O2的浓度为10mmol/L,体积为所述水的1-2倍;所述维生素C的浓度为10mmol/L,体积为所述水的0.1-0.5倍。
作为优选地,步骤(4)中所述二次酶解处理具体为:先采用糖化酶35-55℃下酶解3-5h,再采用葡聚糖酶40-60℃下酶解0.5-1h。
作为优选地,步骤(4)中所述超声处理的条件为:功率800W,时间10min,超声处理可以有效降低低聚糖的粘度。
作为优选地,步骤(4)中所述膜分离具体为:上清先通过分子量为20kDa的超滤膜分离,去除大分子物质,取流出液;然后再通过分子量为5kDa超滤膜分离,取截留液。此目的为获得5-20kDa的低聚糖。
作为优选地,步骤(2.1)中所述桑叶、黑豆和芡实的质量比为5:3:2。
作为优选地,步骤(5)中磨浆时桑叶、黑豆和芡实与水的质量比为1:10。
作为优选地,步骤(5)中所述酶解处理具体为:先采用α-淀粉酶30-50℃下酶解2h,再采用中性蛋白酶40-60℃下酶解3-4h。
作为优选地,步骤(6)中所述酸解处理的条件为:pH值3.5,温度50-80℃,时间4h。
作为优选地,步骤(6)中所述膜分离具体为:溶液先通过分子量为20kDa的超滤膜分离,去除大分子物质,取流出液;然后再通过分子量为5kDa超滤膜分离,取截留液。此目的为获得5-20kDa的低聚肽。
作为优选地,步骤(8)中所述低聚糖与低聚肽按照质量为1:1进行混合。
作为优选地,步骤(8)中任选地还混合有功能性和/或非功能性辅料。
作为优选地,所述功能性和/或非功能性辅料选自填充剂、崩解剂、润滑剂、抗氧化剂、着色剂、抑菌剂、螯合剂中的一种或多种。
本发明第三方面提供了上述调节肠道菌群的组合物在制备调节肠道菌群的产品中的应用。
作为优选地,所述产品选自食品、保健品中的一种或多种。
本发明以桑椹、火龙果、香蕉、桑叶、黑豆和芡实等为原料,通过特定的工艺方法从中提取获得了特定低聚糖和低聚肽作为活性成分。所述低聚糖和低聚糖不可被消化吸收,可对肠道菌群进行调节,使其重新达到平衡状态,且可选择性地刺激结肠中部分有益微生物的生长代谢从而维持机体健康。当摄入本发明的低聚糖和低聚肽后,可定向增加肠内有益菌的丰度,增加其种间竞争力,从而优化肠道菌群系统的构成。本发明的活性组合物在肠道微生物群的作用下最终降解成一系列短链脂肪酸,该过程为肠道微生物供能的同时,其产物短链脂肪酸又反过来调节微生物生态和机体肠道环境健康,从而实现代谢调控作用。
本发明相对于现有的技术,具有如下有益效果:
本发明以桑椹、火龙果、香蕉、桑叶、黑豆和芡实等为原料,对桑椹、火龙果、香蕉进行特定工艺的两次酶解、超声等处理,对、桑叶、黑豆、芡实进行特定工艺的酶解、酸解等处理,能够有效提取其中具有调节肠道菌群的特定低聚糖和低聚肽成分。以所提取获得的低聚糖和低聚肽成分作为活性成分,能够有效恢复体内乳酸菌及双歧杆菌水平、刺激肠内短链脂肪酸的产生、平衡肠道内菌群、降低体内IL-6炎症因子水平,进而恢复肠道功能,改善腹泻症状。同时由于本发明的各活性成分均来源于天然产物提取物,安全性更好,充分实现了对农作物的高效利用,具有广阔的应用前景。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确,以下参照实施例对本发明作进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。除非另有定义,下文中所使用的所有专业术语与本领域技术人员通常理解的含义相同。本文中所使用的专业术语只是为了描述具体实施例的目的,并不是旨在限制本发明的保护范围。
实施例1
一种调节肠道菌群的组合物,其制备方法包括如下步骤:
(1)取桑椹、火龙果和香蕉按照质量比为5:2:3充分混合并进行粉碎后加入等量的水搅拌均匀,随后加入果胶素酶于50℃进行一次酶解处理10min;
(2)酶解完成后于85℃水提处理5h,随后将提取液浓缩至1/3体积,加入3倍体积95%乙醇醇沉24h,回收乙醇收集沉淀并进行冷冻干燥,得到多糖混合物;
(3)取0.5g步骤(2)得到的多糖混合物溶解于10mL水中,先加入15mL浓度为10mmol/L的H2O2于30℃进行一次降解反应10min,随后再加入3mL浓度为10mmol/L的维生素C于40℃进行二次降解反应30min;
(4)对步骤(3)反应后的产物先采用糖化酶45℃下酶解4h,再采用葡聚糖酶50℃下酶解0.75h;二次酶解完成后加入水进行超声处理10min,超声处理的功率为800W,离心取上清;将上清先通过分子量为20kDa的超滤膜分离,去除大分子物质,取流出液;然后再通过分子量为5kDa超滤膜分离,取截留液,获得5-20kDa的低聚糖;
(5)取桑叶、黑豆和芡实按照质量比为5:3:2充分混合并置于10倍质量的水中进行磨浆,随后采用α-淀粉酶40℃下酶解2h,再采用中性蛋白酶50℃下酶解3.5h;
(6)酶解处理完成后,调节溶液pH值为3.5,于65℃下酸解处理4h,随后调节pH至中性;随后将溶液先通过分子量为20kDa的超滤膜分离,去除大分子物质,取流出液;然后再通过分子量为5kDa超滤膜分离,取截留液;
(7)高压均质后喷雾干燥即得分子量为5-20kDa的低聚肽;
(8)将步骤(4)得到的低聚糖与步骤(7)得到的低聚肽按照1:1的质量比进行充分混合即得。
实施例2
一种调节肠道菌群的组合物,其制备方法包括如下步骤:
(1)取桑椹、火龙果和香蕉按照质量比为5:2:3充分混合并进行粉碎后加入等量的水搅拌均匀,随后加入果胶素酶于60℃进行一次酶解处理10min;
(2)酶解完成后于90℃水提处理5h,随后将提取液浓缩至1/3体积,加入3倍体积95%乙醇醇沉24h,回收乙醇收集沉淀并进行冷冻干燥,得到多糖混合物;
(3)取0.5g步骤(2)得到的多糖混合物溶解于15mL水中,先加入30mL浓度为10mmol/L的H2O2于30℃进行一次降解反应10min,随后再加入7.5mL浓度为10mmol/L的维生素C于40℃进行二次降解反应30min;
(4)对步骤(3)反应后的产物先采用糖化酶55℃下酶解3h,再采用葡聚糖酶60℃下酶解0.5h;二次酶解完成后加入水进行超声处理10min,超声处理的功率为800W,离心取上清;将上清先通过分子量为20kDa的超滤膜分离,去除大分子物质,取流出液;然后再通过分子量为5kDa超滤膜分离,取截留液,获得5-20kDa的低聚糖;
(5)取桑叶、黑豆和芡实按照质量比为5:3:2充分混合并置于10倍质量的水中进行磨浆,随后采用α-淀粉酶50℃下酶解2h,再采用中性蛋白酶60℃下酶解3h;
(6)酶解处理完成后,调节溶液pH值为3.5,于80℃下酸解处理4h,随后调节pH至中性;随后将溶液先通过分子量为20kDa的超滤膜分离,去除大分子物质,取流出液;然后再通过分子量为5kDa超滤膜分离,取截留液;
(7)高压均质后喷雾干燥即得分子量为5-20kDa的低聚肽;
(8)将步骤(4)得到的低聚糖与步骤(7)得到的低聚肽按照1:1的质量比进行充分混合即得。
实施例3
一种调节肠道菌群的组合物,其制备方法包括如下步骤:
(1)取桑椹、火龙果和香蕉按照质量比为5:2:3充分混合并进行粉碎后加入等量的水搅拌均匀,随后加入果胶素酶于40℃进行一次酶解处理10min;
(2)酶解完成后于80℃水提处理5h,随后将提取液浓缩至1/3体积,加入3倍体积95%乙醇醇沉24h,回收乙醇收集沉淀并进行冷冻干燥,得到多糖混合物;
(3)取0.5g步骤(2)得到的多糖混合物溶解于5mL水中,先加入5mL浓度为10mmol/L的H2O2于30℃进行一次降解反应10min,随后再加入0.5mL浓度为10mmol/L的维生素C于40℃进行二次降解反应30min;
(4)对步骤(3)反应后的产物先采用糖化酶35℃下酶解5h,再采用葡聚糖酶40℃下酶解1h;二次酶解完成后加入水进行超声处理10min,超声处理的功率为800W,离心取上清;将上清先通过分子量为20kDa的超滤膜分离,去除大分子物质,取流出液;然后再通过分子量为5kDa超滤膜分离,取截留液,获得5-20kDa的低聚糖;
(5)取桑叶、黑豆和芡实按照质量比为5:3:2充分混合并置于10倍质量的水中进行磨浆,随后采用α-淀粉酶30℃下酶解2h,再采用中性蛋白酶40℃下酶解4h;
(6)酶解处理完成后,调节溶液pH值为3.5,于50℃下酸解处理4h,随后调节pH至中性;随后将溶液先通过分子量为20kDa的超滤膜分离,去除大分子物质,取流出液;然后再通过分子量为5kDa超滤膜分离,取截留液;
(7)高压均质后喷雾干燥即得分子量为5-20kDa的低聚肽;
(8)将步骤(4)得到的低聚糖与步骤(7)得到的低聚肽按照1:1的质量比进行充分混合即得。
对比例1
一种调节肠道菌群的组合物,其制备方法包括如下步骤:
(1)取桑椹、火龙果和香蕉按照质量比为5:2:3充分混合并进行粉碎后加入等量的水搅拌均匀;
(2)于85℃水提处理5h,随后将提取液浓缩至1/3体积,加入3倍体积95%乙醇醇沉24h,回收乙醇收集沉淀并进行冷冻干燥,得到多糖混合物;
(3)取0.5g步骤(2)得到的多糖混合物溶解于10mL水中,先加入15mL浓度为10mmol/L的H2O2于30℃进行一次降解反应10min,随后再加入3mL浓度为10mmol/L的维生素C于40℃进行二次降解反应30min;
(4)对步骤(3)反应后的产物先采用糖化酶45℃下酶解4h,再采用葡聚糖酶50℃下酶解0.75h;酶解完成后加入水进行超声处理10min,超声处理的功率为800W,离心取上清;将上清先通过分子量为20kDa的超滤膜分离,去除大分子物质,取流出液;然后再通过分子量为5kDa超滤膜分离,取截留液,获得5-20kDa的低聚糖;
(5)取桑叶、黑豆和芡实按照质量比为5:3:2充分混合并置于10倍质量的水中进行磨浆,随后采用α-淀粉酶40℃下酶解2h,再采用中性蛋白酶50℃下酶解3.5h;
(6)酶解处理完成后,调节溶液pH值为3.5,于65℃下酸解处理4h,随后调节pH至中性;随后将溶液先通过分子量为20kDa的超滤膜分离,去除大分子物质,取流出液;然后再通过分子量为5kDa超滤膜分离,取截留液;
(7)高压均质后喷雾干燥即得分子量为5-20kDa的低聚肽;
(8)将步骤(4)得到的低聚糖与步骤(7)得到的低聚肽按照1:1的质量比进行充分混合即得。
对比例2
一种调节肠道菌群的组合物,其制备方法包括如下步骤:
(1)取桑椹、火龙果和香蕉按照质量比为5:2:3充分混合并进行粉碎后加入等量的水搅拌均匀,随后加入果胶素酶于50℃进行一次酶解处理10min;
(2)酶解完成后于85℃水提处理5h,随后将提取液浓缩至1/3体积,加入3倍体积95%乙醇醇沉24h,回收乙醇收集沉淀并进行冷冻干燥,得到多糖混合物;
(3)取0.5g步骤(2)得到的多糖混合物溶解于10mL水中,先加入15mL浓度为10mmol/L的H2O2于30℃进行一次降解反应10min,随后再加入3mL浓度为10mmol/L的维生素C于40℃进行二次降解反应30min;
(4)对步骤(3)反应后的产物加入水进行超声处理10min,超声处理的功率为800W,随后采用糖化酶45℃下酶解4h,再采用葡聚糖酶50℃下酶解0.75h;二次酶解完成后离心取上清;将上清先通过分子量为20kDa的超滤膜分离,去除大分子物质,取流出液;然后再通过分子量为5kDa超滤膜分离,取截留液,获得5-20kDa的低聚糖;
(5)取桑叶、黑豆和芡实按照质量比为5:3:2充分混合并置于10倍质量的水中进行磨浆,随后采用α-淀粉酶40℃下酶解2h,再采用中性蛋白酶50℃下酶解3.5h;
(6)酶解处理完成后,调节溶液pH值为3.5,于65℃下酸解处理4h,随后调节pH至中性;随后将溶液先通过分子量为20kDa的超滤膜分离,去除大分子物质,取流出液;然后再通过分子量为5kDa超滤膜分离,取截留液;
(7)高压均质后喷雾干燥即得分子量为5-20kDa的低聚肽;
(8)将步骤(4)得到的低聚糖与步骤(7)得到的低聚肽按照1:1的质量比进行充分混合即得。
对比例3
一种调节肠道菌群的组合物,其制备方法包括如下步骤:
(1)取桑椹、火龙果和香蕉按照质量比为5:2:3充分混合并进行粉碎后加入等量的水搅拌均匀,随后加入果胶素酶于50℃进行一次酶解处理10min;
(2)酶解完成后于85℃水提处理5h,随后将提取液浓缩至1/3体积,加入3倍体积95%乙醇醇沉24h,回收乙醇收集沉淀并进行冷冻干燥,得到多糖混合物;
(3)取0.5g步骤(2)得到的多糖混合物溶解于10mL水中,先加入15mL浓度为10mmol/L的H2O2于30℃进行一次降解反应10min,随后再加入3mL浓度为10mmol/L的维生素C于40℃进行二次降解反应30min;
(4)对步骤(3)反应后的产物先采用糖化酶45℃下酶解4h,再采用葡聚糖酶50℃下酶解0.75h;二次酶解完成后离心取上清;将上清先通过分子量为20kDa的超滤膜分离,去除大分子物质,取流出液;然后再通过分子量为5kDa超滤膜分离,取截留液,获得5-20kDa的低聚糖;
(5)取桑叶、黑豆和芡实按照质量比为5:3:2充分混合并置于10倍质量的水中进行磨浆,随后采用α-淀粉酶40℃下酶解2h,再采用中性蛋白酶50℃下酶解3.5h;
(6)酶解处理完成后,调节溶液pH值为3.5,于65℃下酸解处理4h,随后调节pH至中性;随后将溶液先通过分子量为20kDa的超滤膜分离,去除大分子物质,取流出液;然后再通过分子量为5kDa超滤膜分离,取截留液;
(7)高压均质后喷雾干燥即得分子量为5-20kDa的低聚肽;
(8)将步骤(4)得到的低聚糖与步骤(7)得到的低聚肽按照1:1的质量比进行充分混合即得。
对比例4
一种调节肠道菌群的组合物,其制备方法包括如下步骤:
(1)取桑椹、火龙果和香蕉按照质量比为5:2:3充分混合并进行粉碎后加入等量的水搅拌均匀,随后加入果胶素酶于50℃进行一次酶解处理10min;
(2)酶解完成后于85℃水提处理5h,随后将提取液浓缩至1/3体积,加入3倍体积95%乙醇醇沉24h,回收乙醇收集沉淀并进行冷冻干燥,得到多糖混合物;
(3)取0.5g步骤(2)得到的多糖混合物溶解于10mL水中,先加入15mL浓度为10mmol/L的H2O2于30℃进行一次降解反应10min,随后再加入3mL浓度为10mmol/L的维生素C于40℃进行二次降解反应30min;
(4)对步骤(3)反应后的产物先采用糖化酶45℃下酶解4h,再采用葡聚糖酶50℃下酶解0.75h;二次酶解完成后加入水进行超声处理10min,超声处理的功率为800W,离心取上清;将上清先通过分子量为20kDa的超滤膜分离,去除大分子物质,取流出液;然后再通过分子量为5kDa超滤膜分离,取截留液,获得5-20kDa的低聚糖;
(5)取桑叶、黑豆和芡实按照质量比为5:3:2充分混合并置于10倍质量的水中进行磨浆,随后采用葡萄糖氧化酶40℃下酶解2h,再采用β-甘露聚糖酶50℃下酶解3.5h;
(6)酶解处理完成后,调节溶液pH值为3.5,于65℃下酸解处理4h,随后调节pH至中性;随后将溶液先通过分子量为20kDa的超滤膜分离,去除大分子物质,取流出液;然后再通过分子量为5kDa超滤膜分离,取截留液;
(7)高压均质后喷雾干燥即得分子量为5-20kDa的低聚肽;
(8)将步骤(4)得到的低聚糖与步骤(7)得到的低聚肽按照1:1的质量比进行充分混合即得。
对比例5
一种调节肠道菌群的组合物,其制备方法包括如下步骤:
(1)取桑椹、火龙果和香蕉按照质量比为5:2:3充分混合并进行粉碎后加入等量的水搅拌均匀,随后加入果胶素酶于50℃进行一次酶解处理10min;
(2)酶解完成后于85℃水提处理5h,随后将提取液浓缩至1/3体积,加入3倍体积95%乙醇醇沉24h,回收乙醇收集沉淀并进行冷冻干燥,得到多糖混合物;
(3)取0.5g步骤(2)得到的多糖混合物溶解于10mL水中,先加入15mL浓度为10mmol/L的H2O2于30℃进行一次降解反应10min,随后再加入3mL浓度为10mmol/L的维生素C于40℃进行二次降解反应30min;
(4)对步骤(3)反应后的产物先采用糖化酶45℃下酶解4h,再采用葡聚糖酶50℃下酶解0.75h;二次酶解完成后加入水进行超声处理10min,超声处理的功率为800W,离心取上清;将上清先通过分子量为20kDa的超滤膜分离,去除大分子物质,取流出液;然后再通过分子量为5kDa超滤膜分离,取截留液,获得5-20kDa的低聚糖;
(5)取桑叶、黑豆和芡实按照质量比为5:3:2充分混合并置于10倍质量的水中进行磨浆,调节溶液pH值为3.5,于65℃下酸解处理4h,随后调节pH至中性;进一步将溶液先通过分子量为20kDa的超滤膜分离,去除大分子物质,取流出液;然后再通过分子量为5kDa超滤膜分离,取截留液;
(6)高压均质后喷雾干燥即得分子量为5-20kDa的低聚肽;
(7)将步骤(4)得到的低聚糖与步骤(6)得到的低聚肽按照1:1的质量比进行充分混合即得。
对比例6
一种调节肠道菌群的组合物,其制备方法包括如下步骤:
(1)取桑椹、火龙果和香蕉按照质量比为5:2:3充分混合并进行粉碎后加入等量的水搅拌均匀,随后加入果胶素酶于50℃进行一次酶解处理10min;
(2)酶解完成后于85℃水提处理5h,随后将提取液浓缩至1/3体积,加入3倍体积95%乙醇醇沉24h,回收乙醇收集沉淀并进行冷冻干燥,得到多糖混合物;
(3)取0.5g步骤(2)得到的多糖混合物溶解于10mL水中,先加入15mL浓度为10mmol/L的H2O2于30℃进行一次降解反应10min,随后再加入3mL浓度为10mmol/L的维生素C于40℃进行二次降解反应30min;
(4)对步骤(3)反应后的产物先采用糖化酶45℃下酶解4h,再采用葡聚糖酶50℃下酶解0.75h;二次酶解完成后加入水进行超声处理10min,超声处理的功率为800W,离心取上清;将上清先通过分子量为20kDa的超滤膜分离,去除大分子物质,取流出液;然后再通过分子量为5kDa超滤膜分离,取截留液,获得5-20kDa的低聚糖;
(5)取桑叶、黑豆和芡实按照质量比为5:3:2充分混合并置于10倍质量的水中进行磨浆,随后调节溶液pH值为3.5,于65℃下酸解处理4h,随后调节pH至中性;
(6)采用α-淀粉酶40℃下酶解2h,再采用中性蛋白酶50℃下酶解3.5h;随后将酶解液先通过分子量为20kDa的超滤膜分离,去除大分子物质,取流出液;然后再通过分子量为5kDa超滤膜分离,取截留液;
(7)高压均质后喷雾干燥即得分子量为5-20kDa的低聚肽;
(8)将步骤(4)得到的低聚糖与步骤(7)得到的低聚肽按照1:1的质量比进行充分混合即得。
验证例1
取4-5周龄的雌性Balb/c小鼠,将氨苄青霉素每天以22.4g/kg(小鼠重量)剂量连续灌胃给药7天,建立菌群失衡小鼠模型;将造模成功的小鼠随机分为9组,记为组1-组9,每组10只。其中组1-组9分别给予实施例1-3以及对比例1-6制备得到的调节肠道菌群的组合物,给药剂量为50mg/只,给药方式为灌胃给药,每天一次,连续给药7天;另设一空白对照组组10,不进行造模处理,且正常饮食。末次给药后,于第8天采集各组小鼠粪便,利用添加碳酸钙MRS培养基检测乳酸菌数量,添加X-GAL及莫匹罗星MRS培养基检测双歧杆菌数量,并计算出每克湿粪便中的菌数,结果如下表1所示。
表1各组小鼠粪便乳酸菌和双歧杆菌检测结果
由上述结果可明显看出,在给药7天后,实施例1-3组中小鼠粪便内乳酸菌及双歧杆菌数量均恢复至正常水平,表明摄入按实施例制备的调节肠道菌群的组合物,可快速恢复肠道菌群失衡模型小鼠肠道中的乳酸菌和双歧杆菌等益生菌,效果显著优于其他对照组。
进一步地,取各组小鼠的粪便,采用气相色谱质谱联用法对其进行短链脂肪酸含量的检测,具体步骤如下:取0.3g粪便样品加入2.0mL磷酸水溶液(1:3),涡旋匀浆2min,加入乙醚萃取10min,0℃条件下,4000r/min离心20min,取上清;再加入1.0mL乙醚萃取10min,以同样条件再次离心20min;将两次萃取液合并挥发至1.0mL以内,进样分析,并以乙酸、丙酸、丁酸的含量作为总短链脂肪酸浓度。检测结果如下表2所示。
表2实施例1-3和对比例1-6对小鼠粪便短链脂肪酸含量的影响
由上述结果可知,本发明实施例可以有效促进小鼠肠道代谢产生乙酸、丙酸和丁酸,效果明显优于对比例。乙酸、丙酸和丁酸等短链脂肪酸的大量生成,有助于修复异常的肠道菌群,增加肠内有益菌的丰度,同时抑制场内腐败菌的生长,达到平衡肠道菌群的目的。
验证例2
招募360名年龄在18-40岁之间的经大便常规、尿常规和血常规确诊为腹泻的患者。将受试者随机分为9组,分别给予本发明实施例1-3以及对比例1-6制备得到的调节肠道菌群的组合物,口服给药,3g/次,2次/天,分别于早饭前和晚饭后服用,连续治疗2周,期间停用其他止泻药。效果判断标准为:有效:受试者临床症状有了明显的好转;无效:受试者所有临床症状没有好转而且有恶化的现象。试验结果如下表3所示。
表3实施例1-3和对比例1-6对腹泻的作用
腹泻是临床上常见的消化道疾病,腹泻后肠道内的菌群平衡打破,肠道内乳酸菌和双歧杆菌的数量会显著地下降,肠道内菌群失衡又会加重腹泻症状。由上述结果可知,实施例组受试者有效率明显高于各组对比例。这表明本发明实施例制备的调节肠道菌群的组合物能有效地改善肠道菌群紊乱的现象,从而改善腹泻的症状。
进一步地,采集各组受试者治疗前后的血清样本,采用ELISA检测其IL-6表达水平。结果如下表4所示。
表4治疗前后各组IL-6炎症因子变化情况
IL-6细胞因子在患者腹泻中具有调节组织细胞生长分化的功能,人们发生腹泻后IL-6因子的水平会显著增高,IL-6因子的致炎活性非常强,使内皮血管的通透性显著的增加。因此,受试者体内的IL-6因子的水平可以有效的反映体内的炎症情况。由上述结果可知,治疗前各组IL-6水平差异不大,而经治疗后各组IL-6水平均有降低,且本发明实施例1组明显高于其他各对比例组。说明摄入本发明实施例制备得到的调节肠道菌群的组合物,能显著降低体内IL-6炎症因子的水平,进而改善腹泻症状。
以上具体实施方式部分对本发明所涉及的分析方法进行了具体的介绍。应当注意的是,上述介绍仅是为了帮助本领域技术人员更好地理解本发明的方法及思路,而不是对相关内容的限制。在不脱离本发明原理的情况下,本领域技术人员还可以对本发明进行适当的调整或修改,上述调整和修改也应当属于本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种调节肠道菌群的组合物,包含低聚糖和低聚肽;其特征在于,所述低聚糖的分子量为5-20kDa,所述低聚肽的分子量为5-20kDa;
所述低聚糖通过如下方法制备得到:
(1.1)取桑椹、火龙果和香蕉进行粉碎后加入水搅拌均匀,随后加入果胶素酶进行一次酶解处理;
(1.2)酶解完成后进行水提处理,随后将提取液浓缩至1/3体积,加入乙醇进行醇沉,回收乙醇收集沉淀并进行冷冻干燥,得到多糖混合物;
(1.3)取步骤(1.2)得到的多糖混合物溶解于水中,先加入H2O2进行一次降解反应,随后再加入维生素C进行二次降解反应;
(1.4)对步骤(1.3)反应后的产物进行二次酶解处理;二次酶解完成后加入水进行超声处理,离心取上清后进行膜分离,冷冻干燥即得;
所述低聚肽通过如下方法制备得到:
(2.1)取桑叶、黑豆和芡实置于水中进行磨浆,随后进行酶解处理;
(2.2)酶解处理完成后,调节溶液pH值进行酸解处理,随后调节pH至中性并进行膜分离;
(2.3)高压均质后喷雾干燥即得。
2.根据权利要求1所述的调节肠道菌群的组合物,其特征在于,步骤(1.1)中所述一次酶解的条件为:温度40-60℃,时间10min。
3.根据权利要求1所述的调节肠道菌群的组合物,其特征在于,步骤(1.4)中所述二次酶解处理具体为:先采用糖化酶35-55℃下酶解3-5h,再采用葡聚糖酶40-60℃下酶解0.5-1h。
4.根据权利要求1所述的调节肠道菌群的组合物,其特征在于,骤(1.4)中所述超声处理的条件为:功率800W,时间10min。
5.根据权利要求1所述的调节肠道菌群的组合物,其特征在于,步骤(2.1)中所述酶解处理具体为:先采用α-淀粉酶30-50℃下酶解2h,再采用中性蛋白酶40-60℃下酶解3-4h。
6.根据权利要求1所述的调节肠道菌群的组合物,其特征在于,步骤(2.2)中所述酸解处理的条件为:pH值3.5,温度50-80℃,时间4h。
7.根据权利要求1-6任一项所述的调节肠道菌群的组合物,其特征在于,所述调节肠道菌群的组合物中还含有功能性和/或非功能性辅料。
8.一种调节肠道菌群的组合物的制备方法,包括如下步骤:
(1)取桑椹、火龙果和香蕉进行粉碎后加入水搅拌均匀,随后加入果胶素酶进行一次酶解处理;
(2)酶解完成后进行水提处理,随后将提取液浓缩至1/3体积,加入乙醇进行醇沉,回收乙醇收集沉淀并进行冷冻干燥,得到多糖混合物;
(3)取步骤(2)得到的多糖混合物溶解于水中,先加入H2O2进行一次降解反应,随后再加入维生素C进行二次降解反应;
(4)对步骤(3)反应后的产物进行二次酶解处理;二次酶解完成后加入水进行超声处理,离心取上清后进行膜分离,冷冻干燥即得低聚糖;
(5)取桑叶、黑豆和芡实置于水中进行磨浆,随后进行酶解处理;
(6)酶解处理完成后,调节溶液pH值进行酸解处理,随后调节pH至中性并进行膜分离;
(7)高压均质后喷雾干燥即得低聚肽;
(8)将步骤(4)得到的低聚糖与步骤(7)得到的低聚肽充分混合即得。
9.根据权利要求1-7任一项所述的调节肠道菌群的组合物在制备调节肠道菌群的产品中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,所述产品选自食品、保健品中的一种或多种。
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