CN116046503A - 一种能够增强特异性染色效果并降低染色背景的抗原修复液及其应用 - Google Patents
一种能够增强特异性染色效果并降低染色背景的抗原修复液及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116046503A CN116046503A CN202310345992.0A CN202310345992A CN116046503A CN 116046503 A CN116046503 A CN 116046503A CN 202310345992 A CN202310345992 A CN 202310345992A CN 116046503 A CN116046503 A CN 116046503A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- antigen retrieval
- staining
- liquid
- abcam
- retrieval
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 77
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 77
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 77
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title claims abstract description 70
- 238000010186 staining Methods 0.000 title claims abstract description 59
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 35
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 title claims abstract description 14
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 160
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol Substances OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 98
- 229960004063 propylene glycol Drugs 0.000 claims abstract description 59
- 235000013772 propylene glycol Nutrition 0.000 claims abstract description 58
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 23
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims abstract description 14
- DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N (R)-(-)-Propylene glycol Chemical compound C[C@@H](O)CO DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 14
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 7
- 238000012151 immunohistochemical method Methods 0.000 claims description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 3
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 claims description 3
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 abstract description 19
- 238000001035 drying Methods 0.000 abstract description 3
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 abstract description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 60
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 15
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 15
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 14
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 14
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 12
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 8
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 8
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 7
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 5
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 5
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 5
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 4
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 4
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 210000002741 palatine tonsil Anatomy 0.000 description 2
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 2
- 210000005059 placental tissue Anatomy 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000006059 cover glass Substances 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000003517 fume Substances 0.000 description 1
- 230000001744 histochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000005965 immune activity Effects 0.000 description 1
- 238000002991 immunohistochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 238000010827 pathological analysis Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004018 waxing Methods 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明提供了一种能够增强特异性染色效果并降低染色背景的抗原修复液及其应用，所述抗原修复液包括利用稀释剂稀释后的Abcam修复液，所述稀释剂包括1,2‑丙二醇和/或乙二醇。在免疫组化染色过程中，利用Leica Bond RX自带修复液无法产生特异性染色，不能满足染色要求；采用Abcam修复液单次修复会导致切片蒸干，多次修复背景较深，需要对Abcam修复液调整以满足实验需求。本发明创造性地将Abcam修复液用含1,2‑丙二醇和/或乙二醇的稀释剂稀释，成功实现了特异性染色较强的前提下，背景明显降低的效果。
Description
技术领域
本发明属于免疫组织化学领域，具体涉及一种能够增强特异性染色效果并降低染色背景的抗原修复液及其应用。
背景技术
免疫组织化学技术是近年来病理诊断迅速发展的检测技术，作为一种重要的病理辅助诊断方法，在临床的应用中日益受到重视。随着全自动免疫组化染色仪的应用推广，对于染色质量的要求也日益提高。
组织（或细胞标本）中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定过程中发生了蛋白之间交联及醛基的封闭作用，导致抗原决定簇的三维结构发生异常改变，使抗原决定簇被掩盖或原来位于表面的一些抗原决定簇因折叠而形成隐蔽的抗原决定簇，因此抗原的理化性质发生了显著的变化，表位空间结构改变导致许多抗原免疫活性丢失，使得相当部分抗原不能与抗体充分结合，从而影响免疫组织化学结果。但这一变化是可逆的，可通过抗原修复，使组织抗原决定簇重新暴露，提高抗原检测率。
目前商业化的抗原修复液主要为柠檬酸盐修复液（pH 6.0）、EDTA修复液（pH 8.0~9.0）和Tris缓冲液（pH 10.0），以上修复液均以超纯水为稀释剂或稀释液，采用水浴热修复法修复抗原。由于修复液沸点均在100℃左右，无法满足Leica Bond RX热修复20分钟的要求。Leica Bond RX自带修复液Leica ER1(AR9961)或ER2(AR9640)采用特殊添加剂，提高了修复液的沸点，避免高温蒸发，减少试剂用量，以满足实验要求，但是其仍然存在无特异性染色的问题，不能满足染色需求。
因此，在免疫组化实验中如何提高特异性染色效果，成为了本领域亟待解决的问题。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种能够增强特异性染色效果并降低染色背景的抗原修复液及其应用。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种能够增强特异性染色效果并降低染色背景的抗原修复液，所述抗原修复液包括利用稀释剂稀释后的Abcam修复液，所述稀释剂包括1,2-丙二醇和/或乙二醇，所述Abcam修复液为市售产品，厂家为Abcam，产品名为Universal HIERantigen retrieval试剂，中文名称为通用HIER抗原修复试剂。
优选地，所述稀释后的Abcam修复液的浓度为0.8×~1.2×，例如0.8×、0.9×、1×、1.1×、1.2×等，所述稀释剂中1,2-丙二醇和/或乙二醇的体积占比为35-65%，例如35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%等。
优选地，所述稀释剂为35-45%的1,2-丙二醇水溶液或55-65%的乙二醇水溶液。
上述35-45%（指1,2-丙二醇所占体积分数）中的具体数值例如35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%等。
上述55-65%（指乙二醇所占体积分数）中的具体数值例如55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%等。
第二方面，本发明提供如第一方面所述的能够增强特异性染色效果并降低染色背景的抗原修复液在免疫组化中的应用。
第三方面，本发明提供一种抗原修复方法，所述抗原修复方法包括利用如第一方面所述的抗原修复液进行抗原修复。
优选地，所述抗原修复方法包括：利用抗原修复液冲洗待测样本后，将待测样本与抗原修复液在95-99℃下共孵育，再用抗原修复液冲洗。
上述95-99℃中的具体数值例如95℃、95.5℃、96℃、96.5℃、97℃、97.5℃、98℃、98.5℃、99℃等。
优选地，所述共孵育的时间为18-22 min，例如18 min、19 min、20 min、21 min、22min等。
优选地，所述冲洗在15-40℃下进行，例如15℃、17℃、20℃、22℃、25℃、27℃、30℃、32℃、35℃、37℃、40℃等。
第四方面，本发明提供一种免疫组化方法，所述免疫组化方法包括对待测样本依次进行脱蜡、抗原修复、抗体孵育、显色和染色，所述抗原修复采用如第三方面所述的抗原修复方法进行。
优选地，所述免疫组化方法在Leica Bond RX平台上进行。
本发明所述的数值范围不仅包括上述列举的点值，还包括没有列举出的上述数值范围之间的任意的点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
在免疫组化染色过程中，利用Leica Bond RX自带修复液无法产生特异性染色，不能满足染色要求；采用Abcam修复液（市售，配方未知）单次修复会导致切片蒸干，多次修复背景较深，需要对Abcam修复液调整以满足实验需求。
本发明创造性地将Abcam修复液的稀释剂（常规使用时用水稀释）以特定的比例更换为丙二醇或乙二醇，成功实现了特异性染色较强的前提下，背景明显降低，其中以35-45%丙二醇或55-65%乙二醇效果最佳。
值得注意的是，利用丙二醇或乙二醇来稀释常用的柠檬酸钠修复液和EDTA修复液后进行抗原修复，均无法实现特异性染色，说明仅仅单纯的降低沸点，并不能实现增强特异性染色并降低染色背景的效果，丙二醇或乙二醇只特定适用Abcam修复液，才能实现此效果，这可能是因为Abcam修复液中存在某些特殊组分，与特定浓度的丙二醇或乙二醇共同作用，从而实现了增强特异性染色并降低染色背景的效果。
附图说明
图1是采用Leica自带的两款修复液进行抗原修复后得到的染色效果图；
图2是采用市售Abcam修复液进行抗原修复后得到的染色效果图；左下角标尺为200 μm，分成5小格，每格40 μm；
图3是采用Abcam修复液（40%丙二醇）进行抗原修复后得到的染色效果图；左下角标尺为200 μm，分成5小格，每格40 μm；
图4是采用Abcam修复液（60%丙二醇）进行抗原修复后得到的染色效果图；左下角标尺为200 μm，分成5小格，每格40 μm；
图5是采用Abcam修复液（80%丙二醇）进行抗原修复后得到的染色效果图；左下角标尺为200 μm，分成5小格，每格40 μm。
图6是采用Abcam修复液（35%丙二醇）进行抗原修复后得到的染色效果图；左下角标尺每小格20 μm。
图7是采用Abcam修复液（45%丙二醇）进行抗原修复后得到的染色效果图；左下角标尺每小格20 μm。
图8是采用Abcam修复液（60%乙二醇）进行抗原修复后得到的染色效果图；左下角标尺每小格20 μm。
图9是采用Abcam修复液（55%乙二醇）进行抗原修复后得到的染色效果图；左下角标尺每小格20 μm。
图10是采用Abcam修复液（65%乙二醇）进行抗原修复后得到的染色效果图；左下角标尺每小格20 μm。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
以下实施例中，若无特殊说明，所有的试剂及耗材均购自本领域常规试剂厂商；若无特殊说明，所用的实验方法和技术手段均为本领域常规的方法和手段。
本发明具体实施方式涉及的仪器、试剂及主要方法程序列于表1-表4。
表1 仪器设备
表2 试剂信息
表3 染色程序
表4 抗原修复液
试剂配制：
CD137一抗工作液：取10 μL CD137原液加入到490 μL样本稀释液中，混匀即可。
Abcam修复液（40%丙二醇）：取3.6 mL丙二醇，5.4 mL超纯水，1 mL 10× Abcam修复液，混匀即可。
Abcam修复液（60%丙二醇）：取5.4 mL丙二醇，3.6 mL超纯水，1 mL 10× Abcam修复液，混匀即可。
Abcam修复液（80%丙二醇）：取7.2 mL丙二醇，1.8 mL超纯水，1 mL 10× Abcam修复液，混匀即可。
Abcam修复液（30%丙二醇）：取2.7 mL丙二醇，1.8 mL超纯水，1 mL 10× Abcam修复液，混匀即可。
Abcam修复液（35%丙二醇）：取3.15 mL丙二醇，1.8 mL超纯水，1 mL 10× Abcam修复液，混匀即可。
Abcam修复液（45%丙二醇）：取4.05 mL丙二醇，1.8 mL超纯水，1 mL 10× Abcam修复液，混匀即可。
Abcam修复液（40%乙二醇）：取3.6 mL乙二醇，3.6 mL超纯水，1 ml 10× Abcam修复液，混匀即可。
Abcam修复液（60%乙二醇）：取5.4 mL乙二醇，3.6 mL超纯水，1 ml 10× Abcam修复液，混匀即可。
Abcam修复液（65%乙二醇）：取5.85 mL乙二醇，3.6 mL超纯水，1 ml 10× Abcam修复液，混匀即可。
Abcam修复液（55%乙二醇）：取4.95 mL乙二醇，3.6 mL超纯水，1 ml 10× Abcam修复液，混匀即可。
75%乙醇：取150 mL无水乙醇，50 mL超纯水，混匀即可。
95%乙醇：取190 mL无水乙醇，10 mL超纯水，混匀即可。
柠檬酸钠抗原修复液（40%丙二醇）：取40 mL丙二醇加入到60 mL超纯水中混匀得到40%丙二醇，取100 µL柠檬酸钠抗原修复液（50×）加入到4900 µL 40%丙二醇中混匀即可。
EDTA抗原修复液（40%丙二醇）：取40 mL丙二醇加入到60 mL超纯水中混匀得到40%丙二醇，取100 µL EDTA抗原修复液（50×）加入到4900 µL 40%丙二醇中混匀即可。
免疫组化实验步骤
参照Leica Bond RX的使用说明，具体如下：
选择需检验的组织切片和试剂类型和数量，通过软件进行“试剂设置”步骤、“玻片设置”步骤、“程序设置”步骤等相关设置，确定染色运行程序，打印标签，对应的组织切片上贴好标签，将贴好标签的玻片和试剂放入染色机中进行质检，质检通过后，进入染色程序，具体如下：
3.1. Bake and Dewax Protocol（烤片与脱蜡）：
3.1.1玻片加热至60℃，烤片30 min；
3.1.2玻片温度升至72℃，加入150 µL Bond Dewax Solution（脱蜡液），孵育30 s后除去Bond Dewax Solution；
3.1.3玻片温度维持在72℃，再加入150 µL Bond Dewax Solution洗涤一次，除去Bond Dewax Solution；
3.1.4玻片温度降至室温，加入150 µL Bond Dewax Solution洗涤一次，除去BondDewax Solution；
3.1.5室温（25℃左右）下，加入150 µL无水乙醇冲洗并除去无水乙醇，共洗涤3次；
3.1.6室温下，加入150 µL Bond Wash Solution（清洗液）冲洗并除去Bond WashSolution，共洗涤2次；
3.1.7室温下，加入150 µL Bond Wash Solution，孵育5 min后除去Bond WashSolution。
3.2. 热抗原修复：
3.2.1室温下，加入150 µL抗原修复液冲洗玻片一次；
3.2.2室温下，加入150 µL抗原修复液，玻片加热至98℃，孵育20 min，降至室温；
3.2.3室温下，加入150 µL抗原修复液冲洗玻片一次；
3.2.4室温下，加入150 µL Bond Wash Solution冲洗并除去 Bond WashSolution，共洗涤5次；
3.3 .IHC Protocol（免疫组化步骤）：
3.3.1室温下，加入150 µL Peroxide Block（过氧化物封闭液），孵育5 min；
3.3.2室温下，加入150 µL Bond Wash Solution冲洗玻片并除去Bond WashSolution，洗涤3次；
3.3.3室温下，加入150 µL—抗试剂，孵育30 min；
3.3.4室温下，加入150 µL Bond Wash Solution冲洗玻片并除去Bond WashSolution，洗涤3次；
3.3.5室温下，加入150 µL Post Primary，孵育8 min后除去Post Primary；
3.3.6室温下，加入150 µL Bond Wash Solution，室温孵育2 min后除去BondWash Solution，重复3次；
3.3.7室温下，加入150 µL Polymer，室温孵育8 min后除去Polymer；
3.3.8室温下，加入150 µL Bond Wash Solution，室温孵育2 min后除去 BondWash Solution，重复2次；
3.3.9室温下，加入150 µL Deionized Water（去离子水），洗涤1次，除去Deionized Water；
3.3.10室温下，加入150 µL Mixed DAB Refine（DAB色原）冲洗并除去Mixed DABRefine；
3.3.11室温下，加入150 µL Mixed DAB Refine，室温孵育10 min，吸去Mixed DABRefine；
3.3.12室温下，加入150 µL Deionized Water冲洗玻片及除去Deionized Water，重复3次；
3.3.13室温下，加入150 µL Hematoxylin（苏木精），室温孵育5 min后除去Hematoxylin；
3.3.14室温下，加入150 µL Deionized Water冲洗玻片1次；
3.3.15室温下，加入150 µL Bond Wash Solution冲洗玻片1次；
3.3.16室温下，再加入150 µL Deionized Water冲洗玻片1次。
3.4. 脱水透明
3.4.1染色程序结束后，取出玻片，甩去多余的Deionized Water；
3.4.3在95%的乙醇中浸泡脱水，共2 min；
3.4.4在无水乙醇中浸泡两次，每次2 min；
3.4.5在二甲苯中浸泡两次，每次5 min；
3.5. 封片
3.5.1取出切片沥干，用吹风机冷风吹干切片；
3.5.2滴加1~2滴中性树胶于切片组织上（视切片组织数量和大小而定），盖上盖玻片；
3.5.3 检查切片，确保切片组织完全被中性树胶覆盖住，且组织中没有较大气泡（若有较大气泡，通过挤压盖玻片排出）；
3.5.4将切片放置于通风橱中晾干；
4.镜下观察切片。
抗原修复效果
分别利用表4中各实施例、对比例中的抗原修复液，按照上述免疫组化实验步骤，对组织切片进行免疫组化分析，组织样本为同一批次获取的正常人类的扁桃体组织、胎盘组织和胃组织，各组织样本的切片制作（固定，脱水，透明，浸蜡，包埋，切片，贴片等）采用统一方法进行，为本领域常规操作。
（1）分别采用Leica自带的两款修复液（Leica Bond RX平台配套的修复液）：LeicaER1和Leica ER2进行抗原修复，染色结果如图1所示：扁桃体组织、胎盘组织和胃组织均无特异性染色，无法满足染色要求。
（2）采用市售Abcam修复液进行抗原修复（注：单次修复20 min会导致切片蒸干；因此换用多次修复：4次，每次5 min；其他实施例、对比例均采用单次修复即可），染色结果如图2所示：切片组织上出现了特异性染色，但是染色背景较高。
（3）分别采用Abcam修复液（30%丙二醇）、Abcam修复液（40%丙二醇）、Abcam修复液（60%丙二醇）、Abcam修复液（80%丙二醇）进行抗原修复，结果：Abcam修复液（30%丙二醇）会导致切片蒸干，无法完成染色；Abcam修复液（40%丙二醇）、Abcam修复液（60%丙二醇）、Abcam修复液（80%丙二醇）均能完成染色，出现特异性染色，且在一定程度上降低染色背景（图3-图5），其中Abcam修复液（40%丙二醇）的效果显著好于其他组：特异性染色较强，背景明显降低（图3）。
（4）进一步地，采用Abcam修复液（35%丙二醇）、Abcam修复液（45%丙二醇）进行抗原修复，结果为：Abcam修复液（35%丙二醇）和Abcam修复液（45%丙二醇）均能完成染色，呈现较好的特异性染色，背景较低（图6-图7）。
（5）分别采用Abcam修复液（40%乙二醇）、Abcam修复液（60%乙二醇）、Abcam修复液（80%丙乙二醇）进行抗原修复，结果：Abcam修复液（60%乙二醇）的效果显著好于其他组（图8）：特异性染色较强，背景明显降低，与Abcam修复液（40%丙二醇）染色效果基本一致。
（6）进一步地，采用Abcam修复液（55%乙二醇）、Abcam修复液（65%乙二醇）进行抗原修复，结果：Abcam修复液（55%乙二醇）和Abcam修复液（65%乙二醇）均能完成染色，呈现较好的特异性染色，背景较低（图9-图10）。
（7）另外，还尝试利用40%丙二醇来稀释常用的柠檬酸钠修复液和EDTA修复液后进行抗原染色，结果：采用柠檬酸钠修复液（40%丙二醇）和EDTA修复液（40%丙二醇）修复的样本，均无特异性染色，说明仅仅单纯的降低沸点，并不能实现提高染色效果（增强特异性染色并降低染色背景），丙二醇或乙二醇只特定适用Abcam修复液，才能实现此效果，这可能是因为Abcam修复液中存在某些特殊组分，与特定浓度的丙二醇或乙二醇共同作用，从而实现了增强特异性染色并降低染色背景的效果。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的一种能够增强特异性染色效果并降低染色背景的抗原修复液及其应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
Claims (10)
1.一种能够增强特异性染色效果并降低染色背景的抗原修复液，其特征在于，所述抗原修复液包括利用稀释剂稀释后的Abcam修复液，所述稀释剂包括1,2-丙二醇和/或乙二醇。
2.如权利要求1所述的能够增强特异性染色效果并降低染色背景的抗原修复液，其特征在于，所述稀释后的Abcam修复液的浓度为0.8×~1.2×，所述稀释剂中1,2-丙二醇和/或乙二醇的体积占比为35-65%。
3.如权利要求2所述的能够增强特异性染色效果并降低染色背景的抗原修复液，其特征在于，所述稀释剂为35-45%的1,2-丙二醇水溶液或55-65%的乙二醇水溶液。
4.如权利要求1-3中任一项所述的能够增强特异性染色效果并降低染色背景的抗原修复液在免疫组化中的应用。
5.一种抗原修复方法，其特征在于，所述抗原修复方法包括利用如权利要求1-3中任一项所述的抗原修复液进行抗原修复。
6.如权利要求5所述的抗原修复方法，其特征在于，所述抗原修复方法包括：利用抗原修复液冲洗待测样本后，将待测样本与抗原修复液在95-99℃下共孵育，再用抗原修复液冲洗。
7.如权利要求6所述的抗原修复方法，其特征在于，所述共孵育的时间为18-22 min。
8.如权利要求6或7所述的抗原修复方法，其特征在于，所述冲洗在15-40℃下进行。
9.一种免疫组化方法，其特征在于，所述免疫组化方法包括对待测样本依次进行脱蜡、抗原修复、抗体孵育、显色和染色，所述抗原修复采用如权利要求5-8中任一项所述的抗原修复方法进行。
10.如权利要求9所述的免疫组化方法，其特征在于，所述免疫组化方法在Leica BondRX平台上进行。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310345992.0A CN116046503B (zh) | 2023-04-03 | 2023-04-03 | 一种能够增强特异性染色效果并降低染色背景的抗原修复液及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310345992.0A CN116046503B (zh) | 2023-04-03 | 2023-04-03 | 一种能够增强特异性染色效果并降低染色背景的抗原修复液及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116046503A true CN116046503A (zh) | 2023-05-02 |
| CN116046503B CN116046503B (zh) | 2023-06-23 |
Family
ID=86129834
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310345992.0A Active CN116046503B (zh) | 2023-04-03 | 2023-04-03 | 一种能够增强特异性染色效果并降低染色背景的抗原修复液及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116046503B (zh) |
Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103282778A (zh) * | 2011-11-30 | 2013-09-04 | 王小亚 | 一种抗原修复液及抗原修复方法 |
| CN104744588A (zh) * | 2015-04-03 | 2015-07-01 | 福州大学 | 一种用于制备抗体的抗原预处理方法 |
| CN105067816A (zh) * | 2015-07-16 | 2015-11-18 | 三峡大学 | 一种即用型抗体及其应用 |
| CN107643396A (zh) * | 2017-09-15 | 2018-01-30 | 如皋福大工程技术研究院有限公司 | 一种免疫组化抗原修复方法 |
| CN113495138A (zh) * | 2021-06-22 | 2021-10-12 | 南京弗瑞思生物科技有限公司 | 一种组织切片抗原修复液及其使用方法 |
| CN113804661A (zh) * | 2021-08-12 | 2021-12-17 | 深圳市锦欣医疗科技创新中心有限公司 | 一种评估子宫内膜容受性的试剂盒及方法 |
| CN115165511A (zh) * | 2022-09-09 | 2022-10-11 | 迈杰转化医学研究(苏州)有限公司 | Pd-l1免疫组化检测质控品和参考品 |
| CN115615783A (zh) * | 2022-11-11 | 2023-01-17 | 中南大学 | 石蜡组织切片的制备方法 |
| CN115856301A (zh) * | 2022-12-15 | 2023-03-28 | 江苏阔然生物医药科技有限公司 | 一种评估肿瘤内三级淋巴结构的试剂盒及其方法 |
-
2023
- 2023-04-03 CN CN202310345992.0A patent/CN116046503B/zh active Active
Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103282778A (zh) * | 2011-11-30 | 2013-09-04 | 王小亚 | 一种抗原修复液及抗原修复方法 |
| CN104744588A (zh) * | 2015-04-03 | 2015-07-01 | 福州大学 | 一种用于制备抗体的抗原预处理方法 |
| CN105067816A (zh) * | 2015-07-16 | 2015-11-18 | 三峡大学 | 一种即用型抗体及其应用 |
| CN107643396A (zh) * | 2017-09-15 | 2018-01-30 | 如皋福大工程技术研究院有限公司 | 一种免疫组化抗原修复方法 |
| CN113495138A (zh) * | 2021-06-22 | 2021-10-12 | 南京弗瑞思生物科技有限公司 | 一种组织切片抗原修复液及其使用方法 |
| CN113804661A (zh) * | 2021-08-12 | 2021-12-17 | 深圳市锦欣医疗科技创新中心有限公司 | 一种评估子宫内膜容受性的试剂盒及方法 |
| CN115165511A (zh) * | 2022-09-09 | 2022-10-11 | 迈杰转化医学研究(苏州)有限公司 | Pd-l1免疫组化检测质控品和参考品 |
| CN115615783A (zh) * | 2022-11-11 | 2023-01-17 | 中南大学 | 石蜡组织切片的制备方法 |
| CN115856301A (zh) * | 2022-12-15 | 2023-03-28 | 江苏阔然生物医药科技有限公司 | 一种评估肿瘤内三级淋巴结构的试剂盒及其方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 北京中山生物技术有限公司研发部: "抗原修复技术条件的选择", 《临床与实验病理学杂志》 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN116046503B (zh) | 2023-06-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN1764469B (zh) | 巴氏染色方法 | |
| CN103940658A (zh) | 一种组织细胞标本石蜡包埋的制作方法 | |
| CN103116018A (zh) | 一种免疫组化质量控制参照物及质量控制方法 | |
| CN108051582B (zh) | 一种改良的免疫组化修复液 | |
| CN110346552A (zh) | 一种通用型抗原修复缓冲液 | |
| CN116046503B (zh) | 一种能够增强特异性染色效果并降低染色背景的抗原修复液及其应用 | |
| RU2536502C2 (ru) | Цитологическая и гистологическая фиксирующая композиция и способ окрашивания | |
| CN108287097A (zh) | 一种硫堇伊红染色液及制备方法和应用 | |
| CN110257483A (zh) | 用于原位杂交的杂交液、其制备方法及检测试剂盒 | |
| CN108195653A (zh) | 一种复染染色试剂盒及制备和应用 | |
| Sathawane et al. | Nuances of the Papanicolaou stain | |
| CN106940376A (zh) | 蛋白质检测 | |
| CN111122876A (zh) | Cd47抗体在肝癌放疗敏感性检测试剂盒中的应用 | |
| CN110068491A (zh) | 一种高灵敏度低背景考马斯亮蓝染色液及其使用方法 | |
| JP2798431B2 (ja) | 病理組織の検査方法およびそれに用いる脱水処理剤 | |
| CN107219104A (zh) | 一种克氏原螯虾染色体的制备方法 | |
| US3440317A (en) | Cell coloring process and composition for cytological examination | |
| GB2372811A (en) | Staining physiological samples | |
| CN110006724A (zh) | 采用巴氏和革兰氏染色方法检测滴虫用试剂 | |
| CN111999144B (zh) | 一种防掉片细胞dna定量染色方法 | |
| CN105648035B (zh) | 一种α-醋酸萘酚酯酶染色试剂盒 | |
| CN117929065A (zh) | 一种新型通用型免疫组化抗原修复液及其制作方法 | |
| RU2798117C1 (ru) | Способ выявления тучных клеток на гистологических препаратах сердца человека | |
| CN112798373B (zh) | 一种血液本周氏蛋白的检测方法 | |
| CN108645683A (zh) | 一种软脂固定液及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |