CN103282778A

CN103282778A - 一种抗原修复液及抗原修复方法

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Publication number: CN103282778A
Application number: CN2011800241360A
Authority: CN
Inventors: 熊玉林; 林齐心; 王小亚
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2011-11-30
Filing date: 2011-11-30
Publication date: 2013-09-04
Also published as: WO2013078650A1

Abstract

提供一种抗原修复液和抗原修复方法，用于免疫组织和细胞的化学染色过程中的抗原修复。所述抗原修复液为衣康酸、衣康酸酐或柠康酸水溶液。所述抗原修复方法为采用上述抗原修复液对组织切片进行高温或高温高压修复。提供的抗原修复液和抗原修复方法具有染色质量高，可重现性、安全性、稳定性好的优点。

Description

一种抗原修复液及抗原修复方法技术领域本发明属于生物医学领域，具体地，本发明涉及一种抗原修复液，用于暴露组织细胞中因醛固定所屏蔽的抗原，即免疫组织化学或免疫细胞化学染色过程中的抗原修复过程。技术背景自从 1991年石善溶教授发明了热抗原修复技术后，该技术已在全世界得到广泛的应用，无数关于病理学和形态学的临床研究文献及著作得到发表。目前，最为常用的抗原修复液主要有三种： 0.01mol/L， pH6.0 的柠檬酸缓冲液； 0.1mol/L , pH9.0~pH10.0 含 5%尿素的 Tris-HCl 缓冲液以及 0.01mol/L， pH8.0~pH9.0 的 EDTA 溶液。特殊情况下采用胰酶或胃酶修复。少数采用 0.01mol/L, pH7.0含 5%尿素的柠檬酸缓冲液；常用的抗原修复方法为将组织切片浸泡于抗原修复液中加热至沸或高压处理适当的时间。但是目前的抗原修复液对某些抗原的修复效果并不是最佳的，染色强度也有待提高，而且在操作过程中往往要将大部分需要修复的组织切片采用不同的修复方式，不仅操作繁琐，而且浪费试剂和时间。发明内容本发明的目的在于提供一种效果好、应用广、无毒、无刺激性气味、无腐蚀性的抗原修复液及抗原修复方法，用于免疫组织化学或免疫细胞化学染色过程中暴露因醛固定而屏蔽的抗原。

本发明首先提供了一种抗原修复液，所述抗原修复液为衣康酸、衣康酸酐或柠康酸水溶液。

其中所述的衣康酸、衣康酸酐或柠康酸水溶液的浓度为 0.00001~1.0mol/L， H为 1.0~12.0。

优选地，所述的衣康酸、衣康酸酐或柠康酸水溶液的浓度为 0.0001~0.1mol/L, pH为 5.0~10.0。更优选地，所述的衣康酸、衣康酸酐或柠康酸水溶液的浓度为 0.001~0.01mol/L, pH为 7.0 8.0。其抗原修复效果强于或等于 EDTA和柠檬酸抗原修复效果。

所述的衣康酸、衣康酸酐或柠康酸水溶液是将衣康酸、衣康酸酐或柠康酸溶于蒸馏水或去离子水中。用 0.5~8mol/L的 NaOH溶液调节衣康酸、衣康酸酐或柠康酸水溶液的 pH值。

本发明另外提供了一种抗原修复方法，采用上述的抗原修复液对组织切片进行高温或高温高压修复。

采用的加热设备为灭菌锅、高压锅、电锅、蒸煮锅、微波炉或水浴锅。本发明的突出优点在于：（1 )本发明的抗原修复液，其修复效果强于常规的抗原修复液（0.01 mol/L， pH6.0的柠檬酸缓冲液； 0.1 mol/L， pH9.0~pH10.0含 5%尿素的 Tris-HCl缓冲液以及 0.01 mol/L, pH8.0~pH9.0的 EDTA溶液等），染色结果显示：染色程度深、组织形态清晰、细胞定位准确、无背景染色、无皱片及脱片现象、可重现性和稳定性好。（2) 目前大部分抗体都需采用 EDTA或柠檬酸修复液分开进行抗原修复，而本发明采用的抗原修复液可对 95%以上的抗原一起进行抗原修复，而无需采用不同的抗原修复液分开进行抗原修复，而且工作液浓度很低。因此，不仅操作简单、而且节约时间和试剂。（3)衣康酸、衣康酸酐或柠康酸为粉末状、易溶于水、无毒、无挥发性、无刺激性气味和腐蚀性。

总之，本发明提供的抗原修复液及抗原修复方法不仅具有良好的可重现性、安全性、稳定性和应用性，而且与其它抗原修复液及抗原修复方法相比，具有更高质量的染色结果，因此对提高临床病理诊断的重现性和减少误诊和漏诊的可能性具有重要的意义。具体实施方式本发明是免疫组织化学和免疫细胞化学过程中非常有效的抗原修复方法。用于激活组织细胞中因醛固定而屏蔽的抗原，使之能与对应的抗体发生免疫反应。

配制抗原修复液所用的水不应含有任何杂质，最好是去离子水或蒸馏水。衣康酸、衣康酸酐或柠康酸在抗原修复液中浓度可以为 0.00001~1.0mol/L。

该抗原修复液 pH范围可以为 pH1.0~pH12.0。

特别地，该抗原修复液的浓度范围为 0.00001~1.0mol/L，pH为 ρΗ1.0~ρΗ12.0。目前，绝大部分病理组织都是经醛固定和石蜡包埋处理的，醛固定后，组织细胞内的蛋白会和醛形成一种 "亚甲基桥"交联，从而屏蔽了抗原表位，使之不能与相应抗原发生免疫反应。在加热的条件下，衣康酸、衣康酸酐或柠康酸溶液可以破坏这种 "亚甲基桥"交联，使细胞内抗原重新暴露出来，从而能够与相应抗体发生免疫反应，进而可进行免疫组织化学或免疫细胞化学染色。抗原修复步骤可以在脱蜡之后，内源性过氧化物酶阻断剂处理之前；也可以在内源性过氧化物酶阻断剂处理之后，加入一抗之前。

在不破坏组织形态和细胞内抗原的前提下，抗原修复可采取足够的时间来破坏醛固定引起的 "亚甲基桥"交联。所用的时间取决于温度、抗原修复液浓度、醛固定的时间和组织切片的厚度。

采用水浴锅加热， 60~80°C处理 12h以上或过夜。

采用水浴锅加热， 80~98°C处理 30~90min

采用水浴锅加热， 98~100°C处理 20~45min

采用电锅、蒸煮锅、微波炉等加热器加热， 10CTC处理 15~20min

采用高压锅加热， 121 °C处理 l~10min

下面结合具体实施例对本发明进行详细说明，以下实施例是为了进一步说明本发明，但不应视为限制本发明。

实施例 1 :

研究对象为甲醛固定-石蜡包埋的淋巴瘤、扁桃体、恶性间皮瘤、肺腺癌、甲状腺癌、食道鳞癌、乳腺癌、肺癌、慢性淋巴结炎、霍奇金淋巴瘤、乳腺浸润性导管癌、肺鳞癌、结肠管状腺癌组织（X X医院病理科）。检测的目标抗原有： CD4 CD8 CD10 CD15 CD30 Bcl-6 WT1 COX2 CyclinDl TTF-1 Ki-67 PCNA ER P21 D2-40 Bob-l p53 ERCC1 TOPO II MLH1 (所列出的目标抗原并非与组织一一对应，因为一种组织可以表达多种目标抗原，一种目标抗原也可在多种组织中表达）。

石蜡组织切片通过常规二甲苯脱蜡、梯度酒精水化、自来水冲洗后进行抗原修复。抗原修复步骤为：将切片置于适量已稀释成工作液的衣康酸、衣康酸酐或柠康酸抗原修复液（800-1500mL，浓度为 0.01mol/L pH分别为 ρΗ1.0 ρΗ5.0 ρΗ6.0 ρΗ7.0 ρΗ8.0 ρΗ9.0 ρΗΙΟ.Ο, ρΗ12.0)于蒸煮锅中 100°C加热 20分钟或压力锅中 121 °C处理 1.5分钟。同时设置阳性对照和阴性对照，其中阳性对照分为 EDTA修复（将切片置于 pH9.0的 EDTA溶液中 100°C加热 20分钟）和柠檬酸修复（将切片置于 pH6.0的柠檬酸溶液中 121 °C加热 1.5分钟）；阴性对照中组织切片不进行抗原修复处理；其中每种抗原修复所用的测试液与阳性对照采用加热方法相同。抗原修复完成后加入过氧化物酶阻断剂，室温孵育 10分钟， PBS 冲洗 3 X 3分钟。加入一抗，室温孵育 1小时， PBS冲洗 3 X 3分钟。加入二抗，室温孵育 15分钟， PBS冲洗 3 X 3分钟。加入 DAB显色液，室温孵育 5分钟，自来水冲洗终止显色，苏木素复染， PBS返蓝。经梯度酒精脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封片后显微镜检。实验结果见表 1、表 2、表 3。表 1 不同 pH值衣康酸抗原修复的 IHC染色结果阳性 PH PH PH PH PH PH PH PH 阴性对照 1.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 12.0 对照

CD4^# +土 ± + +土 +土 ++ ++ + ± -

CD8^# ++土 + +土 ++土 +++ +++ +++ ++土 -

CD10^# ++土 + + ++土 +++ +++ +++ ++土 + -

CD15^# ++土 + +土 ++土 ++土 ++土 ++土 ++土 -

CD30^# ++ +土 ++ ++ ++ +土 -

Bcl-6^# ++ + ++ ++ ++土 ++土 ++ -

WT1 ^# + +土 +土 ++ ++ +土 -

COX2^# ++ + +土 ++ ++ ++ + -

CyclinDl ^# ++土 + +土 ++土 ++土 ++土 ++土 ++ + -

TTF-1 ^# ++ + +土 ++ ++ ++ ++ ++ + -

Ki-67 ^§ ++土 +土 + ++土 +++ +++ +++ ++土 + -

PCNA ^§ ++土 + + ++土 +++ +++ +++ ++ + -

ER ^§ +++ + +++ +++ +++ +++ ++ - § ++ + ++ ++土 ++土 ++土 ++ -

D2-40 ^§ ++ + ++ ++ ++土 ++ +土 -

Bob-1 ^§ ++土 + + ++土 ++土 +++ +++ ++ + - _P53 ^§ ++土 + +土 ++土 ++土 +++ ++土 ++ -

ERCC1 ^§ ++土 + +土 ++土 ++土 +++ ++土 ++ + -

TOPO II ^§ ++土 + ++土 ++土 +++ ++土 +土 -

MLH1 ^§ +土 ± + ++ ++ ++ ++ ++ ± - 表 2 不同 pH值衣康酸酐抗原修复的 IHC染色结果阳性 PH PH PH PH PH PH PH PH 阴性对照 1.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 12.0 对照

CD4^# +土 ± + +土 +土 ++ ++ + ± -

CD8^# ++土 + ++土 ++土 +++ ++土 ++土 + -

CD10^# ++土 + + ++土 +++ +++ ++土 ++土 + -

CD15^# ++土 + +土 ++土 ++土 ++土 ++土 ++土 -

CD30^# ++ - +土 +土 ++ +土 +土 -

Bcl-6^# ++ + ++ ++ ++土 ++ ++ -

WT1^# + - +土 +土 ++ ++ +土 -

COX2^# ++ + +土 ++ ++ ++ + -

CyclinDl ^# ++土 + +土 ++土 ++土 ++土 ++土 ++ + -

TTF-1 ^# ++ + +土 ++ ++ ++ ++ ++ + -

Ki-67 ^§ ++土 + + ++土 +++ +++ ++土 ++土 +土 -

PCNA^§ ++土 + + ++土 +++ +++ ++土 ++ -

ER^§ +++ + +++ +++ +++ +++ ++ - § ++ + ++ ++土 ++土 ++土 ++ -

D2-40 ^§ ++ + ++ ++ ++ ++ +土 -

Bob-1 ^§ ++土 + + ++土 ++土 +++ ++土 ++ + - p53 ^§ ++土 + +土 ++土 ++土 +++ ++土 ++ + -

ERCC1 ^§ ++土 + +土 ++土 ++土 +++ ++土 ++ + -

TOPO II ^§ ++土 + + ++土 ++土 +++ ++土 +土 -

MLH1 ^§ +土 + ++ ++ ++ ++ ++ - 表 3 不同 pH值柠康酸抗原修复的 IHC染色结果阳性 PH PH PH PH PH PH PH PH 阴性对照 1.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 12.0 对照

CD4^# +土 ± + +土 +土 ++ ++ + ± -

CD8^# ++土 + +土 ++土 +++ +++ +++ ++土 -

CD10^# ++土 + ++土 +++ +++ ++土 ++ + -

CD15^# ++土 + +土 ++土 ++土 ++土 ++土 ++ -

CD30^# ++ +土 ++ ++ +土 +土 - -

Bcl-6^# ++ + ++ ++ ++土 ++土 ++ -

WT1 ^# + - + +土 +土 +土 ± -

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TTF-1 ^# ++ + +土 ++ ++ ++ ++ ++ + -

Ki-67 ^§ ++土 + + ++土 +++ +++ +++ ++土 + -

PCNA ^§ ++土 + + ++土 +++ +++ +++ ++ + -

ER ^§ +++ + ++ +++ +++ ++土 ++ - § ++ + ++ ++土 ++土 ++土 ++ -

D2-40 ^§ ++ + +土 ++ ++土 ++ +土 -

Bob-1 ^§ ++土 + + ++土 ++土 +++ +++ ++ + - p53 ^§ ++土 + +土 ++土 ++土 +++ ++土 ++ -

ERCC1 ^§ ++土 + +土 ++土 ++土 +++ ++土 ++ + -

TOPO II ^§ ++土 + + ++ ++土 +++ ++ +土 -

MLH1 ^§ +土 + + +土 ++ ++ + - 备注：阳性对照^#为50了八修复，阳性对照^§为柠檬酸修复。阴性对照为不修复。 -: 无染色； +: 阳性； ++: 中等阳性； +++: 强阳性。土：阳性强度小于 +。

实验结果显示，衣康酸、衣康酸酐或柠康酸抗原修复液在 pH1.0~pH12.0 范围内都具有抗原修复作用，几乎所有的 pH值都获得了一定程度的染色结果。该抗原修复液在 pH6.0~pH9.0范围内的抗原修复效果良好，几乎所有被测抗原的免疫组化染色程度都强于或等于对照，且组织形态清晰、细胞形态完整、无背景染色、细胞定位准备，是一种良好的抗原修复液。实施例 2:

研究对象为甲醛固定-石蜡包埋的淋巴瘤、扁桃体、恶性间皮瘤、肺腺癌、甲状腺癌、食道鳞癌、乳腺癌、肺癌、慢性淋巴结炎、霍奇金淋巴瘤、乳腺浸润性导管癌、肺鳞癌、结肠管状腺癌组织（X X医院病理科）。检测的目标抗原有： CD4、 CD8、 CD10、 CD15、 CD30、 Bcl-6、 WT1、 COX2、 CyclinDl、 TTF-1、 Ki-67、 PCNA、 ER、 P21醫、 D2-40、 Bob-l、 p53、 ERCC1、 TOPO II MLH1。 (所列出的目标抗原并非与组织一一对应，因为一种组织可以表达多种目标抗原，一种目标抗原也可在多种组织中表达）。

石蜡组织切片通过常规二甲苯脱蜡、梯度酒精水化、自来水冲洗后进行抗原修复。抗原修复步骤为：将切片置于适量已稀释成工作液的衣康酸、衣康酸酐或柠康酸抗原修复液（800-1500mL， pH为 8.0，浓度分别为 0.00001、 0.0001、 0.001、 0.01、 0.1、 1.0mol/L) 于蒸煮锅中 100°C加热 20分钟或压力锅中 121 °C处理 1.5 分钟。同时设置阳性对照和阴性对照，其中阳性对照分为 EDTA修复（将切片置于 pH9.0的 EDTA溶液中 10CTC加热 20分钟）和柠檬酸修复（将切片置于 pH6.0 的柠檬酸溶液中 121 °C加热 1.5 分钟）；阴性对照中组织切片不进行抗原修复处理；其中每种抗原修复所用的测试液与阳性对照采用加热方法相同。抗原修复完成后加入过氧化物酶阻断剂，室温孵育 10分钟， PBS冲洗 3 X 3分钟。加入一抗，室温孵育 1小时， PBS冲洗 3 X 3分钟。加入二抗，室温孵育 15分钟， PBS冲洗 3 X 3分钟。加入 DAB显色液，室温孵育 5分钟，自来水冲洗终止显色，苏木素复染， PBS返蓝。经梯度酒精脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封片后显微镜检。实验结果见表 4、表 5、表 6。

表 4 不同浓度衣康酸抗原修复的 IHC染色结果阳性 0.00001 0.0001 0.001 0.01 0.1 1.0 阴性对照 mol/L mol/L mol/L mol/L mol/L mol/L 对照

CD4^# +土 ± ± +土 +土 ++ + -

CD8^# ++土 + +土 ++土 +++ +++ +土 -

CD10^# ++土 + +土 ++土 ++土 +++ + -

CD15^# ++土 + + ++土 ++土 ++土 + - CD30^# ++ - +土 ++ ++ -

Bcl-6^# ++ + ++ ++ ++土 -

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COX2^# ++ + +土 ++ ++ -

CyclinDl ^# ++土 +土 ++ ++土 ++土 + -

TTF-1 ^# ++ +土 ++ ++ ++ -

Ki-67 ^§ ++土 + ++ ++土 +++ +++ +土 -

PCNA ^§ ++土 + +土 ++土 +++ +++ + -

ER^§ +++ +土 +++ +++ +++ + - § ++ + ++土 +++ ++土 -

D2-40 ^§ ++ + ++土 +++ ++土 + -

Bob-1 ^§ ++土 + + +++ ++土 +++ + - p53 ^§ ++土 + ++ ++土 +++ +++ +土 -

ERCCl ^§ ++土 + +土 +++ +++ +++ +土 -

TOPO II ^§ ++土 + ++土 ++土 ++土 +土 -

MLH1 ^§ +土 - ± ++ ++ ++ ± - 表 5 不同浓度衣康酸酐抗原修复的 IHC染色结果阳性 0.00001 0.0001 0.001 0.01 0.1 1.0 阴性对照 mol/L mol/L mol/L mol/L mol/L mol/L 对照

CD4^# +土 ± ± +土 +土 ++ + -

CD8^# ++土 + +土 ++土 ++土 ++土 +土 -

CD10^# ++土 + +土 ++土 ++土 ++ + -

CD15^# ++土 + + ++土 ++土 ++土 + -

CD30^# ++ - +土 ++ ++ -

Bcl-6^# ++ + ++ ++ ++土 -

WT1 ^# + - +土 ++ ++ -

COX2^# ++ + +土 ++ ++ -

CyclinDl ^# ++土 + +土 ++ ++土 ++土 + -

TTF-1 ^# ++ + +土 ++ ++ ++ - Ki-67 ^§ ++土 +土 ++ ++土 +++ +++ +土 -

PCNA ^§ ++土 + +土 ++土 +++ +++ + -

ER^§ +++ +土 +++ +++ ++土 + - § ++ + ++土 +++ ++土 -

D2-40 ^§ ++ + ++土 +++ ++土 + -

Bob-1 ^§ ++土 + + +++ ++土 ++土 + - p53 ^§ ++土 + ++ ++土 +++ ++土 +土 -

ERCCl ^§ ++土 + +土 +++ +++ ++土 +土 -

TOPO II ^§ ++土 + ++土 ++土 ++土 +土 -

MLH1 ^§ +土 ± ± ++ ++ ++ ± - 表 6 不同浓度柠康酸抗原修复的 IHC染色结果阳性 0.00001 0.0001 0.001 0.01 0.1 1.0 阴性对照 mol/L mol/L mol/L mol/L mol/L mol/L 对照

CD4^# +土 ± + +土 +土 +土 + -

CD8^# ++土 + +土 ++土 +++ ++土 +土 -

CD10^# ++土 + + ++土 +++ ++土 + -

CD15^# ++土 + +土 ++土 ++土 ++土 + -

CD30^# ++ - +土 ++ ++ -

Bcl-6^# ++ + ++ ++ ++土 -

WT1 ^# + +土 +土 ++ - -

COX2^# ++ + +土 ++ ++ -

CyclinDl ^# ++土 + +土 ++土 ++土 ++土 + -

TTF-1 ^# ++ + +土 ++ ++ ++ -

Ki-67 ^§ ++土 +土 + ++土 +++ ++土 +土 -

PCNA ^§ ++土 + + ++土 +++ ++土 + -

ER^§ +++ + +++ +++ +++ + - § ++ + ++ ++土 ++土 -

D2-40 ^§ ++ + ++ ++ ++土 + - Bob-1 ^§ ++土 + + ++土 ++土 ++ + - p53 ^§ ++土 + +土 ++土 +++ ++土 +土 -

ERCC1 ^§ ++土 + +土 ++土 ++土 ++ +土 -

TOPO II ^§ ++土 + ++土 ++土 +++ +土 -

MLH1 ^§ +土 + ++ ++ ++ 土 ― 备注：阳性对照^#为50了八修复，阳性对照^§为柠檬酸修复。阴性对照为不修复。 -: 无染色； +: 阳性； ++: 中等阳性； +++: 强阳性。土：阳性强度小于 +。实验结果显示，衣康酸、衣康酸酐或柠康酸抗原修复液在浓度为 0.00001~1.0 mol/L范围内都具有抗原修复作用，几乎所有的浓度都获得了一定程度的染色结果。该抗原修复液浓度在 0.001~0.01mol/L范围内的抗原修复效果良好，几乎所有被测抗原的免疫组化染色程度都强于或等于对照，且组织形态清晰、细胞形态完整、无背景染色、细胞定位准备，是一种良好的抗原修复液。

综上，浓度为 0.00001~1.0mol/L， pH1.0~pH12.0的衣康酸、衣康酸酐或柠康酸抗原修复液都可用于抗原修复；其中浓度为 0.001~0.01mol/L， pH7.0~pH8.0的抗原修复液效果最好。

所用一抗信息：

CD4: 单克隆抗体，克隆号 4B12, 主要用于鉴别 T细胞淋巴瘤和 B细胞淋巴瘤以及 T细胞淋巴瘤亚型的确认。

CD8: 单克隆抗体，克隆号 SP16, 主要用于鉴别 T细胞淋巴瘤和 B细胞淋巴瘤以及 T细胞淋巴瘤亚型的确认。

CD10: 单克隆抗体，克隆号 56C6, 也称共同型急性淋巴细胞白血病抗原，主要用于鉴别 B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤和 Butkitt's淋巴瘤。

CD15: 单克隆抗体，克隆号 Carb-3，主要用于鉴别霍奇金氏病、胸腺瘤和富于 T细胞型 B细胞淋巴瘤。

CD30: 单克隆抗体，克隆号 Ber-H2，是一种分子量 120kDa的跨膜单链糖蛋白，是细胞因子配体 CD30L的受体，主要用于鉴别霍奇金氏病、胸腺瘤、富于 T细胞型 B细胞淋巴瘤、胚胎性癌和睾丸精原细胞瘤。

Bcl-6: 单克隆抗体，克隆号 P1F6+PG-B6p，是一种原癌基因，具有诱导细胞凋亡的功能。主要用于鉴别弥漫大 B 细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞性淋巴瘤和粘膜相关性淋巴瘤等。

WT1 : 单克隆抗体，克隆号 WT49, 是肾母细胞瘤基因蛋白，主要用于散发性和家族性肾母细胞瘤的诊断。

COX2: 单克隆抗体，克隆号 SP21 , 为诱导性酶，在 85~90%的人结肠癌中表达显著增高。

CyclinDl : 单克隆抗体，克隆号 SP4，主要用于鉴别套细胞淋巴瘤和慢性淋巴细胞白血病 /淋巴瘤。

TTF-1 : 单克隆抗体，克隆号 8G7G3/1 , 主要用于鉴别甲状腺癌、转移性肾细胞癌、肺小细胞癌和 Merkel细胞癌。

Ki-67: 单克隆抗体，克隆号 MIB-1 , 主要用于鉴别高度和低度非霍奇金氏病淋巴瘤、伯吉特淋巴瘤 /白血病和其它淋巴瘤。

PCNA: 单克隆抗体，克隆号 PC10, 是和细胞周期相关的 36kDa的核蛋白，是细胞 DNA合成所必需的蛋白，作为细胞增殖指数的主要标记物。

ER: 单克隆抗体，克隆号 SP1，主要用于鉴别乳腺癌激素水平、乳腺来源转移癌和其它部位来源转移癌。

P21^WAF1: 单克隆抗体，克隆号 DCS-60.2, 是 p53蛋白下游调控因子，也是一种肿瘤抑制因子，主要用于各种恶性肿瘤的研究。

D2-40: 单克隆抗体，克隆号 D2-40, 主要用于鉴别间皮瘤、腺癌、淋巴管内皮和血管内皮。

Bob-1 : 多克隆抗体，是滤泡生发中心形成和免疫球蛋白产生所必需的一种转录活化因子。

_P53: 单克隆抗体，克隆号 DO-7,是一种抑癌基因，主要用于鉴别子宫浆液性癌、内膜样癌、恶性间皮瘤、增生性间皮、肺肉瘤和肺炎性假瘤。

ERCC1 : 单克隆抗体，克隆号 8F1 , 是核苷酸切除修复通路中高度保守的切除性核酶，可能成为患者是否应用顺铂辅助化疗的指标之一。

TOPO II : 主要用于各种肿瘤细胞耐药的研究。

MLH1 : 单克隆抗体，克隆号 G168-15, 是一种错配修复基因，可用于对遗传性非息肉病性结、直肠癌等疾病的筛选。

Claims

权利要求书

1. 一种抗原修复液，其特征在于：所述抗原修复液为衣康酸、衣康酸酐或柠康酸水溶液。
2. 根据权利要求 1所述的抗原修复液，其特征在于，所述的衣康酸、衣康酸酐或柠康酸水溶液的浓度为 0.00001~1.0mol/L， pH为 1.0~12.0。
3. 根据权利要求 1所述的抗原修复液，其特征在于，所述的衣康酸、衣康酸酐或柠康酸水溶液的浓度为 0.0001~0.1mol/L， pH为 5.0~10.0。
4. 根据权利要求 1所述的抗原修复液，其特征在于，所述的衣康酸、衣康酸酐或柠康酸水溶液的浓度为 0.001~0.01mol/L， pH为 7.0~8.0。
5. 根据权利要求 1所述的抗原修复液，其特征在于，所述的衣康酸、衣康酸酐或柠康酸水溶液是将衣康酸、衣康酸酐或柠康酸溶于蒸馏水或去离子水中。
6. 根据权利要求 2、 3或 4所述的抗原修复液，其特征在于，用 0.5~8mol/L的 NaOH溶液调节衣康酸、衣康酸酐或柠康酸水溶液的 pH值。
7. 一种抗原修复方法，其特征在于：采用权利要求 1-6中任一项所述的抗原修复液对组织切片进行高温或高温高压修复。
8. 根据权利要求 7所述的抗原修复方法，其特征在于，采用的加热设备为灭菌锅、高压锅、电锅、蒸煮锅、微波炉或水浴锅。