CN101828525A - 一种通过胚抢救获得植物嫁接嵌合体后代的方法 - Google Patents
一种通过胚抢救获得植物嫁接嵌合体后代的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101828525A CN101828525A CN201010151622A CN201010151622A CN101828525A CN 101828525 A CN101828525 A CN 101828525A CN 201010151622 A CN201010151622 A CN 201010151622A CN 201010151622 A CN201010151622 A CN 201010151622A CN 101828525 A CN101828525 A CN 101828525A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ovary
- chimaera
- medium
- ovule
- plant graft
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 241000251477 Chimaera Species 0.000 title claims abstract description 32
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 title claims abstract description 28
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 claims abstract description 32
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 13
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims abstract description 6
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 17
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 17
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 17
- 238000005286 illumination Methods 0.000 claims description 14
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 12
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 12
- 239000012879 subculture medium Substances 0.000 claims description 8
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 7
- 230000007226 seed germination Effects 0.000 claims description 7
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 108010079058 casein hydrolysate Proteins 0.000 claims description 6
- 239000012869 germination medium Substances 0.000 claims description 6
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 206010000210 abortion Diseases 0.000 claims description 5
- 231100000176 abortion Toxicity 0.000 claims description 5
- 239000010455 vermiculite Substances 0.000 claims description 5
- 235000019354 vermiculite Nutrition 0.000 claims description 5
- 229910052902 vermiculite Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 4
- NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N N-benzyladenine Chemical compound N=1C=NC=2NC=NC=2C=1NCC1=CC=CC=C1 NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000013039 cover film Substances 0.000 claims description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 3
- 239000010408 film Substances 0.000 claims description 3
- 239000010451 perlite Substances 0.000 claims description 3
- 235000019362 perlite Nutrition 0.000 claims description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract description 4
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 abstract description 4
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 abstract description 4
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 abstract description 2
- 239000012883 rooting culture medium Substances 0.000 abstract 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 28
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 10
- 240000007124 Brassica oleracea Species 0.000 description 9
- 235000003899 Brassica oleracea var acephala Nutrition 0.000 description 7
- 235000011301 Brassica oleracea var capitata Nutrition 0.000 description 7
- 235000001169 Brassica oleracea var oleracea Nutrition 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 241000219198 Brassica Species 0.000 description 3
- 235000003351 Brassica cretica Nutrition 0.000 description 3
- 235000003343 Brassica rupestris Nutrition 0.000 description 3
- QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N bis(2-chloroethyl) sulfide Chemical compound ClCCSCCCl QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- 235000010460 mustard Nutrition 0.000 description 3
- 244000178993 Brassica juncea Species 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000007614 genetic variation Effects 0.000 description 2
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000010152 pollination Effects 0.000 description 2
- 244000144730 Amygdalus persica Species 0.000 description 1
- 235000011303 Brassica alboglabra Nutrition 0.000 description 1
- 235000011332 Brassica juncea Nutrition 0.000 description 1
- 235000014700 Brassica juncea var napiformis Nutrition 0.000 description 1
- 235000011302 Brassica oleracea Nutrition 0.000 description 1
- 241000219193 Brassicaceae Species 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000018633 Prunus armeniaca Species 0.000 description 1
- 235000009827 Prunus armeniaca Nutrition 0.000 description 1
- 235000006040 Prunus persica var persica Nutrition 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 230000002380 cytological effect Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000249 desinfective effect Effects 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000010413 gardening Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- -1 pH=5.8.Wherein Chemical compound 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 230000008121 plant development Effects 0.000 description 1
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000008844 regulatory mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- Y02P60/216—
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明公开一种通过胚抢救获得植物嫁接嵌合体后代的方法，包括如下步骤：(1)在十字花科植物嫁接嵌合体幼胚败育前1天摘取子房；(2)将子房消毒并冲洗；(3)将子房置于铺有用营养液充分浸泡过的滤纸的培养皿上，剖开子房一端后沿腹缝线撕开，选取淡绿色且有光泽的胚珠连同胚柄及与胚柄相连的子房壁组织一同切下并接种到发育培养基上；于25±2℃黑暗条件下培养，再光照培养；(4)将成熟种子摘下接种于发芽培养基上于25±2℃黑暗条件下培养；(5)在种子萌发长出真叶后将幼苗先转移到继代培养基上培养，后转移至生根培养基上生根；(6)将生根后的幼苗取出，移栽至装有基质的营养钵中炼苗6～12天，后将幼苗移至田间，获得植物嫁接嵌合体后代。
Description
技术领域
本发明涉及的是一种通过胚抢救获得植物嫁接嵌合体后代的方法，尤其涉及一种抢救十字花科植物种间嫁接嵌合体有性后代的技术方法。
背景技术
嫁接是将植物体的芽或枝接到另一植物体的适当部位，使两者接合成一个新植物体的技术。作为一项世界性的技艺，嫁接一直被广泛地应用并积极地促进了农业的发展。植物嫁接是一种无性繁殖方式，但是它能够诱导植物产生遗传变异。早在明代的《本草纲目》中就记载了“李接桃而本强者其实毛，梅接杏而本强者其实甘”的现象。20世纪初，苏联园艺学家米丘林曾提出嫁接杂交、定向培育和驯化等改变植物遗传性的原则和方法，并培育出许多果树新品种。因此，研究嫁接对植株性状的影响和调控机制具有重要的意义。
茎尖嫁接是植物嫁接的一种形式，通过茎尖嫁接可以获得植物嵌合体，即顶端分生组织包含两种或两种以上遗传型细胞，并由这些细胞层共同形成器官并最终发育而成的完整植株。植物嫁接嵌合体是研究嫁接对植物生长发育调控机制的优良材料。但是，研究发现嫁接嵌合体中存在的异源细胞层能够影响植物的生殖发育特性，进而导致嵌合体的不育(参见Plant cell graft chimerasobtained by co-culture of isolated protoplasts.Binding et al.Protoplasma，第141卷第1期，64-73页，1987年2月)，从而阻碍了人们对嫁接遗传变异机制的研究。因此急需一套完善的人工胚抢救体系以保留嫁接嵌合体植物的有性后代，但在此之前还没有关于嫁接嵌合体植物胚抢救及植株再生的方法，更没有成功的实例。
发明内容
本发明的目的是提供一种通过胚抢救获得植物嫁接嵌合体后代的方法。
为实现上述目的，本发明所采取的技术方案是：该通过胚抢救获得植物嫁接嵌合体后代的方法主要包括如下步骤：
(1)在十字花科植物嫁接嵌合体的幼胚败育的前1天摘取子房；
(2)将摘取的子房先消毒，后在超净工作台上用无菌蒸馏水冲洗；
(3)将冲洗后的子房置于铺有用营养液充分浸泡过的滤纸的培养皿上，剖开子房的一端，然后将子房沿腹缝线撕开，选取子房内呈淡绿色且有光泽的胚珠；将胚珠连同胚柄以及与胚柄相连的子房壁组织一同切下并接种到发育培养基上，使胚柄和子房壁组织与培养基相接触；接种后的胚珠先于25±2℃的黑暗条件下培养12～24小时，再进行光照培养，所述光照培养的温度为25±2℃、光照强度为30～60μmol m-2s-1、光照时间为8～12小时/天；
(4)在胚珠成熟为种子后，将种子摘下后接种于发芽培养基上于25±2℃的黑暗条件下进行培养使种子萌发；
(5)在种子萌发长出真叶后将幼苗先转移到继代培养基上培养，后再转移至生根培养基上生根，在继代培养基和生根培养基上进行培养的温度为25±2℃、光照强度为80～120μmol m-2s-1、光照时间为12小时/天；
(6)将生根后的幼苗从生根培养基中取出，洗掉根部的培养基并将幼苗移栽至装有基质的营养钵中炼苗6～12天，后将幼苗移至田间，从而获得植物嫁接嵌合体后代。
进一步地，本发明在所述步骤(3)中，所述营养液为3％蔗糖溶液。
进一步地，本发明在所述步骤(3)中，将胚珠接种到发育培养基时的接种密度为1～3个胚珠/厘米2。
进一步地，本发明所述接种密度为1个胚珠/厘米2。
进一步地，本发明在所述步骤(3)中，所述发育培养基的配方为MS+3％蔗糖+0.8％琼脂+400mg/L谷氨酰胺+400mg/L水解酪蛋白+0.2％活性炭，pH＝5.8。
进一步地，本发明在所述步骤(4)中，所述发芽培养基的配方为1/2MS+3％蔗糖+0.8％琼脂+0.2mg/L 6-苄氨基嘌呤。
进一步地，本发明在所述步骤(5)中，所述继代培养基的配方为1/2MS+3％蔗糖+0.8％琼脂。
进一步地，本发明在所述步骤(5)中，所述生根培养基的配方为1/2MS+3％蔗糖+0.8％琼脂+0.1mg/L α-萘乙酸。
进一步地，本发明在所述步骤(6)中，所述基质为蛭石和珍珠岩，蛭石和珍珠岩的体积比为2∶1。
进一步地，本发明在步骤(6)中进行炼苗时，先在幼苗上覆盖薄膜并遮荫，在炼苗2～4天后逐渐揭开薄膜使幼苗适应外界环境。
本发明的优点是：本发明采用人工培养基对胚珠进行培养使胚珠成熟为种子，种子萌发后再经过继代和生根，可在短期内获得大量的有性后代植株。该方法可操作性强，简单实用，胚抢救的效果显著，可以广泛应用于十字花科植物及嫁接嵌合体植物的胚抢救，对于特殊植物新品种的培育和嫁接育种的发展具有重要的意义。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步说明。
实施例1：
材料：本实例以人工合成的十字花科芸薹属紫甘蓝(Brassica oleracea)和榨菜(B.juncea)的种间嫁接嵌合体TCC为材料。该种间嫁接嵌合体TCC是以其茎尖分生组织三层结构的细胞来源命名的：从外向内依次为L1-L2-L3，T＝榨菜，C＝紫甘蓝(可参见：Synthesis of interspecific chimeras between tuber mustard(Brassicajuncea)and cabbage(B.oleracea)and cytological analysis.Chen et al.Plant CellReports，第25卷第9期：907-913页，2006年9月)
步骤(1)：取材
对TCC进行蕾期人工自花授粉，取授粉后不同时期的子房，通过石蜡切片的方法观察其幼胚发育过程，发现败育发生在球形胚后期，其具体的败育时间为授粉后的第17天。故在胚胎败育的前1天即第16天时摘取子房。
步骤(2)：材料消毒
将摘取的子房先用75％的酒精消毒30秒，再用5％的次氯酸钠溶液浸泡15分钟，其间摇动几次以彻底消毒。然后在超净工作台上用无菌蒸馏水冲洗3遍。
步骤(3)：胚珠的剥离和接种
将冲洗后的子房置于铺有用3％蔗糖溶液充分浸泡过的滤纸的培养皿上，用手术刀剖开一端，然后用两把镊子缓慢地将子房沿腹缝线撕开，这种操作方法简单易行，可有效地减少刀切，在避免对胚珠的操作损伤方面有显著效果。其中，3％蔗糖溶液的作用是维持渗透压和湿度，从而使胚珠在脱离母体后到接种至培养基期间保持良好的生长状态，有利于提高抢救效率。本发明使用3％蔗糖溶液作为营养液，效果较佳，且其配制简单方便，当然也可用其它适当浓度的营养液代替。选取子房内呈淡绿色且有光泽的胚珠，将其与胚柄及与胚珠相连的子房壁组织一同切下，接种到发育培养基上，子房壁组织可以只切取与胚柄相连的那部分。接种时使胚柄及子房壁组织接触到发育培养基，有利于胚柄对营养物质的吸收；若使胚珠不直接接触培养基，则可为其提供一个与活体更接近的生长环境从而更有利于促进胚珠的发育。适当的接种密度有利于胚柄和子房壁组织吸收发育培养基中的养分，从而使胚珠获得充足的营养，当接种密度为1～3个胚珠/厘米2时，营养供给较为理想，其中当接种密度为1个胚珠/厘米2时，营养供给效果最好。发育培养基配方为MS+3％蔗糖+0.8％琼脂+400mg/L谷氨酰胺+400mg/L水解酪蛋白+0.2％活性炭，pH＝5.8。其中，谷氨酰胺和水解酪蛋白是营养添加物，对胚珠的发育有显著的促进作用；活性炭的添加可以有效防止接种材料的褐化。接种后的胚珠先于25±2℃、黑暗条件下培养24小时，再转到25±2℃，40μmol m-2s-1光照下培养，光照时间为16小时/天。
培养6天左右，以胚珠内可以肉眼观察到绿色胚体为佳；培养15天左右，整个胚珠转为深绿色；大约在培养的第24天，胚珠表面局部出现淡红色并逐渐蔓延至整个胚珠；培养30天后，胚珠通体转为褐色并逐渐成为成熟种子。
步骤(4)：种子的成熟和萌发
将成熟的种子从胚柄上摘下并接种于发芽培养基上，发芽培养基的配方为1/2MS(MS中的大量元素减半)+3％蔗糖+0.8％琼脂+0.2mg/L 6-苄氨基嘌呤，培养条件：温度为25±2℃，黑暗。待种子萌发后统计抢救成活率(即胚的抢救成活率)为22.4％。
步骤(5)：继代和生根
种子萌发长出真叶后将幼苗先转移到继代培养基上培养，继代培养基的配方为1/2MS+3％蔗糖+0.8％琼脂。待长出4～5片叶子时再转移至生根培养基上生根，生根培养基的配方为1/2MS+3％蔗糖+0.8％琼脂+0.1mg/L α-萘乙酸(NAA)。培养条件：温度为25±2℃，80μmol m-2s-1光照下培养，光照时间为12小时/天。
步骤(6)：幼苗的移栽
当生根后的幼苗的平均根长大于2厘米时，幼苗的根系已经足够健壮，此时将其从培养瓶中取出，轻轻冲洗掉根部的培养基并移栽至营养钵中，营养钵中的基质为蛭石和珍珠岩(2∶1，v/v)。为防止幼苗失水萎蔫，提高移栽成活率，可在幼苗上方覆盖薄膜并适当遮荫以保持湿度，2天后开始逐渐揭开薄膜使幼苗适应外界环境。大约炼苗10天后移至田间，从而获得本发明的嫁接嵌合体TCC的有性后代植株，移栽成活率可达100％。
植物学特性观察：通过本实施例培养获得的嫁接嵌合体TCC的自交后代植株的植物学特性与紫甘蓝较为相似，未出现显著的形态学变异，且染色体数为2n＝18，也与紫甘蓝相同。
实施例2-10：
在实施例2-10中，本发明通过胚抢救获得植物嫁接嵌合体后代的方法的步骤与实施例1相同，不同之处见表1。
表1
| 实施例 | 在步骤(3)中的黑暗培养时间(小时) | 在步骤(3)中的光照培养时的光照强度μmolm-2s-1 | 在步骤(3)中的光照时间(小时/天) | 在步骤(3)中的胚珠接种的密度(个/厘米2) | 在步骤(5)中的光照培养时的光照强度μmolm-2s-1 | 胚的抢救成活率(％) |
| 实施例2 | 12 | 30 | 8 | 1 | 80 | 15.6 |
| 实施例3 | 12 | 45 | 10 | 2 | 100 | 13.3 |
| 实施例4 | 12 | 60 | 12 | 3 | 120 | 10.8 |
| 实施例5 | 18 | 30 | 8 | 1 | 80 | 16.7 |
| 实施例6 | 18 | 45 | 10 | 2 | 100 | 18.0 |
| 实施例7 | 18 | 60 | 12 | 3 | 120 | 17.1 |
| 实施例8 | 24 | 30 | 8 | 1 | 80 | 21.6 |
| 实施例9 | 24 | 45 | 10 | 2 | 100 | 20.8 |
| 实施例10 | 24 | 60 | 12 | 3 | 120 | 18.5 |
实施例11-12：
在实施例11-12中，本发明通过胚抢救获得植物嫁接嵌合体后代的方法的步骤与实施例1相同，不同之处见表2。
表2
| 实施例 | 在步骤(3)中的发育培养基配方的活性炭含量(％) | 在步骤(3)中的发育培养基配方的谷氨酰胺的含量(mg/L) | 在步骤(3)中的发育培养基配方的水解酪蛋白的含量(mg/L) | 胚的抢救成活率(％) |
| 实施例11 | 0.2 | 400 | 0 | 15.8 |
| 实施例 | 在步骤(3)中的发育培养基配方的活性炭含量(％) | 在步骤(3)中的发育培养基配方的谷氨酰胺的含量(mg/L) | 在步骤(3)中的发育培养基配方的水解酪蛋白的含量(mg/L) | 胚的抢救成活率(％) |
| 实施例12 | 0.2 | 0 | 400 | 17.3 |
植物学特性观察：以上实施例2-12培养获得的嫁接嵌合体TCC的自交后代植株的植物学特性与紫甘蓝较为相似，未出现显著的形态学变异，且染色体数为2n＝18，也与紫甘蓝相同。
最后需要说明的是，以上列举的仅是本发明的具体实施例子。显然，本发明不限于以上实施例子，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种通过胚抢救获得植物嫁接嵌合体后代的方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)在十字花科植物嫁接嵌合体的幼胚败育的前1天摘取子房；
(2)将摘取的子房先消毒，后在超净工作台上用无菌蒸馏水冲洗；
(3)将冲洗后的子房置于铺有用营养液充分浸泡过的滤纸的培养皿上，剖开子房的一端，然后将子房沿腹缝线撕开，选取子房内呈淡绿色且有光泽的胚珠；将胚珠连同胚柄以及与胚柄相连的子房壁组织一同切下并接种到发育培养基上，使胚柄和子房壁组织与培养基相接触；接种后的胚珠先于25±2℃的黑暗条件下培养12～24小时，再进行光照培养，所述光照培养的温度为25±2℃、光照强度为30～60μmol m-2s-1、光照时间为8～12小时/天；
(4)在胚珠成熟为种子后，将种子摘下后接种于发芽培养基上于25±2℃的黑暗条件下进行培养使种子萌发；
(5)在种子萌发长出真叶后将幼苗先转移到继代培养基上培养，后再转移至生根培养基上生根，在继代培养基和生根培养基上进行培养的温度为25±2℃、光照强度为80～120μmol m-2s-1、光照时间为12小时/天；
(6)将生根后的幼苗从生根培养基中取出，洗掉根部的培养基并将幼苗移栽至装有基质的营养钵中炼苗6～12天，后将幼苗移至田间，从而获得植物嫁接嵌合体后代。
2.根据权利要求1所述的通过胚抢救获得植物嫁接嵌合体后代的方法，其特征在于：在所述步骤(3)中，所述营养液为3％蔗糖溶液。
3.根据权利要求1所述的通过胚抢救获得植物嫁接嵌合体后代的方法，其特征在于：在所述步骤(3)中，将胚珠接种到发育培养基时的接种密度为1～3个胚珠/厘米2。
4.根据权利要求3所述的通过胚抢救获得植物嫁接嵌合体后代的方法，其特征在于：所述接种密度为1个胚珠/厘米2。
5.根据权利要求1所述的通过胚抢救获得植物嫁接嵌合体后代的方法，其特征在于：在所述步骤(3)中，所述发育培养基的配方为MS+3％蔗糖+0.8％琼脂+400mg/L谷氨酰胺+400mg/L水解酪蛋白+0.2％活性炭，pH＝5.8。
6.根据权利要求1所述的通过胚抢救获得植物嫁接嵌合体后代的方法，其特征在于：在所述步骤(4)中，所述发芽培养基的配方为1/2MS+3％蔗糖+0.8％琼脂+0.2mg/L 6-苄氨基嘌呤。
7.根据权利要求1所述的通过胚抢救获得植物嫁接嵌合体后代的方法，其特征在于：在所述步骤(5)中，所述继代培养基的配方为1/2MS+3％蔗糖+0.8％琼脂。
8.根据权利要求1所述的通过胚抢救获得植物嫁接嵌合体后代的方法，其特征在于：在所述步骤(5)中，所述生根培养基的配方为1/2MS+3％蔗糖+0.8％琼脂+0.1mg/Lα-萘乙酸。
9.根据权利要求1所述的通过胚抢救获得植物嫁接嵌合体后代的方法，其特征在于：在所述步骤(6)中，所述基质为蛭石和珍珠岩，蛭石和珍珠岩的体积比为2∶1。
10.根据权利要求1所述的通过胚抢救获得植物嫁接嵌合体后代的方法，其特征在于：在步骤(6)中进行炼苗时，先在幼苗上覆盖薄膜并遮荫，在炼苗2～4天后逐渐揭开薄膜使幼苗适应外界环境。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2010101516226A CN101828525B (zh) | 2010-04-20 | 2010-04-20 | 一种通过胚抢救获得植物嫁接嵌合体后代的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2010101516226A CN101828525B (zh) | 2010-04-20 | 2010-04-20 | 一种通过胚抢救获得植物嫁接嵌合体后代的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101828525A true CN101828525A (zh) | 2010-09-15 |
| CN101828525B CN101828525B (zh) | 2012-05-23 |
Family
ID=42712868
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2010101516226A Expired - Fee Related CN101828525B (zh) | 2010-04-20 | 2010-04-20 | 一种通过胚抢救获得植物嫁接嵌合体后代的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101828525B (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103385167A (zh) * | 2013-06-26 | 2013-11-13 | 浙江省农业科学院 | 一种宝莲灯子房培养及组培快繁方法 |
| CN103651111A (zh) * | 2013-12-16 | 2014-03-26 | 浙江大学 | 榨菜与紫甘蓝三基因组异源六倍体蔬菜种质及获取方法 |
| CN114467750A (zh) * | 2022-02-16 | 2022-05-13 | 浙江大学 | 一种大盘山榧未成熟种子看护培养方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1994067A (zh) * | 2006-11-16 | 2007-07-11 | 云南省农业科学院花卉研究所 | 利用幼胚离体挽救培养获得百合远缘杂种的方法 |
-
2010
- 2010-04-20 CN CN2010101516226A patent/CN101828525B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1994067A (zh) * | 2006-11-16 | 2007-07-11 | 云南省农业科学院花卉研究所 | 利用幼胚离体挽救培养获得百合远缘杂种的方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 《2008园艺学进展--中国园艺学会第八届青年学术讨论会暨现代园艺论坛论文集》 20081231 王燕等 榨菜与紫甘蓝种间嵌合体的特性研究 583 1-10 , 2 * |
| 《实验生物学报》 19830331 赵德培 通过组织培养获得萝卜与大白菜的属间杂种 21-29 1-10 第16卷, 第1期 2 * |
| 《热带亚热带植物学报》 20041231 伍成厚等 被子植物未受精胚珠与子房离体培养的研究进展 580-586 1-10 第12卷, 第6期 2 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103385167A (zh) * | 2013-06-26 | 2013-11-13 | 浙江省农业科学院 | 一种宝莲灯子房培养及组培快繁方法 |
| CN103385167B (zh) * | 2013-06-26 | 2015-07-08 | 浙江省农业科学院 | 一种宝莲灯子房培养及组培快繁方法 |
| CN103651111A (zh) * | 2013-12-16 | 2014-03-26 | 浙江大学 | 榨菜与紫甘蓝三基因组异源六倍体蔬菜种质及获取方法 |
| CN114467750A (zh) * | 2022-02-16 | 2022-05-13 | 浙江大学 | 一种大盘山榧未成熟种子看护培养方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101828525B (zh) | 2012-05-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101558744B (zh) | 亨利兜兰种子试管苗的培育方法 | |
| CN101647393B (zh) | 毛花猕猴桃组培快速繁殖方法 | |
| CN109220793B (zh) | 一种蝴蝶兰新品种的选育方法 | |
| CN103444552A (zh) | 一种诱导茄子花药再生单倍体植株的方法 | |
| CN104885948B (zh) | 一种油茶子叶节直接再生植株的方法 | |
| CN113661924B (zh) | 保亭花的组培快速繁殖方法 | |
| CN111264383B (zh) | 一种同步选育和保存姜花属杂交新品系及种质的方法 | |
| CN107278891B (zh) | 一种杏梅组织培养快速繁殖方法 | |
| CN108029559B (zh) | 一种快速培育落叶冬青组培苗的方法 | |
| CN100429972C (zh) | 晚春含笑的组织培养繁殖方法 | |
| CN108064699B (zh) | 一种葛根植物的组织离体培养繁殖方法 | |
| KR100868523B1 (ko) | 새우난속 식물의 기내 무균발아를 통한 증식방법 | |
| CN105284622B (zh) | 一种快速获得鸢尾杂交优良无性系的方法 | |
| Cañas et al. | Micropropagation of olive (Olea europaea L.) | |
| CN101828525B (zh) | 一种通过胚抢救获得植物嫁接嵌合体后代的方法 | |
| CN110402818B (zh) | 一种优种板栗成熟胚组织培养快繁育苗的方法 | |
| CN105010123B (zh) | 通过离体挽救培养获得草莓远缘杂种的方法及培养基 | |
| CN115024220B (zh) | 薄层培养获得大花君子兰体细胞胚的方法 | |
| CN114600772B (zh) | 一种深山含笑的组培方法和快速繁殖方法 | |
| CN103535279B (zh) | 一种龙爪柳未生根组培苗的生根方法 | |
| CN109479704B (zh) | 一种早熟蟠桃胚挽救的方法 | |
| CN111972074A (zh) | 一种甜樱桃早熟品种的种子处理方法及播种当年成苗的方法 | |
| CN112005882A (zh) | 一种软枣猕猴桃远缘杂交胚胎挽救的方法 | |
| CN110583481A (zh) | 一种诱导辽东楤木体细胞胚发生及植株再生的方法 | |
| LU506847B1 (en) | Hardening-seedling method of poplar tissue culture seedlings |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C53 | Correction of patent for invention or patent application | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Chen Liping Inventor after: Wang Yan Inventor before: Wang Yan Inventor before: Chen Liping |
|
| COR | Change of bibliographic data |
Free format text: CORRECT: INVENTOR; FROM: WANG YAN CHEN LIPING TO: CHEN LIPING WANG YAN |
|
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20120523 Termination date: 20150420 |
|
| EXPY | Termination of patent right or utility model |