CN116515752B - 3,5-二羟基-4’-甲氧基芪-3-O-β-D-葡萄糖苷用于促进DC细胞体外增殖的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了3，5‑二羟基‑4’‑甲氧基芪‑3‑O‑β‑D‑葡萄糖苷用于促进DC细胞体外增殖的用途。本发明研究发现3，5‑二羟基‑4’‑甲氧基芪‑3‑O‑β‑D‑葡萄糖苷可以用于提高DC细胞体增殖活性，用于制备提高DC细胞体外增殖活性的培养基。
Description
技术领域
本发明涉及细胞培养技术领域，具体是涉及一种3，5-二羟基-4′-甲氧基芪-3-O-β-D-葡萄糖苷用于促进DC细胞体外增殖的用途。
背景技术
树突状细胞，简称DC细胞，作为人体内已知的抗原递呈能力最强的抗原递呈细胞，成为当前抗病毒免疫和肿瘤免疫治疗的热点之一。
DC细胞广泛应用于组织工程和医学领域，但由于DC细胞自身增殖能力不强，在常规培养条件下，扩增速度不能满足需求，因此，本领域急需解决的是如何提高DC细胞体外增殖活力。
3，5-二羟基-4’-甲氧基芪-3-O-β-D-葡萄糖苷为大黄提取物，相关论文和专利技术CN107474083A均公开过其制备方法。但目前尚未见3，5-二羟基-4’-甲氧基芪-3-O-β-D-葡萄糖苷在促进DC细胞体外增殖的研究。
发明内容
本发明目的是克服现有技术的不足，提供一种3，5-二羟基-4’-甲氧基芪-3-O-β-D-葡萄糖苷用于促进DC细胞体外增殖的用途，以提高DC细胞体外增殖活力。为实现上述目的，本发明提供了以下技术方案：
第一方面，本发明提供了3，5-二羟基-4’-甲氧基芪-3-O-β-D-葡萄糖苷用于促进DC细胞体外增殖的用途。
第二方面，本发明还提供了3，5-二羟基-4’-甲氧基芪-3-O-β-D-葡萄糖苷用于制备促进DC细胞体外增殖的培养基的用途。
本发明与现有技术不同之处在于本发明取得了如下技术效果：
本发明通过实验发现3，5-二羟基-4′-甲氧基芪-3-O-β-D-葡萄糖苷可以显著提高DC细胞体外增殖活性，可促进DC细胞成熟并保持细胞活性，可用于制备提高DC细胞体外增殖活性的培养基。
附图说明
图1是本发明对照组、诱导组1和诱导组2的DC细胞的体外生长曲线。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用材料、试剂等，如无特别说明，均可从商业途径获得。
一、实验材料
人外周血单个核细胞购自武汉普诺赛生命科技有限公司；
胎牛血清、RPMI1640培养基购自AusGeneX公司；
白介素-4、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子购自上海普欣生物技术有限公司；
PE标记小鼠抗人CD40抗体、PE标记小鼠抗人CD80抗体、PE标记小鼠抗人CD83抗体、PE标记小鼠抗人CD86抗体以及FITC标记的小鼠抗人HLA-DR抗体购自上海生工。
二、实验方法
1、DC细胞培养
将人外周血单个核细胞以5×106/mL的密度接种至含10％FBS的RPMI1640培养基中于37℃、5％CO2培养箱培养4h，收集贴壁细胞；
将贴壁细胞以1×106/mL的密度接种于48孔培养板，每孔2mL细胞悬液，加入300U/mL白介素-4、600U/mL粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和10％FBS的RPMI1640培养基于37℃、5％CO2培养箱培养，培养1d后，每2d更换培养基并补充细胞因子；
随机分为对照组、诱导组1和诱导组2：对照组不进行额外添加；诱导组1在培养第5d加入30μg/mL 3，5-二羟基-4’-甲氧基芪-3-O-β-D-葡萄糖苷，诱导组2在培养第5d加入60μg/mL3，5-二羟基-4’-甲氧基芪-3-O-β-D-葡萄糖苷；
然后，对照组、诱导组1和诱导组2均培养10d，分别收集侧壁细胞进行检测。
2、DC细胞增殖能力测定
在第0、2、4、6、8、10d分别取3孔细胞，消化后用细胞计数仪进行计数，以培养时间为横轴和细胞数量为纵轴，绘制对照组和诱导组的DC细胞的体外生长曲线。
3、DC细胞表型检测
分别取诱导组1的第0、2、4、6、8、10dDC细胞，以及取对照组和诱导组2第10dDC细胞，消化后用PBS洗涤、重悬成1×106细胞/mL，取500μL悬液，分别加入PE标记小鼠抗人CD40抗体、PE标记小鼠抗人CD80抗体、PE标记小鼠抗人CD83抗体、PE标记小鼠抗人CD86抗体以及FITC标记的小鼠抗人HLA-DR抗体，混匀后4℃避光孵育40min，PBS洗涤2次，上流式细胞仪检测。
三、实验结果
1、DC细胞增殖能力
对照组、诱导组1和诱导组2的DC细胞的体外生长曲线如图1所示。参照图1可知，3，5-二羟基-4’-甲氧基芪-3-O-β-D-葡萄糖苷可以显著促进DC细胞体外增殖，且浓度越高DC细胞的增殖活性越强。表1为对照组、诱导组1和诱导组2在不同时间点的细胞数。
表1对照组、诱导组1和诱导组2不同时间点的细胞数
2、DC细胞表面表型
表面共刺激分子CD40、CD80、CD83和CD86是DC功能成熟的表面标志，HLA-DR是抗原提呈分子。
如表2所示，体外培养2d后，诱导组1的细胞表面表型与培养前相比，CD40、CD80、CD86、HLA-DR阳性率表达明显升高(P＜0.05)，但CD83低表达符合不成熟DC表型；在第6d，加入3，5-二羟基-4’-甲氧基芪-3-O-β-D-葡萄糖苷的诱导组1，CD40、CD80、CD83、CD86和HLA-DR阳性率表达显著升高(P＜0.05)，符合成熟DC表型特征。如表2-4所示，诱导组1和诱导组2相对于对照组，DC细胞成熟度得到增强，3,5-二羟基-4′-甲氧基芪-3-O-β-D-葡萄糖苷可促进DC细胞成熟。
表2诱导组1DC细胞表面标志的表达水平
表3对照组DC细胞表面标志的表达水平
表4诱导组2DC细胞表面标志的表达水平
通过上述实验可以发现，3，5-二羟基-4′-甲氧基芪-3-O-β-D-葡萄糖苷可以显著提高DC细胞体外增殖活性，可促进DC细胞成熟并保持细胞活性。
以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
Claims (2)
1.3，5-二羟基-4’-甲氧基芪-3-O-β-D-葡萄糖苷用于促进DC细胞体外增殖的用途。
2.3，5-二羟基-4’-甲氧基芪-3-O-β-D-葡萄糖苷用于制备促进DC细胞体外增殖的培养基的用途。
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