CN116584395A - 一种获得大花绣球与乔木绣球种间杂交后代的方法 - Google Patents
一种获得大花绣球与乔木绣球种间杂交后代的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116584395A CN116584395A CN202310758803.2A CN202310758803A CN116584395A CN 116584395 A CN116584395 A CN 116584395A CN 202310758803 A CN202310758803 A CN 202310758803A CN 116584395 A CN116584395 A CN 116584395A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- culture
- hydrangea
- hybrid
- ovary
- medium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 235000014486 Hydrangea macrophylla Nutrition 0.000 title claims abstract description 76
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 41
- 244000267823 Hydrangea macrophylla Species 0.000 title claims description 69
- 235000012139 Viburnum alnifolium Nutrition 0.000 title claims description 7
- 241000385251 Hydrangea arborescens Species 0.000 title claims 3
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 claims abstract description 61
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 claims abstract description 57
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims abstract description 43
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 claims abstract description 42
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims abstract description 39
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 37
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims abstract description 22
- 230000010152 pollination Effects 0.000 claims abstract description 18
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims abstract description 15
- 239000012883 rooting culture medium Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims abstract description 4
- 241001092080 Hydrangea Species 0.000 claims abstract 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 27
- 238000005286 illumination Methods 0.000 claims description 23
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 21
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 19
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 11
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 claims description 11
- 239000012882 rooting medium Substances 0.000 claims description 9
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 8
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 claims description 6
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000003415 peat Substances 0.000 claims description 3
- 239000010451 perlite Substances 0.000 claims description 3
- 235000019362 perlite Nutrition 0.000 claims description 3
- 230000035784 germination Effects 0.000 claims description 2
- 238000003892 spreading Methods 0.000 claims description 2
- 230000007480 spreading Effects 0.000 claims description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 abstract description 13
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 abstract description 13
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 abstract description 11
- 238000009403 interspecific hybridization Methods 0.000 abstract description 4
- 241000272503 Sparassis radicata Species 0.000 abstract 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 21
- 239000000306 component Substances 0.000 description 16
- 238000003359 percent control normalization Methods 0.000 description 15
- JTEDVYBZBROSJT-UHFFFAOYSA-N indole-3-butyric acid Chemical compound C1=CC=C2C(CCCC(=O)O)=CNC2=C1 JTEDVYBZBROSJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 11
- NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M potassium iodide Chemical compound [K+].[I-] NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 239000005708 Sodium hypochlorite Substances 0.000 description 8
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 8
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 7
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 6
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 6
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 6
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 6
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Chemical compound [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 6
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 5
- 235000006679 Mentha X verticillata Nutrition 0.000 description 5
- 235000002899 Mentha suaveolens Nutrition 0.000 description 5
- 235000001636 Mentha x rotundifolia Nutrition 0.000 description 5
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 244000128096 Viburnum alnifolium Species 0.000 description 4
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 4
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 description 4
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 description 4
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 4
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 4
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 description 4
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 description 4
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 description 4
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- ZUFQODAHGAHPFQ-UHFFFAOYSA-N pyridoxine hydrochloride Chemical compound Cl.CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O ZUFQODAHGAHPFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960004172 pyridoxine hydrochloride Drugs 0.000 description 4
- 235000019171 pyridoxine hydrochloride Nutrition 0.000 description 4
- 239000011764 pyridoxine hydrochloride Substances 0.000 description 4
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000011684 sodium molybdate Substances 0.000 description 4
- 235000015393 sodium molybdate Nutrition 0.000 description 4
- TVXXNOYZHKPKGW-UHFFFAOYSA-N sodium molybdate (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Mo]([O-])(=O)=O TVXXNOYZHKPKGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960000344 thiamine hydrochloride Drugs 0.000 description 4
- 235000019190 thiamine hydrochloride Nutrition 0.000 description 4
- 239000011747 thiamine hydrochloride Substances 0.000 description 4
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- 229960001763 zinc sulfate Drugs 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 3
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 3
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 3
- 229910003460 diamond Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 3
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 3
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 3
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 3
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000004323 potassium nitrate Substances 0.000 description 3
- 235000010333 potassium nitrate Nutrition 0.000 description 3
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 3
- VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)-N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C(=O)NCCC(N1CC2=C(CC1)NN=N2)=O VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 239000003109 Disodium ethylene diamine tetraacetate Substances 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000246386 Mentha pulegium Species 0.000 description 2
- 235000016257 Mentha pulegium Nutrition 0.000 description 2
- 235000004357 Mentha x piperita Nutrition 0.000 description 2
- NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N N-benzyladenine Chemical compound N=1C=NC=2NC=NC=2C=1NCC1=CC=CC=C1 NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 206010000210 abortion Diseases 0.000 description 2
- 231100000176 abortion Toxicity 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 2
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 2
- 235000019301 disodium ethylene diamine tetraacetate Nutrition 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 2
- 235000001050 hortel pimenta Nutrition 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 206010003591 Ataxia Diseases 0.000 description 1
- 206010010947 Coordination abnormal Diseases 0.000 description 1
- 206010012559 Developmental delay Diseases 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 241001091442 Hydrangeaceae Species 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 241000237509 Patinopecten sp. Species 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 235000020415 coconut juice Nutrition 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 description 1
- 230000000249 desinfective effect Effects 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011419 induction treatment Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 208000028756 lack of coordination Diseases 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 229960002523 mercuric chloride Drugs 0.000 description 1
- LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L mercury dichloride Chemical compound Cl[Hg]Cl LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L potassium sulfate Chemical compound [K+].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910052939 potassium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011151 potassium sulphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000004382 potting Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 235000020637 scallop Nutrition 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/002—Culture media for tissue culture
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P60/00—Technologies relating to agriculture, livestock or agroalimentary industries
- Y02P60/40—Afforestation or reforestation
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Botany (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明涉及一种获得大花绣球与乔木绣球种间杂交后代的方法，其方法包括：取大花绣球与乔木绣球种间杂交授粉30‑45d后膨大的子房清洗消毒，剥取子房中的未成熟杂种胚珠并接种到1/2MS培养基上，暗培养后用1/2MS+2.0mg/L6‑BA+0.1mg/LIBA+50mg/LCW的愈伤组织诱导培养基进行愈伤组织诱导，用1/2WPM+0.3mg/LIBA的增殖与分化培养基进行增殖与分化，用生根培养基生根培养后，炼苗移栽即可，能够提高其种间杂交育种效率，出愈率达70‑80％，分化率达75‑80％，生根率达95‑100％，缩短育种周期，操作方法简单、成本低、成活率高。
Description
技术领域
本发明属于绣球生物技术育种领域，具体涉及一种获得大花绣球与乔木绣球种间杂交后代的方法。
背景技术
绣球别名八仙花，绣球花科绣球属植物，其花色丰富，花型多样，花期较长，具有较高的观赏价值。绣球属有73种，我国作为其种质资源分布中心，有46种10变种，在盆栽、园林绿化、切花等领域应用甚广，已成为第五大鲜切花。但是，我国绣球育种起步晚、成效差，栽培品种主要从国外引进，如国内市场占有率第一、被誉为“绣球王者”的‘无尽夏’(H.macrophylla‘Endless Summer’)由美国贝利苗圃公司引进。然而，包括‘无尽夏’的大花绣球，抗寒性普遍较差，国内露地栽培局限于长江流域及以南地区，相比之下，乔木绣球的耐寒性非常强，如‘贝拉安娜’(H.arborescens‘Annabelle’)可耐-30～-40℃的低温，是绣球耐寒种质培育的理想亲本。因此，开展大花绣球与乔木绣球的种间远缘杂交，获得抗寒性大幅提升的杂交后代，对绣球品种改良具有重要意义。
杂种的不孕育性是远缘杂交育种的主要障碍，受精后杂种胚、胚乳和子房组织之间缺乏协调性将导致幼胚不发育或中途停止发育，无法获得杂交后代。为此，通过胚挽救技术，在杂交幼胚败育前对杂交子房、杂种胚珠、杂交幼胚进行离体培养，可以克服受精后的发育障碍，避免远缘杂种胚败育以获得杂种植株。现有技术中利用幼胚拯救获得绣球杂种的方法，如专利CN105494078A、专利CN114375840B，主要包括依次进行的子房消毒、接种、增殖培养和生根培养工序，其主要缺陷在于采用切去基部的子房接种，由于子房壁等母本组织大量存在，极可能形成愈伤组织并分化发育成苗，形成假杂种，从而增加了对真杂种的甄别难度，且其采用诱导培养基成分组成不适，导致愈伤组织出愈率不足，将不利于后续增殖培养，增殖培养基成分不适将进一步导致分化率下降，进而影响生根，而在增殖培养与生根培养之间采用叶片诱导愈伤组织培养，将增加育种周期、生产成本、操作难度，难以满足应用需求，不易推广。
其次，授粉后胚拯救时期不适，消毒采用的升汞为剧毒药剂不易获取且使用后易在植物材料上残留，对成活率有一定影响，将造成育种成活率下降。
此外，生根培养时生根培养基成分不适，将导致生根率下降；培养温度、光照强度、光质、光周期等环境因素不适将导致培养效果下降，不利于愈伤，进一步降低大花绣球与乔木绣球种间种间杂交育种效率。
发明内容
本发明旨在至少在一定程度上解决上述技术问题之一，本发明提供一种获得大花绣球与乔木绣球种间杂交后代的方法，提高其种间杂交育种效率，缩短育种周期，操作方法简单、成本低、成活率高。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
一种获得大花绣球与乔木绣球种间杂交后代的方法，其方法包括以下步骤：
(1)子房消毒：取大花绣球与乔木绣球种间杂交授粉30-45d后膨大的子房，清洗消毒；
(2)接种：剥取步骤(1)消毒后子房中的未成熟杂种胚珠并接种到1/2MS培养基上；
(3)暗培养：将步骤(2)接种后的培养基进行暗培养至杂种胚珠变绿萌发；
(4)愈伤组织诱导：将步骤(3)暗培养后转绿萌发的杂种胚珠接种到愈伤组织诱导培养基，光周期培养，期间转换一次新鲜的愈伤组织诱导培养基；
(5)增殖与分化：将步骤(4)愈伤组织诱导后形成的愈伤组织转移至增殖与分化培养基，光周期培养，期间转换一次新鲜的增殖与分化培养基；
(6)生根培养：将步骤(5)增殖与分化后生长健壮的无菌幼苗转入生根培养基进行生根培养，获得杂交苗；
(7)炼苗移栽：将步骤(6)的杂交苗移栽培育，获得大花绣球与乔木绣球种间杂交后代。
进一步的，步骤(1)中所述子房消毒时，取授粉35-45d后膨大的子房，接种后光周期培养30d后统计杂种胚珠成活率＞75％。
进一步的，步骤(1)中所述子房消毒时，将清洗后的子房用酒精浓度为75％的酒精冲洗30-60s，用无菌水冲洗后转入有效氯浓度为1.5-2.5％的NaClO溶液中浸泡6-8min，再用无菌水冲洗，接种培养2周后，污染率＜6％。
进一步的，步骤(2)中所述接种时，吸干消毒后子房表面的水分，将子房平铺于无菌滤纸上，纵切子房，剥取子房中的未成熟杂种胚珠，可以进一步降低污染率。
进一步的，步骤(3)中所述暗培养时，水平放置培养基，在25±2℃黑暗条件下培养7-10d，可以防止迅速分裂的愈伤细胞老化，进一步利于诱导愈伤组织。
进一步的，步骤(4)中所述愈伤组织诱导时，愈伤组织诱导培养基为1/2MS，还添加1.0-2.0mg/L 6-BA、0.1-0.2mg/L IBA、50-100mg/L CW，出愈率可以达到62-80％。
进一步的，步骤(4)中所述愈伤组织诱导时，愈伤组织诱导培养基为1/2MS+2.0mg/L6-BA+0.1mg/L IBA+50mg/L CW，愈伤诱导率可以达到75-80％。
进一步的，步骤(4)中所述愈伤组织诱导时，光周期培养条件：培养温度为25±2℃，光照强度为2000-2500Lx，光照时间为12h/d，进一步利于诱导愈伤组织，培养后杂种胚珠生长呈绿色。
进一步的，步骤(4)中所述愈伤组织诱导时，接种30-40d后，转换一次新鲜的所述愈伤组织诱导培养基，愈伤组织诱导共培养60-80d，进一步利于诱导愈伤组织。
进一步的，步骤(5)中所述增殖与分化时，所述增殖与分化培养基为1/2WPM，还添加0.2-0.3mg/L IBA，分化率可以达到75-80％。
进一步的，步骤(5)中所述增殖与分化时，所述光周期培养条件：培养温度为25±2℃，光照强度为2000-2500Lx，光照时间为12h/d，
进一步的，步骤(5)中所述增殖与分化时，接种30-40d后，转换一次新鲜的所述增殖与分化培养基，增殖与分化共培养60-80d，进一步利于增殖与分化。
进一步的，步骤(6)中所述生根培养时，所述生根培养基为MS，还添加0.3mg/LIBA，光周期培养条件：培养温度为25±2℃，光照强度为2000-2500Lx，光照时间为12h/d。
进一步的，步骤(6)中所述生根培养时，接种30-40d后，转换一次新鲜的所述生根培养基，生根共培养60-80d，生根率可以达到100％。
进一步的，所述愈伤组织诱导、增殖与分化和生根培养的光周期培养时，光质为日光，较光质为红光可以进一步提高胚培养效果，促进愈伤，杂种胚珠生长呈绿色。
进一步的，步骤(7)中所述炼苗移栽时，取生根后2-3周生长健壮的杂交苗，洗净所述杂交苗根部残留的所述生根培养基并移栽至育苗盒的移栽基质中，当杂交苗叶片上部接触育苗盒上盖，育苗盒限制杂交苗继续生长时，将杂交苗带移栽基质移栽到花盆中，正常栽培管理。
进一步的，步骤(7)中所述炼苗移栽时，所述移栽基质由泥炭和珍珠岩按体积比5:1-5:2组成。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
(1)剥取消毒后子房中的未成熟杂种胚珠接种避免假杂种，依次经暗培养、愈伤组织诱导、增殖与分化、生根培养，其育苗周期短、生产成本低、操作简单、技术易推广。
(2)使用优化的愈伤组织诱导培养基和增殖与分化培养基成分，可以分化出大量不定芽，出愈率可以达到70-80％，分化率可以达到75-80％，利于生根，短期内可以获得大量种间杂交后代苗，有效克服了大花绣球与乔木绣球种间杂交中存在的种子败育导致杂交失败的问题，提高了种间杂交育种效率，从而获得自然条件下无法获得的大花绣球与乔木绣球种间杂交杂种后代，使绣球抗寒性大幅提升。
(3)选择杂种胚珠最佳拯救时期，杂种胚珠成活率＞75％，使用所述子房消毒方法可以显著降低污染率至＜6％，可以进一步提高成活率，并且消毒剂种类常见，成本低，操作简单。
(4)使用优化的生根培养基，生根率可以达到95-100％，采用适宜的培养温度、光照强度、光质、光周期等环境因素提高培养效果，愈伤效果好，且杂种胚珠生长为绿色。
附图说明
本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
图1是本发明实施例1的愈伤组织诱导与分化不定芽的图。
图1a表示在愈伤组织诱导培养基中的杂种胚珠诱导形成愈伤组织图；图1b表示在增殖与分化培养基中的愈伤组织分化不定芽图。
具体实施方式
下面结合具体实施例和附图对本发明作进一步说明。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制，在本发明的描述中，如未特殊说明，所用试剂均为市售；下列实施例与对照例中的试剂：
6-BA为6-苄基氨基嘌呤；IBA为吲哚丁酸；CW为椰子汁；
‘薄荷’、‘贝拉安娜’均购自于上海虹越花卉有限公司；
大花绣球‘薄荷’与乔木绣球‘贝拉安娜’种间杂交授粉方法为：选取长势健壮、无病虫害的植株开展杂交，于花序外围不育花花瓣初始着色开展时剪去母本‘薄荷’不育花，当内部可育花花蕾膨大并露色时，用镊子轻轻挤压至花蕾打开，去除所有的雄蕊；去雄后2-3d，当母本‘薄荷’柱头完全伸展并分泌粘液时，采用直接授粉法，用镊子夹取父本‘贝拉安娜’花花粉粒散出的雄蕊，轻触柱头至表面沾满花粉，次日上午重复授粉一次。
1/2MS培养基的组分为：硝酸钾950mg/L、硝酸铵825mg/L、磷酸二氢钾85mg/L、硫酸镁185mg/L、氯化钙220mg/L、碘化钾0.415mg/L、硼酸3.1mg/L、硫酸锰11.15mg/L、硫酸锌4.3mg/L、钼酸钠0.125mg/L、硫酸铜0.0125mg/L、氯化钻0.0125mg/L、乙二胺四乙酸二钠18.65mg/L、硫酸亚铁13.9mg/L、肌醇50mg/L、甘氨酸1mg/L、盐酸硫胺素0.05mg/L、盐酸吡哆醇0.25mg/L、烟酸0.25mg/L、蔗糖30000mg/L、琼脂7000mg/L，购自于青岛高科技工业园海博生物技术有限公司；
1/2WPM培养基的组分为：铵盐200mg/L、硫酸镁185mg/L、硫酸钾450mg/L、磷酸二氢钾85mg/L、氯化钙48mg/L、硫酸锰11.25mg/L、硫酸锌4.3mg/L、硼酸3.1mg/L、钼酸钠0.1mg/L、硫酸铜0.125mg/L、硫酸亚铁13.65mg/L、甘氨酸1.0mg/L、盐酸(VB5)0.25mg/L、肌醇50mg/L、乙二胺四乙酸18.65mg/L、盐酸硫胺素0.5mg/L、盐酸吡哆辛0.25mg/L，购自于北京索莱宝科技有限公司；
MS培养基的组分为：硝酸钾1900mg/L、硝酸铵1650mg/L、磷酸二氢钾170mg/L、硫酸镁370mg/L、氯化钙440mg/L、碘化钾0.83mg/L、硼酸6.2mg/L、硫酸锰22.30mg/L、硫酸锌8.6mg/L、钼酸钠0.25mg/L、硫酸铜0.025mg/L、氯化钻0.025mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L、硫酸亚铁27.8mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、蔗糖30000mg/L、琼脂7000mg/L，购自于青岛高科技工业园海博生物技术有限公司；
B5培养基的组分为：磷酸二氧钠150mg/L、硫酸铵134mg/L、无水氯化钙113.24mg/L、EDTANa2373mg/L、硝酸钾2500mg/L、硫酸锌2mg/L、硫酸亚铁27mg/L、钼酸钠0.25mg/L、硫酸锰10mg/L、氯化钻0.025mg/L、硼酸3mg/L、盐酸硫胺素10mg/L、硫酸铜0.025mg/L、盐酸吡哆醇1mg/L、碘化钾0.75mg/L、烟酸1mg/L、肌醇100mg/L、无水硫酸镁122.09mg/L，购自于北京索莱宝科技有限公司。
实施例1：
为本发明所述一种获得大花绣球与乔木绣球种间杂交后代的方法的一种较佳实施方式，其方法包括以下步骤：
(1)子房消毒：取大花绣球‘薄荷’与乔木绣球‘贝拉安娜’种间杂交授粉30d后膨大的子房，流水冲洗4h进行清洗，在超净工作台上，用酒精浓度为75％的酒精冲洗子房30s，用无菌水冲洗3次后转入有效氯浓度为2.5％的NaClO溶液中浸泡8min，再用无菌水冲洗3次，进行消毒，用滤纸吸干消毒后子房表面的水分；
(2)接种：将步骤(1)消毒后的子房平铺于无菌滤纸上，用解剖刀纵切子房，并用细胞夹剥取子房中的未成熟杂种胚珠，将未成熟杂种胚珠接种到1/2MS培养基上；
(3)暗培养：将步骤(2)接种后的培养基水平放置，在25±2℃黑暗条件下进行暗培养7d；
(4)愈伤组织诱导：将步骤(3)暗培养后将转绿萌发的杂种胚珠接种到愈伤组织诱导培养基，所述愈伤组织诱导培养基为1/2MS，还添加2.0mg/L 6-BA、0.1mg/L IBA和50mg/LCW，pH为7，光周期培养条件：培养温度为25℃，光照强度为2000Lx，光质为日光，光照时间为12h/d，接种30d后，转换一次新鲜的同样成分的愈伤组织诱导培养基，共培养60d；
(5)增殖与分化：将步骤(4)愈伤组织诱导后形成的愈伤组织转移至增殖与分化培养基，所述增殖与分化培养基为1/2WPM，还添加0.3mg/L IBA，pH为7，光周期培养条件：培养温度为25℃，光照强度为2000Lx，光质为日光，光照时间为12h/d，接种30d后，转换一次新鲜的同样成分的增殖与分化培养基，共培养60d；
(6)生根培养：将步骤(5)增殖与分化后生长健壮的无菌幼苗转入生根培养基进行生根培养，所述生根培养基为MS，还添加0.3mg/L IBA，pH为7，光周期培养条件：培养温度为25±2℃，光照强度为2000Lx，光质为日光，光照时间为12h/d，接种30d后，转换一次新鲜的同样成分的生根培养基，生根共培养60d，获得杂交苗；
(7)炼苗移栽：取步骤(6)生根后2周生长健壮的杂交苗，用清水洗净杂交苗根部残留的所述生根培养基并移栽至带透明盒盖的育苗盒中，育苗盒中移栽基质由泥炭和珍珠岩按体积比5:1组成，1月后，杂交苗叶片上部接触育苗盒上盖，育苗盒限制杂交苗继续生长，将杂交苗带移栽基质移栽到花盆中，正常栽培管理，获得大花绣球与乔木绣球种间杂交后代。
进一步的，考察愈伤组织诱导培养基成分的影响：
取大花绣球与乔木绣球种间杂交授粉30d后膨大的子房，经过与实施例1相同的子房消毒处理、接种、暗培养后，选择与实施例1不同的基本培养基和添加成分组成愈伤组织诱导培养基，接种后置于相同的条件下培养，作为对照组，接种30d后，转换一次新鲜的愈伤组织诱导培养基，60d后统计实施例1与对照组的出愈率，每种培养基成分接种30个外植体作为重复，不同类型愈伤组织诱导培养基的基本培养基及外源激素对杂种胚珠生长的影响结果如下表1：
表1.不同类型愈伤组织诱导培养基的基本培养基及外源激素对杂种胚珠生长的影响
| 处理 | 基本培养基 | 添加成分 | 出愈率 |
| 实施例2 | 1/2MS | 1.0mg/L6-BA+0.1mg/LIBA+50mg/LCW | 62％ |
| 实施例1 | 1/2MS | 2.0mg/L6-BA+0.1mg/LIBA+50mg/LCW | 80％ |
| 对照组1 | B5 | 1.0mg/L6-BA+0.1mg/LIBA | 20％ |
| 对照组2 | B5 | 2.0mg/L6-BA+0.1mg/LIBA | 51％ |
| 对照组3 | B5 | 1.0mg/L6-BA+0.1mg/LIBA+50mg/LCW | 43％ |
| 对照组4 | B5 | 2.0mg/L6-BA+0.1mg/LIBA+50mg/LCW | 50％ |
由表1可知，最适愈伤组织诱导培养基为1/2MS+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/L IBA+50mg/L CW，愈伤诱导率可以达到62-80％。
进一步的，考察增殖与分化培养基成分的影响：
取大花绣球与乔木绣球种间杂交授粉30d后膨大的子房，经过与实施例1相同的子房消毒、接种、暗培养和愈伤组织诱导处理后，选择与实施例1不同的基本培养基和添加成分组成增殖与分化培养基，接种后置于相同的条件下培养，作为对照组，接种30d后，观察生长状况并计算增殖系数及分化率，每种培养基成分接种30个外植体作为重复，不同类型增殖与分化培养基的基本培养基及外源激素对杂种胚珠生长的影响结果如下表2：
表2.不同类型增殖与分化培养基的基本培养基及外源激素对杂种胚珠生长的影响
| 处理 | 基本培养基 | 添加成分 | 分化率 |
| 对照组5 | MS | 1.0mg/L6-BA+0.1mg/LIBA | 0％ |
| 对照组6 | MS | 2.0mg/L6-BA+0.1mg/LIBA | 0％ |
| 对照组7 | 1/2WPM | 0.1mg/LIBA | 2％ |
| 实施例1 | 1/2WPM | 0.3mg/LIBA | 76％ |
由表2可知，最适增殖与分化培养基为1/2WPM+0.3mg/L IBA，分化率可以达到75％以上。
进一步的，考察生根培养基成分的影响：
取大花绣球与乔木绣球种间杂交授粉30d后膨大的子房，经过与实施例1相同的子房消毒、接种、暗培养、愈伤组织诱导、增殖与分化处理后，选择与实施例1不同的基本培养基和添加成分组成生根培养基，接种后置于相同的条件下培养，作为对照组，接种30d后，30d后统计实施例1与对照组的生根率、平均生根数及根毛区长度，每种培养基成分接种30个外植体作为重复，不同类型生根培养基的基本培养基及外源激素对杂种胚珠生长的影响结果如下表3：
表3.不同类型生根培养基的基本培养基及外源激素对杂种胚珠生长的影响
| 处理 | 基本培养基 | 添加成分 | 生根率 |
| 对照组8 | MS | 0.1mg/LIBA | 95％ |
| 实施例1 | MS | 0.3mg/LIBA | 100％ |
由表3可知，最适生根培养基为：MS+0.3mg/L IBA，生根率可以达到100％。
进一步的，考察外植体消毒方法的影响：
以授粉后40d的膨大子房为对象，经过与实施例1相同的子房消毒方法作为实施例3，经过与实施例2不同的子房消毒方法，分别用①酒精酒精浓度为75％酒精消毒30s、60s、90s；②有效氯浓度为2.5％的次氯酸钠溶液浸泡消毒5min、10min、15min；③酒精酒精浓度为75％酒精消毒30s+无菌水冲洗+有效氯浓度为2.5％次氯酸钠溶液浸泡消毒3min、5min、8min+无菌水冲洗；然后用无菌水漂洗3-6次，作为对照组，培养2周后统计实施例3与对照组的污染率和成活率，进行不同消毒方法的比较，每种消毒方法接种30个外植体作为重复，不同消毒方法对杂种胚珠灭菌效果的影响如下表4：
表4.不同消毒方法对杂种胚珠灭菌效果
| 处理 | 消毒方法 | 消毒时间 | 污染率 |
| 对照组9 | 75％酒精 | 30s | 8.9％ |
| 对照组10 | 75％酒精 | 60s | 7.5％ |
| 对照组11 | 75％酒精 | 90s | 7.8％ |
| 对照组12 | 2.5％次氯酸钠 | 5min | 25.4％ |
| 对照组13 | 2.5％次氯酸钠 | 8min | 10.0％ |
| 对照组14 | 2.5％次氯酸钠 | 15min | 9.6％ |
| 对照组15 | 75％酒精(30s)+2.5％次氯酸钠溶液 | 3min | 28.6％ |
| 对照组16 | 75％酒精(30s)+2.5％次氯酸钠溶液 | 5min | 15.3％ |
| 实施例3 | 75％酒精(30s)+2.5％次氯酸钠溶液 | 8min | 5.3％ |
由表4可知，最适外植体消毒方法为将清洗后的子房用酒精浓度为75％的酒精冲洗30s，用无菌水冲洗后转入有效氯浓度为2.5％的NaClO溶液中浸泡8min，再用无菌水冲洗，污染率＜6％。
进一步的，考察杂种胚珠拯救时期的影响：
选取授粉后20、25、30、35、40、45、50天的发育正常的子房，经过与实施例1相同的子房消毒、接种、光周期培养后，作为实施例和对照组，观察杂种胚的生长情况，30d后统计实施例与对照组的成活率，进行不同时期胚培养效果的比较，每个培养时期接种30个子房作为重复，不同杂种胚珠拯救时期进行离体培养的成功率的结果如下表5：
表5.不同杂种胚珠拯救时期进行离体培养的成功率情况
| 处理 | 授粉后天数 | 成活率 |
| 对照组17 | 20 | 0％ |
| 对照组18 | 25 | 16％ |
| 实施例1 | 30 | 37％ |
| 实施例4 | 35 | 75％ |
| 实施例3 | 40 | 78％ |
| 实施例5 | 45 | 57％ |
| 对照组19 | 50 | 0％ |
结果如表5结果可知，最佳胚拯救时期为授粉后35-40d，接种后光周期培养30d后统计杂种胚珠成活率＞75％。
进一步的，考察培养条件的影响：
选取授粉后发育正常的子房，经过与实施例1相同的子房消毒处理后，愈伤组织诱导、增殖与分化和生根培养时，置于不同光周期培养条件下：培养温度分别为22℃、25℃；光照强度分别为1000Lx、2000Lx；光质分别为红光、日光；光周期分别为12h光照/12h黑暗、8h光照/16h黑暗条件下进行培养，作为对照组，观察杂种胚珠的生长情况，30d后进行不同培养条件效果的比较，每个培养条件接种30个子房作为重复，不同光周期培养条件对培养结果的影响如下表6：
表6.不同光周期培养条件对培养结果的影响
由表6可知，最适光周期培养条件为培养温度25℃、光照强度2000Lx、光质为日光、光周期为12h光照/12h黑暗，愈伤效果好，且杂种胚珠生长为绿色。
综上可见，本发明获得大花绣球与乔木绣球种间杂交后代的方法，其污染率低、可操作性强、简单高效，有效克服了大花绣球与乔木绣球种间杂交中存在的种子败育导致杂交失败的问题，提高了育种效率、缩短育种周期，最终实现绣球种质的创新。
上文所列出的一系列的详细说明仅仅是针对本发明的可行性实施例的具体说明，它们并非用以限制本发明的保护范围，需要说明的是，本发明中涉及数值范围时，应理解为每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用，由于采用的步骤方法与实施例相同，为了防止赘述，本发明描述了优选的实施例。尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例做出另外的变更和修改，如：大花绣球可以是‘海宁蓝’、‘薄荷’、‘袭夏’的任意一种；乔木绣球可以是‘贝拉安娜’或‘无敌贝贝’。所以，凡未脱离本发明技艺精神所作的等效实施例或变更均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种获得大花绣球与乔木绣球种间杂交后代的方法，其特征在于，其方法包括以下步骤：
(1)子房消毒：取大花绣球与乔木绣球种间杂交授粉30-45d后膨大的子房，清洗消毒；
(2)接种：剥取步骤(1)消毒后子房中的未成熟杂种胚珠并接种到1/2MS培养基上；
(3)暗培养：将步骤(2)接种后的培养基进行暗培养至杂种胚珠变绿萌发；
(4)愈伤组织诱导：将步骤(3)暗培养后转绿萌发的杂种胚珠接种到愈伤组织诱导培养基，光周期培养，期间转换一次新鲜的愈伤组织诱导培养基；
(5)增殖与分化：将步骤(4)愈伤组织诱导后形成的愈伤组织转移至增殖与分化培养基，光周期培养，期间转换一次新鲜的增殖与分化培养基；
(6)生根培养：将步骤(5)增殖与分化后生长健壮的无菌幼苗转入生根培养基进行生根培养，获得杂交苗；
(7)炼苗移栽：将步骤(6)的杂交苗移栽培育，获得大花绣球与乔木绣球种间杂交后代。
2.根据权利要求1所述的一种获得大花绣球与乔木绣球种间杂交后代的方法，其特征在于，步骤(1)中所述子房消毒时，取授粉35-45d后膨大的子房。
3.根据权利要求1所述的一种获得大花绣球与乔木绣球种间杂交后代的方法，其特征在于，步骤(1)中所述子房消毒时，将清洗后的子房用酒精浓度为75％的酒精冲洗30-60s，用无菌水冲洗后转入有效氯浓度为1.5％-2.5％的NaClO溶液中浸泡6-8min，再用无菌水冲洗。
4.根据权利要求1所述的一种获得大花绣球与乔木绣球种间杂交后代的方法，其特征在于，步骤(2)中所述接种时，吸干消毒后子房表面的水分，将子房平铺于无菌滤纸上，纵切子房，剥取子房中的未成熟杂种胚珠。
5.根据权利要求1所述的一种获得大花绣球与乔木绣球种间杂交后代的方法，其特征在于，步骤(3)中所述暗培养时，水平放置培养基，在25±2℃黑暗条件下培养7-10d。
6.根据权利要求1所述的一种获得大花绣球与乔木绣球种间杂交后代的方法，其特征在于，步骤(4)中所述愈伤组织诱导时，所述愈伤组织诱导培养基为1/2MS，还添加1.0-2.0mg/L6-BA、0.1-0.2mg/LIBA和50-100mg/LCW，所述光周期培养条件：培养温度为25±2℃，光照强度为2000-2500Lx，光照时间为12h/d，接种30-40d后，转换一次新鲜的愈伤组织诱导培养基。
7.根据权利要求1所述的一种获得大花绣球与乔木绣球种间杂交后代的方法，其特征在于，步骤(5)中所述增殖与分化时，所述增殖与分化培养基为1/2WPM，还添加0.2-0.3mg/LIBA，所述光周期培养条件：培养温度为25±2℃，光照强度为2000-2500Lx，光照时间为12h/d，接种30-40d后，期间转换一次新鲜的增殖与分化培养基。
8.根据权利要求1所述的一种获得大花绣球与乔木绣球种间杂交后代的方法，其特征在于，步骤(6)中所述生根培养时，所述生根培养基为MS，还添加0.3mg/LIBA，光周期培养条件：培养温度为25±2℃，光照强度为2000-2500Lx，光照时间为12h/d，接种30-40d后，转换一次新鲜的生根培养基。
9.根据权利要求1～8任意一项所述的一种获得大花绣球与乔木绣球种间杂交后代的方法，其特征在于，步骤(7)中所述炼苗移栽时，取生根后2-3周生长健壮的杂交苗，洗净杂交苗根部残留的所述生根培养基并移栽至育苗盒的移栽基质中，当杂交苗叶片上部接触育苗盒上盖，育苗盒限制杂交苗继续生长时，将杂交苗带移栽基质移栽到花盆中，正常栽培管理。
10.根据权利要求9所述的一种获得大花绣球与乔木绣球种间杂交后代的方法，其特征在于，步骤(7)中所述炼苗移栽时，所述移栽基质由泥炭和珍珠岩按体积比5:1-5:2组成。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310758803.2A CN116584395B (zh) | 2023-06-26 | 2023-06-26 | 一种获得大花绣球与乔木绣球种间杂交后代的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310758803.2A CN116584395B (zh) | 2023-06-26 | 2023-06-26 | 一种获得大花绣球与乔木绣球种间杂交后代的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116584395A true CN116584395A (zh) | 2023-08-15 |
| CN116584395B CN116584395B (zh) | 2024-04-02 |
Family
ID=87590180
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310758803.2A Active CN116584395B (zh) | 2023-06-26 | 2023-06-26 | 一种获得大花绣球与乔木绣球种间杂交后代的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116584395B (zh) |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020081731A1 (en) * | 1995-05-19 | 2002-06-27 | Angela Stafford | Manipulation of plant cell and tissue cultures |
| WO2004057947A1 (en) * | 2002-12-30 | 2004-07-15 | Soo-Sung Lee | A new species of plant baemoochae and method for breeding the same |
| WO2016054236A1 (en) * | 2014-09-30 | 2016-04-07 | Plant Advancements Llc | In situ embryo rescue and recovery of non-genetically modified hybrids from wide crosses |
| CN105494078A (zh) * | 2014-10-15 | 2016-04-20 | 杨玉勇 | 一种利用幼胚拯救获得八仙花种间杂种的方法 |
| CN106613908A (zh) * | 2016-12-06 | 2017-05-10 | 南京市蔬菜科学研究所 | 一种绣球花杂交育种授粉的方法 |
| CN114375840A (zh) * | 2022-02-08 | 2022-04-22 | 西安市农业技术推广中心 | 恢复绣球花杂交后代生长势的培养基及恢复生长的方法 |
-
2023
- 2023-06-26 CN CN202310758803.2A patent/CN116584395B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020081731A1 (en) * | 1995-05-19 | 2002-06-27 | Angela Stafford | Manipulation of plant cell and tissue cultures |
| WO2004057947A1 (en) * | 2002-12-30 | 2004-07-15 | Soo-Sung Lee | A new species of plant baemoochae and method for breeding the same |
| WO2016054236A1 (en) * | 2014-09-30 | 2016-04-07 | Plant Advancements Llc | In situ embryo rescue and recovery of non-genetically modified hybrids from wide crosses |
| CN105494078A (zh) * | 2014-10-15 | 2016-04-20 | 杨玉勇 | 一种利用幼胚拯救获得八仙花种间杂种的方法 |
| CN106613908A (zh) * | 2016-12-06 | 2017-05-10 | 南京市蔬菜科学研究所 | 一种绣球花杂交育种授粉的方法 |
| CN114375840A (zh) * | 2022-02-08 | 2022-04-22 | 西安市农业技术推广中心 | 恢复绣球花杂交后代生长势的培养基及恢复生长的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN116584395B (zh) | 2024-04-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101347099B (zh) | 落羽杉离体快速繁殖方法 | |
| CN111492973B (zh) | 普通油茶通过体细胞胚胎发生方式获得再生植株的方法 | |
| CN103461118A (zh) | 一种金线莲种苗的工厂化生产方法 | |
| CN108513910A (zh) | 一种黑果枸杞耐盐突变体的离体筛选方法 | |
| CN101455179B (zh) | 一种老龄秤锤树的组织培养方法 | |
| CN104885948A (zh) | 一种油茶子叶节直接再生植株的方法 | |
| CN110583488A (zh) | 石蒜属新品种‘桃红’组培快繁技术体系的建立方法 | |
| CN114027182A (zh) | 一种景天科拟石莲属东云系多肉植物组织培养繁殖方法 | |
| WO2019153690A1 (zh) | 无种质基因型限制的高频体胚再生培养基及其应用 | |
| CN111134019B (zh) | 一种齿叶冬青体细胞胚胎直接发生和植株再生的方法 | |
| CN105284622B (zh) | 一种快速获得鸢尾杂交优良无性系的方法 | |
| CN116584395B (zh) | 一种获得大花绣球与乔木绣球种间杂交后代的方法 | |
| CN112931197A (zh) | 一种菠萝组织培养苗的制备方法 | |
| CN109937883A (zh) | 百子莲矮生重瓣品种‘钻石重’的种苗快速繁育方法 | |
| CN113317206B (zh) | 一种用于墨脱百合组培快繁的培养基组合、组培快繁方法及应用 | |
| CN102550404A (zh) | 一种梅花叶片愈伤组织高效诱导方法 | |
| CN105010123A (zh) | 通过离体挽救培养获得草莓远缘杂种的方法及培养基 | |
| CN112470920A (zh) | 一种通过幼胚挽救技术获得茉莉花种间杂交后代的方法 | |
| CN101828525A (zh) | 一种通过胚抢救获得植物嫁接嵌合体后代的方法 | |
| CN105075861A (zh) | 一种白芨胚性细胞发生与子叶胚培养方法 | |
| CN112544444B (zh) | 一种用于红花木莲的组培培养基、红花木莲胚性愈伤组织培养的方法及红花木莲快繁的方法 | |
| CN105638472B (zh) | 一种国槐子叶体细胞胚诱导的快速繁殖方法 | |
| CN115812589B (zh) | 一种加工型辣椒不易出胚基因型花药培养获得胚状体的培养方法 | |
| CN114568305B (zh) | 一种夏栎组织培养提高再生效率的处理方法 | |
| CN116034873B (zh) | 一种柽柳组织快繁方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |