CN109956984B - 烟花苷在月季花中的提取分离方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于植物提取技术领域，具体涉及一种烟花苷在月季花中的提取分离方法，具体为：1）取干燥月季花，粉碎，在室温下用石油醚脱脂，再加入乙醇冷浸提取，提取液浓缩，得乙醇总浸膏；2）将乙醇总浸膏用甲醇溶解并拌样，通过D101大孔树脂柱依次用水、20％乙醇、40％乙醇进行洗脱，挥干溶剂，得到40％乙醇洗脱组分；3）40％乙醇洗脱组分通过常压硅胶柱色谱用二氯甲烷‑甲醇进行梯度洗脱，以硅胶薄层色谱检测合并，得到12个组分，按照所得组分极性由小到大依次标记为组分Fr.4‑1至Fr.4‑12；4）第11个组分Fr.4‑11经凝胶柱色谱、高效液相色谱纯化即得。本发明方法可以将月季花中所含的烟花苷快速、有效的提取分离出来，且烟花苷提取产率高。
Description
技术领域
本发明属于植物提取分离技术领域，具体涉及一种从月季花中有效、快速提取分离烟花苷的方法。
背景技术
月季花为蔷薇科蔷薇属植物月季Rosa chinensis Jacq.的干燥花。月季花主要成分有黄酮类化合物如槲皮素、山奈酚；其他甾体类成分如齐墩果酸、β-谷甾醇、菜油甾醇、环桉烯醇等以及挥发油成分如没食子酸等。月季花具有多种药理作用，包括抑制血小板聚集作用、降低血管通透性、抗真菌和抗病毒、抗氧化、增强机体免疫力等。
目前，尚无关于在月季花中提取分离烟花苷的报道。
发明内容
本发明目的在于克服现有技术缺陷，提供一种从月季花中有效、快速提取烟花苷的方法，该方法烟花苷提取产率高。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种烟花苷在月季花中的提取分离方法，其包括如下步骤：
1）取干燥月季花，粉碎，在室温下用石油醚冷浸脱脂，残渣挥干石油醚，再加入乙醇，冷浸提取，提取液浓缩，得乙醇总浸膏；
2）将乙醇总浸膏用甲醇溶解并拌样，通过D101大孔树脂柱依次用水、20％乙醇、40％乙醇进行洗脱，挥干溶剂，得到40％乙醇洗脱组分；
3）40％乙醇洗脱组分通过常压硅胶柱色谱用二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱，以硅胶薄层色谱检测合并，得到12个组分，按照所得组分极性由小到大依次标记为组分Fr.4-1至Fr.4-12；
4）第11个组分Fr.4-11经凝胶柱色谱、高效液相色谱纯化得到1个纯组分，经核磁共振谱图，参考文献数据，及经高效液相与标准品对照，可知此纯品是烟花苷；
其中，高效液相色谱的色谱条件为：采用 RP-18endcapped色谱柱；流动相为甲醇（A）-水（B）；梯度洗脱：0～30 min，40%～90%A，60%～10%B；流速：0.8 mL/min；检测波长：254nm；进样体积：20 μL。
具体的，步骤1）中，石油醚冷浸脱脂2-4次，每次冷浸脱脂时间为2-4天，干燥月季花与石油醚的添加比范围为1kg：4-7L。
具体的，步骤1）中，加入的乙醇体积分数为60-80%，残渣与乙醇的添加比范围为1kg：4-7L，冷浸提取3次，每次冷浸提取时间分别为6-8天、2-4天、2-4天。
进一步优选的，步骤3）中，用体积比为10:1、8:1、5:1、3:1、2:1的二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱。步骤4）中，凝胶柱色谱用甲醇洗脱，以获得较好的分离纯化效果。
烟花苷，又叫莰菲醇-3-O-芸香糖苷，是一种黄酮苷物质，CAS号17650-84-9，结构式如下所示：
而本发明通过对于月季花乙醇总浸膏的提取分离，经过大孔树脂柱色谱、硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、高效液相色谱等分离手段，将月季花中所含的烟花苷快速、有效的提取分离出来，且烟花苷提取产率高。和现有技术相比，本发明方法的有益效果如下：
1）到目前为止，尚未见从植物月季花中得到烟花苷的报道，本发明提供了一种从月季花中提取分离烟花苷的方法，有利于更好的开发利用月季花这一药用植物；
2）本发明提取得到的化合物烟花苷有广泛的生物活性，本发明提供了一种烟花苷的提取方法，便于对其进行深入的研究；
3）本发明使用到的分离材料有大孔树脂、硅胶、凝胶柱色谱，不溶于水和任何溶剂，无毒无味，化学性质稳定，对有机物选择性较好，不受无机盐类及强离子低分子化合物存在的影响，并且易于洗脱再生，有益于多次利用。在纯化过程中所使用的制备型高效液相的分离，则是目前最流行的新型分离方法，省时省力，能够大大提高样品的产率。
附图说明
图1为实施例1提取获得产品的1H-NMR谱图；
图2为实施例1提取获得产品的13C-NMR谱图。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的技术方案作进一步地详细介绍，但本发明的保护范围并不局限于此。
实施例1
一种烟花苷在月季花中的提取分离方法，其包括如下步骤：
1）取干燥月季花2kg，粉碎，在室温下用石油醚冷浸脱脂3次，每次冷浸脱脂时间为3天，残渣挥干石油醚，再加入体积分数为70%的乙醇，冷浸提取3次，每次冷浸提取时间分别为7天、3天、3天，合并提取液并浓缩，得乙醇总浸膏600 g；其中，干燥月季花与石油醚的添加比为1kg：5L，残渣与乙醇的添加比为1kg：5L；
2）将乙醇总浸膏 （600 g）用适量的甲醇溶解并用D101大孔树脂柱（600 g）拌样，经D101大孔树脂柱层析，依次用水、20％乙醇、40％乙醇进行洗脱，挥干溶剂，得到40％乙醇洗脱组分；
3）40％乙醇洗脱组分通过常压硅胶柱色谱用体积比为10:1、8:1、5:1、3:1、2:1的二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱，以硅胶薄层色谱检测合并，得到12个组分，按照所得组分极性由小到大依次标记为组分Fr.4-1至Fr.4-12；
4）第11个组分Fr.4-11（500 mg）经凝胶柱色谱、高效液相色谱纯化得到1个纯组分（20 mg）黄色粉末，经高效液相检测纯度为97.968%，经核磁共振谱图，参考文献数据，及与标准品对照，可知此纯品是烟花苷。
步骤4）中，凝胶柱色谱用纯甲醇洗脱；高效液相色谱的色谱条件为：采用 RP-18endcapped色谱柱；流动相为甲醇（A）-水（B）；梯度洗脱：0～30 min，40%～90%A，60%～10%B；流速：0.8 mL/min；检测波长：254 nm；进样体积：20μL；tR=18.607 min。
上述实施例1提取获得的化合物的鉴定结果列举如下，1H，13C-NMR 图谱见图1和2：
仪器材料：紫外在 UV-210A 紫外光谱测定仪上测定；1H，13C-NMR 图谱→由Bruker am-400 MHz 核磁共振仪测定。TMS 为内标；二维核磁共振图谱由 DRX-500 MHz 核磁共振仪测定；质谱由VG.AUTOSpec-3000 型质谱仪测定。测定条件及结果：黄色粉末 (甲醇), 分子式：C27H30O15: ESI-MS m/z 595 [M+H]+. 1H- NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 1.15(d, 3H, J = 6.2 Hz, H–6′′′), 3.84-3.28 (m, 10H, glu-cose 6H + rhamnose 4H),4.54 (d, 1H, J = 1.5 Hz, H–1′′′), 5.15 (d, 1H, J = 7.3 Hz, H–1′′), 6.23 (d,1H, brs H–6), 6.42 (d, 1H, brs Hz, H–8), 6.91 (d, 2H, J = 8.6 Hz, H–3′, 5′),8.08 (d, 2H, J = 8.6 Hz, H–2′, 6′); 13C -NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 18.8 (C–6′′′), 69.4 (C–6′′), 70.6 (C– 5′′′), 72.3 (C–4′′), 72.9 (C–2′′′), 73.1 (C–3′′′), 74.7 (C–4′′′), 76.6 (C–2′′), 78.0 (C–5′′), 79.0 (C–3′′), 95.8(C–8),100.8(C–6), 103.3 (C–1′′′), 105.4 (C–1′′), 106.5 (C–10), 117.0 (C–3′, 5′),123.6 (C–1′), 133.2 (C–2′, 6′), 136.3 (C–3), 159.4 (C–9), 160.2 (C–4′), 162.3(C–2), 163.8 (C–5), 166.9 (C–7), 180.2 (C–4)。
实施例2
一种烟花苷在月季花中的提取分离方法，其包括如下步骤：
1）取干燥月季花2kg，粉碎，在室温下用石油醚冷浸脱脂2次，每次冷浸脱脂时间为3天，残渣挥干石油醚，再加入体积分数为75%的乙醇，冷浸提取2次，每次冷浸提取时间分别为7天、3天，合并提取液并浓缩，得乙醇总浸膏490 g；其中，干燥月季花与石油醚的添加比为1 kg：6 L，残渣与乙醇的添加比为1 kg：6 L；
2）将乙醇总浸膏（490 g）用适量甲醇溶解并用D101大孔树脂柱（490 g）拌样，经D101大孔树脂柱层析，依次用水、20％乙醇、40％乙醇进行洗脱，挥干溶剂，得到40％乙醇洗脱组分；
3）40％乙醇洗脱组分通过常压硅胶柱色谱用体积比为10:1、8:1、5:1、3:1、2:1的二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱，以硅胶薄层色谱检测合并，得到12个组分，按照所得组分极性由小到大依次标记为组分Fr.4-1至Fr.4-12；
4）第11个组分Fr.4-11（300 mg）经凝胶柱色谱、高效液相色谱纯化得到1个纯组分（12 mg）黄色粉末，经高效液相检测纯度为97.668%，即为烟花苷。
步骤4）中，凝胶柱色谱用甲醇洗脱；高效液相色谱的色谱条件为：采用 RP-18endcapped色谱柱；流动相为甲醇（A）-水（B）；梯度洗脱：0～30 min，40%～90%A，60%～10%B；流速：0.8 mL/min；检测波长：254 nm；进样体积：20μL；tR=18.607 min。
Claims (4)
1.一种烟花苷在月季花中的提取分离方法，其特征在于，包括如下步骤：
1）取干燥月季花，粉碎，在室温下用石油醚冷浸脱脂，残渣挥干石油醚，再加入乙醇，冷浸提取，提取液浓缩，得乙醇总浸膏；
2）将乙醇总浸膏用甲醇溶解并拌样，通过D101大孔树脂柱依次用水、20％乙醇、40％乙醇进行洗脱，挥干溶剂，得到40％乙醇洗脱组分；
3）40％乙醇洗脱组分通过常压硅胶柱色谱用二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱，以硅胶薄层色谱检测合并，得到12个组分，按照所得组分极性由小到大依次标记为组分Fr.4-1至Fr.4-12；
4）第11个组分Fr.4-11经凝胶柱色谱、高效液相色谱纯化得到1个纯组分，即为烟花苷；
其中，高效液相色谱的色谱条件为：采用 RP-18endcapped色谱柱；流动相为甲醇（A）-水（B）；梯度洗脱：0～30 min，40%～90%A，60%～10%B；流速：0.8 mL/min；检测波长：254 nm；进样体积：20 μL；
步骤4）中，凝胶柱色谱用甲醇洗脱。
2.如权利要求1所述烟花苷在月季花中的提取分离方法，其特征在于，步骤1）中，石油醚冷浸脱脂2-4次，每次冷浸脱脂时间为2-4天，干燥月季花与石油醚的添加比范围为1kg：4-7L。
3.如权利要求1所述烟花苷在月季花中的提取分离方法，其特征在于，步骤1）中，加入的乙醇体积分数为60-80%，残渣与乙醇的添加比范围为1kg：4-7L，冷浸提取3次，每次冷浸提取时间分别为6-8天、2-4天、2-4天。
4.如权利要求1所述烟花苷在月季花中的提取分离方法，其特征在于，步骤3）中，用体积比为10:1、8:1、5:1、3:1、2:1的二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱。
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