CN116437956A - 用于治疗慢性淋巴细胞白血病的针对cd3和cd20的双特异性抗体 - Google Patents

用于治疗慢性淋巴细胞白血病的针对cd3和cd20的双特异性抗体 Download PDF

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Abstract

提供了使用与CD3和CD20结合的抗体进行受试者的慢性淋巴细胞白血病(CLL)的临床治疗的方法。

Description

用于治疗慢性淋巴细胞白血病的针对CD3和CD20的双特异性 抗体
技术领域
本发明涉及针对CD3和CD20的双特异性抗体以及这种抗体在治疗慢性淋巴细胞白血病(CLL)中的用途。还提供了有利的治疗方案。
背景技术
慢性淋巴细胞白血病(CLL)是起源于骨髓中不成熟淋巴细胞的不受控制的增殖，并且涉及在血液中循环肿瘤细胞的B细胞恶性肿瘤。CLL的特征在于克隆性CD5+CD19+CD20+CD23+B细胞在骨髓、血液和淋巴样器官诸如淋巴结和脾脏中的积累(Zenz等人,Nat RevCancer 2010；10:37-50)。CLL通常是缓慢生长的癌症。CLL主要是老年人的疾病，诊断时的中位年龄为70岁。在西方国家中，CLL是成人中最常见的白血病，占美国所有白血病的大约25％至30％，估计有20,720个新病例和3,930例死亡(Siegel等人,CA Cancer J Clin2019；69:7-34)。在世界范围内，每年约有105,000个病例，其中35,000例死亡(Global Burden ofDisease Cancer,Fitzmaurice等人,JAMA Oncol 2018；4:1553-68)。
相反，淋巴瘤起源于骨髓以外器官中淋巴细胞的不受控制的增殖。虽然在一些淋巴瘤中，骨髓也可以具有肿瘤细胞浸润。淋巴瘤细胞通常不会出现在外周血中。据观察，CLL的CD20表达低于正常外周B细胞或其他恶性NHL(Almasri等人,Am J Hematol 1992:40:259-63；Pedersen等人,Blood 2002；99:1314-9；Prevodnik等人,Diagn Pathol 2011；6:33；Olejniczak等人,Immunol Invest 2006；35:93-114；Ginaldi等人,J Clin Pathol1998；51:364-9；D'Arena等人,Am J Hematol 2000；64:275-81)。
大多数新诊断的CLL患者表现为无症状疾病并且可以不治疗而进行监测。对于有症状或高风险的疾病，护理标准包含细胞毒性化疗(即氟达拉滨(fludarabine)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、苯达莫司汀(bendamustine)或瘤可宁(chlorambucil))联合抗CD20单克隆抗体(即利妥昔单抗(rituximab)或奥比妥珠单抗(obinutuzumab))(Goede等人,NEngl J Med 2014；370-1101-10；Hallek等人,Lancet 2010；376:1164-74)。尽管这些化疗免疫疗法已经彻底改革了用于CLL的治疗，但作为这些高毒性和强化方案的替代，具有低毒性概况的新的药剂特别重要。
近年来，单独的或与奥比妥珠单抗联合(Khan等人,Future Oncol；2019；15(6):579-89))的无化疗方案，诸如依鲁替尼加利妥昔单抗(Burger等人,Ann Intern Med 2015；163:461-4)、维奈托克(venetoclax)加利妥昔单抗(Seymour等人,N Engl J Med 2018；378:1107-20)、维奈托克加奥比妥珠单抗(Fisher等人N Engl J Med；2019；380(23):2225-36))、依鲁替尼加维奈托克(Niemann等人,Blood 2019；134:4292；Tam等人,2019ASH年会；2019年12月7至10日；Orlando,FL.Abstract 35.bit.ly/2RvawBV)，以及阿卡替尼(acalabrutinib)，在新诊断的和复发性/难治性CLL两者中显示出有希望的结果。尽管有这些优势，但在干细胞移植的积极疗法之外，CLL仍然是不可治愈的疾病。特别是从依鲁替尼和维奈托克的组合中具有早期复发的患者，或对靶向疗法不耐受的患者，造成了显著的未满足医疗需求。总的来说，CLL患者，特别是那些在接受依鲁替尼或维奈托克治疗时已经早期复发的患者，或对靶向疗法不耐受的患者，具有非常有限的选择。
CLL患者，例如，那些在目前可用的疗法后已复发或对目前可用的疗法不耐受的患者的治疗选择仍未得到满足。
发明概述
本文提供了通过施用与CD3和CD20结合的双特异性抗体治疗患有CLL的人受试者的方法，以及特别是有利的临床治疗方案。
在一个方面，本文提供了在人受试者中治疗CLL(例如复发性和/或难治性CLL)的方法，该方法包括向受试者施用(例如，皮下)有效量的双特异性抗体(例如，艾可瑞妥单抗(epcoritamab))，该双特异性抗体包含：
(i)包含第一抗原结合区的第一结合臂，该第一抗原结合区与人CD3ε(epsilon)结合并且包含可变重链(VH)区和可变轻链(VL)区，其中VH区包含SEQ ID NO:6的VH区序列中的CDR1、CDR2和CDR3序列，并且VL区包含SEQ ID NO:7的VL区序列中的CDR1、CDR2和CDR3序列；和
(ii)包含第二抗原结合区的第二结合臂，该第二抗原结合区与人CD20结合并且包含VH区和VL区，其中VH区包含SEQ ID NO:13的VH区序列中的CDR1、CDR2和CDR3序列，并且VL区包含SEQ ID NO:14的VL区序列中的CDR1、CDR2和CDR3序列。
其中双特异性抗体在28天周期中以12-60mg范围的剂量施用。在一些实施方案中，双特异性抗体以12mg、24mg、48mg或60mg的剂量(或约12mg、24mg、48mg或60mg的剂量)施用。在一些实施方案中，双特异性抗体以12mg的剂量(或约12mg的剂量)施用。在一些实施方案中，双特异性抗体以24mg的剂量(或约24mg的剂量)施用。在一些实施方案中，双特异性抗体以48mg的剂量(或约48mg的剂量)施用。在一些实施方案中，双特异性抗体以60mg的剂量(或约60mg的剂量)施用。
在一些实施方案中，双特异性抗体每周施用一次，例如，持续2.5个28天周期(即周期1的第15和22天，以及周期2-3的第1、8、15和22天)。在一些实施方案中，双特异性抗体在每周施用后每两周施用一次，例如，持续6个28天周期。在一些实施方案中，双特异性抗体在两周施用一次后每四周施用一次。在另一个实施方案中，在施用24mg或48mg的每周剂量之前两周，施用双特异性抗体的引发剂量(例如0.05-0.35mg，例如0.16mg或约0.16mg)。在进一步的实施方案中，在中间剂量之前一周施用引发剂量，并且在24mg或48mg的首次每周剂量之前一周施用中间剂量。
在一些实施方案中，双特异性抗体以28天周期施用，其中：
a)在周期1中，在第1天施用引发剂量(例如0.05-0.35mg，例如0.16mg或约0.16mg)，在第8天施用中间剂量(例如0.6-1.2mg，例如0.8mg或约0.8mg)，并且在第15和22天施用12-60mg(例如12mg、24mg、48mg或60mg)的全剂量；
b)在周期2-3中，在第1、8、15和22天施用12-60mg(例如12mg、24mg、48mg或60mg)的全剂量；
c)在周期4-9中，在第1天和15天施用12-60mg(例如12mg、24mg、48mg或60mg)的全剂量；和
d)在周期10和随后的周期中，在第1天施用12-60mg的全剂量(例如12mg、24mg、48mg或60mg)。
在一些实施方案中，受试者对BTK抑制剂不耐受。在一些实施方案中，受试者已经接受至少两种既往抗赘生疗法线，例如，其中至少两种既往抗赘生疗法线的至少一种包括用BTK抑制剂诸如依鲁替尼治疗。在一些实施方案中，受试者的CLL对于BTK抑制剂(诸如依鲁替尼或阿卡替尼)是难治性的。在另一个实施方案中，受试者的CLL在用BTK抑制剂(依鲁替尼)治疗期间复发。在另一个实施方案中，受试者在接受两种既往抗赘生疗法后具有难治性和/或复发性CLL。
在一些实施方案中，用针对细胞因子释放综合征(CRS)的防治来治疗受试者。在一些实施方案中，防治包括在例如与双特异性抗体的同一天施用皮质类固醇(例如泼尼松龙(prednisolone)，以例如100mg的剂量或其当量，包含口服剂量)。在一些实施方案中，在施用双特异性抗体后的第二、第三和第四天进一步施用皮质类固醇。
在一些实施方案中，对受试者施用前驱用药，诸如抗组胺药(例如苯海拉明(diphenhydramine)，以例如50mg的剂量或其当量静脉内或口服)和/或退热药(例如对乙酰氨基酚，以例如560-1000mg的剂量)，以减少对注射的反应。在一些实施方案中，在与双特异性抗体的同一天施用前驱用药。
在一些实施方案中，在周期1期间施用该防治和前驱用药。在一些实施方案中，当在周期1中双特异性抗体的末次施用后受试者经历大于1级的CRS时，在周期2期间施用该防治。在一些实施方案中，当在先前周期的双特异性抗体的末次施用中，受试者经历大于1级的CRS时，在随后的周期中继续该防治。在另一个实施方案中，在周期2期间施用前驱用药。在另一个实施方案中，在随后的周期中施用前驱用药。
在一些实施方案中，如果受试者发展1级CRS，则用退热药和水化治疗受试者。在一些实施方案中，如果受试者发展2级CRS，则用托珠单抗(tocilizumab)和/或地塞米松(dexamethasone)或其甲泼尼龙(methylprednisolone)等效物治疗受试者。在一些实施方案中，如果受试者发展3级CRS，则用托珠单抗和地塞米松(例如，以10-20mg的剂量或其甲泼尼龙当量，例如，每6小时施用一次)治疗受试者。在另一个实施方案中，如果受试者发展4级CRS，则用托珠单抗和甲泼尼龙(例如，以1000mg/天的剂量)治疗受试者。在另一个实施方案中，如果受试者对托珠单抗没有响应，则将托珠单抗换成司妥昔单抗(siltuximab)。
在一些实施方案中，向受试者施用针对肿瘤溶解综合征(TLS)的防治。在一些实施方案中，针对TLS的防治包括在施用双特异性抗体之前施用一种或多种降尿酸剂。在一些实施方案中，别嘌呤醇和拉布立酶作为降尿酸剂施用。在进一步的实施方案中，在施用双特异性抗体之前至少72小时施用别嘌呤醇。在进一步的实施方案中，在施用别嘌呤醇之后且施用双特异性抗体之前，施用拉布立酶。在一些实施方案中，当受试者表现出TLS的体征时，可以使用支持性疗法，诸如拉布立酶和/或别嘌呤醇。
在一些实施方案中，用本文所述方法治疗的受试者达到完全响应、部分响应或疾病稳定，例如按照iwCLL响应标准所定义的。
在一些实施方案中，双特异性抗体的第一抗原结合区包含分别包含SEQ ID NO:1、2和3中列出的氨基酸序列的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3，以及分别包含SEQ ID NO:4、序列GTN和SEQ ID NO:5中列出的氨基酸序列的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3；并且第二抗原结合区包含分别包含SEQ ID NO:8、9和10中列出的氨基酸序列的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3，以及分别包含SEQ ID NO:11、序列DAS和SEQ ID NO:12中列出的氨基酸序列的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3。
在一些实施方案中，双特异性抗体的第一抗原结合区包含VH区和VL区，该VH区包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列，该VL区包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；并且第二抗原结合区包含VH区和VL区，该VH区包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列，该VL区包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列。
在一些实施方案中，双特异性抗体的第一结合臂衍生自人源化抗体，优选衍生自全长的IgG1,λ(lambda)抗体。在一些实施方案中，双特异性抗体的第二结合臂衍生自人抗体，优选衍生自全长的IgG1,κ(kappa)抗体。在一些实施方案中，该双特异性抗体是具有人IgG1恒定区的全长抗体。
在一些实施方案中，该双特异性抗体包含惰性Fc区，例如，其中对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链恒定区中位置L234、L235和D265的位置处的氨基酸分别为F、E和A的Fc区。在一些实施方案中，双特异性抗体包含促进双特异性抗体形成的取代，例如，其中在第一重链中，对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链恒定区中F405的位置处的氨基酸是L，并且在第二重链中，对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链恒定区中K409的位置处的氨基酸是R，或反之亦然。在一些实施方案中，双特异性抗体具有惰性Fc区(例如在L234、L235和D265的取代(例如L234F、L235E和D265A))和促进双特异性抗体形成的取代(例如F405L和K409R)两者。在进一步的实施方案中，该双特异性抗体包含重链恒定区，该重链恒定区包含SEQ ID NO:19和20的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该双特异性抗体包含分别包含SEQ ID NO:24和25中列出的氨基酸序列(或由其组成)的第一重链和第一轻链，以及分别包含SEQ ID NO:26和27中列出的氨基酸序列(或由其组成)的第二重链和第二轻链，其。在一些实施方案中，双特异性抗体是艾可瑞妥单抗或其生物类似物。
附图简述
图1A-1C是一系列图，其显示了在从CLL患者(左小图)和健康供体(右小图)获得的PBMC中，艾可瑞妥单抗对CD4+(图1A)和CD8+(图1B)T细胞活化，以及B细胞存活力(图1C)的作用。显示的数据是来自三个测试供体中的一个代表性供体的重复孔的百分比 SD。左边的小图显示了CLL患者的PBMC(CFSE阴性)的结果，右边的小图是健康供体的PBMC(CFSE阳性)。实心圆代表艾可瑞妥单抗，空心方块代表含有CD3特异性臂和对照(非结合)臂的对照双特异性抗体，并且空心三角形代表含有CD20特异性臂和对照(非结合)臂的对照双特异性抗体。
图2是临床试验设计的示意图。*可以探索额外的剂量水平(更高或更低)。MTD：最大耐受剂量，RP2D：R/R CLL受试者中的推荐2期剂量。
发明详述
定义
如本文所用，术语“免疫球蛋白”是指一类结构相关的糖蛋白，其由两对多肽链组成，一对轻(L)低分子量链和一对重(H)链，所有四条通过二硫键相互连接。免疫球蛋白的结构已被很好地表征(参见例如,Fundamental Immunology Ch.7(Paul,W.编,第2版RavenPress,N.Y.(1989))。简而言之，每条重链通常由重链可变区(本文缩写为VH或VH)和重链恒定区(本文缩写为CH或CH)组成。重链恒定区通常由三个域CH1、CH2和CH3组成。铰链区是重链CH1和CH2域之间的区并且高度柔性。铰链区中的二硫键是IgG分子中两条重链之间相互作用的一部分。每条轻链通常由轻链可变区(本文缩写为VL或VL)和轻链恒定区(本文缩写为CL或CL)组成。轻链恒定区通常由一个域CL组成。VH区和VL区可以进一步细分为高变性区(或高变区，其在序列和/或结构定义环的形式上可以是高变的)，也称为互补决定区(CDR)，散布有更保守的区，称为框架区(FR)。每个VH和VL通常由三个CDR和四个FR构成，从氨基端到羧基端按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4(另见Chothia和Lesk J MolBiol 1987；196:90117)。除非另有说明或与上下文矛盾，否则本文的CDR序列根据IMGT规则(Brochet X.,Nucl Acids Res2008；36:W503-508；Lefranc MP.,Nucl Acids Res 1999；27:209-12；www.imgt.org/)鉴定。除非另有说明或与上下文矛盾，否则对恒定区中氨基酸位置的引用是根据EU编号(Edelman等人,PNAS.1969；63:78-85；Kabat等人,Sequences ofProteins of Immunological Interest,第五版1991NIH Publication No.91-3242)。例如，根据EU编号，SEQ ID NO:15示出IgG1重链恒定区的氨基酸位置118-447。
如本文所用，术语“对应于位置......的氨基酸”是指人IgG1重链中的氨基酸位置编号。其他免疫球蛋白中的相应氨基酸位置可通过与人IgG1比对发现。因此，一个序列中“对应于”另一序列中的氨基酸或区段的氨基酸或区段是使用标准序列比对程序(诸如ALIGN、ClustalW或类似程序)通常以默认设置与其他氨基酸或区段比对的氨基酸或区段，并且与人IgG1重链具有至少50％、至少80％、至少90％或至少95％的同一性。比对序列或序列中的区段并由此确定序列中与根据本发明的氨基酸位置对应的位置在本领域普通技术人员的能力范围内。
如本文所用，在本发明的上下文中，术语“抗体”(Ab)是指免疫球蛋白分子，其在典型生理条件下具有特异性结合抗原的能力，具有显著时间段的半衰期，诸如至少约30分钟、至少约45分钟、至少约1小时、至少约2小时、至少约4小时、至少约8小时、至少约12小时、约24小时或更长时间、约48小时或更长时间，约3、4、5、6、7天或更多天等，或任何其他相关的功能定义时期(诸如足以诱导、促进、增强和/或调节与抗体结合抗原相关的生理反应的时间和/或足以使抗体募集效应器活性的时间)。免疫球蛋白分子的重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合域。除非另有说明，否则术语抗体还涵盖多克隆抗体、单克隆抗体(mAb)、抗体样多肽、嵌合抗体和人源化抗体。生成的抗体可以拥有任何同种型。
如本文所用，术语“抗体片段”或“抗原结合片段”是指保留特异性结合抗原的能力的免疫球蛋白分子的片段，并且可以通过任何已知技术，诸如酶促裂解、肽合成和重组技术生成。抗体片段的实例包括(i)Fab’或Fab片段，由VL、VH、CL和CH1域组成的单价片段，或如WO2007059782(Genmab)中所述的单价抗体；(ii)F(ab’)2片段，包含在铰链区通过二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)Fd片段，基本上由VH和CH1域组成；(iv)Fv片段，基本上由抗体单臂的VL和VH域组成；(v)dAb片段(Ward等人,Nature 1989；341:54446)，其基本上由VH域组成并且也称为域抗体(Holt等人；Trends Biotechnol2003；21:484-90)；(vi)骆驼科或纳米抗体(Revets等人；Expert Opin Biol Ther2005；5:111-24)和(vii)分离的互补决定区(CDR)。此外，尽管Fv片段的两个域VL和VH由单独的基因编码，但可以使用重组方法通过合成接头连接它们，使它们能够制成单个蛋白质链，其中VL和VH区配对以形成单价分子(称为单链抗体或单链Fv(scFv)，参见例如，Bird等人,Science 1988；242:42326以及Huston等人,PNAS 1988；85:587983)。此类单链抗体涵盖在术语抗体片段中，除非另有说明或上下文明确指出。
如本文所用，术语“抗体结合区”或“抗原结合区”是指与抗原相互作用并包含VH区和VL区两者的区。当在本文中使用时，术语抗体不仅指单特异性抗体，而且指包含多个，诸如两个或更多个，例如三个或更多个不同的抗原结合区的多特异性抗体。除非另有说明或与上下文明显矛盾，否则术语抗原结合区包括作为抗原结合片段的抗体片段，即保留特异性结合抗原的能力。
如本文所用，术语“同种型”是指由重链恒定区基因编码的免疫球蛋白类别(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgD、IgA、IgE或IgM)。当提及特定的同种型例如IgG1时，该术语不限于特定的同种型序列例如特定的IgG1序列，而是用于指示抗体在序列上更接近于该同种型例如IgG1，而不是其他同种型。因此，例如，IgG1抗体可以是天然存在的IgG1抗体的序列变体，其可以包括恒定区中的变异。
如本文所用，术语“双特异性抗体”或“bs”或“bsAb”是指具有由不同抗体序列定义的两个不同抗原结合区的抗体。双特异性抗体可以是任何形式。
如本文所用，术语“半分子”、“Fab-臂”和“臂”是指一个重链-轻链对。
当双特异性抗体被描述为包含“衍生自”第一亲本抗体的半分子抗体和“衍生自”第二亲本抗体的半分子抗体时，术语“衍生自”表示通过任何已知方法将来自所述第一和第二亲本抗体中的每一个的所述半分子重组为所得双特异性抗体来生成双特异性抗体。在此上下文中，“重组”不旨在受任何特定重组方法的限制，因此包括用于产生本文所述双特异性抗体的所有方法，包括例如通过半分子交换(也称为“受控Fab-臂交换”)重组，以及在核酸水平和/或通过在同一细胞中共表达两个半分子进行重组。
如本文所用，在抗体的上下文中，术语“全长”表示抗体不是片段，而是含有通常在自然界中发现的特定同种型的所有域，例如，IgG1抗体的VH、CH1、CH2、CH3、铰链、VL和CL域。全长抗体可以是工程化的。“全长”抗体的实例是艾可瑞妥单抗。
如本文所用，术语“Fc区”是指由免疫球蛋白的两条重链的Fc序列组成的抗体区，其中所述Fc序列至少包含铰链区、CH2域和CH3域。
如本文所用，术语“第一和第二CH3区之间的异二聚体相互作用”是指第一CH3/第二CH3异二聚体蛋白中第一CH3区和第二CH3区之间的相互作用。
如本文所用，术语“第一和第二CH3区的同二聚体相互作用”是指第一CH3/第一CH3同二聚体蛋白中的第一CH3区和另一个第一CH3区之间的相互作用以及第二CH3/第二CH3同二聚体蛋白中的第二CH3区和另一个第二CH3区之间的相互作用。
如本文所用，在抗体与预定抗原结合的上下文中的术语“结合”通常是以对应于当使用作为配体的抗体和作为分析物的抗原，通过例如在OctetHTX仪器中生物层干涉法(BioLayer Interferometry，BLI)技术确定时约10-6M或更小，例如10-7M或更小，如约10-8M或更小，如约10-9M或更小，约10-10M或更小或约10-11M或更小的KD的亲和力的结合，并且其中抗体以对应于KD的亲和力结合预定抗原，该KD比其结合预定抗原或密切相关抗原之外的非特异性抗原(例如BSA、酪蛋白)的KD低至少十倍，诸如低至少100倍，例如低至少1,000倍，诸如低至少10,000倍，例如低至少100,000倍。具有较低结合KD的量取决于抗体的KD，使得当抗体的KD非常低时，那么与抗原结合的KD比与非特异性抗原结合的KD低的量可能至少是10,000倍(即抗体是高度特异的)。
如本文所用，术语“KD”(M)是指特定抗体-抗原相互作用的解离平衡常数。如本文所用，亲和力和KD是负相关的，即更高的亲和力旨在指更低的KD，而更低的亲和力旨在指更高的KD。
如本文所用，术语“分离的抗体”是指基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体。在优选的实施方案中，与CD20和CD3特异性结合的分离的双特异性抗体另外基本上不含与CD20或CD3特异性结合的单特异性抗体。
如本文所用，术语“CD3”是指人分化簇3蛋白，其为T细胞共受体蛋白复合物的一部分并且由四个不同的链构成。CD3也存在于其他物种中，因此，术语“CD3”不限于人CD3，除非与上下文相矛盾。在哺乳动物中，复合物含有CD3γ(gamma)链(人CD3γ链UniProtKB/Swiss-Prot No P09693，或食蟹猴CD3γUniProtKB/Swiss-Prot No Q95LI7)、CD3δ(delta)链(人CD3δUniProtKB/Swiss-Prot No P04234，或食蟹猴CD3δUniProtKB/Swiss-Prot NoQ95LI8)、两条CD3ε(epsilon)链(人CD3εUniProtKB/Swiss-Prot No P07766，SEQ ID NO:28)；食蟹猴CD3εUniProtKB/Swiss-Prot No Q95LI5；或恒河猴CD3εUniProtKB/Swiss-ProtNo G7NCB9)和CD3ζ链(zeta)链(人CD3ζUniProtKB/Swiss-Prot No P20963，食蟹猴CD3ζUniProtKB/Swiss-Prot No Q09TK0)。这些链与称为T细胞受体(TCR)的分子缔合并在T淋巴细胞中生成激活信号。TCR和CD3分子共同构成TCR复合物。
如本文所用，术语“CD3抗体”或“抗-CD3抗体”是指特异性结合抗原CD3，特别是人CD3ε(epsilon)的抗体。
术语“人CD20”或“CD20”是指人CD20(UniProtKB/Swiss-Prot No P11836，SEQ IDNO:29)，并包括由细胞(包括肿瘤细胞)天然表达的或在用CD20基因或cDNA转染的细胞上表达的CD20的任何变体、同等型和物种同系物。物种同系物包括恒河猴CD2(恒河猴(macacamulatta)；UniProtKB/Swiss-Prot No H9YXP1)和食蟹猴CD20(食蟹猴(macacafascicularis)；UniProtKB No G7PQ03)。
如本文所用，术语“CD20抗体”或“抗CD20抗体”是指特异性结合抗原CD20，特别是人CD20的抗体。
如本文所用，术语“CD3xCD20抗体”、“抗CD3xCD20抗体”、“CD20xCD3抗体”或“抗CD20xCD3抗体”是指双特异性抗体，其包含两个不同的抗原结合区，其中一个与抗原CD20特异性结合并且其中一个与CD3特异性结合。
如本文所用，术语“DuoBody-CD3xCD20”是指IgG1双特异性CD3xCD20抗体，其包含分别如SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:25所定义的第一重链和轻链对，并且包含如SEQ ID NO:26和SEQ ID NO:27所定义的第二重链和轻链对。第一重链和轻链对包含结合人CD3ε(epsilon)的区，第二重链和轻链对包含结合人CD20的区。第一结合区包含如SEQ ID NO:6和7所定义的VH和VL序列，并且第二结合区包含如SEQ ID NO:13和14所定义的VH和VL序列。这种双特异性抗体可以如WO 2016/110576所述进行制备。
本文还提供抗体，其包含实例的抗体的重链、轻链、VL区、VH区或一个或多个CDR的功能变体。在抗体的上下文中使用的重链、轻链、VL、VH或CDR的功能变体仍然允许抗体保留至少相当大比例(至少约90％、95％或更多)的“参考”和/或“亲本”抗体的功能性特征，包括对CD20和/或CD3的特定表位的亲和力和/或特异性/选择性、Fc惰性和PK参数，诸如半衰期、Tmax、Cmax。此类功能变体通常保留与亲本抗体的显著序列同一性和/或具有基本上相似长度的重链和轻链。两个序列之间的同一性百分比是考虑到为实现两个序列的最佳比对而需要引入的空位的数量和每个空位的长度，序列共享的相同位置数量的函数(即，同源性百分比＝相同位置的#/位置的总#x 100)。两个核苷酸或氨基酸序列之间的同一性百分比可以例如使用已纳入ALIGN程序(2.0版)的E.Meyers和W.Miller,Comput.Appl.Biosci 4,11-17(1988)的算法确定，使用PAM120重量残差表，空位长度罚分12和空位罚分4。此外，可以使用Needleman和Wunsch,J.Mol.Biol.48,444-453(1970)算法确定两个氨基酸序列之间的同一性百分比。示例性变体包括与亲本抗体序列的重链和/或轻链、VH和/或VL和/或CDR区主要相差保守取代的变体；例如，变体中的10个，例如9、8、7、6、5、4、3、2或1个取代可以是保守氨基酸残基取代。
保守取代可以通过下表中反映的氨基酸类别内的取代来定义：
表1：用于保守取代的氨基酸残基类别
Figure BDA0004174131210000111
除非另有说明，否则使用以下命名法描述突变：i)给定位置的氨基酸取代被写为例如K409R，其意指用精氨酸取代位置409的赖氨酸；ii)对于特定变体，使用特定的三字母或一字母代码，包括代码Xaa和X以指示任何氨基酸残基。因此，在位置409用精氨酸取代赖氨酸称为：K409R，并且在位置409用任何氨基酸残基取代赖氨酸称为K409X。如果位置409的赖氨酸缺失，则其用K409*表示。
如本文所用，术语“人源化抗体”是指遗传工程化改造的非人抗体，其含有人抗体恒定域和经修饰以含有与人可变域的高度序列同源性的非人可变域。这可以通过将一起形成抗原结合位点的六个非人抗体CDR移植到同源人接受体框架区(FR)上来实现(参见WO92/22653和EP0629240)。为了完全重建亲本抗体的结合亲和力和特异性，可能需要将亲本抗体(即非人抗体)的框架残基替换为人框架区(回复突变)。结构同源性建模可能有助于鉴定框架区中对抗体结合特性很重要的氨基酸残基。因此，人源化抗体可以包含非人CDR序列，主要是任选地包含相对于非人氨基酸序列的一个或多个氨基酸回复突变的人框架区，以及完全人恒定区。本文在DuoBody-CD3xCD20中使用的CD3臂的VH和VL代表人源化抗原结合区。任选地，可以应用不一定是回复突变的额外的氨基酸修饰，以获得具有优选特征诸如亲和力和生化特性的人源化抗体。
如本文所用，术语“人抗体”是指具有衍生自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。人抗体可以包括不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)。然而，如本文所用，术语“人抗体”不旨在包括其中衍生自另一哺乳动物物种(诸如小鼠)的种系的CDR序列已移植到人框架序列上的抗体。DuoBody-CD3xCD20中使用的CD20臂的VH和VL代表人抗原结合区。本发明的人单克隆抗体可以通过多种技术产生，包括常规的单克隆抗体方法，例如Kohler和Milstein,Nature 256:495(1975)的标准体细胞杂交技术。虽然体细胞杂交规程是优选的，但原则上，可以采用其他用于产生单克隆抗体的技术，例如B淋巴细胞的病毒或致癌转化或使用人抗体基因文库的噬菌体展示技术。用于制备分泌人单克隆抗体的杂交瘤的合适动物系统是鼠系统。在小鼠中产生杂交瘤是非常完善的规程。用于分离免疫化脾细胞进行融合的免疫方案和技术是本领域已知的。融合配偶体(例如，鼠骨髓瘤细胞)和融合规程也是已知的。因此，可以使用例如携带部分人免疫系统而不是小鼠或大鼠系统的转基因或转染色体小鼠或大鼠来生成人单克隆抗体。因此，在一个实施方案中，人抗体获得自转基因动物，诸如小鼠或大鼠，其携带人种系免疫球蛋白序列而不是动物免疫球蛋白序列。在此类实施方案中，抗体源自引入动物的人种系免疫球蛋白序列，但最终抗体序列是所述人种系免疫球蛋白序列通过内源性动物抗体机制的体细胞超突变和亲和力成熟进一步修饰的结果(参见例如，Mendez等人Nat Genet 1997；15:146-56)。DuoBody-CD3xCD20中使用的CD20臂的VH区和VL区代表人抗原结合区。
如本文所用，术语(例如，批准的参考产品/生物药物的)“生物类似物”是指基于来自以下的数据与参考产品类似的生物产品：(a)分析研究，其表明生物产品与参考产品高度类似，尽管临床非活性组分存在细微差异；(b)动物研究(包括毒性评估)；和/或(c)一项或多项临床研究(包括免疫原性和药代动力学或药效学的评估)，其足以证明在参考产品批准使用和将要使用以及寻求批准的一种或多种适当条件下的安全性、纯度和效力(例如，生物制品和参考产品在产品的安全性、纯度和效力方面没有临床上有意义的差异)。在一些实施方案中，生物类似物生物制品和参考产品针对建议标签中规定、推荐或建议的一个或多个使用条件使用相同的一个或多个作用机制，但仅限于参考产品已知的一个或多个作用机制的范围。在一些实施方案中，提议用于生物产品的标签中规定、推荐或建议的一个或多个使用条件先前已被批准用于参考产品。在一些实施方案中，生物产品的施用途径、剂型和/或规格(strength)与参考产品相同。生物类似物可以是，例如，与上市抗体具有相同一级氨基酸序列的目前已知的抗体，但可以在不同的细胞类型中或通过不同的生产、纯化或配制方法制备。
如本文所用，术语“还原条件”或“还原环境”是指其中底物(此处为抗体铰链区中的半胱氨酸残基)更可能被还原而不是被氧化的条件或环境。
如本文所用，术语“重组宿主细胞”(或简称为“宿主细胞”)旨在指已引入表达载体，例如编码本文所述抗体的表达载体的细胞。重组宿主细胞包括，例如转染瘤，诸如CHO、CHO-S、HEK、HEK293、HEK-293F、Expi293F、PER.C6或NSO细胞，以及淋巴细胞。
如本文所用，“慢性淋巴细胞白血病”或“CLL”是指形态学上成熟但免疫学上较不成熟的淋巴细胞的病症并且表现为这些细胞在血液、骨髓和淋巴组织中的进行性积累。CLL可以根据WHO分类法进行诊断和分类，其通过引用包含在本文中(Swerdlow SH,Campo E,Harris NL等人WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and LymphoidTissues(修订版，第4版).Lyon,France:IARC Press(2017)；Swerdlow SH,Campo E,HarrisNL,等人WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues(第4版).Lyon,France:IARC Press(2008))。CLL从骨髓中的淋巴细胞开始，并且最常发生在年龄大于50岁的那些中。其特征在于成熟B淋巴细胞的克隆性增殖和积累，这最终导致单克隆B细胞淋巴细胞增多症(reviewed in Uhm,Blood Res 2020；55:S72-82)。CLL中的单克隆B细胞表达若干成熟活化B淋巴细胞所特有的标志物，包含CD5、CD19、CD20和CD23，以及减少表达IgGM、IgGD和CD79b(Chiorazzi等人,N Engl J Med 2005；352-804-15)。已经报道了该疾病的若干预后标志物，包含IGHV基因中的突变、TP53中的突变、del(17p)和del(11q)(Wierda等人,J Clin Oncol 2011；29:4088-95；Rossi等人,Blood 2013-121:1403-12；CLL-IPI,Lancet Oncol 2016；17:779-90)。针对CLL的治疗包括诸如化疗、BCL2抑制剂、BTK抑制剂、PI3Kδ抑制剂，单独或联合抗CD20抗体(Uhm,2020，同上)。
术语“治疗”是指为了缓解、改善、阻止或根除(治愈)症状或疾病状态诸如CLL的目的而施用有效量的本文所述的治疗活性抗体。治疗可以导致完全响应(CR)、部分响应(PR)或疾病稳定(SD)，例如，按照iwCLL响应标准的定义，如表2所示。可以继续治疗，例如直至疾病进展(PD)或不可接受的毒性。
如本文所用，术语“施用”是指使用本领域技术人员已知的各种方法和递送系统中的任一种将包含治疗剂的组合物(或配制剂)物理引入受试者。本文所述的抗体的优选施用途径包括静脉内、腹膜内、肌肉内、皮下、脊柱或其他胃肠外施用途径，例如通过注射或输注。如本文所用，短语“胃肠外施用”是指除肠内和表面施用以外的施用方式，通常通过注射，并且包括但不限于静脉内、腹膜内、肌肉内、动脉内、鞘内、淋巴管内、病变内(intralesional)、囊内、眼眶内、心内、皮内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内注射和输注，以及体内电穿孔。替代性地，本文所述的治疗剂可以经由非胃肠外途径，诸如表面、表皮或粘膜施用途径施用，例如鼻内、经口、阴道、直肠、舌下或表面施用。也可以例如一次、多次和/或在一个或多个延长的时期内进行施用。在本文所述的方法中，皮下施用双特异性抗体(例如，艾可瑞妥单抗)。与双特异性抗体联合使用的其他药剂(诸如用于细胞因子释放综合征防治或肿瘤溶解综合征(TLS)防治)可以通过其他途径，诸如静脉内或口服施用。
术语“有效量”或“治疗有效量”是指在必要的剂量和时间段内有效实现期望治疗结果的量。例如，如本文所定义的用于以12-60mg范围皮下施用的双特异性抗体(例如艾可瑞妥单抗)的剂量可以被定义为此类“有效量”或“治疗有效量”。抗体的治疗有效量可根据诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重以及抗体在个体中引出期望响应的能力等因素而变化。治疗有效量也是其中抗体或抗体部分的任何毒性或有害作用被治疗有益作用抵消的量。在一些实施方案中，用本文所述方法治疗的患者将表现出ECOG表现状态的改善。药物的治疗有效量或剂量包括“防治有效量”或“防治有效剂量”，其是当药物单独或联合另一种治疗剂施用于处于发展疾病或病症(例如，细胞因子释放综合征)的风险或处于患有疾病复发的风险的受试者时，抑制疾病的发展或复发的该药物的任何量。
如本文所用，术语“抑制肿瘤生长”包括肿瘤生长的任何可测量的减少，例如将肿瘤生长抑制了至少约10％，例如至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约99％或100％。
如本文所用，术语“受试者”是指人患者，例如，患有CLL的人患者。术语“受试者”和“患者”本文中可互换使用。
如本文所用，术语“缓冲液”表示药学上可接受的缓冲液。术语“缓冲液”涵盖将溶液的pH值保持在例如可接受范围内的那些试剂，并且包括但不限于乙酸盐、组氨酸、
Figure BDA0004174131210000151
(三(羟甲基)氨基甲烷)、柠檬酸盐、琥珀酸盐、乙醇酸盐等。通常，如本文所用，“缓冲液”具有适合于约5至约6、优选约5.5的pH范围的pKa和缓冲能力。
如本文所用的“疾病进展”或“PD”是指CLL的一个或多个指数显示尽管进行治疗但疾病仍在进展的情况。在一些实施方案中，疾病进展是根据iwCLL响应标准定义的，如表2所示。
如本文所用，“表面活性剂”是通常用于药物配制剂中以防止药物吸附到表面和/或聚集的化合物。此外，表面活性剂降低两种液体之间或液体与固体之间的表面张力(或界面张力)。例如，当以非常低的浓度(例如，5％w/v或更小，诸如3％w/v或更小，诸如1％w/v或更小，诸如0.4％w/v或更小，诸如低于0.1％w/v或更小，诸如0.04％w/v)存在时，示例性表面活性剂可以显著降低表面张力。表面活性剂是两亲性的，这意味着它们通常由亲水和疏水或亲油基团构成，因此能够在水溶液中形成胶束或类似的自组装结构。已知的药用表面活性剂包括单油酸甘油酯、苄索氯铵、多库酯钠、磷脂、聚乙烯烷基醚(polyethylene alkylethers)、月桂基硫酸钠和三辛精(阴离子表面活性剂)；苯扎氯铵、柠檬酰亚胺、氯化十六烷基吡啶(cetylpyridinium chloride)和磷脂(阳离子表面活性剂)；和α-生育酚、单油酸甘油酯、肉豆蔻醇、磷脂、泊洛沙姆、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯硬脂酸酯、聚乙二醇羟基硬脂酸酯(polyoxylhydroxystearate)、聚乙二醇甘油酯(polyoxylglyceride)、聚山梨醇酯诸如聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80、丙二醇二月桂酸酯、丙二醇单月桂酸酯、失水山梨糖醇酯蔗糖棕榈酸酯、蔗糖硬脂酸酯、三辛精和TPGS(非离子和两性离子表面活性剂)。
如本文所用，“稀释剂”是药学上可接受的(对人施用安全且无毒)并且可用于制备药物组合物或药物配制剂的稀释物(术语“组合物”和“配制剂”在本文中可互换使用)。优选地，组合物的此类稀释物仅稀释抗体浓度而不稀释缓冲液和稳定剂。因此，在一个实施方案中，稀释剂含有与存在于本发明药物组合物中的浓度相同的缓冲液和稳定剂。进一步的示例性稀释剂包括无菌水、注射用抑菌水(BWFI)、pH缓冲溶液(优选为乙酸盐缓冲液)、无菌盐水溶液、林格氏溶液或右旋糖溶液。在一个实施方案中，稀释剂包含乙酸盐缓冲液和山梨糖醇或基本上由乙酸盐缓冲液和山梨糖醇组成。
如本文所用，术语“约”是指规定值的±10％。
CLL治疗方案
本文提供了在人受试者中使用与CD3和CD20结合的双特异性抗体(“抗CD3xCD20抗体”)，例如与人CD3和人CD20结合的分离的抗CD3xCD20抗体来治疗CLL的方法。该方法也可用于治疗复发性或难治性CLL(R/R CLL)。可以理解的是，本文描述的用与CD3和CD20两者结合的双特异性抗体治疗CLL的方法也涵盖双特异性抗体用于在人受试者中治疗CLL的相应用途。
因此，在一个方面，本文提供了在人受试者中治疗CLL的方法，该方法包括向受试者施用(例如，皮下地)有效量的双特异性抗体，该双特异性抗体包含：
(i)包含第一抗原结合区的第一结合臂，该第一抗原结合区结合人CD3ε(epsilon)并包含可变重链(VH)区和可变轻链(VL)区，其中VH区包含SEQ ID NO:6的VH区序列中的CDR1、CDR2和CDR3序列，并且VL区包含SEQ ID NO:7的VL区序列中的CDR1、CDR2和CDR3序列；和
(ii)包含第二抗原结合区的第二结合臂，该第二抗原结合区结合人CD20并包含VH区和VL区，其中VH区包含SEQ ID NO:13的VH区序列中的CDR1、CDR2和CDR3序列，并且VL区包含SEQ ID NO:14的VL区序列中的CDR1、CDR2和CDR3序列；
其中在28天周期中以12-60mg范围的剂量施用双特异性抗体。
在一些实施方案中，双特异性抗体是全长抗体。在一些实施方案中，双特异性抗体是具有惰性Fc区的抗体。在一些实施方案中，双特异性抗体是具有惰性Fc区的全长抗体。
在一些实施方案中，双特异性抗体以12mg的剂量(或约12mg的剂量)施用。在一些实施方案中，双特异性抗体以24mg的剂量(或约24mg的剂量)施用。在一些实施方案中，双特异性抗体以48mg的剂量(或约48mg的剂量)施用。在一些实施方案中，双特异性抗体以60mg的剂量(或约60mg的剂量)施用。
关于待施用的双特异性抗体的12-60mg的剂量，或任何其他指定剂量，应理解该量是指代表全长抗体的双特异性抗体的量，诸如实施例部分中定义的艾可瑞妥单抗。因此，可以将施用24mg的双特异性抗体的剂量称为施用本文所述的双特异性抗体的剂量，其中该剂量对应于艾可瑞妥单抗的24mg的剂量。当例如使用的抗体的分子量与全长抗体诸如艾可瑞妥单抗的分子量显著不同时，本领域的普通技术人员可以容易地确定待施用的抗体的量。例如，抗体的量可以通过将抗体的分子量除以全长抗体诸如艾可瑞妥单抗的重量并将其结果乘以特定剂量来计算，如本文所述的。只要双特异性抗体(例如，DuoBody-CD3xCD20的功能变体)与DuoBody-CD3xCD20在血浆半衰期、Fc惰性和/或对CD3和CD20的结合特征方面(即，在CDR和表位结合特征方面)具有高度相似的特征，此类抗体就适合于以对于全长抗体诸如艾可瑞妥单抗描述的剂量用于本文提供的方法。
在一个实施方案中，双特异性抗CD3xCD20抗体以12mg和60mg之间范围的剂量施用。在一些实施方案中，双特异性抗体以12mg或约12mg的剂量施用。在一些实施方案中，双特异性抗体以24mg或约24mg的剂量施用。在一些实施方案中，双特异性抗体以48mg或约48mg的剂量施用。在一些实施方案中，双特异性抗体以60mg或约60mg的剂量施用。
在一些实施方案中，双特异性抗体的剂量以28天周期每周施用一次(每周施用)。在一些实施方案中，每周施用进行2.5个28天周期(即10次)。在一个实施方案中，剂量施用2.5个28天周期(即10次；在周期1的第15和22天，和周期2和3的第1、8、15和22天)。在一些实施方案中，在所述每周施用之后，可以将施用双特异性抗体的间隔降低到每两周施用一次(每两周施用)。在一些实施方案中，此类每两周施用可以进行6个28天周期(即12次)。在一些实施方案中，在所述每两周施用后，施用双特异性抗体的间隔可以进一步降低到每四周一次。在一个实施方案中，每四周一次的施用可以进行较长时间，例如，持续28天周期的至少1个周期、至少2个周期、至少3个周期、至少4个周期、至少5个周期、至少6个周期、至少7个周期、至少8个周期、至少9个周期、至少10个周期、至少11个周期、至少12个周期、至少13个周期、至少14个周期、至少15个周期、至少16个周期、至少17个周期，或1-20个周期之间、1-19个周期之间、1-18个周期之间、1-17个周期之间、1-16个周期之间、1-15个周期之间、1-14个周期之间、1-13个周期之间、1-12个周期之间、1-10个周期之间、1-5个周期之间、5-20个周期之间、5-15个周期之间，或5-10个周期。在一些实施方案中，每四周施用一次艾可瑞妥单抗，直到疾病进展(例如，由iwCLL响应标准所定义，如表2所示)或不可接受的毒性。在一个实施方案中，每周剂量在周期1-3施用(并且可以包含引发和中间剂量，如下所述)，两周剂量在周期4-9施用，并且每四周一次的剂量从周期10以后施用。
应当理解，本文所指的剂量在上述情况下也可称为全剂量或固定剂量(flatdose)，其中例如，每周剂量、双周剂量和/或每四周剂量以相同的水平施用。因此，当优选地在每个每周施用，在每个双周施用，和每个每四周施用选择48mg的剂量时，应施用48mg的相同剂量。在施用该剂量之前，可以施用引发或引发和随后的中间(二次引发)剂量。这可能是有利的，因为其可能有助于减轻细胞因子释放综合征(CRS)的风险和严重性，这是可在用本文所述的双特异性抗CD3xCD20抗体治疗期间发生的副作用。与固定剂量或全剂量相比，此类引发或引发和中间剂量处于较低剂量。
因此，在一些实施方案中，在施用12-60mg的每周剂量之前，可以施用双特异性抗体的引发剂量。在一个实施方案中，在周期1中施用12-60mg的首次每周剂量之前两周施用引发剂量。引发剂量可以在20-2000μg(0.02mg-2mg)的范围内，例如在50-1000μg(0.05mg至1mg)的范围内或70-350μg(0.07mg至0.35mg)的范围内。引发剂量可以是例如80、100、120、140、160、180、200、220、240、260、280、300、320、350、400、450、500、600、700、800、900或1000μg，或约80、约100、约120、约140、约160、约180、约200、约220、约240、约260、约280、约300、约320、约350、约400、约450、约500、约600、约700、约800、约900或约1000μg。在优选的实施方案中，引发剂量在50和350μg(分别为0.05和0.35mg)之间。在更优选的实施方案中，引发剂量为160μg(0.16mg)或约160μg(约0.16mg)。在最优选的实施方案中，引发剂量是160μg(0.16mg)或约160μg(约0.16mg)的全长双特异性抗体。
在一些实施方案中，在施用引发剂量之后且施用12-60mg的首次每周剂量之前，施用所述双特异性抗体的中间剂量。在一个实施方案中，在周期1的第1天施用引发剂量并且在第8天施用中间剂量，之后是在第15和22天12-60mg的首次每周剂量，即引发剂量在中间剂量之前一周(即周期1的第1天)施用，并且中间剂量在12-60mg的首次每周剂量之前一周(周期1的第8天)施用。中间剂量选自引发剂量与固定(flat)或全剂量之间的范围。例如，中间剂量可以在200-8000μg(0.2-8mg)的范围，例如，在400-4000μg(0.4-4mg)或600-2000μg(0.6-2mg)的范围。中间剂量可以是例如200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500或1600μg，或约200、约300、约400、约500、约600、约700、约800、约900、约1000、约1100、约1200、约1300、约1400、约1500或约1600μg。在优选的实施方案中，中间剂量在600和1200μg(分别是0.6和1.2mg)的范围内。在更优选的实施方案中，中间剂量是800μg(0.8mg)或约800μg(0.8mg)。在最优选的实施方案中，中间剂量是800μg或约800μg(0.8mg)的全长双特异性抗体。
在一些实施方案中，双特异性抗体以28天周期施用(例如，皮下)，其中
a)在周期1中，在第1天施用引发剂量，在第8天施用中间剂量，并且在第15和22天施用12-60mg的全剂量；
b)在周期2-3中，在第1、8、15和22天施用12-60mg的全剂量；
c)在周期4-9中，在第1和15天施用12-60mg的全剂量；以及
d)在周期10及随后的周期中，在第1天施用12-60mg的全剂量。
在一些实施方案中，双特异性抗体以28天周期施用(例如，皮下)，其中
a)在周期1中，在第1天施用0.05-0.35范围内的引发剂量，在第8天施用0.6-1.2mg范围内的中间剂量，并且在第15和22天施用12-60mg的全剂量；
b)在周期2-3中，在第1、8、15和22天施用12-60mg的全剂量；
c)在周期4-9中，在第1和15天施用12-60mg的全剂量；以及
d)在周期10及随后的周期中，在第1天施用12-60mg的全剂量。
在一些实施方案中，双特异性抗体以28天周期施用(例如，皮下)，其中
a)在周期1中，在第1天施用160μg的引发剂量，在第8天施用800μg的中间剂量，并且在第15和22天施用12-60mg的全剂量；
b)在周期2-3中，在第1、8、15和22天施用12-60mg的全剂量；
c)在周期4-9中，在第1和15天施用12-60mg的全剂量；以及
d)在周期10及随后的周期中，在第1天施用12-60mg的全剂量。
在一些实施方案中，双特异性抗体以28天周期施用(例如，皮下)，其中
a)在周期1中，在第1天施用引发剂量，在第8天施用中间剂量，并且在第15和22天施用12mg或约12mg的全剂量；
b)在周期2-3中，在第1、8、15和22天施用12mg或约12mg的全剂量；
c)在周期4-9中，在第1和15天施用12mg或约12mg的全剂量；以及
d)在周期10及随后的周期中，在第1天施用12mg或约12mg的全剂量。在一些实施方案中，双特异性抗体以28天周期施用(例如，皮下)，其中
a)在周期1中，在第1天施用0.05-0.35范围内的引发剂量，在第8天施用0.6-1.2mg范围内的中间剂量，并且在第15和22天施用12mg的全剂量；
b)在周期2-3中，在第1、8、15和22天施用12mg的全剂量；
c)在周期4-9中，在第1和15天施用12mg的全剂量；以及
d)在周期10及随后的周期中，在第1天施用12mg的全剂量。
在一些实施方案中，双特异性抗体以28天周期施用(例如，皮下)，其中
a)在周期1中，在第1天施用160μg的引发剂量，在第8天施用800μg的中间剂量，并且在第15和22天施用12mg或约12mg的全剂量；
b)在周期2-3中，在第1、8、15和22天施用12mg或约12mg的全剂量；
c)在周期4-9中，在第1和15天施用12mg或约12mg的全剂量；以及
d)在周期10及随后的周期中，在第1天施用12mg或约12mg的全剂量。在一些实施方案中，双特异性抗体以28天周期施用(例如，皮下)，其中
a)在周期1中，在第1天施用引发剂量，在第8天施用中间剂量，并且在第15和22天施用24mg或约24mg的全剂量；
b)在周期2-3中，在第1、8、15和22天施用24mg或约24mg的全剂量；
c)在周期4-9中，在第1和15天施用24mg或约24mg的全剂量；以及
d)在周期10及随后的周期中，在第1天施用24mg或约24mg的全剂量。在一些实施方案中，双特异性抗体以28天周期施用(例如，皮下)，其中
a)在周期1中，在第1天施用0.05和0.35范围内的引发剂量，在第8天施用0.6和1.2mg范围内的中间剂量，并且在第15和22天施用24mg的全剂量；
b)在周期2-3中，在第1、8、15和22天施用24mg的全剂量；
c)在周期4-9中，在第1和15天施用24mg的全剂量；以及
d)在周期10及随后的周期中，在第1天施用24mg的全剂量。
在一些实施方案中，双特异性抗体以28天周期施用(例如，皮下)，其中
a)在周期1中，在第1天施用160μg的引发剂量，在第8天施用800μg的中间剂量，并且在第15和22天施用24mg或约24mg的全剂量；
b)在周期2-3中，在第1、8、15和22天施用24mg或约24mg的全剂量；
c)在周期4-9中，在第1和15天施用24mg或约24mg的全剂量；以及
d)在周期10及随后的周期中，在第1天施用24mg或约24mg的全剂量。在一些实施方案中，双特异性抗体以28天周期施用(例如，皮下)，其中
a)在周期1中，在第1天施用引发剂量，在第8天施用中间剂量，并且在第15和22天施用48mg或约48mg的全剂量；
b)在周期2-3中，在第1、8、15和22天施用48mg或约48mg的全剂量；
c)在周期4-9中，在第1和15天施用48mg或约48mg的全剂量；以及
d)在周期10及随后的周期中，在第1天施用48mg或约48mg的全剂量。在一些实施方案中，双特异性抗体以28天周期施用(例如，皮下)，其中
a)在周期1中，在第1天施用0.05-0.35范围内的引发剂量，在第8天施用0.6-1.2mg范围内的中间剂量，并且在第15和22天施用48mg的全剂量；
b)在周期2-3中，在第1、8、15和22天施用48mg的全剂量；
c)在周期4-9中，在第1和15天施用48mg的全剂量；以及
d)在周期10及随后的周期中，在第1天施用48mg的全剂量。
在一些实施方案中，双特异性抗体以28天周期施用(例如，皮下)，其中
a)在周期1中，在第1天施用160μg的引发剂量，在第8天施用800μg的中间剂量，并且在第15和22天施用48mg或约48mg的全剂量；
b)在周期2-3中，在第1、8、15和22天施用48mg或约48mg的全剂量；
c)在周期4-9中，在第1和15天施用48mg或约48mg的全剂量；以及
d)在周期10及随后的周期中，在第1天施用48mg或约48mg的全剂量。在一些实施方案中，双特异性抗体以28天周期施用(例如，皮下)，其中
a)在周期1中，在第1天施用引发剂量，在第8天施用中间剂量，并且在第15和22天施用60mg或约60mg的全剂量；
b)在周期2-3中，在第1、8、15和22天施用60mg或约60mg的全剂量；
c)在周期4-9中，在第1和15天施用60mg或约60mg的全剂量；以及
d)在周期10及随后的周期中，在第1天施用60mg或约60mg的全剂量。在一些实施方案中，双特异性抗体以28天周期施用(例如，皮下)，其中
a)在周期1中，在第1天施用0.05-0.35范围内的引发剂量，在第8天施用0.6-1.2mg范围内的中间剂量，并且在第15和22天施用60mg的全剂量；
b)在周期2-3中，在第1、8、15和22天施用60mg的全剂量；
c)在周期4-9中，在第1和15天施用60mg的全剂量；以及
d)在周期10及随后的周期中，在第1天施用60mg的全剂量。
在一些实施方案中，双特异性抗体以28天周期施用(例如，皮下)，其中
a)在周期1中，在第1天施用160μg的引发剂量，在第8天施用800μg的中间剂量，并且在第15和22天施用60mg或约60mg的全剂量；
b)在周期2-3中，在第1、8、15和22天施用60mg或约60mg的全剂量；
c)在周期4-9中，在第1和15天施用60mg或约60mg的全剂量；以及
d)在周期10及随后的周期中，在第1天施用60mg或约60mg的全剂量。在一些实施方案中，双特异性抗体是艾可瑞妥单抗，其以28天周期皮下施用，其中
a)在周期1中，在第1天施用引发剂量，在第8天施用中间剂量，并且在第15和22天施用12-60mg的全剂量；
b)在周期2-3中，在第1、8、15和22天施用12-60mg的全剂量；
c)在周期4-9中，在第1和15天施用12-60mg的全剂量；以及
d)在周期10及随后的周期中，在第1天施用12-60mg的全剂量。
在一些实施方案中，双特异性抗体是艾可瑞妥单抗，其以28天周期施用(例如，皮下)，其中
a)在周期1中，在第1天施用0.05-0.35范围内的引发剂量，在第8天施用0.6-1.2mg范围内的中间剂量，并且在第15和22天施用12-60mg的全剂量；
b)在周期2-3中，在第1、8、15和22天施用12-60mg的全剂量；
c)在周期4-9中，在第1和15天施用12-60mg的全剂量；以及
d)在周期10及随后的周期中，在第1天施用12-60mg的全剂量。
在一些实施方案中，双特异性抗体是艾可瑞妥单抗，其以28天周期皮下施用，其中
a)在周期1中，在第1天施用160μg的引发剂量，在第8天施用800μg的中间剂量，并且在第15和22天施用12-60mg的全剂量；
b)在周期2-3中，在第1、8、15和22天施用12-60mg的全剂量；
c)在周期4-9中，在第1和15天施用12-60mg的全剂量；以及
d)在周期10及随后的周期中，在第1天施用12-60mg的全剂量。
在一些实施方案中，双特异性抗体是艾可瑞妥单抗，其以28天周期皮下施用，其中
a)在周期1中，在第1天施用引发剂量，在第8天施用中间剂量，并且在第15和22天施用12mg或约12mg的全剂量；
b)在周期2-3中，在第1、8、15和22天施用12mg或约12mg的全剂量；
c)在周期4-9中，在第1和15天施用12mg或约12mg的全剂量；以及
d)在周期10及随后的周期中，在第1天施用12mg或约12mg的全剂量。
在一些实施方案中，双特异性抗体是艾可瑞妥单抗，其以28天周期施用(例如，皮下)，其中
a)在周期1中，在第1天施用0.05-0.35范围内的引发剂量，在第8天施用0.6-1.2mg范围内的中间剂量，并且在第15和22天施用12mg的全剂量；
b)在周期2-3中，在第1、8、15和22天施用12mg的全剂量；
c)在周期4-9中，在第1和15天施用12mg的全剂量；以及
d)在周期10及随后的周期中，在第1天施用12mg的全剂量。
在一些实施方案中，双特异性抗体是艾可瑞妥单抗，其以28天周期皮下施用，其中
a)在周期1中，在第1天施用160μg的引发剂量，在第8天施用800μg的中间剂量，并且在第15和22天施用12mg或约12mg的全剂量；
b)在周期2-3中，在第1、8、15和22天施用12mg或约12mg的全剂量；
c)在周期4-9中，在第1和15天施用12mg或约12mg的全剂量；以及
d)在周期10及随后的周期中，在第1天施用12mg或约12mg的全剂量。
在一些实施方案中，双特异性抗体是艾可瑞妥单抗，其以28天周期皮下施用，其中
a)在周期1中，在第1天施用引发剂量，在第8天施用中间剂量，并且在第15和22天施用24mg或约24mg的全剂量；
b)在周期2-3中，在第1、8、15和22天施用24mg或约24mg的全剂量；
c)在周期4-9中，在第1和15天施用24mg或约24mg的全剂量；以及
d)在周期10及随后的周期中，在第1天施用24mg或约24mg的全剂量。
在一些实施方案中，双特异性抗体是艾可瑞妥单抗，其以28天周期施用(例如，皮下)，其中
a)在周期1中，在第1天施用0.05-0.35范围内的引发剂量，在第8天施用0.6-1.2mg范围内的中间剂量，并且在第15和22天施用24mg的全剂量；
b)在周期2-3中，在第1、8、15和22天施用24mg的全剂量；
c)在周期4-9中，在第1和15天施用24mg的全剂量；以及
d)在周期10及随后的周期中，在第1天施用24mg的全剂量。
在一些实施方案中，双特异性抗体是艾可瑞妥单抗，其以28天周期皮下施用，其中
a)在周期1中，在第1天施用160μg的引发剂量，在第8天施用800μg的中间剂量，并且在第15和22天施用24mg或约24mg的全剂量；
b)在周期2-3中，在第1、8、15和22天施用24mg或约24mg的全剂量；
c)在周期4-9中，在第1和15天施用24mg或约24mg的全剂量；以及
d)在周期10及随后的周期中，在第1天施用24mg或约24mg的全剂量。
在一些实施方案中，双特异性抗体是艾可瑞妥单抗，其以28天周期皮下施用，其中
a)在周期1中，在第1天施用引发剂量，在第8天施用中间剂量，并且在第15和22天施用48mg或约48mg的全剂量；
b)在周期2-3中，在第1、8、15和22天施用48mg或约48mg的全剂量；
c)在周期4-9中，在第1和15天施用48mg或约48mg的全剂量；以及
d)在周期10及随后的周期中，在第1天施用48mg或约48mg的全剂量。
在一些实施方案中，双特异性抗体是艾可瑞妥单抗，其以28天周期施用(例如，皮下)，其中
a)在周期1中，在第1天施用0.05-0.35范围内的引发剂量，在第8天施用0.6-1.2mg范围内的中间剂量，并且在第15和22天施用48mg的全剂量；
b)在周期2-3中，在第1、8、15和22天施用48mg的全剂量；
c)在周期4-9中，在第1和15天施用48mg的全剂量；以及
d)在周期10及随后的周期中，在第1天施用48mg的全剂量。
在一些实施方案中，双特异性抗体是艾可瑞妥单抗，其以28天周期皮下施用，其中
a)在周期1中，在第1天施用160μg的引发剂量，在第8天施用800μg的中间剂量，并且在第15和22天施用48mg或约48mg的全剂量；
b)在周期2-3中，在第1、8、15和22天施用48mg或约48mg的全剂量；
c)在周期4-9中，在第1和15天施用48mg或约48mg的全剂量；以及
d)在周期10及随后的周期中，在第1天施用48mg或约48mg的全剂量。
在一些实施方案中，双特异性抗体是艾可瑞妥单抗，其以28天周期皮下施用，其中
a)在周期1中，在第1天施用引发剂量，在第8天施用中间剂量，并且在第15和22天施用60mg或约60mg的全剂量；
b)在周期2-3中，在第1、8、15和22天施用60mg或约60mg的全剂量；
c)在周期4-9中，在第1和15天施用60mg或约60mg的全剂量；以及
d)在周期10及随后的周期中，在第1天施用60mg或约60mg的全剂量。
在一些实施方案中，双特异性抗体是艾可瑞妥单抗，其以28天周期施用(例如，皮下)，其中
a)在周期1中，在第1天施用0.05-0.35范围内的引发剂量，在第8天施用0.6-1.2mg范围内的中间剂量，并且在第15和22天施用60mg的全剂量；
b)在周期2-3中，在第1、8、15和22天施用60mg的全剂量；
c)在周期4-9中，在第1和15天施用60mg的全剂量；以及
d)在周期10及随后的周期中，在第1天施用60mg的全剂量。
在一些实施方案中，双特异性抗体是艾可瑞妥单抗，其以28天周期皮下施用，其中
a)在周期1中，在第1天施用160μg的引发剂量，在第8天施用800μg的中间剂量，并且在第15和22天施用60mg或约60mg的全剂量；
b)在周期2-3中，在第1、8、15和22天施用60mg或约60mg的全剂量；
c)在周期4-9中，在第1和15天施用60mg或约60mg的全剂量；以及
d)在周期10及随后的周期中，在第1天施用60mg或约60mg的全剂量。
在一个实施方案中，在第一周期的第1天和第8天，分别选择80μg的引发剂量和800μg的中间剂量。在一些实施方案中，在第一周期的第1天和第8天，分别选择80μg的引发剂量和1200μg的中间剂量。在一些实施方案中，在第一周期的第1天和第8天，分别选择80μg的引发剂量和1600μg的中间剂量。在一些实施方案中，在第一周期的第1天和第8天，分别选择160μg的引发剂量和1200μg的中间剂量。在一些实施方案中，在第一周期的第1天和第8天，分别选择160μg的引发剂量和1600μg的中间剂量。
在一个实施方案中，患有需要治疗的活动性CLL的人受试者，满足以下标准中的至少一项：(1)表现为贫血和/或血小板减少的发展或恶化的进行性骨髓衰竭的证据；(2)巨大的(即在左肋缘下≥6cm)或进行性或有症状的脾肿大；(3)巨大的结节(即最长直径≥10cm)或进行性或有症状的淋巴结病；(4)进行性淋巴细胞增多，在2个月期间增加≥50％，或淋巴细胞倍增时间(LDT)<6个月；(5)自身免疫性并发症，包括对皮质类固醇响应性差的贫血或血小板减少；(6)有症状或功能性结节外受累(例如皮肤、肾脏、肺、脊柱)；和/或(7)与疾病相关的症状，其由以下中的任一项所定义：过去6个月内非故意的体重下降≥10％、明显的疲乏、发热≥38.0℃(100.5°F)持续2周或更长时间而没有感染的证据，以及夜间盗汗持续≥1个月而没有感染的证据。在一些实施方案中，CLL疾病是复发性和/或难治性CLL。在一些实施方案中，CLL对BTK抑制剂是难治性的。在一些实施方案中，CLL在用BTK抑制剂治疗期间复发。
在一些实施方案中，人受试者在用本文所述的方法治疗之前，已经接受至少一种治疗线。例如，在一个实施方案中，受试者已经接受一种既往治疗线。在一些实施方案中，受试者已经接受了两种既往治疗线。在一些实施方案中，受试者已经接受了两种既往系统性抗赘生疗法线。在一些实施方案中，受试者已经接受了两种既往系统性抗赘生疗法线，其中至少两种既往系统性抗赘生疗法线的至少一种包括用BTK抑制剂(例如依鲁替尼)治疗(或对其不耐受)。在一些实施方案中，受试者在接受了两种既往抗赘生疗法后患有难治性和/或复发性CLL。复发可以定义为在先前已实现CR或PR至少6个月的受试者中的疾病进展的证据。难治性疾病可以定义为治疗失败(未达到CR或PR)或在末剂疗法起6个月内的进展。在一些实施方案中，受试者已经接受三种既往治疗线。在一些实施方案中，受试者已经接受超过三种既往治疗线。在一些实施方案中，受试者已经接受一种、两种、三种或更多既往治疗线。在一些实施方案中，受试者已经接受至少两种既往治疗线。在一个实施方案中，既往治疗线包含系统性抗赘生疗法。在一个实施方案中，系统性抗赘生疗法包括用BTK抑制剂例如依鲁替尼进行的治疗。在一些实施方案中，受试者对BTK抑制剂例如依鲁替尼不耐受。在其他实施方案中，既往疗法线包括用BCL2抑制剂例如维奈托克进行的治疗。在另外的实施方案中，既往疗法线包括用BTK抑制剂和BCL2抑制剂(例如依鲁替尼和维奈托克)的组合进行的治疗。
在一些实施方案中，人受试者患有可测量的疾病，其满足以下至少一项：(a)外周血中B淋巴细胞≥5×109/L(5,000/μL)和(b)存在可测量的淋巴结病和/或器官肿大。
在一些实施方案中，人受试者的ECOG表现状态评分为0或1。有关ECOG表现状态评分的信息可以在例如Oken等人,Am J Clin Oncol 1982Dec；5(6):649-55)中找到。
在一些实施方案中，人受试者具有可接受的实验室参数：(1)肌酐清除率或血清肌酐(使用Cockcroft-Gault公式>45mL/min或血清肌酐≤1.5倍正常上限(xULN))，(2)血清丙氨酸转氨酶(≤2.5×ULN)，(3)血清天冬氨酸转氨酶(≤2.5×ULN)，(4)胆红素(≤1.5×ULN，除非是由于吉尔伯特(Gilbert)综合征)，(5)血红蛋白(≥9.0g/dL，除非贫血是由于CLL的骨髓受累)，(6)绝对中性粒细胞计数(≥1.0×109/L(1000/μL)，除非中性粒细胞减少是由于CLL的骨髓受累)、血小板计数(≥30×109/L(30000/μL))和凝血状态(PT/INR/aPTT≤1.5×ULN)。
接受本文所述治疗的人受试者可以是具有实施例2中列出的一项或多项纳入标准的患者，或不具有实施例2中列出的一项或多项排除标准的患者。
患有CLL的人受试者被归类为患有CD20阳性癌症。因此，此类人受试者可以接受的既往癌症治疗包括抗CD20单克隆抗体(例如利妥昔单抗)。在此类治疗或任何其他治疗期间，CLL对所述治疗可能是难治性的或已经复发。因此，在一个实施方案中，受试者在用双特异性抗体治疗之前，已经接受使用抗CD20单克隆抗体诸如利妥昔单抗或奥比妥珠单抗的治疗。在一些实施方案中，在使用抗CD20抗体或抗CD20单克隆抗体与一种治疗剂(例如维奈托克(一种Bcl2抑制剂))的组合的所述既往治疗期间，CLL复发或对治疗是难治性的。
本文所述的方法对治疗CLL诸如难治性或复发性CLL是有利的。使用例如上述的治疗方案持续不断地维持治疗。然而，当发生疾病进展或出现不可接受的毒性时可以终止治疗。
CLL患者对本文所述方法的响应可以根据iwCLL响应标准进行评估，如表2所示(来源：Hallek等人,Lancet 2018；391:1524-1537)。
表2.对慢性淋巴细胞白血病响应标准的国际研讨会
Figure BDA0004174131210000281
Figure BDA0004174131210000291
缩写：CLL＝慢性淋巴细胞白血病；CR＝完全响应；PD＝疾病进展；PR＝部分响应；SD＝疾病稳定。
定义：
·CR，完全缓解(必须符合所有标准)；
·PD，疾病进展(要满足A组或B组的标准中的至少一项)；
·PR，部分缓解(对于PR，如果先前异常，A组的参数中的至少2个和B组的1个参数需要改良，如果在疗法前A组和B组两者中的仅1个参数异常，则仅1个需要改良)；
·SD，疾病稳定(必须满足所有的标准；单独的全身症状不定义PD)。
1.6个或更少的淋巴结的乘积之和(如在临床试验中通过CT扫描和体格检查或在一般实践中通过体格检查所评价)。
2.如果脾脏大小<13cm则认为是正常的。国际上还没有对正常肝脏大小牢固建立共识；因此，肝脏的大小应通过影像学和人工触诊进行评价并记录在eCRF中。
根据本文所述方法治疗的受试者优选经历CLL的至少一个体征的改善。在一个实施方案中，改善是通过循环淋巴细胞的数量的减少来测量的。在一些实施方案中，改善是通过可测量的肿瘤病变的数量和/或大小的减少来测量的。在一些实施方案中，病变可以在CT或MRI片上测量。在一些实施方案中，可以使用细胞学或组织学来评价对疗法的响应性。在一些实施方案中，可以使用骨髓抽吸物和骨髓生检来评价对疗法的响应。
在一个实施方案中，治疗的受试者表现出完全响应(CR)、部分响应(PR)或疾病稳定(SD)，如iwCLL响应标准(参见例如表2)所定义。在一些实施方案中，本文所述的方法产生选自延长生存(诸如无进展生存或总体生存)的至少一种治疗效果，任选地与另一种疗法或安慰剂相比。在一些实施方案中，用本文所述的方法治疗受试者，直到疾病进展(PD)或不可接受的毒性。
当在人受试者中使用方法时，可以发生细胞因子释放综合征(CRS)，所述方法利用基于免疫细胞和双特异性抗体的办法，所述办法通过激活免疫效应细胞，例如通过衔接CD3发挥作用(Lee等人,Biol Blood Marrow Transplant2019；25:625-38，其通过引用并入本文)。因此，在一些实施方案中，CRS缓解与本文所述的方法一起进行。作为CRS缓解的一部分，如本文所述，在施用全剂量(例如，12-60mg)之前进行引发剂量和/或中间剂量的选择。CRS可以按照标准实践(例如，如Lee等人,Biol Blood Marrow Transplant.2019Apr；25(4):625-638中的概述，其通过引用并入本文)分类。CRS可以包括细胞因子，例如促炎细胞因子，例如IL-6、TNF-α或IL-8的过度释放，这可能导致不良反应，如发热、恶心、呕吐和寒战。因此，尽管双特异性抗体诸如艾可瑞妥单抗具有独特的抗肿瘤活性，但它们的免疫学作用方式可能触发不必要的“副作用”，即诱导不需要的炎症反应。因此，患者可以进一步经受用例如止痛药、退热药和/或抗炎药的伴随治疗、防治和/或前驱用药以减轻可能的CRS症状。
因此，在一个实施方案中，本文所述方法中的人受试者用对CRS的防治进行治疗。在优选的实施方案中，该防治包括向受试者施用皮质类固醇。在一个实施方案中，该防治(例如皮质类固醇)与双特异性抗体在同一天施用。该防治(例如皮质类固醇)也可以在随后的一天施用。在一些实施方案中，该防治(例如皮质类固醇)在随后的第2、3和4天进一步施用。应当理解，在涉及进一步用药(诸如防治)时，第2、3和4天是相对于在第1天施用的双特异性抗体的施用而言的。例如，当在周期的第15天施用抗体并且还施用防治时，对应于第2、3和4天的防治是该周期的第16、17和18天。在一些实施方案中，防治在施用双特异性抗体的当天和随后的第2-4天施用。当所述防治与双特异性抗体在同一天施用时，优选在所述双特异性抗体施用之前30-120分钟施用防治。适用于本文所述的方法和用途的示例性皮质类固醇为泼尼松龙。在一些实施方案中，皮质类固醇是泼尼松龙。在一些实施方案中，以100mg的静脉注射剂量或其当量(包含口服剂量)施用泼尼松龙。表6中显示了可以用于CRS防治的泼尼松龙的示例性皮质类固醇当量，以及剂量当量。
此外，在一些实施方案中，在本文所述的方法中的人受试者用前驱用药治疗以减少对注射的反应。在一个实施方案中，前驱用药包括抗组胺药的施用。在一些实施方案中，前驱用药包括退热药的施用。在进一步的实施方案中，前驱用药包括抗组胺药和退热药的全身施用。
适合用于前驱用药的示例性抗组胺药是苯海拉明(diphenhydramine)。在一些实施方案中，抗组胺药是苯海拉明。在一个实施方案中，苯海拉明以静脉内或口服剂量50mg或其当量施用。适合用于前驱用药的示例性退热药是对乙酰氨基酚。在一些实施方案中，退热药是对乙酰氨基酚。在一个实施方案中，对乙酰氨基酚以560-1000mg(诸如650-1000mg)的口服剂量或其当量施用。在一些实施方案中，前驱用药与双特异性抗体在同一天施用。在一些实施方案中，前驱用药在注射双特异性抗体之前，例如在双特异性抗体的施用之前的30-120分钟，与双特异性抗体在同一天施用。
可以至少在治疗的初始阶段施用前驱用药和/或防治。在一些实施方案中，在双特异性抗体的前四次施用期间施用前驱用药和/或防治。例如，可以在双特异性抗体施用的第一个28天周期期间如本文所述施用前驱用药和/或防治。在一些实施方案中，在周期1期间内施用前驱用药。在一些实施方案中，在周期1期间内施用防治。
通常，初始治疗期间反应的风险会在数次施用后消退，例如，在前四次施用(第一周期)后消退。因此，而且当人受试者没有经历CRS时，可以停止针对CRS的防治。然而，当人受试者经历大于1级的CRS时，可以继续CRS防治。同样地，前驱用药也可以任选地继续。CRS分级可以按照表7和表8中所述进行。
在进一步的实施方案中，在本文所述的方法中，当人受试者在第1周期中双特异性抗体的第四次(即末次)施用后经历大于1级的CRS时，在第二个28天周期(即周期2)期间施用防治。此外，当在前一周期的双特异性抗体的末次施用中人受试者经历大于1级的CRS时，防治可以在随后的周期期间继续进行。在第二个周期期间可以任选地施用任何前驱用药。一些实施方案中，在周期2期间施用防治。也可以在随后的周期中任选地施用进一步的前驱用药。在一些实施方案中，在随后的周期(周期2之后)期间施用前驱用药。
在一个实施方案中，施用针对CRS的前驱用药和防治，其中该前驱用药包括抗组胺药诸如苯海拉明(例如，以静脉内或口服剂量50mg或其当量)，并且该防治包含退热药诸如对乙酰氨基酚(例如，以650-1000mg的口服剂量或其当量)，以及皮质类固醇诸如泼尼松龙(例如，以100mg的静脉内剂量或其当量)。在一些实施方案中，在施用双特异性抗体之前30-120分钟施用前驱用药和防治。在随后的第2、3天和任选地第4天，施用进一步的防治，包括全身施用皮质类固醇诸如泼尼松龙(例如，以100mg的静脉内剂量或其当量)。在一些实施方案中，优选在双特异性抗体的前四次施用期间，例如在本文所述的双特异性抗体施用的第一个28天周期期间，施用前驱用药和防治时间表。此外，在先前周期的末次施用期间发生例如大于1级的CRS的情况下，随后的周期可以包括相同的施用时间表，其中作为施用时间表的一部分的前驱用药是任选的。
在使用本文所述的剂量和治疗方案治疗患有CLL的人受试者期间，CRS可以得到良好管理，同时有效地控制和/或治疗CLL。如实施例中所述，用本文所述方法治疗的受试者可以经历可管理的CRS。在一些情况下，接受本文所述治疗的受试者可以发展根据标准实践定义的1级的CRS。在其他情况下，受试者可以发展可管理的根据标准实践定义的2级的CRS。因此，接受本文所述治疗的受试者可以具有可管理的根据标准实践定义的1级或2级的CRS。根据CRS的标准分类，1级CRS包括发热至至少38℃、无低血压、无缺氧，并且2级CRS包括发热至至少38℃加不需要血管加压药的低血压和/需要通过低流量鼻套管吸氧或漏气的缺氧。此种可管理的CRS可以在第1周期发生。接受本文所述治疗的人受试者在治疗期间也可以具有根据标准实践定义的大于2级的CRS。因此，接受本文所述治疗的人受试者在所述治疗期间也可以具有根据标准实践定义的3级CRS。此种可管理的CRS可以在第1周期和随后的周期期间进一步发生。
根据本文所述方法治疗的人受试者也可以经历发热、疲乏和注射部位反应。他们还可以经历神经毒性、部分性癫痫发作、与CRS相关的失写症或与CRS相关的意识模糊状态。
如上所述，尽管已接受CRS防治，但受试者可以在用本文所述方法治疗期间发展CRS。CRS分级标准描述于表7和表8。
在一个实施方案中，如果受试者发展1级CRS，则向受试者施用抗生素，即发展1级CRS的受试者如果出现感染则用抗生素治疗。在一些实施方案中，继续抗生素直至中性粒细胞减少症(如果存在)消退。在一些实施方案中，表现出全身症状的患有1级CRS的受试者用NSAID治疗。
在一个实施方案中，发展2级CRS的受试者用静脉内液体推注(fluid bolus)和/或补氧治疗。在一些实施方案中，发展2级CRS的受试者用血管加压药治疗。在一些实施方案中，患有2级CRS伴合并症的受试者用托珠单抗(针对IL-6受体的人源化抗体，作为例如
Figure BDA0004174131210000331
市售)和/或类固醇(例如，地塞米松或其甲泼尼龙等效物)治疗。在进一步的实施方案中，对出现并发ICANS的受试者施用地塞米松。在又一个实施方案中，如果受试者在例如6小时内未显示CRS症状改善，或者如果受试者在初始改善后开始恶化，则第二剂托珠单抗与一剂皮质类固醇一起施用。在一些实施方案中，如果受试者在三次施用后对托珠单抗难治，则向受试者施用额外的细胞因子疗法，例如抗IL-6抗体(例如，司妥昔单抗)或IL-1R拮抗剂(例如，阿那白滞素)。
在一个实施方案中，发展3级CRS的受试者用血管加压药(例如，去甲肾上腺素)支持和/或补氧治疗。在一些实施方案中，患有3级CRS的受试者用托珠单抗、或托珠单抗联合类固醇(例如，地塞米松或其甲泼尼龙等效物)治疗。在一些实施方案中，对出现并发ICANS的受试者施用地塞米松。在进一步的实施方案中，如果受试者在三次施用后对托珠单抗难治，则向受试者施用额外的细胞因子疗法，例如抗IL-6抗体(例如，司妥昔单抗)或IL-1R拮抗剂(例如，阿那白滞素)。
在一个实施方案中，发展4级CRS的受试者用血管加压药支持和/或补氧(例如，经由正压通气，诸如CPAP、BiPAP、插管或机械通气)治疗。在一些实施方案中，如果受试者发展4级CRS，则向受试者施用至少两种血管加压药。在一些实施方案中，向受试者进一步施用类固醇，即向受试者施用托珠单抗和类固醇。在一些实施方案中，类固醇是地塞米松。在一些实施方案中，类固醇是甲泼尼龙。在进一步的实施方案中，对出现并发ICANS的受试者施用地塞米松。在又进一步的实施方案中，如果受试者在三次施用后对托珠单抗难治，则向受试者施用额外的细胞因子疗法，例如抗IL-6抗体(例如，司妥昔单抗)或IL-1R拮抗剂(例如，阿那白滞素)。在一些实施方案中，如果受试者对托珠单抗是难治性的，则将托珠单抗的施用转换为抗IL-6抗体(例如司妥昔单抗)的施用。在一些实施方案中，如果受试者对托珠单抗是难治性的，则将托珠单抗转换为IL-1R拮抗剂(例如阿那白滞素)。
在一些实施方案中，人受试者接受肿瘤溶解综合征(TLS)的防治性治疗，即用针对肿瘤溶解综合征(TLS)的防治来治疗受试者。肿瘤溶解综合征的分类和分级可以使用本领域已知的方法进行，其中该方法例如Howard等人NEngl J Med 2011；364:1844-54,和Coiffier等人,J Clin Oncol 2008；26:2767-78中所描述的。在一些实施方案中，TLS的防治性治疗包括在施用双特异性抗体之前施用一种或多种降尿酸剂，即针对TLS的防治包括在施用双特异性抗体之前施用一种或多种降尿酸剂。示例性降尿酸剂包含别嘌呤醇和拉布立酶。因此，在一个实施方案中，TLS的防治性治疗包括施用别嘌呤醇和/或拉布立酶。在一些实施方案中，TLS的防治治疗包括在施用双特异性抗体之前施用别嘌呤醇和/或拉布立酶。在一个实施方案中，在双特异性抗体前72小时施用别嘌呤醇。在一些实施方案中，在施用别嘌呤醇之后但在施用双特异性抗体之前启动拉布立酶。在双特异性抗体的后续剂量之前，可以进行受试者的TLS风险类别的重新评估。如果所有可测量的淋巴结的最大直径<5cm并且ALC<25×109/L，则认为受试者处于TLS的低风险。如果任何可测量的淋巴结的最大直径≥5cm但<10cm或ALC≥25×109/L，则认为受试者处于TLS的中风险。如果(a)任何可测量的淋巴结的最大直径≥10cm，或(b)ALC≥25×109/L并且任何可测量的淋巴结的最大直径≥5cm但<10cm，则认为受试者处于TLS的高风险。淋巴细胞计数>100×109/L的受试者被认为是高风险。在一些实施方案中，当受试者显示出TLS的体征时，可以使用支持性疗法，诸如拉布立酶和/或别嘌呤醇。
在一个实施方案中，本文所述方法中使用的双特异性抗体是皮下施用的，并且因此在药物组合物中配制以使其与皮下(s.c.)施用相容，即具有允许以本文所述的剂量下药学可接受的s.c.施用的配制剂和/或浓度。在一些实施方案中，皮下施用通过注射进行。例如，与皮下配制剂相容并可用于本文所述方法的DuoBody-CD3xCD20的配制剂先前已有描述(参见例如WO2019155008，其通过引用并入本文)。在一些实施方案中，双特异性抗体可以使用三水乙酸钠、乙酸、氢氧化钠、山梨糖醇、聚山梨酯80和注射用水配制，并且具有5.5或约5.5的pH。在一些实施方案中，双特异性抗体作为5mg/mL或60mg/mL浓缩物提供。在其他实施方案中，将期望剂量的双特异性抗体重构至约1mL的体积用于皮下注射。
在一个实施方案中，用于双特异性抗体的合适药物组合物可以包含双特异性抗体、20-40mM乙酸盐、140-160mM山梨糖醇和表面活性剂诸如聚山梨酯80，并且具有5.3-5.6的pH。在一些实施方案中，药物配制剂可以包含在5-100mg/mL范围内的抗体浓度，例如48或60mg/mL的双特异性抗体、30mM乙酸盐、150mM山梨糖醇、0.04％w/v聚山梨醇酯80，并且具有5.5的pH。此类配制剂可以用例如配制剂缓冲液稀释以允许适当的给药和皮下施用。
适当地选择药物组合物的体积以允许抗体的皮下施用。例如，待施用的体积在约0.3mL至约3mL的范围内，诸如0.3mL至3mL。待施用的体积可以是0.5mL、0.8mL、1mL、1.2mL、1.5mL、1.7mL、2mL或2.5mL，或约0.5mL、约0.8mL、约1mL、约1.2mL、约1.5mL、约1.7mL、约2mL或约2.5mL。因此，在一个实施方案中，待施用的体积是0.5mL或约0.5mL。在一些实施方案中，待施用的体积为0.8mL或约0.8mL。在一些实施方案中，待施用的体积为1mL或约1mL。在一些实施方案中，待施用的体积为1.2mL或约1.2mL。在一些实施方案中，待施用的体积为1.5mL或约1.5mL。在一些实施方案中，待施用的体积为1.7mL或约1.7mL。在一些实施方案中，待施用的体积为2mL或约2mL。在一些实施方案中，待施用的体积为2.5mL或约2.5mL。
本文所述的方法(或CD3xCD20抗体的用途)是用于治疗患有CLL的人患者。可以理解的是，本文所述的方法可能是提供给此类患者的首次或部分首次治疗。然而，患者可以已经经受针对CLL的既往治疗。既往治疗可以包括但不限于化疗、免疫疗法和靶向治疗中的一种或多种，或其组合。最常见的是，护理标准包含用细胞毒性化疗和抗CD20单克隆抗体的组合进行的治疗。可以理解的是，本文所述的方法也可以与其他治疗联合使用。
在一个实施方案中，用于本文所述方法的双特异性抗体包含：
(i)包含第一抗原结合区的第一结合臂，第一抗原结合区结合人CD3ε(epsilon)并包含可变重链(VH)区和可变轻链(VL)区，其中VH区包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列内的CDR1、CDR2和CDR3序列，并且VL区包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列内的CDR1、CDR2和CDR3序列；和
(ii)包含第二抗原结合区的第二结合臂，第二抗原结合区结合人CD20并包含VH区和VL区，其中VH区包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列内的CDR1、CDR2和CDR3序列，并且VL区包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列内的CDR1、CDR2和CDR3序列。
可以使用本领域已知的方法从可变重链区和可变轻链区鉴定CDR1、CDR2和CDR3区。来自所述可变重链区和可变轻链区的CDR区可以根据IMGT(参见Lefranc等人,NucleicAcids Research 1999；27:209-12和Brochet.Nucl Acids Res 2008；36:W503-8)进行注释。
在一些实施方案中，双特异性抗体包含：
(i)包含第一抗原结合区的第一结合臂，第一抗原结合区结合人CD3ε(epsilon)并包含分别包含SEQ ID NO:1、2和3中所示氨基酸序列的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3，以及分别包含SEQ ID NO:4、GTN序列和SEQ ID NO:5中所示氨基酸序列的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3；和
(ii)包含第二抗原结合区的第二结合臂，第二抗原结合区结合人CD20并包含分别包含SEQ ID NO:8、9和10中所示氨基酸序列的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3，以及分别包含SEQID NO:11、序列DAS和SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3。
在一些实施方案中，双特异性抗体包含：
(i)包含第一抗原结合区的第一结合臂，第一抗原结合区结合人CD3ε(epsilon)并包含含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VH区和含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的VL区；和
(ii)包含第二抗原结合区的第二结合臂，第二抗原结合区结合人CD20并包含含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VH区和含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL区。
在一些实施方案中，双特异性抗体是全长抗体。在一些实施方案中，该双特异性抗体包含惰性Fc区。在一个实施方案中，双特异性抗体是全长抗体并且可以具有惰性Fc区。在一些实施方案中，针对CD3的第一结合臂衍生自人源化抗体，例如衍生自全长IgG1,λ(lambda)抗体，如WO2015001085(其通过引用并入本文)中所述的H1L1，和/或针对CD20的第二结合臂衍生自人抗体，例如衍生自全长IgG1,κ(kappa)抗体，如WO2004035607(其通过引用并入本文)中所述的克隆7D8。双特异性抗体可以由两个半分子抗体产生，其中两个半分子抗体中的每个包含例如SEQ ID NO:24和25以及SEQ ID NO:26和27中所示的相应的第一和第二结合臂。半抗体可以在CHO细胞中产生，并且双特异性抗体可以通过例如Fab臂交换生成。在一个实施方案中，双特异性抗体是DuoBody-CD3xCD20的功能变体。
因此，在一些实施方案中，双特异性抗体包含(i)包含第一抗原结合区的第一结合臂，第一抗原结合区结合人CD3ε(epsilon)并包含含有与SEQ ID NO:6至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列的VH区或含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列但具有1、2或3个突变(例如，氨基酸取代)的VH区，以及含有与SEQ ID NO:7至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列的VL区或含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列但具有1、2或3个突变(例如，氨基酸取代)的VL区；和
(ii)包含第二抗原结合区的第二结合臂，第二抗原结合区结合人CD20并包含含有与SEQ ID NO:13至少85％、90％、95％、98％或99％相同的氨基酸序列的VH区或含有SEQ IDNO:13的氨基酸序列但具有1、2或3个突变(例如，氨基酸取代)的VH区，以及含有与SEQ IDNO:14至少85％、90％、95％、98％或99％相同的氨基酸序列的VL区或含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列但具有1、2或3个突变(例如，氨基酸取代)的VL区。
在一个实施方案中，双特异性抗体包含：
(i)包含第一抗原结合区的第一结合臂，第一抗原结合区结合人CD3ε(epsilon)并包含含有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的轻链；和
(ii)包含第二抗原结合区的第二结合臂，第二抗原结合区结合人CD20并包含含有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的VH区和含有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的VL区。
在一些实施方案中，双特异性抗体包含(i)包含第一抗原结合区的第一结合臂，第一抗原结合区结合人CD3ε(epsilon)并包含含有与SEQ ID NO:24至少85％、90％、95％、98％或99％相同的氨基酸序列的重链或含有SEQ ID NO:24的氨基酸序列但具有1、2或3个突变(例如，氨基酸取代)的重链，以及含有与SEQ ID NO:25至少85％、90％、95％、98％或99％相同的氨基酸序列的轻链或含有SEQ ID NO:25的氨基酸序列但具有1、2或3个突变(例如，氨基酸取代)的轻链；和
(ii)包含第二抗原结合区的第二结合臂，第二抗原结合区结合人CD20并包含含有与SEQ ID NO:26至少85％、90％、95％、98％或99％相同的氨基酸序列的重链或含有SEQ IDNO:26的氨基酸序列但具有1、2或3个突变(例如，氨基酸取代)的重链，以及含有与SEQ IDNO:27至少85％、90％、95％、98％或99％相同的氨基酸序列的轻链或含有SEQ ID NO:27的氨基酸序列但具有1、2或3个突变(例如，氨基酸取代)的轻链。
各种恒定区或其变体可以用于双特异性抗体。在一个实施方案中，抗体包含IgG恒定区，诸如人IgG1恒定区，例如，如SEQ ID NO:15中定义的人IgG1恒定区，或任何其他合适的IgG1同种异型。在一些实施方案中，双特异性抗体是具有人IgG1恒定区的全长抗体。在一些实施方案中，双特异性抗体的第一结合臂衍生自人源化抗体，优选衍生自全长的IgG1,λ(lambda)抗体。在一个实施方案中，双特异性抗体的第一结合臂衍生自人源化抗体，例如衍生自全长的IgG1,λ(λ)抗体，并且因此包含λ轻链恒定区。在一些实施方案中，第一结合臂包含SEQ ID NO:22中定义的λ轻链恒定区。在一些实施方案中，双特异性抗体的第二结合臂衍生自人抗体，优选来自全长IgG1,κ(kappa)抗体。在一些实施方案中，双特异性抗体的第二结合臂衍生自人抗体，优选衍生自全长IgG1,κ(kappa)抗体，并且因此可以包含κ轻链恒定区域。在一些实施方案中，第二结合臂包含SEQ ID NO:23中定义的κ轻链恒定区。在优选的实施方案中，第一结合臂包含SEQ ID NO:22中定义的λ轻链恒定区并且第二结合臂包含SEQID NO:23中定义的κ轻链恒定区。
应当理解，双特异性抗体的恒定区部分可以包含允许双特异性抗体的高效形成/产生和/或提供惰性Fc区的修饰。此类修饰在本领域中是众所周知的。
不同格式的双特异性抗体是本领域已知的(由Kontermann,Drug Discov Today2015；20:838-47；MAbs,2012；4:182-97综述)。因此，本文所述的方法和用途中使用的双特异性抗体不限于任何特定的双特异性格式或生产其的方法。例如，双特异性抗体可以包括但不限于具有互补CH3域以强制异二聚化的双特异性抗体、旋钮入孔(Knob-into-Hole)分子(Genentech，WO9850431)、CrossMAb(Roche，WO2011117329)或静电匹配分子(Amgen,EP1870459和WO2009089004；Chugai，US201000155133；Oncomed，WO2010129304)。
优选地，双特异性抗体包含含有第一重链和第二重链的Fc区，第一重链具有包含第一CH3区的第一Fc序列，第二重链具有包含第二CH3区的第二Fc序列，其中第一和第二CH3区的序列是不同的并且使得所述第一和第二CH3区之间的异二聚体相互作用强于所述第一和第二CH3区的同二聚体相互作用中的每一者。有关这些相互作用以及如何实现它们的更多详细信息，提供于例如WO2011131746和WO2013060867(Genmab)，其通过引用并入本文。在一个实施方案中，双特异性抗体在第一重链中包含(i)对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链恒定区中的F405的位置中的氨基酸L，并且在第二重链中包含对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链恒定区中的K409的位置中的氨基酸R，或反之亦然。
双特异性抗体可以包含Fc区中的修饰以使Fc区惰性或非活化。因此，在本文公开的双特异性抗体中，可以修饰一条或两条重链，使得相对于没有修饰的双特异性抗体，该抗体诱导Fc介导的效应器功能的程度更小。Fc介导的效应器功能可以通过测定T细胞上Fc介导的CD69表达(即CD3抗体介导的、Fcγ受体依赖性CD3交联导致的CD69表达)、通过结合Fcγ受体、通过结合Clq、或通过诱导Fc介导的FcγR交联来测量。特别地，可以修饰重链恒定区序列，使得在与野生型(未修饰的)抗体相比时，Fc介导的CD69表达降低至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少99％或100％，其中所述Fc介导的CD69表达在基于PBMC的功能测定中测定，例如如WO2015001085的实施例3所述。重链和轻链恒定区序列的修饰也可以导致Clq与所述抗体的结合减少。与未修饰的抗体相比，降低可以是至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少97％或100％，并且Clq结合可以例如通过ELISA测定。此外，可以修饰Fc区以使得抗体介导与未修饰的抗体相比Fc介导的T细胞增殖降低了至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少99％或100％，其中所述T细胞增殖是在基于PBMC的功能测定中测量的。可以经修饰的氨基酸位置的实例，例如在IgG1同种型抗体中包括位置L234和L235。因此，在一个实施方案中，双特异性抗体可以包含第一重链和第二重链，并且其中在第一重链和第二重链中，对应于根据Eu编号的人IgG1重链中位置L234和L235的位置中的氨基酸残基分别为F和E。此外，D265A氨基酸取代可以降低与所有Fcγ受体的结合并防止ADCC(Shields等人,JBC 2001；276:6591-604)。因此，双特异性抗体可以包含第一重链和第二重链，其中在第一重链和第二重链中，对应于根据Eu编号的人IgG1重链中位置D265的位置中的氨基酸残基为A。
在一个实施方案中，双特异性抗体的第一重链和第二重链中，对应于人IgG1重链中位置L234、L235和D265的位置中的氨基酸分别为F、E和A。在这些位置具有这些氨基酸的抗体是具有惰性Fc区或非活化Fc区的抗体的实例。
在一些实施方案中，该双特异性抗体包含第一重链和第二重链，其中在第一和第二重链两者中，对应于SEQ ID NO：15的人IgG1重链恒定区中位置L234、L235和D265的位置中的氨基酸分别是F、E和A。在一些实施方案中，双特异性抗体包含第一重链和第二重链，其中在第一重链中，对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链恒定区中F405的位置中的氨基酸是L，并且在第二重链中，对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链恒定区中K409的位置中的氨基酸是R，或反之亦然。在优选的实施方案中，双特异性抗体包含第一重链和第二重链，其中(i)在第一和第二重链两者中，对应于SEQ ID NO.15的人IgG1重链恒定区中位置L234、L235和D265的位置中的氨基酸分别是F、E和A，并且(ii)在第一重链中，对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链恒定区中F405的位置中的氨基酸是L，并且其中在第二重链中，对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链恒定区中K409的位置中的氨基酸是R，或反之亦然。
关于本文所述的双特异性抗体，那些具有三个氨基酸取代L234F、L235E和D265A的组合以及另外地K409R或F405L突变的双特异性抗体，如上所述，可以分别用后缀“FEAR”或“FEAL”表示。
野生型IgG1重链恒定区的氨基酸序列在本文中可以鉴定为SEQ ID NO:15。与上文公开的实施方案一致，双特异性抗体可以包含携带F405L取代的IgG1重链恒定区并且可以具有SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列和/或携带K409R取代的IgG1重链恒定区并且可以具有SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列，并且具有使Fc区惰性或非活化的进一步取代。因此，在一个实施方案中，双特异性抗体包含IgG1重链恒定区的组合，其中IgG1重链恒定区之一的氨基酸序列携带L234F、L235E、D265A和F405L取代(例如，如SEQ ID NO:19中所示)并且另一个IgG1重链恒定区的氨基酸序列携带L234F、L235E、D265A和K409R取代(例如，如SEQID NO:20中所示)。因此，在一些实施方案中，双特异性抗体包括重链恒定区，该重链恒定区包含SEQ ID NO:19和20的氨基酸序列。
在优选的实施方案中，用于本文所述的方法和用途的双特异性抗体包含含有分别如SEQ ID NO:24和25中定义的重链和轻链的第一结合臂，以及含有分别如SEQ ID NO:26和27中定义的重链和轻链的第二结合臂。此类抗体也可以本文中称为DuoBody CD3xCD20。此外，此类抗体的变体被考虑用于本文所述的方法和用途。在一些实施方案中，双特异性抗体包含分别由SEQ ID NO:24和25中列出的氨基酸序列组成的重链和轻链，以及包含分别由SEQ ID NO:26和27中列出的氨基酸序列组成的重链和轻链。在一些实施方案中，双特异性抗体是艾可瑞妥单抗(CAS 2134641-34-0)或其生物类似物。
试剂盒
本文还提供包括药物组合物的试剂盒，该药物组合物含有以适于在本文所述方法中使用的治疗有效量的根据本发明的与CD3和CD20结合的双特异性抗体，诸如DuoBodyCD3xCD20或艾可瑞妥单抗，以及药学上可接受的载剂。试剂盒任选地还可以包括例如包括施用时间表的说明书，以允许从业者(例如，医师、护士或患者)施用包含在其中的组合物以将组合物施用于患有CLL的患者。试剂盒还可以包括注射器。
任选地，试剂盒包括多个包装的单剂量(例如12-60mg之间，诸如12mg、24mg、36mg、48mg或60mg的剂量)药物组合物，其各自含有有效量的双特异性抗体，用于根据本文所述的方法进行单次施用。用于施用药物组合物所必需的仪器或装置也可以包括在试剂盒中。例如，试剂盒可以提供含有一定量双特异性抗体的一个或多个预装填注射器。
进一步的实施方案
1.双特异性抗体，其包含：
(i)包含第一抗原结合区的第一结合臂，所述第一抗原结合区与人CD3ε(epsilon)结合并且包含可变重链(VH)区和可变轻链(VL)区，其中所述VH区包含SEQ ID NO:6的VH区序列中的CDR1、CDR2和CDR3序列，并且所述VL区包含SEQ ID NO:7的VL区序列中的CDR1、CDR2和CDR3序列；和
(ii)包含第二抗原结合区的第二结合臂，所述第二抗原结合区与人CD20结合并且包含VH区和VL区，其中所述VH区包含SEQ ID NO:13的VH区序列中的CDR1、CDR2和CDR3序列，并且所述VL区包含SEQ ID NO:14的VL区序列中的CDR1、CDR2和CDR3序列；
所述双特异性抗体用于治疗人受试者中的慢性淋巴细胞白血病(CLL)，其中所述治疗包括在28天周期中以12-60mg范围的剂量向所述人受试者施用所述双特异性抗体。
2.根据实施方案1所述的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体以24mg的剂量施用。
3.根据实施方案1所述的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体以48mg的剂量施用。
4.根据实施方案1-3任一项所述的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体每周施用一次(每周施用)。
5.根据实施方案4所述的双特异性抗体，其中所述每周施用进行2.5个28天周期。
6.根据实施方案4或5所述的双特异性抗体，其中在所述每周施用之后，所述双特异性抗体每两周施用一次(每两周施用)。
7.根据实施方案6所述的双特异性抗体，其中所述每两周施用进行6个28天周期。
8.根据实施方案6或7所述的双特异性抗体，其中在所述每两周施用之后，所述双特异性抗体每四周施用一次。
9.根据实施方案1-8任一项所述的双特异性抗体，其中在施用12-60mg的首次每周剂量之前，在28天周期的周期1中施用所述双特异性抗体的引发剂量。
10.根据实施方案9所述的双特异性抗体，其中所述引发剂量在施用所述12-60mg的首次每周剂量之前两周施用。
11.根据实施方案9或10所述的双特异性抗体，其中所述引发剂量在0.05-0.35mg的范围内。
12.根据实施方案9-11任一项所述的双特异性抗体，其中所述引发剂量是0.16mg或约0.16mg。
13.根据实施方案9-12任一项所述的双特异性抗体，其中在施用所述引发剂量之后且施用所述12-60mg的首次每周剂量之前，施用所述双特异性抗体的中间剂量。
14.根据实施方案13所述的双特异性抗体，其中在周期1的第1天施用所述引发剂量并且在第8天施用所述中间剂量，之后是在第15和22天的所述12-60mg的首次每周剂量。
15.根据实施方案13或14所述的双特异性抗体，其中所述中间剂量在0.6-1.2mg的范围内。
16.根据实施方案13-15任一项所述的双特异性抗体，其中所述中间剂量是0.8mg或约0.8mg。
17.根据实施方案13-16任一项所述的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体以28天周期施用，其中：
a)在周期1中，在第1天施用引发剂量，在第8天施用中间剂量，并且在第15和22天施用12-60mg的全剂量；
b)在周期2-3中，在第1、8、15和22天施用12-60mg的全剂量；
c)在周期4-9中，在第1和15天施用12-60mg的全剂量；和
d)在周期10及随后的周期中，在第1天施用12-60mg的全剂量。
18.根据实施方案17所述的双特异性抗体，其中所述全剂量是24mg或约24mg。
19.根据实施方案17所述的双特异性抗体，其中所述全剂量是48mg或约48mg。
20.根据实施方案1-19任一项所述的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体在皮下施用。
21.根据实施方案1-20任一项所述的双特异性抗体，其中所述CLL是复发性和/或难治性CLL。
22.根据实施方案1-21任一项所述的双特异性抗体，其中所述受试者对BTK抑制剂不耐受。
23.根据实施方案1-22任一项所述的双特异性抗体，其中所述受试者已经接受至少两种既往抗赘生疗法线。
24.根据实施方案23所述的双特异性抗体，其中所述至少两种既往抗赘生疗法的至少一种包括用BTK抑制剂治疗。
25.根据实施方案1-24任一项所述的双特异性抗体，其中所述CLL对BTK抑制剂是难治性的。
26.根据实施方案1-25任一项所述的双特异性抗体，其中所述CLL在用BTK抑制剂治疗期间复发。
27.根据实施方案21-26任一项所述的双特异性抗体，其中所述受试者在接受所述两种既往抗赘生疗法后患有难治性和/或复发性CLL。
28.根据实施方案1-27任一项所述的双特异性抗体，其中所述受试者用针对细胞因子释放综合征(CRS)的防治来治疗。
29.根据实施方案28所述的双特异性抗体，其中所述防治包括向受试者施用皮质类固醇。
30.根据实施方案28或29任一项所述的双特异性抗体，其中所述皮质类固醇与所述双特异性抗体在同一天施用。
31.根据实施方案30所述的双特异性抗体，其中在施用所述双特异性抗体后的第二、第三和第四天进一步施用所述皮质类固醇。
32.根据实施方案29-31任一项所述的双特异性抗体，其中所述皮质类固醇是泼尼松龙。
33.根据实施方案32所述的双特异性抗体，其中所述泼尼松龙以100mg的静脉内剂量或其当量(包括口服剂量)施用。
34.根据实施方案1-33任一项所述的双特异性抗体，其中向所述受试者施用前驱用药以减少对注射的反应。
35.根据实施方案34所述的双特异性抗体，其中所述前驱用药包含抗组胺药。
36.根据实施方案35所述的双特异性抗体，其中所述抗组胺药是苯海拉明。
37.根据实施方案36所述的双特异性抗体，其中所述苯海拉明以50mg的静脉内或口服剂量，或其当量施用。
38.根据实施方案34-37中任一项所述的双特异性抗体，其中所述前驱用药包含退热药。
39.根据实施方案38所述的双特异性抗体，其中所述退热药是对乙酰氨基酚。
40.根据实施方案39所述的双特异性抗体，其中所述对乙酰氨基酚以560至1000mg的口服剂量或其当量施用。
41.根据实施方案34-40任一项所述的双特异性抗体，其中所述前驱用药与所述双特异性抗体在同一天施用。
42.根据实施方案28-41任一项所述的双特异性抗体，其中所述防治在周期1期间施用。
43.根据实施方案34-42任一项所述的双特异性抗体，其中所述前驱用药在周期1期间施用。
44.根据实施方案42或43所述的双特异性抗体，其中当所述受试者在周期1中所述双特异性抗体的末次施用后经历大于1级的CRS时，在周期2期间施用所述防治。
45.根据实施方案44所述的双特异性抗体，其中当在前一周期的所述双特异性抗体的末次施用中，所述受试者经历大于1级的CRS时，在随后的周期中继续所述防治。
46.根据实施方案34-45任一项所述的双特异性抗体，其中所述前驱用药在周期2期间施用。
47.根据实施方案46所述的双特异性抗体，其中所述前驱用药在随后的周期期间施用。
48.根据实施方案1-47任一项所述的双特异性抗体，其中如果所述受试者发展1级CRS，则向所述受试者施用抗生素。
49.根据实施方案1-47任一项所述的双特异性抗体，其中如果所述受试者发展2级或3级CRS，则向所述受试者施用血管加压药。
50.根据实施方案1-47任一项所述的双特异性抗体，其中如果所述受试者发展4级CRS，则向所述受试者施用至少两种血管加压药。
51.根据实施方案1-50任一项所述的双特异性抗体，其中如果所述受试者发展2级、3级或4级CRS，则向所述受试者施用托珠单抗。
52.根据实施方案51所述的双特异性抗体，其中向所述受试者进一步施用类固醇。
53.根据实施方案52所述的双特异性抗体，其中所述类固醇是地塞米松。
54.根据实施方案52所述的双特异性抗体，其中所述类固醇是甲泼尼龙。
55.根据实施方案51-54任一项所述的双特异性抗体，其中如果所述受试者对托珠单抗是难治性的，则将托珠单抗换成抗IL-6抗体(例如司妥昔单抗)。
56.根据实施方案51-54任一项所述的双特异性抗体，其中如果所述受试者对托珠单抗是难治性的，则将托珠单抗换成IL-1R拮抗剂(例如阿那白滞素)。
57.根据实施方案1-56任一项所述的双特异性抗体，其中所述受试者用针对肿瘤溶解综合征(TLS)的防治来治疗。
58.根据实施方案57所述的双特异性抗体，其中所述针对TLS的防治包括在施用所述双特异性抗体之前施用一种或多种降尿酸剂。
59.根据实施方案58所述的双特异性抗体，其中所述一种或多种降尿酸剂包含拉布立酶和/或别嘌呤醇。
60.根据实施方案1-59任一项所述的双特异性抗体，其中所述受试者达到完全响应、部分响应或疾病稳定。
61.根据实施方案1-60任一项所述的双特异性抗体，其中：
(i)所述第一抗原结合区包含分别包含SEQ ID NO:1、2和3中所列出的氨基酸序列的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3，以及分别包含SEQ ID NO:4、序列GTN和SEQ ID NO:5中列出的氨基酸序列的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3；和
(ii)所述第二抗原结合区包含分别包含SEQ ID NO:8、9和10中列出的氨基酸序列的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3，以及分别包含SEQ ID NO:11、序列DAS和SEQ ID NO:12中列出的氨基酸序列的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3。
62.根据实施方案1-61任一项所述的双特异性抗体，其中：
(i)所述第一抗原结合区包含VH区和VL区，所述VH区包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列，并且所述VL区包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；和
(ii)所述第二抗原结合区包含VH区和VL区，所述VH区包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列，并且所述VL区包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列。
63.根据实施方案1-62任一项所述的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体的所述第一结合臂衍生自人源化抗体，优选衍生自全长IgG1,λ(lambda)抗体。
64.根据实施方案63所述的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体的所述第一结合臂包含λ轻链恒定区，所述λ轻链恒定区包含SEQ ID NO:22中列出的氨基酸序列。
65.根据实施方案1-64任一项所述的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体的所述第二结合臂衍生自人抗体，优选衍生自全长IgG,1κ(kappa)抗体。
66.根据实施方案65所述的双特异性抗体，其中所述第二结合臂包含κ轻链恒定区，所述κ轻链恒定区包含SEQ ID NO:23中列出的氨基酸序列。
67.根据实施方案1-66中任一项所述的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体是具有人IgG1恒定区的全长抗体。
68.根据实施方案1-67任一项所述的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体包含惰性Fc区。
69.根据实施方案1-68任一项所述的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体包含第一重链和第二重链，其中在所述第一和第二重链两者中，对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链恒定区中位置L234、L235和D265的位置处的氨基酸分别是F、E和A。
70.根据实施方案1-69任一项所述的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体包含第一重链和第二重链，其中在所述第一重链中，对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链恒定区中F405的位置处的氨基酸是L，并且其中在所述第二重链中，对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链恒定区中K409的位置处的氨基酸是R，或反之亦然。
71.根据实施方案1-70任一项所述的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体包含第一重链和第二重链，其中
(i)在所述第一和第二重链两者中，对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链恒定区中位置L234、L235和D265的位置处的氨基酸分别是F、E和A，和
(ii)在所述第一重链中，对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链恒定区中F405的位置处的氨基酸是L，并且其中在所述第二重链中，对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链恒定区中K409的位置处的氨基酸是R，或反之亦然。
72.根据实施方案71所述的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体包含重链恒定区，所述重链恒定区包含SEQ ID NO:19和20的氨基酸序列。
73.根据实施方案1-72任一项所述的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体包含分别包含SEQ ID NO:24和25中列出的氨基酸序列的重链和轻链，以及分别包含SEQ ID NO:26和27中列出的氨基酸序列的重链和轻链。
74.根据实施方案1-73任一项所述的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体包含分别由SEQ ID NO:24和25的氨基酸序列组成的重链和轻链，以及分别由SEQ ID NO:26和27的氨基酸序列组成的重链和轻链。
75.根据实施方案1-74任一项所述的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体是艾可瑞妥单抗或其生物类似物。
本公开由以下实施例进一步说明，不应将这些实施例解释为进一步的限制。本申请中通篇引用的所有附图和所有参考文献、Genbank序列、专利和已公开的专利申请的内容通过引用明确并入本文。
1a.在人受试者中治疗慢性淋巴细胞白血病(CLL)的方法，所述方法包括向所述受试者施用双特异性抗体，所述双特异性抗体包含：
(i)包含第一抗原结合区的第一结合臂，所述第一抗原结合区与人CD3ε(epsilon)结合并且包含可变重链(VH)区和可变轻链(VL)区，其中所述VH区包含SEQ ID NO:6的VH区序列中的CDR1、CDR2和CDR3序列，并且所述VL区包含SEQ ID NO:7的VL区序列中的CDR1、CDR2和CDR3序列；和
(ii)包含第二抗原结合区的第二结合臂，所述第二抗原结合区与人CD20结合并且包含VH区和VL区，其中所述VH区包含SEQ ID NO:13的VH区序列中的CDR1、CDR2和CDR3序列，并且所述VL区包含SEQ ID NO:14的VL区序列中的CDR1、CDR2和CDR3序列；
其中在28天周期中以12-60mg范围的剂量施用所述双特异性抗体。
2a.根据实施方案1a所述的方法，其中所述双特异性抗体以24mg的剂量施用。
3a.根据实施方案1a所述的方法，其中所述双特异性抗体以48mg的剂量施用。
4a.根据实施方案1a-3a任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体每周施用一次(每周施用)。
5a.根据实施方案4a所述的方法，其中所述每周施用进行2.5个28天周期。
6a.根据实施方案4a或5a所述的方法，其中在所述每周施用之后，所述双特异性抗体每两周施用一次(每两周施用)。
7a.根据实施方案6a所述的方法，其中所述每两周施用进行6个28天周期。
8a.根据实施方案6a或7a所述的方法，其中在所述每两周施用之后，所述双特异性抗体每四周施用一次。
9a.根据实施方案1a-8a任一项所述的方法，其中在施用12-60mg的第一每周剂量之前，在28天周期的周期1中施用所述双特异性抗体的引发剂量。
10a.根据实施方案9a所述的方法，其中所述引发剂量在施用所述12-60mg的第一每周剂量之前两周施用。
11a.根据实施方案9a或10a所述的方法，其中所述引发剂量在0.05-0.35mg的范围内。
12a.根据实施方案9a-11a任一项所述的方法，其中所述引发剂量是0.16mg或约0.16mg。
13a.根据实施方案9a-12a任一项所述的方法，其中在施用所述引发剂量之后且施用所述12-60mg的首次每周剂量之前，施用所述双特异性抗体的中间剂量。
14a.根据实施方案13a所述的方法，其中在周期1的第1天施用所述引发剂量并且在第8天施用所述中间剂量，之后是在第15和22天的所述12-60mg的首次每周剂量。
15a.根据实施方案13a或14a所述的方法，其中所述中间剂量在0.6-1.2mg的范围内。
16a.根据实施方案13a-15a任一项所述的方法，其中所述中间剂量是0.8mg或约0.8mg。
17a.根据实施方案13a-16a任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体以28天周期施用，其中：
a)在周期1中，在第1天施用引发剂量，在第8天施用中间剂量，并且在第15和22天施用12-60mg的全剂量；
b)在周期2-3中，在第1、8、15和22天施用12-60mg的全剂量；
c)在周期4-9中，在第1和15天施用12-60mg的全剂量；和
d)在周期10及随后的周期中，在第1天施用12-60mg的全剂量。
18a.根据实施方案17a所述的方法，其中所述全剂量是24mg或约24mg。
19a.根据实施方案17a所述的方法，其中所述全剂量是48mg或约48mg。
20a.根据实施方案1a-19a任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体在皮下施用。
21a.根据实施方案1a-20a任一项所述的方法，其中所述CLL是复发性和/或难治性CLL。
22a.根据实施方案1a-21a任一项所述的方法，其中所述受试者对BTK抑制剂不耐受。
23a.根据实施方案1a-22a任一项所述的方法，其中所述受试者已经接受至少两种既往抗赘生疗法线。
24a.根据实施方案23a所述的方法，其中所述至少两种既往抗赘生疗法的至少一种包括用BTK抑制剂治疗。
25a.根据实施方案1a-24a任一项所述的方法，其中所述CLL对BTK抑制剂是难治性的。
26a.根据实施方案1a-25任一项所述的方法，其中所述CLL在用BTK抑制剂治疗期间复发。
27a.根据实施方案21a-26a任一项所述的方法，其中所述受试者在接受所述两种既往抗赘生疗法后具有难治性和/或复发性CLL。
28a.根据实施方案1a-27a任一项所述的方法，其中所述受试者用针对细胞因子释放综合征(CRS)的防治来治疗。
29a.根据实施方案28a所述的方法，其中所述防治包括向受试者施用皮质类固醇。
30a.根据实施方案28a或29a任一项所述的方法，其中所述皮质类固醇与所述双特异性抗体在同一天施用。
31a.根据实施方案30a所述的方法，其中在施用所述双特异性抗体后的第二、第三和第四天进一步施用所述皮质类固醇。
32a.根据实施方案29a-31a任一项所述的方法，其中所述皮质类固醇是泼尼松龙。
33a.根据实施方案32a所述的方法，其中所述泼尼松龙以100mg的静脉内剂量或其当量(包括口服剂量)施用。
34a.根据实施方案1a-33a任一项所述的方法，其中向所述受试者施用前驱用药以减少对注射的反应。
35a.根据实施方案34a所述的方法，其中所述前驱用药包含抗组胺药。
36a.根据实施方案35a所述的方法，其中所述抗组胺药是苯海拉明。
37a.根据实施方案36a所述的方法，其中所述苯海拉明以50mg的静脉内或口服剂量，或其当量施用。
38a.根据实施方案34a-37a中任一项所述的方法，其中所述前驱用药包含退热药。
39a.根据实施方案38a所述的方法，其中所述退热药是对乙酰氨基酚。
40a.根据实施方案39a所述的方法，其中所述对乙酰氨基酚以560至1000mg的口服剂量或其当量施用。
41a.根据实施方案34a-40a任一项所述的方法，其中所述前驱用药与所述双特异性抗体在同一天施用。
42a.根据实施方案28a-41a任一项所述的方法，其中所述防治在周期1期间施用。
43a.根据实施方案34a-42a任一项所述的方法，其中所述前驱用药在周期1期间施用。
44a.根据实施方案42或43所述的方法，其中当所述受试者在周期1中所述双特异性抗体的末次施用后经历大于1级的CRS时，在周期2期间施用所述防治。
45a.根据实施方案44a所述的方法，其中当在前一周期的所述双特异性抗体的末次施用中，所述受试者经历大于1级的CRS时，在随后的周期中继续所述防治。
46a.根据实施方案34a-45a任一项所述的方法，其中所述前驱用药在周期2期间施用。
47a.根据实施方案46a所述的方法，其中所述前驱用药在随后的周期期间施用。
48a.根据实施方案1a-47a任一项所述的方法，其中如果所述受试者发展1级CRS，则向所述受试者施用抗生素。
49a.根据实施方案1a-47a任一项所述的方法，其中如果所述受试者发展2级或3级CRS，则向所述受试者施用血管加压药。
50a.根据实施方案1a-47a任一项所述的方法，其中如果所述受试者发展4级CRS，则向所述受试者施用至少两种血管加压药。
51a.根据实施方案1a-50a任一项所述的方法，其中如果所述受试者发展2级、3级或4级CRS，则向所述受试者施用托珠单抗。
52a.根据实施方案51a所述的方法，其中向所述受试者进一步施用类固醇。
53a.根据实施方案52a所述的方法，其中所述类固醇是地塞米松。
54a.根据实施方案52a所述的方法，其中所述类固醇是甲泼尼龙。
55a.根据实施方案51a-54a任一项所述的方法，其中如果所述受试者对托珠单抗是难治性的，则将托珠单抗换成抗IL-6抗体(例如司妥昔单抗)。
56a.根据实施方案51a-54a任一项所述的方法，其中如果所述受试者对托珠单抗是难治性的，则将托珠单抗换成IL-1R拮抗剂(例如阿那白滞素)。
57a.根据实施方案1a-56a任一项所述的方法，其中所述受试者用针对肿瘤溶解综合征(TLS)的防治来治疗。
58a.根据实施方案57a所述的方法，其中所述针对TLS的防治包括在施用所述双特异性抗体之前施用一种或多种降尿酸剂。
59a.根据实施方案58所述的方法，其中所述一种或多种降尿酸剂包含拉布立酶和/或别嘌呤醇。
60a.根据实施方案1a-59a任一项所述的方法，其中所述受试者达到完全响应、部分响应或疾病稳定。
61a.根据实施方案1a-60a任一项所述的方法，其中：
(i)所述第一抗原结合区包含分别包含SEQ ID NO:1、2和3中所列出的氨基酸序列的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3，以及分别包含SEQ ID NO:4、序列GTN和SEQ ID NO:5中列出的氨基酸序列的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3；和
(ii)所述第二抗原结合区包含分别包含SEQ ID NO:8、9和10中列出的氨基酸序列的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3，以及分别包含SEQ ID NO:11、序列DAS和SEQ ID NO:12中列出的氨基酸序列的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3。
62a.根据实施方案1a-61a任一项所述的方法，其中：
(i)所述第一抗原结合区包含VH区和VL区，所述VH区包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列，并且所述VL区包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；和
(ii)所述第二抗原结合区包含VH区和VL区，所述VH区包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列，并且所述VL区包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列。
63a.根据实施方案1a-62a任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体的所述第一结合臂衍生自人源化抗体，优选衍生自全长IgG1,λ(lambda)抗体。
64a.根据实施方案63a所述的方法，其中所述双特异性抗体的所述第一结合臂包含λ轻链恒定区，所述λ轻链恒定区包含SEQ ID NO:22中列出的氨基酸序列。
65a.根据实施方案1a-64a任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体的所述第二结合臂衍生自人抗体，优选衍生自全长IgG,1κ(kappa)抗体。
66a.根据实施方案65a所述的方法，其中所述第二结合臂包含κ轻链恒定区，所述κ轻链恒定区包含SEQ ID NO:23中列出的氨基酸序列。
67a.根据实施方案1a-66a中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体是具有人IgG1恒定区的全长抗体。
68a.根据实施方案1a-67a任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体包含惰性Fc区。
69a.根据实施方案1a-68a任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体包含第一重链和第二重链，其中在所述第一和第二重链两者中，对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链恒定区中位置L234、L235和D265的位置处的氨基酸分别是F、E和A。
70a.根据实施方案1a-69a任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体包含第一重链和第二重链，其中在所述第一重链中，对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链恒定区中F405的位置处的氨基酸是L，并且其中在所述第二重链中，对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链恒定区中K409的位置处的氨基酸是R，或反之亦然。
71a.根据实施方案1a-70a任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体包含第一重链和第二重链，其中
(i)在所述第一和第二重链两者中，对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链恒定区中位置L234、L235和D265的位置处的氨基酸分别是F、E和A，和
(ii)在所述第一重链中，对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链恒定区中F405的位置处的氨基酸是L，并且其中在所述第二重链中，对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链恒定区中K409的位置处的氨基酸是R，或反之亦然。
72a.根据实施方案71a所述的方法，其中所述双特异性抗体包含重链恒定区，所述重链恒定区包含SEQ ID NO:19和20的氨基酸序列。
73a.根据实施方案1a-72a任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体包含分别包含SEQ ID NO:24和25中列出的氨基酸序列的重链和轻链，以及分别包含SEQ ID NO:26和27中列出的氨基酸序列的重链和轻链。
74a.根据实施方案1a-73a任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体包含分别由SEQ ID NO:24和25的氨基酸序列组成的重链和轻链，以及分别由SEQ ID NO:26和27的氨基酸序列组成的重链和轻链。
75a.根据实施方案1a-74a任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体是艾可瑞妥单抗或其生物类似物。
实施例
DuoBody-CD3xCD20
DuoBody-CD3xCD20是识别T细胞抗原CD3和B细胞抗原CD20的bsAb。DuoBody-CD3xCD20引发有例的T细胞介导的对表达CD20的细胞的杀伤。DuoBody-CD3xCD20具有规则IgG1结构。
将两种亲本抗体，IgG1-CD3-FEAL(人源化IgG1λ,CD3ε特异性抗体，其具有分别如SEQ ID NO：24和25中所列的重链和轻链序列)以及IgG1-CD20-FEAR(衍生自具有分别如SEQID NO：26和27中所列的重链和轻链序列的人IgG1κCD20-特异性抗体7D8)制备为单独的生物中间体。每个亲本抗体含有生成DuoBody分子所需的CH3域中的互补突变之一(分别为F405L和K409R)。亲本抗体在Fc区中包含三个额外的突变(L234F、L235E和D265A；FEA)。使用标准悬浮细胞培养和纯化技术在哺乳动物中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系中产生亲本抗体。随后，通过受控Fab臂交换(cFAE)过程(Labrijn等人2013,Labrijn等人2014,Gramer等人2013)制备DuoBody-CD3xCD20。将亲本抗体混合并经受受控还原条件。这导致在再氧化下再组装的亲本抗体的分离。通过这种方式，获得高度纯的DuoBody-CD3xCD20制备物(约93-95％)。在进一步的抛光/纯化之后，获得接近100％纯的最终产物。利用理论消光系数ε＝1.597mL·mg-1cm-1，通过在280nm处的吸光度测量DuoBody-CD3xCD20浓度。该产品已获得艾可瑞妥单抗的国际专有名称。
艾可瑞妥单抗制备为无菌透明无色至淡黄色溶液(5mg/mL或60mg/mL)，作为皮下(SC)注射用溶液的浓缩物提供。艾可瑞妥单抗含有缓冲剂和补强剂(tonicifyingagents)。配制产品中的所有赋形剂及其量对于皮下注射产品是药学上可接受的。将合适的剂量重构至约1mL的体积用于皮下注射。
实施例1：艾可瑞妥单抗诱导的从CLL患者获得的CD4+和CD8+T细胞的活化和B细胞的细胞毒性
CLL患者往往具有固有T细胞免疫功能失调，这可能潜在影响艾可瑞妥单抗的抗肿瘤活性。本实验是为了确定艾可瑞妥单抗是否可以活化CLL患者的T细胞并诱导针对B细胞的细胞毒性。
简而言之，将商购获得的CLL患者PBMC与健康供体(HD)的PBMC(患者：健康供体细胞比率为1:5)和艾可瑞妥单抗共培养，或与含有CD3臂或CD20臂，以及非结合对照臂的双特异性抗体(分别为bsIgG1-CD3xctrl，和bsIgG1-ctrlxCD20)共培养24小时，其中对照具有与艾可瑞妥单抗相同的格式(即具有惰性的Fc)。添加HD PBMC以改善CLL患者衍生PBMC的存活力并用CFSE标记，以便能够将它们与CLL患者衍生PBMC区分。CD69的表达被用来评价(A)CD4+和(B)CD8+T细胞活化。分析B细胞存活力(％剩余的CD4-CD8-CD22+细胞)作为对艾可瑞妥单抗诱导的细胞毒性的测量。
如图1所示，艾可瑞妥单抗诱导CLL和HD CD4+和CD8+T细胞两者的活化(参见小图A和B)。对于CD4+T细胞，HD T细胞比CLL T细胞更高效地活化(参见小图A，比较左边图与右边图，其中与CLL患者衍生PBMC相比，艾可瑞妥单抗在健康供体衍生PBMC中诱导CD4+T细胞活化至更高％的CD69)。艾可瑞妥单抗将CLL和HDD CD8+T细胞两者活化至相似的程度(参见小图B，两张图的上面的线代表艾可瑞妥单抗)。艾可瑞妥单抗诱导CLL和HD B细胞两者的T细胞介导的细胞毒性，表明CLL B细胞易受T细胞介导的细胞毒性的影响(参见小图C，其中艾可瑞妥单抗遵循剂量响应曲线降低B细胞的存活力)。这些数据表明艾可瑞妥单抗活化来自CLL患者的CD4+和CD8+T细胞两者，并且诱导对来自CLL患者的B细胞的杀伤。
实施例2：艾可瑞妥单抗在复发性/难治性慢性淋巴细胞白血病中的1b/2期、开放标签、安全性和功效研究
进行开放标签、2部分(剂量递增和扩展)、多中心研究以评估单一药剂艾可瑞妥单抗在患有复发性和/或难治性(R/R)慢性淋巴细胞白血病(CLL)的18岁或更年长的受试者中的安全性、可耐受性、PK、药效学、免疫原性和初步功效。
艾可瑞妥单抗的正在进行的临床试验概述
艾可瑞妥单抗目前正处于用于治疗R/R B-NHL的临床试验中(ClinicalTrials.gov Identifier:NCT03625037)。初步数据表明，在R/R B-NHL患者中，该药物在高达至少48mg，包括60mg的剂量下得到耐受，具有良好的安全性概况，没有报告剂量限制性毒性。
目标
剂量递增
剂量递增部分的主要目标是鉴定艾可瑞妥单抗在R/R CLL患者中的推荐2期剂量(RP2D)和最大耐受剂量(MTD)(终点：剂量限制性毒性(DLT)的发生率)，并且评价其安全性和可耐受性(终点：不良事件(AE)、严重不良事件(SAE)、CRS、ICAN和TLS的发生率和严重性，以及剂量中断、剂量延迟和剂量强度的发生率)。
剂量递增部分的次要目标包括表征艾可瑞妥单抗的PK特性(终点：PK参数，包含清除率、分布体积和AUC0-last和AUC0-x、Cmax、Tmax、给药前值和半衰期)，评价与艾可瑞妥单抗的功效和作用机制相关的药效学标志物(终点：血液样品中的药效学标志物)，评价艾可瑞妥单抗的免疫原性(终点：艾可瑞妥单抗的抗药物抗体(ADA)的发生率)，以及评价艾可瑞妥单抗的初步抗肿瘤活性(终点：总体响应率(ORR)、响应持续时间(DOR)、响应前时间(timeto response，TTR)、无进展生存(PFS)和总体生存(OS))。
剂量递增部分的探索性目标包括评价预测对艾可瑞妥单抗的临床响应的生物标志物(终点：CD20表达，评价免疫群体、表型和功能以及血液)，并且评估外周血和骨髓中的微小残留病(MRD)状态(终点：不可检测的MRD的发生率)。
扩展
扩展部分的主要目标是评估艾可瑞妥单抗的初步功效(终点：ORR)。
扩展部分的次要目标包括评价艾可瑞妥单抗的初步功效(终点：DOR、TTR、PFS和OS)，评估外周血和骨髓中的MRD状态(终点：不可检测的MRD的发生率)，评价艾可瑞妥单抗的安全性和可耐受性(终点：终点：AE、SAE、CRS、ICAN和TLS的发生率和严重性，以及剂量中断、剂量延迟和剂量强度的发生率)，建立艾可瑞妥单抗的PK和药效学概况(终点：PK参数和药效学参数)，以及评价艾可瑞妥单抗的免疫原性(终点：针对艾可瑞妥单抗的ADA的发生率)。
扩展部分的探索性目标包括评价预测对艾可瑞妥单抗的临床响应的生物标志物(终点：CD20的表达和评价免疫群体、表型和功能，以及血液)。
研究设计综述
试验分2部分进行：剂量递增(部分1)和扩展(部分2)。整个试验设计的示意图显示在图2中。两部分均由筛查期(周期1第1天之前至多21天)、治疗期(周期1第1天直到艾可瑞妥单抗停用)、安全性随访(艾可瑞妥单抗的末剂之后60天)和生存状态随访。
在部分1和部分2两者中，在4周周期(即28天)中艾可瑞妥单抗作为皮下(SC)注射剂施用，如以下所示，直到满足一个或多个停药标准。
·周期1-3：第1、8、15和22天(QW)
·周期4-9：第1和15天(Q2W)
·周期10及之后：第1天(Q4W)
采用递升给药方法来减轻CRS的可能性：周期1第1天的引发剂量，随后是周期1第8天的中间剂量，然后周期1第15天和第22天的全剂量，以及后续周期中的全剂量。
在部分1(剂量递增)中，使用经修改的3+3设计，在患有R/R CLL的受试者中测试艾可瑞妥单抗。第一个治疗周期(即28天)期间评估DLT。在鉴定RP2D后，单一药剂艾可瑞妥单抗的初步功效与安全性、可耐受性、药代动力学(PK)、药效学和生物标志物共同在部分2(扩展)中评估。
剂量递增(部分1)
剂量递增部分实施经修改的3+3设计。以2个全剂量水平：24mg和48mg研究艾可瑞妥单抗。应用递升给药方案：0.16mg/0.8mg/24mg和0.16mg/0.8mg/48mg(引发/中间/全剂量)。可以根据新出现的数据探索额外剂量，包含中间剂量和给药方案。在每个剂量水平，最初有3名受试者接受治疗。根据表3规定的递增规则，在目前的剂量水平上可能需要3个额外的受试者，或者在不同的剂量水平上治疗3个受试者。部分1中将入组至少6个受试者。在第一个治疗周期(即28天)期间监测受试者的DLT。
表3.基于患有DLT的受试者的数量的递增规则
Figure BDA0004174131210000571
可以替换不可评估DLT的受试者，并且对于鉴定为RP2D的剂量水平，需要至少6名受试者。可以研究低于24mg(例如12mg)或高于48mg(例如60mg)的额外的全剂量水平。
在剂量水平的所有受试者完成DLT监测期(即周期1；28天)后，将评价所有可用的数据(包括但不限于安全性、PK、药效学和免疫原性数据)，以便告知下一剂量水平。
当有下项时停止剂量递增：
·在待研究的最低剂量水平，根据递增规则，决定将是不允许、逐步下降或保持相同剂量水平。
·在待研究的最高剂量水平，根据递增规则，决定将是递增或保持相同剂量水平。
·在当前的剂量水平，根据递增规则，决定将是递增但已经评价导致剂量逐步下降的更高剂量水平；或者根据递增规则，决定将是逐步下降但已经评价导致剂量递增的更低剂量水平。
MTD定义为在最多三分之一受试者中观察到的DLT的最高研究剂量水平。如果发现该剂量水平是安全和可耐受的，R/R CLL的RP2D将设定为48mg。全体数据，包括安全性(例如不良事件(AE)和安全性实验室值，以及DLT评价期结束后的观察)、药代动力学、药效学和初步功效，将指导扩展的进一步开发。
扩展(部分II)
一旦RP2D建立，将开始扩展部分。扩展部分入组约20名R/R CLL受试者，这些受试者之前已经用包括BTK抑制剂(例如依鲁替尼)的2种既往系统性抗赘生疗法线治疗或否则对BTK抑制剂不耐受。以部分1中鉴定的RP2D治疗R/R CLL受试者。扩展部分的主要功效终点是如使用iwCLL 2018标准评估的ORR(表2)。ORR是广泛接受的响应终点以评价对R/R CLL受试者的功效。次要功效终点包含DOR、TTR、PFS和OS。MRD阴性状态的发生率也作为次要功效终点进行评价。MRD评估指示在已经实施治疗期间或之后处于缓解的受试者中仍有多少癌细胞。扩展部分中的安全性终点包括AE/SAE的发生率和严重性，肿瘤溶解综合征(TLS)、免疫效应细胞相关的神经毒性综合征(ICANS)和CRS的发生率和严重性，以及治疗中断和延迟的发生率。
纳入标准
1.受试者必须至少18岁。
2.需要治疗的活动性CLL疾病，满足以下标准的至少1项：
a.表现为贫血和/或血小板减少的发展或恶化的进行性骨髓衰竭的证据
b.巨大的(即在左肋缘下≥6cm)或进行性或有症状的脾肿大
c.巨大的结节(即最长直径≥10cm)或进行性或有症状的淋巴结病
d.进行性淋巴细胞增多，在2个月期间增加≥50％，或淋巴细胞倍增时间(LDT)<6个月
e.自身免疫性并发症，包括对皮质类固醇反应差的贫血或血小板减少
f.有症状或功能性结节外受累(例如皮肤、肾脏、肺、脊柱)
g.与疾病相关的症状，其由以下中的任一项所定义：
o过去6个月内非故意的体重下降≥10％
o明显的疲乏
o发热≥38.0℃(100.5°F)持续2周或更长时间而没有感染的证据
o夜间盗汗持续≥1个月而没有感染的证据
3.接受至少2种既往系统性抗赘生疗法线后的R/R CLL，包括用BTK抑制剂(例如依鲁替尼)治疗(或对其不耐受)。复发定义为先前已实现CR或PR≥6个月的受试者中的疾病进展的证据。难治性疾病定义为治疗失败(未达到CR或PR)或在末剂疗法起6个月内的进展。
4.可测量的疾病，具有以下标准中的至少一项：
a.外周血中B淋巴细胞≥5×109/L(5,000/μL)；
b.存在可测量的淋巴结病和/或器官肿大
5.0或1的ECOG表现状态评分
6.CD20阳性的筛选流式细胞术证据
7.具有以下可接受的实验室参数：
表4
Figure BDA0004174131210000591
/>
Figure BDA0004174131210000601
8.在首剂艾可瑞妥单抗之前2周内，接受的皮质类固醇的累积剂量小于250mg的泼尼松(prednisone)当量。
9.受试者在筛选时必须具有可用的新鲜骨髓材料。
10.必须采取针对CRS/TLS的防治。
11.受试者必须愿意并能够坚持方案中规定的禁例和限制。
排除标准
1.CLL向侵袭性非霍奇金淋巴瘤的转化
2.受试者接受过CD3×CD20双特异性抗体的既往治疗
3.受试者接受过任何既往同种异体HSCT或实体器官移植
4.受试者在首剂艾可瑞妥单抗前4周内或5个半衰期内(以较短者为准)接受过抗癌生物学，包括抗CD20疗法、放射缀合或毒素缀合抗体或CAR T细胞疗法的治疗。
5.受试者在首剂艾可瑞妥单抗的2周内接受化疗或放射疗法。
6.受试者在首剂艾可瑞妥单抗前4周内或5个半衰期内(以较短者为准)接受过试验药物或侵入性试验医疗设备的治疗。
7.受试者患有自身免疫性疾病或其他需要永久或大剂量免疫抑制疗法的疾病
8.受试者患有不受控的间发性疾患，包含但不限于：
a.正在进行的或活动性感染，其在入组时或在首剂艾可瑞妥单抗之前先前2周内，需要静脉内抗生素治疗
b.有症状的充血性心力衰竭(如纽约心脏协会分类的III或IV级)，不稳定型心绞痛或心律失常
c.过去6个月内的心肌梗塞、颅内出血或中风
9.具有筛查时经Fridericia公式校正(QTcF)的基线QT间隔>480msec
10.受试者在首剂艾可瑞妥单抗之前28天内接受过活疫苗的疫苗接种
11.受试者具有没有解决到基线水平或1级或以下的来自先前抗癌疗法的毒性，脱发和周围神经病除外
12.受试者在筛选时具有已知的CNS受累
13.受试者具有不同于纳入诊断的过去或当前已知恶性肿瘤，以下除外：
a.1B期或以下的宫颈癌
b.非侵入性基底细胞或鳞状细胞皮肤癌
c.非侵入性浅表性膀胱癌
d.当前PSA水平<0.1ng/mL的前列腺癌
e.CR持续时间>2年的任何可治愈的癌症，
14.受试者具有对艾可瑞妥单抗或其赋形剂的疑似变态反应、超敏性或不耐受
15.受试者不能耐受降尿酸药物
16.受试者在筛查前3周内已有大手术(例如需要全身麻醉)，或将尚未从手术中完全恢复，或已在受试者预期参加试验期间(或在艾可瑞妥单抗的最后剂量后4周内)计划的大手术；注意：计划在局部麻醉下进行手术的受试者可以参加。
17.受试者有已知的乙型肝炎B史/血清学阳性(除非因接种疫苗或消退的自然感染的免疫，或除非因免疫球蛋白疗法的被动免疫)：
a.乙型肝炎B核心抗原抗体(抗-HBc)测试呈阳性，并且
b.乙型肝炎B表面抗原抗体(抗-HBs)测试呈阴性。
18.已知病史或尚未治愈的正在进行的丙型肝炎C感染。
19.受试者在筛查HIV的测试呈阳性。
20.受试者为妊娠或正在哺乳，或计划在入组此试验期间或在末剂艾可瑞妥单抗之后12个月内妊娠的女性。
21.受试者为计划在入组此试验期间或在末剂艾可瑞妥单抗之后12个月内为人父的男性。
22.受试者具有参与不符合受试者最大利益(例如，损害福祉)或可能阻止、限制或混淆方案指定的评估的任何状况。
前驱用药和CRS防治
进行四天的皮质类固醇、抗组胺药和退热药的施用以减少/预防来自周期1中每剂艾可瑞妥单抗的潜在CRS的症状的严重性。对于周期2及以后的艾可瑞妥单抗的施用，用皮质类固醇进行的CRS防治是任选的。可以以推荐剂量或当量静脉内或口服途径施用皮质类固醇。
表5.艾可瑞妥单抗施用之前或之后的防治性皮质类固醇施用
Figure BDA0004174131210000621
/>
Figure BDA0004174131210000631
*在施用艾可瑞妥单抗之前30分钟-2小时
表6：皮质类固醇剂量当量-转换表
Figure BDA0004174131210000632
/>
Figure BDA0004174131210000641
细胞因子释放综合征的支持性护理
CRS根据对CRS的ASTCT分级进行分级(表7和8)，并且对于CRS的治疗，受试者应接受支持性护理。支持性护理可以包括但不限于，
-盐水输注
-系统性糖皮质激素、抗组胺药、抗发热剂(antipyrexia)
-血压支持(血管加压素(vasopressin)、血管加压药(vasopressor))
-低流量和高流量氧和正压通气的支持
-针对IL-6R的单克隆抗体，例如托珠单抗的IV施用
-如果不响应重复的托珠单抗，则是针对IL-6的单克隆抗体，例如IV司妥昔单抗。
表7：细胞因子释放综合征的分级和管理
根据美国移植和细胞疗法学会(ASTCT)，先前是美国血液和骨髓移植学会(ASBMT)，CRS的统一定义和分级标准呈现如下。
细胞因子释放综合征的分级
Figure BDA0004174131210000642
缩略语：BiPAP，双水平气道正压；CPAP，持续气道正压；CRS，细胞因子释放综合征；IV，静脉内。
注：与CRS相关的器官毒性或全身症状可以根据CTCAE进行分级，但它们不影响CRS的分级。
1.发热定义为不能归因于任何其他原因的体温≥38.0℃，其伴有或不伴有全身症状(例如，肌痛、关节痛、乏力)。在接受退热药、抗细胞因子疗法和/或皮质类固醇的CRS受试者中，不再需要发热来对后续CRS严重性进行分级。在这种情况下，CRS的分级是由低血压和/或缺氧驱动。
2.CRS等级由更严重的事件确定：不归因于任何其他原因的低血压或缺氧。例如，具有39.5℃的温度、需要1种血管加压药的低血压、需要低流量鼻套管的缺氧的受试者被分类为3级CRS。收缩压和平均动脉压两者用于测量血压是可接受的。不需要具体的限制，但低血压应考虑到年龄和受试者的个体基线根据具体情况确定，即低于个体在给定环境中预期的正常值的血压。
3.出于单独的未闭气道的可能神经系统损害或规程，对没有缺氧的受试者进行插管不是根据定义4级CRS。
来源：改编自Lee等人,Biol Blood Marrow Transplant 2019；25:625-638
表8：细胞因子释放综合征的分级和管理
Figure BDA0004174131210000651
Figure BDA0004174131210000661
肿瘤溶解综合征的预防和管理
对于肿瘤溶解综合征的防治性治疗，受试者施用艾可瑞妥单抗之前接受降尿酸剂，在首剂艾可瑞妥单抗之前至少72小时给予别嘌呤醇，并且在开始艾可瑞妥单抗之前启动拉布立酶。在首剂之前应增加口服水化并且在给药期间维持。在随后的剂量之前对受试者的TLS风险类别进行重新评估。
研究评估
骨髓评估
在筛查时(即周期1第1天之前21天内)和完全响应(CR)时或当有临床指征时获得新鲜骨髓抽吸物。在筛查时和CR或结节性部分响应(PR)(nPR)时或当有临床指征时获得新鲜骨髓生检。骨髓评价包括形态学检查以及流式细胞术或免疫组织化学。获得具有抽吸物的骨髓生检，(a)以根据iwCLL指南(Hallek等，Lancet 2018；391:1524-37)确认由体格检查结果、实验室评和放射线照相术评价支持的CR或nPR，和(b)如果仅在1个参数中显示进展，来确认细胞病(cytopenic)进展(即中性粒细胞减少、贫血和/或血小板减少，并且与自身免疫性和治疗相关的血球减少区分)。
放射线照相术评估
颈部、胸部、腹部和骨盆的成像扫描是在筛查时(即在首剂艾可瑞妥单抗前3周内)和随后的响应评估中进行。用具有造影剂的CT扫描是推荐的成像方式。只有当用具有造影剂的CT是医学禁忌或CT扫描频率超过当地标准时，才可以使用MRI。MRI研究不能替代所需的颈部、胸部、腹部和骨盆CT扫描。必要时可进行额外的成像评估以支持对受试者的功效评价。
骨髓评估
在筛查时(即周期1第1天之前21天内)和CR时或当有临床指征时获得新鲜骨髓抽吸物。在筛查时和CR或结节性PR(nPR)时或当有临床指征时获得新鲜骨髓生检。骨髓评价包括形态学检查以及流式细胞术或免疫组织化学。获得具有抽吸物的骨髓生检，(a)以根据iwCLL指南(Hallek等，Lancet2018；391:1524-37)确认由体格检查结果、实验室评和放射线照相术评价支持的CR或nPR，和(b)如果仅在1个参数中显示进展，来确认细胞病(cytopenic)进展(即中性粒细胞减少、贫血和/或血小板减少，并且与自身免疫性和治疗相关的血球减少区分)。
微小残留病(MRD)评估
通过流式细胞术和下一代测序评估血液中的MRD。治疗开始后，在固定时间点和CR时请求血样。作为探索性分析，当受试者达到CR时，为确认CR而收集的部分抽吸物被用来评估MRD。
疾病响应和疾病进展评估
进行根据影像学评估的肿瘤响应以通知连续治疗的决定。响应评估是根据诊断、治疗适应症、响应评估和CLL支持性管理的修订iwCLL指南完成的，如表2中所述。终点定义如下：
总体响应率(ORR)，定义为在开始后续疗法之前达到PR或CR响应的受试者的比例。
响应前时间(TTR)，在响应者中定义为从首剂艾可瑞妥单抗到PR或CR的初始记录之间的时间。
响应持续时间(DOR)，在响应者中定义为从PR或CR的最初记录到疾病进展或死亡(以较早发生者为准)日期之间的时间。
无进展生存(PFS)，定义为从艾可瑞妥单抗的首次给药日期到疾病进展或死亡(以较早发生者为准)日期的时间。
总体生存(OS)，定义为从艾可瑞妥单抗的首次给药日期到死亡日期的时间。
MRD阴性率，定义为在开始后续疗法之前，根据特定的阈值，至少有一个检测不到的MRD结果的受试者比例。
临床安全性评估
安全性将通过测量不良事件、实验室测试结果、ECG、生命体征测量、体格检查结果和ECOG表现状态来评估。还将评估免疫效应细胞相关的神经毒性综合征(例如，如Lee等人,Biol Blood Marrow Transplant 2019；25:625-638等所描述)、全身症状(B症状)、肿瘤闪烁(flare)反应和生存。
免疫表型分析
用流式细胞术确定新鲜全血中的绝对B细胞和T细胞计数，以监测与艾可瑞妥单抗治疗有关的变化。使用流式细胞术和标志物评估T细胞活化和耗竭表型，以评价此类标志物与药物靶点接合、治疗功效和/或艾可瑞妥单抗的安全性的关联。使用流式细胞术确定在全血中循环免疫细胞的其他免疫表型(例如，可抑制T细胞功能的调控T细胞的水平)，以评估此类标志物与T细胞活化/耗竭表型、受试者响应和艾可瑞妥单抗的MOA的关联。
细胞因子和内皮细胞活化标志物分析
由于初始艾可瑞妥单抗施用后的T细胞活化可以导致细胞因子释放，引起CRS，密切监测细胞因子水平。细胞因子(诸如IL-2、IL15、IL-6、IL-8、IL-10、IFNγ和/或TNFα)的水平使用基于阵列的配体结合测定法在血浆样品中测量。也可以测定其他细胞因子，以评价此类标志物与治疗突发AE及与艾可瑞妥单抗的结局的关联。
初步结果：
第一位患者于2020年11月30日入组。截至2021年7月1日，7名R/RCLL患者接受2个全剂量水平下皮下施用的艾可瑞妥单抗：24(n＝3)和48mg(n＝4)。6名患者完成了剂量限制性毒性(DLT)评价期，并且5名患者进行响应评估。患者已接受中位数为4的既往疗法线(范围为2-5)。7名患者中有6名具有del(17p)、TP53突变或两者的差风险特征。7名患者中有3名患者有大面积的疾病。24或48mg时没有发生DLT。最常见的治疗突发AE(>30％)是细胞因子释放综合征(CRS)(100％)、疲乏(71％)、注射部位反应(43％)，和恶心(43％)。所有患者在第一个周期经历了CRS，但没有高于2级的CRS事件。没有观察到免疫效应细胞相关的神经毒性综合征(ICANS)的病例。尽管存在循环肿瘤细胞，但没有观察到肿瘤溶解综合征(TLS)。在两个剂量水平上观察到抗白血病活性，5名患者中有3名部分响应。
截至2021年9月8日，共有11名R/R CLL患者接受了24mg(N＝3)和48mg(N＝8)的艾可瑞妥单抗。
艾可瑞妥单抗在24mg和48mg两者处的耐受性良好，最常见的治疗突发不良事件是CRS、疲乏和注射部位反应。没有出现免疫效应细胞相关的神经毒性综合征(ICANS)。已在这些具有高风险细胞遗传学的重度预处理患者中观察到艾可瑞妥单抗的初步活性。在6名可评估响应的受试者中，24mg时有1名未确认的部分响应(nPR)，并且48mg时有2名部分响应(PR)。这些数据是初步的、未经验证的和未清洁的数据，并且响应数据没有通过位置完全输入。
结论：
这些初步数据表明，高达48mg剂量水平的艾可瑞妥单抗在R/R CLL患者中耐受良好，并且在高风险疾病患者中具有令人鼓舞的临床活性。
表9：序列列表
Figure BDA0004174131210000691
/>
Figure BDA0004174131210000701
/>
Figure BDA0004174131210000711
粗体和下划线的是FE；A；L和R，分别对应于位置234和235；265；405和409，所述位置是根据EU编号。在可变区中，按照IMGT的定义的所述CDR区用下划线注释。
序列表
<110> 健玛保
<120> 用于治疗慢性淋巴细胞白血病的针对CD3和CD20的双特异性抗体
<130> P/0162-WO-PCT
<160> 29
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR序列
<400> 1
Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr Ala
1 5
<210> 2
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR序列
<400> 2
Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr
1 5 10
<210> 3
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR序列
<400> 3
Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr
1 5 10 15
<210> 4
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR序列
<400> 4
Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr
1 5
<210> 5
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR序列
<400> 5
Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val
1 5
<210> 6
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区序列l
<400> 6
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Met Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 7
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区序列
<400> 7
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Phe Ser Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Phe Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Asp Asp Glu Ser Ile Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 8
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR序列
<400> 8
Gly Phe Thr Phe His Asp Tyr Ala
1 5
<210> 9
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR序列
<400> 9
Ile Ser Trp Asn Ser Gly Thr Ile
1 5
<210> 10
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR序列
<400> 10
Ala Lys Asp Ile Gln Tyr Gly Asn Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 11
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR序列
<400> 11
Gln Ser Val Ser Ser Tyr
1 5
<210> 12
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR序列
<400> 12
Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Ile Thr
1 5
<210> 13
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区序列
<400> 13
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Asp Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe His Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Ser Trp Asn Ser Gly Thr Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Ile Gln Tyr Gly Asn Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 14
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区序列
<400> 14
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 15
<211> 329
<212> PRT
<213> 智人
<400> 15
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 16
<211> 329
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链恒定区
<400> 16
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Ala Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 17
<211> 329
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链恒定区
<400> 17
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Leu
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 18
<211> 329
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链恒定区
<400> 18
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 19
<211> 329
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链恒定区
<400> 19
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Ala Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Leu
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 20
<211> 329
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链恒定区
<400> 20
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Ala Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 21
<211> 106
<212> PRT
<213> 智人
<400> 21
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
1 5 10 15
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
100 105
<210> 22
<211> 106
<212> PRT
<213> 智人
<400> 22
Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
1 5 10 15
Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp
20 25 30
Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro
35 40 45
Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn
50 55 60
Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys
65 70 75 80
Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val
85 90 95
Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
100 105
<210> 23
<211> 107
<212> PRT
<213> 智人
<400> 23
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 24
<211> 454
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体重链
<400> 24
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Met Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
130 135 140
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
165 170 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
180 185 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
195 200 205
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu
210 215 220
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
225 230 235 240
Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
245 250 255
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
260 265 270
Ala Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
275 280 285
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
290 295 300
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
305 310 315 320
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
325 330 335
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
340 345 350
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
355 360 365
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
370 375 380
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
385 390 395 400
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Leu Leu Tyr Ser
405 410 415
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
420 425 430
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
435 440 445
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
450
<210> 25
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体轻链
<400> 25
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Phe Ser Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Phe Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Asp Asp Glu Ser Ile Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro
100 105 110
Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu
115 120 125
Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro
130 135 140
Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala
145 150 155 160
Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala
165 170 175
Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg
180 185 190
Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr
195 200 205
Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 26
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体重链
<400> 26
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Asp Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe His Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Ser Trp Asn Ser Gly Thr Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Ile Gln Tyr Gly Asn Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly
450
<210> 27
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体轻链
<400> 27
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 28
<211> 207
<212> PRT
<213> 智人
<400> 28
Met Gln Ser Gly Thr His Trp Arg Val Leu Gly Leu Cys Leu Leu Ser
1 5 10 15
Val Gly Val Trp Gly Gln Asp Gly Asn Glu Glu Met Gly Gly Ile Thr
20 25 30
Gln Thr Pro Tyr Lys Val Ser Ile Ser Gly Thr Thr Val Ile Leu Thr
35 40 45
Cys Pro Gln Tyr Pro Gly Ser Glu Ile Leu Trp Gln His Asn Asp Lys
50 55 60
Asn Ile Gly Gly Asp Glu Asp Asp Lys Asn Ile Gly Ser Asp Glu Asp
65 70 75 80
His Leu Ser Leu Lys Glu Phe Ser Glu Leu Glu Gln Ser Gly Tyr Tyr
85 90 95
Val Cys Tyr Pro Arg Gly Ser Lys Pro Glu Asp Ala Asn Phe Tyr Leu
100 105 110
Tyr Leu Arg Ala Arg Val Cys Glu Asn Cys Met Glu Met Asp Val Met
115 120 125
Ser Val Ala Thr Ile Val Ile Val Asp Ile Cys Ile Thr Gly Gly Leu
130 135 140
Leu Leu Leu Val Tyr Tyr Trp Ser Lys Asn Arg Lys Ala Lys Ala Lys
145 150 155 160
Pro Val Thr Arg Gly Ala Gly Ala Gly Gly Arg Gln Arg Gly Gln Asn
165 170 175
Lys Glu Arg Pro Pro Pro Val Pro Asn Pro Asp Tyr Glu Pro Ile Arg
180 185 190
Lys Gly Gln Arg Asp Leu Tyr Ser Gly Leu Asn Gln Arg Arg Ile
195 200 205
<210> 29
<211> 297
<212> PRT
<213> 智人
<400> 29
Met Thr Thr Pro Arg Asn Ser Val Asn Gly Thr Phe Pro Ala Glu Pro
1 5 10 15
Met Lys Gly Pro Ile Ala Met Gln Ser Gly Pro Lys Pro Leu Phe Arg
20 25 30
Arg Met Ser Ser Leu Val Gly Pro Thr Gln Ser Phe Phe Met Arg Glu
35 40 45
Ser Lys Thr Leu Gly Ala Val Gln Ile Met Asn Gly Leu Phe His Ile
50 55 60
Ala Leu Gly Gly Leu Leu Met Ile Pro Ala Gly Ile Tyr Ala Pro Ile
65 70 75 80
Cys Val Thr Val Trp Tyr Pro Leu Trp Gly Gly Ile Met Tyr Ile Ile
85 90 95
Ser Gly Ser Leu Leu Ala Ala Thr Glu Lys Asn Ser Arg Lys Cys Leu
100 105 110
Val Lys Gly Lys Met Ile Met Asn Ser Leu Ser Leu Phe Ala Ala Ile
115 120 125
Ser Gly Met Ile Leu Ser Ile Met Asp Ile Leu Asn Ile Lys Ile Ser
130 135 140
His Phe Leu Lys Met Glu Ser Leu Asn Phe Ile Arg Ala His Thr Pro
145 150 155 160
Tyr Ile Asn Ile Tyr Asn Cys Glu Pro Ala Asn Pro Ser Glu Lys Asn
165 170 175
Ser Pro Ser Thr Gln Tyr Cys Tyr Ser Ile Gln Ser Leu Phe Leu Gly
180 185 190
Ile Leu Ser Val Met Leu Ile Phe Ala Phe Phe Gln Glu Leu Val Ile
195 200 205
Ala Gly Ile Val Glu Asn Glu Trp Lys Arg Thr Cys Ser Arg Pro Lys
210 215 220
Ser Asn Ile Val Leu Leu Ser Ala Glu Glu Lys Lys Glu Gln Thr Ile
225 230 235 240
Glu Ile Lys Glu Glu Val Val Gly Leu Thr Glu Thr Ser Ser Gln Pro
245 250 255
Lys Asn Glu Glu Asp Ile Glu Ile Ile Pro Ile Gln Glu Glu Glu Glu
260 265 270
Glu Glu Thr Glu Thr Asn Phe Pro Glu Pro Pro Gln Asp Gln Glu Ser
275 280 285
Ser Pro Ile Glu Asn Asp Ser Ser Pro
290 295

Claims (42)

1.在人受试者中治疗慢性淋巴细胞白血病(CLL)的方法，所述方法包括向所述受试者施用双特异性抗体，所述双特异性抗体包含：
(i)包含第一抗原结合区的第一结合臂，所述第一抗原结合区与人CD3ε(epsilon)结合并且包含可变重链(VH)区和可变轻链(VL)区，其中所述VH区包含SEQ ID NO:6的VH区序列中的CDR1、CDR2和CDR3序列，并且所述VL区包含SEQ ID NO:7的VL区序列中的CDR1、CDR2和CDR3序列；和
(ii)包含第二抗原结合区的第二结合臂，所述第二抗原结合区与人CD20结合并且包含VH区和VL区，其中所述VH区包含SEQ ID NO:13的VH区序列中的CDR1、CDR2和CDR3序列，并且所述VL区包含SEQ ID NO:14的VL区序列中的CDR1、CDR2和CDR3序列；
其中在28天周期中以12-60mg范围的剂量施用所述双特异性抗体。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述双特异性抗体以24mg的剂量施用。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述双特异性抗体以48mg的剂量施用。
4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体每周施用一次(每周施用)。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述每周施用进行2.5个28天周期。
6.根据权利要求4或5所述的方法，其中在所述每周施用之后，所述双特异性抗体每两周施用一次(每两周施用)。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述每两周施用进行6个28天周期。
8.根据权利要求6或7所述的方法，其中在所述每两周施用之后，所述双特异性抗体每四周施用一次。
9.根据权利要求4-8任一项所述的方法，其中在施用12-60mg的首次每周剂量之前，在28天周期的周期1中施用所述双特异性抗体的引发剂量。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述引发剂量在施用所述12-60mg的首次每周剂量之前两周施用。
11.根据权利要求9或10所述的方法，其中所述引发剂量在0.05-0.35mg的范围内。
12.根据权利要求9-11任一项所述的方法，其中所述引发剂量是0.16mg或约0.16mg。
13.根据权利要求9-12任一项所述的方法，其中在施用所述引发剂量之后且施用所述12-60mg的首次每周剂量之前，施用所述双特异性抗体的中间剂量。
14.根据权利要求13所述的方法，其中在周期1的第1天施用所述引发剂量并且在第8天施用所述中间剂量，之后是在第15和22天的所述12-60mg的首次每周剂量。
15.根据权利要求13或14所述的方法，其中所述中间剂量在0.6-1.2mg的范围内。
16.根据权利要求13-15任一项所述的方法，其中所述中间剂量是0.8mg或约0.8mg。
17.根据权利要求13-16任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体以28天周期施用，其中：
a)在周期1中，在第1天施用引发剂量，在第8天施用中间剂量，并且在第15和22天施用12-60mg的全剂量；
b)在周期2-3中，在第1、8、15和22天施用12-60mg的全剂量；
c)在周期4-9中，在第1和15天施用12-60mg的全剂量；和
d)在周期10及随后的周期中，在第1天施用12-60mg的全剂量。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述全剂量是24mg或约24mg。
19.根据权利要求17所述的方法，其中所述全剂量是48mg或约48mg。
20.根据权利要求1-19任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体在皮下施用。
21.根据权利要求1-20任一项所述的方法，其中所述CLL是复发性和/或难治性CLL。
22.根据权利要求1-21任一项所述的方法，其中所述受试者对BTK抑制剂不耐受。
23.根据权利要求1-22任一项所述的方法，其中所述受试者已经接受至少两种既往抗赘生疗法线。
24.根据权利要求23所述的方法，其中所述至少两种既往抗赘生疗法的至少一种包括用BTK抑制剂治疗。
25.根据权利要求1-24任一项所述的方法，其中所述CLL对BTK抑制剂是难治性的。
26.根据权利要求1-25任一项所述的方法，其中所述CLL在用BTK抑制剂治疗期间复发。
27.根据权利要求21-26任一项所述的方法，其中所述受试者在接受所述两种既往抗赘生疗法后患有难治性和/或复发性CLL。
28.根据权利要求1-27任一项所述的方法，其中：
(i)所述第一抗原结合区包含分别包含SEQ ID NO:1、2和3中所列出的氨基酸序列的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3，以及分别包含SEQ ID NO:4、序列GTN和SEQ ID NO:5中列出的氨基酸序列的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3；和
(ii)所述第二抗原结合区包含分别包含SEQ ID NO:8、9和10中列出的氨基酸序列的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3，以及分别包含SEQ ID NO:11、序列DAS和SEQ ID NO:12中列出的氨基酸序列的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3。
29.根据权利要求1-28任一项所述的方法，其中：
(i)所述第一抗原结合区包含VH区和VL区，所述VH区包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列，并且所述VL区包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；和
(ii)所述第二抗原结合区包含VH区和VL区，所述VH区包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列，并且所述VL区包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列。
30.根据权利要求1-29任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体的所述第一结合臂衍生自人源化抗体，优选衍生自全长IgG1,λ(lambda)抗体。
31.根据权利要求30所述的方法，其中所述双特异性抗体的所述第一结合臂包含λ轻链恒定区，所述λ轻链恒定区包含SEQ ID NO:22中列出的氨基酸序列。
32.根据权利要求1-31任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体的所述第二结合臂衍生自人抗体，优选衍生自全长IgG,1κ(kappa)抗体。
33.根据权利要求32所述的方法，其中所述第二结合臂包含κ轻链恒定区，所述κ轻链恒定区包含SEQ ID NO:23中列出的氨基酸序列。
34.根据权利要求1-33中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体是具有人IgG1恒定区的全长抗体。
35.根据权利要求1-34任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体包含惰性Fc区。
36.根据权利要求1-35任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体包含第一重链和第二重链，其中在所述第一和第二重链两者中，对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链恒定区中位置L234、L235和D265的位置处的氨基酸分别是F、E和A。
37.根据权利要求1-36任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体包含第一重链和第二重链，其中在所述第一重链中，对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链恒定区中F405的位置处的氨基酸是L，并且其中在所述第二重链中，对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链恒定区中K409的位置处的氨基酸是R，或反之亦然。
38.根据权利要求1-37任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体包含第一重链和第二重链，其中
(i)在所述第一和第二重链两者中，对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链恒定区中位置L234、L235和D265的位置处的氨基酸分别是F、E和A，和
(ii)在所述第一重链中，对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链恒定区中F405的位置处的氨基酸是L，并且其中在所述第二重链中，对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链恒定区中K409的位置处的氨基酸是R，或反之亦然。
39.根据权利要求38所述的方法，其中所述双特异性抗体包含重链恒定区，所述重链恒定区包含SEQ ID NO:19和20的氨基酸序列。
40.根据权利要求1-39任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体包含分别包含SEQID NO:24和25中列出的氨基酸序列的重链和轻链，以及分别包含SEQ ID NO:26和27中列出的氨基酸序列的重链和轻链。
41.根据权利要求1-40任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体包含分别由SEQ IDNO:24和25的氨基酸序列组成的重链和轻链，以及分别由SEQ ID NO:26和27的氨基酸序列组成的重链和轻链。
42.根据权利要求1-41任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体是艾可瑞妥单抗或其生物类似物。
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