CN115925928A - 炎性疾病中的il-18结合蛋白(il-18bp) - Google Patents

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Abstract

本发明涉及炎性疾病中的IL‑18结合蛋白(IL‑18BP)。具体而言，本发明提供用于治疗白介素18(IL‑18)相关疾病和病症的工具和方法。特别地，本发明公开用于这类治疗和用于诊断适应症的游离IL‑18和IL‑18结合蛋白(IL‑18BP)特异性抗体。

Description

炎性疾病中的IL-18结合蛋白(IL-18BP)
本申请为2014年9月5日提交的发明名称为“炎性疾病中的IL-18结合蛋白(IL-18BP)”的PCT申请PCT/EP2014/069013的分案申请，该PCT申请进入中国国家阶段日期为2016年5月4日，申请号为201480060413.7。
技术领域
本发明提供用于治疗白介素18(IL-18)相关疾病和病症的工具和方法。特别地，本发明公开用于这类治疗和用于诊断适应症的对游离IL-18和IL-18结合蛋白(IL-18BP)特异性的抗体。
背景技术
白介素-18(IL-18)，也称作干扰素-γ诱导因子，是由活化的巨噬细胞、枯氏(Kupffer)细胞和其他细胞产生的细胞因子。IL-18与IL-18受体结合并且诱导细胞介导的免疫力。IL-18细胞因子受体或IL-18细胞因子的缺陷(例如敲除)导致天然杀伤(NK)细胞活性和TH1反应受损。除其生理作用之外，IL-18还可以引起严重的炎性疾病。出于早期诊断这类病症的目的，因此将需要对预计患有这种病症的对象体液中游离IL-18的水平定量。
但是，目前，通常通过使用ELISA测定进行体液中IL-18水平的定量，所述ELISA测定包含对检测游离IL-18非特异的抗体。通过ELISA测定实现的结果受所用的结合靶抗原的第一抗体的特异性限制。迄今，仅可能通过使用市售抗体检出总IL-18水平，而迄今已知无针对游离IL-18的抗体。检出总IL-18不适于评定游离IL-18水平，因为复合物中结合的IL-18(例如与其天然拮抗剂IL-18结合蛋白(IL-18BP)结合)具有降低的IL-18受体亲和力。另外，已知增加的IL-18水平经常与升高的IL-18BP水平相关。
鉴于上述原因，确定总IL-18不足以作出IL-18相关疾病的充分诊断。这意味，为了能够评定对象体液中的游离IL-18水平及为了作出IL-18相关疾病的适当诊断，将需要与游离IL-18特异性结合，但不与复合物中结合的IL-18特异性结合的检测工具。因此，目前尚不存在IL-18相关疾病或病症的有效治疗。
本发明现在提供处于与游离IL-18特异性结合、但不与复合物中结合的IL-18特异性结合的IL-18结合分子、尤其是IL-18结合蛋白(IL-18BP)或抗体的形式的这类检测工具。因此，本发明满足了用于检测游离IL-18和用于诊断与体液中游离IL-18相关的疾病或病症的适当工具的需要。
这种开启了高效个体化医疗方案之门。特别地，现在首次可以鉴定这样的患者群体，所述患者患有与身体组织内、但尤其体液中游离IL-18相关的疾病或病症，并且通过施用特异性结合游离-IL18的结合分子有效治疗所述患者。
本发明因此还提供用于治疗和预防患者群体中IL-18相关疾病或病症的有效治疗工具，其中所述患者患有与身体组织内、但尤其体液中游离IL-18相关的疾病或病症。本发明还通过提供对游离IL-18特异并且不与复合物中结合的IL-18交叉反应的IL-18结合分子、尤其(1)IL-18BP和/或(2)抗体，满足有效治疗与身体组织中、尤其体液中游离IL-18相关的疾病或病症的需求。
本发明的IL-18结合分子，但是尤其IL-18BP和IL-18特异性抗体能够减少和/或消除游离IL-18与其受体结合并且向患有IL-18相关疾病或病症的患者提供治疗益处。
近来的非临床和临床研究已经确定促炎细胞因子白介素18(IL-18)在慢性阻塞性肺病的发病机制中的突出作用，并且表明IL-18充当破坏过程和重塑过程的主要调节物。
慢性阻塞性肺病(COPD)，也称作慢性阻塞性肺疾病(COLD)、慢性阻塞性气道病(COAD)、慢性气流受限(CAL)和慢性阻塞性呼吸道疾病(CORD)，是肺部出现慢性支气管炎或气肿(一对常并发的疾病)，其中气道随时间推移狭窄。这导致气流进入和离开肺部受限，其中认为所述受限并非充分可逆的，反而随时间推移逐渐变得更严重。在欧洲和美国，吸烟造成90％的COPD。虽然并非全部吸烟者均会形成COPD，但估计20％的吸烟者将形成COPD。患有COPD的吸烟者具有比患有COPD的非吸烟者更高的死亡率。他们还比非吸烟者具有更频繁的呼吸道症状(咳嗽、气短等)及更差的肺功能。其他风险因子例如是遗传易感性(例如α1-抗胰蛋白酶缺乏以及在第4号染色体上靠近HHIP和在FAM13A中的区域和在第15号染色体上CHRNA和IREB2中的区域)、既往结核病、空气污染、职业性暴露于粉尘和烟气(气源颗粒)、暴露于二手烟和生物质烟雾吸入。COPD主要由两种相关疾病组成：慢性支气管炎和气肿。慢性支气管炎是支气管衬层发炎和最终瘢痕化。当支气管发炎和/或感染时，能够流入和离开肺的空气较少并且咳出浓厚粘液或痰。气肿始于肺泡(肺中来自空气的氧与血液内二氧化碳交换的气囊)破坏，其部分原因是肺对毒性粒子或气体(主要是烟草烟雾)的异常炎症反应。气囊的壁薄而脆弱。气囊的损伤是不可逆的并且在肺下部的组织中产生永久性“孔”。随着气囊被摧毁，肺能够向血流转移的氧越来越少，造成气短。肺还丧失其弹性，弹性对保持气道通畅重要。因此，患者出现明显呼气困难。在慢性支气管炎和气肿中，阻塞和组织破坏通常是永久和进行性的。COPD患者经常出现恶化。术语“恶化”指症状加重或疾病的严重程度增加。恶化的持续时间可大幅度变动-从数小时至几日不等。恶化可以引起呼吸过程特有的症状加重。该患者可能出现呼吸困难增加、排痰性咳嗽伴变异痰，及发热。痰可能增加或具有更多脓性及改变颜色。患者还可能出现非特异性症状，如不适、乏力、失眠、嗜睡或抑郁。COPD恶化通常由下呼吸道感染引起。最常见的感染病因是：需氧性革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌、非典型细菌、呼吸道病毒、鼻病毒、流感病毒、RSV或病原体的组合。病毒性恶化更严重、持续时间更长并且与相比于其他病因引起恶化更高的炎症水平和肺功能丧失相关(Wedzicha,2004,PATS；Seemungel等人,2001,AM.J.RCCM；Tan等人,2003,Am.J.Med.Donaldson等人,2000,Thorax)。每位COPD患者均可能一年出现1至4次恶化。尽管许多患者经历这些恶化，但据估计他们仅向医师报告了约50％的全部发作。频繁恶化已经与生活质量低下和经济负担高昂相关。
在COPD疾病模型中的研究已经解析了香烟烟雾(CS)引起和二手烟雾引起的肺气肿和炎症中IL-18引起肺部炎症及其与吸烟者中COPD的关联性，显示在动物模型中和在人肺部炎症中及在香烟烟雾引起肺气肿中的气腔膨大中，香烟烟雾暴露借助IL-18R显著激活IL-18和IL-18信号传导途径。结果确证了肺泡巨噬细胞作为IL-18释放的主要细胞来源的重要作用。
显示IL-18诱导肺特异性、诱导型IL-18转基因小鼠中的气道和血管重塑以及组织炎症、气肿、粘液化生及右心室肥大。
进一步显示IL-18通过IFNγ依赖性机制引起气肿和细胞毒性反应，通过IL-17A依赖性途径和IL-13依赖性途径引起纤维化气道重塑、粘液化生和血管重塑。在这些途径之间存在重要相互作用，其中IL-18借助IL-17A依赖性机制诱导IL-13并且IFNγ及IL-17A/IL-13应答彼此反向调节。因此，IL-18是调节多个炎症级联的核心。
COPD患者中的全身性IL-18水平提示肺泡巨噬细胞作为COPD中的循环IL-18来源并且已经显示IL-18在循环中和COPD患者的诱导痰中升高。
提出在COPD的共病中升高的血清IL-18水平与全身性炎症相关。
另外，在血清IL-18水平和肺功能之间发现强相关性。
总之，非临床结果和临床结果清晰地主张抑制/中和作为潜在上游靶的IL-18，因而阻止或限制通常导致COPD疾病表现和进展的破坏性过程和重塑过程。
可以从对循环中和COPD患者痰中IL-18水平的最近的临床研究的结果得出结论，IL-18肺水平在COPD患者中与疾病严重程度相关地显著升高。
关于COPD患者痰中IL-18的数据表明，肺泡巨噬细胞是COPD中IL-18的主要来源并且与对照相比，IL-18在COPD患者的肺中显著过量表达。
最近对NLRP3炎性小体在刺激胱天蛋白酶-1活化、随后释放促炎细胞因子IL-1b和IL-18的成熟形式中作用的研究有助于进一步阐明烟草烟雾在气道炎症中的作用(Rastrick等人,2013)。
在每日两次暴露于香烟烟雾的小鼠中，检验胱天蛋白酶-1活化和IL-18释放(Eltom等人,2011)。
通过比较烟草烟雾的作用和暴露于正常空气，展示了烟雾借助胱天蛋白酶-1活化诱导的IL-18上调。
总之，IL-18呈现为能够干预COPD肺破坏性过程和重塑过程的未来COPD治疗药的有利上游靶，因而是用于COPD中病情改善治疗模式的有前景候选物。
因此在WO 2008/150431 A1中提出，通过向患有COPD和相关共病的对象施用IL-18抑制物、IL-18Rα抑制物和IFNγ抑制物、PKR抑制物及其任意组合，治疗所述对象中因IL-18、IFN-γ或PKR升高引起的COPD和相关共病。
例如借助靶向IL-18信号传导的单克隆抗体通过受体阻断对IL-18的抑制导致作用持续时间长，原因是这些活性剂的延长的半寿期，因而不仅作用于有害的IL-18活性，还干扰宿主防御的有益作用，因此在IFN-γ抑制作用和淋巴细胞1型辅助T细胞对病原体(病毒、细菌、真菌和其他寄生体)所驱动的反应方面导致不想要的副作用。
在本发明的背景下现在令人惊讶地发现，这些不想要的副作用可以通过采取备选方案避免，即，施用天然存在的IL-18结合蛋白(IL-18BP)，所述IL-18结合蛋白对白介素18(IL-18)具有高结合亲和力并且例如，与现有技术已知的单克隆抗体相比，具有根本上不同的靶向IL-18的作用模式。
发明内容
在本发明的一个具体实施方案中，以如实施例4.4.2中所示的BIAcore设置测定时，IL-18结合蛋白(IL-18BP)具有20pM和30pM之间的结合亲和力。
本发明因此在一个实施方案中涉及与游离IL-18特异性结合而不与复合物中结合的IL-18交叉反应的IL-18结合分子(下文中称作“游离IL-18特异性结合分子”)，特别涉及是减少和/或消除游离IL-18与其受体结合的IL-18抑制物的游离IL-18特异性结合分子(下文中称作“IL-18抑制物”)，特别涉及IL-18BP，其用于治疗对象中IL-18相关疾病或病症，其中与健康对照对象体液中的水平相比，所述对象经诊断在体液中具有异常的游离IL-18水平和/或异常的游离IL-18/IL-18BP比率。
特别地，所述体液内异常的游离IL-18水平超过健康对照对象体液中的水平5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或多于100％。
在另一个实施方案中，本发明提供游离IL-18特异性结合分子、尤其IL-18抑制物、尤其IL-18BP，其用于根据本发明和如本文中公开的用途，其中根据本发明和如本文在某些实施方案中公开，已经通过使用与游离IL-18特异性结合、但是不与复合物中结合的IL-18特异性结合的IL-18结合分子、尤其IL-18结合蛋白(IL-18BP)或抗体测定身体样品内、尤其体液中所述异常的游离IL-18水平。
另外，在一个实施方案中，本发明提供游离IL-18特异性结合分子、尤其IL-18抑制物、尤其IL-18BP，其如前述实施方案任一项中公开而使用，其中待治疗的对象属于这样的对象群体，与取自健康对象的样品中的水平相比，已经确定所述对象群体在身体样品中、尤其在选自支气管肺泡灌洗液(BALF)循环流体、分泌流体、活检及均化组织、尤其血清、尿、泪、唾液、胆汁、汗、呼出、呼气、痰、支气管肺泡液、皮脂、细胞分泌物、腺体分泌物、粘膜分泌物和组织分泌物的样品中具有升高的游离IL-18水平和/或异常的游离IL-18/IL-18BP比率。
来自患病患者或对象的样品中所述升高的游离IL-18水平是≥5pg/mL并且多至10000pg/mL或更高。特别地，来自患病患者或对象的样品中所述升高的游离IL-18水平处于≥5pg/mL至10000pg/mL的范围内、尤其处于100pg/mL至10000pg/mL的范围内、尤其处于200pg/mL至10000pg/mL的范围内、尤其处于300pg/mL至10000pg/mL的范围内、尤其处于400pg/mL至10000pg/mL的范围内、尤其处于500pg/mL至10000pg/mL的范围内、尤其处于600pg/mL至10000pg/mL的范围内、尤其处于700pg/mL至10000pg/mL的范围内、尤其处于800pg/mL至10000pg/mL的范围内、尤其处于900pg/mL至10000pg/mL的范围内、尤其处于1000至10000pg/mL的范围内、尤其处于1500pg/mL至10000pg/mL的范围内、尤其处于2000pg/mL至10000pg/mL的范围内、尤其处于3000pg/mL至10000pg/mL的范围内、尤其处于4000pg/mL至10000pg/mL的范围内、尤其处于5000pg/mL至10000pg/mL的范围内。健康对象血清、尤其健康人血清中游离IL-18的量是≤5pg/mL、尤其≤4pg/mL、尤其≤1pg/mL、尤其≤0.5pg/m、尤其低于检出水平。
然而，本发明的另一个目的是提供游离IL-18特异性结合分子、尤其IL-18抑制物、尤其IL-18BP，其用于前述实施方案任一项中公开的用途，其中所述IL-18相关疾病或病症是选自以下的一种疾病：成人Still病、青少年Still病、慢性阻塞性肺病(COPD)、输注相关性肺损伤、支气管肺发育不良(BPD)、成人呼吸窘迫综合征(ARDS)、间质性肺病(ILD)、特发性肺纤维化、囊性纤维化、肺动脉高血压、哮喘、支气管扩张症、心力衰竭、肌萎缩侧索硬化(ALS)、干眼病(DED)、角膜炎、角膜溃疡和磨损、角膜血管新生、病理性眼内新血管化、虹膜炎、青光眼、黄斑变性、
Figure BDA0003786898910000071
综合征、自身免疫性葡萄膜炎、
Figure BDA0003786898910000072
病、结膜炎、过敏性结膜炎、眼睑皮炎、II型糖尿病、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、脂肪性肝炎、实体器官和血液移植、局部缺血再灌注损伤、家族性地中海热、肿瘤坏死因子受体1相关的周期性综合征、cryopyrin相关的周期性发热综合征、高IgD综合征、痛风、Schnitzler综合征、韦格纳肉芽肿，又称作肉芽肿病伴多血管炎(GPA)、桥本甲状腺炎、Crohn病、溃疡性结肠炎、免疫球蛋白-4(IgG4)相关的疾病和干细胞疗法。
在一个具体实施方案中，本发明提供游离IL-18特异性结合分子、尤其IL-18抑制物、尤其IL-18BP，其用于前述实施方案任一项中公开的用途，其中所述IL-18相关疾病或病症由吸烟或二手烟暴露、尤其烟草烟雾暴露引起。
在另一个具体实施方案中，本发明提供游离IL-18特异性结合分子、尤其IL-18抑制物、尤其IL-18BP，其如前述实施方案任一项中公开而使用，其中所述IL-18相关疾病或病症由病毒性感染引起。
然而，本发明的另一个目的是提供游离IL-18特异性结合分子、尤其IL-18抑制物、尤其IL-18BP，其用于前述实施方案任一项中公开的用途，其中所述IL-18相关疾病或病症是IL-18引起的炎症的全身性表现和相关共病，所述相关共病选自气肿、组织炎症、组织破坏、肺切除、脉管系统消失、内皮细胞凋亡、粘膜化生、心脏肥大、肺组织中VEGF减少、肺血管损失、血管肌化、血管重塑、胶原蛋白沉积、肺中异常弹性蛋白层、纤维化气道重塑、气腔膨大、慢性气道和肺血管重塑和肺功能减低。
本发明的另一个目的是提供游离IL-18特异性结合分子、尤其IL-18抑制物，其用于前述实施方案任一项中公开的用途，所述游离IL-18特异性结合分子是阻止游离IL-18与IL-18受体结合、尤其游离IL-18与IL-18Rα结合的抗体、尤其游离IL-18特异性抗体、尤其拮抗性抗体。
本发明的IL-18特异性抗体包括任何功能性等同抗体或其部分，在IL-18BP的结合位点处或IL-18BP结合位点附近与IL-18结合，或是构象抗体，所述构象抗体与IL-18分子上的至少两个表位结合，所述表位由在三维构象中聚拢并且与受体的互补位如此相互作用，从而封闭IL-18分子上IL-18BP的结合位点的不连续氨基酸组成。
在一个实施方案中，根据本发明和如本文在多种实施方案中公开的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，结合游离IL-18蛋白，但是不结合IL-18/IL-18BP复合物。
尤其，根据本发明的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，与IL-18/IL-18BP复合物显示在≤0.01％和≤0.05％之间、尤其≤0.1％和≤0.2％之间、尤其≤0.2％和≤0.5％之间、尤其≤0.5％和≤1％之间、尤其≤1％和≤2％之间的交叉反应性，如通过竞争性ELISA所测定。
在一个具体实施方案中，根据本发明的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，与IL-18/IL-18BP复合物显示≤0.1％的交叉反应性，如通过竞争性ELISA所测定。
在一个实施方案中，如前述实施方案任一项中公开的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，在空间上阻碍IL-18BP与IL-18结合。
在又一个实施方案中，如前述实施方案任一项中公开的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3中所述序列群组的序列内分别所包含的单个表位、2个表位的组合或3个表位的组合特异性结合。
在一个具体实施方案中，本发明的抗体与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQID NO:3中所述序列群组的序列内所包含的单个表位特异性结合。
在另一个具体实施方案中，本发明的抗体与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQID NO:3中所述序列群组的序列内分别所包含的2个表位特异性结合。
特别地，抗体与(a)分别在SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2的序列中、(b)分别在SEQID NO:1和SEQ ID NO:3的序列中、(c)分别在SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的序列中所包含的两个表位结合。
在另一个具体实施方案中，本发明的抗体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ IDNO:3的序列中分别所包含的三个表位特异性结合。
在一个实施方案中，本发明提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，所述抗体与选自SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQID NO:6的单个表位、2个表位的组合或3个表位的组合特异性结合。
特别地，本发明还涉及所述IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，其中所述表位与SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6中所述的序列具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的序列。
在一个具体实施方案中，本发明的抗体与选自SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQID NO:6中所述序列群组的序列内所包含的单个表位特异性结合。
在另一个具体实施方案中，本发明的抗体与选自SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQID NO:6中所述序列群组的序列内所包含的两个表位特异性结合。
特别地，抗体与(a)分别在SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5的序列中、(b)分别在SEQID NO:4和SEQ ID NO:6的序列中、(c)分别在SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6的序列中所包含的两个表位结合。
在另一个具体实施方案中，本发明的抗体与SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ IDNO:6的序列中分别所包含的三个表位特异性结合。
在一个具体实施方案中，如本文在多种实施方案中公开的本发明抗体，包括任何功能性等同抗体或其抗原结合部分，包含如SEQ ID NO:10、12、14、16、17、19、22、24和26中分别所示的轻链可变区的至少一个、至少两个或全部三个互补决定区(CDR)，和/或如SEQID NO:9、11、13、15、18、20、21、23和25中分别所示的重链可变区的至少一个、至少两个或全部三个互补决定区(CDR)，其中所述抗体、等同抗体或其抗原结合部分结合游离IL-18蛋白、尤其在IL-18BP的结合位点处或在IL-18BP结合位点的附近结合游离IL-18蛋白，但是不结合IL-18/IL-18BP复合物。
特别地，如本文在多种实施方案中公开的本发明抗体，包括任何功能性等同抗体或其抗原结合部分，包含如SEQ ID NO:10、12、14、16、17、19、22、24和26中分别所示的轻链可变区的互补决定区(CDR)，和如SEQ ID NO:9、11、13、15、18、20、21、23和25中分别所示的重链可变区的互补决定区(CDR)，其中所述抗体、等同抗体或其抗原结合部分结合游离IL-18蛋白、尤其在IL-18BP的结合位点处或在IL-18BP结合位点的附近结合游离IL-18蛋白，但是不结合IL-18/IL-18BP复合物至任何显著程度。
在一个具体实施方案中，如本文在多种实施方案中公开的本发明抗体，包括任何功能性等同抗体或其抗原结合部分，包含如图11中所示的轻链可变区的至少一个、至少两个或全部三个互补决定区(CDR)，和/或如图11中所示的重链可变区的至少一个、至少两个或全部三个互补决定区(CDR)，其中所述抗体、等同抗体或其抗原结合部分结合游离IL-18蛋白、尤其在IL-18BP的结合位点处或在IL-18BP结合位点的附近结合游离IL-18蛋白，但是不结合IL-18/IL-18BP复合物。
特别地，如本文在多种实施方案中公开的本发明抗体，包括任何功能性等同抗体或其抗原结合部分，包含如图11中所示的轻链可变区的互补决定区(CDR)，和如图11中所示的重链可变区的互补决定区(CDR)，其中所述抗体、等同抗体或其抗原结合部分结合游离IL-18蛋白、尤其在IL-18BP的结合位点处或在IL-18BP结合位点的附近结合游离IL-18蛋白，但是不结合IL-18/IL-18BP复合物至任何显著程度。
在本发明的一个具体实施方案中，互补决定区(CDR)根据如Kabat中的可变结构域残基编号确定。
在本发明的另一个具体实施方案中，互补决定区(CDR)根据如Chothia中的可变结构域残基编号确定。
在本发明的另一个具体实施方案中，互补决定区(CDR)由IMGT系统确定。
如本文在多种实施方案中公开的本发明抗体，包括任何功能性等同抗体或其抗原结合部分，包含如下的互补决定区(CDR)：
a.分别具有如SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28和SEQ ID NO:29中所示序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；和分别具有如SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:32中所示序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；或
b.分别具有如SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34和SEQ ID NO:35中所示序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；和分别具有如SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38中所示序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；或
c.分别具有如SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:40和SEQ ID NO:41中所示序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；和分别具有如SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43和SEQ ID NO:44中所示序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；或
d.分别具有如SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46和SEQ ID NO:47中所示序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；和分别具有如SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:50中所示序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；或
e.分别具有如SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46和SEQ ID NO:47中所示序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；和分别具有如SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:53中所示序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；或
f.分别具有如SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55和SEQ ID NO:56中所示序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；和分别具有如SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58和SEQ ID NO:59中所示序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；或
g.分别具有如SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61和SEQ ID NO:62中所示序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；和分别具有如SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67和SEQ ID NO:68中所示序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；或
h.分别具有如SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64和SEQ ID NO:65中所示序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；和分别具有如SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67和SEQ ID NO:68中所示序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；或
i.分别具有如SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70和SEQ ID NO:71中所示序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；和分别具有如SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:73和SEQ ID NO:74中所示序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；或
j.分别具有如SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:78和SEQ ID NO:77中所示序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；和分别具有如SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:79和SEQ ID NO:80中所示序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；或
具有如图11中所示序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；和具有如图11中所示序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3。
在本发明的一个实施方案中，抗体在一个或多个CDR序列中显示这样的程度的变异，从而并入所述变体CDR的抗体仍然具有本发明抗体的特异性结合活性，包括结合游离IL-18蛋白、尤其在IL-18BP的结合位点处或在IL-18BP结合位点的附近结合游离IL-18蛋白，而不结合IL-18/IL-18BP复合物。
在本发明的另一个具体实施方案中，所述抗体是人抗体或人源化抗体，尤其其中已经将CDR插入从一种(或多种)人免疫球蛋白衍生的人抗体“支架”的人抗体或人源化抗体。
在仍然另一个具体实施方案中，本发明提供抗体，包括任何功能性等同抗体或其抗原结合部分，其至少包含分别与SEQ ID NO:10、12、14、16、17、19、22、24、26和图11中所示的序列具有75％、80％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％序列同一性的轻链可变区和/或至少包含分别与SEQ ID NO:9、11、13、15、18、20、21、23、25和图11中所示的序列具有75％、80％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％序列同一性的重链可变区，其中所述抗体，等同抗体或其抗原结合部分结合游离IL-18蛋白、尤其在IL-18BP的结合位点处或在IL-18BP结合位点的附近结合游离IL-18蛋白，但是不结合IL-18/IL-18BP复合物。
在仍然另一个具体实施方案中，本发明提供抗体，包括任何功能性等同抗体或其抗原结合部分，其至少包含分别与SEQ ID NO:10、12、14、16、17、19、22、24、26和图11中所示的序列具有75％、80％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％序列同一性的轻链可变区和/或至少包含分别与SEQ ID NO:9、11、13、15、18、20、21、23、25和图11中所示的序列具有75％、80％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％序列同一性的重链可变区，条件是轻链可变区和/或重链可变区的CDR的序列保持不变并且其中所述抗体，等同抗体或其抗原结合部分结合游离IL-18蛋白、尤其在IL-18BP的结合位点处或在IL-18BP结合位点的附近结合游离IL-18蛋白，但是不结合IL-18/IL-18BP复合物。
在一个实施方案中，本发明提供IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，其用于前述实施方案任一项中公开的用途，其中所述抗体或其部分是单克隆抗体或多克隆抗体。
在一个具体实施方案中，本发明提供IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，其用于前述实施方案任一项中公开的用途，其中所述抗体或其部分是嵌合、单链、双特异性、类人猿化、人和人源化抗体。
特别地，所述抗体是人源化抗体、尤其人源化抗体，其中已经突变重链和轻链可变区和/或重链和轻链恒定区的框架和恒定结构域中的某些氨基酸，从而在人类中避免或消除免疫反应。
尤其，本发明的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其抗原结合部分，与IL-18/IL-18BP复合物显示在≤0.01％和≤0.05％之间、尤其≤0.1％和≤0.2％之间、尤其≤0.2％和≤0.5％之间、尤其≤0.5％和≤1％之间、尤其≤1％和≤2％之间的交叉反应性，如通过竞争性ELISA所测定。
在一个具体实施方案中，本发明的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其抗原结合部分，与IL-18/IL-18BP复合物显示≤0.1％的交叉反应性，如通过竞争性ELISA所测定。
在另一个具体实施方案中，本发明提供IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，如前述实施方案任一项中所公开的，其中所述抗体或其部分与人IL-18结合。
本发明的再一个目的是提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，其中IL-18与IL-18受体亚基α(IL-18Rα)和β(IL-18Rβ)的结合、尤其与结合IL-18Rα的结合减少至少5％、尤其至少10％、尤其至少15％、尤其至少20％、尤其至少25％、尤其至少30％、尤其至少40％、尤其至少45％、尤其至少50％、尤其至少55％、尤其至少60％、尤其至少65％、尤其至少70％、尤其至少75％、尤其至少80％、尤其至少85％、尤其至少90％、尤其至少95％、尤其96％、尤其97％、尤其98％、尤其99％、尤其100％。
本发明的又一个目的是提供游离IL-18特异性结合分子、尤其IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其如前述实施方案任一项中公开的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，其用于治疗对象群体中IL-18相关疾病或病症，其中与健康对照对象体液中的水平相比，所述对象群体经诊断在体液中具有异常的游离IL-18水平和/或异常的游离IL-18/IL-18BP比率，其中所述游离IL-18特异性结合分子、抑制物、IL-18BP或IL-18特异性抗体或其部分通过限制或阻止IL-18与IL-18受体(IL-18R)结合、尤其游离IL-18与IL-18Rα的结合，中和游离IL-18的作用。
在一个实施方案中，本发明提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，其中所述抗体或其部分
a)与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3中所述序列群组的序列内所包含的单个表位、2个表位的组合或3个表位的组合特异性结合；和/或
b)特异性结合与SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6中所述的序列具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的表位；并且
c)在IL-18BP的结合位点处或在IL-18BP结合位点的附近与IL-18特异性结合；并且
d)与游离IL-18蛋白、但不与IL-18/IL-18BP复合物特异性结合；并且
e)空间上阻碍IL-18BP与IL-18结合；以及
f)减少IL-18与IL-18受体的结合、尤其与IL-18Rα的结合至少5％、尤其至少10％、尤其至少15％、尤其至少20％、尤其至少25％、尤其至少30％、尤其至少40％、尤其至少45％、尤其至少50％、尤其至少55％、尤其至少60％、尤其至少65％、尤其至少70％、尤其至少75％、尤其至少80％、尤其至少85％、尤其至少90％、尤其至少95％、尤其100％。
特别地，上文具体限定的抗体与IL-18/IL-18BP复合物显示在0.01％和≤0.05％之间、尤其≤0.1％和≤0.2％之间、尤其≤0.2％和≤0.5％之间、尤其≤0.5％和≤1％之间、尤其≤1％和≤2％之间的交叉反应性，如通过竞争性ELISA所测定。
在本发明的某些实施方案中，如多种实施方案的任一个中公开的IL-18BP和/或游离IL-18特异性抗体可以用作IL-18抑制物。
在本发明的某些其他实施方案中，如多种实施方案的任一个中公开的IL-18BP和/或游离IL-18特异性抗体可以在用于检测身体样品中、尤其选自支气管肺泡灌洗液(BALF)循环流体、分泌流体、活检及均化组织、尤其血清、尿、泪、唾液、胆汁、汗、呼出、呼气、痰、支气管肺泡液、皮脂、细胞分泌物、腺体分泌物、粘膜分泌物和组织分泌物的样品中游离IL-18的测定中用作捕获分子。
在一个实施方案中，本发明涉及编码根据本发明如本文在多种实施方案中公开的抗体的多核苷酸。
在一个实施方案中，多核苷酸编码在SEQ ID NO:9、11、13、15、18、20、21、23、25和图11中所示的可变重链。
在一个实施方案中，多核苷酸编码在SEQ ID NO:10、12、14、16、17、19、22、24、26和图11中所示的可变轻链。
在一个实施方案中，多核苷酸编码如SEQ ID NO:27–80中所示的CDR区。
特别地，本发明涉及多核苷酸，所述多核苷酸编码具有与图11中所示的序列具有75％、80％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％序列同一性的序列的本发明抗体的重链和/或轻链可变区。
另外，本发明还提供本发明的IL-18抑制物，用于如前述实施方案任一项中公开的用途，其中抑制物是IL-18结合蛋白(IL-18BP)、尤其人IL-18BP(hIL-18BP)、尤其IL-18BP，包括其任何功能性等同物或部分、尤其如SEQ ID NO:7中所示的IL-18BP。
还包括编码IL-18BP的转录物变体。
在一个实施方案中，本发明提供IL-18抑制物，其用于如前述实施方案任一项中公开的用途，其中抑制物是与SEQ ID NO:7中所述的序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的IL-18结合蛋白(IL-18BP)。
本发明的再一个目的是提供IL-18抑制物，其用于如前述实施方案任一项中公开的用途，其中治疗包括预防、制止、缓和或逆转与所述疾病或病症相关的症状。
在又一个实施方案中，本发明提供IL-18抑制物，其用于如前述实施方案任一项中公开的用途，其中限制或抑制IL-18结合，尤其游离IL-18与IL-18R的结合，但尤其游离IL-18与IL-18Rα的结合。
在另一个实施方案中，本发明提供IL-18抑制物，其用于如前述实施方案任一项中公开的用途，其中调节、尤其抑制IL-18-依赖性下游信号传导途径。
在又一个实施方案中，本发明提供IL-18抑制物，其用于如前述实施方案任一项中公开的用途，其中与未治疗的患有所述疾病或病症的对象相比，调节、尤其抑制增加的IFNγ、IL-13或IL-17A表达。
本发明的另一个目的仍然是提供IL-18抑制物，其用于如前述实施方案任一项中公开的用途，其中IL-18抑制物通过捕捉组织和循环中过量的游离IL-18，代偿IL-18/IL-18BP不平衡。
在一个实施方案中，本发明提供IL-18抑制物，其用于如前述实施方案任一项中公开的用途，其中IL-18抑制物抑制、尤其通过减轻肺气道中G-CSF释放抑制嗜中性粒细胞向肺中浸润。
本发明的又一个实施方案是提供IL-18抑制物，其用于如前述实施方案任一项中公开的用途，所述抑制物是全长蛋白质或突变蛋白、功能性衍生物、功能性片段、生物活性肽、部分、环状排列衍生物、融合蛋白、同种型或其盐。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗慢性阻塞性肺病(COPD)、心脏病、干眼病和/或II型糖尿病。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗慢性阻塞性肺病(COPD)。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗心脏病
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗干眼病。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗肌萎缩侧索硬化(ALS)。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其拮抗性抗体、尤其IL-18BP，其用于治疗II型糖尿病。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗成人Still病。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗输注相关性肺损伤。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗青少年Still病。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗支气管肺发育不良(BPD)。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗间质性肺病(ILD)。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗特发性肺纤维化。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗囊性纤维化。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其拮抗性抗体、尤其IL-18BP，其用于治疗肺动脉高血压
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、拮抗性抗体，其用于治疗哮喘。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗支气管扩张症。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗心力衰竭。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗角膜炎。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、拮抗性抗体，其用于治疗角膜溃疡。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗角膜血管新生。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗病理性眼内新血管化。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗虹膜炎。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其拮抗性抗体、尤其IL-18BP，其用于治疗青光眼。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗黄斑变性。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗
Figure BDA0003786898910000201
综合征。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其拮抗性抗体、尤其IL-18BP，其用于治疗自身免疫性葡萄膜炎。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗
Figure BDA0003786898910000202
病。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗结膜炎。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗眼睑皮炎。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗非酒精性脂肪肝病(NAFLD)。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗脂肪性肝炎。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗实体器官和血液移植。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗局部缺血再灌注损伤。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗家族性地中海热。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗肿瘤坏死因子受体1相关的周期性综合征。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗cryopyrin相关的周期性发热综合征。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗高IgD综合征。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗痛风。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗Schnitzler综合征。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗韦格纳肉芽肿。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗桥本甲状腺炎。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗Crohn病。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗溃疡性结肠炎。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于治疗免疫球蛋白-4(IgG4)相关的疾病。
本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于干细胞疗法的治疗。
在另一个实施方案中，本发明提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于前述实施方案任一项中公开的用途，其中所述疾病或病症由吸烟或二手烟暴露、尤其烟草烟雾暴露引起。
在另一个实施方案中，本发明提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于前述实施方案任一项中公开的用途，其中所述疾病或病症由病毒性感染引起。
进一步，本发明还提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于前述实施方案任一项中公开的用途，其中所述疾病或病症是IL-18引起的炎症的全身性表现和相关共病，所述相关共病选自气肿、组织炎症、组织破坏、肺切除、脉管系统消失、粘膜化生、心脏肥大、肺组织中VEGF减少、肺血管损失、血管肌化、胶原蛋白沉积、肺中异常弹性蛋白层、纤维化气道重塑、气腔膨大、慢性气道和肺血管重塑和肺功能减低。
本发明的再一个目的是提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于如前述实施方案任一项中公开的用途，其中限制或抑制IL-18结合作用、尤其游离IL-18与IL-18R的结合，但特别游离IL-18与IL-18Rα的结合。
本发明的再一个目的是提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于前述实施方案任一项中公开的用途，其中改变、尤其抑制IL-18依赖性下游信号传导途径。
本发明的再一个目的是提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于如前述实施方案任一项中公开的用途，其中与未治疗的患有所述疾病或病症的对象相比，改变、尤其抑制增加的IFNγ、IL-13或IL-17A表达。
在一个实施方案中，本发明提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于前述实施方案任一项中公开的用途，其中IL-18抑制物通过捕获组织和循环中过量的游离IL-18，代偿IL-18/IL-18BP不平衡。
在另一个实施方案中，本发明提供如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，其用于如前述实施方案任一项中公开的用途，其中治疗包括预防、制止、缓和或逆转与所述疾病或病症相关的症状。
进一步，本发明还提供用于治疗对象中如前述实施方案任一项中限定的疾病或病症的药物组合物，所述对象患有如前述实施方案任一项中限定的这种疾病或病症或具有形成这种疾病或病症的素质，其中所述组合物包含如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性抗体，尤其连同可药用载体和/或赋形剂、尤其为预防和/或治疗有效量。
特别地，本发明提供前述实施方案的药物组合物，其中所述药物组合物任选地还提供促炎细胞因子或其功能性片段的另一种抑制物，或诱导所述促炎细胞因子或其功能性片段的抑制物原位表达的调节因子、共治疗剂如抗炎、支气管扩张、抗组胺、解充血药或镇咳药物物质。
在一个实施方案中，本发明提供如前述实施方案任一项中公开的药物组合物，其包含可药用载体和/或赋形剂。
在一个具体实施方案中，本发明提供用于治疗对象中如前述实施方案任一项中限定的疾病或病症的药物组合物，所述对象患有如前述实施方案任一项中限定的这种疾病或病症或具有形成这种疾病或病症的素质，其中所述组合物包含如前述实施方案的一项或多项中公开的白介素-18结合蛋白(IL-18BP)，尤其连同可药用载体和/或赋形剂、尤其为预防有效量和/或治疗有效量。
在另一个具体实施方案中，本发明提供用于治疗对象中如前述实施方案任一项中限定的疾病或病症的药物组合物，所述对象患有如前述实施方案任一项中限定的这种疾病或病症或具有形成这种疾病或病症的素质，其中所述组合物包含如前述实施方案任一项中公开的拮抗性游离IL-18特异性抗体、尤其本发明的拮抗性游离IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，所述抗体与IL-18/IL-18BP复合物显示在≤0.01％和≤0.05％之间、尤其≤0.1％和≤0.2％之间、尤其≤0.2％和≤0.5％之间、尤其≤0.5％和≤1％之间、尤其≤1％和≤2％之间的交叉反应性，如通过竞争性ELISA所测定，尤其连同可药用载体和/或赋形剂、尤其为预防有效量和/或治疗有效量。
在一个具体实施方案中，本发明提供前述实施方案的药物组合物，其中所述组合物任选地还提供促炎细胞因子或其功能性片段的另一种抑制物，或诱导所述促炎细胞因子或其功能性片段的抑制物原位表达的调节因子、共治疗药如抗炎、支气管扩张、抗组胺、解充血药或镇咳药物物质。
本发明的再一个目的是提供如前述实施方案任一项中公开的药物组合物，其包含可药用载体和/或赋形剂。
本发明还公开表达载体，所述表达载体包含IL-18抑制物的编码序列或如前述实施方案任一项中公开的IL-18反义表达载体，当施用至患有如前述实施方案中限定的疾病或病症或具有形成这种疾病或病症的素质的对象时，所述表达载体导致IL-18抑制物的原位表达，用于治疗如前述实施方案任一项中公开的疾病或病症。
本发明还公开包含IL-18反义表达载体的表达载体，当施用至患有如本发明实施方案中限定的疾病或病症或具有形成这种疾病或病症的素质的对象时，所述表达载体导致原位抑制IL-18表达，用于治疗如前述实施方案任一项中公开的疾病或病症。
本发明还公开包含调节因子的编码序列的表达载体，当施用至患有如前述实施方案的任一项中所公开的疾病或病症或具有形成这种疾病或病症的素质的对象时，所述表达载体导致所述调节因子原位表达，所述调节因子调节控制如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物表达的上游信号传导途径，尤其所述调节因子诱导细胞表达IL-18抑制物，用于治疗如前述实施方案任一项中公开的疾病或病症。
特别地，将如前述实施方案任一项中公开的用于如前述实施方案任一项中所限定的治疗疾病或病症的所述表达载体单独或与如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、如前述实施方案任一项中公开的白介素-18结合蛋白(IL-18BP)或如前述实施方案任一项中公开的药物组合物组合施用至患有如前述实施方案任一项中公开的这种疾病或病症或具有形成这种疾病或病症的素质的对象。
本发明还公开表达载体，所述表达载体包含如前述实施方案任一项中公开的IL-18BP的编码序列，当施用至患有如前述实施方案中限定的疾病或病症或具有形成这种疾病或病症的素质的对象时，所述表达载体导致IL-18BP原位表达，用于治疗如前述实施方案任一项中限定的疾病或病症。
本发明还公开包含调节因子的编码序列的表达载体，当施用至患有如前述实施方案的任一项中限定的疾病或病症或具有形成这种疾病或病症的素质的对象时，所述表达载体导致所述调节因子原位表达，所述调节因子调节控制如前述实施方案任一项中限定的IL-18BP表达的上游信号传导途径，尤其所述调节因子诱导细胞表达IL-18BP，用于治疗如前述实施方案任一项中公开的疾病或病症。
特别地，将如前述实施方案任一项中公开的用于如前述实施方案任一项中所限定的治疗疾病或病症的所述表达载体单独或与如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、如前述实施方案任一项中公开的白介素-18结合蛋白(IL-18BP)或如前述实施方案任一项中公开的药物组合物组合施用至患有如前述实施方案任一项中限定的这种疾病或病症或具有形成这种疾病或病症的素质的对象。
本发明的再一个目的是提供IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性游离IL-18特异性抗体，或包含IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性游离IL-18特异性抗体的药物组合物，或表达载体，用于前述实施方案任一项中公开的用途，其中通过全身性、鼻内、眼内、玻璃体内、滴眼剂、颊、口腔、透粘膜、气管内、静脉内、皮下、尿道内、直肠内、阴道内、舌下、支气管内、肺内、经皮或肌内施用、尤其支气管-肺施用，将它们以预防和/或治疗有效量施用至对象。
特别地，所述对象是哺乳动物，尤其所述对象是人。
本发明还涉及用于治疗对象中如前述实施方案任一项中限定的疾病或病症的方法，所述对象患有如前述实施方案任一项中限定的这种疾病或病症或具有形成这种疾病或病症的素质，所述方法包括向所述对象施用治疗或预防有效量的如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性游离IL-18特异性抗体，或包含IL-18抑制物、尤其IL-18BP、尤其拮抗性游离IL-18特异性抗体的药物组合物，或表达载体。
本发明还涉及在样品中或原位确定游离IL-18的量的方法，所述方法包括在样品中或原位检测前述实施方案任一项的游离IL-18特异性结合分子与游离IL-18蛋白的特异性结合，包括步骤：
a)使疑似含有游离IL-18的样品或特定身体部分或身体区域与前述实施方案任一项的游离IL-18特异性结合分子接触，所述游离IL-18特异性结合分子与游离IL-18特异性结合，但是不与复合物中结合的IL-18特异性结合，并且作为游离IL-18的捕获分子发挥作用；
b)允许游离IL-18特异性结合分子与游离IL-18结合；
c)检测IL-18与游离IL-18特异性结合分子的结合并且确定样品中游离IL-18的量。
在另一个实施方案中，本发明提供诊断患者中如前述实施方案任一项中限定的疾病或病症的方法，所述方法包括在样品中或原位检测前述实施方案任一项的游离IL-18特异性结合分子与游离IL-18蛋白的特异性结合，包括步骤：
a)使疑似含有游离IL-18的样品或特定身体部分或身体区域与前述实施方案任一项的游离IL-18特异性结合分子接触，所述游离IL-18特异性结合分子与游离IL-18特异性结合，但是不与复合物中结合的IL-18特异性结合，并且作为游离IL-18的捕获分子发挥作用；
b)允许游离IL-18特异性结合分子与游离IL-18结合；
c)检测IL-18与游离IL-18特异性结合分子的结合并且确定样品中游离IL-18的量；
d)将患有如前述实施方案任一项中限定的疾病或病症的对象的样品中游离IL-18的量与健康对象样品中的量比较。
在另一个实施方案中，本发明提供用于诊断患者中如前述实施方案任一项中限定的疾病或病症的素质的方法，所述方法包括在样品中或原位检测前述实施方案任一项的游离IL-18特异性结合分子与游离IL-18蛋白特异性结合，包括步骤：
a)使疑似含有游离IL-18的样品或特定身体部分或身体区域与前述实施方案任一项的游离IL-18特异性结合分子接触，所述游离IL-18特异性结合分子与游离IL-18特异性结合，但是不与复合物中结合的IL-18特异性结合，并且作为游离IL-18的捕获分子发挥作用；
b)允许游离IL-18特异性结合分子与游离IL-18结合；
c)检测IL-18与游离IL-18特异性结合分子的结合并且确定样品中游离IL-18的量；
d)将患有如前述实施方案任一项中限定的疾病或病症的患者的样品中游离IL-18的量与健康患者样品中的量比较；
其中与从健康患者获得的正常对照值相比，样品中所述游离-IL-18的量增加表示所述患者患有如前述实施方案任一项中限定的疾病或病症或处于形成这种疾病或病症的风险。
本文中还包括在用前述实施方案任一项的IL-18抑制物、药物组合物或表达载体治疗后监测患者中最小残留疾病的方法，其中所述方法包括：
a)使疑似含有游离IL-18的样品或特定身体部分或身体区域与前述实施方案任一项的游离IL-18特异性结合分子接触，所述游离IL-18特异性结合分子与游离IL-18特异性结合，但是不与复合物中结合的IL-18特异性结合，并且作为游离IL-18的捕获分子发挥作用；
b)允许游离IL-18特异性结合分子与游离IL-18结合；
c)检测IL-18与游离IL-18特异性结合分子的结合并且确定样品中游离IL-18的量；
d)将患有如前述实施方案任一项中限定的疾病或病症的患者的样品中游离IL-18的量与健康患者样品中的量比较；
其中与从健康患者获得的正常对照值相比，样品中所述游离IL-18的量增加表示所述患者仍患有最小残留疾病。
本发明还涉及用于预测患者对用前述实施方案任一项的IL-18抑制物、药物组合物或表达载体治疗的响应的方法，其中所述方法包括：
a)使疑似含有游离IL-18的样品或特定身体部分或身体区域与前述实施方案任一项的游离IL-18特异性结合分子接触，所述游离IL-18特异性结合分子与游离IL-18特异性结合，但是不与复合物中结合的IL-18特异性结合，并且作为游离IL-18的捕获分子发挥作用；
b)允许游离IL-18特异性结合分子与游离IL-18结合；
c)检测IL-18与游离IL-18特异性结合分子的结合并且确定样品中游离IL-18的量；
d)将患有如前述实施方案任一项中限定的疾病或病症的患者的样品中游离IL-18的量与健康患者样品中的量比较；
其中样品中所述游离IL-18的量减少表示所述患者响应于治疗的潜力高。
这些方法任一者可以包括额外步骤：在步骤(a)中使用IL-18BP特异性结合分子，其结合与捕获分子不同的IL-18BP位点，尤其其中所述分子之一与IL-18BP的IL-18结合位点结合。
另外，前述任一方法还可以包括通过以下方式确定样品中游离IL-18BP存在的额外步骤：在步骤(a)中使用IL-18BP特异性捕获分子和IL-18BP特异性检测分子，所述IL-18BP特异性检测分子结合与捕获分子不同的IL-18BP位点，尤其，其中所述IL-18BP特异性分子之一与IL-18BP的IL-18结合位点结合；在步骤c)中确定样品中游离IL-18和总IL-18的量以及游离IL-18BP和与捕获分子结合的总IL-18BP的量；和在步骤d)中将患有如前述实施方案任一项中限定的疾病或病症的患者的样品中游离和/或总IL-18的量以及游离和/或总IL-18BP的量与健康患者的样品中该量比较。
在前述任一方法中使用的捕获分子可以是根据前述实施方案任一项的游离IL-18特异性结合分子、尤其如本文所述的IL-18BP或根据本发明和如本文所述的游离IL-18结合抗体。
在前述任一方法中使用的样品可以是选自支气管肺泡灌洗液(BALF)循环流体、分泌流体、活检及均化组织、尤其血清、尿、泪、唾液、胆汁、汗、呼出、呼气、痰、支气管肺泡液、皮脂、细胞分泌物、腺体分泌物、粘膜分泌物和组织分泌物等的样品。
在一个实施方案中，患有本文公开的任何疾病的对象、尤其人的样品中游离IL-18的量是≥5pg/mL和多至10000pg/mL或更高。特别地，来自患病患者或对象的样品中所述升高的游离IL-18水平处于≥5pg/mL至10000pg/mL的范围内、尤其处于100pg/mL至10000pg/mL的范围内、尤其处于200pg/mL至10000pg/mL的范围内、尤其处于300pg/mL至10000pg/mL的范围内、尤其处于400pg/mL至10000pg/mL的范围内、尤其处于500pg/mL至10000pg/mL的范围内、尤其处于600pg/mL至10000pg/mL的范围内、尤其处于700pg/mL至10000pg/mL的范围内、尤其处于800pg/mL至10000pg/mL的范围内、尤其处于900pg/mL至10000pg/mL的范围内、尤其处于1000至10000pg/mL的范围内、尤其处于1500pg/mL至10000pg/mL的范围内、尤其处于2000pg/mL至10000pg/mL的范围内、尤其处于3000pg/mL至10000pg/mL的范围内、尤其处于4000pg/mL至10000pg/mL的范围内、尤其处于5000pg/mL至10000pg/mL的范围内。健康对象、尤其健康人的血清中游离IL-18的量是≤5pg/mL、尤其≤4pg/mL、尤其≤1pg/mL、尤其≤0.5pg/m、尤其低于检测水平。
特别地，患有本文公开的任何疾病的对象、尤其人的分离的样品中游离IL-18的量是≥5pg/mL并且尤其多至10000pg/mL，而健康对象、尤其健康人的样品中游离IL-18的量是≤4pg/mL。
在本发明的另一个实施方案中，提供一组生物标志物用于前述任一项检测方法中，以进一步详细说明如前述实施方案任一项中限定的疾病或病症，以诊断如前述实施方案任一项中限定的疾病或病症的素质，以监测对象中的最小残留疾病，或以预测对象对采用前述实施方案任一项的IL-18抑制物、药物组合物或表达载体治疗的响应，包括确定生物标志物谱并且关联获得的图谱与特异性疾病或病症。
特别地，生物标志物可以用于这样的方法，所述方法用于诊断如前述实施方案任一项中限定的疾病或病症、用于诊断如前述实施方案任一项中限定的疾病或病症的素质或用于监测对象中最小残留疾病，或用于预测对象对采用如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、如前述实施方案任一项中公开的IL-18BP或包含如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物的药物组合物的治疗的响应，所述方法包括步骤：
a)通过从所述对象取得体液样品，获得待检验对象的生物标志物谱；
b)获得健康参照群体的生物标志物谱；
c)从患有所述疾病或病症的群体获得生物标志物谱并且
d)将步骤a)中获得的生物标志物谱与步骤b)和步骤c)中获得的谱比较。
本发明的再一个目的是提供一组生物标志物用于诊断如前述实施方案任一项中限定的疾病或病症、用于诊断如前述实施方案任一项中限定的疾病或病症的素质或用于监测对象中最小残留疾病，或用于预测对象对采用如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、如前述实施方案任一项中公开的IL-18BP或包含如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物的药物组合物的治疗的响应，包含a)IL-18、IL-18BP、IL-13、IL-17A、IL-8、IL-1β、IL-2、IL-12、IL-4、IL-6、INF-γ、TNF-α、VEGF、EGF、HB-EGF、TGF-α、MMP-9、MMP-12、髓过氧化物酶、通过免疫测定测量的钙卫蛋白(calprotectin)、TGF-β、金属蛋白酶的组织抑制物(TIMP-1)、肝细胞生长因子(HGF)、缺氧诱导的因子1α(HIF-1α)、von Willebrand因子(vWF)、EN-RAGE、S-RAGE、表面活性蛋白D、HsCRP、纤维蛋白原、内皮微粒子，和b)气体，包含NO、CO、烷烃、戊烷、乙烷，由呼出气组成测量。
本发明的再一个目的是提供药物试剂盒，所述药物试剂盒包含如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物、如前述实施方案任一项中公开的白介素-18结合蛋白(IL-18BP)或以独立单位剂量形式包含如前述实施方案任一项中公开的IL-18抑制物和本发明可药用载体和/或赋形剂的药物组合物，所述形式适于按有效量施用。
在一个实施方案中，本发明提供用于检测游离IL-18的诊断试剂盒，所述诊断试剂盒包含前述实施方案任一项的游离IL-18特异性结合分子作为捕获分子，和第二IL-18特异性结合分子作为检测分子和，任选地，第二IL-18特异性捕获分子，其中检测分子与捕获分子结合不同的IL-18位点。
在另一个实施方案中，提供用于检测总IL-18或总IL-18BP的诊断试剂盒，所述诊断试剂盒包含不与IL-18BP的IL-18结合位点结合的第一IL-18BP特异性结合分子和不与IL-18的IL-18BP结合位点结合的第二IL-18特异性结合分子。
本文还提供用于检测游离IL-18BP的诊断试剂盒，所述诊断试剂盒包含第一IL-18BP特异性结合分子作为捕获分子和第二IL-18特异性结合分子作为检测分子，其中所述检测分子与捕获分子结合不同的IL-18BP位点。
在一个实施方案中，诊断试剂盒并入在上文限定的诊断试剂盒中所含的一些或全部结合分子的组合。
本发明的再一个目的是提供用于检测游离IL-18的诊断试剂盒，所述诊断试剂盒包含如前述实施方案任一项中公开的IL-18特异性抗体作为捕获抗体或IL-18BP作为备选捕获分子，和如前述实施方案任一项中公开的第二IL-18特异性检测抗体或IL-18特异性抗体作为检测抗体及第二IL-18特异性捕获抗体，其中检测抗体与捕获分子结合不同的IL-18位点。
本发明的再一个目的是提供用于检测总IL-18或总IL-18BP的诊断试剂盒，所述诊断试剂盒包含不与IL-18BP的IL-18结合位点结合的第一单克隆IL-18BP特异性抗体和不与IL-18的IL-18BP结合位点结合的第二IL-18特异性抗体。
本发明的再一个目的是提供用于检测游离IL-18BP的诊断试剂盒，所述诊断试剂盒包含第一单克隆IL-18BP特异性捕获抗体和IL-18BP特异性检测抗体，其与捕获抗体结合不同的IL-18BP位点。
在另一个实施方案中，本发明提供诊断试剂盒，所述诊断试剂盒包含如前述实施方案任一项中公开的全部诊断试剂盒。
本发明现在提供IL-18BP，用于通过向患有这种疾病或病症或具有形成这种疾病或病症的素质的对象施用的治疗有效量至少一种IL-18BP，治疗所述对象中的IL-18相关疾病或病症。
IL-18BP在本发明的范围内理解为还包括IL-18BP的突变蛋白、IL-18BP的功能部分或衍生物、IL-18BP的环状排列衍生物、包含IL-18BP的融合蛋白、IL-18BP的同种型或其盐。
IL-18BP可以本身或以组合物、尤其药物组合物的形式提供。所述组合物可以包含额外的医用活性剂、药剂、载体、缓冲剂、分散剂、稀释剂、共治疗剂如抗炎、支气管扩张、抗组胺、解充血剂或镇咳药物物质等，这取决于预期用途和应用。
因此，本发明提供IL-18BP或包含IL-18BP和可药用载体和/或赋形剂的药物组合物，用于在患有IL-18相关疾病或病症或具有形成这种疾病或病症的素质的对象中治疗这种疾病或病症。
根据本发明，进一步提供IL-18BP或包含IL-18BP和可药用载体和/或赋形剂的药物组合物，用于治疗需要这种治疗的对象中的IL-18相关疾病或病症，其中IL-18相关疾病或病症由特定组织和/或身体区室中IL-18过量表达引起，这导致所述组织和/或区室中IL-18/IL-18BP不平衡。例如，如本文所述的IL-18表达增强导致与健康对照对象相比，所述对象的肺、血清、痰、支气管肺泡灌洗液(BALF)或循环中IL-18水平升高，尤其痰和/或血清中的IL-18水平升高。
在本发明的多种实施方案中，如本文所述的IL-18相关疾病或病症由IL-18过量表达引起。因此，如本文所述的IL-18表达增强导致与健康对照对象相比，患有这种疾病或病症或具有形成这种疾病或病症的素质的对象的肺、血清、痰、支气管肺泡灌洗液(BALF)和/或循环中IL-18水平升高，尤其痰和/或血清中的IL-18水平升高。另外，升高的IL-18水平导致患有这种疾病或病症的对象中IL-18/IL-18BP不平衡。
在一个具体实施方案中，本发明提供IL-18BP或包含IL-18BP和可药用载体和/或赋形剂的药物组合物，用于在患有如本发明的多种实施方案中所述的IL-18相关疾病或病症或具有这种疾病或病症的素质的对象中通过捕获过量IL-18，补偿IL-18/IL-18BP不平衡。特别地，与未治疗的对象相比，IL-18BP降低IL-18水平。
在又一个实施方案中，本发明提供IL-18BP或包含IL-18BP和可药用载体和/或赋形剂的药物组合物，用于治疗本发明的IL-18相关疾病或病症，其中IL-18BP导致IL-18的表达的抑制。特别地，IL-18BP将IL-18水平朝未治疗对象的那些水平降低。
本发明还提供IL-18BP或包含IL-18BP和可药用载体和/或赋形剂的药物组合物，用于治疗IL-18引起的局部和全身性炎症表现。
本发明还提供IL-18BP或包含IL-18BP和可药用载体和/或赋形剂的药物组合物，用于治疗IL-18引起的局部和全身性炎症表现和相关共病(如气肿、组织炎症、组织破坏、肺切除、脉管系统消失、粘膜化生、心脏肥大、肺组织中VEGF减少、肺血管损失、血管肌化、胶原蛋白沉积、肺中异常弹性蛋白层、纤维化气道重塑、气腔膨大、慢性气道和肺血管重塑和/或肺功能减低)。
在本发明的另一个方面，与健康对照对象相比，如本发明公开的IL-18的升高的水平在患有所述IL-18相关疾病或病症的对象中触发增强的IFNγ、IL-13或IL-17A表达。因此，本发明提供IL-18BP或包含IL-18BP和可药用载体和/或赋形剂的药物组合物用于调节、尤其用于减少对象中IFNγ、IL-13或IL-17A的表达和/或产生。
在本发明的某些实施方案中，IL-18BP或包含IL-18BP和可药用载体和/或赋形剂的药物组合物导致抑制IL-18与IL-18受体(IL-18R)结合、尤其抑制IL-18与IL-18受体-α(IL-18Rα)结合。
IL-18相关疾病或病症的表现由Th1细胞因子反应和/或Th2细胞因子反应触发。本发明的IL-18BP或包含IL-18BP和可药用载体和/或赋形剂的药物组合物因此导致抑制Th1细胞因子反应和/或Th2细胞因子反应。
在本发明的某些实施方案中，IL-18BP或包含IL-18BP和可药用载体和/或赋形剂的药物组合物导致调节IL-18依赖性下游信号传导途径，例如，调节TNF-α、IL-1β、IL-8、巨噬细胞炎性蛋白-α(MIP-α)、IL-12、IL-15和一氧化氮生产和/或释放的途径。特别地，所述信号传导途径受抑制。
在本发明的一个实施方案中，IL-18BP或包含IL-18BP和可药用载体和/或赋形剂的药物组合物防止胱天蛋白酶激活。特别地，所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-1。
在一个实施方案中，本发明提供IL-18BP或包含IL-18BP和可药用载体和/或赋形剂的药物组合物，用于治疗IL-18相关疾病，如慢性阻塞性肺病(COPD)、心脏病和II型糖尿病。
在一个实施方案中本发明提供IL-18BP或包含IL-18BP和可药用载体和/或赋形剂的药物组合物，用于治疗IL-18相关疾病，如慢性阻塞性肺病(COPD)、输注相关性肺损伤、支气管肺发育不良(BPD)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、成人Still病、青少年Still病、间质性肺病(ILD)、特发性肺纤维化、囊性纤维化、肺动脉高血压、哮喘、支气管扩张症、心力衰竭、肌萎缩侧索硬化(ALS)、干眼病(DED)、角膜炎、角膜溃疡和磨损、角膜血管新生、病理性眼内新血管化、虹膜炎、青光眼、黄斑变性、
Figure BDA0003786898910000341
综合征、自身免疫性葡萄膜炎、
Figure BDA0003786898910000342
病、结膜炎、过敏性结膜炎、眼睑皮炎、II型糖尿病、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、脂肪性肝炎、实体器官和血液移植、局部缺血再灌注损伤、家族性地中海热、肿瘤坏死因子受体1相关的周期性综合征、cryopyrin相关的周期性发热综合征、高IgD综合征、痛风、Schnitzler综合征、韦格纳肉芽肿，又称作肉芽肿病伴多血管炎(GPA)、桥本甲状腺炎、Crohn病、溃疡性结肠炎、免疫球蛋白-4(IgG4)相关的疾病和干细胞疗法。
在一个具体实施方案中，本发明提供IL-18BP或包含IL-18BP和可药用载体和/或赋形剂的药物组合物，用于治疗如本文定义的IL-18相关性肺疾病或病症、心脏病或病症或II型糖尿病。
更具体地，待治疗的所述IL-18相关疾病或病症表现于对象的肺中并且可以导致形成与炎症的全身性表现相关的慢性阻塞性肺病(COPD)和相关共病如气肿、组织炎症、组织破坏、肺切除、脉管系统消失、粘膜化生、心脏肥大、肺组织中VEGF减少、肺血管损失、肺血管肌化、肺中胶原蛋白沉积、肺中异常弹性蛋白层、纤维化气道重塑、气腔膨大、慢性气道和肺血管重塑和肺功能减低。特别地，所述表现是烟雾引起肺部炎症。在一个具体实施方案中，本发明提供本发明的IL-18BP或包含IL-18BP和可药用载体和/或赋形剂的药物组合物，用于治疗慢性阻塞性肺病(COPD)。
对象中观察到的IL-18/IL-18BP不平衡和如本文所述的引起疾病或病症，如COPD，可以由吸烟或二手烟暴露、尤其烟草烟雾暴露和/或病毒性感染引起。特别地，香烟烟雾暴露可以导致烟雾引起肺气肿和/或炎症的形成。
在本发明的另一个方面，待治疗的IL-18相关疾病或病症由长期暴露于空气污染引起。
因此，本发明还提供IL-18BP或包含IL-18BP和可药用载体和/或赋形剂的药物组合物，用于治疗IL-18引起的气道和血管重塑，因此，阻止COPD疾病表现和进展。
在本发明的一个方面，肺泡巨噬细胞是IL-18水平升高的重要来源。因此，如本发明提供的IL-18BP或包含IL-18BP和可药用载体和/或赋形剂的药物组合物减少肺泡巨噬细胞表达和/或产生IL-18。
本发明还提供IL-18BP或包含IL-18BP和可药用载体和/或赋形剂的药物组合物，用于阻止和/或抑制受如本文所述的IL-18相关疾病或病症侵袭的肺组织细胞和/或上皮细胞的烟雾引起细胞死亡形式。特别地，所述烟雾引起细胞死亡形式是凋亡。
在本发明的一个实施方案中，预防地施用本发明和如本文在多种实施方案中公开的药物组合物。
在本发明的另一个实施方案中，治疗地施用本发明和如本文在多种实施方案中公开的药物组合物。
在本发明的一个实施方案中，将本发明和如本文在多种实施方案中公开的药物组合物通过全身性、鼻内、眼内、玻璃体内、滴眼剂、经颊、口腔、透粘膜、气管内、静脉内、皮下、尿道内、直肠内、阴道内、舌下、支气管内、肺内、经皮或肌内施用来施用至患有IL-18相关疾病或病症或具有形成这种疾病或病症的素质的对象。特别地，通过支气管-肺施用来施用本发明和如本文在多种实施方案中公开的药物组合物。
可以将本发明和如本文在多种实施方案中公开的药物组合物作为液体、液体喷雾、微球、半固体、凝胶或粉剂提供用于透粘膜施用，例如鼻内、经颊、经口腔粘膜、气管内、尿道内、阴道内、舌下、支气管内、肺内和/或透皮施用。另外，组合物可以为固体剂型用于经颊、经口腔粘膜和/或舌下施用。鼻内、经颊、口腔气管内、尿道内、阴道内、透粘膜和舌下施用导致如本文所述的组合物在口腔中在体温崩解并且任选地可以黏附至口腔的体组织。额外地，如本文中公开的组合物还可以包括一种或多种赋形剂、稀释剂、粘合剂、润滑剂、助流剂、崩解剂、去敏化剂、乳化剂、粘膜胶粘剂、增溶剂、悬浮剂、粘度调节物、离子张度剂、缓冲剂、载体、表面活性剂、香料或其混合物。
在本发明的一个具体方面，将组合物配制为肠胃外用剂、静脉内剂、片剂、丸剂、生物黏附贴剂、滴剂、海绵剂、薄膜剂、锭剂、硬糖、薄片、球状体、棒棒糖、盘形结构、栓剂或喷雾剂。
透粘膜施用通常起效迅速，原因粘膜的血管供应丰富和表皮中缺少角质层。这种药物转运一般引起血液浓度快速升高，并且类似地避免肝肠循环和立即被胃酸破坏或消化道壁和的部分“首过”效应和肝代谢。药物一般需要延长暴露于粘膜表面以便显著的药物吸收发生。
透粘膜途径也能够比口服途径更有效，在于这些途径可以提供相对更快的吸收和治疗作用发动。另外，透粘膜途径可以优选用于治疗难以吞咽片剂、胶囊剂或其他口服固体的患者，或具有疾病损伤的肠道吸收的那些患者。因此，透粘膜施用IL-18BP或包含IL-18BP和可药用载体和/或赋形剂的药物组合物存在许多优点。
在鼻内途径或颊部途径任一者中，药物吸收可以延迟或延长，或摄取可以几乎与实施静脉内快速推注同样迅速。因为丰富血液供应的高通透性，舌下途径可以提供快速起效。
鼻内组合物可以根据它们的形式通过任何适宜的方法施用。包括微球或粉末的组合物可以使用鼻用吹入器装置施用。这些装置的例子是本领域技术人员熟知的，并且包括商业粉末系统如Fisons Lomudal系统。吹入器产生干燥粉末或微球的精细分散的云雾。吹入器优选地设有确保施用基本上固定量的组合物的机制。粉末或微球可以采用吹入器直接使用，所述吹入器设有粉末或微球的瓶或容器。备选地，可以将粉末或微球填充入胶囊如明胶胶囊或适应于经鼻给药的其他单次给药装置。吹入器优选地具有破坏胶囊的机制或其他装置。另外，组合物可以提供活性成分的初始快速释放，随后提供活性成分的缓释，例如，通过提供多于一种类型的微球或粉末。另外，适于施用组合物至鼻腔的备选方法将是本领域普通技术人员熟知的。可以使用任何合适的方法。关于合适方法的更详述描述，参考EP2112923、EP1635783、EP1648406，EP2112923(全部内容通过引用的方式并入本文)。
在本发明的一个实施方案中，本发明和如本文在多种实施方案中公开的药物组合物还可以鼻内施用，即通过吸入施用，并且因此，可以按适于鼻内施用的形式配制，即配制为气溶胶剂、干粉制剂或液体制剂。
合适的药用载体、赋形剂和/或稀释剂的例子是本领域熟知的并且包括但不限于胶、淀粉(例如玉米淀粉、预糊化淀粉)、糖(例如、乳糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖)、纤维素材料(例如微晶纤维素)、丙烯酸酯(例如聚丙烯酸甲酯)、碳酸钙、氧化镁、滑石、或它们的混合物。
用于液态制剂的可药用载体是水溶液或非水溶液、悬液、干粉制剂、乳液或油。非水溶剂的例子是丙二醇、聚乙二醇和可注射的有机酯如油酸乙酯。油的例子是动物、蔬菜或合成来源的那些油，例如，花生油、大豆油、橄榄油、向日葵油、鱼肝油、另一种海洋动物油、或来自乳或卵的脂质。
本发明还涉及通过经由呼吸道吸入处于干粉制剂、气态制剂或挥发性制剂的本发明和如本文在多种实施方案中公开的药物组合物进入全身循环的经肺施用。吸收实际上同样迅速，随着制剂可以递送至肺的肺泡中，原因是肺泡和血管上皮膜是非常可透的，血流量丰富并且存在非常大的吸附表面。例如，气溶胶可以从加压包装、定量吸入器(MDI)递送。
本发明和如本文在多种实施方案中公开的药物组合物通常将与根据选定的吸入工具和标准药物实践选择的合适药物赋形剂、稀释剂或载体混合施用。
在本发明的另一个实施方案中，IL-18BP制剂或包含IL-18BP的药物组合物的制剂是干粉剂，任选地连同至少一种颗粒状可药用载体，所述可药用载体可以是称作可药用载体的一种或多种材料，其优选地选自干粉吸入组合物中称作载体的材料，例如糖，包括单糖、二糖、多糖和糖醇如阿拉伯糖、葡萄糖、果糖、核糖、甘露糖、蔗糖、海藻糖、乳糖、麦芽糖、淀粉、葡聚糖、甘露醇或山梨醇。特别优选的载体是乳糖，例如乳糖一水合物或无水乳糖。干粉剂可以作为单位剂量含于(例如，明胶或塑料)胶囊，中或含于(例如铝或塑料)泡罩中，用于干粉剂吸入装置中，所述干粉剂吸入装置可以是单剂量或多剂量装置，优选地处于剂量单位，连同载体，数量为使得粉末总重量每胶囊为5mg至50mg。备选地，干粉剂可以含于适应于递送的多剂量干粉吸入(MDDPI)装置中的储器内。
可以使用任何其他治疗性有效的施用途径，例如，通过上皮或内皮组织吸收或通过其中将编码活性剂的DNA分子施用至患者(例如通过表达载体)的基因治疗，这引起活性剂在体内表达和分泌。
在身体内，可以通过调节控制IL-18BP表达的上游信号传导途径，诱导IL-18BP的表达。例如，作为通过IL-18调节IFN-γ诱导作用的负反馈环的部分，IL-18BP由IFN-γ特异性诱导。据报道调节IL-18BP表达的其他已知因子是IL-18、IL-27、IFN-α和STAT1。
因此，在本发明的一个实施方案中，通过修改控制IL-18BP表达的一个或多个上游信号传导途径间接地诱导IL-18BP的细胞表达。特别地，通过修改至少一个上游信号传导途径，间接诱导IL-18BP的表达。
本发明还涉及包含IL-18BP的编码序列的表达载体，所述表达载体用于制备在患有如本文所述的IL-18相关疾病或病症或具有形成这种疾病或病症的素质的对象中治疗这种疾病或病症的药物。
在一个具体实施方案中，本发明涉及包含调节因子的编码序列的表达载体，所述调节因子调节上游信号传导途径，所述上游信号传导途径调节IL-18BP的表达。因此，所述调节因子通过调节至少一个上游信号传导途径，诱导IL-18BP的表达。
本发明还涉及包含调节因子的编码序列的表达载体，所述调节因子调节上游信号传导途径，所述上游信号传导途径调节IL-18BP的表达，所述表达载体用于制备在患有如本文所述的IL-18相关疾病或病症或具有形成这种疾病或病症的素质的对象中治疗这种疾病或病症的药物。
本发明还涉及包含调节因子的编码序列的表达载体，所述调节因子诱导IL-18BP的表达，用于在患有如本文所述的IL-18相关疾病或病症或具有形成这种疾病或病症的素质的对象中治疗这种疾病或病症。特别地，它涉及涉及包含调节因子的编码序列的表达载体，所述调节因子诱导IL-18BP在肺中表达，用于在患有如本文所述的IL-18相关疾病或病症或具有形成这种疾病或病症的素质的对象中治疗这种疾病或病症。
任选地，本发明提供第二表达载体，其包含第二天然存在的促炎细胞因子抑制物或调节因子的编码序列，所述调节因子调节至少一个上游信号传导途径，所述上游信号传导途径调节所述促炎细胞因子的表达。特别地，所述调节因子诱导所述细胞因子抑制物的表达。
特别地，IL-18的表达由RNA干扰(RNAi)或IL-18反义表达载体调节。更特别地，通过RNA干扰(RNAi)调节IL-18的表达，其中通过转录后基因沉默(PTGS)下调IL-18的表达。特别地，IL-18的表达在患有如本文中公开的疾病或病症的对象的肺中下调。RNA干扰机制包括任何转录后基因沉默事件、尤其由微RNA(miRNA)或小干扰性RNA(siRNA)诱导的任何转录后基因沉默事件。微RNA(miRNA)和小干扰性RNA(siRNA)可以由根据本发明和如本文所述的表达载体表达。
基因治疗方案可以因此用于治疗如本文所述和如多种实施方案中公开的IL-18相关疾病或病症。因此，IL-18BP的表达原位发生，因此，直接中和受所述疾病或病症影响的组织或细胞中的IL-18。特别地，在肺中诱导如本文中公开的IL-18BP的表达。
本发明和如本文在多种实施方案中公开的药物组合物可以在人医学和兽医学中用于治疗如本文在多种实施方案中所述的IL-18相关疾病或病症，以治疗人类和动物，所述动物包括禽类、非人灵长类、犬、猫、猪、山羊、羊、牛、马、小鼠、大鼠和兔。
在一个具体实施方案中，本发明提供如本文在多种实施方案中公开的本发明药物组合物，用于在多种实施方案中治疗如本文所述的IL-18相关疾病或病症，其中对象是哺乳动物，特别地对象是人。
在另一个具体实施方案中，施用治疗有效量的如本文在多种实施方案中公开的本发明药物组合物和合适剂量的至少第二种促炎细胞因子抑制物。特别地，所述抑制物是对IL-1、IL-6、IL-13、IL-17A、IFNγ或TNFα特异的。
水性载体包括水、醇/水溶液、乳液或悬液，包括盐水和缓冲的介质如磷酸盐缓冲盐水溶液，水、乳液，如油/水乳液、多种类型的润湿剂、无菌溶液等。可以通过熟知的常规方法配制包含这类载体的组合物。合适的载体可以包含与本发明的生物活性化合物组合时保留生物活性的任何材料。
本领域中已经做出努力以化学地修改皮肤的屏障特性，以允许某些活性剂渗透、增强正在递送的活性剂的有效性、增强递送时间、减少递送的剂量、减少源自多种递送方法的副作用、减少患者反应等。
在这个方面，增渗剂已经用来增加皮肤表面对药物的通透性，并且经常是质子接受溶剂如二甲基亚砜(DMSO)和二甲基乙酰胺。已经研究并报告为有效的其他增渗剂包括2-吡咯烷、N,N-二乙基-间-甲苯甲酰胺(Deet)、1-十二烷基-氮杂环庚烷-2-酮、N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基-2-吡咯烷、巯基乙酸钙、己醇、脂肪酸和酯、吡咯烷酮衍生物、1,3-二噁烷和1,3-二氧戊环的衍生物、1-N-十二烷基-2-吡咯烷酮-5-羧酸、2-戊基-2-氧代-吡咯烷乙酸、2-十二烷基-2-氧代-1-吡咯烷乙酸、1-氮杂环庚-2-酮-2-十二烷基乙酸和氨基醇衍生物，尤其包括1,3-二噁烷的衍生物。
用于透粘膜施用的制品可以包含无菌水性溶液剂或非水溶液剂、干粉制剂、悬液和乳剂。非水溶剂的例子是丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄榄油和可注射有机酯如油酸乙酯。水性载体包括水、醇/水溶液、乳剂或悬液，包括盐水和缓冲的介质。透粘膜载体可以包括氯化钠溶液、Ringer葡萄糖液、葡萄糖和氯化钠、乳酸化Ringer液或不挥发性油。防腐剂和其他添加物也可以存在，包括例如抗微生物剂、抗氧化剂、络合剂和惰性气体等。此外，本发明的药物组合物可能包含蛋白质载体，如，血清白蛋白或免疫球蛋白，优选地是人源的。
如本文在多种实施方案中公开的本发明药物组合物可以局部地施用至体表并且因此以适于局部施用的形式配制。合适的局部用制剂包括凝胶、油膏、乳霜、洗剂、滴剂等。对于局部施用，制备如本文在多种实施方案中公开的本发明药物组合物并且作为具有或没有药学载体的生理可接受的稀释剂中的溶液、悬液或乳液施加。
本发明和如本文在多种实施方案中公开的药物组合物也可以作为控释组合物(即其中活性成分在施用后的一段时间内释放的组合物)施用。控释组合物或持续释放组合物包括亲脂性库(例如脂肪酸、蜡、油)中的制剂。在另一个实施方案中，组合物是快速释放组合物，即其中全部活性成分在施用后立即释放的组合物。
WO2006/085983中提供合适制剂的其他例子，所述专利的全部内容通过引用的方式并入本文。例如，本发明和如本文在多种实施方案中公开的本发明药物组合物可以作为脂质体制剂提供。形成脂质体悬液的技术是本领域熟知的。所用的脂质层可以具有任何常规组成并且可以含有胆固醇或可以无胆固醇。如通过使用标准超声处理和均匀化技术，脂质体可以缩减大小。含有如本文在多种实施方案中公开的本发明药物组合物的脂质体制剂可以冻干，以产生可以用可药用载体，如水重构以再生脂质体悬液的冻干物。如本文在多种实施方案中公开的本发明药物组合物可以合适的剂量施用至对象。剂量方案将由主治医生和临床因素决定。如医学领域中熟知，针对任一对象的剂量取决于许多因素，包括对象的大小、身体表面积、年龄、待施用的具体化合物、性别、施用时间和途径、总体健康状况和正在共同施用的其他药物。
另外，设想本发明的药物组合物可能包含其他生物活性剂，这取决于药物组合物的预期用途。这些其他生物活性剂可以是例如抗体、抗体片段、激素、生长因子、酶、结合分子、细胞因子、趋化因子、核酸分子和药物。在一个优选实施方案中，本发明的药物组合物将与长效β-肾上腺素受体激动剂(LABA)、长效毒蕈碱拮抗剂(LAMA)、类固醇、皮质类固醇、糖皮质激素和糖皮质激素激动剂磷酸二酯酶抑制剂、激酶抑制剂、细胞因子和趋化因子抑制剂或拮抗剂或蛋白酶抑制剂或其组合共施用。
如本文在多种实施方案中公开的本发明药物组合物的剂量将取决于正在治疗的病症、所用的具体组合物和其他临床因素如对象的体重、大小和状况、体表面积、待施用的化合物或组合物、正在同时施用的其他药物，和施用途径。
如本文在多种实施方案中公开的本发明药物组合物可以与其他生物活性物质和方法组合施用，以治疗与IL-18相关疾病相关的症状，如慢性阻塞性肺病(COPD)、输注相关性肺损伤、支气管肺发育不良(BPD)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、成人Still病、青少年Still病、间质性肺病(ILD)、特发性肺纤维化、囊性纤维化、肺动脉高血压、哮喘、支气管扩张症、心力衰竭、肌萎缩侧索硬化(ALS)、干眼病(DED)、角膜炎、角膜溃疡和磨损、角膜血管新生、病理性眼内新血管化、虹膜炎、青光眼、黄斑变性、
Figure BDA0003786898910000421
综合征、自身免疫性葡萄膜炎、
Figure BDA0003786898910000422
病、结膜炎、过敏性结膜炎、眼睑皮炎、II型糖尿病、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、脂肪性肝炎、实体器官和血液移植、局部缺血再灌注损伤、家族性地中海热、肿瘤坏死因子受体1相关的周期性综合征、cryopyrin相关的周期性发热综合征、高IgD综合征、痛风、Schnitzler综合征、韦格纳肉芽肿，又称作肉芽肿病伴多血管炎(GPA)、桥本甲状腺炎、Crohn病、溃疡性结肠炎、免疫球蛋白-4(IgG4)相关的疾病和干细胞疗法。其他生物活性物质可以是混合物形式的已经包含本发明组合物的相同组合物的部分，其中本发明的组合物和其他生物活性物质在相同的可药用溶剂和/或载体中混合或与相同的可药用溶剂和/或载体混合或可以作为单独组合物的部分单独提供，所述部分可以单独提供或按试剂盒的部分的形式一起提供。
如本文在多种实施方案中公开的本发明药物组合物可以与其他生物活性物质间断或依次地共同施用。例如，本发明的组合物可以与第一种额外生物活性物质同时施用或在施用所述组合物后或之前依次施用。如果选择其中施用多于一种额外生物活性物质和至少一种本发明组合物的施加方案，则化合物或物质可以部分地同时施用、按多种组合部分地依次施用。
因此，本发明的另一个目的是提供如本文在多种实施方案中公开的本发明药物组合物的混合物，所述药物组合物以治疗或预防有效量任选地包含一种或多种其他生物活性物质，以及使用本发明的这种组合物或其混合物用于预防和/或治疗性治疗和/或缓和慢性阻塞性肺病(COPD)、心脏病和II型糖尿病的影响的方法。
因此，本发明的另一个目的是提供如本文在多种实施方案中公开的本发明药物组合物的混合物，所述药物组合物以治疗或预防有效量任选地包含一种或多种其他生物活性物质，以及使用本发明的这种组合物或其混合物用于预防和/或治疗性治疗和/或缓和以下疾病的影响的方法：慢性阻塞性肺病(COPD)、输注相关性肺损伤、支气管肺发育不良(BPD)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、成人Still病、青少年Still病、间质性肺病(ILD)、特发性肺纤维化、囊性纤维化、肺动脉高血压、哮喘、支气管扩张症、心力衰竭、肌萎缩侧索硬化(ALS)、干眼病(DED)、角膜炎、角膜溃疡和磨损、角膜血管新生、病理性眼内新血管化、虹膜炎、青光眼、黄斑变性、
Figure BDA0003786898910000431
综合征、自身免疫性葡萄膜炎、
Figure BDA0003786898910000432
病、结膜炎、过敏性结膜炎、眼睑皮炎、II型糖尿病、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、脂肪性肝炎、实体器官和血液移植、局部缺血再灌注损伤、家族性地中海热、肿瘤坏死因子受体1相关的周期性综合征、cryopyrin相关的周期性发热综合征、高IgD综合征、痛风、Schnitzler综合征、韦格纳肉芽肿，又称作肉芽肿病伴多血管炎(GPA)、桥本甲状腺炎、Crohn病、溃疡性结肠炎、免疫球蛋白-4(IgG4)相关的疾病和干细胞疗法。
其他生物活性物质或化合物可以通过与本发明组合物相同或相似的机制、或通过不相关的作用机制或通过多重相关和/或不相关的作用机制，产生其生物学作用。
通常，其他生物活性的化合物可以包括针对以下产生并与之结合的抗体：INF-γ、IL-17A、IL-13、IL-1β、IL-6、IL-2、IL-4、IL-12、TNF-α。特别地，本发明的混合物可以包含IL-18BP(IL-18BP)或根据本发明和如本文所述的包含IL-18BP(IL-18BP)和可药用载体和/或赋形剂的药物组合物。
如本文在多种实施方案中公开的本发明药物组合物的合适剂量将根据对象的状况、年龄和物种变动，并且可以由本领域技术人员轻易决定。在兽医学和人医学中使用的每日总剂量将适当地处于0.01-2000mg/kg体重范围内，优选地是从0.1-1000mg/kg体重，优选地是从1-100mg/kg并且这些每日总剂量可以作为单一剂量或分立剂量施用，并且额外地，当发现适用时，也可以超出上限。这种剂量将针对每个特定病例中的个别要求调整，所述个别要求包括正在施用的具体化合物、施用途径、正在治疗的病状以及正在治疗的对象。然而，化合物也可以作为储库制品(植入物、缓释制剂等)每周、每月或以甚至更长间距施用。在这种情况下，剂量将比每日剂量高得多并且必需适应于施用形式、体重和具体适应症。适宜的剂量可以通过实施常规模型测试、优选地通过动物模型确定。活性成分的有效剂量至少取决于正在治疗的病状的性质、毒性、所述化合物是否以预防方式或针对活动性感染或病状使用、递送方法和药物制剂，并且将由临床医生使用常规剂量递增研究决定。可以预期它是从每日约0.01mg至约1g/kg体重。例如，对于局部递送，体重大约70kg的成人的每日候选剂量范围将是从约1mg至约500mg，通常在约5mg和约40mg之间，并且可以采取单个或多个剂量或施用部位的形式。对于鼻内递送，候选剂量范围可以预期是每日约0.01mg至约1g/kg体重。
另外，IL-18BP的功能性衍生物可以缀合于聚合物以改善蛋白质的特性，如稳定性、半寿期、生物利用率、人体耐受性或免疫原性。为了实现这个目的，IL18-BP可以例如连接至聚乙二醇(PEG)。PEG化可以通过已知方法(例如在WO92/13095中描述的方法)实施。
因此，在本发明的另一个实施方案中，IL-18BP是PEG化的。
在本发明的又一个实施方案中，IL-18BP是融合蛋白，所述融合蛋白包含与全部或部分免疫球蛋白融合的全部或部分IL-18BP。
在本发明的又一个实施方案中，IL-18BP是PEG化的，与全部或部分免疫球蛋白融合，优选地与免疫球蛋白的恒定区融合，并且其中融合蛋白仍然能够与IL-18结合。更具体地，免疫球蛋白可以是IgG1或IgG2同种型。
本领域技术人员将理解，所产生的融合蛋白保留IL-18BP的生物学活性，尤其与IL-18的结合。融合物可以是直接的，或借助短接头肽，所述短接头肽可以短至1到3个氨基酸残基长或更长，例如，13个氨基酸残基长。所述接头可以是序列为E-F-M(Glu-Phe-Met)(SEQ ID NO:9)的三肽，例如，或在IL-18BP序列和免疫球蛋白序列之间引入的包含Glu-Phe-Gly-Ala-Gly-Leu-Val-Leu-Gly-Gly-Gln-Phe-Met(SEQ ID NO:8)的13氨基酸接头序列。所得到的融合蛋白具有改善的特性，如体液中延长的停留时间(半寿期)、增加的比活性、增加的表达水平，或促进融合蛋白的纯化。
优选地，它与重链区域例如人IgG1的CH2和CH3结构域融合。例如在WP 99/09063的实施例11中描述了包含IL-18BP和免疫球蛋白的一部分的具体融合蛋白的产生。Ig分子的其他同种型也适用于产生本发明的融合蛋白，如同种型IgG2或IgG4，或其他Ig类别，如IgM或IgA。融合蛋白可以是单体的或多聚体的、异源或同型多聚的。
在某些其他实施方案中，本发明提供用于治疗对象的方法，所述对象患有如本文在本发明多种实施方案中所述的与IL-18过量表达相关的疾病或病症或具有形成这种疾病或病症的素质，所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的如本文在多种实施方案中公开的本发明药物组合物。
血液学测定是本领域熟知的并且已经变成检测体液(如血清、支气管肺泡灌洗(BAL)液和痰)中抗原的可用工具。然而，直至现在不存在通过特异性抗体检测IL-18的有功能的诊断测定。因此，特别需要检测体液中、尤其血清中IL-18的诊断方法。
本发明因此公开了用于检测和诊断如本文所述的IL-18相关疾病或病状、用于诊断如本文所述的IL18相关疾病或病状的素质或用于监测对象中最小残留疾病或用于预测对象对采用如本文在多种实施方案中公开的本发明药物组合物治疗的反应性的方法和试剂盒。这些方法包括常用于生物样品中或原位条件下检测或定量物质的已知免疫学方法。
在一个实施方案中，本发明进一步公开用于诊断如本文所述的IL-18相关疾病、或用于诊断如本文所述的IL-18相关疾病的素质或用于监测对象中最小残留疾病或用于预测对象对采用根据前述实施方案任一项的IL-18BP或包含IL-18BP和可药用载体和/或赋形剂的药物组合物(IL-18BP)治疗的反应性的方法，所述方法包括步骤：
a)从患有这种疾病的对象获得体液样品；
b)通过使用如本文中公开的IL-18BP或本发明的IL-18特异性抗体作为捕获分子，对所述样品测试IL-18的存在；
c)确定样品中与捕获分子结合的IL-18的量；
d)将患有这种疾病的对象的样品中IL-18的量与健康对象的样品中的量比较。
在患有所述疾病的对象、尤其人的分离的血清中游离IL-18的量范围从≥5pg/mL至10000pg/mL，尤其处于100至10000pg/mL的范围内、尤其处于200至10000pg/mL的范围内、尤其处于300至10000pg/mL的范围内、尤其处于400至10000pg/mL的范围内、尤其处于500至10000pg/mL的范围内、尤其处于600至10000pg/mL的范围内、尤其处于700至10000pg/mL的范围内、尤其处于800至10000pg/mL的范围内、尤其处于900至10000pg/mL的范围内、尤其处于1000至10000pg/mL的范围内、尤其处于1500至10000pg/mL的范围内、尤其处于2000至10000pg/mL的范围内、尤其处于3000至10000pg/mL的范围内、尤其处于4000至10000pg/mL的范围内、尤其处于5000至10000pg/mL的范围内。在健康对象、尤其健康人的血清中游离IL-18的量是≤40pg/mL、尤其≤30pg/mL、尤其≤25pg/mL、尤其≤20pg/mL、尤其≤10pg/mL、尤其≤5pg/mL、尤其≤1pg/mL、尤其≤0.5pg/mL。因此，在血清中具有5至10000pg/mL之间的可检测IL-18浓度的对象患有如本文中公开的IL-18相关疾病。可以通过如本文中公开的诊断方法，通过使用线性标准曲线确定血清和其他体液中IL-18的量，所述线性标准曲线是对5至200pg/mL范围内的预定的IL-18浓度计算的。
诊断对象中L-18相关疾病或病状或对如本文所述的IL-18相关疾病或病状的素质可以通过以下方式实现：在样品中或原位检测如本文中公开的IL-18BP与IL-18的结合或如本文中公开的单克隆抗体或其活性其片段与IL-18表位的免疫特异性结合，这包括使疑似含有IL-18抗原的样品或特定身体部分或身体区域与结合IL-18蛋白或其片段的表位的IL-18BP和/或抗体接触，允许IL-18BP或抗体结合IL-18抗原以形成疫复合物，检测免疫复合物的形成并且将免疫复合物的存在或不存在与样品或特定身体部分或区域内IL-18抗原的存在或不存在相关联，任选地将所述免疫复合物的量与正常对照值比较，其中与正常对照值相比，所述聚集物的量增加表示所述对象正患有IL-18相关疾病或病状或处于形成IL-18相关疾病或病状的风险。
监测用根据前述实施方案任一项和如前文所述的IL-18BP或包含IL-18BP和可药用载体和/或赋形剂的药物组合物治疗后的对象中的最小残留疾病可以通过以下方式实现：在样品中或原位检测如本文中公开的IL-18BP与IL-18的结合或如本文中公开的单克隆抗体或其活性其片段与IL-18蛋白或其片段的表位的免疫特异性结合，这包括使疑似含有IL-18抗原的样品或特定身体部分或身体区域与如本文所述的结合IL-18蛋白或其片段的表位的IL-18BP和/或抗体接触，允许IL-18BP和/或抗体结合IL-18抗原以形成疫复合物，检测免疫复合物的形成并且将免疫复合物的存在或不存在与样品或特定身体部分或区域内IL-18抗原的存在或不存在相关联，任选地将所述免疫复合物的量与正常对照值比较，其中与正常对照值相比，所述聚集物的量增加表示所述对象仍可能患有最小残留疾病。
预测对象对采用如本文在多种实施方案中公开的本发明药物组合物治疗的反应性可以通过以下方式实现：在样品中或原位检测如本文中公开的IL-18BP与IL-18的结合或如本文中公开的单克隆抗体或其活性其片段与IL-18蛋白或其片段的表位的免疫特异性结合，这包括使疑似含有IL-18抗原的样品或特定身体部分或身体区域与结合IL-18蛋白或其片段的表位的IL-18BP和/或抗体接触，允许IL-18BP和/或抗体结合IL-18抗原以形成疫复合物，检测免疫复合物的形成并且将免疫复合物的存在或不存在与样品或特定身体部分或区域内IL-18抗原的存在或不存在相关联，任选地比较治疗启动之前和之后所述免疫复合物的量，其中所述聚集物的量减少表示所述对象具有响应于治疗的高可能性。
可以用于诊断如本文所述的IL-18相关疾病或病状、用于诊断IL-18相关疾病或病状的素质或用于监测对象中如本文所述的最小残留疾病或用于预测对象对采用如本文在多种实施方案中公开的本发明药物组合物治疗的反应性的生物样品例如是流体如血清、血浆、唾液、胃分泌物、粘液、脑脊液、淋巴液等或从生物获得的组织或细胞样品如神经组织、脑组织、肺组织、心脏组织或血管组织。为了确定样品中IL-18抗原、尤其游离IL-18抗原的存在或不存在，可以使用本领域技术人员已知的任何免疫测定。(参见Harlow和Lane，Antibodies:A Laboratory Manual(Cold Spring Harbor Laboratory,New York 1988555-612)。例如可以使用这样的测定，所述测定利用使用检测用第二试剂的间接检测方法、ELISA和免疫沉淀和凝集测定。这些测定的详细描述例如在Maertens和Stuyver的WO 96/13590、Zrein等人(1998)和WO 96/29605中给出。
为了原位诊断，如本文中公开的IL-18BP和/或如本文中公开的IL-18-特异性抗体或任何活性和其功能部份可以通过本领域已知的方法如，例如，静脉内、鼻内、腹膜内、脑内、动脉内注射施用至待诊断的生物，从而IL-18BP和/或特异性抗体与IL-18抗原上表位区域之间的特异性结合可以发生。可以通过与抗体或其功能性片段连接的标记物检测IL-18BP/抗原或抗体/抗原复合物。
在诊断性应用中使用或用于诊断如本文所述的IL-18相关疾病或病状的素质或用于监测对象中最小残留疾病或用于预测对象对采用如本文在多种实施方案中公开的本发明药物组合物治疗的反应性的免疫测定一般依赖标记的抗原、抗体或第二试剂用于检测。这些蛋白质或试剂可以用本领域技术人员通常已知的化合物标记，包括酶、放射性同位素和荧光物质、发光物质和生色物质，包括有色粒子，如胶体金和乳胶珠。这些化合物当中，放射性标记物可以用于几乎全部类型的测定及大部分变型。当必须避免放射性活性时或当需要快速结果时，酶-缀合物标记物特别有用。荧光染料，虽然其使用需要昂贵设备，但提供非常灵敏的检测方法。可用于这些测定中的抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体和亲和纯化的多克隆抗体。
备选地，抗体可以通过与对免疫球蛋白具有亲和力的经标记的物质(如蛋白A或G或第二抗体)反应间接地标记。抗体可以与第二物质缀合并且用标记的第三物质检测，所述标记的第三物质对缀合于抗体的第二物质具有亲和力。例如，抗体可以缀合于生物素并且可以使用标记的抗生物素蛋白或链霉亲和素检出抗体-生物素缀合物。类似地，抗体可以缀合于半抗原并且可以使用标记的抗半抗原抗体检出抗体-半抗原缀合物。
本领域普通技术人员将知道根据本发明可以使用的这些标记物和其他合适的标记物。这些标记物与抗体或其片段的结合可以使用本领域普通技术人员公知的标准技术实现。常见技术由Kennedy,J.H.等人,1976(Clin.Chim.Acta 70:1-31)和Schurs,A.H.W.M.等人1977(Clin.Chim Acta 81:1-40)描述。下文提到的偶联技术是戊二醛法、高碘酸盐法、二马来酰亚胺法和其他方法，所述方法均通过引用的方式并入本文。
现在的免疫测定利用双抗体法用于检测分析物存在，其中借助与已经用可检测标记物标记的第二抗体的反应性间接地标记捕获抗体。第二抗体优选地是与衍生单克隆抗体的动物的抗体结合的抗体。换而言之，如果单克隆抗体是小鼠抗体，则标记的第二抗体是抗小鼠抗体。对于下文描述的测定中待使用的单克隆抗体，这种标记物优选地是抗体包覆的珠、尤其磁珠。对于本文所述的免疫测定中待使用的多克隆抗体，标记物优选地是可检测的分子如放射物质、荧光物质或电化学发光物质。
也可以在本发明的范围内使用备选的双抗体系统，经常称作快速模式系统，因为其适应于快速确定分析物的存在。这种系统需要抗体和分析物之间的高亲和力。根据本发明的一个实施方案，使用一对各自对IL-18抗原特异的抗体确定IL-18抗原的存在。所述抗体对之一在本文中称作“检测抗体”并且所述抗体对的另一个在本文中称作“捕获抗体”。本发明的单克隆抗体可以作为捕获抗体或检测抗体使用。本发明的单克隆抗体也可以作为捕获抗体和检测抗体一起在单一测定中使用。本发明的一个实施方案因此使用双抗体夹心法用于检测生物流体样品中的IL-18抗原。在这种方法中，分析物(IL-18抗原)夹在检测抗体和捕获抗体之间，捕获抗体不可逆地固定在固相支持物上。检测抗体将含有可检测标记物，以确定抗体-分析物夹心的存在并且因此分析物的存在。
示例性固相物质包括但不限于放射免疫测定和酶免疫测定领域熟知的微量滴定板、聚苯乙烯试管、磁珠、塑料珠或玻璃珠和载玻片。用于偶联抗体至固相的方法也是本领域技术人员熟知的。最近，已经使用多种多孔材料如尼龙、硝酸纤维素、醋酸纤维素、玻璃纤维和其他多孔聚合物作为固相支持物。
本发明还涉及用于检测生物样品中IL-18抗原的诊断试剂盒。另外，本发明涉及稍后的诊断试剂盒，其中除如上文定义的组合物之外，所述诊断试剂盒还包含如上文定义的检测试剂。术语“诊断试剂盒”通常指本领域已知的任何诊断试剂盒。更具体地，后一种术语指如Zrein等人(1998).中所述的诊断试剂盒。
本发明的另一个目的仍然是提供检测和诊断如本文所述的IL-18相关疾病和病状的新免疫探针和测试试剂盒，包含如前文中公开的IL-18BP或如前文中公开的特异性IL-18BP抗体。对于免疫探针，IL-18BP或抗体直接或间接地连接至合适的报告分子，例如，酶或放射性核素。测试试剂盒包括容纳IL-18BP和/或一种或多种抗体的容器和使用IL-18BP和/或抗体的说明书，目的在于与IL-18抗原结合以形成免疫复合物并且检测免疫复合物的形成从而免疫复合物的存在或不存在与IL-18抗原的存在或不存在相关联。
根据上文，本发明还提供包含独立单位剂量形式的如本文在多种实施方案中公开的本发明药物组合物的药物试剂盒，所述形式适于按有效量施用。这种试剂盒适当地还包含一个或多个吸入装置用于施用如本文在多种实施方案中公开的本发明药物组合物。例如，试剂盒可以包含适应于从胶囊递送干粉的一个或多个干粉吸入装置，连同含有干粉的胶囊，所述干粉包含剂量单位的如本文在多种实施方案中公开的本发明的药物组合物。在另一个例子中，试剂盒可以包含在其储器中含有干粉的多剂量干粉吸入装置，所述干粉包含本文在多种实施方案中公开的本发明药物组合物。
定义
如果下文没有另外指明，则通常对本申请范围内所用的技术术语和表述给予相关领域内常适用于它们的含义。
除非上下文另外清楚地说明，否则如本说明书及所附实施方案中所用，单数形式“a”、“an”和“the”包括复数指称。因此，例如，对“化合物”的提及包括一种或多种化合物。
术语“治疗”等在本文中通常用来意指获得所需的药理和/或生理效应。该效应可以就完全或部分预防疾病或其症状而言是预防性的和/或可以就部分或完全治愈疾病和/或归属于该疾病的副作用的而言是治疗性的。如本文所用的术语“治疗”涵盖对对象中疾病的任何治疗并且包括：(a)防止(即与不利免疫反应相关)的疾病在对象中发生，所述对象可能具有患有所述疾病的素质；(b)抑制该疾病，即中止其形成；或(c)减轻该疾病，即造成该疾病消退；(d)逆转疾病症状，即导致受损组织恢复。
如本文所用的表述“IL-18结合蛋白(IL-18BP)”包括全长蛋白质、突变蛋白、片段、肽、功能性衍生物、功能性片段、部分、环状排列衍生物、融合蛋白、同种型或其盐。
如本文所用的术语“游离IL-18”意指单体、可溶解性和未复合的白介素-18蛋白。
“免疫球蛋白”是四聚体分子。在天然存在的免疫球蛋白中，每种四聚体由两对相同的多肽链组成，每对链具有一条“轻”(约25kDa)和一条＂重＂链(约50-70kDa)。每条链的氨基端部分包括主要负责抗原识别的约100至110个或更多个氨基酸的可变区。每条链的羧基端部分限定主要负责效应子功能的恒定区。人轻链划分为[κ]轻链和[λ]轻链。重链划分为[μ]、[δ]、[γ]、[α]或[ε]，并且将抗体的同种型分别限定为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在轻链和重链内部，可变区和恒定区由约122个或更多氨基酸的“J”区域连接，其中重链还包括约多10个氨基酸的“D”区域。通常参见，Fundamental Immunology第7章(Paul,W.编著，第2版，Raven Press,N.Y.(1989))(通过引用方式完整并入用于全部目的)。每个轻链/重链对的可变区形成抗体结合位点，从而完整的免疫球蛋白具有两个结合位点。
免疫球蛋白链显示出相对保守的框架区(FR)由3个高变区(也称作互补决定区或CDR)连接的相同总体结构。来自每对两条链的CDR按框架区对齐，使得与特定表位结合成为可能。从N末端至C末端，轻链和重链均包含结构域FR1、CDR1、FR2，CDR2、FR3、CDR3和FR4。根据Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest(National Institutesof Health,Bethesda,Md.(1987和1991))或Chothia和Lesk J.Mol.Biol,196:901-917(1987)；Chothia等人,Nature 342:878-883(1989)的定义将氨基酸归于每个结构域。
如本文所用的术语“抗体”是本领域认可的术语并且理解为指与已知抗原结合的分子或分子活性片段，尤其指免疫球蛋白分子并且指免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即含有免疫特异性结合抗原的结合位点的分子。本发明的免疫球蛋白可以是任意类型(IgG、IgM、IgD、IgE、IgA和IgY)或类别(IgGI、lgG2、lgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类的免疫球蛋白分子。
出于本发明的目的，术语“抗体”指完整免疫球蛋白或指其与完整抗体竞争特异性结合的抗原结合部分。特别地，“抗体”在本发明的范围内意在包括单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、双特异性或双有效性抗体、类人猿化抗体、人抗体和人源化抗体。
抗原结合部分的例子尤其包括Fab、Fab’、F(ab')2，scFv，dAb和Fv片段，包括Fab免疫球蛋白表达文库的产物和上文所提及任意抗体和片段的表位结合片段。抗原结合部分的其他例子包括互补决定区(CDR)片段、双体抗体和至少含有足以赋予该多肽特异性抗原结合的免疫球蛋白部分的多肽。
这类活性片段可以通过众多现有已知的技术衍生自本发明的抗体。例如，纯化的单克隆抗体可以用酶如胃蛋白酶切割，并经过HPLC凝胶过滤处理。随后可以通过膜过滤法和其他方法收集并浓缩含有Fab片段的适宜级分。关于进一步描述用于分离抗体活性片段的一般技术，参见例如，Khaw,B.A.等人,J.Nucl.Med.23:1011-1019(1982)；Rousseaux等人,Methods Enzymology,121:663-69,Academic Press,1986。
“人源化抗体”指其CDR衍生自非人类供体免疫球蛋白的工程化抗体类型。在一个实施方案中，已经突变重链和轻链的框架和恒定结构域中的某些氨基酸，从而在人类中避免或消除免疫反应。在备选实施方案中，可以通过来自人抗体的恒定结构域与非人类物种的可变结构域融合，产生人源化抗体。如何产生人源化抗体的例子可以在美国专利号6,054,297、5,886,152和5,877,293中找到。
在本发明的又一个实施方案中，“人源化抗体”指工程化抗体类型，其衍生自非人类供体免疫球蛋白的CDR插入衍生自一种(或多种)人免疫球蛋白的人抗体“支架”。此外，可以改变框架支撑残基以保留结合亲和性。获得“人源化抗体”的方法是本领域普通技术人员熟知的。(参见，例如，Queen等人,Proc.Natl Acad Sci USA,86:10029-10032(1989)；Hodgson等人,Bio/Technology,9:421(1991))。
“人源化抗体”也可以通过新的基因工程方案获得，所述基因工程方案能够在大动物(例如，兔)中产生亲和力成熟的人样多克隆抗体(参见，例如，美国专利号7,129,084)。
术语“单克隆抗体”也是本领域充分认可的并且指在实验室中从单一克隆大规模产生并且仅识别一种抗原的抗体。单克隆抗体一般通过将正常的短寿、产生抗体的B细胞与快速生长的细胞如癌细胞(有时称作”永生”细胞)融合产生。所得到的杂交细胞，或杂交瘤，快速增殖，创建出产生大量抗体的克隆。出于本发明的目的，”单克隆抗体”也理解包括由尚未达到完整单克隆性的母克隆产生的抗体。
术语“CDR”指抗体的高变区。术语“高变区”、“HVR”或“HV”在文中使用时指抗体可变结构域中在序列方上高度变化和/或形成结构上确定的环的区域。通常，抗体包含六个高变区；VH中三个(H1、H2、H3)和VL中三个(L1、L2、L3)。本文中使用和包括了众多的高变区描述。Kabat互补性决定区基于序列变异性并且是最常使用的(Kabat等人,Sequences ofProteins of Immunological Interest,第5版.Public Health Service,NationalInstitutes of Health,Bethesda,Md.(1991))。
术语“CDR”之前的字母”HC”和”LC”分别指重链和轻链的CDR，而Chothia指结构环的位置(Chothia和Lesk J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。AbM高变区代表Kabat CDR和Chothia结构环之间的折中方案，并且由Oxford Molecular's AbM建模软件使用。“接触”高变区基于可获得的复合物晶体结构的分析。
术语“如Kabat中编号的可变结构域残基”或”如Kabat中编号的氨基酸位置”和其变型，指用于Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5thEd.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991)中的抗体编纂的重链可变结构域或轻链可变结构域的编号体系。
”功能性等同抗体”在本发明的范围内理解为指一种抗体，所述抗体与一种抗体基本上共有至少一种主要功能特性，例如本文中所述的功能特性，包括但不限于：游离IL-18蛋白结合特异性。抗体可以是任何类别的，如IgG、IgM或IgA等或任何亚类如IgG1、IgG2a等和本文所述或本领域已知的其他亚类，但是尤其是IgG4类的。另外，抗体可以通过任何方法产生，如噬菌体展示法，或在产生具有所需特征的抗体(如人源化抗体)的任何生物或细胞系中产生，包括细菌、昆虫、哺乳动物或其他类型的细胞或细胞系。也可以通过组合来自不同物种的Fab部分和Fc区，形成抗体。
可以由本领域普通技术人员遵循本说明书的教导，轻易地制备抗体的片段或类似物。片段或类似物的优选氨基末端和羧基末端出现在功能性结构域的边界附近。可以通过将核苷酸序列数据和/或氨基酸序列数据与公共或专有序列数据库比较，鉴定结构结构域和功能性结构域。优选地，计算机化比较多种方法用来鉴定序列基序或在具有已知结构和/或功能的其他蛋白质中出现的预测蛋白质构象结构域。鉴定折叠成已知三维结构的蛋白质序列的方法是已知的。Bowie等人,Science 253:164(1991)。
术语“人抗体”包括具有源自人免疫球蛋白序列的一个或多个可变区和恒定区的全部抗体。在一个优选实施方案中，可变结构域和恒定结构域全部衍生自人免疫球蛋白序列(全人抗体)。这些抗体可以在多种宿主细胞如原核细胞例如大肠杆菌中制备。在另一个实施方案中，宿主细胞是真核细胞，例如，原生生物细胞、动物细胞、植物细胞、植物或真菌细胞。在一个实施方案中，宿主细胞是哺乳动物细胞，包括但不限于CHO、COS、NS0、SP2、PER.C6，或真菌细胞，如酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，或昆虫细胞，如Sf9。在另一个实施方案中，产生人抗体的细胞可以在生物反应器中培育或对于产生人抗体的植物，可以在温室和田间培育(例如参见以下文献中：Riechmann L等人(1988).Nature 332(6162):332–323；Queen C等人(Dec 1989).Proc Natl Acad Sci U S A.86(24):10029–33；Kashmiri SV等人(May 2005).Methods 36(1):25–34；Hou S等人(July 2008).JBiochem 144(1):115–20)。
在宿主中。
出于本发明目的，“患者”或“对象”互换地使用并且意在包括人和其他动物，特别是哺乳动物，及其他生物。因而，所述方法适用于人类治疗和兽医应用。在优选的实施方案中，患者或对象是哺乳动物，并且在最优选的实施方案中，患者或对象是人。
表达法“药物组合物”和“治疗性组合物”在本文中可互换地以最广泛意义使用。出于本发明目的，它们意指治疗有效量的活性成分，即IL-18BP和，任选地，可药用载体或稀释剂。
它包括适于在人类或非人类动物中治愈性治疗、控制、改良、改善病状或预防疾病或病症的组合物。因而，它包括用于人医学或兽医学领域内的药物组合物。这种“治疗性组合物”特征在于，它包含至少一种IL-18BP化合物或其生理可接受盐和任选地载体或赋形剂，从而盐和载体和赋形剂由采用所述组合物治疗的靶生物耐受。
“治疗有效量”指为给定病况和施用方案提供治疗效果的量。具体而言，“治疗有效量”意指有效防止、逆转、减轻或改善疾病症状或有效延长正在治疗的对象存活的量，所述对象可以是人类或非人类动物。确定治疗有效量处于本领域技术人员的技能范围内。特别地，在本发明情况下，”治疗或预防有效量”指蛋白质或肽、突变蛋白、功能性衍生物、部分、环状排列衍生物、融合蛋白、同种型或其盐和化合物或药物组合物的量，所述量在施用至人或动物时在所述人或动物中导致治疗作用或预防作用。有效量由本领域技术人员遵循例行程序轻易地确定。本发明的化合物的治疗有效量或剂量根据可以在宽限值范围内变动并且可以按相关技术领域已知的方式确定。剂量可以在宽限值范围内变动并且当然，将不得不在每个特定情况下针对个体要求调节。
术语“透粘膜”施用指其中化合物由任何身体部分的粘膜吸收的多种施用途径。透粘膜施用包括但不限于即鼻内、经颊、透口腔粘膜、气管内、尿道内、直肠内、阴道内、舌下、支气管内、肺内和透皮施用。
定义“可药用的”意在涵盖不干扰活性成分的生物学活性的有效性并且对施用它的宿主无毒的任何载体、赋形剂、稀释剂或溶媒。
术语“融合蛋白”指与另一种蛋白质融合的包含IL-18BP或病毒性IL-18BP或突变蛋白或其片段的多肽，所述多肽例如在体液中具有延长的停留时间。IL-18BP或病毒性IL-18BP可以因此融合至另一种蛋白质、多肽等，例如，免疫球蛋白或其片段。
这些同种型，突变蛋白，融合蛋白或功能性衍生物保留IL-18BP的生物学活性，尤其IL-18结合，并且优选地具有基本上至少与IL-18BP相似的活性。理想地，与未修饰的IL-18BP相比，这类蛋白质具有甚至增加的生物学活性。优选的活性部分具有优于IL-18BP活性的活性，或具有其他优点，如更好的稳定性或较低的毒性或免疫原性，或它们是更易大量产生或更易纯化。
术语“白介素-18结合蛋白”还包括IL-18BP突变蛋白、功能性衍生物、部分、生物活性肽、环状排列衍生物、融合蛋白、同种型和其盐。
如本文所用术语“突变蛋白”指IL-18BP的类似物或病毒性IL-18BP的类似物，其中天然IL-18BP或病毒性IL-18BP的一个或多个氨基酸残基由不同氨基酸残基更换，或缺失，或一个或多个氨基酸残基添加至IL-18BP或病毒性IL-18BP的天然序列，而与野生型IL-18BP或病毒性IL-18BP相比，不明显改变所得产物的活性。这些突变蛋白通过已知的合成法和/或通过位点定向诱变技术、高通量诱变、DNA改组、蛋白质进化技术或因此合适的任何其他已知技术制备。
任何的这类突变蛋白优选地具有充分重复IL-18BP的氨基酸序列，或充分重复病毒性IL-18BP的氨基酸序列，从而与IL-18BP具有基本上相似的活性。IL-18BP的一种活性是其结合IL-18的能力。只要突变蛋白具有基本的IL-18结合活性，则它可以用于纯化IL-18，如借助亲和层析纯化，并且因此可以视为与IL-18BP具有基本上相似的活性。因此，可以借助常规实验，包括使这种突变蛋白经历例如简单夹心竞争测定以确定它是否与适当标记的IL-18结合，如放射免疫测定或ELISA测定，确定任何给定的突变蛋白是否与IL-18BP具有基本上相同的活性。
可以根据本发明使用的IL-18BP多肽的突变蛋白或病毒性IL-18BP的突变蛋白，或编码它们的核酸，包括有限组的基本上相应序列作为置换肽或多核苷酸，所述置换肽或多核苷酸可以由本领域普通技术人员基于本文中呈献的教导和指引，在无需过多实验的情况下常规地获得。
本发明突变蛋白的优选变化是所谓“保守性”置换。IL-18BP多肽或蛋白或病毒性IL-18BP的保守性氨基酸置换可以包括群组内部的同义氨基酸，所述同义氨基酸具有充分相似的物理化学特性，从而群组成员之间的置换将保留分子的生物学功能(Grantham，1974)。显而易见，也可以在上文限定的序列中插入和缺失氨基酸而不改变它们的功能，尤其如果插入或缺失仅涉及数个氨基酸，例如30个以下并且优选地10个以下，并且不移除或替换对功能性构象至关重要的氨基酸，例如，半胱氨酸残基。通过这类缺失和/或插入产生的蛋白质和突变蛋白进入本发明的范围内。
如本文所用的”“功能性衍生物”涵盖IL-18BP或病毒性IL-18BP的衍生物，及其突变蛋白和融合蛋白，它们可以通过本领域已知的手段，从作为残基上侧链或N端或C端基团出现的官能团制备，并且纳入本发明中，只要它们保持可药用，即它们不破坏与IL-18BP或病毒性IL-18BP的活性基本上相似的蛋白质活性，并且不对含有它的组合物赋予毒性特性。
这些衍生物可以，例如，包括聚乙二醇侧链，它可以掩蔽抗原位点并延长IL-18BP或病毒性IL-18BP在体液中的停留。其他衍生物包括羧基的脂肪酯、通过与氨或与伯胺或仲胺反应形成的羧基的酰胺、与酰基部分形成的氨基酸残基的游离氨基的N-酰基衍生物(例如烷醇或碳环芳酰基)或与酰基部分形成的游离羟基(例如丝氨酰残基或苏氨酰残基)的O-酰基衍生物。
作为IL-18BP或病毒性IL-18BP、突变蛋白和融合蛋白的”“功能性片段”，本发明涵盖单独或连同与之连接的相关分子或残基(例如，糖或磷酸酯残基)的IL-18BP蛋白质分子的任何片段或前体多肽链，或蛋白质分子或糖残基自身的聚集物，只要所述部分具有与IL-18BP基本上相似的活性.
本文中的术语“盐”指羧基的盐并且指IL-18BP分子或其类似物的氨基的酸加成盐。羧基的盐可以通过本领域已知的手段形成并且包括无机盐，例如，钠盐、钙盐、铵盐、亚铁盐或锌盐等，及与有机碱的盐，例如与胺(如三乙醇胺)、精氨酸或赖氨酸、哌啶、普鲁卡因等形成的那些。酸加成盐例如包括与无机酸(如氢氯酸或硫酸)的盐和与有机酸(如乙酸或草酸)的盐。当然，任何这类盐必须保留IL-18BP的生物学活性，例如结合IL-18的能力。
IL-18BP的“同种型”是能够结合IL-18或其片段的蛋白质，这可以通过可变剪接产生。
如本文所用，术语“环状排列衍生物”指线型分子，其中末端已经直接或通过接头连接在一起以产生环状分子，并且随后环状分子在另一个位置开放以产生末端与原始分子中末端不同的新线型分子。环状排列包括其结构与已经环化并且随后开放的分子等同的那些分子。因此，环状排列的分子可以作为线型分子从头合成并且从未经历环化和开口步骤。环状排列衍生物的制备在WO 95/27732中描述。
表述“异常的游离IL-18水平”指与健康对照对象体液中检测到的值相比，增加或降低的IL-18水平。特别地，这些异常水平意指增加的IL-18值。特别地，体液内所述异常的游离IL-18水平超过健康对照对象体液中的水平5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或多于100％。在本发明的某些实施方案中，参考或对照值是待治疗的患者中测定的游离IL-18的正常、无病理基础值。
表达“异常的游离IL-18/IL-18BP比率”指与健康对照对象体液中存在的值相比，增加的IL-18对IL-18BP比率。特别地，体液内所述异常的游离IL-18对IL-18BP比率超过健康对照对象体液中的比率5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或多于100％。在本发明的某些实施方案中，参考或对照值是待治疗的患者中测定的游离IL-18的正常、无病理基础值。
表达“基因沉默”和“转录后基因沉默”意指通过基因修饰之外的机制对基因表达的阻抑性调节。沉默通过转录后水平上的mRNA消除而出现，其中阻止mRNA翻译形成活性基因产物，所述活性基因产物在大多数情况下是蛋白质。
术语“素质”意指对象形成特定疾病的易感性增加。在本发明情况下，如果例如升高的IL-18水平出现在肺、血清、痰、支气管肺泡灌洗液(BALF)或循环中，则对象划归有素质的。
表述“烟雾”、“烟雾诱导的”、“香烟烟雾”或“香烟烟雾诱导的”指烟草烟雾。
“肺泡巨噬细胞”是存在于肺泡中的巨噬细胞亚型。它们经常含有它们已经从呼吸道表面挑取的外源物质颗粒。这类黑色颗粒特别常见于长时间暴露于细粉尘、细粒子的人群例如吸烟者或长期城市居民中。
“Th2细胞因子反应”由IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-13和/或IL-17A、尤其IL-4和/或IL-8和/或IL-17A介导，而“Th1细胞因子反应”由干扰素-γ(IFN-γ)、IL-2、和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)介导。
表述“IL-18/IL-18BP不平衡”指IL-18和IL-18BP相互作用失调，这最终导致升高水平的非结合的IL-18。
”疾病”是其中动物不能维持内稳态并且其中如果疾病不改善则动物健康继续变差的动物健康状态。与之相反，动物中的”病症”是健康状态其中动物能够维持内稳态，但是其中动物的健康状态比没有这种病症情况下的健康状态更差。不予治疗时，病症不必然地引起动物健康状态进一步下降。
如果疾病或病症的症状的严重程度、对象经历这种症状的频率或这两种情况减低，则该疾病或病症”缓和”。
如本文所用，术语“失调的”或”失调”指生物学过程受损，这转而可以导致有害的生理学后遗症或者基因、核酸、蛋白质、肽或其他生物分子异常表达。在其中基因、核酸、蛋白质、肽或其他生物分子的表达失调的情况下，基因、核酸、蛋白质、肽或其他生物分子按这样的水平表达、加工或维持，其中所述水平处于视为如通过技术人员所确定的该基因、核酸、蛋白质、肽或其他生物分子的正常水平范围外部。哺乳动物中基因、核酸、蛋白质、肽或其他生物分子的失调可以通过测量哺乳动物中基因、核酸、蛋白质、肽或其他生物分子的水平并且将这种哺乳动物中测量的水平与已知未经历这基因、核酸、蛋白质、肽或其他生物分子失调的匹配的群体中测量的水平比较来确定。备选地，该水平可以与相同个体中在不同时间测量的一个水平比较。
如本文所用术语“心脏病”或“心血管疾病”包括影响心肌或心脏和身体血管的疾病和病症。心脏病可以导致心力衰竭及最终是工业社会中最常见死亡原因的之一。由IL-18/IL-18BP不平衡引起的心脏病的实例包括但不限于梗阻性心脏病、溶栓功能障碍、酒精性心肌病、主动脉瓣脱垂、主动脉瓣狭窄、心率失常、心源性休克、先天性心脏病、扩张型心肌病、心脏病发作、心力衰竭、心脏肿瘤、心脏瓣膜肺部狭窄、肥大性心肌病、特发性心肌病、缺血性心脏病、缺血性心肌病、二尖瓣反流、二尖瓣脱垂、围产期心肌病、稳定型心绞痛。
如本文所用的术语“2型糖尿病”是最常见形式的糖尿病。这种疾病或病症的特征在于身体不产生或仅不充分地产生胰岛素或细胞在其胰岛素反应方面具有缺陷。这类缺陷据信涉及胰岛素受体。
如本文所用”内源”指来自生物、细胞、组织或系统或在其内部产生的任何物质。术语”外源”指从生物、细胞、组织或系统外部引入或在其外部产生的任何物质。
如本文所用的术语“表达”定义为受其启动子驱动的特定核苷酸序列的转录和/或翻译。如本文所用，术语“表达载体”指含有核酸序列的载体，所述核酸序列编码至少部分的能够转录的基因产物。在一些情况下，RNA分子随后翻译成蛋白质、多肽或肽。在其他情况下，这些序列不翻译，例如，在产生反义分子、siRNA、核酶等时。表达载体可以含有多种控制序列，所述控制序列指对于有效连接的编码序列在特定宿主生物中转录和可能翻译所必需的核酸序列。除掌控转录和翻译的控制序列之外，载体和表达载体可以含有还履行其他职能的核酸序列。本发明的表达载体可以用于基因治疗以治疗如本文中公开的疾病或病症。特别地，所述表达载体是病毒载体。可以作为载体使用以递送表达载体的病毒选自逆转录病毒、腺病毒、慢病毒、单纯疱疹病毒、痘苗病毒、痘病毒和腺相关病毒。
如本文所用，术语“抑制”、“中和”或“阻断”不得不理解为同义词，它们意指按可计量的量减少分子、反应、相互作用、基因表达、mRNA和/或蛋白质的表达、稳定性、功能或活性或完全阻止。抑制物是例如结合至、部分或全部阻断刺激、降低、防止、延迟活化、失活、去敏化或下调蛋白质，基因和mRNA稳定性、表达、功能和活性的化合物，例如，拮抗剂。
术语“反义表达载体”指编码与信使RNA(mRNA)链互补的单链或双链RNA并抑制所述mRNA翻译成氨基酸的表达载体。术语反义RNA包括asRNA、siRNA、shRNA、微RNA。
如本文所用的术语“基因治疗”意指使用DNA，例如表达载体，作为药剂以治疗如本文中公开的疾病。
附图说明
图1：单个败血症患者中总IL-18和游离IL-18的比较。修改自Novick等人，2001。考虑IL-18和IL-18BPa的1:1复合物和计算KD400 pM，基于总IL-18(空心圆圈)和IL-18BPa的浓度计算入院时败血症患者血清中游离IL-18(闭合圆圈)的水平。每条垂直线联系单个血清样品中的总IL-18和游离IL-18。上述ELISA测定用Taniguchi等人1997 1开发的抗体对即抗体125-2H作为第一/捕获抗体和抗体159-12B作为第二/显色抗体进行。
图2：用抗体125-2H和159-12B检测总IL-18。数据表示两种抗体均定量总IL-18。
图3：400pg/ml IL-18的滴度作为IL-18BP水平的函数
图4：在1)空气暴露、2)烟草烟雾(TS)、3)p[I:C]单独、4)在第4日p[I:C]与烟草烟雾组合(诱导恶化)后在第5日肺气道空间中小鼠IL-18诱导。点线显示检测下限。使用非配对t-检验进行统计分析。
图5：在1)空气暴露、2)烟草烟雾(TS)、3)p[I:C]单独、4)在第4日p[I:C]与烟草烟雾组合(诱导恶化)、5-7)按1、3或10mg/kg进行IL-18BP治疗时在第4日p[I:C]与烟草烟雾组合、8)按10mg/kg地塞米松治疗后在第5日小鼠肺气道空间中总细胞浸润的抑制。使用非配对t-检验进行统计分析。
图6：在1)空气暴露、2)烟草烟雾(TS)、3)p[I:C]单独、4)在第4日p[I:C]与烟草烟雾组合(诱导恶化)、5)按10mg/kg进行IL-18BP治疗时在第4日p[I:C]与烟草烟雾组合、6)按10mg/kg地塞米松治疗后在第5日小鼠肺气道空间中总细胞浸润的抑制。使用ANOVA检验(Sidak事后检验)进行统计分析。
图7：通过IL-18BP抑制嗜中性粒细胞浸润。在1)空气暴露、2)烟草烟雾(TS)、3)p[I:C]单独、4)在第4日p[I:C]与烟草烟雾组合(诱导恶化)、5-7)按1、3或10mg/kg进行IL-18BP治疗时在第4日p[I:C]与烟草烟雾组合、8)按10mg/kg地塞米松治疗后，在第5日监测小鼠肺气道空间中的嗜中性粒细胞浸润。使用ANOVA检验(Sidak事后检验)进行统计分析。
图8：通过IL-18BP抑制嗜中性粒细胞浸润。在1)空气暴露、2)烟草烟雾(TS)、3)p[I:C]单独、4)在第4日p[I:C]与烟草烟雾组合(诱导恶化)、5)按10mg/kg进行IL-18BP治疗时在第4日p[I:C]与烟草烟雾组合、6)按10mg/kg地塞米松治疗后，在第5日监测小鼠肺气道空间中的嗜中性粒细胞浸润。使用ANOVA检验(Sidak事后检验)进行统计分析。
图9：通过IL-18BP抑制G-CSF途径。在1)空气暴露、2)烟草烟雾(TS)、3)p[I:C]单独、4)在第4日p[I:C]与烟草烟雾组合(诱导恶化)、5-7)按1、3或10mg/kg进行IL-18BP治疗时在第4日p[I:C]与烟草烟雾组合、8)按10mg/kg地塞米松治疗后，在第5日通过ELISA在小鼠肺气道空间中监测G-CSF(pg/ml)的存在。点线显示检测下限。使用Students t-检验进行统计分析。
图10：通过IL-18BP缓和体重减轻。在1)空气暴露、2)烟草烟雾(TS)、3)p[I:C]单独、4)在第4日p[I:C]与烟草烟雾组合(诱导恶化)、5)按10mg/kg进行IL-18BP治疗时在第4日p[I:C]与烟草烟雾组合、7)按10mg/kg地塞米松治疗后，在第5日监测小鼠体重减轻。使用ANOVA检验(Sidak事后检验)进行统计分析。
图11：显示由不同克隆产生的抗体的可变重链(VH)和可变轻链(VK)的氨基酸序列。通过将相应序列加下划线鉴定互补决定区CDR1、CDR2和CDR3，如通过IMGT编号体系确定(Lefranc,M.-P.等人,Nucleic Acids Research,27,209-212(1999))。从左至右，所示的每个VH和VK序列中的第一个加下划线的序列代表CDR1，第二个加下划线序列代表CDR2并且第三个加下划线的序列代表CDR3。可变结构域以粗体突出显示。
序列
SEQ ID NO 1：IL-18表位1：Tyr-Phe-Gly-Lys-Leu-Glu-Ser-Lys-Leu-Ser-Val-Ile-Arg-Asn
SEQ ID NO 2：IL-18表位2：Phe-Ile-Ile-Ser-Met-Tyr-Lys-Asp-Ser-Gln-Pro-Arg-Gly-Met-Ala-Val-Thre-Ile-Ser-Val-Lys
SEQ ID NO 3：IL-18表位3：Glu-Met-Asn-Pro-Pro-Asp-Asn-Ile-Lys-Asp-Thr-Lys-Ser-Asp-Ile-Ile-Phe
SEQ ID NO 4：IL-18表位4：Tyr-Phe-Gly-Lys-Leu-Glu-Ser
SEQ ID NO 5：IL-18表位5：Tyr-Lys-Asp-Ser-Gln-Pro-Arg-Gly-Met-Ala
SEQ ID NO 6：IL-18表位6：Asp-Asn-Ile-Lys-Asp-Thr-Lys
SEQ ID NO 7：IL-18结合蛋白(IL-18BP)
SEQ ID NO:8：13氨基酸接头序列：Glu-Phe-Gly-Ala-Gly-Leu-Val-Leu-Gly-Gly-Gln-Phe-Met
SEQ ID NO:9：抗体107C6 VH序列
SEQ ID NO:10：抗体107C6 VK序列
SEQ ID NO:11：抗体108F8 VH序列
SEQ ID NO: 12：抗体108F8 VK序列
SEQ ID NO:13：抗体109A6 VH序列
SEQ ID NO:14：抗体109A6 VK序列
SEQ ID NO:5：抗体111A6 VH序列
SEQ ID NO:16：抗体111A6 VK序列1
SEQ ID NO:17：抗体111A6 VK序列2
SEQ ID NO:18：抗体131B4 VH序列
SEQ ID NO:19：抗体131B4 VK序列
SEQ ID NO:20：抗体131E8 VH序列1
SEQ ID NO:21：抗体131E8 VH序列2
SEQ ID NO:22：抗体131E8 VK序列
SEQ ID NO:23：抗体132H4 VH序列
SEQ ID NO:24：抗体132H4 VK序列
SEQ ID NO:25：抗体133A6 VH序列
SEQ ID NO:26：抗体133A6 VK序列
SEQ ID NO:27：抗体107C6 VH序列CDR1：Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly
SEQ ID NO:28：抗体107C6 VH序列CDR2：Ile Asn Thr Tyr Ser Gly Val Pro
SEQ ID NO:29：抗体107C6 VH序列CDR3：Ala Arg Glu Gly Tyr Ser Thr Thr ArgSer Met Asp Tyr
SEQ ID NO:30：抗体107C6 VK序列CDR1：Gln Ser Leu Leu Asp Ser Arg Thr ArgLys Asn Tyr
SEQ ID NO:31：抗体107C6 VK序列CDR2：Trp Ala Ser
SEQ ID NO:32：抗体107C6 VK序列CDR3：Lys Gln Ser Tyr Asn Leu Arg Thr
SEQ ID NO:33：抗体108F8 VH序列CDR1：Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly
SEQ ID NO:34：抗体108F8 VH序列CDR2：Ile Asn Thr Tyr Ser Gly Val Pro
SEQ ID NO:35：抗体108F8 VH序列CDR3：Ala Arg Glu Gly Tyr Ser Thr Thr ArgSer Met Asp Tyr
SEQ ID NO:36：抗体108F8 VK序列CDR1：Gln Ser Leu Leu Asp Ser Arg Thr ArgLys Asn Tyr
SEQ ID NO:37：抗体108F8 VK序列CDR2：Trp Ala Ser
SEQ ID NO:38：抗体108F8 VK序列CDR3：Lys Gln Ser Tyr Asn Leu Arg Thr
SEQ ID NO:39：抗体109A6 VH序列CDR1：Gly Phe Lys Ile Lys Asp Thr Tyr
SEQ ID NO:40：抗体109A6 VH序列CDR2：Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr
SEQ ID NO:41：抗体109A6 VH序列CDR3：Ala Gly Tyr Val Trp Phe Ala Tyr
SEQ ID NO:42：抗体109A6 VK序列CDR1：Gln Arg Leu Val His Ser Asn Gly AsnThr Tyr
SEQ ID NO:43：抗体109A6 VK序列CDR2：Thr Val Ser
SEQ D NO:44:抗体109A6 VK序列CDR3：Ser Gln Ser Thr Leu Val Pro Trp Thr
SEQ ID NO:45：抗体111A6 VH序列CDR1：Gly Phe Lys Ile Lys Asp Thr Tyr
SEQ ID NO:46抗体111A6 VH序列CDR2：Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr
SEQ ID NO:47：抗体111A6 VH序列CDR3：Ala Gly Tyr Val Trp Phe Ala Tyr
SEQ ID NO:48：抗体111A6 VK序列1 CDR1：Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr
SEQ ID NO:49：抗体111A6 VK序列1 CDR2：Ser Thr Ser
SEQ ID NO 50：抗体111A6 VK序列1 CDR3：Gln Gln Tyr Ser Gly Tyr Pro LeuThr
SEQ ID NO:51：抗体111A6 VK序列2 CDR1：Gln Arg Leu Val His Ser Asn GlyAsn Thr Tyr
SEQ ID NO:52：抗体111A6 VK序列2 CDR2：Thr Val Ser
SEQ ID NO:53：抗体111A6 VK序列2 CDR2：Ser Gln Ser Thr Leu Val Pro TrpThr
SEQ ID NO:54：抗体131B4 VH序列CDR1：Gly Phe Lys Ile Lys Asp Thr Tyr
SEQ ID NO:55：抗体131B4 VH序列CDR2：Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr
SEQ ID NO:56：抗体131B4 VH序列CDR3：Ala Gly Tyr Val Trp Phe Ala Tyr
SEQ ID NO:57：抗体131B4 VK序列CDR1：Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly AsnThr Tyr
SEQ ID NO:58：抗体131B4 VK序列CDR2：Lys Val Ser
SEQ ID NO:59：抗体131B4 VK序列CDR3：Ser Gln Ser Ser Leu Val Pro Trp Thr
SEQ ID NO:60：抗体131E8 VH序列1 CDR1：Gly Phe Ser Leu Pro Asn Tyr Gly
SEQ ID NO:61：抗体131E8 VH序列1 CDR2：Ile Trp Ser Gly Gly Ser Thr
SEQ ID NO:62：抗体131E8 VH序列1 CDR3：Ala Arg Asn Phe Tyr Ser Lys TyrAsp Tyr Ala Met Asp Tyr
SEQ ID NO:63：抗体131E8 VH序列2 CDR1：Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp
SEQ ID NO:64：抗体131E8 VH序列2CDR2：Ile Asn Pro Asn Ser Gly Ser Thr
SEQ ID NO:65：抗体131E8 VH序列2 CDR3：Ala Arg Leu Gly Asp Tyr
SEQ ID NO:66：抗体131E8 VK序列CDR1：Ser Ser Val Ser Tyr
SEQ ID NO:67：抗体131E8 VK序列CDR2：Asp Thr Ser
SEQ ID NO:68：抗体131E8 VK序列CDR3：Phe Gln Gly Ser Gly Tyr Pro Leu Thr
SEQ ID NO:69：抗体132H4 VH序列CDR1：Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala
SEQ ID NO:70：抗体132H4 VH序列CDR2：Ile Ser Ser Gly Gly Ala Asn Ile
SEQ ID NO:71：抗体132H4 VH序列CDR3：Ala Arg Gly Asp Tyr Phe Asn His PheTrp Phe Ala Tyr
SEQ ID NO:72：抗体132H4 VK序列CDR1：Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly AsnThr Tyr
SEQ ID NO:73：抗体132H4 VK序列CDR2：Lys Val Ser
SEQ D NO: 74：抗体132H4 VK序列CDR3：Phe Gln Gly Ser His Val Pro Trp Thr
SEQ ID NO:75：抗体133A6 VH序列CDR1：Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala
SEQ ID NO:76：抗体133A6 VH序列CDR2：Ile Ser Ser Gly Gly Gly Asn Ile
SEQ ID NO:77：抗体133A6 VH序列CDR3：Ala Arg Gly Asp Tyr Ser Asn Tyr PheTrp Phe Ala Tyr
SEQ ID NO:78：抗体133A6 VK序列CDR1：Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly AsnThr Tyr
SEQ ID NO:79：抗体133A6 VK序列CDR2：Lys Val Ser
SEQ ID NO:80：抗体133A6 VK序列CDR3：Phe Gln Gly Ser His Val Pro Trp Thr
具体实施方式
实施例
A.游离IL-18与复合IL-18/IL-18BP的检测
1.共同检测患者中的IL-18
用检测总IL-18(游离形式和IL-18BP复合物)的ELISA测定进行患者中的人IL-18定量。该ELISA包含市售抗体(参见下表8)。最常见的ELISA测定用Taniguchi等人19971开发并由不同供应商出售的一对抗IL-18抗体，即小鼠单克隆抗体125-2H作为第一/捕获抗体和大鼠单克隆抗体159-12B作为第二/显色抗体进行。
Figure BDA0003786898910000681
Figure BDA0003786898910000691
Figure BDA0003786898910000701
2.游离IL-18水平的估计量
迄今，尚无游离IL-18测量水平的报告。使用Novick等人,2004描述的计算(见下文)，通过外推法产生游离IL-18的估计量。数据比较人类中的IL-18水平和IL-18BP水平。在这些研究中，研究者使用一对商业单克隆抗IL-18抗体125-2H和159-12B，其中抗体125-2H用于捕获并且已知结合IL-18/IL-18BP复合物(Argiradi等人,2009)。为了计算患者血清中的游离IL-18，他们应用质量作用定律，假定IL-18抗体的结合作用是可逆的。如下文进行计算：
KD＝0.4nM＝([IL-18]x[IL-18BP])/[IL-18-IL18BP]
或以nM计的[IL-18]＝(0.4x[IL-18-IL18BP])/[IL-18BP]
其中：
IL-18-IL-18BP是复合物
解离常数如通过Kim等人,2000计算，KD＝0.4nM
复合物IL-18-IL-18BP中化学计量1:1
通过电化学发光法确定IL-18的浓度
通过ELISA确定IL-18BP的浓度
值得注意的是，作者发现患者之间游离IL-18相对于总IL-18的巨大变动，这些变动不反映IL-18对IL-18BP的比率。有趣地，援引的出版物中未报告这个IL18/IL-18BP比率。另外，抗IL18抗体不能够在游离IL-18和复合形式的IL-18/IL-18BP之间区分。最后，如Novick等人,2001描述，抗IL-18BP抗体不检出IL-18BP游离形式，而检出总IL-18BP，因为据报道它们不阻断IL-18BP和IL-18分别与单克隆抗体582.10和657.27之间的相互作用。因此，使用IL-18BP浓度计算游离IL-18缺少准确度。即便令人鼓舞，但是数据变异表明，可以用组合有特异性靶向与IL-18BP结合的IL-18区域的多种抗体的更适宜测定改进游离IL-18的检测。
3.证实常用商业抗体不检出游离IL-18
检验11种市售抗IL-18单克隆抗体阻止任何IL-18与IL-18BP相互作用的能力。下文数据表明，情况并非如此并且所检验的抗体均不与L-18和IL-18BP之间的相互作用位点结合。因此，检测人样品中的游离IL-18需要靶向例如IL-18结合位点/IL-18BP表位的特定设计和方案。
将常用抗体125-2H和159-12B均作为捕获抗体和显色抗体检验(参见图2)。数据表示，两种抗体均不识别IL-18BP的IL-18表位并且因此仅提供总IL-18(游离形式和与IL-18BP复合形式)的定量。
与抗体125-2H和159-12G平行，检验9种其他商业单克隆抗体在同上的条件下检测游离IL-18的潜力。如上文描述，这类抗体将有检测生物样品中游离IL-18的价值。下表9中给出所检验的商业抗体清单。
Figure BDA0003786898910000711
Figure BDA0003786898910000721
收集的数据表明市售抗体均不能够将游离IL-18从其与IL-18BP的复合物区分。
4.检测游离IL-18的ELISA设定
4.1.用IL-18BP捕获游离IL-18
微量平板孔用适宜体积的含有重组人IL-18BP的磷酸盐缓冲液盐水溶液包被。将平板在4℃孵育一段时间并且随后用含有牛血清白蛋白或其他适宜封闭剂的封闭缓冲液稳定。一旦反应完成，将微量平板密封并贮存在4℃直至用于检测游离IL-18。微量平板也可以在稳定液中干燥，允许在室温储存并且随后当用于测定时通过由水化过程重构。
作为一个例子，对于100μl最终反应体积，首先配置80μl生物素/抗体缀合物。用IL-18BP包被的微量平板检验含有游离IL-18的样品或生物流体。此后，将含有生物流体或标准物的20μl样品体积分配至每个微量平板孔。未稀释的或稀释的生物流体可以是但不限于血清、尿、泪、唾液、胆汁、汗、呼出或呼气、痰、支气管肺泡液、皮脂、细胞分泌物、腺体分泌物、粘膜分泌物或组织分泌物、活检样品、均化组织。游离IL-18标准浓度范围在4.2pg/ml至3000pg/ml之间。标准物和浓缩物从市售重组人IL-18制备。将平板密封并且随后在温和振摇下孵育以捕获游离IL-18。允许反应在室温、37℃或不影响样品和试剂稳定性的其他温度在范围从数分钟至数小时的合适时间段进行一段时间。微量平板孔用适宜缓冲液充分洗涤并且随后，向每个孔添加100μl缓冲液显影混合物。显影混合物含有链霉亲和素缀合的酶如过氧化物酶或碱性磷酸酶。将微量平板孔密封并且允许反应在室温、37℃或不影响样品和试剂稳定性的其他温度在范围从数分钟至数小时的合适时间段进行一段时间。随后用微量平板读数仪在适宜的纳米波长对所得到的反应监测所产生试剂的吸光度或荧光。
4.2.用抗IL-18抗体捕获游离IL-18
微量平板孔用适宜体积的含有抗体X的磷酸盐缓冲液溶液包被。将平板在4℃孵育一段时间并且随后用含有牛血清白蛋白或其他适宜封闭剂的封闭缓冲液稳定。一旦反应完成，将微量平板密封并贮存在4℃直至用于检测游离IL-18。微量平板也可以在稳定液中干燥，允许在室温储存并且随后当需要测定时通过水化过程重构。
作为一个例子，对于100μl最终反应体积，首先配置80μl生物素/抗体缀合物。用IL-18BP包被的微量平板检验含有游离IL-18的样品或生物流体。此后，将含有生物流体或标准物的20μl样品体积分配至每个微量平板孔。未稀释的或稀释的生物流体可以是但不限于血清、尿、泪、唾液、胆汁、汗、呼气或呼气、痰、支气管肺泡液、皮脂、细胞分泌物、腺体分泌物、粘膜分泌物或组织分泌物、活检样品、均化组织。游离IL-18标准浓度范围在4.2pg/ml至3000pg/ml之间。标准物和浓缩物从市售重组人IL-18制备。将平板密封并且随后在温和振摇下孵育以捕获游离IL-18。允许反应在室温、37℃或不影响样品和试剂稳定性的其他温度在范围从数分钟至数小时的合适时间段进行一段时间。微量平板孔用适宜缓冲液充分洗涤并且随后，向每个孔添加100μl缓冲液显影混合物。显影混合物含有链霉亲和素缀合的酶如过氧化物酶或碱性磷酸酶。将微量平板孔密封并且允许反应在室温、37℃或不影响样品和试剂稳定性的其他温度在范围从数分钟至数小时的合适时间段进行一段时间。随后用微量平板读数仪在适宜的纳米波长对所得到的反应监测吸光度或荧光。
4.3.滴定随IL-18BP水平变化的游离IL-18
滴定恒定量的重组IL-18作为不同的并且充分确定的IL-18BP量的函数，以理解何时游离IL-18不再可检测。5％BSA补充的400pg/mL IL-18 PBS溶液剂用范围从0至10’000pg/mL的确定量的IL-18BP掺加(spike)。根据IL-18和IL-18BP的相应分子量计算摩尔比。如上文所述，使用针对IL-18的IL-18BP，用ELISA进行游离IL-18检测。图1中呈献的归集数据表明，当IL-18BP浓度等于或高于代表约15倍较高IL-18BP的IL-18BP/IL-18摩尔比的6000pg/mL时，400pg/mL IL-18检测值接近背景检测水平。相反，当摩尔比低于15时，游离IL-18轻易地可检出。
4.4.人IL-18和IL-18BP之间解离常数(KD)的修订计算值
4.4.1通过滴定获得的KD计算值
文献中基于Biacore测量报道了400pM的KD(Kim等人,20008)。但是，归因于以上结果，用上述ELISA设定重新检查了KD。在a)耗尽内源IL-18BP的健康志愿者血清或b)5％BSA补充的PBS中用渐增浓度的IL-18BP(60pM–3nM)进行10pM IL-18滴定。除总IL-18和总IL-18BP市售测定之外的游离IL-18ELISA允许在溶液中测定KD，所述KD应当比来自固相BIAcore方法的数据更好地反映体液中IL-18对其结合蛋白的亲和力。结果的例子展示在表10中。
Figure BDA0003786898910000741
Figure BDA0003786898910000751
基于以下式计算KD：
KD＝[游离IL-18]x[游离IL-18BP]/[IL-18/IL-18BP复合物]
[游离IL-18BP]＝[总IL-18BP]–[游离IL-18]
[IL-18/IL-18BP复合物]＝[总IL-18]–[游离IL-18]
结果：KD＝50pM(血清稀释剂)；35pM(5％BSA稀释剂)
滴定结果显示血清稀释剂中和5％BSA补充的PBS中KD分别是50pM和35pM。与人IL-18BP和IL-18之间的KD的此前估计值相反，新计算的KD表明，先前Kim等人,2000报道的基于KD 400pM的游离IL-18估计值不精确。
4.4.2通过BIAcore获得的KD估计值
在通过滴定获得以上KD结果后，我们用更简单的BIAcore设置检验了IL-18BP对IL-18的结合亲和力，所述BIAcore设置由IL-18BP与BIAcore芯片的结合并且随后检验其对IL-18的亲和力组成。该方法设置与Kim等人,20008的相反，他们将IL-18用单克隆抗体结合至BIAcore芯片并且随后检验复合抗体-IL-18对IL-18BP的亲和力。重要地，新BIAcore设置采集到与上述滴定研究结果完全一致的数据，即KD范围在20pM和30pM之间。下表11中提供数据。
Figure BDA0003786898910000752
4.5.滴定血清中或含有IL-18BP的5％BSA溶液中掺加的IL-18
人血清含有显著水平的分别在ng/mL和pg/mL水平的内源IL-18以及与IL-18BP复合的IL-18。二者均是用市售抗体可检测的。然而，没有市售测定可用于检测游离IL-18。为了验证以上ELISA用以检测游离IL-18的设置，我们在人血清中掺加重组人IL-18以找出检测水平。为此目的，将纳克级的IL-18掺入含有内源性35ng/mL IL-18BP的血清或补充有5％BSA和35ng/mL IL-18BP的PBS溶液中。用上文描述的ELISA方法监测所得的游离IL-18。下表12中示出结果。
Figure BDA0003786898910000761
5.检测患者中的游离IL-18
5.1.检测来自患有不同炎性疾病的患者的血清和滑液中的游离IL-18
用上文描述的ELISA检验来自患有不同炎性疾病的患者的样品。为此目的，我们选择据报道具有较高水平IL-18的不同疾病和应激状态，如类风湿性关节炎、银屑病、系统性红斑狼疮和在重症监护室的患者。据我们所知，仅通过用质量作用定律和Kim等人,2000报告的KD 400pM计算，尚未在这些患者中鉴定到游离IL-18。根据以上数据，预计游离IL-18的可能水平将难以检测，原因在于如科学出版物中所报道的血清中总IL-18水平低于或接近于1000pg/mL。另外，我们检验了来自年龄匹配健康对照的样品以验证我们的ELISA设置的性能。如预期的，并且与报道的质量作用定律估计值相反，血清和滑液中均不可检出游离IL-18水平，而可检出总IL-18和IL-18BP(参见表13)。
Figure BDA0003786898910000771
Figure BDA0003786898910000781
Figure BDA0003786898910000791
-：不可检测，与背景信号相当的水平
**：不在标准曲线内部的高IL-18BP水平
5.2.检测来自患有成人发作型Still病的患者的血清中的游离IL-18
遵循结果并且与具有合理低水平总IL-18的以上适应症相反，我们检验了已知血清中其总IL-18水平升高的成人发作型Still病患者样品(Kawashima等人,2001和Chen等人,2004)。如Kawashima等人,2001和其他地方所描述，升高的总IL-18血清水平与成人发作型Still病活动性如a)发热、关节痛、关节炎、软骨损伤，b)铁蛋白水平较高和c)肝酶(LDH)相关。由于以上ELISA设置，我们首次报道了成人发作型Still病患者中的游离IL-18水平(参见表14)。对于其他检验的适应症，计算的游离IL-18水平并不对应于检出的游离IL-18水平。采集的数据表明，至少70％患者呈游离IL-18阳性。
Figure BDA0003786898910000811
*：与背景信号相当的水平
**：与检测下限相当的水平
-：不可检测，与背景信号相当的水平
6.结论
出版物和以上实验设置中的数据均显示商业单克隆抗体检测总IL-18，但不检测游离IL-18。另外，也证实了定量IL-18的最常用抗体，即125-2H和159-12B也是检测总IL-18。
使用质量作用定律估计游离IL-18是一项有意义的方案。然而，获得的巨大误差线不支持其用于临床监测。另外，抗IL-18BP抗体检出总IL-18BP并且不检出其游离形式。因此，使用IL-18BP浓度计算游离IL-18缺少准确度。
通过靶向IL-18对IL-18BP的结合位点定量游离IL-18的所提出方案似乎更适宜并且首次展示出比采用质量作用定律的外推量定量更精确。此外，IL-18BP的亲和力高于Kim等人,2000报告的亲和力，KD血清中范围接近50pM并且采用新的BIAcore设置时为20-30pM。
最后，首次用本发明的这种ELISA方案和设置诊断患有成人发作型Still病的患者呈游离IL-18阳性。数据支持早期如Kawashima等人,2001和Chen等人,2004报告的关于成人发作型Still病的总IL-18研究结果，他们报告高水平的总IL-18。本申请中提出的新ELISA方案首次展示游离、非复合和生物活性的促炎性IL-18在成人发作型Still病患者中存在。
B.COPD恶化小鼠模型中的IL-18BP功效
本研究的目的是确定通过皮下途径按三个剂量水平施用的IL-18BP对C57BL/6J小鼠中聚肌苷酸:聚胞苷酸诱导的烟草烟雾引起肺部炎症恶化的影响。本研究中包含口服给药的高水平地塞米松作为对照药物。
1.一般方法学：4日恶化/烟草烟雾小鼠模型
小鼠接受溶媒(PBS)或IL-18BP。从第1日至第4日在起始烟草烟雾暴露之前2小时，将IL-18BP分别按1、3或10mg/kg皮下给予3组动物。在每个每日二次暴露之前1小时，小鼠经口接受溶媒或地塞米松(10mg/kg)。在第4日起始空气暴露或烟草烟雾暴露之前2小时，小鼠通过鼻内施用接受溶媒或聚肌苷酸:聚胞苷酸(2mg/kg)以诱导肺部炎症恶化。烟草烟雾暴露在清晨和下午期间如下进行：第1日15分钟，第2日25分钟，第3日30分钟和第4日30分钟。
表1中汇总动物分组和它们的相应处理方案。
Figure BDA0003786898910000831
TS烟草烟雾；
Veh：溶媒(Vehicule)；
Dex：地塞米松，
p[I:C]：聚肌苷酸:聚胞苷酸
在以上处理后，动物最终在第5日麻醉。此后，经锁骨下动脉取得血液样品(血浆)并且用3X 0.4ml PBS对动物进行支气管肺泡灌洗用于进一步细胞分析和细胞因子/介质。支气管肺泡灌洗上清液贮存在-80℃用于细胞因子/介质分析。使用Sysmex细胞计数器计数从BALF回收的细胞。最后，通过Students t检验和ANOVA统计分析采集的数据(Sidak’s用于数据通过正态性检验的情况或如果数据未通过正态性检验，则使用Kruskal Wallis检验)。
2.在4日恶化/烟草烟雾小鼠模型中证实IL-18途径的活化
在BAL使用商业ELISA检验小鼠IL-18以证实针对IL-18途径的活化的小鼠模型。采集的数据表明肺部气道腔隙中IL-18的明显诱导(参见图5)。IL-18在对照(仅空气)中不可检测。有趣地，IL-18在烟雾暴露下表达，但是在单独的聚[I:C]下并未显著地诱导(在检测下限下)。与之相反并且如所预期的，在BAL中烟雾和聚[I:C]的组合明显地升高IL-18至比单独烟雾或聚[I:C]高得多的水平。
3.恶化/烟草烟雾小鼠模型中IL-18BP缓和恶化的炎症
3.1.IL-18BP抑制肺部气道腔隙中的总细胞浸润和恶化的炎症
在诱导恶化的炎症后，通过IL-18BP处理的小鼠在肺中具有显著的总细胞浸润缓和。与阳性对照地塞米松相比，剂量3mg/kg和10mg/kg显示统计学上有价值的功效(参见图5)。值得注意的是，小鼠模型中地塞米松在3mg/kg剂量没有功效的迹象(数据未显示)，这表明地塞米松大剂量10mg/kg在某些细胞类型如巨噬细胞、嗜酸性粒细胞和淋巴细胞中可能诱导凋亡(数据未显示)。小鼠模型中用罗氟司特[3-(环丙基甲氧基)-N-(3,5-二氯吡啶-4-基)-4-(二氟甲氧基)苯甲酰胺]产生相似的观察结果，其中采用2.5mg/kg剂量时未观察到细胞浸润抑制作用的迹象(数据未显示)。图6显示10mg/kg IL-18BP在当前小鼠模型中恶化的炎症抑制作用方面清晰和统计学上相关的功效。
3.2.IL-18BP抑制肺部气道腔隙中的嗜中性粒细胞浸润
在烟草烟雾恶化的肺中嗜中性粒细胞浸润被IL-18BP抑制。与阳性对照地塞米松相比，剂量3mg/kg和10mg/kg IL-18BP都显示统计学上有价值的功效(参见图7)。在当前小鼠模型条件下，IL-18BP 10mg/kg剂量似乎具有最佳的统计学功效(参见图8)。
3.3.IL-18BP抑制肺部气道腔隙中的粒细胞集落刺激因子(G-CSF)途径G-CSF公认为刺激嗜中性粒细胞前体和成熟嗜中性粒细胞的存活、增殖、分化和功能的关键细胞因子。因此，通过烟雾-p[I:C]诱导的G-CSF途径的缓解是证实IL-18BP对小鼠肺部气道腔隙中嗜中性粒细胞召集的功效的显著因素。用市售ELISA试剂盒监测BALF中G-CSF的存在。图9表明施用IL-18BP缓和肺部气道中的G-CSF释放，因而证实抑制嗜中性粒细胞浸润。检验的三个IL-18BP剂量在小鼠模型中具有统计意义上的相关效果。
3.4.IL-18BP安全性：对恶化/烟草烟雾小鼠模型中体重减轻的影响
IL-18BP施用似乎由恶化/烟草烟雾小鼠模型良好耐受。作为一个例子，体重减轻由IL-18BP缓和，虽然Students t检验和ANOVA统计分析均不显著(参见图10)。接受3mg/kg和10mg/kg IL-18BP的大部分小鼠分别丧失6-7％体重，相反，暴露于烟草烟雾和p[I:C]的对照丧失约9％体重。因此，体重减轻缓和数据表明IL-18BP未向动物模型提供额外应激。有趣的是指出，与接受p[I:C]和烟草烟雾组合的小鼠相比，仅接受p[I:C]的小鼠不丧失体重[参见图8，处理3)和4)]。
C.抗IL-18单克隆抗体的产生
1.小鼠免疫和单克隆抗体筛选
使用允许以正确折叠的蛋白质免疫的技术，对小鼠接种人白介素-18。在免疫之前，就假定对结合IL-18BP的IL-18表面区域表位敏感的主要组织相容性复合体，选择基因修饰的小鼠。在免疫后，B细胞从脾分离并且按照标准杂交瘤技术杂交。将杂交瘤在微量平板上分选并且随后检验靶向IL-18BP结合位点中所包含的IL-18表位的单克隆抗IL-18抗体的表达。
筛选以3个依次和选择性步骤进行：
第一步骤。用连接至Luminex珠的IL-18进行阳性抗体筛选尝试，证实细胞表达单克隆抗IL-18抗体。
第二步骤。与IL-18BP竞争时，再筛选靶向IL-18BP结合位点上IL-18的潜在抗体。为此目的，单克隆抗体与携带IL-18的Luminex珠结合。复合物随后暴露于生物素酰化的IL-18BP，以鉴定对先前鉴定的抗IL-18抗体的干扰作用(参见表1，栏#2)。第二筛选带来超过300个阳性抗体候选物(参见表1，栏#3)。阳性候选物的数目令人惊讶地高，从而提示针对所靶向表位区域的优异的小鼠免疫。但是，抑制作用因削弱但仍然持久的荧光信号而不充分，因此提示IL-18BP与复合的抗体IL-18的结合。然而并且重要地，其他地方报道的这类标准筛选方法未考虑巨大抗体分子(约160kDa)对小得多的IL-18BP(仅约18kDa的肽)的潜在空间位阻。
第三步骤。用Luminex珠进行第三筛选程序，所述Luminex珠连接至IL-18BP并且随后与白介素-18复合，从而确保呈递正确折叠的重组IL-18至阳性抗体候选物。所产生的筛选明显地更有选择性，因为大部分的上述抗体仍然结合Luminex-IL-18珠，因而这表明它们此前对IL-18BP的抑制作用因空间位阻引起。最后，最终认定总计12种抗体靶向IL-18BP蛋白上的IL-18，原因在于它们的荧光信号在IL-18BP存在下结合IL-18后十分低，即克隆#107C6、108F8、109A6、111A6、129C3、131B4、131E8、131H1、132C12、132H4、133A6和134B2(参见表16，栏#4，选择的克隆代表与栏#2相比超过500倍的抑制作用均数)。下表16中包括阳性抗体与一组阴性抗体。
来自第三筛选步骤(表16，栏#4)的收集数据促进进一步的mRNA测序和克隆稀释工作以从#107C6、108F8、109A6、111A6、129C3、131B4、131E8、131H1、132C12、132H4、133A6和134B2富集阳性单克隆细胞。证实全部这些单克隆抗体结合在IL-18BP结合位点上的IL-18。
Figure BDA0003786898910000871
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本发明的其他实施方案
1.一种用于治疗对象中IL-18相关疾病或病症的IL-18抑制物，与健康对照对象体液中的水平相比，所述对象经诊断在体液中具有异常的游离IL-18水平和/或异常的游离IL-18/IL-18BP比率。
2.根据实施方案1使用的IL-18抑制物，其中，体液内所述异常的游离IL-18水平超过健康对照对象体液中的水平5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、或多于100％。
3.用于前述实施方案任一项中的IL-18抑制物，其中待治疗的对象属于这样的对象群体，与健康对象体液中的水平相比，已经确定所述对象群体在体液、尤其血清，痰，支气管肺泡灌洗液(BALF)、滑液和/或循环中具有升高的游离IL-18水平和/或异常的游离IL-18/IL-18BP(IL-18BP)比率。
4.用于实施方案2或3中的IL-18抑制物，其中，血清内所述升高的游离IL-18水平在5pg/mL至10000pg/mL内，而健康对象血清、尤其健康人血清中游离IL-18的量是≤4pg/mL。
5.根据前述实施方案任一项使用的IL-18抑制物，其中所述IL-18相关疾病或病症是选自以下的一种疾病：慢性阻塞性肺病(COPD)、输注相关性肺损伤、支气管肺发育不良(BPD)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、成人Still病、青少年Still病、间质性肺病(ILD)、特发性肺纤维化、囊性纤维化、肺动脉高血压、哮喘、支气管扩张症、心力衰竭、肌萎缩侧索硬化(ALS)、干眼病(DED)、角膜炎、角膜溃疡和磨损、角膜血管新生、病理性眼内新血管化、虹膜炎、青光眼、黄斑变性、
Figure BDA0003786898910000961
综合征、自身免疫性葡萄膜炎、
Figure BDA0003786898910000962
病、结膜炎、过敏性结膜炎、眼睑皮炎、II型糖尿病、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、脂肪性肝炎、实体器官和血液移植、局部缺血再灌注损伤、家族性地中海热、肿瘤坏死因子受体1相关的周期性综合征、cryopyrin相关的周期性发热综合征、hyper-IgD综合征、痛风、Schnitzler综合征、韦格纳肉芽肿，又称作肉芽肿病伴多血管炎(GPA)、桥本甲状腺炎、Crohn病、溃疡性结肠炎、免疫球蛋白-4(IgG4)相关的疾病和干细胞疗法。
6.根据前述实施方案任一项使用的IL-18抑制物，其中所述IL-18相关疾病或病症由吸烟或二手烟暴露、尤其烟草烟雾暴露引起。
7.根据前述实施方案任一项使用的IL-18抑制物，其中所述IL-18相关疾病或病症由病毒性感染引起。
8.根据前述实施方案中任一项使用的IL-18抑制物，其中所述IL-18相关疾病或病症是IL-18引起的炎症的全身性表现和相关共病，所述相关共病选自气肿、组织炎症、组织破坏、肺切除、脉管系统消失、内皮细胞凋亡、粘膜化生、心脏肥大、肺组织中VEGF减少、肺血管损失、血管肌化、血管重塑、胶原蛋白沉积、肺中异常弹性蛋白层、纤维化气道重塑、气腔膨大、慢性气道和肺血管重塑和肺功能减低。
9.用于前述实施方案任一项中的IL-18抑制物，其中治疗包括预防、制止、缓和或逆转与所述疾病或病症相关的症状。
10.用于前述实施方案任一项中的IL-18抑制物，其中限制或抑制IL-18结合作用，尤其游离IL-18与IL-18R的结合，但尤其限制或抑制游离IL-18与IL-18Rα的结合。
11.用于前述实施方案任一项中的IL-18抑制物，其中调节、尤其抑制IL-18-依赖性下游信号传导途径。
12.用于前述实施方案任一项中的IL-18抑制物，其中与未治疗的患有所述疾病或病症的对象相比，调节、尤其抑制增加的IFNγ、IL-13或IL-17A表达。
13.用于前述实施方案任一项中的IL-18抑制物，其中IL-18抑制物通过截获并中和组织和循环中过量的游离IL-18，代偿IL-18/IL-18BP不平衡。
14.IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，其中抗体或其部分在IL-18BP的结合位点处或靠近IL-18BP结合位点区域与IL-18结合。
15.根据实施方案14的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，所述抗体或其部份结合游离IL-18蛋白，但是不结合IL-18/IL-18BP复合物。
16.根据实施方案14或实施方案15的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，其中所述抗体或其部分空间上阻碍或防止IL-18BP与IL-18结合。
17.根据实施方案14至16的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，其中所述抗体或其部分与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3中所述序列群组的序列内所包含的单个表位、两个表位的组合或三表位的组合特异性结合。
18.根据实施方案17的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，其中所述表位具有与选自SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6中所述序列群组的序列具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％序列同一性的序列。
19.根据实施方案18的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，其中所述表位选自SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6。
20.根据前述实施方案任一项的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，其中所述抗体或其部份是单克隆抗体或多克隆抗体。
21.根据前述实施方案任一项的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，其中所述抗体或其部份是嵌合抗体、单链抗体抗体、双特异性抗体、类人猿化抗体、人抗体和人源化抗体。
22.根据前述实施方案任一项的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，其中所述抗体或其部分与人IL-18结合。
23.根据前述实施方案任一项的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，其中IL-18与IL-18受体的结合、尤其与IL-18Rα的结合减少至少5％、尤其至少10％、尤其至少15％、尤其至少20％、尤其至少25％、尤其至少30％、尤其至少40％、尤其至少45％、尤其至少50％、尤其至少55％、尤其至少60％、尤其至少65％、尤其至少70％、尤其至少75％、尤其至少80％、尤其至少85％、尤其至少90％、尤其至少95％、尤其至少100％。
24.根据前述实施方案任一项的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，其中所述抗体或其部份通过限制或阻止IL-18与IL-18受体(IL-18R)结合、尤其游离IL-18与IL-18Rα结合，中和游离IL-18。
25.根据前述实施方案任一项的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，其中所述抗体或其部分
a)与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3中所述序列群组的序列内所包含的单个表位、两个表位的组合或三表位的组合特异性结合；和/或
b)特异性结合表位，所述表位具有与SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6中所述的序列具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的序列；并且
c)在IL-18BP的结合位点处或靠近IL-18BP结合位点的区域与IL-18特异性结合；并且。
d)与游离IL-18蛋白、但不与IL-18/IL-18BP复合物特异性结合；并且
e)空间上阻碍IL-18BP与IL-18结合；以及
f)减少IL-18与IL-18受体的结合、尤其与IL-18Rα的结合至少5％、尤其至少10％、尤其至少15％、尤其至少20％、尤其至少25％、尤其至少30％、尤其至少40％、尤其至少45％、尤其至少50％、尤其至少55％、尤其至少60％、尤其至少65％、尤其至少70％、尤其至少75％、尤其至少80％、尤其至少85％、尤其至少90％、尤其至少95％、尤其100％。
26.根据实施方案1至13中任一项使用的IL-18抑制物，其中抑制物是阻止游离IL-18与IL-18受体结合、尤其游离IL-18与IL-18Rα结合的抗体、尤其是针对游离IL-18的特异性抗体、尤其是拮抗性抗体。
27.根据实施方案26使用的IL-18抑制物，其中所述抗体是实施方案14-25中任一项的抗体。
28.根据实施方案1-13中任一项使用的IL-18抑制物，其中已经通过使用根据实施方案14-25中任一项的抗体测定体液中所述异常的游离IL-18水平。
29.根据实施方案1至13中任一项使用的IL-18抑制物，其中抑制物是IL-18BP、尤其人IL-18BP(hIL-18BP)、尤其包含其任何功能性等同物或部分的IL-18BP、尤其如SEQ IDNO:7中所示的IL-18BP。
30.根据实施方案26-29使用的IL-18抑制物，所述抑制物是全长蛋白质或突变蛋白、功能性衍生物、功能性片段、生物活性肽、部分、环状排列衍生物、融合蛋白、同种型或其盐。
31.用于治疗慢性阻塞性肺病(COPD)、心脏病、干眼病和/或II型糖尿病的IL-18BP。
32.根据实施方案31使用的IL-18BP，用于治疗慢性阻塞性肺病(COPD)。
33.根据实施方案31使用的IL-18BP，用于治疗心脏病。
34.根据实施方案31使用的IL-18BP，用于治疗干眼病。
35.根据实施方案31使用的IL-18BP，用于治疗II型糖尿病。
36.根据实施方案31至35使用的IL-18BP，其中所述疾病或病症由吸烟或二手烟暴露、尤其烟草烟雾暴露引起。
37.根据前述实施方案任一项使用的IL-18BP，其中所述疾病或病症由病毒性感染引起。
38.根据前述实施方案任一项的用途的IL-18BP，其中所述疾病或病症是IL-18引起的炎症的全身性表现和相关共病，所述相关共病选自气肿、组织炎症、组织破坏、肺切除、脉管系统消失、粘膜化生、心脏肥大、肺组织中VEGF减少、肺血管损失、血管肌化(vesselmuscularization)、胶原蛋白沉积、肺中异常弹性蛋白层、纤维化气道重塑、气腔膨大、慢性气道和肺血管重塑和肺功能减低。
39.根据前述实施方案任一项使用的IL-18BP，其中限制或抑制IL-18结合作用，尤其游离IL-18与IL-18R的结合，但尤其限制或抑制游离IL-18与IL-18Rα的结合。
40.根据前述实施方案任一项使用的IL-18BP，其中调节、尤其抑制IL-18-依赖性下游信号传导途径。
41.根据前述实施方案任一项使用的IL-18BP，其中与未治疗的患有所述疾病或病症的对象相比，调节、尤其抑制增加的IFNγ、IL-13或IL-17A表达。
42.根据前述实施方案任一项使用的IL-18BP，其中IL-18抑制物通过截获组织和循环中过量的游离IL-18，代偿IL-18/IL-18BP不平衡。
43.根据前述实施方案任一项使用的IL-18BP，其中治疗包括预防、制止、缓和或逆转与所述疾病或病症相关的症状。
44.一种用于治疗对象中如前述实施方案1-13任一项中限定的疾病或病症的药物组合物，所述对象患有如前述实施方案1-13任一项中限定的这种疾病或病症或具有形成这种疾病或病症的素质，其中所述组合物尤其以预防有效量和/或治疗有效量包含根据实施方案1-13和26-30中任一项的IL-18抑制物。
45.实施方案44的药物组合物，其中所述组合物任选地还提供促炎细胞因子或其功能性片段的另一种抑制物，或诱导所述促炎细胞因子或其功能性片段抑制物原位表达的调节因子、共治疗药如抗炎药、支气管扩张药、抗组胺药、减充血药或镇咳药。
46.实施方案44或45的药物组合物，包含可药用载体和/或赋形剂。
47.一种用于治疗对象中如前述实施方案31至43任一项中限定的疾病或病症的药物组合物，所述对象患有如前述实施方案31至43任一项中限定的这种疾病或病症或具有形成这种疾病或病症的素质，其中所述组合物尤其以预防有效量和/或治疗有效量包含根据实施方案31至43的IL-18BP。
48.实施方案47的药物组合物，其中所述组合物任选地还提供促炎细胞因子或其功能性片段的另一种抑制物，或诱导所述促炎细胞因子或其功能性片段抑制物原位表达的调节因子、共治疗药如抗炎药、支气管扩张药、抗组胺药、减充血药或镇咳药。
49.实施方案47或48的药物组合物，包含可药用载体和/或赋形剂。
50.表达载体，包含根据实施方案1-13和26-30中任一项的IL-18抑制物的编码序列，当施用至患有如前述实施方案中限定的疾病或病症或具有形成这种疾病或病症的素质的对象时，所述表达载体导致IL-18抑制物原位表达用于治疗如实施方案1-13任一项中所限定的疾病或病症。
51.包含IL-18反义表达载体的表达载体，当施用至患有如实施方案1-13中限定的疾病或病症或具有形成这种疾病或病症的素质的对象时，所述表达载体导致原位抑制IL-18表达，用于治疗如实施方案1-13任一项中公开的疾病或病症。
52.实施方案50或51的用于治疗如实施方案1-13和26-43任一项中所限定的疾病或病症的表达载体，其中将所述表达载体单独或与根据实施方案实施方案1-13和26-30中任一项的IL-18抑制物、根据实施方案31-43的IL-18BP或根据实施方案44-49中任一项的药物组合物组合施用至患有这种疾病或病症或具有形成这种疾病或病症的素质的对象。
53.表达载体，包含根据实施方案31-43的IL-18BP的编码序列，当施用至患有如前述实施方案中限定的疾病或病症或具有形成这种疾病或病症的素质的对象时，所述表达载体导致IL-18BP原位表达用于治疗如实施方案31-43任一项中所限定的疾病或病症。
54.实施方案53的用于治疗如实施方案1-13和26-43任一项中所限定的疾病或病症的表达载体，其中将所述表达载体单独或与根据实施方案1-13和26-30中任一项的IL-18抑制物、根据实施方案31-43的IL-18BP或根据实施方案44-49中任一项的药物组合物组合施用至患有这种疾病或病症或具有形成这种疾病或病症的素质的对象。
55.根据实施方案1-13和26-30中任一项使用的IL-18抑制物，根据实施方案31-43任一项使用的IL-18BP、根据实施方案44-49任一项使用的药物组合物或根据实施方案50-54任一项使用的表达载体，包括向有需求的对象施用预防有效量和/或治疗有效量的所述IL-18抑制物、IL-18BP、药物组合物或表达载体，尤其通过全身性、鼻内、颊部、口腔、经粘膜、气管内、静脉内、皮下、尿道内、阴道内、舌下、支气管内、肺内、经皮或肌内施用法、尤其支气管-肺施用法施用。
56.根据实施方案55使用的IL-18抑制物、IL-18BP、药物组合物或表达载体，其中所述对象是哺乳动物，尤其所述对象是人。
57.一种在患有如实施方案1-13和26-43任一项中所限定的疾病或病症或具有形成这种疾病或病症的素质的对象中治疗这种疾病或病症的方法，所述方法包括向所述对象施用治疗有效量或预防有效量的根据实施方案1-13和26-30任一项的IL-18抑制物、根据实施方案31-43的IL-18BP或根据实施方案44-49任一项的药物组合物和/或根据实施方案50-54任一项的表达载体，尤其通过全身性、鼻内、颊部、口腔、经粘膜、气管内、静脉内、皮下、尿道内、阴道内、舌下、支气管内、肺内、经皮或肌内施用法、尤其支气管-肺施用法施用。
58.一种用于以下的方法：诊断如实施方案1-13和26-43任一项中限定的疾病或病症、诊断如实施方案1-13和26-43任一项中限定的疾病或病症的素质、监测对象中最小残留疾病或预测对象对采用根据实施方案1-13和26-30的IL-18抑制物、根据实施方案31-43的IL-18BP或根据实施方案44-49的包含IL-18抑制物的药物组合物治疗的响应，所述方法包括步骤：
a)从对象获得体液、尤其血清的样品；
b)通过使用实施方案14-25中任一项的IL-18抗体或实施方案中任一项的IL-18BP作为捕获分子，对所述样品检验游离IL-18的存在和/或通过使用第一单克隆IL-18BP特异性捕获抗体和IL-18BP特异性检测抗体，对所述样品检验游离IL-18BP的存在，所述IL-18BP特异性检测抗体结合至与捕获抗体(尤其与IL-18BP的IL-18结合位点结合的所述抗体之一)不同的IL-18BP位点；
c)确定样品中游离IL-18和/或与捕获分子结合的游离IL-18BP的量；
d)将患有这种疾病的对象的样品中游离IL-18和/或游离IL-18BP的量与健康对象样品中的量比较。
59.一种用于以下的方法：诊断如实施方案1-13和26-43任一项中限定的疾病或病症、诊断如实施方案1-13和26-43任一项中限定的疾病或病症的素质、监测对象中最小残留疾病或预测对象对采用根据实施方案1-13和26-30的IL-18抑制物、根据实施方案31-43的IL-18BP或根据前述实施方案任一项的包含根据实施方案44-49的IL-18抑制物和可药用载体和/或赋形剂的药物组合物治疗的响应，所述方法包括步骤：
a)从对象获得体液、尤其痰和血清的样品；
b)通过使用实施方案14-25的IL-18抗体或IL-18BP作为捕获分子，对所述样品检验游离IL-18的存在和/或通过使用第一单克隆IL-18BP特异性捕获抗体和IL-18BP特异性检测抗体，对所述样品检验游离IL-18BP的存在，所述IL-18BP特异性检测抗体结合至与捕获抗体(尤其与IL-18BP的IL-18结合位点结合的所述IL-18BP特异性抗体之一)不同的IL-18BP位点；
c)通过使用不与IL-18BP的IL-18结合位点结合的第一IL-18BP特异性单克隆抗体和不与IL-18的IL-18BP结合位点结合的第二IL-18特异性抗体，对所述样品检验总IL-18和/或总IL-18BP的存在；
d)确定样品中游离IL-18和总IL-18的量和/或与捕获分子结合的游离IL-18BP和总IL-18BP的量；
e)将患有这种疾病的对象的样品中游离IL-18和/或总IL-18的量和/或游离IL-18BP和/或总IL-18BP的量与健康对象样品中的量比较。
60.前述实施方案任一项的用于诊断方法，其中患有所述疾病的对象、尤其患有所述疾病的人的分离血清中游离IL-18的量范围从5pg/mL至10000pg/mL，而健康对象血清、尤其健康人血清中游离IL-18的量是≤4pg/mL。
61.用于以下的生物标志物集合：诊断如实施方案1-13和26-43任一项中限定的疾病或病症、诊断如实施方案1-13和26-43任一项中限定的疾病或病症的素质或监测对象中最小残留疾病或预测对象对采用根据实施方案1-13和26-30的IL-18抑制物、根据实施方案31-43的IL-18BP或包含根据实施方案44-49的IL-18抑制物的药物组合物治疗的响应。
62.一种用于以下的方法：诊断如实施方案1-13和26-43任一项中限定的疾病或病症、诊断如实施方案1-13和26-43任一项中限定的疾病或病症的素质或监测对象中最小残留疾病、或预测对象对采用根据实施方案1-13和26-30的IL-18抑制物、根据实施方案31-43的IL-18BP或包含根据实施方案44-49的IL-18抑制物的药物组合物治疗的响应，所述方法包括步骤：
a)通过从所述对象取得体液样品，获得待检验对象的生物标志物谱；
b)获得健康参比群体的生物标志物谱；
c)从患有所述疾病或病症的群体获得生物标志物谱并且
d)将步骤a)中获得的生物标志物谱与步骤b)和步骤c)中获得的图谱比较。
63.药物试剂盒，以独立单位剂量形式包含根据实施方案1-13和26-30任一项的IL-18抑制物、根据实施方案31-43的IL-18BP或包含根据实施方案44-49的IL-18抑制物和可药用载体和/或赋形剂的本发明药物组合物，所述形式适于按有效量施用。
64.一种用于检测游离IL-18的诊断试剂盒，所述诊断试剂盒包含根据实施方案14-25任一项中的IL-18-特异性抗体作为捕获抗体或IL-18BP作为备选捕获分子，和根据实施方案14-25任一项中的第二IL-18特异性检测抗体或IL-18特异性抗体作为检测抗体及第二IL-18特异性捕获抗体，其中检测抗体与捕获分子结合不同的IL-18位点。
65.一种用于检测总IL-18或总IL-18BP的诊断试剂盒，所述诊断试剂盒包含不与IL-18BP的IL-18结合位点结合的第一IL-18BP特异性单克隆抗体和不与IL-18的IL-18BP结合位点结合的第二IL-18特异性抗体。
66.一种用于检测游离IL-18BP的诊断试剂盒，所述诊断试剂盒包含第一IL-18BP特异性单克隆捕获抗体和IL-18BP特异性检测抗体，其与捕获抗体结合不同的IL-18BP位点。
67.诊断试剂盒，包含实施方案64至66的全部诊断试剂盒。
方案：
1.用于治疗对象群体中IL-18相关疾病或病症的IL-18抑制物，与健康对照对象体液中的水平相比，所述对象群体经诊断在身体样品中、尤其在体液中具有异常的游离IL-18水平和/或异常的游离IL-18/IL-18BP比率。
2.用于根据方案1所述用途的IL-18抑制物，其中，体液内所述异常的游离IL-18水平超过健康对照对象体液中的水平5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、或多于100％。
3.用于根据前述方案任一项所述用途的IL-18抑制物，其中，待治疗的对象属于这样的对象的组，与健康对象体液中的水平相比，已经确定所述对象的组在身体样品中、尤其在选自支气管肺泡灌洗液(BALF)循环流体、分泌流体、活检及均化组织、尤其血清、尿、泪、唾液、胆汁、汗、呼出、呼气、痰、支气管肺泡液、皮脂、细胞分泌物、腺体分泌物、粘膜分泌物和组织分泌物的样品中具有升高的游离IL-18水平和/或异常的游离IL-18/IL-18BP(IL-18BP)比率。
4.用于根据方案2或3所述用途的IL-18抑制物，其中，血清内所述升高的游离IL-18水平是≥5pg/mL并且尤其多至10000pg/mL，而健康对象、尤其健康人的血清中游离IL-18的量是≤4pg/mL。
5.用于根据前述方案任一项所述用途的IL-18抑制物，其中所述IL-18相关疾病或病症是选自以下的一种：慢性阻塞性肺病(COPD)、输注相关性肺损伤、支气管肺发育不良(BPD)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、成人Still病、青少年Still病、间质性肺病(ILD)、特发性肺纤维化、囊性纤维化、肺动脉高血压、哮喘、支气管扩张症、心力衰竭、肌萎缩侧索硬化(ALS)、干眼病(DED)、角膜炎、角膜溃疡和磨损、角膜血管新生、病理性眼内新血管化、虹膜炎、青光眼、黄斑变性、
Figure BDA0003786898910001061
综合征、自身免疫性葡萄膜炎、
Figure BDA0003786898910001071
病、结膜炎、过敏性结膜炎、眼睑皮炎、2型糖尿病、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、脂肪性肝炎、实体器官和血液移植、局部缺血再灌注损伤、家族性地中海热、肿瘤坏死因子受体1相关的周期性综合征、cryopyrin相关的周期性发热综合征、高IgD综合征、痛风、Schnitzler综合征、韦格纳肉芽肿，又称作肉芽肿病伴多血管炎(GPA)、桥本甲状腺炎、Crohn病、溃疡性结肠炎、免疫球蛋白-4(IgG4)相关的疾病和干细胞疗法。
6.用于根据前述方案中任一项所述用途的IL-18抑制物，其中所述IL-18相关疾病或病症由吸烟或二手烟暴露、尤其烟草烟雾暴露引起。
7.用于根据前述方案中任一项所述用途的IL-18抑制物，其中所述IL-18相关疾病或病症由病毒性感染引起。
8.用于根据前述方案中任一项所述用途的IL-18抑制物，其中所述IL-18相关疾病或病症是IL-18引起的炎症的全身性表现和相关共病，所述相关共病选自气肿、组织炎症、组织破坏、肺切除、脉管系统消失、内皮细胞凋亡、粘膜化生、心脏肥大、肺组织中VEGF减少、肺血管损失、血管肌化、血管重塑、胶原蛋白沉积、肺中异常弹性蛋白层、纤维化气道重塑、气腔膨大、慢性气道和肺血管重塑和肺功能减低。
9.用于根据前述方案中任一项所述用途的IL-18抑制物，其中治疗包括预防、制止、缓和或逆转与所述疾病或病症相关的症状。
10.用于根据前述方案中任一项所述用途的IL-18抑制物，其中限制或抑制IL-18结合，尤其游离IL-18与IL-18R的结合。
11.用于根据方案10所述用途的IL-18抑制物，其中限制或抑制游离IL-18与IL-18Rα的结合。
12.用于根据前述方案中任一项所述用途的IL-18抑制物，其中调节、尤其抑制IL-18依赖性下游信号传导途径。
13.用于根据前述方案中任一项所述用途的IL-18抑制物，其中与未治疗的患有所述疾病或病症的对象相比，调节、尤其抑制增加的IFNγ、IL-13或IL-17A表达。
14.用于根据前述方案中任一项所述用途的IL-18抑制物，其中IL-18抑制物通过捕获并中和组织和循环中过量的游离IL-18，代偿IL-18/IL-18BP不平衡。
15.用于根据前述方案中任一项所述用途的IL-18抑制物，其中IL-18抑制物抑制嗜中性粒细胞向肺中浸润，尤其通过减轻肺气道中G-CSF释放。
16.用于根据前述方案中任一项所述用途的IL-18抑制物，用于治疗慢性阻塞性肺病(COPD)、心脏病、肌萎缩侧索硬化(ALS)、干眼病和/或II型糖尿病。
17.用于根据前述方案中任一项所述用途的IL-18抑制物，用于治疗慢性阻塞性肺病(COPD)。
18.用于根据前述方案中任一项所述用途的IL-18抑制物，用于治疗心脏病。
19.用于根据前述方案中任一项所述用途的IL-18抑制物，用于治疗肌萎缩侧索硬化(ALS)。
20.用于根据前述方案中任一项所述用途的IL-18抑制物，用于治疗干眼病。
21.用于根据前述方案中任一项所述用途的IL-18抑制物，用于治疗II型糖尿病。
22.用于根据前述方案中任一项所述用途的IL-18抑制物，其中所述疾病或病症由吸烟或二手烟暴露、尤其烟草烟雾暴露引起。
23.用于根据前述方案中任一项所述用途的IL-18抑制物，其中所述疾病或病症由病毒性感染引起。
24.用于根据前述方案中任一项所述用途的IL-18抑制物，其中所述疾病或病症是IL-18引起的炎症的全身性表现和相关共病，所述相关共病选自气肿、组织炎症、组织破坏、肺切除、脉管系统消失、粘膜化生、心脏肥大、肺组织中VEGF减少、肺血管损失、血管肌化、胶原蛋白沉积、肺中异常弹性蛋白层、纤维化气道重塑、气腔膨大、慢性气道和肺血管重塑和肺功能减低。
25.用于根据前述方案中任一项所述用途的IL-18抑制物，其中限制或抑制IL-18结合，尤其游离IL-18与IL-18R的结合，但尤其游离IL-18与IL-18Rα的结合。
26.用于根据前述方案中任一项所述用途的IL-18抑制物，其中IL-18抑制物减少IL-18与IL-18受体的结合、尤其与IL-18Rα的结合至少5％、尤其至少10％、尤其至少15％、尤其至少20％、尤其至少25％、尤其至少30％、尤其至少40％、尤其至少45％、尤其至少50％、尤其至少55％、尤其至少60％、尤其至少65％、尤其至少70％、尤其至少75％、尤其至少80％、尤其至少85％、尤其至少90％、尤其至少95％、尤其100％。
27.用于根据前述方案中任一项所述用途的IL-18抑制物，其中IL-18抑制物通过限制或阻止IL-18与IL-18受体(IL-18R)结合、尤其游离IL-18与IL-18Rα结合，中和游离IL-18。
28.用于根据前述方案中任一项所述用途的IL-18抑制物，其中抑制物是IL-18结合分子，尤其是特异性结合游离IL-18的IL-18结合分子、尤其是阻止游离IL-18与IL-18受体结合、尤其游离IL-18与IL-18Rα结合的IL-18结合分子。
29.用于根据前述方案中任一项所述用途的IL-18抑制物，其中IL-18结合分子是IL-18BP、尤其人IL-18BP(hIL-18BP)、尤其IL-18BP包括任何功能性等同物或其部分、尤其如SEQ ID NO:7中所示的IL-18BP。
30.根据方案28或29所述的用于前述方案中任一项用途的IL-18抑制物，所述抑制物是全长蛋白质或突变蛋白、功能性衍生物、功能性片段、生物活性肽、部分、环状排列衍生物、融合蛋白、同种型或其盐。
31.用于根据前述方案中任一项所述用途的IL-18抑制物，其中IL-18结合分子是阻止游离IL-18与IL-18受体结合、尤其游离IL-18与IL-18Rα结合的抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分、尤其游离IL-18特异性抗体、尤其拮抗性抗体。
32.根据方案31或32所述的用于前述方案中任一项用途的IL-18抑制物，其中IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，在IL-18BP的结合位点处或在IL-18BP结合位点的附近与IL-18结合，但是不与IL-18/IL-18BP复合物结合。
33.根据方案31或32所述的用于前述方案中任一项用途的IL-18抑制物，其中IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，是单克隆抗体或多克隆抗体。
34.根据方案31或32所述的用于前述方案中任一项用途的IL-18抑制物，其中IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，是嵌合抗体、单链抗体、双特异性抗体、类人猿化抗体、人抗体和人源化抗体。
35.根据方案31-34中任一项所述的用于前述方案中任一项用途的IL-18抑制物，其中IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，与人IL-18结合。
36.用于根据前述方案中任一项所述用途的IL-18抑制物，其中已经通过使用如方案28-35中任一项所限定的IL-18结合分子测定身体样品中、尤其体液中所述异常的游离IL-18水平。
37.用于治疗对象群体中IL-18相关疾病或病症的药物组合物，与健康对照对象体液中的水平相比，所述对象群体经诊断在体液中具有异常的游离IL-18水平和/或异常的游离IL-18/IL-18BP比率或具有形成如方案1-27中任一项所限定的这种疾病或病症的素质，其中所述组合物包含、尤其以预防和/或治疗有效量包含如前述方案中任一项所限定的IL-18抑制物、尤其如方案28-35中限定的IL-18抑制物。
38.根据方案37所述的用于治疗如方案1-27中任一项所限定的疾病或病症的药物组合物，其中所述组合物包含、尤其以预防和/或治疗有效量包含如方案29和30中任一项所限定的IL-18抑制物。
39.根据方案36所述的用于治疗如方案1-27中任一项所限定的疾病或病症的药物组合物，其中所述组合物包含、尤其以预防和/或治疗有效量包含如方案31-35中任一项所限定的IL-18抑制物。
40.根据方案37-39中任一项所述的用于治疗如方案1-27中任一项所限定的疾病或病症的药物组合物，其中所述组合物任选地还提供促炎细胞因子或其功能性片段的另一种抑制物，或诱导所述促炎细胞因子或其功能性片段的抑制物原位表达的调节因子、共治疗药如抗炎、支气管扩张、抗组胺、解充血药或镇咳药物物质。
41.根据方案37-40所述的用于治疗如方案1-27中任一项所限定的疾病或病症的药物组合物，包含可药用载体和/或赋形剂。
42.用于治疗如方案1-27中任一项所限定的疾病或病症的表达载体，所述表达载体包含根据方案28-35中任一项所述的IL-18抑制物的编码序列，当施用至患有如前述方案中限定的疾病或病症或具有形成这种疾病或病症的素质的对象时，所述表达载体导致IL-18抑制物原位表达。
43.根据方案42所述的用于治疗如方案1-27中任一项所限定的疾病或病症的表达载体，其中将所述表达载体单独或与根据方案28-35中任一项所述的IL-18抑制物，或根据方案37-41中任一项所述的药物组合物组合施用至患有这种疾病或病症或具有形成这种疾病或病症的素质的对象。
44.根据方案42-43中任一项所述的表达载体，用于治疗如方案1-27中任一项所限定的疾病或病症，所述表达载体包含根据方案29-30中任一项所述的IL-18BP的编码序列，当施用至患有如前述方案中限定的疾病或病症或具有形成这种疾病或病症的素质的对象时，所述表达载体导致IL-18BP原位表达。
45.根据方案28-35中任一项所述的IL-18抑制物、根据方案37-41中任一项所述的药物组合物，或根据方案42-44中任一项所述的表达载体，用于根据方案1-27中任一项所述的用途，包括向有需求的对象施用预防有效量和/或治疗有效量的所述IL-18抑制物、IL-18BP、药物组合物或表达载体，尤其通过全身性、鼻内、颊部、口腔、透粘膜、气管内、静脉内、皮下、尿道内、阴道内、舌下、支气管内、肺内、经皮或肌内施用法、尤其支气管-肺施用法施用。
46.IL-18抑制物、药物组合物或表达载体用于根据方案45所述的用途，其中所述对象是哺乳动物，尤其所述对象是人。
47.用于治疗对象群体中IL-18相关疾病或病症的方法，与健康对照对象体液中的水平相比，所述对象群体经诊断在体液中具有异常的游离IL-18水平和/或异常的游离IL-18/IL-18BP比率或具有形成这种疾病或病症的素质，所述方法包括向所述对象施用治疗有效量或预防有效量的如方案28-35中任一项所限定的IL-18抑制物、根据方案37-41中任一项所述的药物组合物，或根据方案42-44中任一项所述的表达载体，尤其通过全身性、鼻内、颊部、口腔、透粘膜、气管内、静脉内、皮下、尿道内、阴道内、舌下、支气管内、肺内、经皮或肌内施用法、尤其支气管-肺施用法施用。
48.在样品中或原位确定游离IL-18的量的方法，包括在样品中或原位检测如方案28中限定的IL-18结合分子、尤其如方案29-30中任一项所限定的IL-18BP或如方案31-35中任一项所限定的抗体与游离IL-18蛋白的特异性结合，包括步骤：
a)使疑似含有游离IL-18的样品或特定身体部分或身体区域与如方案28中限定的IL-18结合分子、尤其如方案29-30中任一项所限定的IL-18BP或如方案31-35中任一项所限定的抗体接触，其与游离IL-18特异性结合，但是不与复合物中结合的IL-18特异性结合，并且作为游离IL-18的捕获分子发挥作用；
b)允许IL-18结合分子、18BP或抗体与游离IL-18结合；
c)检测IL-18与IL-18结合分子、IL-18BP或抗体的结合并且确定样品中游离IL-18的量。
49.在患者中诊断IL-18相关疾病或病症、尤其如方案1-27中任一项所限定的IL-18相关疾病或病症的方法，包括在样品中或原位检测如方案28中限定的IL-18结合分子、尤其如方案29-30中任一项所限定的IL-18BP或如方案31-35中任一项所限定的抗体与游离IL-18蛋白的特异性结合，包括步骤：
a)使疑似含有游离IL-18的样品或特定身体部分或身体区域与如方案28中限定的IL-18结合分子、尤其如方案29-30中任一项所限定的IL-18BP或如方案31-35中任一项所限定的抗体接触，其与游离IL-18特异性结合，但是不与复合物中结合的IL-18特异性结合，并且作为游离IL-18的捕获分子发挥作用；
b)允许IL-18结合分子、IL-18BP或抗体与游离IL-18结合；
c)检测IL-18与IL-18结合分子、IL-18BP或抗体的结合并且确定样品中游离IL-18的量；
d)将患有如方案1-27中任一项所限定的疾病或病症的对象的样品中游离IL-18的量与健康对象样品中的量比较。
50.在患者中诊断IL-18相关疾病或病症素质、尤其如方案1-27中任一项所限定的IL-18相关疾病或病症素质的方法，包括在样品中或原位检测如方案28中限定的IL-18结合分子、尤其如方案29-30中任一项所限定的IL-18BP或如方案31-35中任一项所限定的抗体与游离IL-18蛋白的特异性结合，包括步骤：
a)使疑似含有游离IL-18的样品或特定身体部分或身体区域与如方案28中限定的IL-18结合分子、尤其如方案29-30中任一项所限定的IL-18BP或如方案31-35中任一项所限定的抗体接触，其与游离IL-18特异性结合，但是不与复合物中结合的IL-18特异性结合，并且作为游离IL-18的捕获分子发挥作用；
b)允许IL-18结合分子、IL-18BP或抗体与游离IL-18结合；
c)检测IL-18与IL-18结合分子、IL-18BP或抗体的结合并且确定样品中游离IL-18的量；
d)将患有如方案1-27中任一项所限定的疾病或病症的患者的样品中游离IL-18的量与健康患者样品中的量比较。
其中与从健康患者获得的正常对照值相比，样品中所述游离IL-18的量增加表示所述患者患有如方案1-27中任一项所限定的疾病或病症或处于形成这种疾病或病症的风险。
51.在用如方案28-35中任一项所限定的IL-18抑制物、根据方案37-41中任一项所述的药物组合物或根据方案42-44中任一项所述的表达载体治疗后监测患者中最小残留疾病的方法，其中所述方法包括：
a)使疑似含有游离IL-18的样品或特定身体部分或身体区域与如方案28中限定的IL-18结合分子、尤其如方案29-30中任一项所限定的IL-18BP或如方案31-35中任一项所限定的抗体接触，其与游离IL-18特异性结合，但是不与复合物中结合的IL-18特异性结合，并且作为游离IL-18的捕获分子发挥作用；
b)允许IL-18结合分子、IL-18BP或抗体与游离IL-18结合；
c)检测IL-18与IL-18结合分子、IL-18BP或抗体的结合并且确定样品中游离IL-18的量；
d)将患有如方案1-27中任一项所限定的疾病或病症的患者的样品中游离IL-18的量与健康患者样品中的量比较。
其中与从健康患者获得的正常对照值相比，样品中所述游离IL-18的量增加表示所述患者仍正在患有最小残留疾病。
52.用于预测患者对用根据方案28-35中任一项所述的IL-18抑制物、根据方案37-41中任一项所述的药物组合物或根据方案42-44中任一项所述的表达载体的治疗的响应的方法，其中所述方法包括：
a)使疑似含有游离IL-18的样品或特定身体部分或身体区域与如方案28中限定的IL-18结合分子、尤其如方案29-30中任一项所限定的IL-18BP或如方案31-35中任一项所限定的抗体接触，其与游离IL-18特异性结合，但是不与复合物中结合的IL-18特异性结合，并且作为游离IL-18的捕获分子发挥作用；
b)允许IL-18结合分子、IL-18BP或抗体与游离IL-18结合；
c)检测IL-18与IL-18结合分子、IL-18BP或抗体的结合并且确定样品中游离IL-18的量；
d)将患有如方案1-27中任一项所限定的疾病或病症的患者的样品中游离IL-18的量与健康患者样品中的量比较。
其中样品中所述游离IL-18的量减少表示所述患者响应于治疗的潜力高。
53.根据方案48至52中任一项所述的方法，包括额外步骤：在步骤(a)中使用与捕获分子结合不同的IL-18BP位点的IL-18BP特异性结合分子，尤其其中所述分子之一与IL-18BP的IL-18结合位点结合。
54.根据方案48至53中任一项所述的方法，包括通过以下方式确定样品中游离IL-18BP存在的额外步骤：在步骤(a)中使用IL-18BP特异性捕获分子和IL-18BP特异性检测分子，所述IL-18BP特异性检测分子与捕获分子结合不同的IL-18BP位点，特别地，其中所述IL-18BP特异性分子之一与IL-18BP的IL-18结合位点结合；在步骤c)中确定样品中游离IL-18和总IL-18的量以及游离IL-18BP和与捕获分子结合的总IL-18BP的量；和在步骤d)中将患有如方案1-27中任一项所限定的疾病或病症的患者的样品中游离IL-18和/或总IL-18的量以及游离和/或总IL-18BP的量与健康患者的样品中的量比较。
55.根据方案48-54中任一项所述的方法，其中所述捕获分子是如方案28中限定的IL-18结合分子。
56.根据方案48-54中任一项所述的方法，其中所述捕获分子是
a.如方案29-30中任一项所限定的IL-18BP，
b.如方案31-35中任一项所限定的游离IL-18特异性抗体。
57.根据方案48-56中任一项所述的方法，其中所述样品选自支气管肺泡灌洗液(BALF)循环流体、分泌流体、活检及均化组织、尤其血清、尿、泪、唾液、胆汁、汗、呼出或呼气、痰、支气管肺泡液、皮脂、细胞分泌物、腺体分泌物、粘膜分泌物或组织分泌物。
58.根据方案48-57中任一项所述的方法，其中患有所述疾病的对象、尤其患有所述疾病的人的分离的血清中游离IL-18的量是≥5pg/mL并且尤其多至10000pg/mL，而健康对象血清、尤其健康人血清中游离IL-18的量是≤4pg/mL。
59.用于根据方案48-58中任一项所述方法的生物标志物的组，用于进一步指明如方案1-27中任一项所限定的疾病或病症，用于诊断如方案1-27中任一项所限定疾病或病症的素质，用于监测对象中的最小残留疾病，或用于预测对象对采用根据方案28-35中任一项所述的IL-18抑制物、根据方案37-41中任一项所述的药物组合物或根据方案42-44中任一项所述的表达载体的治疗的响应，包括确定生物标志物谱并且使获得的谱与特定疾病或病症相关联。
60.用于根据方案59所述用途的生物标志物的组，其中所述方法包括步骤：
i)通过从所述对象取得体液样品，获得待检验对象的生物标志物谱；
j)获得健康参比群体的生物标志物谱；
k)从患有所述疾病或病症的群体获得生物标志物谱并且
l)将步骤a)中获得的生物标志物谱与步骤b)和步骤c)中获得的谱比较。
61.药物试剂盒，以独立单位剂量形式包含根据方案28-35中任一项所述的IL-18抑制物、根据方案37-41中任一项所述的药物组合物或根据方案42-44中任一项所述的表达载体和可药用载体和/或赋形剂，所述形式适于以有效量施用。
62.用于检测游离IL-18的诊断试剂盒，包含如方案28中限定的IL-18结合分子、如方案29-30中任一项所限定的IL-18BP或如方案31-35中任一项所限定的抗体作为捕获分子，和第二IL-18特异性结合分子作为检测分子和，任选地，第二IL-18特异性捕获分子，其中检测分子与捕获分子结合不同的IL-18位点。
63.用于检测总IL-18或总IL-18BP的诊断试剂盒，包含不与IL-18BP的IL-18结合位点结合的第一IL-18BP特异性结合分子，和不与IL-18的IL-18BP结合位点结合的第二IL-18特异性结合分子。
64.用于检测游离IL-18BP的诊断试剂盒，包含第一IL-18BP特异性结合分子作为捕获分子和第二IL-18特异性结合分子作为检测分子，其中所述检测分子与捕获分子结合不同的IL-18BP位点。
65.诊断试剂盒，其并入根据方案62至64所述的结合分子。
66.根据方案61-65中任一项所述的诊断试剂盒，用于根据方案46-58中任一项所述的方法。
67.IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，所述抗体或其部分在IL-18BP的结合位点处或在IL-18BP结合位点的附近与IL-18结合，但是不与IL-18/IL-18BP复合物结合。
68.根据方案67所述的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，其中所述抗体或其部分空间上阻碍或防止IL-18BP与IL-18结合。
69.根据方案67或68所述的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，其中所述抗体或其部分与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3中所述序列群组的序列内所包含的单个表位、两个表位的组合或3个表位的组合特异性结合。
70.根据方案69所述的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，其中所述表位具有与选自SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6中所述序列群组的序列具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％序列同一性的序列。
71.根据方案70所述的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，其中所述表位选自SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6。
72.根据前述方案中任一项所述的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，其中所述抗体或其部份是单克隆抗体或多克隆抗体。
73.根据前述方案中任一项所述的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，其中所述抗体或其部份是嵌合抗体、单链抗体、双特异性抗体、类人猿化抗体、人抗体和人源化抗体。
74.根据前述方案中任一项所述的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，其中所述抗体或其部份与人IL-18结合。
75.根据前述方案中任一项所述的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，其中IL-18与IL-18受体的结合、尤其与IL-18Rα的结合减少至少5％、尤其至少10％、尤其至少15％、尤其至少20％、尤其至少25％、尤其至少30％、尤其至少40％、尤其至少45％、尤其至少50％、尤其至少55％、尤其至少60％、尤其至少65％、尤其至少70％、尤其至少75％、尤其至少80％、尤其至少85％、尤其至少90％、尤其至少95％、尤其100％。
76.根据前述方案中任一项所述的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，其中所述抗体或其部份通过限制或阻止IL-18与IL-18受体(IL-18R)结合、尤其游离IL-18与IL-18Rα结合，中和游离IL-18。
77.根据前述方案中任一项所述的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，其中所述抗体或其部分
g)与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3中所述序列群组的序列内所包含的单个表位、两个表位的组合或3个表位的组合特异性结合；和/或
h)特异性结合与SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6中所述的序列具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的表位；并且
i)在IL-18BP的结合位点处或在IL-18BP结合位点的附近与IL-18特异性结合；并且
j)与游离IL-18蛋白、但不与IL-18/IL-18BP复合物特异性结合；并且
k)空间上阻碍IL-18BP与IL-18结合；以及
l)减少IL-18与IL-18受体的结合、尤其与IL-18Rα的结合至少5％、尤其至少10％、尤其至少15％、尤其至少20％、尤其至少25％、尤其至少30％、尤其至少40％、尤其至少45％、尤其至少50％、尤其至少55％、尤其至少60％、尤其至少65％、尤其至少70％、尤其至少75％、尤其至少80％、尤其至少85％、尤其至少90％、尤其至少95％、尤其100％。
78.根据方案67至77中任一项所述的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分或其抗原结合部分，
a.分别包含如SEQ ID NO:9中所示的重链可变区的至少一个、至少两个或全部三个互补决定区(CDR)，和/或分别包含如SEQ ID NO:10中所示的轻链可变区的至少一个、至少两个或全部三个互补决定区(CDR)，包括其变体；或
b.分别包含如SEQ ID NO:11中所示的重链可变区的至少一个、至少两个或全部三个互补决定区(CDR)，和/或分别包含如SEQ ID NO:12中所示的轻链可变区的至少一个、至少两个或全部三个互补决定区(CDR)，包括其变体；或
c.分别包含如SEQ ID NO:13中所示的重链可变区的至少一个、至少两个或全部三个互补决定区(CDR)，和/或分别包含如SEQ ID NO:14中所示的轻链可变区的至少一个、至少两个或全部三个互补决定区(CDR)，包括其变体；或
d.分别包含如SEQ ID NO:15中所示的重链可变区的至少一个、至少两个或全部三个互补决定区(CDR)，和/或分别包含如SEQ ID NO:16中所示的轻链可变区的至少一个、至少两个或全部三个互补决定区(CDR)，包括其变体；或
e.分别包含如SEQ ID NO:15中所示的重链可变区的至少一个、至少两个或全部三个互补决定区(CDR)，和/或分别包含如SEQ ID NO:17中所示的轻链可变区的至少一个、至少两个或全部三个互补决定区(CDR)，包括其变体；或
f.分别包含如SEQ ID NO:18中所示的重链可变区的至少一个、至少两个或全部三个互补决定区(CDR)，和/或分别包含如SEQ ID NO:19中所示的轻链可变区的至少一个、至少两个或全部三个互补决定区(CDR)，包括其变体；或
g.分别包含如SEQ ID NO:20中所示的重链可变区的至少一个、至少两个或全部三个互补决定区(CDR)，和/或分别包含如SEQ ID NO:22中所示的轻链可变区的至少一个、至少两个或全部三个互补决定区(CDR)，包括其变体；或
h.分别包含如SEQ ID NO:21中所示的重链可变区的至少一个、至少两个或全部三个互补决定区(CDR)，和/或分别包含如SEQ ID NO:22中所示的轻链可变区的至少一个、至少两个或全部三个互补决定区(CDR)，包括其变体；或
i.分别包含如SEQ ID NO:23中所示的重链可变区的至少一个、至少两个或全部三个互补决定区(CDR)，和/或分别包含如SEQ ID NO:24中所示的轻链可变区的至少一个、至少两个或全部三个互补决定区(CDR)，包括其变体；或
j.分别包含如SEQ ID NO:25中所示的重链可变区的至少一个、至少两个或全部三个互补决定区(CDR)，和/或分别包含如SEQ ID NO:26中所示的轻链可变区的至少一个、至少两个或全部三个互补决定区(CDR)，包括其变体；
其中所述抗体、等同抗体或其抗原结合部分结合游离IL-18蛋白，尤其在IL-18BP的结合位点处或在IL-18BP结合位点的附近，但是不结合IL-18/IL-18BP复合物。
79.根据方案78所述的IL-18特异性抗体，包含轻链可变区和重链可变区的全部6个CDR。
80.根据方案78和79中任一项所述的IL-18特异性抗体，其中所述抗体包含
a.分别具有如SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28和SEQ ID NO:29中所示序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；和分别具有如SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:32中所示序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；或
b.分别具有如SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34和SEQ ID NO:35中所示序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；和分别具有如SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38中所示序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；或
c.分别具有如SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:40和SEQ ID NO:41中所示序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；和分别具有如SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43和SEQ ID NO:44中所示序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；或
d.分别具有如SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46和SEQ ID NO:47中所示序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；和分别具有如SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:50中所示序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；或
e.分别具有如SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46和SEQ ID NO:47中所示序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；和分别具有如SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:53中所示序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；或
f.分别具有如SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55和SEQ ID NO:56中所示序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；和分别具有如SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58和SEQ ID NO:59中所示序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；或
g.分别具有如SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61和SEQ ID NO:62中所示序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；和分别具有如SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67和SEQ ID NO:68中所示序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；或
h.分别具有如SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64和SEQ ID NO:65中所示序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；和分别具有如SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67和SEQ ID NO:68中所示序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；或
i.分别具有如SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70和SEQ ID NO:71中所示序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；和分别具有如SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:73和SEQ ID NO:74中所示序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；或
j.分别具有如SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:78和SEQ ID NO:77中所示序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；和分别具有如SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:79和SEQ ID NO:80中所示序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3。
81.根据前述方案中任一项所述的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分或其抗原结合部分，包含
a.分别与SEQ ID NO:10、12、14、16、17、19、22、24和26中所示的序列具有至少75％、80％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％序列同一性的轻链可变区，和/或
分别与SEQ ID NO:9、11、13、15、18、20、21、23,和25中所示的序列具有至少75％、80％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％序列同一性的重链可变区。
82.根据方案67至81中任一项所述的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分或其抗原结合部分，
a.分别包含如SEQ ID NO:9中所示的重链可变区，和/或分别包含如SEQ ID NO:10中所示的轻链可变区，包括其变体；或
b.分别包含如SEQ ID NO:11中所示的重链可变区，和/或分别包含如SEQ ID NO:12中所示的轻链可变区，包括其变体；或
c.分别包含如SEQ ID NO:13中所示的重链可变区，和/或分别包含如SEQ ID NO:14中所示的轻链可变区，包括其变体；或
d.分别包含如SEQ ID NO:15中所示的重链可变区，和/或分别包含如SEQ ID NO:16中所示的轻链可变区，包括其变体；或
e.分别包含如SEQ ID NO:15中所示的重链可变区，和/或分别包含如SEQ ID NO:17中所示的轻链可变区，包括其变体；或
f.分别包含如SEQ ID NO:18中所示的重链可变区，和/或分别包含如SEQ ID NO:19中所示的轻链可变区，包括其变体；或
g.分别包含如SEQ ID NO:20中所示的重链可变区，和/或分别包含如SEQ ID NO:22中所示的轻链可变区，包括其变体；或
h.分别包含如SEQ ID NO:21中所示的重链可变区，和/或分别包含如SEQ ID NO:22中所示的轻链可变区，包括其变体；或
i.分别包含如SEQ ID NO:23中所示的重链可变区，和/或分别包含如SEQ ID NO:24中所示的轻链可变区，包括其变体；或
j.分别包含如SEQ ID NO:25中所示的重链可变区，和/或分别包含如SEQ ID NO:26中所示的轻链可变区，包括其变体；或
其中所述抗体、等同抗体或其抗原结合部分结合游离IL-18蛋白，尤其在IL-18BP的结合位点处或在IL-18BP结合位点的附近，但是不结合IL-18/IL-18BP复合物。
83.根据方案67-82中任一项所述的IL-18特异性抗体，其为单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、双特异性或双有效抗体、类人猿化抗体、人抗体和人源化抗体
84.根据方案67-82所述的IL-18特异性抗体，其是人抗体或人源化抗体。
85.根据方案67至84中任一项所述的IL-18特异性抗体，包括任何功能性等同抗体或其部分，用于治疗对象群体中IL-18相关疾病或病症，与健康对照对象体液中的水平相比，所述对象群体经诊断在体液中具有异常的游离IL-18水平和/或异常的游离IL-18/IL-18BP比率，或具有形成这种疾病或病症的素质。
86.根据方案85所述的IL-18特异性抗体，用于治疗根据方案2-27中任一项所述的IL-18相关疾病或病症。
87.用于根据前述方案中任一项所述用途的IL-18抑制物，其中已经通过使用如方案48-58中任一项所述的方法测定身体样品中、尤其体液中异常的游离IL-18水平。
Figure IDA0003786898950000011
Figure IDA0003786898950000021
Figure IDA0003786898950000031
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Claims (38)

1.IL-18结合蛋白(IL-18BP)在制备用于在样品中确定游离IL-18的量的试剂盒中的用途，所述试剂盒包括在样品中检测IL-18结合蛋白(IL-18BP)与游离IL-18蛋白的特异性结合，包括步骤：
a)使疑似含有游离IL-18的样品与IL-18结合蛋白(IL-18BP)接触，其与游离IL-18特异性结合，但是不与复合物中结合的IL-18特异性结合，并且作为游离IL-18的捕获分子发挥作用；
b)允许IL-18结合蛋白(IL-18BP)与游离IL-18结合；
c)检测IL-18与IL-18结合蛋白(IL-18BP)的结合并且确定样品中游离IL-18的量；
其中所述IL-18结合蛋白是如SEQ ID NO:7所示的IL-18BP或其功能性片段。
2.如SEQ ID NO:7所示的IL-18结合蛋白(IL-18BP)或其功能性片段用于制备药物中的用途，所述药物用于治疗对象群体中IL-18相关疾病或病症，与健康对照对象身体样品中的水平相比，所述对象群体经权利要求1所述的方法诊断在身体样品中具有异常的游离IL-18水平和/或异常的游离IL-18/IL-18BP比率，包括向需要其的对象施用预防和/或治疗有效量的所述IL-18BP。
3.权利要求2的用途，其中，待治疗的对象属于这样的对象的组，与健康对象体液中的水平相比，已经确定所述对象的组在身体样品中具有升高的游离IL-18水平和/或异常的游离IL-18/IL-18BP(IL-18BP)比率，所述样品选自支气管肺泡灌洗液(BALF)循环流体、分泌流体、活检及均化组织、血清、尿、泪、唾液、胆汁、汗、呼出、呼气、痰、支气管肺泡液、皮脂、细胞分泌物、腺体分泌物、粘膜分泌物和组织分泌物。
4.权利要求3的用途，其中，血清内所述升高的游离IL-18水平是≥5pg/mL并且尤其多至10000pg/mL，而健康对象的血清中游离IL-18的量是≤4pg/mL。
5.权利要求4的用途，其中所述对象是人。
6.权利要求2-5中任一项的用途，其中所述IL-18相关疾病或病症是选自以下的一种：慢性阻塞性肺病(COPD)、输注相关性肺损伤、支气管肺发育不良(BPD)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、成人Still病、青少年Still病、间质性肺病(ILD)、特发性肺纤维化、囊性纤维化、肺动脉高血压、哮喘、支气管扩张症、心力衰竭、肌萎缩侧索硬化(ALS)、干眼病(DED)、角膜炎、角膜溃疡和磨损、角膜血管新生、病理性眼内新血管化、虹膜炎、青光眼、黄斑变性、
Figure FDA0003786898900000021
综合征、自身免疫性葡萄膜炎、
Figure FDA0003786898900000022
病、结膜炎、过敏性结膜炎、眼睑皮炎、2型糖尿病、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、脂肪性肝炎、实体器官和血液移植、局部缺血再灌注损伤、家族性地中海热、肿瘤坏死因子受体1相关的周期性综合征、cryopyrin相关的周期性发热综合征、高IgD综合征、痛风、Schnitzler综合征、韦格纳肉芽肿，又称作肉芽肿病伴多血管炎(GPA)、桥本甲状腺炎、Crohn病、溃疡性结肠炎、免疫球蛋白-4(IgG4)相关的疾病和干细胞疗法。
7.权利要求2-5中任一项的用途，其中所述IL-18相关疾病或病症由吸烟或二手烟暴露引起。
8.权利要求7的用途，其中所述烟暴露是烟草烟雾暴露。
9.权利要求2-5中任一项的用途，其中所述IL-18相关疾病或病症由病毒性感染引起。
10.权利要求2-5中任一项的用途，其中所述IL-18相关疾病或病症是IL-18引起的炎症的全身性表现和相关共病，所述相关共病选自气肿、组织炎症、组织破坏、肺切除、脉管系统消失、内皮细胞凋亡、粘膜化生、心脏肥大、肺组织中VEGF减少、肺血管损失、血管肌化、血管重塑、胶原蛋白沉积、肺中异常弹性蛋白层、纤维化气道重塑、气腔膨大、慢性气道和肺血管重塑和肺功能减低。
11.权利要求2-5中任一项的用途，其中治疗包括预防、制止、缓和或逆转与所述疾病或病症相关的症状。
12.权利要求2-4中任一项的用途，其中调节或抑制IL-18依赖性下游信号传导途径。
13.权利要求2-4中任一项的用途，其中与未治疗的患有所述疾病或病症的对象相比，调节或抑制增加的IFNγ、IL-13或IL-17A表达。
14.权利要求2-4中任一项的用途，其中IL-18BP通过捕获并中和组织和循环中过量的游离IL-18，代偿IL-18/IL-18BP不平衡。
15.权利要求2-4中任一项的用途，其中IL-18抑制物抑制嗜中性粒细胞向肺中浸润，尤其通过减轻肺气道中G-CSF释放。
16.权利要求2-4中任一项的用途，用于治疗慢性阻塞性肺病(COPD)。
17.权利要求2-4中任一项的用途，用于治疗心脏病。
18.权利要求2-4中任一项的用途，用于治疗肌萎缩侧索硬化(ALS)。
19.权利要求2-4中任一项的用途，用于治疗干眼病。
20.权利要求2-4中任一项的用途，用于治疗II型糖尿病。
21.权利要求2-4中任一项的用途，其中IL-18BP是人IL-18BP(hIL-18BP)。
22.权利要求21的用途，其中IL-18BP具有如SEQ ID NO:7中所示的序列。
23.根据权利要求22的用途，其中所述IL-18BP是全长蛋白质或突变蛋白、功能性衍生物、功能性片段、生物活性肽、部分、环状排列衍生物、融合蛋白、同种型或其盐。
24.权利要求2-4中任一项的用途，其中所述组合物任选地还提供促炎细胞因子或其功能性片段的另一种抑制物，或诱导所述促炎细胞因子或其功能性片段的抑制物原位表达的调节因子、共治疗药如抗炎、支气管扩张、抗组胺、解充血药或镇咳药物物质。
25.权利要求2-4中任一项的用途，其中所述药物包含药物组合物，所述药物组合物包含IL-18BP和可药用载体和/或赋形剂。
26.权利要求2-4中任一项的用途，其中所述药物包含药物组合物，，所述药物组合物包含表达载体，其包含IL-18BP的编码序列，当施用至患有如权利要求8-12中任一项限定的疾病或病症或具有形成这种疾病或病症的素质的对象时，所述表达载体导致IL-18BP原位表达。
27.权利要求2-4中任一项的用途，其中施用是全身性、鼻内、颊部、口腔、透粘膜、气管内、静脉内、皮下、尿道内、阴道内、舌下、支气管内、肺内、经皮或肌内施用法、或支气管-肺施用法施用。
28.如SEQ ID NO:7所示的IL-18BP或其功能性片段用于制备诊断试剂盒的用途，所述试剂盒用于在样品中或原位确定游离IL-18的量，包括在样品中或原位检测如IL-18BP与游离IL-18蛋白的特异性结合，包括步骤：
a)使疑似含有游离IL-18的样品或特定身体部分或身体区域与IL-18BP接触，其与游离IL-18特异性结合，但是不与复合物中结合的IL-18特异性结合，并且作为游离IL-18的捕获分子发挥作用；
b)允许IL-18BP与游离IL-18结合；
c)检测IL-18与IL-18BP的结合并且确定样品中游离IL-18的量。
29.如SEQ ID NO:7所示的IL-18BP或其功能性片段用于制备诊断试剂盒的用途，所述试剂盒用于在患者中诊断IL-18相关疾病或病症，包括在样品中或原位检测IL-18BP与游离IL-18蛋白的特异性结合，包括步骤：
a)使疑似含有游离IL-18的样品或特定身体部分或身体区域与IL-18BP接触，其与游离IL-18特异性结合，但是不与复合物中结合的IL-18特异性结合，并且作为游离IL-18的捕获分子发挥作用；
b)允许IL-18BP与游离IL-18结合；
c)检测IL-18与IL-18BP的结合并且确定样品中游离IL-18的量；
d)将患有IL-18相关的疾病或病症的对象的样品中游离IL-18的量与健康对象样品中的量比较。
30.如SEQ ID NO:7所示的IL-18BP或其功能性片段用于制备诊断试剂盒的用途，所述试剂盒用于在患者中诊断IL-18相关疾病或病症素质，包括在样品中或原位检测IL-18BP与游离IL-18蛋白的特异性结合，包括步骤：
a)使疑似含有游离IL-18的样品或特定身体部分或身体区域与IL-18BP接触，其与游离IL-18特异性结合，但是不与复合物中结合的IL-18特异性结合，并且作为游离IL-18的捕获分子发挥作用；
b)允许IL-18BP与游离IL-18结合；
c)检测IL-18与IL-18BP的结合并且确定样品中游离IL-18的量；
d)将患有IL-18相关的疾病或病症的患者的样品中游离IL-18的量与健康对象样品中的量比较。
其中与从健康对象获得的正常对照值相比，样品中所述游离IL-18的量增加表示所述患者患有IL-18相关的疾病或病症或处于形成这种疾病或病症的风险。
31.如SEQ ID NO:7所示的IL-18BP或其功能性片段用于制备诊断试剂盒的用途，所述试剂盒用于在包含IL-18BP的药物或如权利要求30或31所定义的药物组合物治疗后监测患有IL-18相关疾病或病症的患者中最小残留疾病的方法，其中所述方法包括：
a)使疑似含有游离IL-18的样品或特定身体部分或身体区域与IL-18BP接触，其与游离IL-18特异性结合，但是不与复合物中结合的IL-18特异性结合，并且作为游离IL-18的捕获分子发挥作用；
b)允许IL-18BP与游离IL-18结合；
c)检测IL-18与IL-18BP的结合并且确定样品中游离IL-18的量；
d)将患有IL-18相关的疾病或病症的患者的样品中游离IL-18的量与健康对象样品中的量比较。
其中与从健康对象获得的正常对照值相比，样品中所述游离IL-18的量增加表示所述患者仍正在患有最小残留疾病。
32.如SEQ ID NO:7所示的IL-18BP或其功能性片段用于制备诊断试剂盒的用途，所述试剂盒用于预测患有IL-18相关疾病或病症的患者对用包含IL-18BP的药物或如权利要求30或31所定义的药物组合物的治疗的响应的方法，其中所述方法包括：
a)使疑似含有游离IL-18的样品或特定身体部分或身体区域与IL-18BP接触，其与游离IL-18特异性结合，但是不与复合物中结合的IL-18特异性结合，并且作为游离IL-18的捕获分子发挥作用；
b)允许IL-18BP与游离IL-18结合；
c)检测IL-18与IL-18BP的结合并且确定样品中游离IL-18的量；
d)将患有IL-18相关的疾病或病症的患者的样品中游离IL-18的量与健康对象样品中的量比较。
其中样品中所述游离IL-18的量减少表示所述患者响应于治疗的潜力高。
33.根据权利要求28-32中任一项所述的用途，包括额外步骤：在步骤(a)中使用与捕获分子结合不同的IL-18BP位点的IL-18BP特异性结合分子，尤其其中所述分子之一与IL-18BP的IL-18结合位点结合。
34.根据权利要求28-32中任一项所述的用途，包括通过以下方式确定样品中游离IL-18BP存在的额外步骤：在步骤(a)中使用IL-18BP特异性捕获分子和IL-18BP特异性检测分子，所述IL-18BP特异性检测分子与捕获分子结合不同的IL-18BP位点，其中所述IL-18BP特异性分子之一与IL-18BP的IL-18结合位点结合；在步骤c)中确定样品中游离IL-18和总IL-18的量以及游离IL-18BP和与捕获分子结合的总IL-18BP的量；和在步骤d)中将患有IL-18相关的疾病或病症的患者的样品中游离IL-18和/或总IL-18的量以及游离和/或总IL-18BP的量与健康对象的样品中的量比较。
35.根据权利要求28-32中任一项所述的用途，其中所述样品选自支气管肺泡灌洗液(BALF)循环流体、分泌流体、活检及均化组织、尤其血清、尿、泪、唾液、胆汁、汗、呼出或呼气、痰、支气管肺泡液、皮脂、细胞分泌物、腺体分泌物、粘膜分泌物或组织分泌物。
36.用于检测游离IL-18的诊断试剂盒，包含如SEQ ID NO:7所示的IL-18BP或其功能性片段作为捕获分子，和第二IL-18特异性结合分子作为检测分子和，任选地，第二IL-18特异性捕获分子，其中检测分子与捕获分子结合不同的IL-18位点。
37.用于检测游离IL-18BP的诊断试剂盒，包含如SEQ ID NO:7所示的IL-18BP或其功能性片段作为捕获分子和第二IL-18特异性结合分子作为检测分子，其中所述检测分子与捕获分子结合不同的IL-18BP位点。
38.根据权利要求36或37所述的诊断试剂盒，用于根据权利要求28-32中任一项所述的方法。
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