CN116251137A - 一种从鸡血藤中提取黄酮类化合物的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从鸡血藤中提取黄酮类化合物的方法。本发明方法包括如下步骤：以胆碱类低共熔溶剂为溶剂，在密闭环境下对鸡血藤进行提取，提取结束后分离出液相，得到鸡血藤总黄酮提取液；所述胆碱类低共熔溶剂由氢键受体、氢键供体和水组成；所述氢键受体和所述氢键供体的摩尔比为1：(0.5～2)；所述氢键受体为氯化胆碱；所述氢键供体为尿素、三甘醇或甘油。本发明方法提取效果好，相较于传统溶剂乙醇提取的鸡血藤总黄酮提取量高2.85倍；使用低共熔溶剂提取，提取效率高，提取时间仅5min，传统乙醇提取方法需60‑150min；提取条件温和，溶剂本身对人体与环境的影响较小，不同于传统方法使用甲醇、乙醇等易燃易爆溶剂，更有利于总黄酮的提取向绿色环保方向迈进。
Description
技术领域
本发明属于天然药物化学技术领域，尤其涉及一种从鸡血藤中提取黄酮类化合物的方法。
背景技术
鸡血藤(Spatholobussuberectus)为豆科植物密花豆，主产地为中国广西，同时在云南、四川、贵州等地也分布广泛。鸡血藤为传统中草药，在《本草纲目拾遗》中记载“藤最活血，暖腰膝，已风瘫”等，在《云南志》及《顺宁府志》中对鸡血藤亦见著述，现代医学临床实验表明鸡血藤具有活血化瘀、抗病毒、肿瘤镇静催眠等多种功效。鸡血藤以上药用价值源于其中含有多种黄酮化合物，既以C6-C3-C6结构为基本骨架的化合物。近年来，研究人员从鸡血藤中分离出了许多黄酮类化合物，如大豆苷、芒柄花素、甘草素、芦丁、二氢槲皮素等。
鸡血藤中总黄酮的提取常使用一定浓度的甲醇或乙醇进行提取，同时辅以超声辅助、微波辅助等手段，但使用这类方法进行提取通常存在提取时间较久、提取过程中会产生大量的有毒、易燃易爆的有机废液的问题；用水提取鸡血藤中的黄酮类化合物可以避免产生大量有机废液的问题，但提取率低、提取液容易出现霉菌滋生，使得提取液难以保存。酶解法与超临界流体二氧化碳提取法是近年来新兴的提取方法，但是前者的提取条件较为苛刻，提取时的温度、pH对提取效果的影响很大，后者的设备仪器较为昂贵，制约其发展。因此，开发一种绿色安全、经济实惠的方法来提取天然药物中的活性成分具有积极意义。
低共熔溶剂(Deep Eutectic Solvent,DES)常以季铵盐氯化胆碱(ChCl)作为氢键受体(Hydrogen Bond Acceptor,HBA)，同时以短链醇、羧酸等作为氢键供体(HydrogenBond Donor,HBD)构成，在一定配比下，二者组合而成的混合物熔点显著低于纯物质的熔点。通过改变低共熔溶剂中氢键受体与氢键供体的种类、比例、含水量等影响因素，对于目标化合物的提取效果及提取方式都有非常重要的影响。
发明内容
本发明的目的是提供一种从鸡血藤中提取黄酮类化合物的方法，该方法以胆碱类低共熔溶剂为溶剂进行提取，提取时间短、提取率高、绿色环保且操作简单。
本发明提供的一种从鸡血藤中提取黄酮类化合物的方法，包括如下步骤：
以胆碱类低共熔溶剂为溶剂，在密闭环境下对鸡血藤进行提取，提取结束后分离出液相，得到鸡血藤总黄酮提取液；
所述胆碱类低共熔溶剂由氢键受体、氢键供体和水组成；
所述氢键受体和所述氢键供体的摩尔比为1：(0.5～2)；
所述氢键受体为氯化胆碱；
所述氢键供体为尿素、三甘醇或甘油。
上述的方法中，所述鸡血藤可为干燥的鸡血藤粉末，如100目的鸡血藤粉末。
上述的方法中，使用阿姆斯特丹套件中的真实溶剂似导体屏蔽模型预测所述胆碱类低共熔溶剂中的氢键受体和氢键供体的种类及其摩尔比；计算基组为BP86/TZVP、温度为25℃、压力为101.325kPa；
所述胆碱类低共熔溶剂优选由摩尔比为1：2的氯化胆碱和三甘醇组成。
上述的方法中，所述提取的条件如下：
所述胆碱类低共熔溶剂的含水量为10％～50％，优选为40％；
所述提取的时间为5～35min，优选为5min；
所述提取的温度为40～80℃，优选为60℃；
所述提取的液料比为10～50mL：1g，优选为30mL：1g。
上述的方法中，优选地，所述提取的条件如下：
所述胆碱类低共熔溶剂的含水量为43％；
所述提取的时间为5min；
所述提取的温度为63℃；
所述提取的液料比为39mL：1g。
上述的方法中，通过离心从所述提取后的体系中分离出液相；所述离心的转速具体可为3000r/min，所述离心的时间具体可为5min。
本发明第二方面提供上述的任一项所述的方法提取得到的鸡血藤总黄酮提取液。
本发明第三方面提供上述的鸡血藤总黄酮提取液在制备抗氧化产品中的应用。
本发明具有如下有益效果：
本发明提取方法提取效果好，相较于传统溶剂乙醇提取的鸡血藤总黄酮提取量高2.85倍；使用低共熔溶剂提取，提取效率高，提取时间仅5min，而使用乙醇的传统方案需要60-150min；提取条件温和，溶剂本身对人体与环境的影响较小，不同于传统方法使用甲醇、乙醇等易燃爆的溶剂，更有利于总黄酮的提取向绿色环保方向迈进。
附图说明
图1是本发明实施例1中配制的不同摩尔比的低共熔溶剂σ-profile图。
图2是本发明实施例1中配制的不同摩尔比的低共熔溶剂σ-potential图。
图3是本发明实施例1中刺芒柄花素、甘草素在两种低共熔溶剂中的溶解度预测图。
图4为本发明实施例1中不同摩尔比的低共熔溶剂的黄酮提取量。
图5为本发明实施例2中不同提取时间的黄酮提取量。
图6为本发明实施例3中不同提取温度的黄酮提取量。
图7为本发明实施例4中不同DES含水量的黄酮提取量。
图8为本发明实施例5中不同料液比的黄酮提取量。
具体实施方式
本发明提供的一种从鸡血藤中提取黄酮类化合物的方法，包括如下步骤：
以胆碱类低共熔溶剂为溶剂，在密闭环境下对鸡血藤进行提取，提取结束后分离出液相，得到鸡血藤总黄酮提取液；
胆碱类低共熔溶剂由氢键受体、氢键供体和水组成；
氢键受体和所述氢键供体的摩尔比为1：(0.5～2)；
氢键受体为氯化胆碱；
氢键供体为尿素、三甘醇或甘油。
本发明中，通过利用真实溶剂似导体屏蔽模型(Conductor-like ScreeningModel for Real Solvents,COSMO-RS)，采用合适的算法对低共熔溶剂合成及萃取效果进行预测，可缩短研究周期，节约研究经费。本发明使用阿姆斯特丹套件中的真实溶剂似导体屏蔽模型计算并得到部分低共熔溶剂体系的σ-profile和σ-potential，并对代表性黄酮化合物刺芒柄花素、甘草素在低共熔溶剂中的溶解度进行理论预测，并通过与实际实验结果的对比来筛选低共熔溶剂，进而，将筛选得到的低共熔溶剂用于鸡血藤中黄酮化合物的提取。
本发明中，对影响鸡血藤总黄酮提取率的影响因素进行了单因素实验，分别考察了提取时间(5min、10min、15min、20min、25min、30min、35min)、胆碱类低共熔溶剂的含水量(10％、20％、30％、40％、50％)、提取温度(40℃、50℃、60℃、70℃、80℃)和液料比(10mL：1g、20mL：1g、30mL：1g、40mL：1g、50mL：1g)对总黄酮提取量的影响。各影响要素的最佳点为提取时间t＝5min，提取温度T＝60℃，DES-8水含量为40％，以及提取所选用料液比为30mL：1g。
本发明中，在单因素实验的基础上，使用中心复合有界设计的响应曲面法优化了三个因素对鸡血藤总黄酮提取率的影响。根据预测结果进行改进，确定最优提取工艺为：固液比为39:1、含水量为43％、温度为63℃的温度下提取5min，经实验验证，鸡血藤中黄酮的平均提取量为96.01(mg/g)，与模型预测值差异为0.67％(相差0.64mg/g)。
下述实施例中，实施例1中通过采用COSMO-RS预测以及芦丁标准品核验，筛选出对黄酮类化合物溶解性能优异的DES-4低共熔溶剂，所筛选出的胆碱类低共熔溶剂由摩尔比为1：2的氯化胆碱和三甘醇组成。
实施例2-实施例6通过单因素考察以及响应曲面法优化，最终可实现鸡血藤中黄酮的提取量达96.01mg/g，为相同条件下以水作溶剂的4.12倍，以60％乙醇作溶剂的2.85倍。DES-4体现出了优异的提取性能。
为使本申请的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但本发明并不限于以下实施例。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中的材料和工具的来源如下：
鸡血藤粉末，规格为UV260，厂家为安徽亳州仁者居药粉；
DPPH，规格为AMS2021，厂家为福州飞净生物科技有限公司；
Amsterdam Modeling Suite软件，型号为20.3，荷兰阿姆斯特丹；
Minitab，美国宾夕法尼亚州州立大学。
实施例1、低共熔溶剂的筛选
利用阿姆斯特丹套件中的真实溶剂似导体屏蔽模型计算不同摩尔比的低共熔溶剂及鸡血藤中部分黄酮的σ-profile和σ-potential，并对代表性黄酮化合物刺芒柄花素、甘草素在低共熔溶剂中的溶解度进行理论预测，通过与实际实验结果的对比来筛选低共熔溶剂。
一、低共熔溶剂的预测
使用COSMO-RS理论计算并得到部分DESs体系的σ-profile和σ-potential，COSMO-RS进行理论计算的部分均基于Amsterdam Modeling Suite软件(C.C.Pye and T.Ziegler,“An implementation of the conductor-like screening model of solvation withinthe amsterdam density functional package,”Theoretical Chemistry Accounts,vol.101,no.6,pp.396–408,1999.和J.N.Louwen,C.C.Pye,E.van Lenthe,E.S.McGarrity,R.Xiong,S.I.Sandler,R.I.Burnett,ADF2017 COSMO-RS,SCM,Theoretical Chemistry,Vrije Universiteit,Amsterdam,The Netherlands.URL:http://www.scm.com)进行。对于AMS数据库中已经包含的分子，不另作冗余之工；对于没有包含的分子使用了AMSinput模块进行结构优化，使用COSMO-RS模块的基本设置，在BP86/TZVP基组下进行计算(E.VanLenthe and E.J.Baerends,“Optimized slater-type basis sets for the elements1–118,”Journal of computational chemistry,vol.24,no.9,pp.1142–1156,2003)，并生成.coskf文件，以获得体系的σ-profile以及σ-potential数据。对于σ-profile图像可以将其分为三个区域，以
为界限，/>
区域为氢键供体区；
区域为氢键受体区；/>
为非极性区域,分布在这一区域的分子碎片体现出非极性。对于σ-potential来说，也以/>
为界限，随着σ值变大，溶剂对极性表面电荷的排斥变大。无特殊说明情况下，所得σ-potential图像均为在0℃、101.325kPa条件下进行计算得到的。
经计算，不同摩尔比的低共熔溶剂(表1所示)及鸡血藤中部分黄酮的σ-profile和σ-potential，结果如图1和图2所示，并对鸡血藤中刺芒柄花素及甘草素在各低共熔溶剂的溶解度进行了预测，结果如图3所示。
表1低共熔溶剂组成表
由图1知，DES-4的非极性特征强，在
有最高峰；由图2知，DES-1、DES-3、DES-4在/>
的化学势μ值接近，且是6种低共熔溶剂中最小的，说明三者对于氢键供体有较高的亲和能力。进一步的，DES-4的强非极性特征使其对于芦丁、甘草素、刺芒柄花素等非极性部分特征也较强的此类分子有潜在的、更强的亲和能力。进一步的，我们根据这些分子指纹信息，在Amsterdam Modeling Suite软件中了预测黄酮在各低共熔溶剂中的溶解度。
使用真实溶剂似导体屏蔽模型计算刺芒柄花素、甘草素在各低共熔溶剂中的溶解度如图3所示。由图3可以看出，在温度大于70℃时，刺芒柄花素、甘草素在DES-4中的溶解度最大。进一步的，我们使用配制了各低共熔溶剂，并将其用于鸡血藤黄酮的提取中，以验证Amsterdam Modeling Suite软件的预测结果。
二、低共熔溶剂预测结果的验证
按照摩尔比为1:0.5-2配制由氯化胆碱和氢键供体组成的低共熔溶剂，具体配制如表1中所示。在无水、隔绝空气的条件下搅拌，恒温80℃直至形成单一相的透明溶液，在密封条件下保存。使用时，取出部分加入去离子水制成制得一定含水量的DES。
取干燥100目鸡血藤粉末0.2000g，加入5mL含水量为20％胆碱类低共熔溶剂，隔绝空气密封，在恒温70℃条件下提取5min后，在3000r/min下离心5min，分离出液相，即得到鸡血藤总黄酮提取液，并使用紫外-可见分光光度计测定各提取液的总黄酮提取量。测定方法如下：
将低共熔溶剂用于黄酮糖苷标准品的处理，并使用紫外分光光度计与紫外光谱仪绘制黄酮糖苷类物质的标准曲线。具体步骤如下：
(1)使用由氯化胆碱和三甘醇组成的低共熔溶剂配制0.20mg/mL的芦丁标准溶液。分别吸取0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mL的芦丁标准品于15mL的比色管中，加入去离子水定容至1mL后，加入4％的亚硝酸钠和10％的硝酸铝各0.30mL，静置5min后加入4％的氢氧化钠5mL，最后加入30％的乙醇定容至15mL刻度线，充分摇匀。
(2)使用紫外光谱仪对显色后的提取液进行全波段扫描，选择在可见光区的最大吸收波长处使用紫外可见分光光度计测定吸光度。吸光度Y与待测液浓度x(mg/mL)的线性关系为Y＝1.0718x-0.002(相关系数R2＝0.9994)。记称取鸡血藤总质量为A g，提取液体积为V1 mL，移取提取液100μL作为待测液进行测定，计算得到黄酮提取量为Z mg/g，黄酮提取量计算公式如(1)式表示：
实验结果如图4所示。由图4可以看出，DES-4提取得到的鸡血藤总黄酮提取液中总黄酮的提取量最高，与理论预测结果一致。因此后续的实验我们选择氯化胆碱与三甘醇在摩尔比为1：2的条件下，通过优化提取过程中的时间、温度、液料比和DES的含水量，以获取更优的提取效果。
实施例2、低共熔溶剂提取鸡血藤中黄酮类化合物条件优化(单因素-提取时间)
在实施例1中筛选出的低共熔溶剂含水量为30％、液料比为30:1、提取温度为70℃的情况下，探究提取时间为对鸡血藤黄酮提取效果的影响，具体步骤如下：取干燥100目鸡血藤粉末0.2000g，加入6mL含水量为30％胆碱类低共熔溶剂DES-4，隔绝空气密封，在恒温70℃条件下分别提取5min、10min、15min、20min、25min、30min、35min后，在3000r/min下离心5min，分离出液相，即得到鸡血藤总黄酮提取液。
实验结果如图5所示。由图5提取时间影响可知，采用DES-4为溶剂，提取鸡血藤中的黄酮类化合物，提取5min时，提取率便已经几乎达到稳定，继续延长时间，黄酮提取量增加不大。由此可知，时间对于黄酮提取率影响很小，采用DES-4溶解，控制提取时间为5min即可。该提取方案极大缩减了提取时间，带来提取效率的显著提升。
实施例3、低共熔溶剂提取鸡血藤中黄酮类化合物条件优化(单因素-提取温度)
在实施例1中筛选出的低共熔溶剂含水量为30％、液料比为30:1的情况下，探究提取温度为对鸡血藤黄酮提取效果的影响，具体步骤如下：取干燥100目鸡血藤粉末0.2000g，加入6mL含水量为30％胆碱类低共熔溶剂DES-4，隔绝空气密封，分别在不同恒温40℃、50℃、60℃、70℃、80℃条件下提取5min后，在3000r/min下离心5min，分离出液相，即得到鸡血藤总黄酮提取液。
实验结果如图6所示。由图6提取温度影响曲线可以看出，随着提取温度的升高，黄酮提取量先升高后降低，当温度约为60℃的时候，黄酮的提取量达到最高。在温度较低情况下，温度升高可以降低DESs的黏度，显著地加快分子运动地速度，因此加快了分子向DESs的传递，黄酮提取量随温度的升高而；但当温度达到临界点，继续升高温度将可能造成黄酮结构被破坏，表现为UV-Vis测定黄酮的提取量降低。因此，对于黄酮类化合物的提取，建议温度控制在60℃左右。
实施例4、低共熔溶剂提取鸡血藤中黄酮类化合物条件优化(单因素-DES含水量)
在提取温度为60℃、液料比为30:1的情况下，考察实施例1中筛选出的低共熔溶剂含水量对鸡血藤黄酮提取效果的影响，具体步骤如下：取干燥100目鸡血藤粉末0.2000g，加入6mL含水量分别为10％、20％、30％、40％、50％的胆碱类低共熔溶剂DES-4，隔绝空气密封，在恒温60℃条件下提取5min后，在3000r/min下离心5min，分离出液相，即得到鸡血藤总黄酮提取液。
实验结果如图7所示。由图7DESs水含量影响可知，鸡血藤中黄酮类化合物提取量随DES-4低共熔溶剂中水含量的增高呈先升高，后降低趋势，且变化幅度相较于液料比与温度而言更为显著。当含水量达到40％的时候，黄酮提取量达到最大值。其原因可能是，在DES-4中水含量不高的情况下，增加水含量可以明显地降低DESs的粘度，有利于传质；增加水用量能保证将鸡血藤粉末的充分润湿的同时提升溶剂极性，使得极性相对较大的黄酮类物质更易被提取出来；但当加水过量时，将导致DESs本身的氢键网格结构被破坏，甚至失去低共熔特性，因而导致黄酮的提取量降低。由以上分析可见，除DES的组成会直接影响其特性外，DES中的水含量对于其极性、黏度以及传质影响很大，当面向的提取对象不同，可通过选择不同组成DES以及调节所选DES中的水含量调节其极性，从而实现面向对象的高效提取。对于本实验所关注的黄酮类化合物的提取，选择水含量为40％的DES-4为溶剂。
实施例5、低共熔溶剂提取鸡血藤中黄酮类化合物条件优化(单因素-料液比)
在60℃、DES-4含水量为30％的情况下考察液料比对鸡血藤黄酮提取效果的影响，具体步骤如下：取干燥100目鸡血藤粉末0.2000g，分别按照液料比为10:1、20:1、30:1、40:1、50:1加入2mL、4mL、6mL、8mL、10mL含水量为30％的胆碱类低共熔溶剂DES-4，隔绝空气密封，在恒温60℃条件下提取5min后，在3000r/min下离心5min，分离出液相，即得到鸡血藤总黄酮提取液。
实验结果如图8所示。由图8料液比影响可知，黄酮提取量随料液比的增大而增加，并最终趋于稳定。当液料比到达30:1时，鸡血藤黄酮提取量达到极值。分析原因可能是，当液料比很低时，溶剂的润湿效果差，且随着溶质不断传递到DESs中，甚至接近饱和，导致传质推动力减小，提取效果差，且固液相难以离心分离。加大液料不仅增加的润湿程度，还降低了体系整体的黏度，加大了固液两相间的传质动力，使固相颗粒中黄酮类化合物得以向液相充分转移。但继续加大液料比，对黄酮的传质促进作用削弱，反而增加了投入和分离工作量。对于本实验中采用DES-8提取鸡血藤中的黄酮类化合物，推荐采用液料比为30:1。
根据单因素实验，当采用氯化胆碱与三甘醇按摩尔比1:2合成低共熔溶剂DES-4用于提取鸡血藤中的黄酮类化合物时，影响因素主要包括提取时间、提取温度、DES水含量以及液料比等。各影响要素的最佳点为提取时间t＝5min，提取温度T＝60℃，DES-8水含量为40％，以及提取所选用料液比为30:1。鉴于超过5min后时间对黄酮提取量的影响不大，故在后续研究中忽略。
实施例6、低共熔溶剂提取鸡血藤中黄酮类化合物条件优化(多因素)
在上述单因素实验的基础上，使用Minitab软件进行中心复合有界设计的响应曲面法来优化实验方案。对影响实验的三个因素(提取温度、低共熔溶剂含水量、液料比)进行优化，以得到最优条件，响应曲面实验结果如表2所示；
对结果进行二次项拟合，从而进一步进行低共熔溶剂提取鸡血藤黄酮的响应曲面实验。通过计算得到因变量Y(黄酮提取量，mg/g)和自变量X(液料比A、含水量B、提取温度C)之间的关系式如下所示：Y＝-648+0.703 A+4.822 B+3.73 C-0.00414 A2-0.01192 B2-0.00481 C2-0.00352 AB-0.00070 AC-0.01088 BC。
表2响应曲面实验结果
利用该模型对鸡血藤中黄酮的DES-4提取工艺进行望大优化，得到在最优提取工艺为液料比为38.69:1(v/m)，提取时DES-4含水量为42.73％，温度为69.43℃下进行提取5min，模型预测黄酮提取量为95.37(mg/g)，拟合值标准误差为0.745；95％置信区间为(93.717，97.039)；95％预测区间为(91.154，99.602)。在预测模型的方案上略加改进，以符合实际的配制情况，在液料比为39:1、含水量为43％、温度为63℃的温度下提取5min进行验证验证实验(6次重复)，采用曲面法优化方案，可实现鸡血藤中黄酮的平均提取量为96.01(mg/g)，与模型预测值差异为0.67％(相差0.64mg/g)，准确性很高。
对比例1、以水为溶剂进行提取
在与实施例6相同的条件下，以水为溶剂，对鸡血藤进行提取，具体步骤如下：取干燥100目鸡血藤粉末0.2000g，按照液料比为39:1加入3.8mL的水，隔绝空气密封，在恒温63℃条件下提取5min后，在3000r/min下离心5min，分离出液相，即得到鸡血藤总黄酮提取液。
本对比例中，鸡血藤中黄酮的提取量为23.36mg/g。
对比例2、以乙醇为溶剂进行提取
在与实施例6相同的条件下，以60％的乙醇为溶剂，对鸡血藤进行提取，具体步骤如下：取干燥100目鸡血藤粉末0.2000g，按照液料比为39:1加入3.8mL60％的乙醇，隔绝空气密封，在恒温63℃条件下提取5min后，在3000r/min下离心5min，分离出液相，即得到鸡血藤总黄酮提取液。
本对比例中，鸡血藤中黄酮的提取量为33.77mg/g。
实施例7、鸡血藤黄酮类化合物提取液抗氧化能力的评价
使用DPPH结合紫外分光光度法对提取液抗氧化能力进行评价，具体步骤如下：
称取DPPH 7.9mg，用无水乙醇溶解并定容至100mL，得0.2mmol/L DPPH溶液，转移至棕色瓶，置于避光处保存。称取25.0mg抗坏血酸，用100mL超纯水溶解，制成250μg/mL的抗坏血酸溶液。
在5个干净的15mL比色管中各加入4mL DPPH溶液，再分别加入上述35、40、45、50、55μg/mL的抗坏血酸溶液2mL。另取一比色管，加入4mL的DPPH、2mL的无水乙醇为空白对照组，在常温下避光反应35min后，在波长为517nm处测定吸光度，并绘制标准曲线。所得标准曲线为y＝-0.0082x+0.5182，相关系数R2＝0.9946，说明抗坏血酸浓度在35-45μg/mL时线性关系良好。
记空白对照组吸光度为A0、抗坏血酸组吸光度为A1，则有DPPH自由基清除率(η)公式如(2)式所示：
取1mL实施例6最优条件下制备得到的提取液，加入9mL对应的低共熔溶剂稀释，摇匀后在避光处静置10min，得到待测液。取待测液2mL于三个比色管中，各加入4mL的DPPH溶液，在暗处静置90min，在波长517nm处测定吸光度，带入(2)式中，计算得到DPPH清除率。使用2mL对应的低共熔溶剂加入4mL DPPH为空白对照组。据(2)计算DPPH抑制率。
对使用DES-4在最优条件下的提取液进行DPPH自由基清除能力测定，发现待测液对DPPH自由基清除率为89.77％，抑制率高；标准偏差为0.0017，实验平行性好；每毫升提取液与222.7μg/mL的抗坏血酸抗氧化能力相当。
Claims (6)
1.一种从鸡血藤中提取黄酮类化合物的方法，包括如下步骤：
以胆碱类低共熔溶剂为溶剂，在密闭环境下对鸡血藤进行提取，提取结束后分离出液相，得到鸡血藤总黄酮提取液；
所述胆碱类低共熔溶剂由氢键受体、氢键供体和水组成；
所述氢键受体和所述氢键供体的摩尔比为1：(0.5～2)；
所述氢键受体为氯化胆碱；
所述氢键供体为尿素、三甘醇或甘油。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述胆碱类低共熔溶剂由摩尔比为1：2的氯化胆碱和三甘醇组成。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：
所述提取的条件如下：
所述胆碱类低共熔溶剂的含水量为10％～50％，优选40％；
所述提取的时间为5～35min，优选5min；
所述提取的温度为40～80℃，优选60℃；
所述提取的液料比为10～50mL：1g，优选30mL：1g。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于：
所述提取的条件如下：
所述胆碱类低共熔溶剂的含水量为43％；
所述提取的时间为5min；
所述提取的温度为63℃；
所述提取的液料比为39mL：1g。
5.权利要求1-4中任一项所述的方法提取得到的鸡血藤总黄酮提取液。
6.权利要求5所述的鸡血藤总黄酮提取液在制备抗氧化产品中的应用。
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