CN116286550B - 一株多功能普沙根瘤菌、含有其的微生物菌剂及应用 - Google Patents

一株多功能普沙根瘤菌、含有其的微生物菌剂及应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一株多功能普沙根瘤菌、含有其的微生物菌剂及应用，涉及微生物及其应用技术领域。本发明普沙根瘤菌为普沙根瘤菌（Rhizobium pusense）TYQ1，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.26530。本发明的普沙根瘤菌菌株是从根结线虫发病的黄瓜根际土壤中分离得到，该菌株的发酵上清液对根结线虫有较强的触杀能力并且具有耐盐、溶解难溶性无机磷和分泌生长素的功能，是一株性能优异的多功能菌株。该菌株不仅能够显著促进黄瓜幼苗的生长，还滞缓了根结线虫在黄瓜根系内的发育进程，显著降低了黄瓜根系的单位根结数和卵块数，有利于根结线虫的早期防治。

Description

一株多功能普沙根瘤菌、含有其的微生物菌剂及应用
技术领域
本发明涉及微生物及其应用技术领域，尤其是涉及一株多功能普沙根瘤菌、含有其的微生物菌剂及应用。
背景技术
植物根际有益微生物（PGPR）指的是能够定殖在植物体表或体内，对植物体没有伤害的同时，还能够促进植物生长或者帮助植物体抵御病原的一类微生物。目前已有研究指出，植物根际有益微生物能够通过产生植物激素，溶解土壤中的难溶矿质元素，提高养分利用率以及降解土壤中的一些污染元素而促进植物的生长；也可以通过直接抑制病原物活性或诱导植株系统抗性抑制植物病害的发生。
根结线虫（Meloidogyne）是一种高度专化型的杂食性植物病原线虫。随着近十年来农业种植业结构的深化调整，设施蔬菜栽培得到了迅速发展，同时也导致根结线虫的发生面积逐渐增大，危害也越来越严重。黄瓜作为第一大设施蔬菜作物，同时也是对南方根结线虫最为敏感的蔬菜作物。当黄瓜植株受到根结线虫侵害后，受害较轻时地上部分症状不明显，受害较重时植株一般出现发育停滞、矮化，叶片变薄或变黄等症状，最为严重时可导致整个植株死亡。
根结线虫的防治主要采用化学农药法，不仅会降低蔬菜品质，而且还会破坏土壤的生态平衡，造成环境污染。将植物根际有益微生物应用到植物病害的防治上具有很多的优点，相对传统化学农药而言，生防微生物广谱性更高，并且对环境污染较小。目前关于黄瓜根际有益微生物在根结线虫防治方面的介绍较少，因此，筛选出高效的防治根结线虫的有益菌株成为国内外研究的热点。
鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的目的在于提供一株多功能普沙根瘤菌、含有其的微生物菌剂及应用。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
在一个方面，本发明提供了一株多功能普沙根瘤菌，所述普沙根瘤菌为普沙根瘤菌（Rhizobium pusense）TYQ1，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No. 26530。
本发明从发生根结线虫病的黄瓜的根际土壤中分离筛选到一株新的植物根际有益菌，该菌株的单菌落呈圆形，边缘光滑，乳白色，中央微凸起，该菌体呈棒状，革兰氏染色为阴性。通过16S rDNA分子鉴定该菌株为普沙根瘤菌（Rhizobium pusense）TYQ1。本发明的普沙根瘤菌TYQ1菌株是一株综合性能优异的菌株，除具有分泌生长素、促进植物生长的功能之外，还具有溶磷和耐盐的功能，并且该菌株的发酵上清液对根结线虫有较强的触杀能力，可用于防治根结线虫，尤其是有利于黄瓜根结线虫的早期防治。
在另一个方面，本发明提供了微生物菌剂，所述微生物菌剂包含前述的普沙根瘤菌（Rhizobium pusense）TYQ1或其发酵产物。
在一个实施方案中，所述微生物菌剂中，所述普沙根瘤菌（Rhizobium pusense）TYQ1的总活菌数为0.5×105-1×109 cfu·mL-1。
在一个实施方案中，所述微生物菌剂的制备方法包括：将所述普沙根瘤菌（Rhizobium pusense）TYQ1接种于液体培养基，将菌液培养至OD600为0.6-0.8，然后将菌液离心弃上清液，用等体积的缓冲液悬浮。
在一个可选的实施方案中，将所述普沙根瘤菌（Rhizobium pusense）TYQ1接种至LB液体培养基，在180 rpm/min和28℃条件下将菌液培养至OD600为0.8，然后将菌液在8000rmp/min转速下离心5分钟，弃上清液，用等体积的10 mM MgSO4缓冲液悬浮后即得菌剂。与常规的缓冲液如无菌水、低浓度氯化钠缓冲液相比，采用MgSO4缓冲液的优势在于该缓冲液中所含的镁离子有助于细菌的生长和维持细菌的活性。
在另一个方面，本发明提供了前述普沙根瘤菌（Rhizobium pusense）
TYQ1或含有其的微生物菌剂在以下至少一个方面中的应用：
（A）溶磷；
（B）分泌生长素；
（C）触杀根结线虫；
（D）抗盐；
（E）促进植物生长。
在一个实施方案中，所述溶磷包括溶解难溶性无机磷。
在一个实施方案中，所述根结线虫为南方根结线虫。
在一个实施方案中，所述促进植物生长包括促进黄瓜幼苗生长。
在另一个方面，本发明提供了一种提高土壤磷利用率并防治黄瓜根结线虫的方法，包括将普沙根瘤菌（Rhizobium pusense）TYQ1的菌粉、发酵上清液、菌悬液、孢子悬液和/或含有其的菌剂与黄瓜种子进行拌种，或作为肥料施用于黄瓜植株生长区域。
在一个实施方案中，当黄瓜幼苗长至第一片真叶刚刚露出时，将含有所述普沙根瘤菌（Rhizobium pusense）TYQ1的菌剂浇灌在健康或感病植株根围土壤。
保藏信息：本发明提供的普沙根瘤菌（Rhizobium pusense），菌株名为TYQ1，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏时间为：2023年2月8日，保藏编号CGMCC No.26530。经保藏中心于2023年2月8日检测为存活菌株。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
（1）本发明的普沙根瘤菌（Rhizobium pusense）TYQ1是发明人通过大量筛选工作，首次于感病黄瓜植株中筛选得到的，该菌株具有良好的耐盐、溶磷性，菌株TYQ1可以溶解无机磷培养基中的难溶性磷酸盐，具有提高植物对磷元素吸收效率的潜力，同时其耐盐性可有助于盐碱环境下植物的防病促生。
（2）本发明的普沙根瘤菌（Rhizobium pusense）TYQ1可以分泌IAA，在色氨酸存在下其分泌IAA的浓度为5.329 µg/mL。该菌株有促进黄瓜幼苗生长的作用，当接种于健康或感病黄瓜植株根围土壤时，能够显著增大黄瓜植株的株高和茎粗，显著促进了黄瓜幼苗的干物质积累，并促进黄瓜幼苗的根系生长。
（3）本发明的普沙根瘤菌（Rhizobium pusense）TYQ1的菌株发酵液上清对离体的根结线虫处理24h后，根结线虫的致死率达到98.4%，将菌株发酵上清液稀释6倍，对根结线虫的致死性仍能达到95%以上。当将TYQ1菌剂接种在根结线虫感病黄瓜植株根围土壤时，滞缓了根结线虫在黄瓜根系内的发育进程，黄瓜根系的单位根结数降低了53.24%，卵块数降低了72.74%，有利于根结线虫的早期防治，对黄瓜植株栽培和根结线虫防治具有较大意义。
（4）本发明菌株不仅具有耐盐、溶磷性并且同时能够分泌生长素以及防治根结线虫，综合性能突出，可用于稳定防治植物根结线虫病害且兼具抗逆性，有利于提高植物磷利用率以及促进植物生长，本发明为黄瓜植物栽培和防病提供了一种新的有益的微生物资源。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明的普沙根瘤菌TYQ1在LB固体培养基上的菌落形态；
图2为根据本发明的普沙根瘤菌TYQ1的16S rDNA序列构建的系统发育树；
图3为本发明的普沙根瘤菌TYQ1在无机磷培养基上形成的溶磷圈；
图4为本发明的普沙根瘤菌TYQ1菌液上清液中可溶性磷含量随培养天数的变化；
图5为本发明的普沙根瘤菌TYQ1发酵上清液原液对根结线虫的体外触杀作用，其中左图为对照，右图为普沙根瘤菌TYQ1发酵上清液；
图6为本发明的普沙根瘤菌TYQ1接种后黄瓜幼苗的表型；
图7为本发明的普沙根瘤菌TYQ1对黄瓜幼苗形态指标的影响，其中，A为普沙根瘤菌TYQ1对黄瓜幼苗株高的影响，B为普沙根瘤菌TYQ1对黄瓜幼苗茎粗的影响；
图8为本发明的普沙根瘤菌TYQ1对黄瓜幼苗全株生物量的影响，其中A为普沙根瘤菌TYQ1对黄瓜幼苗全株鲜重的影响，B为普沙根瘤菌TYQ1对黄瓜幼苗全株干重的影响；
图9为本发明的普沙根瘤菌TYQ1对黄瓜幼苗的促根效果；
图10为本发明的普沙根瘤菌TYQ1对黄瓜根系根结的防治效果；
图11为本发明的普沙根瘤菌TYQ1对黄瓜单位根结数的影响；
图12为本发明的普沙根瘤菌对黄瓜单位卵块数的影响；
图13为本发明的普沙根瘤菌TYQ1在盐胁迫下对黄瓜幼苗叶绿素含量的影响；
图14为本发明的普沙根瘤菌TYQ1在盐胁迫下对黄瓜育苗全株鲜重的影响。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。以下实施例用以说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例中未注明具体条件者，按照本领域常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂、材料或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
本发明提供了一株全新的普沙根瘤菌（Rhizobium pusense）菌株TYQ1，该菌株的保藏号为CGMCC No. 26530。本发明的普沙根瘤菌TYQ1为革兰氏阴性菌，具有耐盐性、溶解难溶性无机磷和分泌生长素的能力，同时其发酵液上清对根结线虫有较强的触杀能力。现有技术中，筛选出的菌株通常性能比较单一，例如仅具有促进植物生长的作用。当菌株所具有的功能越多时，其所应用的范围也就越大，并且应用这种集合多种功能的菌株可以同时发挥其多方面的功效，避免了不同单一功能菌株混合使用导致的菌株之间拮抗或者互相影响的问题。本发明的普沙根瘤菌为一株集合多种优异性能的菌株，成本低，效果好，应用场景丰富，商业价值高。
本发明涵盖上述保藏编号的普沙根瘤菌（Rhizobium pusense）TYQ1菌株以及所述菌株的突变菌株。所述“菌株的突变菌株”是指与本发明的SEQ ID No.1所示的TYQ1菌株16SrDNA同源性≥95%，优选≥99%的同源性的菌株。并且，所述“菌株的突变菌株”具有溶磷、耐盐、分泌生长素和触杀根结线虫的性能。
本发明还提供了含有普沙根瘤菌TYQ1或其发酵产物的微生物菌剂。
在本发明中，所述微生物菌剂可以为液体菌剂或固体菌剂，优选为液体菌剂。进一步地，所述微生物菌剂所含普沙根瘤菌TYQ1的总活菌数为0.5×105-1×109 cfu·mL-1或0.5×105-1×109 cfu·g-1。
在实际应用中，所述微生物菌剂可以制成液体、固体粉末等形式，例如乳液或悬浮剂或颗粒剂。也可以另外包含常见的菌剂载体，例如淀粉、膨润土、碳酸钙、沸石植物油和水等。
本发明涵盖含有普沙根瘤菌TYQ1或其发酵产物的组合物，这些组合物可以是包括但不限于微生物有机肥、植物促生剂等。
本发明还提供了普沙根瘤菌TYQ1或含有其的微生物菌剂的应用，鉴于本发明的普沙根瘤菌TYQ1具有耐盐、溶磷（或解磷）、分泌生长素以及促进植物生长的功能，其发酵上清液对根结线虫具有触杀作用。因此，本发明的普沙根瘤菌TYQ1或含有其的微生物菌剂可以应用于不包括（A）溶磷；（B）分泌生长素；（C）防治根结线虫；（D）抗盐；（E）促进植物生长中的一个或多个方面。
本发明的普沙根瘤菌TYQ1具有溶磷能力，其能够溶解难溶性无机磷，可用于溶解培养基或土壤中的难溶性磷酸盐，释放土壤矿物化磷元素，提高植物对磷元素的吸收效率；其中，难溶性磷酸盐包括但不限于磷酸一钙、磷酸二钙、磷酸三钙或氧基磷灰石等。
本发明的普沙根瘤菌TYQ1具有分泌生长素（IAA）的能力，在色氨酸存在下，普沙根瘤菌分泌生长素的浓度为5.329 µg/mL。
本发明的普沙根瘤菌TYQ1的发酵上清液对根结线虫有较强的触杀能力，可用于防治植物根结线虫。当采用本发明TYQ1菌株的发酵上清液对离体的根结线虫处理24h后，根结线虫的致死率达到98.4%，将菌株发酵液上清稀释6倍，对根结线虫的致死性仍能达到95%以上。由此可见，本发明菌株对根结线虫的杀伤力较强，致死率非常高。优选地，所述根结线虫为南方根结线虫。特别地，本发明菌株对南方根结线虫二龄幼虫具有较强的触杀作用。
本发明的普沙根瘤菌TYQ1具有耐盐性，特别是协助植物耐盐，有利于协助植物缓解盐胁迫。在盐胁迫存在的情况下，接种TYQ1可显著促进黄瓜植株的株高、茎粗、叶绿素含量和全株鲜重。普沙根瘤菌TYQ1可协助黄瓜植株缓解盐胁迫，有利于黄瓜在高盐环境下的生长发育。
本发明的普沙根瘤菌TYQ1具有促进植物生长的作用。优选地，可用于促进黄瓜幼苗的生长。当将普沙根瘤菌TYQ1菌剂接种在健康或感病黄瓜植株根围土壤时，可显著增大黄瓜植株的株高和茎粗，显著促进了黄瓜幼苗的干物质积累，并对黄瓜幼苗的根系生长有促进作用。
特别地，本发明的普沙根瘤菌TYQ1可用于促进黄瓜生长的同时协助黄瓜抵御南方根结线虫。普沙根瘤菌TYQ1可抑制根结线虫在黄瓜根系的发育进程。
当将普沙根瘤菌TYQ1菌剂接种在感病黄瓜植株根围土壤，滞缓了根结线虫在黄瓜根系内的发育进程，黄瓜根系的单位根结数降低了53.24%，卵块数降低了72.74%，利于根结线虫的早期防治。本发明提供了一株对黄瓜幼苗促生并对根结线虫有防治作用的菌种资源，以供生产选择，对黄瓜植株栽培和根结线虫防治具有较大意义。
本发明还提供了一种普沙根瘤菌TYQ1在促进黄瓜幼苗生长并防治根结线虫方法，或者一种提高土壤磷利用率并防治黄瓜根结线虫的方法，该方法包括当黄瓜幼苗长至第一片真叶刚刚露出时，将菌剂浇灌在健康或感病植株植株根围土壤；优选地，每株幼苗浇灌10mL，每周浇灌1次并连续浇灌3周。
在本发明中，感病植株是指受到根结线虫胁迫或者经根结线虫侵染的植株。
实施例1：普沙根瘤菌（Rhizobium pusense）TYQ1的分离、纯化与鉴定
1.1普沙根瘤菌（Rhizobium pusense）TYQ1的分离与纯化：
本发明的普沙根瘤菌（Rhizobium pusense）TYQ1菌株是从中国农业大学实验室中根结线虫发病的黄瓜的根际土壤中分离得到的。分离方法为土壤稀释法。具体步骤如下：
从中国农业大学设施蔬菜生长发育调控实验室中根结线虫发病的黄瓜植株的根际均匀地采集土壤样品，共采集4份，每份1 g，将四份土壤混合均匀，迅速放入装有9 mL无菌蒸馏水的15 mL离心管中，然后置于摇床，摇床转速为180 rpm/min，20分钟后取出试管。然后取1mL土壤悬浮液到新的离心管中，加入9 mL无菌水，使得悬浮液被稀释10倍，依次类推进行系列梯度稀释，然后吸取相应稀释倍数的土壤悬浮液100µL至LB固体培养基平板上，均匀涂抹，在28℃培养箱中培养2天，定时观察菌落的生长状况。待平板上长出单个菌落，挑取单个菌落进行连续三次的划线分离纯化。
1.2 普沙根瘤菌（Rhizobium pusense）TYQ1菌株的鉴定
（1）微生物学特性
获得的菌株接种在LB培养基平板上，在28℃条件下培养2天后。如图1所示，该菌株的单菌落呈圆形，边缘光滑，乳白色，中央微凸起，菌体呈棒状，革兰氏染色为阴性。
（2）分子生物学特性
挑取单菌落于装有1mL LB培养基的1.5 mL离心管中，28℃，180 rpm/min的条件下震荡培养24h，以该菌液为模板，用引物27F和1492R进行16s rRNA序列扩增。
PCR扩增反应体系为50µL，包括25µL 2xTaq酶，1µL 27F引物，1µL1492R引物，1µL菌液和22µL ddH2O。扩增条件是：95℃预变性3 min，94℃变性25s，55℃退火25s，72℃延伸1min，32个循环，72℃延伸5 min,扩增产物保存于4℃。扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳分离鉴定，PCR产物送至北京擎科生物科技有限公司进行双向测序。获得了菌株TYQ1的16S rDNA的序列信息，将测定结果进行BLAST同源性比对，并构建系统发育树，如图2。结果显示该菌株与普沙根瘤菌（Rhizobium pusense）的相似度达99.85%。因此，鉴定该菌株为Rhizobium pusense属的一个菌株，命名为普沙根瘤菌（Rhizobium pusense）TYQ1，将其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 26530。
实施例2：普沙根瘤菌（Rhizobium pusense）TYQ1溶磷能力的定性和定量分析
2.1普沙根瘤菌TYQ1溶磷能力的定性分析
利用无机磷固体培养基初步评估了普沙根瘤菌TYQ1对难溶性磷的溶解能力：吸取10µL过夜培养的TYQ1菌液于无机磷固体培养基表面，用封口膜密封后置于28℃培养箱培养5天，每组处理3次重复，然后测量溶磷圈直径(D)和菌落的直径(d)，计算溶磷圈与菌落直径的比值，结果如表1所示，无机磷培养基中TYQ1的溶磷现象如图2所示。从表1和图3可以看出普沙根瘤菌TYQ1的溶磷圈与菌落直径比达到1.3，具有较强的溶磷能力。
其中，无机磷固体培养基的配方为：葡萄糖10g/L，硫酸铵0.5g/L，氯化钠0.31g/L，七水合硫酸镁0.3g/L，硫酸锰0.03g/L，氯化钾0.3g/L，七水合硫酸亚铁0.03g/L，磷酸钙5g/L，琼脂15g/L，pH 7.4±0.2。
2.2 普沙根瘤菌TYQ1溶磷能力的定量分析
采用钼锑抗比色法对普沙根瘤菌TYQ1的溶磷能力进行定量分析。
制备钼锑贮存溶液：量取153 mL浓硫酸，缓缓加入到400 mL蒸馏水中，不断搅拌，冷却。另称取经磨细的钼酸铵10g溶于温度约60℃的300 mL水中，冷却。然后将硫酸溶液缓缓倒入钼酸铵溶液中。再加入0.5%酒石酸锑钾溶液100 mL，冷却后，加水稀释至1000 mL，摇匀，贮于棕色试剂瓶中。
制备钼锑抗显色剂：称取1.50 g抗坏血酸溶于100 mL钼锑贮存溶液中，此溶液有效期不长，宜随配随用。
磷酸盐标准曲线的绘制：分别准确吸取5 mg·L-1磷酸盐标准液 0 mL、2 mL、4 mL、6 mL、8 mL、10 mL于50 mL容量瓶中并用蒸馏水定容，既得含磷量分别为 0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg·L-1的标准溶液，然后吸取10 mL以上标准溶液，加入5 mL钼锑抗显色剂，摇匀后置于室温放置30 min，在700 nm波长处测其吸光值。以吸光值为纵坐标，磷浓度（mg·L-1）为横坐标，绘制标准曲线。
将普沙根瘤菌TYQ1的种子液以1%（v/v）的接种量转接于无机磷液体培养基中，同时设置不接菌的对照组，在28℃，180 rpm/min条件下震荡培养5天，每隔24h取发酵菌液在10000 rpm/min转速下离心10 min，取上清液为待测液。吸取10 mL上清液加入5 mL钼锑抗显色剂，在室温下放置30 mim后，在700 nm波长处测其吸光值。
结果如表2和图4显示，随着培养天数的增加，菌液上清液中可溶性磷的含量也随之增高，在震荡培养第5天，菌液上清液中可溶性磷的含量为18.713 mg/L，是对照的11.96倍，可见本发明普沙根瘤菌TYQ1的溶磷能力较强。
实施例3：普沙根瘤菌TYQ1分泌IAA能力的定性和定量分析
普沙根瘤菌TYQ1分泌IAA能力的测定参照Salkowaki比色法进行。
3.1普沙根瘤菌TYQ1分泌IAA能力的定性分析
将普沙根瘤菌TYQ1的种子液以1%（v/v）的接种量接种至含有过滤除菌的色氨酸的LB液体培养基中，使色氨酸的终浓度为500 µg/mL，同时设置不接菌的对照组，在28℃，180rpm/min的条件下震荡培养3天。取发酵菌液10000 rpm/min离心10 min，取上清液500 µL于10 mL离心管中，加入1 mL Salkowaki显色剂，在室温下静置反应30 min后，观察溶液是否变色，若溶液变为粉红色则说明有IAA产生。
Salkowaki显色剂的配置方法为：取0.811 g FeCl3溶于10 mL蒸馏水中制成浓度为0.5M FeCl3溶液，并取1 mL加入到49 mL 35% HClO4溶液中混匀，即得Salkowaki显色剂。
3.2 普沙根瘤菌TYQ1分泌IAA能力的定量分析
IAA标准曲线制备：配制浓度为1 mg·L-1的吲哚乙酸母液，并将母液按2.5 mg·L-1、2.0 mg·L-1、1.5 mg·L-1、1.0 mg·L-1、0.5 mg·L-1依次进行梯度稀释后，在530 nm波长处测定吸光值，以IAA浓度为横坐标，OD530为纵坐标绘制标准曲线。
吸取500 µL TYQ1菌株的离心上清液，加入4 mL的IAA显色剂，每株菌3个重复，室温下避光显30 min后测定其OD530 nm的吸光值，以空白培养基作对照，以纯IAA作标准曲线计算TYQ1菌株产IAA的含量。
结果表明，普沙根瘤菌TYQ1可以利用色氨酸产生IAA，且产生IAA的量为5.329 µg/mL。
实施例4：普沙根瘤菌TYQ1发酵上清液对根结线虫的体外触杀作用
4.1菌株发酵液上清的制备
供试菌株为普沙根瘤菌TYQ1，对照菌株为对照菌株1和对照菌株2，为实验室现存菌株，其中对照菌株1为阴沟肠杆菌（Enterobacter cloacae），对照菌株2为婴儿芽孢杆菌（Bacillus infantis strain）。对照菌株为可商购的常规菌株，从宁夏万辉农业科技有限公司购买得到。
挑取菌株的单菌落，接种于装有1 mL LB液体培养基的1.5 mL离心管中，在28℃，180 rpm/min的条件下震荡培养48h，然后将菌液发酵液在10000 rpm/min转速下离心5min，吸取离心管中的上清液，用0.2µm的滤膜过滤，过滤后所得的溶液即为菌株的发酵液上清。
4.2 根结线虫二龄幼虫悬浮液制备
本发明供试线虫为南方根结线虫，从感染南方根结线虫的空心菜根系获得。清洗空心菜根系，用镊子挑取空心菜根系表面的卵块，用0.6%次氯酸钠溶液震荡清洗后，用600目网筛过滤，网筛上的卵块用无菌水多次冲洗，最终将其冲洗至装有无菌水的圆形培养皿中，在室温条件下孵化2-3天，收集孵化出来的二龄幼虫，在显微镜下观察并计数，将密度调节至100条/100µL。
4.3 体外触杀实验
吸取TYQ1菌株和对照菌株的发酵液上清400µL于48孔细胞培养板中，并加入100µL根结线虫二龄幼虫悬浮液（含有100条二龄幼虫），对照组中加入400µL无菌水。将细胞培养板用锡箔纸包裹后，置于28℃培养箱静置。处理24h后，在体式显微镜下观察二龄幼虫的存活状况，判断标准为：向各处理中滴加1mol/L NaOH溶液后，仍保持僵直不动的为死虫，弯曲蠕动的为活虫。统计线虫的死亡数目，并计算线虫的校正死亡率。
为检测TYQ1菌株对根结线虫的致死强度，将以上发酵液上清分别稀释2倍、4倍、6倍、8倍和10倍，向24孔细胞培养板中分别加入400 µL不同稀释倍数的TYQ1菌株发酵液上清和100 µL根结线虫二龄幼虫悬浮液（含有100条二龄幼虫），对照组中加入400 µL无菌水。
校正死亡率（%）=（处理死亡率-对照死亡率）/(1-对照死亡率)*100%。
4.4 结果分析
采用TYQ1发酵液上清对线虫进行处理后，对根结线虫具有明显的致死性，且其对根结线虫二龄幼虫的校正死亡率显著高于对照菌株1和对照菌株2。
如图5和表3和表4所示，采用TYQ1发酵液上清对线虫进行处理后，对根结线虫具有明显的致死性。发酵液上清对根结线虫的校正死亡率随着稀释倍数的增大而降低，上清液原液对根结线虫的校正死亡率达到98.28%，稀释6倍时，线虫的校正死亡率仍高达95%以上，这说明菌株TYQ1的发酵液上清中所含有的代谢物质对南方根结线虫二龄幼虫的致死性较强。
实施例5：普沙根瘤菌TYQ1防治南方根结线虫的盆栽实验
黄瓜是对南方根结线虫最为敏感的蔬菜作物，本实施例以黄瓜为模式作物进行研究。
本次实施例设置四组处理：①空白对照（CK）；②接种根结线虫(CK+N)；③接种TYQ1菌剂(TYQ1)；④既接种TYQ1菌剂又接种根结线虫(TYQ1+N)。具体实施步骤如下：
5.1种子消毒
挑选饱满、无损的黄瓜种子进行表面消毒，在75%乙醇中浸泡30s，用无菌蒸馏水冲洗3遍后，将种子置于3%NaClO溶液中浸泡10 min，再用无菌蒸馏水冲洗3遍至无试剂残留后，在无菌水中浸种6h，将种子转移至装有湿润无菌滤纸的培养皿中，置于28℃培养箱进行催芽。
5.2 菌株接种
待胚根长出，将种子播于装有灭菌土壤的50孔穴盘中，待幼苗长至第一片真叶刚刚露出时，开始浇灌TYQ1菌剂，每株幼苗浇灌10 mL，每周浇灌一次并连续浇灌3次。
其中，灭菌土壤的制备方法为：采集森林土壤过筛后，在120℃高温下高压灭菌1h，24h后再次高温灭菌。TYQ1菌剂的制备方法为：将TYQ1接种至LB液体培养基，在180rpm/min和28℃条件下将菌液培养至OD600为0.8，然后将菌液在8000rmp/min转速下离心5分钟，弃上清液，用等体积的10mM MgSO4缓冲液悬浮后即得菌剂。
5.3接种南方根结线虫二龄幼虫
当黄瓜幼苗处于一叶一心时期，开始接种南方根结线虫二龄幼虫。用枪头在黄瓜幼苗的根围戳两个1cm左右深度的小孔，向其中加入根结线虫悬浮液，每株幼苗接种250条根结线虫。分别在接种线虫后第7天，对黄瓜幼苗根系进行酸性品红染色，统计不同虫龄的根结线虫的侵染数；在接种线虫后第30天，取样统计黄瓜植株的生理指标、根结数和卵块数。
其中，酸性品红染色的方法为：去黄瓜植株根系，将其浸泡于1.5%次氯酸钠溶液中漂白1 min，然后用蒸馏水洗净，吸干根系表面水分后，将其置于酸性品红溶液（酸性品红溶液的配置方法为：3.5 g品红+250 mL乙酸+750 mL蒸馏水，并充分混匀）中煮沸30s，然后冷却至室温，清洗根系后再浸泡于20-30 mL酸性甘油中，加热褪色45s后，将根系保存于酸性甘油中。
5.4 结果分析
测定经普沙根瘤菌TYQ1处理及根结线虫侵染黄瓜幼苗30天后，健康植株和感病植株的株高、茎粗、地上部干重、根部干重和全株干重的变化如表5所示。图6为本发明普沙根瘤菌TYQ1接种后黄瓜幼苗表型，图7为本发明普沙根瘤菌TYQ1对黄瓜幼苗形态指标的影响。
图8为本发明普沙根瘤菌TYQ1对黄瓜幼苗生物量的影响。接种普沙根瘤菌TYQ1后，无论是否存在根结线虫胁迫，黄瓜幼苗的株高和茎粗都显著提升，健康植株的地上部鲜重、根部鲜重和全株鲜重分别较对照增高了40.45%、32.00%和40.25%；感病植株的地上部鲜重、根部鲜重和全株鲜重分别较对照增高了48.77%、27.50%和45.88%。同时，接种普沙根瘤菌TYQ1促进了黄瓜幼苗干物质积累，健康植株和感病植株的地上部干重、根部干重均较不加菌处理显著增高，健康植株的全株干重增高14.06%，感病植株的全株干重增高14.93%。由此可见，普沙根瘤菌对黄瓜幼苗的生长有促进作用。
利用扫根仪对黄瓜幼苗根系进行扫描并利用WinRHIZO分析系统软件进行分析，得到的结果如表6和图9所示。由表6可以看出，接种普沙根瘤菌TYQ1显著促进了黄瓜幼苗根系生长。在无根结线虫侵染的状况下，接种TYQ1菌株的黄瓜幼苗的总根长、根表面积、根平均直径和根体积分别较对照增高了19.22%、23.53%、3.45%和30.77%；在根结线虫胁迫下，接种TYQ1菌株的黄瓜幼苗的总根长、根表面积、根平均直径和根体积分别较对照增高了16.35%、24.64%、6.45%和33.33%。
如表7所示，在接种二龄幼虫7天后，两组处理下根系内所侵染的线虫总数无明显差异，但接种普沙根瘤菌TYQ1后根系内三龄幼虫的比例明显低于对照，较对照降低了86.64%，而两组处理之间二龄幼虫侵染数目无显著差异，这说明普沙根瘤菌TYQ1接种后，黄瓜根系中所侵染的二龄幼虫的发育速率明显降低，因此对根结线虫的发育有一定的滞缓作用。
注：表中*表示处理间存在p<0.05水平显著性差异，n.s代表处理间无显著差异。
表8、图10、图11、图12显示，在接种线虫30天后，接种根际促生菌TYQ1显著降低了黄瓜根系的单位根重根结数和卵块数，黄瓜根系的单位根结数降低53.24%，卵块数降低了72.74% ，且其对根结线虫的防治效果显著高于另外两株对照菌株。
以上结果表明，普沙根瘤菌TYQ1菌株不仅能够显著促进黄瓜幼苗的生长，还滞缓了根结线虫在黄瓜根系内的发育进程，显著降低了黄瓜根系的单位根结数和卵块数，有利于根结线虫的早期防治，有助于实现蔬菜的安全、无公害生产。
实施例6：普沙根瘤菌TYQ1协助黄瓜植株耐盐的作用
本次实施例供试黄瓜品种为‘津优401号’，该品种为不耐盐品种。此次实验共设置四组处理：①空白对照（CK）；②盐处理（CK+S）；③接种TYQ1菌剂（TYQ1）；④接种TYQ1菌剂并施加盐处理（TYQ1+S）。具体实施步骤如下：
黄瓜种子表面灭菌后，将种子播种于灭菌基质中（草炭：蛭石=2：1）进行育苗，待种子萌发后在幼苗根系周围接种菌株，每株幼苗浇灌10 ml的用10mM硫酸镁溶液悬浮的菌液悬浮液，每5天浇灌一次，对照处理浇灌10ml的10mM硫酸镁溶液。待幼苗第一片真叶展平，开始出现第二片真叶时开始进行盐处理，盐处理方式为浇灌浓度为75mM的NaCl溶液10ml。盐处理后第15天，开始进行形态和生理指标的测定。
结果如表9和图13和图14显示，在盐胁迫存在的情况下，接种TYQ1显著促进了黄瓜植株的株高、茎粗、叶绿素含量和全株鲜重，较对照相比分别提高了53.96%、54.12%、67.85%和100.14%。由此可见，TYQ1菌株对协助黄瓜植株缓解盐胁迫的能力较强。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (7)

1.一株多功能普沙根瘤菌，其特征在于，所述普沙根瘤菌为普沙根瘤菌（Rhizobium pusense）TYQ1，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No. 26530。
2.微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂包含权利要求1所述的普沙根瘤菌（Rhizobium pusense）TYQ1。
3.根据权利要求2所述的微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂中，所述普沙根瘤菌（Rhizobium pusense）TYQ1的总活菌数为0.5×105-1×109 cfu·mL-1。
4.根据权利要求2或3所述的微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂的制备方法包括：将所述普沙根瘤菌（Rhizobium pusense）TYQ1接种于液体培养基，将菌液培养至OD600为0.6-0.8，然后将菌液离心弃上清液，用等体积的缓冲液悬浮。
5.权利要求1所述的普沙根瘤菌（Rhizobium pusense）TYQ1或权利要求2-4中任一项所述的微生物菌剂在以下至少一个方面中的应用：
（A）溶磷；
（B）分泌生长素；
（C）防治根结线虫；
（D）抗盐；
（E）促进植物生长；
所述溶磷为溶解难溶性无机磷；
所述根结线虫为南方根结线虫；
所述促进植物生长为促进黄瓜幼苗生长。
6.一种提高土壤磷利用率并防治黄瓜根结线虫的方法，其特征在于，包括将权利要求1所述普沙根瘤菌（Rhizobium pusense）TYQ1的菌悬液或含有其的菌剂与黄瓜种子进行拌种，或作为肥料施用于黄瓜植株生长区域。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，包括当黄瓜幼苗长至刚露出第一片真叶时，将含有所述普沙根瘤菌（Rhizobium pusense）TYQ1的菌剂浇灌在健康或感病植株根围土壤。
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Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102936574A (zh) * 2012-11-20 2013-02-20 南京农业大学 一种耐重金属的根瘤菌及其促进尾矿区植物修复的方法
CN105724438A (zh) * 2016-04-12 2016-07-06 深圳市芭田生态工程股份有限公司 一种防治根结线虫的功能性菌剂
CN107881130A (zh) * 2017-11-10 2018-04-06 黑龙江省农业科学院草业研究所 具有高效解磷能力的根瘤菌及其应用
CN108396005A (zh) * 2018-04-27 2018-08-14 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所 一株水稻内生促生根瘤菌及其用途
CN109554308A (zh) * 2018-11-15 2019-04-02 河南省科学院生物研究所有限责任公司 一种Rhizobium pusense F3-1及其应用
CN110172422A (zh) * 2019-05-28 2019-08-27 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 一株溶蛋白芽孢杆菌及其在防治根结线虫中的应用
CN110200017A (zh) * 2019-05-06 2019-09-06 山东省农业科学院植物保护研究所 一种防治根结线虫的复合微生物菌剂及其制备方法
CN111423984A (zh) * 2020-04-01 2020-07-17 中国农业大学 防治植物病虫害的协同促根抗病菌的筛选方法和菌剂
CN112625949A (zh) * 2020-12-18 2021-04-09 青岛农业大学 一株马赛类芽孢杆菌及其在防治植物线虫病害中的应用
CN113088471A (zh) * 2021-04-20 2021-07-09 安徽农业大学 一株产iaa和cmc酶的普沙根瘤菌x2及其应用
CN113174351A (zh) * 2021-06-11 2021-07-27 成都云图控股股份有限公司 一种抗病促生型混合微生物菌群
WO2023052597A1 (en) * 2021-10-01 2023-04-06 Tessenderlo Group Nv Liquid fertilizers comprising potassium and potassium solubilizing microorganisms

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3405564A4 (en) * 2016-01-19 2019-09-04 Bioconsortia, Inc. BENEFICIAL MICROBES FOR AGRICULTURE, MICROBIAL COMPOSITIONS AND CONSORTIVA

Patent Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102936574A (zh) * 2012-11-20 2013-02-20 南京农业大学 一种耐重金属的根瘤菌及其促进尾矿区植物修复的方法
CN105724438A (zh) * 2016-04-12 2016-07-06 深圳市芭田生态工程股份有限公司 一种防治根结线虫的功能性菌剂
CN107881130A (zh) * 2017-11-10 2018-04-06 黑龙江省农业科学院草业研究所 具有高效解磷能力的根瘤菌及其应用
CN108396005A (zh) * 2018-04-27 2018-08-14 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所 一株水稻内生促生根瘤菌及其用途
CN109554308A (zh) * 2018-11-15 2019-04-02 河南省科学院生物研究所有限责任公司 一种Rhizobium pusense F3-1及其应用
CN110200017A (zh) * 2019-05-06 2019-09-06 山东省农业科学院植物保护研究所 一种防治根结线虫的复合微生物菌剂及其制备方法
CN110172422A (zh) * 2019-05-28 2019-08-27 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 一株溶蛋白芽孢杆菌及其在防治根结线虫中的应用
CN111423984A (zh) * 2020-04-01 2020-07-17 中国农业大学 防治植物病虫害的协同促根抗病菌的筛选方法和菌剂
CN112625949A (zh) * 2020-12-18 2021-04-09 青岛农业大学 一株马赛类芽孢杆菌及其在防治植物线虫病害中的应用
CN113088471A (zh) * 2021-04-20 2021-07-09 安徽农业大学 一株产iaa和cmc酶的普沙根瘤菌x2及其应用
CN113174351A (zh) * 2021-06-11 2021-07-27 成都云图控股股份有限公司 一种抗病促生型混合微生物菌群
WO2023052597A1 (en) * 2021-10-01 2023-04-06 Tessenderlo Group Nv Liquid fertilizers comprising potassium and potassium solubilizing microorganisms

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