BR112016004772B1 - Método para determinação da quantidade de il-18 livre em uma amostra ou in situ, uso de um inibidor de il-18, e, kit de diagnóstico para detectar il-18 livre - Google Patents

Abstract

MÉTODO PARA DETERMINAÇÃO DA QUANTIDADE DE IL-18 LIVRE EM UMA AMOSTRA OU IN SITU, USO DE UM INIBIDOR DE IL-18, E, KIT DE DIAGNÓSTICO PARA DETECTAR IL-18 LIVRE. A presente invenção provê meios e métodos para tratar doenças e distúrbios associados à interleucina 18 (IL-18). Em particular, a presente invenção descreve anticorpos específicos para IL-18 livre e Proteína de Ligação à IL-18 (IL-18BP) para uso em tais tratamentos e para o diagnóstico das indicações.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO

[001] A presente invenção provê meios e métodos para tratar doenças e distúrbios associados à interleucina 10 (IL-18). Em particular, a presente invenção descreve anticorpos específicos para IL-18 livre e proteína de ligação à IL-18 (IL-18BP) para uso em tais tratamentos para o diagnóstico das indicações.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

[002] Interleucina-18 (IL-18), também conhecida como fator que induz interferon gama é uma citocina, que é produzida por macrófagos ativados, células de Kupffer e outras células. IL-18 se liga ao receptor de IL- 18 e induz imunidade mediada por célula. Defeitos (por exemplo, knock-out) do receptor de citocina IL-18 ou citocina IL-18 levam à atividade das células exterminadoras naturais (NK) e respostas de TH1 prejudicadas. Além de seu papel fisiológico, IL-18 também pode induzir distúrbios inflamatórios severos. Para o propósito de diagnóstico precoce de tais distúrbios, desta forma, seria necessário quantificar os níveis de IL-18 livre em fluidos corporais de um indivíduo, que se espera ter um distúrbio como este.

[003] Entretanto, atualmente, a quantificação de níveis de IL-18 em fluidos corporais é normalmente realizada usando ensaios ELISA, que compreendem anticorpos que são não específicos para a detecção de IL-18 Segue a página 2/148 livre. O resultado alcançado pelos ensaios ELISA é limitado pela especificidade do anticorpo primário usado, que se liga ao antígeno alvo. Até hoje é meramente possível detectar níveis de IL-18 totais usando os anticorpos comercialmente disponíveis, mas nenhum dos anticorpos para IL- 18 livre são conhecidos até agora. A detecção de IL-18 total é inadequada para a estimativa de Níveis de IL-18 livre, uma vez que IL-18 ligada em um complexo, por exemplo, ligada à sua proteína de ligação à IL-18 antagonista natural (IL-18BP) tem uma afinidade reduzida para receptor de IL-18. Adicionalmente, sabe-se que níveis de IL-18 aumentados frequentemente são associados com níveis de IL-18BP elevados.

[004] Em virtude das razões descritas anteriormente, a determinação de IL-18 total, é insuficiente preparar um diagnóstico adequado de doenças associadas à IL-18. Quer dizer, de maneira a ser capaz de estimar os níveis de IL-18 livre em fluidos corporais de um indivíduo e fazer um diagnóstico adequado da doença associada à IL-18, um meio de detecção seria requerido que, especificamente, se liga à IL-18 livre, mas não à IL-18 ligada em um complexo. Desta maneira, atualmente não existe nenhum tratamento efetivo para doenças ou distúrbios associados à IL-18.

[005] A presente invenção agora provê tais meios de detecção na forma de uma molécula de ligação à IL-18, particularmente uma proteína de ligação à IL-18 (IL-18BP) ou um anticorpo, que especificamente se liga à IL- 18 livre, mas não à IL-18 ligada em um complexo. Portanto, a presente invenção satisfaz a necessidade de um meio adequado para a detecção de IL- 18 livre e para o diagnóstico de doenças ou distúrbios, que são associados com IL-18 livre nos fluidos corporais.

[006] Isto abre as portas para uma abordagem de medicina personalizada eficiente. Em particular, agora é possível pela primeira vez, identificar a população de pacientes que sofrem das doenças ou distúrbios que são associados com IL-18 livre nos tecidos corporais, mas particularmente nos fluidos corporais e efetivamente tratar os ditos pacientes por administração de moléculas de ligação que especificamente se ligam à IL-18 livre.

[007] A presente invenção, assim, adicionalmente provê meios terapêuticos efetivos para o tratamento e prevenção de doenças ou distúrbios associados à IL-18 na população de pacientes que sofrem de doenças ou distúrbios que são associados com IL-18 livre nos tecidos corporais, mas particularmente nos fluidos corporais. A presente invenção também satisfaz a necessidade de um tratamento efetivo de doenças ou distúrbios que são associados com IL-18 livre nos tecidos corporais, particularmente nos fluidos corporais provendo moléculas de ligação à IL-18, particularmente (1) IL- 18BP, e/ou (2) anticorpos, que são específicos para IL-18 livre e não reagem cruzado com IL-18 ligada em um complexo.

[008] As moléculas de ligação à IL-18, mas particularmente a IL- 18BP e os anticorpos específicos para IL-18, de acordo com a presente invenção, são capazes de reduzir e/ou anular a ligação de IL-18 livre ao seu receptor e prover benefícios terapêuticos ao paciente que sofre de uma doença ou distúrbio associada à IL-18.

[009] Recentes investigações não clínicas e clínicas definiram um papel proeminente da interleucina 18 de citocina pró-inflamatória (IL-18) na patogênese de doença pulmonar obstrutiva crônica e sugerem que IL-18 age como o regulador mestre de processos destrutivos e de remodelamento.

[0010] Doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), também conhecida como doença do pulmão obstrutiva crônica (COLD), doença das vias aéreas obstrutiva crônica (COAD), limitação do fluxo de ar crônica (CAL) e doença respiratória obstrutiva crônica (CORD), é a ocorrência de bronquite crônica ou enfisema, um par de doenças coexistentes comuns dos pulmões em que as vias aéreas se estreitam com o tempo. Isto leva ao fluxo de ar limitado para o pulmão e dele, que é considerado como não completamente reversível, mas fica progressivamente pior com o tempo. Tabagismo é responsável por 90% de COPD na Europa e Estados Unidos. Embora nem todos os fumantes de tabaco desenvolvam COPD, estima-se que 20% desenvolverão. Fumantes com COPD têm maiores taxas de morte que não fumantes com COPD. Eles também têm sintomas respiratórios mais frequentes (tosse, encurtamento da respiração, etc.) e mais deterioramento na função do pulmão que não fumantes. Outros fatores de risco são, por exemplo, suscetibilidade genética (por exemplo, deficiência de α1-anti- tripsina, bem como regiões no cromossomo 4 perto de HHIP e em FAM13A e no cromossomo 15 em CHRNA e IREB2), tuberculose prévia, poluição do ar, exposição ocupacional a poeiras e vapores (partículas suspensas no ar), exposição ao fumo passivo e inalação de fumo de biomassa. COPD é composto principalmente de duas doenças relacionadas: bronquite crônica e enfisema. Bronquite crônica é a inflamação e eventual cicatrização do revestimento dos tubos brônquicos. Quando os brônquios são inflamados e/ou infectados, menos ar é capaz de fluir para os pulmões e deles e um muco ou catarro pesado é expelido com a tosse. Enfisema começa com a destruição dos alvéolos (sacos de ar nos pulmões onde oxigênio do ar é trocado por dióxido de carbono no sangue) devido, em parte, a uma resposta inflamatória anormal do pulmão às partículas ou gases nocivos, sobretudo fumo de tabaco. As paredes dos sacos de ar são finas e frágeis. Dano nos sacos de ar é irreversível e resulta em “furos” permanentes nos tecidos dos pulmões inferiores. A medida em que os sacos de ar são destruídos, os pulmões são capazes de transferir menos e menos oxigênio para a corrente sanguínea, causando encurtamento da respiração. Os pulmões também perdem sua elasticidade, que é importante para manter as vias aéreas abertas. Como um resultado, o paciente enfrenta maior dificuldade de expiração. Tanto na bronquite crônica quanto no enfisema, a obstrução e destruição do tecido é geralmente permanente e progressiva. Pacientes com COPD frequentemente enfrentam exacerbações. O termo “exacerbação” se refere ao agravamento dos sintomas ou um aumento na severidade da doença. A duração de uma exacerbação pode variar muito - de horas a vários dias. Exacerbações podem causar sintomas específicos para o processo respiratório aumentar. O paciente pode sofrer maior dispneia, uma tosse produtiva com um catarro alterado e febre. O catarro pode aumentar ou ser mais purulento e mudar de cor. O paciente também pode enfrentar sintomas não específicos, tais como mal-estar, fadiga, insônia, sonolência ou depressão. Exacerbações de COPD são normalmente causadas por uma infecção do trato respiratório inferior. As causas mais comuns de infecção são: bactérias aeróbicas Gram-positivas e Gram- negativas, bactérias atípicas, vírus respiratório, rinovírus, vírus influenza, RSV, ou uma combinação de patógenos. Exacerbações virais são mais severas, duram mais e são associadas com maiores níveis de inflamação e perda da função pulmonar que exacerbações devido a outras causas (Wedzicha, 2004, PATS; Seemungel et al., 2001, AM. J. RCCM; Tan et al., 2003, Am. J. Med. Donaldson et al., 2000, Thorax). Cada paciente com COPD é provável de enfrentar 1 a 4 exacerbações por ano. Embora muitos pacientes enfrentem estas exacerbações, estima-se que eles somente reportam cerca de 50% de todos os episódios aos médicos. Frequentes exacerbações foram associadas com uma qualidade de vida pobre e um peso econômico alto.

[0011] Estudos em modelos de doença de COPD endereçaram inflamação pulmonar induzida por IL-18 em enfisema e inflamação pulmonar induzida por fumo de cigarro (CS) e induzida por fumantes passivos e sua associação com COPD em fumantes, demonstrando que IL-18 e vias de sinalização de IL-18 por meio de IL-18R são significativamente ativadas pela exposição ao fumo de cigarro em modelos de animal e em inflamação do pulmão humano e alargamento do espaço da via aérea em enfisema pulmonar induzido por fumo de cigarro. Os resultados confirmam o papel importante dos macrófagos alveolares como a principal fonte celular de liberação de IL- 18.

[0012] IL-18 mostrou induzir o remodelamento da via aérea e vascular em camundongos transgênicos-IL-18 indutíveis, específico para pulmão, bem como inflamação do tecido, enfisema, metaplasia de muco e hipertrofia do ventrículo direito cardíaco.

[0013] IL-18 adicionalmente mostrou induzir enfisema e a resposta citotóxica por meio de um mecanismo dependente de IFNy, remodelamento da via aérea fibrótica, metaplasia de muco e remodelamento vascular por meio de uma via dependente de IL-17A- e IL-13. Existem interações importantes entre estas vias com IL-13 que induz IL-18 por meio de um mecanismo dependente de IL-17A e o IFNY e as respostas IL-17A/IL-13 que contrarregulam uma a outra. Consequentemente, IL-18 é central para a modulação de múltiplas cascatas inflamatórias.

[0014] Níveis de IL-18 sistêmicos em pacientes com COPD sugerem macrófagos alveolares como a fonte de IL-18 circulante em COPD e mostraram que IL-18 é elevada na circulação e em catarro induzido de pacientes com COPD. Níveis séricos de IL-18 elevados em comorbidades de COPD são sugeridos como associados com inflamação sistêmica. Adicionalmente, uma forte correlação foi encontrada entre níveis séricos de IL-18 e função pulmonar.

[0015] No geral, os resultados não clínicos e clínicos claramente defendem a inibição/neutralização de IL-18 como um alvo a montante potencial, prevenindo ou limitando assim tanto os processos destrutivos quanto de remodelamento, tipicamente levando a manifestação e progressão da doença COPD.

[0016] Pode-se concluir a partir dos resultados das recentes investigações clínicas com relação aos níveis de IL-18 na circulação e no catarro de pacientes com COPD que níveis pulmonares de IL-18 são significativamente elevados em pacientes com COPD em associação com a severidade da doença.

[0017] Dados com relação à IL-18 em catarro de pacientes com COPD sugerem que macrófagos alveolares são a fonte predominante de IL-18 em COPD e que IL-18 é significativamente sobre-expressa nos pulmões de pacientes com COPD em função dos controles.

[0018] Estudos recentes com relação ao papel do inflamassoma NLRP3 no estímulo da ativação de caspase-1 seguido pela liberação da forma madura das citocinas pró-inflamatórias IL-1b e IL-18 contribuiu para adicionalmente esclarecer os efeitos do fumo de tabaco na inflamação da via aérea (Rastrick et al., 2013).

[0019] Em camundongos expostos ao fumo de cigarro duas vezes ao dia, a ativação de caspase-1 e liberação de IL-18 foi examinada (Eltom et al., 2011).

[0020] A sobrerregulação induzida pelo tabagismo de IL-18 por meio da ativação de caspase-1 é demonstrada comparando os efeitos do fumo de tabaco e exposição ao ar normal.

[0021] Inteiramente, IL-18 apresenta como o alvo a montante favorito para futuras terapêuticas de COPD capazes de interferir com os processos destrutivos e de remodelamento em pulmões COPD, sendo assim um candidato promissor para uma modalidade de tratamento que modifica a doença em COPD.

[0022] Portanto, foi sugerido em WO2008/150431 A1 tratar COPD e comorbidades associadas que resultam da elevação de IL-18, IFN-y, ou PKR em indivíduos que sofrem de COPD e comorbidades associadas administrando aos ditos indivíduos um inibidor de IL-18, um inibidor de IL- 18Rα e inibidor de IFNy, um inibidor de PKR e qualquer combinação dos mesmos.

[0023] Inibição de IL-18 por, por exemplo, anticorpos monoclonais, que focam sinalização de IL-18 pelo bloqueio do receptor leva a uma longa duração da ação devido à meia-vida prolongada destes agentes, agindo assim não somente nas atividades de IL-18 deletérias, mas também interferem com os efeitos benéficos para defesa do hospedeiro, levando assim a efeitos colaterais indesejados em termos de resposta acionada aos patógenos (vírus, bactérias, fungos e outros parasitas) por supressão de IFN-gama e linfócito T auxiliar tipo 1.

[0024] Surpreendentemente foi observado no contexto da presente invenção que estes efeitos colaterais indesejados podem ser evitados tomando uma abordagem alternativa, isto é, administração da proteína de ligação à IL- 18 que ocorre naturalmente (IL-18BP), que tem uma alta afinidade de ligação à interleucina 18 (IL-18) e um modo fundamentalmente diferente de ação de alvejamento de IL-18 comparado, por exemplo, aos anticorpos monoclonais conhecidos na técnica.

[0025] Em uma modalidade específica da invenção, a proteína de ligação à IL-18 (IL-18BP) tem uma afinidade de ligação entre 20 pM e 30 pM, quando determinada em um ajuste BIAcore conforme mostrado no exemplo 4.4.2.

[0026] A presente invenção, assim, em uma modalidade, se refere a uma molécula de ligação à IL-18, que especificamente se liga à IL-18 livre sem reagir cruzado com IL-18 ligada em um complexo (referido a seguir como “molécula de ligação específica a IL-18 livre”), particularmente uma molécula de ligação específica a IL-18 livre que é um inibidor de IL-18, que reduz e/ou anula a ligação de IL-18 livre ao seu receptor (referido a seguir como “inibidor de IL-18”), particularmente um IL-18BP, para uso no tratamento de uma doença ou distúrbio associada à IL-18 em um indivíduo diagnosticado com níveis de IL-18 livre anormais e/ou uma razão anormal de IL-18 livre/IL-18BP nos fluidos corporais comparado aos níveis em fluidos corporais de um indivíduo controle saudável.

[0027] Em particular, o dito nível anormal de IL-18 livre nos fluidos corporais excede o nível em fluidos corporais de um indivíduo controle saudável em 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, ou mais que 100%.

[0028] Em uma outra modalidade, a presente invenção provê a molécula de ligação específica a IL-18 livre, particularmente o inibidor de IL- 18, particularmente o IL-18BP, para uso de acordo com a presente invenção e conforme aqui descrito, em que os ditos níveis de IL-18 livre anormais nas amostras corporais, particularmente em fluidos corporais, foram determinados pelo uso de uma molécula de ligação à IL-18, particularmente uma proteína de ligação à IL-18 (IL-18BP) ou um anticorpo, que especificamente se liga à IL-18 livre, mas não à IL-18 ligada em um complexo de acordo com a invenção e conforme aqui descrito em certas modalidades.

[0029] Adicionalmente, em uma modalidade, a presente invenção provê a molécula de ligação específica a IL-18 livre, particularmente o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, para uso conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, em que o indivíduo a ser tratado pertence a um grupo de indivíduos que foram determinados com níveis elevados de IL-18 livre e/ou uma razão anormal de IL-18 livre/IL-18BP em amostras corporais, particularmente em uma amostra selecionada do grupo que consiste em fluido de lavagem broncoalveolar (BALF), fluidos da circulação, fluidos de secreção, tecido de biópsia e homogeneizado, particularmente soro, urina, lágrima, saliva, bile, suor, exalação, expiração, catarro, fluido broncoalveolar, sebo, celular, glândula, mucosa e secreção de tecido, comparado aos níveis em amostras retiradas de indivíduos saudáveis.

[0030] Os ditos níveis elevados de IL-18 livre em uma amostra de um paciente ou indivíduo doente são >5 pg/mL e até 10.000 pg/mL ou superior. Em particular, os ditos níveis elevados de IL-18 livre em uma amostra de um paciente ou indivíduo doente são na faixa de >5 pg/mL a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 100 pg/mL a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 200 pg/mL a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 300 pg/mL a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 400 pg/mL a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 500 pg/mL a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 600 pg/mL a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 700 pg/mL a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 800 pg/mL a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 900 pg/mL a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 1000 a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 1.500 pg/mL a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 2.000 pg/mL a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 3.000 pg/mL a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 4.000 pg/mL a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 5.000 pg/mL a 10.000 pg/mL. A quantidade de IL-18 livre em soro de indivíduo saudável, particularmente um humano saudável é <5 pg/mL, particularmente <4 pg/mL, particularmente <1 pg/mL, particularmente <0,5 pg/m, particularmente abaixo do nível de detecção.

[0031] Ainda um outro objetivo da presente invenção é prover a molécula de ligação específica a IL-18 livre, particularmente o inibidor de IL- 18, particularmente o IL-18BP, para uso conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, em que a dita doença ou distúrbio associada à IL- 18 é uma selecionada do grupo que consiste em doença de Still adulto, doença de Still juvenil, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), lesão do pulmão relacionada à transfusão, displasia broncopulmonar (BPD), síndrome de desconforto respiratório adulto (ARDS), doença pulmonar intersticial (ILD), fibrose pulmonar idiopática, fibrose cística, hipertensão arterial pulmonar, asma, bronquiectasia, falha cardíaca, esclerose lateral amiotrófica (ALS), doença do olho seco (DED), queratite, úlcera e abrasão da córnea, neovascularização da córnea, neovascularização intraocular patológica, irite, glaucoma, degeneração macular, síndrome de Sjogren, uveíte autoimune, doença de Behçet, conjuntivite, conjuntivite alérgica, dermatite da pálpebra, diabetes tipo 2, doença do fígado gordo não alcoólica (NAFLD), esteato- hepatite, transplante de órgão sólido e hematológico, lesão de reperfusão de isquemia, febre do mediterrâneo familiar, síndromes periódicas associadas ao receptor do fator de necrose tumoral 1, síndromes de febre periódica associada a criopirina, síndromes de hiper-IgD, gota, síndrome de Schnitzler, granulomatose de Wegener também chamada granulomatose com poliangite (GPA), tireoidite de Hashimoto, doença de Crohn, colite ulcerativa, doenças relacionadas à imunoglobulina-4 (IgG4) e terapias com célula tronco.

[0032] Em uma modalidade particular, a presente invenção provê a molécula de ligação específica a IL-18 livre, particularmente o inibidor de IL- 18, particularmente a IL-18BP, para uso conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, em que a dita doença ou distúrbio associada à IL- 18 é induzida por tabagismo ou exposição passiva ao fumo, em particular exposição ao fumo de tabaco.

[0033] Em uma outra modalidade particular, a presente invenção provê a molécula de ligação específica a IL-18 livre, particularmente o inibidor de IL-18, particularmente a IL-18BP, para uso conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, em que a dita doença ou distúrbio associada à IL-18 é induzida por infecção viral.

[0034] Ainda um outro objetivo da presente invenção é prover a molécula de ligação específica a IL-18 livre, particularmente o inibidor de IL- 18, particularmente o IL-18BP, para uso conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, em que a dita doença ou distúrbio associada à IL- 18 é uma manifestação sistêmica induzida por IL-18 de inflamação e comorbidades associadas selecionadas do grupo que consiste em enfisema, inflamação do tecido, destruição do tecido, excisão pulmonar, desaparecimento da vasculatura, apoptose das células endoteliais, metaplasia do muco, hipertrofia cardíaca, diminuição de VEGF no tecido pulmonar, perda do vaso pulmonar, muscularização do vaso, remodelamento vascular, deposição de colágeno, camadas de elastina aberrantes no pulmão, remodelamento da via aérea fibrótica, alargamento do espaço da via aérea, remodelamento crônico das vias aéreas e vasos pulmonares e menor função pulmonar.

[0035] Um outro objetivo da presente invenção é prover uma molécula de ligação específica a IL-18 livre, particularmente um inibidor de IL-18 para uso conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, que é um anticorpo, particularmente um anticorpo específico para IL-18 livre, particularmente um anticorpo antagonístico, que previne ligação de IL-18 livre ao receptor de IL-18, especialmente IL-18 livre que se liga à IL-18Rα.

[0036] O anticorpo específico para IL-18 de acordo com a presente invenção incluindo qualquer anticorpo ou partes funcionalmente equivalentes dos mesmos, se liga à IL-18 no sítio de ligação de IL-18BP ou na proximidade do sítio de ligação de IL-18BP, ou é um anticorpo conformacional, que se liga a pelo menos dois epítopos na molécula de IL-18, que são compostos de aminoácidos descontínuos que se reúnem em conformação tridimensional e interagem com os parátopos do receptor, tal como sítio de ligação de IL-18BP na molécula de IL-18 é bloqueado.

[0037] Em uma modalidade, o anticorpo específico para IL-18 incluindo qualquer anticorpo ou partes funcionalmente equivalentes dos mesmos de acordo com a presente invenção e conforme aqui descrito nas várias modalidades se liga à IL-18 livre proteína, mas não aos complexos IL- 18/IL-18BP.

[0038] Em particular, o anticorpo específico para IL-18 incluindo qualquer anticorpo ou partes funcionalmente equivalentes dos mesmos de acordo com a presente invenção apresenta reatividade cruzada com o complexo IL-18/IL-18BP entre <0,01% e <0,05%, particularmente entre <0,1% e <0,2%, particularmente entre <0,2% e <0,5%, particularmente entre <0,5% e <1%, particularmente entre <1% e <2% conforme determinado por ELISA competitivo.

[0039] Em uma modalidade específica, o anticorpo específico para IL-18 incluindo qualquer anticorpo ou partes funcionalmente equivalentes dos mesmos de acordo com a presente invenção apresenta reatividade cruzada com o complexo IL-18/IL-18BP <0,1% conforme determinado por ELISA competitivo.

[0040] Em uma modalidade, o anticorpo específico para IL-18 incluindo qualquer anticorpo ou partes funcionalmente equivalentes dos mesmos conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores estericamente impede a ligação de IL-18BP à IL-18.

[0041] Ainda uma outra modalidade, o anticorpo específico para IL- 18 incluindo qualquer anticorpo ou partes funcionalmente equivalentes dos mesmos conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores especificamente se liga a um único epítopo, uma combinação de dois epítopos ou uma combinação de 3 epítopos compreendidos em uma sequência selecionada de um grupo de sequências apresentadas em SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 e SEQ ID NO: 3, respectivamente.

[0042] Em uma modalidade específica, o anticorpo da invenção especificamente se liga a um único epítopo, formado de uma sequência selecionada de um grupo de sequências apresentadas em SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 e SEQ ID NO: 3.

[0043] Em uma outra modalidade específica, o anticorpo da invenção especificamente se liga a dois epítopos, formados de uma sequência selecionada de um grupo de sequências apresentadas em SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 e SEQ ID NO: 3, respectivamente.

[0044] Em particular, o anticorpo se liga a dois epítopos compreendidos em uma sequência de (a) SEQ ID NO: 1 e SEQ ID NO: 2, respectivamente, (b) SEQ ID NO: 1 e SEQ ID NO: 3, respectivamente, (c) SEQ ID NO: 2 e SEQ ID NO: 3, respectivamente.

[0045] Em uma outra modalidade específica, o anticorpo da invenção especificamente se liga a três epítopos, formados de uma sequência de SEQ ID NO:1, SEQ ID NO: 2 e SEQ ID NO: 3, respectivamente.

[0046] Em uma modalidade, a presente invenção provê o anticorpo específico para IL-18 incluindo qualquer anticorpo ou partes funcionalmente equivalentes dos mesmos conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, cujo anticorpo especificamente se liga a um único epítopo, uma combinação de dois epítopos ou uma combinação de 3 epítopos selecionados do grupo que consiste em SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 e SEQ ID NO: 6.

[0047] Em particular, a presente invenção adicionalmente se refere ao dito anticorpo específico para IL-18 incluindo qualquer anticorpo ou partes funcionalmente equivalentes dos mesmos, em que o dito epítopo tem uma sequência que tem 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência para a sequência apresentada em SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO:5 ou SEQ ID NO: 6.

[0048] Em uma modalidade específica, o anticorpo da invenção especificamente se liga a um único epítopo, composto em uma sequência selecionada de um grupo de sequências apresentadas em SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 e SEQ ID NO: 6.

[0049] Em uma outra modalidade específica, o anticorpo da invenção especificamente se liga a dois epítopos, formados de uma sequência selecionada de um grupo de sequências apresentadas em SEQ ID NO:4, SEQ ID NO: 5 e SEQ ID NO: 6.

[0050] Em particular, o anticorpo se liga a dois epítopos compreendidos em uma sequência de (a) SEQ ID NO: 4 e SEQ ID NO: 5, respectivamente, (b) SEQ ID NO: 4 e SEQ ID NO: 6, respectivamente, (c) SEQ ID NO: 5 e SEQ ID NO: 6, respectivamente.

[0051] Em uma outra modalidade específica, o anticorpo da invenção especificamente se liga a três epítopos, formados de uma sequência de SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 e SEQ ID NO: 6, respectivamente.

[0052] Em uma modalidade específica, o anticorpo de acordo com a presente invenção conforme aqui descrito nas várias modalidades incluindo qualquer anticorpo funcionalmente equivalente ou uma porção de ligação ao antígeno do mesmo compreende pelo menos uma, pelo menos duas ou todas três regiões que determinam complementariedade (CDRs) da região variável de cadeia leve conforme mostrado em SEQ ID NOs: 10, 12, 14, 16, 17, 19, 22, 24 e 26, respectivamente, e/ou pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três regiões que determinam complementariedade (CDRs) da região variável da cadeia pesada conforme mostrado em SEQ ID NOs: 9, 11, 13, 15, 18, 20, 21, 23 e 25, respectivamente, em que o dito anticorpo, anticorpo equivalente ou porção que se liga ao antígeno do mesmo se liga à proteína de IL-18 livre, particularmente no sítio de ligação de IL-18BP ou na proximidade do sítio de ligação de IL-18BP, mas não se liga aos complexos IL-18/IL- 18BP.

[0053] Em particular, o anticorpo de acordo com a presente invenção conforme aqui descrito nas várias modalidades incluindo qualquer anticorpo funcionalmente equivalente ou uma porção de ligação ao antígeno do mesmo compreende as regiões que determinam complementariedade (CDRs) da região variável de cadeia leve conforme mostrado em SEQ ID NOs: 10, 12, 14, 16, 17, 19, 22, 24 e 26, respectivamente e as regiões que determinam complementariedade (CDRs) da região variável da cadeia pesada conforme mostrado em SEQ ID NOs: 9, 11, 13, 15, 18, 20, 21, 23 e 25, respectivamente, em que o dito anticorpo, anticorpo equivalente ou porção que se liga ao antígeno do mesmo se liga à proteína de IL-18 livre, particularmente no sítio de ligação de IL-18BP ou na proximidade do sítio de ligação de IL-18BP, mas não se liga aos complexos IL-18/IL-18BP em qualquer extensão significativa.

[0054] Em uma modalidade específica, o anticorpo de acordo com a presente invenção conforme aqui descrito nas várias modalidades incluindo qualquer anticorpo funcionalmente equivalente ou uma porção de ligação ao antígeno do mesmo compreende pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três regiões que determinam complementariedade (CDRs) da região variável de cadeia leve conforme mostrado na figura 11, e/ou pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três regiões que determinam complementariedade (CDRs) da região variável da cadeia pesada conforme mostrado na figura 11, em que o dito anticorpo, anticorpo equivalente ou porção que se liga ao antígeno do mesmo se liga à proteína de IL-18 livre, particularmente no sítio de ligação de IL-18BP ou na proximidade do sítio de ligação de IL-18BP, mas não se liga aos complexos IL-18/IL-18BP.

[0055] Em particular, o anticorpo de acordo com a presente invenção conforme aqui descrito nas várias modalidades incluindo qualquer anticorpo funcionalmente equivalente ou uma porção de ligação ao antígeno do mesmo compreende as regiões que determinam complementariedade (CDRs) da região variável de cadeia leve conforme mostrado em conforme mostrado na figura 11 e as regiões que determinam complementariedade (CDRs) da região variável da cadeia pesada conforme mostrado em conforme mostrado na figura 11, em que o dito anticorpo, anticorpo equivalente ou porção que se liga ao antígeno do mesmo se liga à proteína de IL-18 livre, particularmente no sítio de ligação de IL-18BP ou na proximidade do sítio de ligação de IL- 18BP, mas não se liga aos complexos IL-18/IL-18BP em qualquer extensão significativa.

[0056] Em uma modalidade específica da invenção, as regiões que determinam complementariedade (CDRs) são determinadas de acordo com a numeração do resíduo de domínio variável que em Kabat.

[0057] Em uma outra modalidade específica da invenção, as regiões que determinam complementariedade (CDRs) são determinadas de acordo com a numeração do resíduo de domínio variável que em Chothia.

[0058] Em uma outra modalidade específica da invenção, as regiões que determinam complementariedade (CDRs) são determinadas pelo sistema IMGT.

[0059] O anticorpo de acordo com a presente invenção conforme aqui descrito nas várias modalidades incluindo qualquer anticorpo funcionalmente equivalente ou uma porção de ligação ao antígeno do mesmo compreende as regiões que determinam complementariedade (CDRs) como se segue: a. CDR1, CDR2 e CDR 3 da região variável da cadeia pesada tendo a sequência conforme mostrado em SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28 e SEQ ID NO: 29, respectivamente; e CDR1, CDR2 e CDR 3 da região variável de cadeia leve tendo a sequência conforme mostrado em SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31 e SEQ ID NO: 32, respectivamente; ou b. CDR1, CDR2 e CDR 3 da região variável da cadeia pesada tendo a sequência conforme mostrado em SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34 e SEQ ID NO: 35, respectivamente; e CDR1, CDR2 e CDR 3 da região variável de cadeia leve tendo a sequência conforme mostrado em SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37 e SEQ ID NO: 38, respectivamente; ou c. CDR1, CDR2 e CDR 3 da região variável da cadeia pesada tendo a sequência conforme mostrado em SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40 e SEQ ID NO: 41, respectivamente; e CDR1, CDR2 e CDR 3 da região variável de cadeia leve tendo a sequência conforme mostrado em SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43 e SEQ ID NO: 44, respectivamente; ou d. CDR1, CDR2 e CDR 3 da região variável da cadeia pesada tendo a sequência conforme mostrado em SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46 e SEQ ID NO: 47, respectivamente; e CDR1, CDR2 e CDR 3 da região variável de cadeia leve tendo a sequência conforme mostrado em SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49 e SEQ ID NO: 50, respectivamente; ou e. CDR1, CDR2 e CDR 3 da região variável da cadeia pesada tendo a sequência conforme mostrado em SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46 e SEQ ID NO: 47, respectivamente; e CDR1, CDR2 e CDR 3 da região variável de cadeia leve tendo a sequência conforme mostrado em SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 e SEQ ID NO: 53, respectivamente; ou f. CDR1, CDR2 e CDR 3 da região variável da cadeia pesada tendo a sequência conforme mostrado em SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55 e SEQ ID NO: 56, respectivamente; e CDR1, CDR2 e CDR 3 da região variável de cadeia leve tendo a sequência conforme mostrado em SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58 e SEQ ID NO: 59, respectivamente; ou g. CDR1, CDR2 e CDR 3 da região variável da cadeia pesada tendo a sequência conforme mostrado em SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61 e SEQ ID NO: 62, respectivamente; e CDR1, CDR2 e CDR 3 da região variável de cadeia leve tendo a sequência conforme mostrado em SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67 e SEQ ID NO: 68, respectivamente; ou h. CDR1, CDR2 e CDR 3 da região variável da cadeia pesada tendo a sequência conforme mostrado em SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64 e SEQ ID NO: 65, respectivamente; e CDR1, CDR2 e CDR 3 da região variável de cadeia leve tendo a sequência conforme mostrado em SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67 e SEQ ID NO: 68, respectivamente; ou i. CDR1, CDR2 e CDR 3 da região variável da cadeia pesada tendo a sequência conforme mostrado em SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 70 e SEQ ID NO: 71, respectivamente; e CDR1, CDR2 e CDR 3 da região variável de cadeia leve tendo a sequência conforme mostrado em SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 73 e SEQ ID NO: 74, respectivamente; ou j. CDR1, CDR2 e CDR 3 da região variável da cadeia pesada tendo a sequência conforme mostrado em SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 78 e SEQ ID NO: 77, respectivamente; e CDR1, CDR2 e CDR 3 da região variável de cadeia leve tendo a sequência conforme mostrado em SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79 e SEQ ID NO: 80, respectivamente. k. CDR1, CDR2 e CDR 3 da região variável da cadeia pesada tendo a sequência conforme mostrado na figura 11; e CDR1, CDR2 e CDR 3 da região variável de cadeia leve tendo a sequência conforme mostrado na figura 11.

[0060] Em uma modalidade da invenção, o anticorpo apresenta variação em uma ou mais das sequências CDR até o ponto em que o anticorpo que incorpora a dita variante CDRs ainda tem a atividade de ligação específica de um anticorpo, de acordo com a presente invenção, compreendendo ligação de proteína de IL-18 livre, particularmente no sítio de ligação de IL-18BP ou na proximidade do sítio de ligação de IL-18BP, sem complexos de ligação IL-18/IL-18BP.

[0061] Em uma outra modalidade específica da invenção, o dito anticorpo é um anticorpo humano ou humanizado, em particular um anticorpo humano ou humanizado, em que os CDRs foram inseridos em um “andaime” de anticorpo humano sendo derivado de uma (ou mais) imunoglobulina(s) humana(a).

[0062] Ainda em uma outra modalidade específica, a invenção provê um anticorpo incluindo qualquer anticorpo funcionalmente equivalente ou uma porção de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo pelo menos uma região variável de cadeia leve tendo 75%, 80%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100% de identidade de sequência para a sequência apresentada em SEQ ID NOs: 10, 12, 14, 16, 17, 19, 22, 24, 26 e figura 11, respectivamente e/ou pelo menos uma região variável da cadeia pesada tendo 75%, 80%, 82%, 83%,84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100% de identidade de sequência para a sequência apresentada em SEQ ID NOs: 9, 11, 13, 15, 18, 20, 21, 23, 25 e figura 11, respectivamente, em que o dito anticorpo, anticorpo equivalente ou porção que se liga ao antígeno do mesmo se liga à proteína de IL-18 livre, particularmente no sítio de ligação de IL-18BP ou na proximidade do sítio de ligação de IL-18BP, mas não se liga aos complexos IL-18/IL-18BP.

[0063] Ainda em uma outra modalidade específica, a invenção provê um anticorpo incluindo qualquer anticorpo funcionalmente equivalente ou uma porção de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo pelo menos uma região variável de cadeia leve tendo 75%, 80%, 82%, 83%,84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100% de identidade de sequência para a sequência apresentada em SEQ ID NOs: 10, 12, 14, 16, 17, 19, 22, 24, 26 e figura 11, respectivamente, e/ou pelo menos uma região variável da cadeia pesada tendo 75%, 80%, 82%, 83%,84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100% de identidade de sequência para a sequência apresentada em SEQ ID NOs: 9, 11, 13, 15, 18, 20, 21, 23, 25 e figura 11, respectivamente, com a condição de que as sequências dos CDRs da região variável de cadeia leve e/ou da região variável da cadeia pesada permanecem inalteradas e em que o dito anticorpo, anticorpo equivalente ou porção que se liga ao antígeno do mesmo se liga à proteína de IL-18 livre, particularmente no sítio de ligação de IL-18BP ou na proximidade do sítio de ligação de IL- 18BP, mas não se liga aos complexos IL-18/IL-18BP.

[0064] Em uma modalidade, a presente invenção provê o anticorpo específico para IL-18 incluindo qualquer anticorpo ou partes funcionalmente equivalentes dos mesmos para uso conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, em que o dito anticorpo ou parte do mesmo é um anticorpo monoclonal ou um anticorpo policlonal.

[0065] Em uma modalidade particular, a presente invenção provê o anticorpo específico para IL-18 incluindo qualquer anticorpo ou partes funcionalmente equivalentes dos mesmos para uso conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, em que o dito anticorpo ou parte do mesmo é um anticorpo quimérico, de cadeia simples, biespecífico, simianizado, humano e humanizado.

[0066] Em particular, o dito anticorpo é um anticorpo humanizado, particularmente um anticorpo humanizado, em que certos aminoácidos na armação e domínios constantes das regiões variáveis de cadeias pesada e leve e/ou das regiões constantes de cadeia pesada e leve foram mutados de maneira a evitar ou anular uma resposta imune em humanos.

[0067] Em particular, o anticorpo específico para IL-18 incluindo qualquer anticorpo funcionalmente equivalente ou porção que se liga ao antígeno do mesmo de acordo com a presente invenção apresenta reatividade cruzada com o complexo IL-18/IL-18BP entre <0,01% e <0,05%, particularmente entre <0,1% e <0,2%, particularmente entre <0,2% e <0,5%, particularmente entre <0,5% e <1%, particularmente entre <1% e <2% conforme determinado por ELISA competitivo.

[0068] Em uma modalidade específica, o anticorpo específico para IL-18 incluindo qualquer anticorpo funcionalmente equivalente ou porção que se liga ao antígeno do mesmo de acordo com a presente invenção apresenta reatividade cruzada com o complexo IL-18/IL-18BP <0,1% conforme determinado por ELISA competitivo.

[0069] Em uma outra modalidade particular a presente invenção provê o anticorpo específico para IL-18 incluindo qualquer anticorpo ou partes funcionalmente equivalentes dos mesmos conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, em que o dito anticorpo ou parte do mesmo se liga à IL-18 humana.

[0070] Ainda um outro objetivo da presente invenção é prover o anticorpo específico para IL-18 incluindo qualquer anticorpo ou partes funcionalmente equivalentes dos mesmos conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, em que a ligação de IL-18 ao receptor de subunidade de IL-18 alfa (IL-18Rα) e beta (IL-18Rβ), particularmente que se liga à IL-18Rα é reduzida em pelo menos 5%, particularmente em pelo menos 10%, particularmente em pelo menos 15%, particularmente em pelo menos 20%, particularmente em pelo menos 25%, particularmente em pelo menos 30%, particularmente em pelo menos 40%, particularmente em pelo menos 45%, particularmente em pelo menos 50%, particularmente em pelo menos 55%, particularmente em pelo menos 60%, particularmente em pelo menos 65%, particularmente em pelo menos 70, particularmente em pelo menos 75, particularmente em pelo menos 80, particularmente em pelo menos 85%, particularmente em pelo menos 90%, particularmente em pelo menos 95%, particularmente em 96%, particularmente em 97%, particularmente em 98%, particularmente em 99%, particularmente em 100%.

[0071] Um objetivo adicional da presente invenção é prover a molécula de ligação específica a IL-18 livre, particularmente o inibidor de IL- 18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo específico para IL-18 incluindo qualquer anticorpo ou partes funcionalmente equivalentes dos mesmos conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores para uso no tratamento de uma doença ou distúrbio associada à IL-18 em uma população de indivíduos diagnosticados tendo níveis de IL-18 livre anormais e/ou uma razão anormal de IL-18 livre/IL-18BP em amostras corporais, particularmente em fluidos corporais, comparado aos níveis em fluidos corporais de um indivíduo controle saudável, em que a dita molécula de ligação específica a IL-18 livre, inibidor, IL-18BP ou anticorpo específico para IL-18 ou parte do mesmo neutraliza o efeito de IL-18 livre restringindo ou prevenindo Ligação de IL-18 ao receptor de IL-18 (IL-18R), especialmente IL-18 livre que se liga à IL-18Rα.

[0072] Em uma modalidade, a presente invenção provê o anticorpo específico para IL-18 incluindo qualquer anticorpo ou partes funcionalmente equivalentes dos mesmos conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, em que o dito anticorpo ou partes do mesmo a) especificamente se liga a um único epítopo, uma combinação de dois epítopos ou uma combinação de 3 epítopos compreendidos em uma sequência selecionada de um grupo de sequências apresentadas em SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 e SEQ ID NO: 3; e/ou b) especificamente se liga a um epítopo, que tem uma identidade de sequência de 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% para a sequência apresentada em SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO:5 ou SEQ ID NO: 6; e c) especificamente se liga à IL-18 no sítio de ligação de IL- 18BP ou na proximidade do sítio de ligação de IL-18BP; e d) especificamente se liga à proteína de IL-18 livre, mas não aos complexos IL-18/IL-18BP; e e) estericamente impede a ligação de IL-18BP à IL-18; e f) reduz a ligação de IL-18 ao receptor de IL-18, particularmente que se liga à IL-18Rα em pelo menos 5%, particularmente em pelo menos 10%, particularmente em pelo menos 15%, particularmente em pelo menos 20%, particularmente em pelo menos 25%, particularmente em pelo menos 30%, particularmente em pelo menos 40%, particularmente em pelo menos 45%, particularmente em pelo menos 50%, particularmente em pelo menos 55%, particularmente em pelo menos 60%, particularmente em pelo menos 65%, particularmente em pelo menos 70, particularmente em pelo menos 75, particularmente em pelo menos 80, particularmente em pelo menos 85%, particularmente em pelo menos 90%, particularmente em pelo menos 95%, particularmente em 100%.

[0073] Em particular, o anticorpo definido especificamente anteriormente apresenta uma reatividade cruzada com complexo IL-18/IL- 18BP entre 0,01% e <0,05%, particularmente entre <0,1% e <0,2%, particularmente entre <0,2% e <0,5%, particularmente entre <0,5% e <1%, particularmente entre <1% e <2% conforme determinado por ELISA competitivo.

[0074] Em certas modalidades da invenção, o IL-18BP e/ou o anticorpo específico de IL-18 livre conforme descrito em qualquer uma das várias modalidades pode ser usado como um inibidor de IL-18.

[0075] Em certas outras modalidades da invenção, o IL-18BP e/ou o anticorpo específico de IL-18 livre conforme descrito em qualquer uma das várias modalidades pode ser usado como uma molécula de captura, em um ensaio para detectar IL-18 livre em uma amostra corporal, particularmente em uma amostra selecionada do grupo que consiste em fluido de lavagem broncoalveolar (BALF), fluidos da circulação, fluidos de secreção, tecido de biópsia e homogeneizado, particularmente soro, urina, lágrima, saliva, bile, suor, exalação, expiração, catarro, fluido broncoalveolar, sebo, celular, glândula, mucosa e secreção de tecido.

[0076] Em uma modalidade, a invenção se refere a um polinucleotídeo que codifica um anticorpo de acordo com a invenção conforme aqui descrito nas várias modalidades.

[0077] Em uma modalidade, o polinucleotídeo codifica a cadeia pesada variável mostrada em SEQ ID NOs: 9, 11, 13, 15, 18, 20, 21, 23, 25 e figura 11.

[0078] Em uma modalidade, o polinucleotídeo codifica a cadeia leve variável mostrada em SEQ ID NOs: 10, 12, 14, 16, 17, 19, 22, 24. 26 e figura 11.

[0079] Em uma modalidade, o polinucleotídeo codifica as regiões de CDR conforme mostrado em SEQ ID NOs: 27 a 80.

[0080] Em particular, a invenção se refere a um polinucleotídeo que codifica a região variável de cadeia pesada e/ou de cadeia leve do anticorpo de acordo com a invenção tendo uma sequência que tem 75%, 80%, 82%, 83%,84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100% de identidade de sequência para a sequência apresentada na figura 11.

[0081] Além do mais, a presente invenção também provê o inibidor de IL-18 de acordo com a presente invenção para uso conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, em que o inibidor é proteína de ligação à IL-18 (IL-18BP), particularmente IL-18 BP humana (hIL-18 BP), particularmente IL-18BP incluindo quaisquer equivalentes ou partes funcionalmente do mesmo, particularmente uma IL-18BP conforme mostrado em SEQ ID NO: 7.

[0082] Também incluídos são variantes de transcrição que codificam o IL-18BP.

[0083] Em uma modalidade, a presente invenção provê o inibidor de IL-18 para uso conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, em que o inibidor é uma proteína de ligação à IL-18 (IL-18BP) que tem uma identidade de sequência de 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% para a sequência apresentada em SEQ ID NO: 7.

[0084] Ainda um outro objetivo da presente invenção é prover o inibidor de IL-18 para uso conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, em que tratamento compreende prevenção, interrupção, alívio ou reversão dos sintomas associados com a dita doença ou distúrbio.

[0085] Em uma modalidade adicional, a presente invenção provê o inibidor de IL-18 para uso conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, em que ligação à IL-18 é restrita ou inibida, particularmente ligação de IL-18 livre à IL-18R, mas especialmente ligação de IL-18 livre à IL-18Rα.

[0086] Em uma outra modalidade, a presente invenção provê o inibidor de IL-18 para uso conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, em que vias de sinalização a jusante dependentes de IL-18 são modificadas, particularmente inibidas.

[0087] Ainda uma outra modalidade, a presente invenção provê o inibidor de IL-18 para uso conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, em que maior expressão de IFNy, IL-13 ou IL-17A é modificada, particularmente inibida, comparada aos indivíduos não tratados que sofrem da dita doença ou distúrbio.

[0088] Ainda é um outro objetivo da presente invenção prover o inibidor de IL-18 para uso conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, em que o inibidor de IL-18 compensa o desequilíbrio de IL-18/IL-18BP captando o excesso de IL-18 livre em tecido e circulação.

[0089] Em uma modalidade, a presente invenção provê o inibidor de IL-18 para uso conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, em que o inibidor de IL-18 inibe a infiltração de neutrófilos no pulmão, particularmente através do abrandamento da liberação de G-CSF nas vias aéreas do pulmão.

[0090] Ainda uma outra modalidade da presente invenção é prover o inibidor de IL-18 para uso conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, que é uma proteína de comprimento total ou uma muteína, derivado funcional, fragmento funcional, peptídeo biologicamente ativo, fração, derivado circularmente permutado, proteína fundida, isoforma ou um sal dos mesmos.

[0091] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), doença cardíaca, doença do olho seco e/ou diabetes tipo II.

[0092] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD).

[0093] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de doença cardíaca.

[0094] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de doença do olho seco.

[0095] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de esclerose lateral amiotrófica (ALS).

[0096] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o anticorpo antagonístico, particularmente o IL-18BP, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de diabetes tipo II.

[0097] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de doença de Still adulto.

[0098] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de lesão do pulmão relacionada à transfusão.

[0099] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de doença de Still juvenil.

[00100] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de displasia broncopulmonar (BPD).

[00101] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de síndrome do desconforto respiratório agudo (ARDS).

[00102] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de doença pulmonar intersticial (ILD).

[00103] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de fibrose pulmonar idiopática.

[00104] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de fibrose cística.

[00105] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o anticorpo antagonístico, particularmente o IL-18BP, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de hipertensão arterial pulmonar.

[00106] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de asma.

[00107] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de bronquiectasia.

[00108] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de falha cardíaca.

[00109] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de queratite.

[00110] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de úlcera corneal.

[00111] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de neovascularização da córnea.

[00112] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de neovascularização intraocular patológica.

[00113] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de irite.

[00114] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o anticorpo antagonístico, particularmente o IL-18BP, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de glaucoma.

[00115] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de degeneração macular.

[00116] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de síndrome de Sjogren.

[00117] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o anticorpo antagonístico, particularmente o IL-18BP, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de uveíte autoimune.

[00118] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de doença de Behçet.

[00119] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de conjuntivite.

[00120] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de dermatite da pálpebra.

[00121] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de doença do fígado gordo não alcoólica (NAFLD).

[00122] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de esteato-hepatite.

[00123] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de transplante de órgão sólido e hematológico.

[00124] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de lesão de reperfusão de isquemia.

[00125] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de febre do mediterrâneo familiar.

[00126] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de síndromes periódicas associadas ao receptor do fator de necrose tumoral 1.

[00127] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de síndromes de febre periódica associada a criopirina.

[00128] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de síndromes de hiper-IgD.

[00129] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de gota.

[00130] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de síndrome de Schnitzler.

[00131] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de granulomatose de Wegener.

[00132] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de tireoidite de Hashimoto.

[00133] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de doença de Crohn.

[00134] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de colite ulcerativa.

[00135] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de doenças relacionadas à imunoglobulina-4 (IgG4).

[00136] A presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento de terapias com célula tronco.

[00137] Em uma outra modalidade, a presente invenção provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, em que a dita doença ou distúrbio é induzida por tabagismo ou exposição passiva ao fumo, em particular exposição ao fumo de tabaco.

[00138] Em uma outra modalidade, a presente invenção provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, em que a dita doença ou distúrbio é induzida por infecção viral.

[00139] Adicionalmente, a presente invenção também provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, em que a dita doença ou distúrbio é uma manifestação sistêmica induzida por IL-18 de inflamação e comorbidades associadas selecionadas do grupo que consiste em enfisema, inflamação do tecido, destruição do tecido, excisão pulmonar, desaparecimento da vasculatura, metaplasia do muco, hipertrofia cardíaca, diminuição de VEGF no tecido pulmonar, perda do vaso pulmonar, muscularização do vaso, deposição de colágeno, camadas de elastina aberrantes no pulmão, remodelamento da via aérea fibrótica, alargamento do espaço da via aérea, remodelamento crônico das vias aéreas e vasos pulmonares e menor função pulmonar.

[00140] Ainda um outro objetivo da presente invenção é prover o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, em que ligação à IL-18 é restrita ou inibida, particularmente ligação de IL-18 livre à IL-18R, mas especialmente IL-18 livre que se liga à IL-18Rα.

[00141] Ainda é um outro objetivo da presente invenção prover o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, em que vias de sinalização a jusante dependentes de IL-18 são modificadas, particularmente inibidas.

[00142] Ainda é um outro objetivo da presente invenção prover o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, em que maior expressão de IFNy, IL-13 ou IL-17A é modificada, particularmente inibida, comparada aos indivíduos não tratados que sofrem da dita doença ou distúrbio.

[00143] Em uma modalidade, a presente invenção provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, em que o inibidor de IL-18 compensa o desequilíbrio de IL-18/IL-18BP captando o excesso de IL-18 livre em tecido e circulação.

[00144] Em uma outra modalidade, a presente invenção provê o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, em que tratamento compreende prevenção, interrupção, alívio ou reversão dos sintomas associados com a dita doença ou distúrbio.

[00145] Adicionalmente, a presente invenção também provê uma composição farmacêutica para uso no tratamento de o doença ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades anteriores em um indivíduo que sofre de uma doença ou distúrbio como esta ou tendo uma predisposição para desenvolver uma doença ou distúrbio como esta, conforme definido em qualquer uma das modalidades anteriores, em que a dita composição compreende o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, particularmente junto com um carreador e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável, particularmente em uma quantidade profilática e/ou terapeuticamente efetiva.

[00146] Em particular, a presente invenção provê a composição farmacêutica da modalidade anterior, em que a dita composição farmacêutica opcionalmente ainda provê um outro inibidor de uma citocina pró- inflamatória ou fragmento funcional do mesmo, ou um fator regulatório, que induz expressão in situ do dito inibidor de citocina pró-inflamatória ou fragmento funcional do mesmo, agentes coterapêuticos, tais como substâncias de medicamento anti-inflamatório, broncodilatador, anti-histamina, descongestionante ou antitussígeno.

[00147] Em uma modalidade, a presente invenção provê a composição farmacêutica conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, compreendendo um carreador e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

[00148] Em uma modalidade específica, a presente invenção provê uma composição farmacêutica para uso no tratamento da doença ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades anteriores em um indivíduo que sofre de uma doença ou distúrbio como esta ou tendo uma predisposição para desenvolver uma doença ou distúrbio como esta, conforme definido em qualquer uma das modalidades anteriores, em que a dita composição compreende a proteína de ligação à interleucina-18 (IL-18BP) conforme descrito em uma ou mais das modalidades anteriores, particularmente junto com um carreador e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável, particularmente em uma quantidade profilática e/ou terapeuticamente efetiva.

[00149] Em uma outra modalidade específica, a presente invenção provê uma composição farmacêutica para uso no tratamento da doença ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades anteriores em um indivíduo que sofre de uma doença ou distúrbio como esta ou tendo uma predisposição para desenvolver uma doença ou distúrbio como esta, conforme definido em qualquer uma das modalidades anteriores, em que a dita composição compreende o anticorpo antagonístico específico de IL-18 livre conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, particularmente o anticorpo antagonístico específico de IL-18 livre incluindo qualquer anticorpo ou partes funcionalmente equivalentes dos mesmos de acordo com a presente invenção, que apresenta reatividade cruzada com o complexo IL-18/IL-18BP <0,01% e <0,05%, particularmente entre <0,1% e <0,2%, particularmente entre <0,2% e <0,5%, particularmente entre <0,5% e <1%, particularmente entre <1% e <2 conforme determinado por ELISA competitivo, particularmente junto com um carreador e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável, particularmente em uma quantidade profilática e/ou terapeuticamente efetiva.

[00150] Em uma modalidade particular, a presente invenção provê a composição farmacêutica da modalidade anterior, em que a dita composição opcionalmente ainda provê um outro inibidor de uma citocina pró- inflamatória ou fragmento funcional do mesmo, ou um fator regulatório, que induz expressão in situ do dito inibidor de citocina pró-inflamatória ou fragmento funcional do mesmo, agentes coterapêuticos, tais como substâncias de medicamento anti-inflamatório, broncodilatador, anti-histamina, descongestionante ou antitussígeno.

[00151] Ainda um outro objetivo da presente invenção é prover a composição farmacêutica conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, compreendendo um carreador e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

[00152] A presente invenção adicionalmente descreve um vetor de expressão compreendendo uma sequência de codificação do inibidor de IL-18 ou um vetor de expressão antessentido IL-18 conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores que mediante administração a um indivíduo que sofre de uma doença ou distúrbio ou tem uma predisposição para desenvolver uma doença ou distúrbio como esta, conforme definido nas modalidade anteriores, leva à expressão in situ de inibidor de IL-18 para uso no tratamento da doença ou distúrbio, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores.

[00153] A presente invenção adicionalmente descreve um vetor de expressão compreendendo um vetor de expressão antessentido IL-18 que mediante administração a um indivíduo que sofre de uma doença ou distúrbio ou tem uma predisposição para desenvolver uma doença ou distúrbio como esta, conforme definido nas modalidades da presente invenção, leva à inibição in situ da expressão de IL-18 para uso no tratamento da doença ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades anteriores.

[00154] A presente invenção adicionalmente descreve um vetor de expressão compreendendo a sequência de codificação de um fator regulatório que, mediante administração a um indivíduo que sofre de uma doença ou distúrbio ou tem uma predisposição para desenvolver uma doença ou distúrbio, como esta conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, leva à expressão in situ do dito fator regulatório, que modula vias de sinalização a montante que controlam a expressão do inibidor de IL-18, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, particularmente o dito fator regulatório induz a expressão celular do inibidor de IL-18 para uso no tratamento da doença ou distúrbio, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores.

[00155] Em particular, o dito vetor de expressão conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores para uso no tratamento da doença ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades anteriores, é administrado a um indivíduo que sofre de uma doença ou distúrbio como esta conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, ou tem uma predisposição para desenvolver uma doença ou distúrbio como esta, sozinho ou em combinação com o inibidor de IL-18, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, o proteína de ligação à interleucina-18 (IL-18BP), conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores ou a composição farmacêutica, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores.

[00156] A presente invenção adicionalmente descreve um vetor de expressão compreendendo a sequência de codificação de IL-18BP, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, que mediante administração a um indivíduo que sofre de uma doença ou distúrbio ou tem uma predisposição para desenvolver uma doença ou distúrbio como esta, conforme definido nas modalidade anteriores, leva à expressão in situ de IL- 18BP para uso no tratamento da doença ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades anteriores.

[00157] A presente invenção adicionalmente descreve um vetor de expressão compreendendo a sequência de codificação de um fator regulatório que mediante administração a um indivíduo que sofre de uma doença ou distúrbio ou tem uma predisposição para desenvolver uma doença ou distúrbio como esta, conforme definido em qualquer uma das modalidades anteriores, leva à expressão in situ do dito fator regulatório, que modula vias de sinalização a montante que controlam a expressão do IL-18BP, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, particularmente o dito fator regulatório induz a expressão celular do IL-18BP para uso no tratamento da doença ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades anteriores.

[00158] Em particular, o dito vetor de expressão, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no tratamento da doença ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades anteriores é administrado a um indivíduo que sofre de uma doença ou distúrbio como esta, conforme definido em qualquer uma das modalidades anteriores, ou tem uma predisposição para desenvolver uma doença ou distúrbio como esta, sozinho ou em combinação com o inibidor de IL-18, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, a proteína de ligação à interleucina- 18 (IL-18BP), conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, ou a composição farmacêutica, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores.

[00159] Ainda um outro objetivo da presente invenção é prover o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico específico de IL-18 livre, ou a composição farmacêutica compreendendo o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico específico de IL-18 livre, ou o vetor de expressão para uso, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, em que eles são administrados a um indivíduo em uma quantidade profilática e/ou terapeuticamente efetiva por administração sistêmica, intranasal, intraocular, intravitral, colírios, bucal, oral, transmucosal, intratraqueal, intravenosa, subcutânea, trato intraurinário, intrarretal, intravaginal, sublingual, intrabronquial, intrapulmonar, transdérmica ou intramuscular, em particular broncopulmonar.

[00160] Em particular, o dito indivíduo é um mamífero, particularmente o dito indivíduo é um humano.

[00161] A presente invenção adicionalmente se refere a um método para tratar a doença ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades anteriores, em um indivíduo que sofre de uma doença ou distúrbio como esta, ou tem uma predisposição para desenvolver uma doença ou distúrbio como esta, conforme definido em qualquer uma das modalidades anteriores, compreendendo administrar ao dito indivíduo uma quantidade terapêutica ou profilaticamente efetiva do inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico específico de IL-18 livre, ou a composição farmacêutica compreendendo o inibidor de IL-18, particularmente o IL-18BP, particularmente o anticorpo antagonístico específico de IL-18 livre, ou o vetor de expressão, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores.

[00162] A presente invenção adicionalmente se refere a um método de determinar a quantidade de IL-18 livre em uma amostra ou in situ compreendendo detectar a ligação específica da molécula de ligação específica a IL-18 livre de qualquer uma das modalidades anteriores à proteína de IL-18 livre na amostra ou in situ, que inclui as etapas de: a) colocar uma amostra ou uma parte do corpo específica ou área corporal suspeita de conter IL-18 livre em contato com a molécula de ligação específica a IL-18 livre, de qualquer uma das modalidades anteriores, que especificamente se liga à IL-18 livre, mas não à IL-18 ligada em um complexo e funciona como a molécula de captura para IL-18 livre; b) permitir que a molécula de ligação específica a IL-18 livre se ligue à IL-18 livre; c) detectar a ligação de IL-18 à molécula de ligação específica a IL-18 livre e determinar a quantidade de IL-18 livre na amostra.

[00163] Em uma outra modalidade, a invenção provê um método de diagnosticar as doenças ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades anteriores, em um paciente compreendendo detectar a ligação específica da molécula de ligação específica a IL-18 livre, de qualquer uma das modalidades anteriores, à proteína de IL-18 livre em uma amostra ou in situ, que inclui as etapas de: a) colocar uma amostra ou uma parte do corpo específica ou área corporal suspeita de conter IL-18 livre em contato com a molécula de ligação específica a IL-18 livre, de qualquer uma das modalidades anteriores, que especificamente se liga à IL-18 livre, mas não à IL-18 ligada em um complexo e funciona como a molécula de captura para IL-18 livre; b) permitir que a molécula de ligação específica a IL-18 livre se ligue à IL-18 livre; c) detectar a ligação de IL-18 à molécula de ligação específica a IL-18 livre e determinar a quantidade de IL-18 livre na amostra. d) comparar a quantidade de IL-18 livre na amostra do indivíduo que sofre da doença ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades anteriores, à quantidade na amostra de um indivíduo saudável.

[00164] Ainda uma outra modalidade, a invenção provê um método para diagnosticar uma predisposição às doenças ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades anteriores, em um paciente compreendendo detectar a ligação específica da molécula de ligação específica a IL-18 livre, de qualquer uma das modalidades anteriores, à proteína de IL-18 livre em uma amostra ou in situ, que inclui as etapas de: a) colocar uma amostra ou uma parte do corpo específica ou área corporal suspeita de conter IL-18 livre em contato com a molécula de ligação específica a IL-18 livre, de qualquer uma das modalidades anteriores, que especificamente se liga à IL-18 livre, mas não à IL-18 ligada em um complexo e funciona como a molécula de captura para IL-18 livre; b) permitir que a molécula de ligação específica a IL-18 livre se ligue à IL-18 livre; c) detectar a ligação de IL-18 à molécula de ligação específica a IL-18 livre e determinar a quantidade de IL-18 livre na amostra. d) comparar a quantidade de IL-18 livre na amostra do paciente que sofre das doenças ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades anteriores, à quantidade na amostra de um paciente saudável; em que um aumento na quantidade da dita IL-18 livre na amostra comparada a um valor de controle normal obtido de um paciente saudável indica que o dito paciente sofre ou está em risco de desenvolver uma doença ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades anteriores.

[00165] Adicionalmente, composto aqui é um método para monitorar doença residual mínima em um paciente depois do tratamento com o inibidor de IL-18, a composição farmacêutica, ou o vetor de expressão, de qualquer uma das modalidades anteriores, em que o dito método compreende: a) colocar uma amostra ou uma parte do corpo específica ou área corporal suspeita de conter IL-18 livre em contato com a molécula de ligação específica a IL-18 livre, de qualquer uma das modalidades anteriores, que especificamente se liga à IL-18 livre, mas não à IL-18 ligada em um complexo e funciona como a molécula de captura para IL-18 livre; b) permitir que a molécula de ligação específica a IL-18 livre se ligue à IL-18 livre; c) detectar a ligação de IL-18 à molécula de ligação específica a IL-18 livre e determinar a quantidade de IL-18 livre na amostra. d) comparar a quantidade de IL-18 livre na amostra do paciente que sofre das doenças ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades anteriores à quantidade na amostra de um paciente saudável; e) que um aumento na quantidade da dita IL-18 livre na amostra comparado a um valor de controle normal obtido de um paciente saudável indica que o dito paciente é ainda sofre de uma doença residual mínima.

[00166] A invenção adicionalmente se refere a um método para prever capacidade de resposta de um paciente a um tratamento com o inibidor de IL- 18, a composição farmacêutica, ou o vetor de expressão, de qualquer uma das modalidades anteriores, em que o dito método compreende: a) colocar uma amostra ou uma parte do corpo específica ou área corporal suspeita de conter IL-18 livre em contato com a molécula de ligação específica a IL-18 livre, de qualquer uma das modalidades anteriores, que especificamente se liga à IL-18 livre, mas não à IL-18 ligada em um complexo e funciona como a molécula de captura para IL-18 livre; b) permitir que a molécula de ligação específica a IL-18 livre se ligue à IL-18 livre; c) detectar a ligação de IL-18 à molécula de ligação específica a IL-18 livre e determinar a quantidade de IL-18 livre na amostra. d) comparar a quantidade de IL-18 livre na amostra do paciente que sofre das doenças ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades anteriores à quantidade na amostra de um paciente saudável; em que uma diminuição na quantidade da dita IL-18 livre na amostra indica que o dito paciente tem um alto potencial de ser responsivo ao tratamento.

[00167] Qualquer dos métodos pode compreender a etapa adicional de usar na etapa a) uma molécula de ligação específica à IL-18BP, que se liga a um diferente sítio de IL-18BP que a molécula de captura, particularmente em que uma das ditas moléculas se liga ao IL-18 sítio de ligação de IL-18BP.

[00168] Adicionalmente, qualquer dos métodos anteriores pode adicionalmente compreende a etapa adicional de determinar na amostra a presença de IL-18 BP livre usando na etapa a) uma molécula de captura específica de IL-18BP e uma molécula de detecção específica de IL-18BP, que se liga a um diferente sítio de IL-18BP que a molécula de captura, particularmente, em que uma das ditas moléculas específicas de IL-18BP se liga ao IL-18 sítio de ligação de IL-18BP, determinando na etapa c) a quantidade de IL-18 livre e total e de IL-18BP livre e total ligado à molécula de captura na amostra; e comparando na etapa d) a quantidade de IL-18 livre e/ou total e IL-18 BP livre e/ou total na amostra do paciente que sofre das doenças ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades anteriores à quantidade na amostra de um paciente saudável.

[00169] A molécula de captura usada em qualquer dos métodos anteriores pode ser a molécula de ligação específica a IL-18 livre, de acordo com qualquer uma das modalidades anteriores, particularmente a IL-18 BP, conforme aqui descrito ou o anticorpo de ligação à IL livre de acordo com a invenção e conforme aqui descrito.

[00170] A amostra usada em qualquer dos métodos anteriores pode ser uma amostra selecionada do grupo que consiste em fluido de lavagem broncoalveolar (BALF), fluidos da circulação, fluidos de secreção, tecido homogeneizado de biópsia, particularmente soro, urina, lágrima, saliva, bile, suor, exalação, expiração, catarro, fluido broncoalveolar, sebo, celular, glândula, mucosa e secreção de tecido etc.

[00171] Em uma modalidade, a quantidade de IL-18 livre na amostra de um indivíduo, particularmente um humano que sofre de qualquer das doenças aqui descritas são >5 pg/mL e até 10.000 pg/mL ou superior. Em particular, os ditos níveis elevados de IL-18 livre em uma amostra de um paciente ou indivíduo doente são na faixa de >5 pg/mL a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 100 pg/mL a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 200 pg/mL a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 300 pg/mL a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 400 pg/mL a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 500 pg/mL a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 600 pg/mL a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 700 pg/mL a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 800 pg/mL a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 900 pg/mL a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 1.000 a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 1.500 pg/mL a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 2.000 pg/mL a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 3.000 pg/mL a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 4.000 pg/mL a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 5.000 pg/mL a 10.000 pg/mL. A quantidade de IL-18 livre em soro de indivíduo saudável, particularmente um humano saudável é <5 pg/mL, particularmente <4 pg/mL, particularmente <1 pg/mL, particularmente <0,5 pg/m, particularmente abaixo do nível de detecção.

[00172] Em particular, a quantidade de IL-18 livre em amostra isolada de um indivíduo, particularmente um humano que sofre de qualquer das doenças aqui descritas são >5 pg/mL e, particularmente, até 10.000 pg/mL, enquanto que a quantidade de IL-18 livre em amostra de um indivíduo saudável, particularmente um humano saudável, é <4 pg/mL.

[00173] Em uma outra modalidade da invenção, um conjunto de biomarcadores é provido para uso em qualquer do método de detecção anterior para adicionalmente especificar as doenças ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades anteriores, para diagnosticar uma predisposição à doença ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades anteriores, para monitorar doença residual mínima em um indivíduo, ou para prever capacidade de resposta de um indivíduo a um tratamento com inibidor de IL-18, a composição farmacêutica, ou o vetor de expressão, de qualquer uma das modalidades anteriores compreendendo determinar um perfil de biomarcador e correlacionar o perfil obtido com um doença ou distúrbio específico.

[00174] Em particular, o biomarcador pode ser usado em um método para o diagnóstico da doenças ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades anteriores, para diagnosticar uma predisposição à doença ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades anteriores ou para monitorar doença residual mínima em um indivíduo, ou para prever capacidade de resposta de um indivíduo a um tratamento com inibidor de IL-18, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, o IL-18BP, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, ou a composição farmacêutica compreendendo inibidor de IL-18, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, compreendendo as etapas de: a) obter um perfil de biomarcador de um indivíduo a ser testado retirando uma amostra de um fluido corporal do dito indivíduo; b) obter um perfil de biomarcador de uma população de referência saudável; c) obter um perfil de biomarcador de uma população que sofre da dita doença ou distúrbio e d) comparar o perfil de biomarcador obtido na etapa a) com o perfil obtido na etapa b) e etapa c).

[00175] Ainda um outro objetivo da presente invenção é prover um conjunto de biomarcadores para uso no diagnóstico das doenças ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades anteriores, para uso no diagnóstico de uma predisposição à doença ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades anteriores ou para uso no monitoramento de doença residual mínima em um indivíduo, ou para prever capacidade de resposta de um indivíduo a um tratamento com o inibidor de IL-18, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, o IL-18BP, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, ou a composição farmacêutica compreendendo inibidor de IL-18, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, compreendendo a) IL-18, IL-18BP, IL-13, IL-17A, IL-8, IL-1β, IL-2, IL-12, IL-4, IL-6, INF-y, TNF-α, VEGF, EGF, HB-EGF, TGF-α, MMP-9, MMP-12, mieloperoxidase, calprotectina medido por imunoensaios, TGF-β, tecido inibidor de metaloproteinases (TIMP-1), fator de crescimento de hepatócito (HGF), fator induzido por hipóxia 1 alfa (HIF-1α), fator de von Willebrand (vWF), EN-RAGE, S- RAGE, proteína D do tensoativo, HsCRP, fibrinogênio, micropartículas endoteliais e b) gases compreendendo NO, CO, alcanos, pentanos, etanos medidos por composição do ar exalado.

[00176] Ainda um outro objetivo da presente invenção é prover um kit farmacêutico compreendendo inibidor de IL-18, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, proteína de ligação à interleucina- 18 (IL-18BP), conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, ou uma composição farmacêutica compreendendo inibidor de IL- 18, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores e um carreador e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável de acordo com a presente invenção nas formas de dosagem unitária separadas, as ditas formas sendo adequadas para a administração em quantidades efetivas.

[00177] Em uma modalidade, a presente invenção provê um kit de diagnóstico para detectar IL-18 livre, compreendendo a molécula de ligação específica a IL-18 livre, de qualquer uma das modalidades anteriores como a molécula de captura e uma segunda molécula de ligação específica à IL-18 como a molécula de detecção e, opcionalmente, uma segunda molécula de captura específica de IL-18, em que a molécula de detecção se liga aos diferentes sítios de IL-18 que a molécula de captura.

[00178] Em uma outra modalidade, um kit de diagnóstico é provido para detectar IL-18 total ou IL-18 BP total, compreendendo uma primeira molécula de ligação específica à IL-18BP, que não se liga ao sítio de ligação IL-18 de IL-18BP e uma segunda molécula de ligação específica à IL-18, que não se liga ao sítio de ligação IL-18BP de IL-18.

[00179] Também, composto aqui é um kit de diagnóstico para detectar IL-18BP livre, compreendendo uma primeira molécula de ligação específica à IL-18BP como a molécula de captura e segunda molécula de ligação específica à IL-18 como a molécula de detecção, em que a dita molécula de detecção se liga a um diferente sítio de IL-18BP que a molécula de captura.

[00180] Em uma modalidade, o kit de diagnóstico incorpora uma combinação de algumas ou todas as moléculas de ligação contidas nos kits de diagnóstico definidos anteriormente.

[00181] Ainda é um outro objetivo da presente invenção prover um kit de diagnóstico para detectar IL-18 livre, compreendendo um anticorpo específico de IL-18, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, como anticorpo de captura ou a IL-18BP como anticorpo de captura alternativa e um segundo anticorpo de detecção específico de IL-18 ou um anticorpo específico de IL-18, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores, como anticorpo de detecção e um segundo anticorpo de captura específico de IL-18, em que o anticorpo de detecção se liga aos diferentes sítios de IL-18 que a molécula de captura.

[00182] Ainda um outro objetivo da presente invenção é prover um kit de diagnóstico para detectar IL-18 total ou IL-18BP total, compreendendo um primeiro anticorpo específico de IL-18BP monoclonal que não se liga ao sítio de ligação IL-18 de IL-18BP e um segundo anticorpo específico para IL-18, que não se liga ao sítio de ligação IL-18BP de IL-18.

[00183] Ainda é um outro objetivo da presente invenção prover um kit de diagnóstico para detectar IL-18BP livre, compreendendo um primeiro anticorpo específico de IL-18BP monoclonal de captura e um anticorpo de detecção específico de IL-18BP que se liga a um diferente sítio de IL-18BP que o anticorpo de captura.

[00184] Em uma outra modalidade, a presente invenção provê um kit de diagnóstico, que compreende todos os kits de diagnóstico, conforme descrito em qualquer uma das modalidades anteriores.

[00185] A presente invenção agora provê IL-18BP, para uso no tratamento de uma doença ou distúrbio associada à IL-18 em um indivíduo que sofre de uma doença ou distúrbio como esta ou tem uma predisposição para desenvolver uma doença ou distúrbio como esta, administrando ao dito indivíduo uma quantidade terapeuticamente efetiva de pelo menos uma IL- 18BP.

[00186] IL-18BP é entendido no escopo da presente invenção por também incluir muteínas de IL-18BP, partes funcionais ou derivados de IL- 18BP, derivado circularmente permutados de IL-18BP, proteína fundidas compreendendo IL-18BP, isoformas de IL-18BP ou sais dos mesmos.

[00187] IL-18BP pode ser provida como tal ou na forma de uma composição, particularmente uma composição farmacêutica. As ditas composições podem compreender agentes medicinais adicionais, agentes farmacêuticos, carreadores, tampões, agentes dispersantes, diluentes, agentes coterapêuticos, tais como substâncias de medicamento anti-inflamatório, broncodilatador, anti-histamina, descongestionante ou antitussígeno e similares dependendo do uso e aplicação pretendidos.

[00188] Assim, a presente invenção provê IL-18BP ou uma composição farmacêutica compreendendo IL-18BP e um carreador e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável para uso no tratamento de uma doença ou distúrbio associada à IL-18 em um indivíduo que sofre de uma doença ou distúrbio como esta ou tem uma predisposição para desenvolver uma doença ou distúrbio como esta.

[00189] Adicionalmente provida é uma IL-18BP ou uma composição farmacêutica compreendendo IL-18BP e um carreador e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável de acordo com a presente invenção, para o tratamento de uma doença ou distúrbio associada à IL-18 em um indivíduo em necessidade de um tratamento como este, em que a doença ou distúrbio associada à IL-18 é causada por expressão excessiva de IL-18 em tecidos específicos e/ou compartimentos do corpo, que leva a um desequilíbrio de IL- 18/IL-18BP nos ditos tecidos e/ou compartimentos. Por exemplo, a melhor expressão de IL-18, conforme aqui descrito leva a níveis elevados de IL-18 no pulmão, soro, catarro, fluido de lavagem broncoalveolar (BALF) ou circulação do dito indivíduo comparado aos indivíduos controle saudáveis, em particular os níveis de IL-18 em catarro e/ou em soro são elevados.

[00190] A doença ou distúrbio associada à IL-18, conforme aqui descrito em várias modalidades da presente invenção é causada por expressão excessiva de IL-18. Desta maneira, a melhor expressão de IL-18, conforme aqui descrito, leva a níveis elevados de IL-18 no pulmão, soro, catarro, fluido de lavagem broncoalveolar (BALF) e/ou de um indivíduo que sofre de uma doença ou distúrbio como esta ou tem uma predisposição para desenvolver uma doença ou distúrbio como esta, comparado aos indivíduos controle saudáveis, especialmente níveis de IL-18 em catarro e/ou soro são elevados. Adicionalmente, os níveis elevados de IL-18 levam a um desequilíbrio de IL- 18/IL-18BP em um indivíduo que sofre de uma doença ou distúrbio como esta.

[00191] Em uma modalidade específica, a presente invenção provê IL- 18BP ou uma composição farmacêutica compreendendo IL-18BP e um carreador e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável para uso na compensação de um desequilíbrio de IL-18/IL-18BP em um indivíduo que sofre de uma doença ou distúrbio associada à IL-18, conforme descrito nas várias modalidades da presente invenção ou tem uma predisposição para uma doença ou distúrbio como esta, captando o excesso de IL-18. Em particular, IL-18BP reduz os níveis de IL-18 comparado a um indivíduo não tratado.

[00192] Em uma modalidade adicional, a presente invenção provê IL- 18BP ou uma composição farmacêutica compreendendo IL-18BP e um carreador e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável para uso no tratamento de doença ou distúrbio associada à IL-18 de acordo com a presente invenção, em que IL-18BP leva a uma inibição da expressão de IL-18. Em particular, IL-18BP reduz os níveis de IL-18 para os de um indivíduo não tratado.

[00193] A presente invenção adicionalmente provê IL-18BP ou uma composição farmacêutica compreendendo IL-18BP e um carreador e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável para o uso no tratamento de manifestações locais e sistêmicas induzidas por IL-18 de inflamação.

[00194] A presente invenção adicionalmente provê IL-18BP ou uma composição farmacêutica compreendendo IL-18BP e um carreador e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável para o uso no tratamento de manifestações locais e sistêmicas induzidas por IL-18 de inflamação e comorbidades associadas, tais como enfisema, inflamação do tecido, destruição do tecido, excisão pulmonar, desaparecimento da vasculatura, metaplasia de muco, hipertrofia cardíaca, diminuição de VEGF no tecido pulmonar, perda do vaso pulmonar, muscularização do vaso, deposição de colágeno, camadas de elastina aberrantes no pulmão, remodelamento da via aérea fibrótica, alargamento do espaço da via aérea, remodelamento crônico das vias aéreas e vasos pulmonares e/ou menor função pulmonar.

[00195] Em um outro aspecto da presente invenção, os níveis aumentados de IL-18, conforme descrito pela presente invenção, acionam uma melhor expressão de IFNY, IL-13 ou IL-17A em indivíduos que sofrem da dita doença ou distúrbio associada à IL-18 comparado aos indivíduos controle saudáveis. A presente invenção, assim, provê IL-18BP ou uma composição farmacêutica compreendendo IL-18BP e um carreador e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável para modulação, particularmente para a redução, a expressão e/ou produção de IFNy, IL-13 ou IL-17A em um indivíduo.

[00196] Em certas modalidades da presente invenção, IL-18BP ou uma composição farmacêutica compreendendo IL-18BP e um carreador e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável levam à inibição da ligação à IL-18 ao receptor de IL-18 (IL-18R), particularmente ligação à IL-18 ao receptor de IL-18-α (IL-18Rα).

[00197] A manifestação da doença ou distúrbio associada à IL-18 é acionada por uma resposta da citocina Th1 e/ou uma resposta da citocina Th2. A IL-18BP ou uma composição farmacêutica compreendendo IL-18BP e um carreador e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável da presente invenção, assim, leva à inibição da resposta da citocina Th1 e/ou resposta da citocina Th2.

[00198] Em certas modalidades da presente invenção, IL-18BP ou uma composição farmacêutica compreendendo IL-18BP e um carreador e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável leva à modulação das vias de sinalização a jusante dependentes de IL-18, por exemplo, como vias que regulam TNF-alfa, IL-1beta, IL-8, proteína inflamatória de macrófago-alfa (MIP-alfa), IL-12, IL-15 e produção e/ou liberação de óxido nítrico. Em particular, as ditas vias de sinalização são inibidas.

[00199] Em uma modalidade da presente invenção, IL-18BP ou uma composição farmacêutica compreendendo IL-18BP e um carreador e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável previne a ativação da capsase. Em particular, a dita caspase é caspase-1.

[00200] Em uma modalidade a presente invenção provê IL-18BP ou uma composição farmacêutica compreendendo IL-18BP e um carreador e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável para uso no tratamento de doença associada à IL-18, tais como doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), doença cardíaca e diabetes tipo 2.

[00201] Em uma modalidade a presente invenção provê IL-18BP ou uma composição farmacêutica compreendendo IL-18BP e um carreador e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável para uso no tratamento de doença associada à IL-18, tais como doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), lesão do pulmão relacionada à transfusão, displasia broncopulmonar (BPD), síndrome do desconforto respiratório agudo (ARDS), doença de Still adulto, doença de Still juvenil, doença pulmonar intersticial (ILD), fibrose pulmonar idiopática, fibrose cística, hipertensão arterial pulmonar, asma, bronquiectasia, falha cardíaca, esclerose lateral amiotrófica (ALS), doença do olho seco (DED), queratite, úlcera e abrasão da córnea, neovascularização da córnea, neovascularização intraocular patológica, irite, glaucoma, degeneração macular, síndrome de Sjogren, uveíte autoimune, doença de Behçet, conjuntivite, conjuntivite alérgica, dermatite da pálpebra, diabetes tipo 2, doença do fígado gordo não alcoólica (NAFLD), esteato-hepatite, transplante de órgão sólido e hematológico, lesão de reperfusão de isquemia, febre do mediterrâneo familiar, síndromes periódicas associadas ao receptor do fator de necrose tumoral 1, síndromes de febre periódica associada a criopirina, síndromes de hiper-IgD, gota, síndrome de Schnitzler, granulomatose de Wegener também chamada granulomatose com poliangite (GPA), tireoidite de Hashimoto, doença de Crohn, colite ulcerativa, doenças relacionadas à imunoglobulina-4 (IgG4) e terapias com célula tronco.

[00202] Em uma modalidade particular, a presente invenção provê IL- 18BP ou uma composição farmacêutica compreendendo IL-18BP e um carreador e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável para uso no tratamento de doença ou distúrbio do pulmão associada à IL-18, doença cardíaca ou distúrbio ou diabetes mellitus tipo 2, conforme aqui definido.

[00203] Mais particular, a dita doença ou distúrbio associada à IL-18 a ser tratada é manifestada no pulmão do indivíduo e pode levar ao desenvolvimento de doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD) associada com manifestações sistêmicas de inflamação e comorbidades associadas, tais como enfisema, inflamação do tecido, destruição do tecido, excisão pulmonar, desaparecimento da vasculatura, metaplasia de muco, hipertrofia cardíaca, diminuição de VEGF no tecido pulmonar, perda do vaso pulmonar, pulmonar muscularização do vaso, deposição de colágeno no pulmão, camadas de elastina aberrantes no pulmão, remodelamento da via aérea fibrótica, alargamento do espaço da via aérea, remodelamento crônico das vias aéreas e vasos pulmonares e/ou menor função pulmonar. Em particular, a dita manifestação é inflamação pulmonar induzida por fumo. Em uma modalidade específica, a presente invenção provê IL-18BP ou uma composição farmacêutica compreendendo IL-18BP e um carreador e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável de acordo com a presente invenção para uso no tratamento de doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD).

[00204] O desequilíbrio observado de IL-18/IL-18BP em um indivíduo e a doença ou distúrbio resultante, conforme aqui descrito, tais como COPD pode ser causado por tabagismo ou exposição passiva ao fumo, em particular exposição ao fumo de tabaco e/ou uma infecção viral. Em particular, exposição ao fumo de cigarro pode levar ao desenvolvimento de enfisema pulmonar e/ou inflamação induzido por fumo.

[00205] Em um outro aspecto da presente invenção, a doença ou distúrbio associada à IL-18 a ser tratada é induzida por exposição a longo prazo à poluição do ar.

[00206] A presente invenção, assim, adicionalmente provê IL-18BP ou uma composição farmacêutica compreendendo IL-18BP e um carreador e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável, para tratar remodelamento da via aérea e vascular induzido por IL-18, assim, prevenindo manifestação e progressão da doença de COPD.

[00207] Em um aspecto da presente invenção, macrófagos alveolares são uma fonte importante de nível de IL-18 aumentado. Assim, a IL-18BP ou uma composição farmacêutica compreendendo IL-18BP e um carreador e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável, conforme provido pela presente invenção, reduz a expressão e/ou produção de IL-18 por macrófagos alveolares.

[00208] A presente invenção adicionalmente provê IL-18BP ou uma composição farmacêutica compreendendo IL-18BP e um carreador e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável para prevenir e/ou inibir uma forma induzida pelo fumo de morte celular de células do tecido pulmonar e/ou células epiteliais afetadas pela doença ou distúrbio associada à IL-18, conforme aqui descrito. Em particular, a dita forma induzida de fumo de morte celular é apoptose.

[00209] Em uma modalidade da presente invenção, a composição farmacêutica da invenção e conforme aqui descrito nas várias modalidades é administrada profilaticamente.

[00210] Em uma outra modalidade da presente invenção, a composição farmacêutica da invenção e conforme aqui descrito nas várias modalidades é administrada terapeuticamente.

[00211] Em uma modalidade da presente invenção, a composição farmacêutica da invenção e conforme aqui descrito nas várias modalidades é administrado a um indivíduo que sofre de doença ou distúrbio associada à IL- 18, ou tem uma predisposição para desenvolver uma doença ou distúrbio como esta por administração sistêmica, intranasal, intraocular, intravitral, colírios, bucal, oral, transmucosal, intratraqueal, intravenosa, subcutânea, trato intraurinário, intrarretal, intravaginal, sublingual, intrabronquial, intrapulmonar, transdérmica ou intramuscular. Em particular, a composição farmacêutica da invenção e conforme aqui descrito nas várias modalidades é administrada por administração broncopulmonar.

[00212] A composição farmacêutica da invenção e conforme aqui descrito nas várias modalidades pode ser provida como um líquido, aspersão líquida, microesferas, semissólido, gel, ou pó para administração transmucosal, por exemplo, administração intranasal, bucal, oral transmucosal, intratraqueal, trato intraurinário, intravaginal, sublingual, intrabronquial, intrapulmonar e/ou transdérmica. Adicionalmente, a composição pode ser em uma forma de dosagem sólida para administrações bucal, oral transmucosal e/ou sublingual administração. Intranasal, bucal, oral intratraqueal, trato intraurinário, intravaginal, transmucosal e sublingual levam à desintegração da composição, conforme aqui descrito em uma cavidade oral na temperatura corporal e opcionalmente pode aderir ao tecido corporal da cavidade oral. Adicionalmente, a composição conforme aqui descrito adicionalmente pode incluir um ou mais excipiente, diluente, aglutinante, lubrificante, deslizante, desintegrante, agente dessensibilizante, emulsificante, adesivo mucosal, solubilizante, agente de suspensão, modificador da viscosidade, agente de tonicidade iônica, tampão, carreador, tensoativo, sabor, ou mistura dos mesmos.

[00213] Em um aspecto específico da presente invenção, a composição é formulada como um parenteral, intravenosa, comprimido, pílula, almofada de bioadesivo, gotas, esponja, película, pastilha, bala dura, pastilha, esfera, pirulito, estrutura em forma de disco, supositório ou aspersão.

[00214] Administração transmucosal é geralmente rápida em virtude do abastecimento vascular rico na mucosa e da falta de um estrato córneo na epiderme. Tal transporte de medicamento tipicamente provê um aumento rápido nas concentrações sanguíneas e similarmente evita a circulação entero- hepática e destruição imediata por ácido gástrico ou efeitos de primeira passagem parciais da parede do intestino e metabolismo hepático. Medicamentos tipicamente precisam ter exposição prolongada a uma superfície da mucosa para absorção significativa de medicamento ocorrer.

[00215] As vias transmucosais também podem ser mais efetivas que a via oral em que estas vias podem prover absorção relativamente rápida e início de ação terapêutica. Adicionalmente, as vias transmucosais podem ser preferidas para uso no tratamento de pacientes que têm dificuldade de engolir comprimidos, cápsulas, ou outros sólidos orais, ou os que têm absorção intestinal comprometida pela doença. Desta maneira, existem muitas vantagens da administração transmucosal de IL-18BP ou uma composição farmacêutica compreendendo IL-18BP e um carreador e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

[00216] Tanto a via intranasal quanto bucal, absorção de medicamento pode ser atrasada ou prolongada, ou absorção pode ser quase tão rápida quanto se um bolo intravenoso fosse administrado. Em virtude da alta permeabilidade do abastecimento de sangue rico, a via sublingual pode prover um rápido início de ação.

[00217] As composições intranasais podem ser administradas por qualquer método apropriado, de acordo com sua forma. Uma composição incluindo microesferas ou um pó pode ser administrada usando um dispositivo insuflador nasal. Exemplos destes dispositivos são bem conhecidos por versados na técnica e incluem sistemas de pó comerciais, tal como Fisons Lomudal System. Um insuflador produz uma nuvem finamente dividida do pó seco ou microesferas. O insuflador é preferivelmente provido com um mecanismo para garantir administração de uma quantidade substancialmente fixa da composição. O pó ou microesferas pode ser usado diretamente com um insuflador, que é provido com uma garrafa ou recipiente para o pó ou microesferas. Alternativamente, o pó ou microesferas pode ser preenchido em uma cápsula, tais como uma cápsula de gelatina, ou outro dispositivo de dose única adaptado para administração nasal. O insuflador, preferivelmente, tem um mecanismo para romper a cápsula ou outro dispositivo. Adicionalmente, a composição pode prover uma liberação rápida inicial do ingrediente ativo seguido por uma liberação prolongada do ingrediente ativo, por exemplo, provendo mais que um tipo de microesfera ou pó. Adicionalmente, métodos alternativos adequados para administrar uma composição na cavidade nasal serão bem conhecidos por versados na técnica. Qualquer método adequado pode ser usado. Para uma descrição mais detalhada dos métodos adequados faz-se referência a EP2112923, EP1635783, EP1648406, EP2112923 (cujos conteúdos estão aqui incorporados na íntegra pela referência).

[00218] Em uma modalidade da presente invenção, a composição farmacêutica da invenção e conforme aqui descrito nas várias modalidades pode ser adicionalmente administrada intranasalmente, isto é, por inalação e, assim, pode ser formulada em uma forma adequada para administração intranasal, isto é, como um aerossol, formulação de pó seco ou uma preparação líquida.

[00219] Exemplos de carreadores, excipientes e/ou diluentes farmacêuticos adequados são bem conhecidos na técnica e incluem, mas sem se limitar a, uma goma, um amido (por exemplo, amido de milho, amido pré- gelatinizado), um açúcar (por exemplo, lactose, manitol, sacarose, dextrose), um material celulósico (por exemplo, celulose microcristalina), um acrilato (por exemplo, polimetacrilato), carbonato de cálcio, óxido de magnésio, talco, ou misturas dos mesmos.

[00220] Carreadores farmaceuticamente aceitáveis para formulação líquida são soluções aquosa ou não aquosas, suspensões, formulações de pó seco, emulsões ou óleos. Exemplos de solventes não aquosos são propileno glicol, polietileno glicol e ésteres orgânicos injetáveis, tal como oleato de etila. Exemplos de óleos são os de origem animal, vegetal ou sintética, por exemplo, óleo de amendoim, óleo de soja, óleo de oliva, óleo de girassol, óleo de fígado de peixe, um outro óleo marinho ou um líquido de leite ou ovos.

[00221] A presente invenção também se refere à administração transpulmonar por inalação da composição farmacêutica da invenção e conforme aqui descrito nas várias modalidades é em pó seco, formulações gasosas ou voláteis na circulação sistêmica por meio do trato respiratório. Absorção é virtualmente tão rápida quanto a formulação pode ser dispensada nos alvéolos dos pulmões, uma vez que as membranas epiteliais alveolares e vasculares são muito permeáveis, fluxo sanguíneo é abundante e há uma superfície muito grande para adsorção. Por exemplo, aerossóis podem ser dispensados de inaladores embalados por pressão, de dose medida (MDIs).

[00222] A composição farmacêutica da invenção e conforme aqui descrito nas várias modalidades geralmente será administrada em uma mistura com um excipiente, diluente ou carreador farmaceuticamente aceitável selecionado com relação aos meios escolhidos de inalação e prática farmacêutica padrão.

[00223] Em uma outra modalidade da invenção, a formulação de IL- 18BP ou a formulação de uma composição farmacêutica compreendendo IL- 18BP é um pó seco, opcionalmente junto com pelo menos um carreador farmaceuticamente aceitável particulado, que pode ser um ou mais materiais conhecidos como carreadores farmaceuticamente aceitáveis, preferivelmente escolhidos de materiais conhecidos como composições de inalação de carreadores em pó seco, por exemplo, sacarídeos, incluindo monossacarídeos, dissacarídeos, polissacarídeos e álcoois de açúcar, tais como arabinose, glicose, frutose, ribose, manose, sacarose, trealose, lactose, maltose, amidos, dextrana, manitol ou sorbitol. Um carreador especialmente preferido é lactose, por exemplo, lactose mono-hidratada ou lactose anidra. O pó seco pode estar contido como doses unitárias em cápsulas, por exemplo, de gelatina ou plástico, ou em ampolas (por exemplo, de alumínio ou plástico), para uso em um dispositivo de inalação de pó seco, que pode ser um dispositivo de dose única ou de múltiplas doses, preferivelmente em unidades de dosagem junto com o carreador em quantidades para levar a um peso total de pó por cápsula de 5 mg a 50 mg. Alternativamente, o pó seco pode estar contido em um reservatório em um dispositivo de inalação de pó seco de múltiplas doses (MDDPI) adaptado para dispensação.

[00224] Qualquer outra via terapeuticamente eficaz de administração pode ser usada, por exemplo, absorção através dos tecidos epitelial ou endotelial ou por terapia genética em que uma molécula de DNA que codifica o agente ativo é administrada ao paciente (por exemplo, por meio de um vetor de expressão), que faz com que o agente ativo seja expresso e secrete in vivo.

[00225] No corpo, expressão de IL-18BP pode ser induzida modulando vias de sinalização a montante, que controlam a expressão de IL-18BP. Por exemplo, IL-18BP é especificamente induzida por IFN-gama como parte de um circuito de retorno negativo que regula a indução de IFN-gama por IL-18. Outros fatores conhecidos que são reportados para regular expressão de IL- 18BP são IL-18, IL-27, IFN-alfa e STAT1.

[00226] Assim, em uma modalidade da presente invenção, expressão celular da IL-18BP é indiretamente induzida por modificação de um ou mais vias de sinalização a montante, que controlam a expressão de IL-18BP. Em particular, expressão de IL-18BP é indiretamente induzida pela modificação de pelo menos uma via de sinalização a montante.

[00227] A invenção adicionalmente se refere a um vetor de expressão compreendendo a sequência de codificação de IL-18BP na preparação de um medicamento para o tratamento de doença ou distúrbio associada à IL-18, conforme aqui descrito em um indivíduo que sofre de uma doença ou distúrbio como esta ou tem uma predisposição para desenvolver uma doença ou distúrbio como esta.

[00228] Em uma modalidade específica, a presente invenção se refere a um vetor de expressão compreendendo a sequência de codificação de um fator regulatório, que modula vias de sinalização a montante que regulam a expressão de IL-18BP. Assim, o dito fator regulatório induz a expressão de IL-18BP modulando pelo menos uma via de sinalização a montante.

[00229] A invenção adicionalmente se refere a um vetor de expressão compreendendo a sequência de codificação de um fator regulatório, que modula vias de sinalização a montante que regulam a expressão de IL-18BP na preparação de um medicamento para o tratamento de doença ou distúrbio associada à IL-18, conforme aqui descrito em um indivíduo que sofre de uma doença ou distúrbio como esta ou tem uma predisposição para desenvolver uma doença ou distúrbio como esta.

[00230] A invenção adicionalmente se refere a um vetor de expressão compreendendo a sequência de codificação de um fator regulatório, que induz a expressão de IL-18BP para o tratamento de doença ou distúrbio associada à IL-18, conforme aqui descrito em um indivíduo que sofre de uma doença ou distúrbio como esta ou tem uma predisposição para desenvolver uma doença ou distúrbio como esta. Em particular, ela se refere a um vetor de expressão compreendendo a sequência de codificação de um fator regulatório, que induz a expressão de IL-18BP no pulmão para o tratamento de doença ou distúrbio associada à IL-18, conforme aqui descrito em um indivíduo que sofre de uma doença ou distúrbio como esta ou tem uma predisposição para desenvolver uma doença ou distúrbio como esta.

[00231] Opcionalmente, a presente invenção provê um segundo vetor de expressão compreendendo a sequência de codificação de um segundo inibidor de citocina pró-inflamatória que ocorre naturalmente ou um fator regulatório que modula pelo menos uma via de sinalização a montante que regula a expressão de das ditas citocinas pró-inflamatórias. Em particular, o dito fator regulatório induz a expressão do dito inibidor de citocina.

[00232] Em particular, a expressão de IL-18 é modulada por interferência de RNA (RNAi) ou um vetor de expressão antessentido IL-18. Mais particular, a expressão de IL-18 é modulada por interferência de RNA (RNAi), em que a expressão de IL-18 é sobrerregulada por silenciamento de gene pós-transcripcional (PTGS). Em particular, a expressão de IL-18 é sobrerregulada no pulmão do indivíduo que sofre da doença ou distúrbio conforme aqui descrito. O mecanismo de interferência de RNA compreende qualquer evento de silenciamento de gene pós-transcripcional, particularmente qualquer evento de silenciamento de gene pós-transcripcional induzido por microRNA (miRNA) ou RNA de pequena interferência (siRNA). MicroRNAs (miRNAs) e RNAs de pequena interferência (siRNAs) podem ser expressos pelo vetor de expressão de acordo com a invenção e conforme aqui descrito.

[00233] Uma abordagem de terapêutica de gene pode, assim, ser usada para tratar uma doença ou distúrbio associada à IL-18, conforme aqui descrito e conforme descrito nas várias modalidades. Desta maneira, a expressão de IL-18BP ocorre in situ, assim, diretamente neutralizando IL-18 no tecido ou células afetadas pela dita doença ou distúrbio. Em particular, a expressão de IL-18BP conforme aqui descrito é induzida no pulmão.

[00234] A composição farmacêutica da invenção e conforme aqui descrito nas várias modalidades pode ser usada para o tratamento de uma doença ou distúrbio associada à IL-18, conforme aqui descrito nas várias modalidades em medicina humana e veterinária para tratar humanos e animais, incluindo aves, primatas não humanos, cães, gatos, porcos, cabras, ovelhas, gado, cavalo, camundongos, ratos e coelhos.

[00235] Em uma modalidade específica, a presente invenção provê a composição farmacêutica da invenção conforme aqui descrito nas várias modalidades para uso no tratamento de doença ou distúrbio associada à IL-18, conforme aqui descrito nas várias modalidades, em que o indivíduo é um mamífero, em particular o indivíduo é um humano.

[00236] Em uma outra modalidade específica, a composição farmacêutica da invenção conforme aqui descrito nas várias modalidades é administrada em uma quantidade terapeuticamente efetiva com uma dose adequada de pelo menos um segundo inibidor de citocina pró-inflamatória. Em particular, o dito inibidor é específico para IL-1, IL-6, IL-13, IL-17A, IFNY ou TNFα.

[00237] Carreadores aquosos incluem água, soluções, emulsões ou suspensões alcoólicas/aquosas, incluindo salina e meios tamponados, tais como soluções de salina tamponada de fosfato, água, emulsões, tais como emulsões óleo/água, vários tipos de agentes umectantes, soluções estéreis etc. Composições compreendendo tais carreadores podem ser formulados por métodos convencionais bem conhecidos. Carreadores adequados podem compreender qualquer material que, quando combinado com o composto biologicamente ativo da invenção, retém a atividade biológica.

[00238] Esforços foram feitos na técnica para quimicamente modificar as propriedades da barreira da pele para permitir a penetração de certos agentes, melhorar a efetividade do agente sendo dispensado, melhorar tempos de dispensação, reduzir as dosagens dispensadas, reduzir os efeitos colaterais de vários métodos de dispensação, reduzir reações do paciente e assim em diante.

[00239] Com relação a isto, melhoradores de penetração foram usados para aumentar a permeabilidade da superfície dérmica aos medicamentos e são frequentemente solventes que aceitam próton, tais como sulfóxido de dimetila (DMSO) e dimetilacetamida. Outros melhoradores de penetração que foram estudados e reportados como efetivos incluem 2-pirrolidina, N,N-dietil- m-toluamida (Deet), 1-dodecal-azaciclo-heptano-2-ona, N,N- dimetilformamida, N-metil-2-pirrolidina, tioglicolato de cálcio, hexanol, ácidos e ésteres graxos, derivados de pirrolidina, derivados de 1,3-dioxanos e 1,3-dioxolanos, ácido 1-N-dodecil-2-pirrolidona-5-carboxílico, ácido 2-pentil- 2-oxo-pirrolidinacético, ácido 2-dodecil-2-oxo-1-pirrolidinacético, ácido 1- azaciclo-heptan-2-ona-2-dodecilacético e derivados de aminoálcool, incluindo derivados de 1,3-dioxanos, entre outros.

[00240] Preparações para administração transmucosal podem incluir soluções, suspensões, formulações de pó seco e emulsões aquosas ou não aquosas estéreis. Exemplos de solventes não aquosos são propileno glicol, polietileno glicol, óleos vegetais, tais como óleo de oliva e ésteres orgânicos injetáveis, tais como oleato de etila. Carreadores aquosos incluem água, soluções, emulsões ou suspensões alcoólicas/aquosas, incluindo salina e meios tamponados. Veículos transmucosa podem incluir solução de cloreto de sódio, dextrose de Ringer, dextrose e cloreto de sódio, Ringer lactado, ou óleos fixos. Conservantes e outros aditivos também podem estar presentes incluindo, por exemplo, antimicrobianos, antioxidantes, agentes quelantes e gases inertes e similares. Além do mais, a composição farmacêutica da presente invenção deve compreender carreadores proteináceos como, por exemplo, albumina sérica ou imunoglobulina, preferivelmente de origem humana.

[00241] A composição farmacêutica da invenção conforme aqui descrito nas várias modalidades pode ser administrada topicamente nas superfícies do corpo e, assim, ser formuladas em uma forma adequada para administração tópica. Formulações tópicas adequadas incluem géis, unguentos, cremes, loções, gotas e similares. Para administração tópica, a composição farmacêutica da invenção conforme aqui descrito nas várias modalidades é preparada e aplicada como uma solução, suspensão, ou emulsão em um diluente fisiologicamente aceitável com ou sem um carreador farmacêutico.

[00242] A composição farmacêutica da invenção e conforme aqui descrito nas várias modalidades também pode ser administrada como composições de liberação controlada, isto é, composições em que o ingrediente ativo é liberado durante um período de tempo depois da administração. Composições de liberação controlada ou prolongada incluem formulação em depósitos lipofílicos (por exemplo, ácidos graxos, ceras, óleos). Em uma outra modalidade, a composição é uma composição de liberação imediata, isto é, uma composição em que todo o ingrediente ativo é liberado imediatamente depois da administração.

[00243] Adicionalmente, exemplos para formulações adequadas são providos em WO 2006/085983, cujos conteúdos estão aqui incorporados na íntegra pela referência. Por exemplo, a composição farmacêutica da invenção e conforme aqui descrito nas várias modalidades da presente invenção pode ser provida como formulações lipossômicas. A tecnologia para formar suspensões lipossômicas é bem conhecida na técnica. A camada de lipídeo empregada pode ser de qualquer composição convencional e pode tanto conter colesterol quanto pode ser sem colesterol. Os lipossomas podem ser de tamanho reduzido, como por meio do uso de técnicas de sonicação e homogeneização padrão. Formulações lipossômicas contendo a composição farmacêutica da invenção conforme aqui descrito nas várias modalidades podem ser liofilizadas para produzir um liofilizado que pode ser reconstituído com um carreador farmaceuticamente aceitável, tais como água, para regenerar uma suspensão lipossômica. A composição farmacêutica da invenção conforme aqui descrito nas várias modalidades pode ser administrada ao indivíduo a uma dose adequada. O regime de dosagem será determinado pelo médico e fatores clínicos. Conforme é bem conhecido na técnica médica, dosagens para qualquer indivíduo dependem de muitos fatores, incluindo o tamanho, área superficial corporal, idade do indivíduo, do composto particular a ser administrado, sexo, tempo e via de administração, saúde geral e outros medicamentos sendo administrados concomitantemente.

[00244] Além do mais, é previsto que a composição farmacêutica da invenção deve compreender adicionalmente agentes biologicamente ativos, dependendo do uso pretendido da composição farmacêutica. Estes agentes biologicamente ativos adicionais podem ser, por exemplo, anticorpos, anticorpo fragmentos, hormônios, fatores de crescimento, enzimas, moléculas de ligação, citocinas, quimiocinas, moléculas de ácido nucleico e medicamentos. Em uma modalidade preferida, a composição farmacêutica da presente invenção é para ser coadministrada com agonista beta-adrenoreceptor de longa ação (LABA), antagonistas muscarínicos de longa ação (LAMA), esteroides, corticosteroide, glicocorticoide e inibidores de fosfodiesterase de agonistas de glicocorticoide, inibidores de quinase, citocina e inibidores de quimiocina ou antagonistas ou inibidores de protease ou combinações dos mesmos.

[00245] A dosagem da composição farmacêutica da invenção conforme aqui descrito nas várias modalidades dependerá da condição sendo tratada, da composição particular usada e outros fatores clínicos, tais como peso, tamanho e condição do indivíduo, área da superfície corporal, do composto particular ou composição a ser administrada, outros medicamentos sendo administrados concomitantemente e da via de administração.

[00246] A composição farmacêutica da invenção conforme aqui descrito nas várias modalidades pode ser administrada em combinação com outras substâncias biologicamente ativas e procedimentos para o tratamento de sintomas associados com doença associada à IL-18, tais como doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), lesão do pulmão relacionada à transfusão, displasia broncopulmonar (BPD), síndrome do desconforto respiratório agudo (ARDS), doença de Still adulto, doença de Still juvenil, doença pulmonar intersticial (ILD), fibrose pulmonar idiopática, fibrose cística, hipertensão arterial pulmonar, asma, bronquiectasia, falha cardíaca, esclerose lateral amiotrófica (ALS), doença do olho seco (DED), queratite, úlcera e abrasão da córnea, neovascularização da córnea, neovascularização intraocular patológica, irite, glaucoma, degeneração macular, síndrome de Sjogren, uveíte autoimune, doença de Behçet, conjuntivite, conjuntivite alérgica, dermatite da pálpebra, diabetes tipo 2, doença do fígado gordo não alcoólica (NAFLD), esteato-hepatite, transplante de órgão sólido e hematológico, lesão de reperfusão de isquemia, febre do mediterrâneo familiar, síndromes periódicas associadas ao receptor do fator de necrose tumoral 1, síndromes de febre periódica associada a criopirina, síndromes de hiper-IgD, gota, síndrome de Schnitzler, granulomatose de Wegener também chamada granulomatose com poliangite (GPA), tireoidite de Hashimoto, doença de Crohn, colite ulcerativa, doenças relacionadas à imunoglobulina-4 (IgG4) e terapias com célula tronco. As outras substâncias biologicamente ativas podem ser parte da mesma composição já compreendendo a composição de acordo com a invenção, na forma de uma mistura, em que a composição da invenção e a outra substância biologicamente ativa são intermisturados em ou com o mesmo solvente e/ou carreador farmaceuticamente aceitável ou podem ser providos separadamente como parte de uma composição separada, que pode ser oferecida separadamente ou junto na forma de um kit de partes.

[00247] A composição farmacêutica da invenção conforme aqui descrito nas várias modalidades pode ser administrada concomitantemente com a outra substância biologicamente ativa ou substâncias, intermitente ou sequencialmente. Por exemplo, a composição de acordo com a invenção pode ser administrada simultaneamente com uma primeira substância biologicamente ativa adicional ou sequencialmente depois ou antes da administração da dita composição. Se um esquema de aplicação for escolhido onde mais que uma substância biologicamente ativa adicional for administrada e pelo menos uma composição de acordo com a invenção, os compostos ou substâncias podem ser parcialmente administrados simultânea, parcialmente sequencialmente em várias combinações.

[00248] Assim, é um outro objetivo da presente invenção prover misturas da composição farmacêutica da invenção conforme aqui descrito nas várias modalidades, opcionalmente compreendendo uma ou mais substâncias biologicamente ativas adicionais em uma quantidade terapêutica ou profilaticamente efetiva, bem como aos métodos de usar uma composição como esta de acordo com a invenção, ou misturas dos mesmos para a prevenção e/ou tratamento terapêutico e/ou alívio dos efeitos da doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), doença cardíaca e diabetes tipo 2.

[00249] Assim, é um outro objetivo da presente invenção prover misturas da composição farmacêutica da invenção conforme aqui descrito nas várias modalidades, opcionalmente compreendendo, uma ou mais substâncias biologicamente ativas adicionais em uma quantidade terapêutica ou profilaticamente efetiva, bem como aos métodos de usar uma composição como esta de acordo com a invenção, ou misturas dos mesmos para a prevenção e/ou tratamento terapêutico e/ou alívio dos efeitos da doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), lesão do pulmão relacionada à transfusão, displasia broncopulmonar (BPD), síndrome do desconforto respiratório agudo (ARDS), doença de Still adulto, doença de Still juvenil, doença pulmonar intersticial (ILD), fibrose pulmonar idiopática, fibrose cística, hipertensão arterial pulmonar, asma, bronquiectasia, falha cardíaca, esclerose lateral amiotrófica (ALS), doença do olho seco (DED), queratite, úlcera e abrasão da córnea, neovascularização da córnea, neovascularização intraocular patológica, irite, glaucoma, degeneração macular, síndrome de Sjogren, uveíte autoimune, doença de Behçet, conjuntivite, conjuntivite alérgica, dermatite da pálpebra, diabetes tipo 2, doença do fígado gordo não alcoólica (NAFLD), esteato-hepatite, transplante de órgão sólido e hematológico, lesão de reperfusão de isquemia, febre do mediterrâneo familiar, síndromes periódicas associadas ao receptor do fator de necrose tumoral 1, síndromes de febre periódica associada a criopirina, síndromes de hiper-IgD, gota, síndrome de Schnitzler, granulomatose de Wegener também chamada granulomatose com poliangite (GPA), tireoidite de Hashimoto, doença de Crohn, colite ulcerativa, doenças relacionadas à imunoglobulina-4 (IgG4) e terapias com célula tronco.

[00250] A outra substância biologicamente ativa ou composto pode exercer seu efeito biológico pelo mesmo mecanismo ou um similar ao da composição de acordo com a invenção ou por um mecanismo não relacionado de ação ou por inúmeros mecanismos relacionados e/ou não relacionados de ação.

[00251] Geralmente, o outro composto biologicamente ativo pode incluir anticorpos criados contra e ligação ao INF-gama, IL-17A, IL-13, IL- 1beta, IL-6, IL-2, IL-4, IL-12, TNF-alfa Em particular, a mistura de acordo com a invenção pode compreender IL-18BP (IL-18BP) ou uma composição farmacêutica compreendendo IL-18BP (IL-18BP) e um carreador e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável de acordo com a invenção e, conforme aqui descrito.

[00252] Dosagens adequadas da composição farmacêutica da invenção conforme aqui descrito nas várias modalidades variarão dependendo da condição, da idade, espécies do indivíduo e podem ser prontamente determinadas por versados na técnica. As dosagens diárias totais empregadas tanto em medicina veterinária quanto humana adequadamente serão na faixa de 0,01 a 2.000 mg/kg de peso corporal, preferivelmente de 0,1 a 1.000 mg/kg de peso corporal, preferivelmente de 1 a 100 mg/kg e estas podem ser administradas como doses únicas e divididas e, além do mais, o limite superior também pode ser excedido quando isto deve ser indicado. Tal dosagem será ajustada às necessidades individuais em cada caso particular incluindo o composto(s) específico sendo administrado, da via de administração, da condição sendo tratada, bem como o indivíduo sendo tratado. Entretanto, os compostos também podem ser administrados como preparações de depósito (implantes, formulações de liberação lenta, etc.) semanalmente, mensalmente ou em intervalos mais longos. Em tais casos a dosagem será muito maior a diária e tem que ser adaptada à forma de administração, o peso corporal e da indicação concreta. A dosagem apropriada pode ser determinada conduzindo testes de modelo convencional, preferivelmente modelos animais. Uma dosagem efetiva de ingrediente ativo(s) depende pelo menos da natureza da condição sendo tratada, toxicidade, se o composto(s) é usado profilaticamente ou contra uma infecção ou condição ativa, do método de dispensação e da formulação farmacêutica e será determinada pelo médico usando estudos de escalonamento de dose convencionais. Ela pode ser esperada como sendo de cerca de 0,01 mg a cerca de 1 g/kg de peso corporal por dia. Por exemplo, para a dispensação tópica, a dosagem candidata diária para um humano adulto de aproximadamente 70 kg de peso corporal variará de cerca de 1 mg a cerca de 500 mg, geralmente entre cerca de 5 mg e cerca de 40 mg e pode ter a forma de dosagens únicas ou múltiplas ou sítios de administração. Para dispensação intranasal, a dosagem candidata pode ser esperada como de cerca de 0,01 mg a cerca de 1 g/kg de peso corporal por dia.

[00253] Adicionalmente, derivados funcionais de IL-18BP podem ser conjugados aos polímeros de maneira a melhorar as propriedades da proteína, tais como a estabilidade, meia-vida, biodisponibilidade, tolerância pelo corpo humano, ou imunogenicidade. Para alcançar este objetivo, IL18-BP pode ser ligada, por exemplo, a polietilenoglicol (PEG). PEGuilação pode ser realizada por métodos conhecidos, descritos em WO 92/13095, por exemplo.

[00254] Portanto, em uma outra modalidade da presente invenção, IL- 18BP é PEGuilado.

[00255] Ainda uma outra modalidade da invenção, IL-18BP é uma proteína fundida compreendendo toda ou parte de uma IL-18BP, que é fundida a toda ou parte de uma imunoglobulina.

[00256] Em uma modalidade adicional da invenção, a IL-18BP é PEGuilada, fundida a toda ou parte de uma imunoglobulina, preferivelmente à região constante de uma imunoglobulina e em que a proteína fundida ainda é capaz de se ligar à IL-18. Mais especificamente, a imunoglobulina pode ser do isótipo IgG1 ou IgG2.

[00257] Versados na técnica entenderão que as proteínas de fusão resultantes retêm a atividade biológica de IL-18BP, em particular a que se liga à IL-18. A fusão pode ser direta ou por meio de um peptídeo ligante curto, que pode ter desde 1 a 3 resíduos de aminoácido de comprimento ou mais, por exemplo, 13 resíduos de aminoácido de comprimento. O dito ligante pode ser um tripeptídeo da sequência E-F-M (Glu-Phe-Met) (SEQ ID NO: 9), por exemplo, ou uma sequência de ligantes de 13 aminoácidos compreendendo Glu-Phe-Gli-Ala-Gli-Leu-Val-Leu-Gli-Gli-Gln-Phe-Met (SEQ ID NO: 8) introduzida entre a sequência de IL-18BP e a sequência de imunoglobulinas. A proteína de fusão resultante tem melhores propriedades, tais como um maior tempo de residência em fluidos corporais (meia-vida), maior atividade específica, maior nível de expressão, ou a purificação da proteína de fusão é facilitada.

[00258] Preferivelmente, ela é fundida nas regiões de cadeia pesada, como os domínios CH2 e CH3 de IgG1 humana, por exemplo. A geração das proteínas de fusão específicas compreendendo IL-18BP e uma porção de uma imunoglobulina são descritas no exemplo 11 de WP99/09063, por exemplo. Outras isoformas de moléculas de Ig também são adequadas para a geração de proteínas de fusão de acordo com a presente invenção, tais como isoformas IgG2 ou IgG4, ou outras classes de Ig, como IgM ou IgA, por exemplo. Proteínas de fusão podem ser monoméricas ou multiméricas, hetero ou homomultiméricas.

[00259] Em certas modalidades adicionais, a presente invenção provê um método para tratar um indivíduo que sofre ou tem uma predisposição para desenvolver uma doença ou distúrbio associada com expressão excessiva de IL-18, conforme aqui descrito em várias modalidades da presente invenção, compreendendo administrar ao dito indivíduo uma quantidade terapeuticamente efetiva da composição farmacêutica da invenção conforme aqui descrito nas várias modalidades.

[00260] Ensaios sorológicos são bem conhecidos na técnica e se tornaram ferramentas úteis para a detecção de antígenos em fluidos corporais, tais como soro, fluido de lavagem broncoalveolar (BAL) e catarro. Entretanto, até agora, não existe nenhum ensaio de diagnostico funcional para a detecção de IL-18 por anticorpos específicos. Assim, há uma necessidade específica de um método de diagnóstico para a detecção de IL-18 em fluido corporal, particularmente no soro.

[00261] A presente invenção, assim, descreve métodos e kits para a detecção e diagnóstico das doenças ou condições associadas à IL-18, conforme aqui descrito, para diagnosticar uma predisposição a uma doença ou condição associada à IL-18, conforme aqui descrito ou para monitorar doença residual mínima em um indivíduo ou para prever capacidade de resposta de um indivíduo a um tratamento com a composição farmacêutica da invenção conforme aqui descrito nas várias modalidades é e conforme aqui descrito anteriormente. Estes métodos incluem métodos imunológicos comumente conhecidos usados para detectar ou quantificar substâncias em amostras biológicas ou em uma condição in situ.

[00262] Em uma modalidade a presente invenção adicionalmente descreve um método para o diagnóstico de doença associada à IL-18, conforme aqui descrito, ou para diagnosticar uma predisposição a uma doença associada à IL-18, conforme aqui descrito, ou para monitorar doença residual mínima em um indivíduo ou para prever capacidade de resposta de um indivíduo a um tratamento com IL-18BP ou uma composição farmacêutica compreendendo IL-18BP (IL-18BP) e um carreador e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável de acordo com qualquer uma das modalidades anteriores, compreendendo as etapas: a) obter uma amostra de fluido corporal de um indivíduo que sofre de uma doença como esta; b) testar a dita amostra com relação à presença de IL-18 usando o IL-18BP conforme aqui descrito ou o anticorpo específico de IL-18 de acordo com a presente invenção como molécula de captura; c) determinar a quantidade de IL-18 ligada à molécula de captura na amostra; d) comparar a quantidade de IL-18 na amostra do indivíduo que sofre de uma doença como esta à quantidade na amostra de um indivíduo saudável.

[00263] A quantidade de IL-18 livre no soro isolado de um indivíduo, particularmente um humano, que sofrem da dita doença varia de 5 a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 100 a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 200 a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 300 a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 400 a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 500 a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 600 a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 700 a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 800 a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 900 a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 1.000 a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 1.500 a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 2.000 a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 3.000 a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 4.000 a 10.000 pg/mL, particularmente na faixa de 5.000 a 10.000 pg/mL. A quantidade de IL-18 livre no soro do indivíduo saudável, particularmente um humano saudável é <40 pg/mL, particularmente <30 pg/mL, particularmente <25 pg/mL, particularmente <20 pg/mL, particularmente <10 pg/mL, particularmente <5 pg/mL, particularmente <1 pg/mL, particularmente <0,5 pg/mL. Assim, um indivíduo tendo uma concentração de IL-18 detectável no soro entre 5 a 10.000 pg/mL sofre da doença associada à IL-18, conforme aqui descrito. A quantidade de IL-18 no soro e outros fluidos corporais pode ser determinada pelo método de diagnóstico aqui descrito usando uma curva padrão linear, que é calculada para concentrações de IL-18 pré-definidas na faixa de 5 a 200 pg/mL.

[00264] Diagnóstico de uma doença ou condição associada à IL-18 ou de uma predisposição a uma doença ou condição associada à IL-18, conforme aqui descrito em um indivíduo, pode ser alcançado detectando a ligação de IL-18BP, conforme aqui descrito, à IL-18 ou a ligação imunoespecífica de um anticorpo monoclonal ou um fragmento ativo do mesmo, conforme aqui descrito, a um epítopo de IL-18 em uma amostra ou in situ, que inclui colocar a amostra ou uma parte do corpo específica ou área corporal suspeita de conter o IL-18 antígeno em contato com IL-18BP e/ou um anticorpo, que se liga a um epítopo da proteína de IL-18 ou um fragmento do mesmo, permitindo que a IL-18BP ou o anticorpo se ligue ao antígeno de IL-18 para formar um complexo imunológico, detectar a formação do complexo imunológico e correlacionar a presença ou ausência do complexo imunológico com a presença ou ausência de antígeno de IL-18 na amostra ou parte do corpo específica ou área, opcionalmente comparar a quantidade do dito complexo imunológico a um valor de controle normal, em que um aumento na quantidade do dito agregado comparado a um valor de controle normal indica que o dito indivíduo sofre ou está em risco de desenvolver uma doença ou condição associada à IL-18.

[00265] O monitoramento da doença residual mínima em um indivíduo depois do tratamento com IL-18BP ou uma composição farmacêutica compreendendo IL-18BP e um carreador e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável de acordo com qualquer uma das modalidades anteriores e, conforme aqui descrito anteriormente, pode ser alcançado detectando a ligação de IL-18BP aqui descrita à IL-18 ou a ligação imunoespecífica de um anticorpo monoclonal ou um fragmento ativo do mesmo aqui descrito a um epítopo da proteína de IL-18 ou um fragmento do mesmo em uma amostra ou in situ, que inclui colocar a amostra ou uma parte do corpo específica ou área corporal suspeita de conter o IL-18 antígeno em contato com o IL-18BP e/ou o anticorpo conforme aqui descrito que se liga a um epítopo da proteína de IL-18 ou um fragmento do mesmo, permitindo que o IL-18BP e/ou o anticorpo se ligue ao antígeno de IL-18 para formar um complexo imunológico, detectar a formação do complexo imunológico e correlacionar a presença ou ausência do complexo imunológico com a presença ou ausência do antígeno de IL-18 na amostra ou parte do corpo específica ou área, opcionalmente comparar a quantidade do dito complexo imunológico a um valor de controle normal, em que um aumento na quantidade do dito agregado comparado a um valor de controle normal indica que o dito indivíduo ainda pode sofrer de uma doença residual mínima.

[00266] A previsão da capacidade de resposta de um indivíduo a um tratamento com a composição farmacêutica da invenção conforme aqui descrito nas várias modalidades pode ser alcançada detectando a ligação de IL-18BP conforme aqui descrito à IL-18 ou a ligação imunoespecífica de um anticorpo monoclonal ou um fragmento ativo do mesmo conforme aqui descrito a um epítopo da proteína de IL-18 ou um fragmento do mesmo em uma amostra ou in situ, que inclui colocar a amostra ou uma parte do corpo específica ou área corporal suspeita de conter o antígeno de IL-18 em contato com o IL-18BP e/ou o anticorpo que se liga a um epítopo da proteína de IL- 18 ou um fragmento do mesmo, permitindo que a IL-18BP e/ou anticorpo se ligue ao antígeno de IL-18 para formar um complexo imunológico, detectar a formação do complexo imunológico e correlacionar a presença ou ausência do complexo imunológico com a presença ou ausência do antígeno de IL-18 na amostra ou parte do corpo específica ou área, opcionalmente comparar a quantidade do dito complexo imunológico antes e depois do início de ação do tratamento, em que uma diminuição na quantidade do dito agregado indica que o dito indivíduo tem um alto potencial de ser responsivo ao tratamento.

[00267] Amostras biológicas que podem ser usadas no diagnóstico de uma doença ou condição associada à IL-18, conforme aqui descrito, para diagnosticar uma predisposição a uma doença ou condição associada à IL-18 ou para monitorar doença residual mínima, conforme aqui descrito, em um indivíduo ou para prever capacidade de resposta de um indivíduo a um tratamento com a composição farmacêutica da invenção conforme aqui descrito nas várias modalidades são, por exemplo, fluidos, tais como soro, plasma, saliva, secreções gástricas, muco, líquido cefalorraquidiano, fluido linfático e similares ou amostras de tecido ou célula obtidas de um organismo, tais como tecido neural, cerebral, pulmonar, cardíaco ou vascular. Para determinar a presença ou ausência do antígeno de IL-18, particularmente do antígeno de IL-18 livre, em uma amostra qualquer imunoensaio conhecido por versados na técnica pode ser usado (Ver Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory, New York 1988 555612), tais como, por exemplo, ensaios que utilizam métodos de detecção indiretos que usam reagentes secundários de detecção, ensaios ELISA e de imunoprecipitação e aglutinação. Uma descrição detalhada destes ensaios é, por exemplo, dada em WO96/13590 a Maertens e Stuyver, Zrein et al. (1998) e WO96/29605.

[00268] Para diagnóstico in situ, a IL-18BP conforme aqui descrito e/ou o anticorpo específico de IL-18 ou qualquer parte ativa e funcional do mesmo, conforme aqui descrito, pode ser administrado ao organismo a ser diagnosticado por métodos conhecidos na técnica, tais como, por exemplo, injeção intravenosa, intranasal, intraperitoneal, intracerebral, intrarterial, de maneira tal que uma ligação específica entre a IL-18BP e/ou o anticorpo específico com uma região eptitópica no antígeno de IL-18 possa ocorrer. O complexo IL18BP/antígeno ou anticorpo/antígeno pode ser detectado através de uma marca anexada ao anticorpo ou um fragmento funcional do mesmo.

[00269] Os imunoensaios usados em aplicações de diagnóstico ou em aplicações para diagnosticar uma predisposição a uma doença ou condição associada à IL-18, conforme aqui descrito, ou para monitorar doença residual mínima em um indivíduo ou para prever capacidade de resposta de um indivíduo a um tratamento com a composição farmacêutica da invenção, conforme aqui descrito, nas várias modalidades tipicamente dependem dos antígenos, anticorpos marcados, ou reagentes secundários para detecção. Estas proteínas ou reagentes podem ser marcadas com compostos geralmente conhecidos por versados na técnica incluindo enzimas, radioisótopos e substâncias fluorescentes, luminescentes e cromogênicas incluindo partículas coloridas, tais como ouro coloidal e grânulos de látex. Destes, marcação radioativa pode ser usada para quase todos os tipos e ensaios e com mais variações. Marcas conjugadas à enzima são particularmente usadas quando radioatividade deve ser evitada ou quando resultados rápidos são necessários. Fluorocromos, embora requeiram equipamentos caros para seu uso, proveem um método muito sensível de detecção. Anticorpos usados nestes ensaios incluem anticorpos monoclonais, anticorpo policlonais e anticorpos policlonais purificados por afinidade.

[00270] Alternativamente, o anticorpo pode ser marcado indiretamente por reação com substâncias marcadas que têm uma afinidade para imunoglobulina, tais como proteína A ou G ou anticorpos secundários. O anticorpo pode ser conjugado com uma substância secundária e detectado com uma terceira substância marcada tendo uma afinidade para a substância secundária conjugada ao anticorpo. Por exemplo, o anticorpo pode ser conjugado à biotina e o conjugado anticorpo-biotina detectado usando avidina ou estreptavidina marcada. Similarmente, o anticorpo pode ser conjugado a um hapteno e o conjugado anticorpo-hapteno detectado usando anticorpo anti- hapteno marcado.

[00271] Versados na técnica saberão destas e outras marcas adequadas que podem ser empregadas de acordo com a presente invenção. A ligação destas marcas aos anticorpos ou fragmentos dos mesmos pode ser realizada usando técnicas padrão comumente conhecidas por versados na técnica. Técnicas típicas são descritas por Kennedy, J. H., et al.,1976 (Clin. Chim. Acta 70:1-31) e Schurs, A. H. W. M., et al. 1977 (Clin. Chim Acta 81:1-40). Técnicas de acoplamento mencionadas no último são o método do glutaraldeído, o método do periodato, o método da dimaleimida e outros, todos os quais estão aqui incorporados pela referência.

[00272] Imunoensaios atuais utilizam um método de anticorpo duplo para detectar a presença de um analito, em que o anticorpo de captura é marcado indiretamente por reatividade com um segundo anticorpo que foi marcado com uma marca detectável. O segundo anticorpo é preferivelmente um que se liga aos anticorpos do animal a partir do qual o anticorpo monoclonal é derivado. Em outras palavras, se o anticorpo monoclonal for um anticorpo de camundongo, então o segundo anticorpo marcado é um anticorpo anticamundongo. Para o anticorpo monoclonal a ser usado no ensaio descrito a seguir, esta marca é preferivelmente uma esfera revestida com anticorpo, particularmente uma esfera magnética. Para o anticorpo policlonal a ser empregado no imunoensaio descrito aqui, a marca é preferivelmente uma molécula detectável, tais como uma substância radioativa, fluorescente ou um eletroquimioluminescente.

[00273] Um sistema de anticorpo duplo alternativo, frequentemente referido como sistemas de formato rápido, em virtude de eles serem adaptados para determinações rápidas da presença de um analito, também pode ser empregado no escopo da presente invenção. O sistema requer alta afinidade entre o anticorpo e o analito. De acordo com uma modalidade da presente invenção, a presença do antígeno de IL-18 é determinada usando um par de anticorpos, cada um específico para antígeno de IL-18. Um dos ditos pares de anticorpos é referido aqui como um “anticorpo detector” e o outro do dito par de anticorpos é referido aqui como um “anticorpo de captura”. O anticorpo monoclonal da presente invenção pode ser usado tanto como um anticorpo de captura quanto como um anticorpo detector. O anticorpo monoclonal da presente invenção também pode ser usado tanto como anticorpo de captura quanto detector, junto em um único ensaio. Uma modalidade da presente invenção, assim, usa o método de prensa de anticorpo duplo para detectar antígeno de IL-18 em uma amostra de fluido biológico. Neste método, o analito (antígeno de IL-18) é prensado entre o anticorpo detector e o anticorpo de captura, o anticorpo de captura sendo irreversivelmente imobilizado em um suporte sólido. O anticorpo detector conteria uma marca detectável, de maneira a identificar a presença da prensa anticorpo-analito e, assim, a presença do analito.

[00274] Substâncias de fase sólida exemplares incluem, mas sem se limitar a, placas de microtitulação, tubos de teste de poliestireno, esferas e lâminas de plástico ou vidro que são bem conhecidos no campo de radioimunoensaio e imunoensaio enzimático. Métodos para acoplar anticorpos às fases sólidas também são bem conhecidos por versados na técnica. Mais recentemente, inúmeros materiais porosos, tais como náilon, nitrocelulose, acetato de celulose, fibras de vidro e outros polímeros porosos foram empregados como suportes sólidos.

[00275] A presente invenção também se refere a um kit de diagnóstico para detectar antígeno de IL-18 em uma amostra biológica. Além do mais, a presente invenção se refere ao último kit de diagnóstico que, além de uma composição definida anteriormente, também compreende um reagente de detecção definido anteriormente. O termo “kit de diagnóstico” no geral se refere a qualquer kit de diagnóstico conhecido na técnica. Mais especificamente, o último termo se refere a um kit de diagnóstico descrito em Zrein et al. (1998).

[00276] Ainda é um outro objetivo da presente invenção prover imunossondas inéditas e kits de teste para detecção e diagnóstico de doenças e condições associadas à IL-18, aqui descrito compreendendo IL-18BP aqui descrito antes ou anticorpos IL-18BP específicos aqui descritos antes. Para imunossondas, o IL-18BP ou os anticorpos são direta ou indiretamente anexados a uma molécula reportadora adequada, por exemplo, uma enzima ou um radionuclídeo. O kit de teste inclui um recipiente que mantém a IL-18BP e/ou um ou mais anticorpos e instruções para usar a IL-18BP e/ou os anticorpos para os propósitos de se ligar à antígeno de IL-18 para formar um complexo imunológico e detectar a formação do complexo imunológico, de maneira tal que a presença ou ausência do complexo imunológico correlacione com a presença ou ausência do antígeno de IL-18.

[00277] De acordo com o anterior, a invenção também provê um kit farmacêutico compreendendo a composição farmacêutica da invenção conforme aqui descrito nas várias modalidades em formas de dosagem unitária separadas, as ditas formas sendo adequadas para administração em quantidades efetivas. Um kit como este adequadamente adicionalmente compreende um ou mais dispositivos de inalação para administração da composição farmacêutica da invenção conforme aqui descrito nas várias modalidades. Por exemplo, o kit pode compreender um ou mais dispositivos de inalação de pó seco adaptados para dispensar pó seco de uma cápsula, junto com cápsulas contendo um pó seco compreendendo uma unidade de dosagem da composição farmacêutica da invenção conforme aqui descrito nas várias modalidades. Em um outro exemplo, o kit pode compreender um dispositivo de inalação de pó seco de múltiplas doses contendo no reservatório do mesmo um pó seco compreendendo um dispositivo de inalação de pó seco de múltiplas doses contendo no reservatório do mesmo um pó seco compreendendo a composição farmacêutica da invenção conforme aqui descrito nas várias modalidades.

DEFINIÇÕES

[00278] Os termos e expressões técnicos usados no escopo deste pedido de patente geralmente têm o significado comumente aplicado a eles na técnica pertinente, se não de outra forma aqui indicado a seguir.

[00279] Da forma usada neste pedido de patente e nas modalidades em anexo, as formas singulares “um”, “uma”, “o” e “a” incluem referentes no plural, a menos que o contexto claramente indique de outra forma. Assim, por exemplo, referência a “um composto” inclui um ou mais compostos.

[00280] Os termos “tratamento”, “tratar” e similares são usados aqui geralmente para significar a obtenção de um efeito farmacológico e/ou fisiológico desejado. O efeito pode ser profilático em termos de prevenir completa ou parcialmente uma doença ou sintoma do mesmo e/ou pode ser terapêutico em termos de curar parcial ou completamente uma doença e/ou efeitos adversos atribuídos à doença. O termo “tratamento” da forma aqui usada cobre qualquer tratamento de uma doença em um indivíduo e inclui: (a) evitar que uma doença, isto é, relacionada a uma resposta imune indesejada ocorra em um indivíduo que pode ser predisposto à doença; (b) inibir a doença, isto é, deter seu desenvolvimento; ou (c) aliviar a doença, isto é, causando regressão da doença (d) reverter os sintomas da doença, isto é, levando à recuperação do tecido danificado.

[00281] A expressão “proteína de ligação à IL-18 (IL-18BP)” da forma aqui usada inclui a proteína de comprimento total, uma muteína, fragmento, peptídeo, derivado funcional, fragmento funcional, fração, derivado circularmente permutado, proteína fundida, isoforma ou um sal dos mesmos.

[00282] O termo “IL-18 livre” da forma aqui usada significa proteína da interleucina-18 monomérica, solúvel e não complexada.

[00283] Uma “imunoglobulina” é uma molécula tetramérica. Em uma imunoglobulina que ocorre naturalmente, cada tetrâmero é composto de dois pares idênticos de cadeias de polipeptídeo, cada par tendo uma cadeia “leve” (cerca de 25 kDa) e uma “pesada” (cerca de 50 a 70 kDa). A porção amino-terminal de cada cadeia inclui uma região variável de cerca de 100 a 110 ou mais aminoácidos principalmente responsáveis pelo reconhecimento do antígeno. A porção carbóxi-terminal de cada cadeia define uma região constante principalmente responsável pela função efetora. Cadeias leves humanas são classificadas como cadeias leves [kapa] e [lambda]. Cadeias pesadas são classificadas como [micro], [Delta], [gama], [alfa], ou [épsilon] e definem o isótipo do anticorpo como IgM, IgD, IgG, IgA e IgE, respectivamente. Nas cadeias leve e pesada, as regiões variável e constante são unidas por uma região “J” de cerca de 12 2 ou mais aminoácidos, com a cadeia pesada também incluindo uma região “D” de cerca de 10 mais aminoácidos. Ver, geralmente, Fundamental Imunology Ch. 7 (Paul, W., ed., 2a ed. Raven Press, N.Y. (1989)) (incorporada pela referência na íntegra para todos os propósitos). As regiões variáveis de cada par cadeia leve/pesada formam o sítio de ligação ao anticorpo, de maneira tal que uma imunoglobulina intacta tenha dois sítios de ligação.

[00284] Cadeias de imunoglobulina apresentam a mesma estrutura geral de regiões de armação relativamente conservadas (FR) unidas por três regiões hipervariáveis, também chamada regiões que determinam complementariedade ou CDRs. As CDRs das duas cadeias de cada par são alinhadas pelas regiões da armação, possibilitando a ligação a um epítopo específico. A partir de N-terminal a C-terminal, tanto cadeias leves quanto pesadas compreendem os domínios FR1, CDR1, FR2, CDR.2, FR3, CDR3 e FR4. A atribuição dos aminoácidos para cada domínio é de acordo com as definições de Sequências Kabat das Proteínas de Interesse Imunológico (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987 e 1991)), ou Chothia & Lesk J. Mol. Biol, 196:901-917 (1987); Chothia et al. Nature 342:878-883 (1989).

[00285] Os termos “anticorpo” ou “anticorpos” da forma aqui usada são termos reconhecidos na técnica e se referem às moléculas ou fragmentos ativos de moléculas que se ligam aos antígenos conhecidos, particularmente ás moléculas de imunoglobulina e às porções imunologicamente ativas das moléculas de imunoglobulina, isto é, moléculas que contêm um sítio de ligação que imunoespecificamente se liga a um antígeno. A imunoglobulina de acordo com a invenção pode ser de qualquer tipo (IgG, IgM, IgD, IgE, IgA e IgY) ou classe (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2) ou subclasses da molécula de imunoglobulina.

[00286] O termo “Anticorpo”, para o propósito da presente invenção, se refere a uma imunoglobulina intacta ou a uma porção de ligação ao antígeno do mesmo que compete com o anticorpo intacto para ligação específica. Em particular, “Anticorpos”, no escopo da presente invenção, devem incluir anticorpo monoclonal, policlonal, quimérico, de cadeia única, biespecífico ou biefetivo, simianizado, humano e humanizado.

[00287] Exemplos de porções que se ligam ao antígeno incluem, inter alia, fragmentos Fab, Fab’, F(ab')2, scFv, dAb e Fv, incluindo os produtos de uma livraria de expressão de imunoglobulina Fab e fragmentos de ligação ao epítopo de qualquer dos anticorpos e fragmentos mencionados anteriormente. Adicionalmente, exemplos das porções de ligação ao antígeno incluem fragmentos da região que determina complementariedade (CDR), diacorpos e polipeptídeos que contêm pelo menos uma porção de uma imunoglobulina que é suficiente para conferir ligação ao antígeno específica ao polipeptídeo.

[00288] Tais fragmentos ativos podem ser derivados de um anticorpo da presente invenção por inúmeras técnicas conhecidas na técnica. Por exemplo, anticorpos monoclonais purificados podem ser clivados com uma enzima, tais como pepsina e submetidos a filtração em gel por HPLC. A fração contendo fragmentos Fab apropriada então pode ser coletada e concentrada por filtração em membrana e similares. Para descrição adicional das técnicas gerais para o isolamento dos fragmentos ativos dos anticorpos, ver, por exemplo, Khaw, B. A. ct al. J. Nucl. Med. 23:1011-1019 (1982); Rousseaux et al. Methods Enzymology, 121:663-69, Academic Press, 1986.

[00289] Um “anticorpo humanizado” se refere a um tipo de anticorpo modificado por engenharia tendo seus CDRs derivadas de uma imunoglobulina de doador não humano. Em uma modalidade, certos aminoácidos nos domínios de armação e constante das cadeias pesada e leve foram mutados de maneira a evitar ou anular uma resposta imune em humanos. Em uma modalidade alternativa, um anticorpo humanizado pode ser produzido fundindo os domínios constantes de um anticorpo humano aos domínios variáveis de uma espécie não humana. Exemplos de como preparar anticorpos humanizados podem ser encontrados nas patentes dos Estados Unidos Nos. 6.054.297, 5.886.152 e 5.877.293.

[00290] Ainda uma outra modalidade da invenção, um “anticorpo humanizado” se refere a um tipo de anticorpo modificado por engenharia tendo suas CDRs derivadas de uma imunoglobulina de doador não humano inserida em um “andaime” do anticorpo humano sendo derivado de uma (ou mais) imunoglobulina(s) humana(a). Além do mais, resíduos de suporte de armação podem ser alterados para conservar a afinidade de ligação. Métodos para obter “anticorpos humanizados” são bem conhecidos por versados na técnica. (ver, por exemplo, Queen et al., Proc. Natl Acad Sci USA, 86:1002910032 (1989), Hodgson et al., Bio/Technology, 9:421 (1991)).

[00291] Um “anticorpo humanizado” também pode ser obtido por uma abordagem de engenharia genética inédita que possibilita a produção de anticorpos policlonais tipo humanos maduros para afinidade, tais como, por exemplo, coelhos (ver, por exemplo, patente U.S. No. 7.129.084).

[00292] O termo “anticorpo monoclonal” também é bem reconhecido na técnica e se refere a um anticorpo que é produzido em massa no laboratório de um único clone e que reconhece somente um antígeno. Anticorpos monoclonais são tipicamente preparados fundindo uma célula B que produz anticorpo normalmente de curta duração a uma célula de crescimento rápido, tal como uma célula cancerígena (algumas vezes referida como uma célula “imortal”). A célula híbrida resultante, ou hibridoma, se multiplica rapidamente, criando um clone que produz grandes quantidades do anticorpo. Para o propósito da presente invenção, “anticorpo monoclonal” também devem compreender anticorpos que são produzidos por um clone mãe que ainda não atingiu monoclonalidade completa.

[00293] O termo “CDRs” se refere à região hipervariável de um anticorpo. O termo “região hipervariável”, “HVR”, ou “HV”, quando usado aqui se refere às regiões de um domínio variável do anticorpo que são hipervariáveis em sequência e/ou forma laços estruturalmente definidos. Geralmente, anticorpos compreendem seis regiões hipervariáveis; três no VH (H1, H2, H3) e três no VL (L1, L2, L3). Inúmeras delineações da região hipervariável estão em uso e estão aqui englobadas. As regiões que determinam complementariedade Kabat são baseadas na variabilidade da sequência e são as mais comumente usadas (Kabat et al., Sequências das Proteínas de Interesse Imunológico, 5a Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)).

[00294] As letras “HC” e “LC” que precedem o termo “CDR”, respectivamente, se referem a uma CDR de uma cadeia pesada e uma cadeia leve, Chothia, ao contrário, se refere à localização dos laços estruturais (Chothia e Lesk J. Mol. Biol.196:901-917 (1987)). As regiões hipervariáveis AbM representam um compromisso entre as CDRs Kabat e laços estruturais de Chothia e são usadas pelo software de modelamento de anticorpo Oxford Molecular's AbM. As regiões hipervariáveis de “contato” são baseadas em uma análise das estruturas de cristal do complexo disponível.

[00295] O termo “numeração do resíduo de domínio variável como em Kabat” ou “numeração da posição do aminoácido como em Kabat”, e variações do mesmo, se refere ao sistema de numeração usado para domínios variáveis de cadeia pesada ou domínios variáveis de cadeia leve da compilação dos anticorpos em Kabat et al., Sequências das Proteínas de Interesse Imunológico, 5a Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991).

[00296] “Anticorpo funcionalmente equivalente” é entendido no escopo da presente invenção por se referir a um anticorpo que substancialmente compartilha pelo menos uma propriedade funcional principal com um anticorpo, por exemplo, propriedades funcionais aqui descritas incluindo, mas sem se limitar a: especificidade de ligação à proteína de IL-18 livre. Os anticorpos podem ser de qualquer classe, tais como IgG, IgM, ou IgA, etc. ou qualquer subclasse, tais como IgG1, IgG2a, etc. e outras subclasses aqui descritas ou conhecidas na técnica, mas particularmente da classe de IgG4. Adicionalmente, os anticorpos podem ser produzidos por qualquer método, tal como apresentação de fago, ou produzidos em qualquer organismo ou linha celular, incluindo bactérias, inseto, mamífero ou outro tipo de célula ou linha celular que produz anticorpos com características desejadas, tais como anticorpos humanizados. Anticorpos também podem ser formados combinando uma porção Fab e uma região Fc de diferentes espécies.

[00297] Fragmentos ou análogos de anticorpos podem ser prontamente preparados por versados na técnica seguindo os ensinamentos deste pedido de patente. Amino- e carbóxi-terminais preferidos dos fragmentos ou análogos ocorrem próximo aos limites dos domínios funcionais. Domínios estruturais e funcionais podem ser identificados por comparação dos dados da sequência de nucleotídeo e/ou aminoácido às bases de dados de sequência pública ou proprietária. Preferivelmente, métodos de comparação computadorizados são usados para identificar motivos de sequência ou domínios de conformação da proteína previstos que ocorrem em outras proteínas de estrutura e/ou função conhecida. Métodos para identificar sequências de proteína que dobram em uma estrutura tridimensional conhecida são conhecidos. Bowie et al. Science 253:164 (1991).

[00298] O termo “anticorpo humano” inclui todos os anticorpos que têm uma ou mais regiões variável e constante derivadas de sequência de imunoglobulina humana. Em uma modalidade preferida, todos os domínios variáveis e constantes são derivados de sequência de imunoglobulina humana (um anticorpo completamente humano). Estes anticorpos podem ser preparados em uma variedade de células hospedeiras, tais como uma célula procariótica, por exemplo, E. coli. Em uma outra modalidade, a célula hospedeira é uma célula eucariótica, por exemplo, uma célula protista, uma célula animal, uma célula de planta, plantas ou uma célula fúngica. Em uma modalidade, a célula hospedeira é uma célula de mamífero incluindo, mas sem se limitar a, CHO, COS, NS0, SP2, PER.C6, ou uma célula fúngica, tais como Saccharomyces cerevisiae, ou uma célula de inseto, tal como Sf9. Em uma outra modalidade, células que produzem anticorpos humanos podem crescer em biorreatores ou plantas em estufas e campos (ver, por exemplo, em: Riechmann L, et al (1988). Nature 332 (6162): 332-323; Queen C, et al. (Dec 1989). Proc Natl Acad Sci U S A. 86 (24): 10029-33; Kashmiri SV, et al. (May 2005). Methods 36 (1): 25-34; Hou S, et al (Julho de 2008). J Biochem 144 (1): 115-20).

[00299] Um “paciente” ou “indivíduo” para os propósitos da presente invenção é usado indiferentemente e deve incluir tanto humanos quanto outros animais, particularmente mamíferos e outros organismos. Assim, os métodos são aplicáveis tanto à terapia humana quanti às aplicações veterinárias. Na modalidade preferida, o paciente ou indivíduo é um mamífero e na modalidade mais preferida, o paciente ou indivíduo é um humano.

[00300] As expressões “composição farmacêutica” e “composição terapêutica” são usadas aqui indiferentemente no sentido mais amplo. Elas devem se referir, para os propósitos da presente invenção, a uma quantidade terapeuticamente efetiva do ingrediente ativo, isto é, a IL-18BP e, opcionalmente, um carreador ou diluente farmaceuticamente aceitável.

[00301] Ela inclui composições que são adequadas para o tratamento curativo, o controle, o alívio, uma melhora da condição ou da prevenção de uma doença ou distúrbio em um ser humano ou um animal não humano. Assim, ela inclui a composição farmacêuticas para o uso na área de medicina humana ou veterinária. Uma “composição terapêutica” como esta é caracterizada em que inclui pelo menos um composto de IL-18BP ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos e opcionalmente um carreador ou excipiente, enquanto que o sal e o carreador e excipiente são tolerados pelo organismo alvo que é tratado nele.

[00302] Uma “quantidade terapeuticamente efetiva” se refere à quantidade que provê um efeito terapêutico para uma dada condição e regime de administração. Em particular, “quantidade terapeuticamente efetiva” significa uma quantidade que é efetiva para prevenir, reverter, aliviar ou melhorar os sintomas da doença ou prolongar a sobrevivência do indivíduo sendo tratado, que pode ser um animal humano ou não humano. Determinação de uma quantidade terapeuticamente efetiva está nas habilidades dos versados na técnica. Em particular, no presente caso uma “quantidade terapêutica ou profilaticamente efetiva” se refere à quantidade de proteína ou peptídeo, muteína, derivado funcional, fração, derivado circularmente permutado, proteína fundida, isoforma ou um sal dos mesmos e composto ou composição farmacêutica que, quando administrada a um humano ou animal, leva a um efeito terapêutico ou profilático no dito humano ou animal. A quantidade efetiva é prontamente determinada por um versado na técnica seguindo procedimentos de rotina. A quantidade ou dosagem terapeuticamente efetiva de um composto de acordo com esta invenção pode variar em limites amplos e pode ser determinada de uma maneira conhecida na técnica relevante. A dosagem pode variar em limites amplos e, certamente, terá que ser ajustada às necessidades individuais em cada caso particular.

[00303] O termo administração “transmucosal” se refere a várias vias de administração em que o composto é absorvido pela mucosa de qualquer parte do corpo. Administração transmucosal compreende, mas sem se limitar a, isto é, administração intranasal, bucal, oral transmucosal, intratraqueal, trato intraurinário, intrarretal, intravaginal, sublingual, intrabronquial, intrapulmonar e transdérmica.

[00304] A definição “farmaceuticamente aceitável” deve englobar qualquer carreador, excipiente, diluente ou veículo que não interfere com a efetividade da atividade biológica do ingrediente ativo e que não é tóxico ao hospedeiro ao qual é administrado.

[00305] O termo “proteína fundida” se refere a um polipeptídeo compreendendo uma IL-18BP, ou uma IL-18BP viral, ou uma muteína ou fragmento do mesmo, fundido a uma outra proteína que, por exemplo, tem um tempo de residência estendido em fluidos corporais. Uma IL-18BP ou uma IL-18BP viral, assim, pode ser fundida a uma outra proteína, polipeptídeo ou similares, por exemplo, uma imunoglobulina ou um fragmento do mesmo.

[00306] Estas isoformas, muteínas, proteína fundidas ou derivados funcionais retêm a atividade biológica de IL-18BP, em particular a que se liga à IL-18 e preferivelmente têm essencialmente pelo menos uma atividade similar à IL-18BP. Idealmente, tais proteínas têm uma atividade biológica que é ainda aumentada em comparação à IL-18BP não modificada. Frações ativas preferidas têm uma atividade que é melhor que a atividade de IL-18BP, ou têm vantagens adicionais, como uma melhor estabilidade ou uma menor toxicidade ou imunogenicidade, ou elas são mais fáceis de produzir em grandes quantidades ou mais fáceis de purificar.

[00307] O termo “proteína de ligação à interleucina-18” compreende também uma muteína de IL-18BP, derivado funcional, fração, peptídeo biologicamente ativo, derivado circularmente permutado, proteína fundida, isoforma e um sal dos mesmos.

[00308] Da forma aqui usada o termo “muteínas” se refere aos análogos de uma IL-18BP, ou análogos de uma IL-18BP viral, em que um ou mais dos resíduos de aminoácido de uma IL-18BP natural ou IL-18BP viral são substituídos por diferentes resíduos de aminoácido, ou são deletados, ou um ou mais resíduos de aminoácido são adicionados à sequência natural de uma IL-18BP, ou uma IL-18BP viral, sem alterar consideravelmente a atividade dos produtos resultantes comparado à IL-18BP tipo selvagem ou IL- 18BP viral. Estas muteínas são preparadas por síntese conhecida e/ou por técnicas de mutagênese direcionada ao sítio, mutagênese de alto rendimento, embaralhamento de DNA, técnicas de evolução de proteína ou qualquer outra técnica conhecida adequada.

[00309] Qualquer muteína como esta preferivelmente tem uma sequência de aminoácidos suficientemente duplicativo do de uma IL-18BP, ou suficientemente duplicativo de uma IL-18BP viral, tais como tem substancialmente atividade similar à IL-18BP. Uma atividade de IL-18BP é sua capacidade de ligação à IL-18. Desde que a muteína tenha atividade de ligação substancial à IL-18, ela pode ser usada na purificação de IL-18, tais como pode meio de cromatografia por afinidade e, assim, pode ser considerada como tendo atividade substancialmente similar à IL-18BP. Assim, se pode determinar se qualquer dada muteína tem substancialmente a mesma atividade que IL-18BP por meio de experimentação de rotina compreendendo submeter uma muteína como esta, por exemplo, a um ensaio de competição de prensa simples para determinar se ela se liga ou não a uma IL-18 apropriadamente marcada, tal como radioimunoensaio ou ensaio ELISA.

[00310] Muteínas dos polipeptídeos de IL-18BP ou muteínas de IL- 18BP viral, que podem ser usadas de acordo com a presente invenção, ou codificação de ácido nucleico, incluem um conjunto finito de sequências substancialmente correspondentes como peptídeos ou polinucleotídeos de substituição que podem ser rotineiramente obtidos por um versado na técnica, sem experimentação indevida, com base nos ensinamentos e guia aqui apresentados.

[00311] Mudanças preferidas para muteínas de acordo com a presente invenção são as que são conhecidas como substituições “conservativas”. Substituições conservativas de aminoácido dos polipeptídeos ou proteínas de IL-18BP ou IL-18BP vitais podem incluir aminoácidos sinônimos em um grupo que tem propriedades fisioquimicamente suficientemente similares às da substituição entre membros do grupo conservarão a função biológica da molécula (Grantham, 1974). [E evidente que inserções e deleções também podem ser feitas nas sequências definidas anteriormente sem alterar sua função, particularmente se as inserções ou deleções somente envolverem poucos aminoácidos, por exemplo, em trinta e preferivelmente em dez e não removem ou deslocam aminoácidos que são críticos para uma conformação funcional, por exemplo, resíduos de cisteína. Proteínas e muteínas produzidas por tais deleções e/ou inserções vêm no âmbito da presente invenção.

[00312] “Derivados funcionais” da forma aqui usada cobre derivados de IL-18BP ou um IL-18BP viral e suas muteínas e proteínas fundidas, que podem ser preparados dos grupos funcionais que ocorrem como cadeias secundárias nos resíduos ou os grupos N-ou C-terminal, por meios conhecidos na técnica e são incluídos na invenção, desde que eles permaneçam farmaceuticamente aceitáveis, isto é, eles não destroem a atividade da proteína que é substancialmente similar à atividade de IL-18BP, ou IL-18BP virais e não conferem propriedades tóxicas nas composições contendo-os.

[00313] Estes derivados podem, por exemplo, incluir cadeias secundárias de polietileno glicol, que podem mascarar sítios do antígeno e estender a residência de uma IL-18BP ou uma IL-18BP viral em fluidos corporais. Outros derivados incluem ésteres alifáticos dos grupos carboxila, amidas dos grupos carboxila por reação com amônia ou com aminas primárias ou secundárias, N-acil derivados dos grupos amino livres dos resíduos de aminoácido formados com frações acila (por exemplo, alcanol ou grupos aroil carboxílicos) ou O-acil derivados de dos grupos hidroxila livres (por exemplo, os dos resíduos de serila ou treonila) formados com frações acila.

[00314] Como “fragmento funcional” de uma IL-18BP, ou uma IL- 18BP viral, muteína e proteína fundida, a presente invenção cobre qualquer fragmento ou precursores da cadeia de polipeptídeo da molécula de proteína de IL-18BP sozinho ou junto com moléculas ou resíduos associados ligados a ele, por exemplo, resíduos de açúcar ou fosfato, ou agregados da molécula da proteína nos resíduos de açúcar em si, provido que a dita fração tem atividade substancialmente similar à IL-18BP.

[00315] O termo “sais” aqui se refere tanto aos sais dos grupos carboxila quantos aos sais de adição de ácido de grupos amino da molécula de IL-18BP ou análogos dos mesmos. Sais de um grupo carboxila podem ser formados por meios conhecidos na técnica e incluem sais inorgânicos, por exemplo, sais de sódio, cálcio, amônio, férrico ou zinco e similares e com bases orgânicas como as formadas, por exemplo, com aminas, tais como trietanolamina, arginina ou lisina, piperidina, procaína e similares. Sais de adição de ácido incluem, por exemplo, sais com ácidos minerais, tais como, por exemplo, ácido clorídrico ou ácido sulfúrico e sais com ácidos orgânicos, tais como, por exemplo, ácido acético ou ácido oxálico. Certamente, quaisquer sais como estes devem reter a atividade biológica de IL-18BP, por exemplo, a capacidade de se ligar à IL-18.

[00316] “Isoformas” da IL-18BP são proteínas capazes de se ligar à IL- 18 ou fragmento do mesmo, que pode ser produzido por junção alternativa.

[00317] O termo “derivados circularmente permutados” da forma aqui usada se refere a uma molécula linear na qual os terminais foram unidos, tanto diretamente quanto por meio de um ligante, para produzir uma molécula circular e então a molécula circular é aberta em um outro local para produzir uma nova molécula linear com terminais diferentes dos terminais na molécula original. Permutações circulares incluem as moléculas cuja estrutura é equivalente a uma molécula que foi circularizada e então aberta. Assim, uma molécula circularmente permutada pode ser sintetizada de novo como uma molécula linear e nunca será uma etapa de circularização e abertura. A preparação de derivados circularmente permutados é descrita em W095/27732.

[00318] A expressão “níveis de IL-18 livre anormais” se refere a níveis de IL-18 maiores ou menores comparados aos valores detectados em fluidos corporais de um indivíduo controle saudável. Em particular, estes níveis anormais significam valores aumentados de IL-18. Em particular, o dito nível anormal de IL-18 livre nos fluidos corporais excede o nível em fluidos corporais de um indivíduo controle saudável em 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, ou mais que 100%. Em certas modalidades da invenção o valor de referência ou controle é o valor base normal, não patológico para IL-18 livre determinado no paciente a ser tratado.

[00319] A expressão “razão anormal de IL-18 livre/IL-18BP” se refere a uma maior razão de IL-18 para IL-18BP comparado aos valores encontrados em fluidos corporais de um indivíduo controle saudável. Em particular, a dita razão anormal de IL-18 livre à IL-18BP nos fluidos corporais excede a razão em fluidos corporais de um indivíduo controle saudável em 1%, 2.5%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, ou mais que 100%. Em certas modalidades da invenção o valor de referência ou controle é o valor de base normal, não patológico para IL-18 livre determinado no paciente a ser tratado.

[00320] As expressões “silenciamento de gene” e “silenciamento de gene pós-transcripcional” significam a regulação supressiva da expressão genética por mecanismos a não ser modificação genética. O silenciamento ocorre por neutralização do RNAm no nível pós-transcripcional, em que a tradução de RNAm é evitada para formar um produto de gene ativo que é, na maioria dos casos, uma proteína.

[00321] O termo “predisposição” significa a maior suscetibilidade de um indivíduo para desenvolver uma doença específica. No presente caso, um indivíduo é classificado como predisposto se, por exemplo, nível elevado de IL-18 aparecer no pulmão, soro, catarro, fluido de lavagem broncoalveolar (BALF) ou circulação.

[00322] As expressões “fumo”, “induzido pelo fumo”, “fumo de cigarro” ou “induzido pelo fumo de cigarro” se referem ao fumo de tabaco.

[00323] “Macrófagos alveolares” são um subtipo de macrófagos encontrados nos alvéolos pulmonares. Eles frequentemente contêm grânulos de material exógeno que eles captaram das superfícies respiratórias. Tais grânulos pretos são especialmente comuns nas pessoas, que são expostos a longo prazo ao pó fino, partículas finas, por exemplo, como fumantes ou moradores da cidade a longo prazo.

[00324] Uma “resposta da citocina Th2” mediada por IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-10, IL-13, e/ou IL-17A, particularmente IL-4 e/ou IL-8 e/ou IL-17A, enquanto que uma “resposta da citocina Th1” é mediada por interferon-gama (IFN-Y), IL-2 e fator de necrose tumoral-alfa (TNF-α).

[00325] A expressão “desequilíbrio de IL-18/IL-18BP” se refere à desregulação de interação mútua de IL-18 e IL-18BP, que finalmente leva a um nível elevado de IL-18 não ligada.

[00326] Uma “doença” é um estado de saúde de um animal em que o animal não pode manter a homeostase e em que se a doença não for aliviada então a saúde do animal continua a deteriorar. Ao contrário, um “distúrbio” em um animal é um estado de saúde no qual o animal é capaz de manter a homeostase, mas no qual o estado de saúde do animal é menos favorável que seria na ausência do distúrbio. Não tratado, um distúrbio não necessariamente causa uma diminuição adicionalmente no estado de saúde do animal.

[00327] Uma doença ou distúrbio é “aliviada” se a severidade de um sintoma da doença ou distúrbio, a frequência com a qual um sintoma como este é experimentado por um indivíduo, ou ambos, forem reduzidos.

[00328] Os termos “desregulado” ou “desregulação”, da forma aqui usada, se referem a uma deficiência em um processo biológico que, por sua vez, pode levar a sequela fisiológica prejudicial ou expressão anormal de um gene, ácido nucleico, proteína, peptídeo, ou outras moléculas biológicas. No caso onde expressão de um gene, ácido nucleico, proteína, peptídeo, ou outras moléculas biológicas é desregulada, o gene, ácido nucleico, proteína, peptídeo, ou outras moléculas biológicas é expressa, processada ou mantida em níveis que estão fora do que é considerado a faixa normal para a do gene, ácido nucleico, proteína, peptídeo, ou outras moléculas biológicas conforme determinado por um versado. Desregulação de um gene, ácido nucleico, proteína, peptídeo, ou outras moléculas biológicas em um mamífero pode ser determinada medindo o nível de um gene, ácido nucleico, proteína, peptídeo, ou outras moléculas biológicas no mamífero e comparando o nível medido no mamífero ao nível medido em uma população combinada que se sabe que não experimentou desregulação do gene, ácido nucleico, proteína, peptídeo, ou outras moléculas biológicas desreguladas. Alternativamente, o nível pode ser comparado a um medido no mesmo indivíduo em um tempo diferente.

[00329] Os termos “doença cardíaca” ou “cardiovascular doença” da forma aqui usada compreende doenças e distúrbios que afetam o músculo cardíaco ou os vasos sanguíneos do coração e do corpo. Doenças cardíacas podem levar a falha cardíaca e eventualmente são uma das causas mais frequentes de morte nas sociedades industriais. Exemplos para doenças cardíacas induzidas por desequilíbrio de IL-18/IL-18BP compreendem, mas sem se limitar a, doença cardíaca obstrutiva, disfunção trombolítica, cardiomiopatia alcoólica, prolapso da válvula aórtica, estenose da válvula aórtica, arritmias, choque cardiogênico, doença cardíaca congênita, cardiomiopatia dilatada, ataque cardíaco, falha cardíaca, tumor cardíaco, estenose pulmonar da válvula cardíaca, cardiomiopatia hipertrófica, cardiomiopatia idiopática, doença cardíaca isquêmica, cardiomiopatia isquêmica, regurgitação mitral, prolapso da válvula mitral, cardiomiopatia periparto, angina estável.

[00330] O termo “diabetes mellitus tipo 2” da forma aqui usada é a forma mais comum de diabetes. Esta doença ou distúrbio é caracterizada que tanto o corpo não produz ou produz somente insuficientemente a enzima insulina quanto as células têm defeitos na sua resposta à insulina. Acredita-se que tais defeitos envolvem o receptor da insulina.

[00331] Da forma aqui usada “endógena” se refere a qualquer material de ou produzido dentro de um organismo, célula, tecido ou sistema. O termo “exógeno” se refere a qualquer material introduzido de ou produzido de fora de um organismo, célula, tecido ou sistema.

[00332] O termo “expressão” da forma aqui usada é definido como a transcrição e/ou tradução de uma sequência de nucleotídeos particular acionada por seu promotor. O termo “vetor de expressão” da forma aqui usada se refere a um vector contendo uma sequência de ácido nucleico que codifica para pelo menos parte de um produto genético capaz de ser transcrito. Em alguns casos, moléculas de RNA são então traduzidas em uma proteína, polipeptídeo ou peptídeo. Em outros casos, estas sequências não são traduzidas, por exemplo, na produção de moléculas antessentido, siRNA, ribozimas e similares. Vetores de expressão podem conter uma variedade das sequências de controle, que se referem à sequência de ácidos nucleicos necessária para a transcrição e, possivelmente, tradução de uma sequência de codificação operativamente ligada em um organismo hospedeiro particular. Além das sequências de controle que governam a transcrição e tradução, vetores e vetores de expressão podem conter sequência de ácidos nucleicos que servem para outras funções igualmente. O vetor de expressão de acordo com a presente invenção pode ser usado na terapia genética para o tratamento da doença ou distúrbio conforme aqui descrito. Em particular, o dito vetor de expressão é um vetor viral. Os vírus que podem ser usados como um veículo para dispensar o vetor de expressão são selecionados do grupo de retrovírus, adenovírus, lentivírus, vírus do herpes simplex, vaccínia, pox vírus e vírus adenoassociado.

[00333] Os termos “inibir”, “neutralizar” ou “bloquear” da forma aqui usada têm que ser entendidos como sinônimos que significam redução de uma molécula, uma reação, uma interação, uma expressão genética, um RNAm, e/ou uma expressão, estabilidade, função ou atividade da proteína por uma quantidade mensurável ou para evitar completamente. Inibidores são compostos que, por exemplo, se ligam parcial ou totalmente, bloqueiam o estímulo, diminuem, previnem, atrasam a ativação, inativam, dessensibilizam ou sobrerregulam a estabilidade, expressão, função e atividade de uma proteína, um gene e um RNAm, por exemplo, antagonistas.

[00334] O termo “vetor de expressão antessentido” se refere a um vetor de expressão, que codifica para RNA de fita simples ou de fita dupla que é complementar a uma fita de RNA mensageiro (RNAm) e que inibe a tradução do dito RNAm nos aminoácidos. O termo RNA antessentido compreende asRNA, siRNA, shRNA, microRNA.

[00335] O termo “terapia genética” da forma aqui usada significa o uso de DNA, por exemplo, um vetor de expressão, como um agente farmacêutico para tratar uma doença conforme aqui descrito.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[00336] Figura 1: Comparação de IL-18 total e livre em pacientes com sepse individuais. Adaptado da Novick et al 2001. O nível de IL-18 livre (círculos fechados) em soros de pacientes com sepse mediante admissão foi calculado com base na concentração de IL-18 total (círculos abertos) e IL- 18BPa, levando-se em consideração um complexo 1:1 de IL-18 e IL-18BPa e um KD calculado de 400 pM. Cada linha vertical liga IL-18 total e livre em uma amostra de soro individual. Os ensaios ELISA anteriores são realizados com o par de anticorpos desenvolvidos por Taniguchi et al 1997 1, a saber anticorpos 125-2H como anticorpo primário/ de captura e 159-12B como anticorpo secundário/ de desenvolvimento.

[00337] Figura 2: Detecção de IL-18 total com anticorpos 125-2H e 159-12B. Os dados indicam que ambos os anticorpos quantificam IL-18 total.

[00338] Figura 3: Titulação de IL-18 400 pg/mL como uma função do nível de IL-18BP.

[00339] Figura 4: Indução de IL-18 de camundongo no espaço da via aérea do pulmão no dia 5 depois de 1) exposição ao ar, 2) fumo de tabaco (TS), 3) p[I:C] sozinho, 4) p[I:C] combinado ao fumo de tabaco no dia 4 (indução de exacerbação). Linha pontilhada indica limite de detecção inferior. Análises estatísticas foram realizadas usando qualquer teste-t não pareado.

[00340] Figura 5: inibição de infiltração da célula total no espaço da via aérea do pulmão de camundongo no dia 5 depois de 1) exposição ao ar, 2) fumo de tabaco (TS), 3) p[I:C] sozinho, 4) p[I:C] combinado ao fumo de tabaco no dia 4 (indução de exacerbação), 5-7) p[I:C] combinado ao fumo de tabaco no dia 4 mediante tratamento com IL-18BP em qualquer de 1, 3 ou 10 mg/kg, 8) tratamento com dexametasona a 10 mg/kg. Análises estatísticas foram realizadas usando qualquer teste-t não pareado.

[00341] Figura 6: inibição de infiltração da célula total no espaço da via aérea do pulmão de camundongo no dia 5 depois de 1) exposição ao ar, 2) fumo de tabaco (TS), 3) p[I:C] sozinho, 4) p[I:C] combinado ao fumo de tabaco no dia 4 (indução de exacerbação), 5) p[I:C] combinado ao fumo de tabaco no dia 4 mediante tratamento com IL-18BP a 10 mg/kg, 6) tratamento com dexametasona a 10 mg/kg. Análises estatísticas foram realizadas usando teste ANOVA (pós-teste de Sidak).

[00342] Figura 7: inibição da infiltração de neutrófilo por IL-18BP. Infiltração de neutrófilo no espaço da via aérea do pulmão de camundongo foi monitorado no dia 5 depois de 1) exposição ao ar, 2) fumo de tabaco (TS), 3) p[I:C] sozinho, 4) p[I:C] combinado ao fumo de tabaco no dia 4 (indução de exacerbação), 5-7) p[I:C] combinado ao fumo de tabaco no dia 4 mediante tratamento com IL-18BP em qualquer de 1, 3 ou 10 mg/kg, 8) tratamento com dexametasona a 10 mg/kg. Análises estatísticas foram realizadas usando teste ANOVA (pós-teste de Sidak).

[00343] Figura 8: inibição de infiltração de neutrófilo por IL-18BP. Infiltração de neutrófilo no espaço da via aérea do pulmão de camundongo foi monitorada no dia 5 depois de 1) exposição ao ar, 2) fumo de tabaco (TS), 3) p[I:C] sozinho, 4) p[I:C] combinado ao fumo de tabaco no dia 4 (indução de exacerbação), 5) p[I:C] combinado ao fumo de tabaco no dia 4 mediante tratamento com IL-18BP a 10 mg/kg, 6) tratamento com dexametasona a 10 mg/kg. Análises estatísticas foram realizadas usando teste ANOVA (pós-teste de Sidak).

[00344] Figura 9: inibição da via G-CSF por IL-18BP. A presença de G-CSF (pg/ml) foi monitorada no espaço da via aérea do pulmão de camundongo por ELISA no dia 5 depois de 1) exposição ao ar, 2) fumo de tabaco (TS), 3) p[I:C] sozinho, 4) p[I:C] combinado ao fumo de tabaco no dia 4 (indução de exacerbação), 5-7) p[I:C] combinado ao fumo de tabaco no dia 4 mediante tratamento com IL-18BP em qualquer de 1, 3 ou 10 mg/kg, 8) tratamento com dexametasona a 10 mg/kg. Linha pontilhada indica limite de detecção inferior. Análises estatísticas foram realizadas usando teste-t de Students.

[00345] Figura 10: Diminuição da perda de peso por IL-18BP. Perda de peso de camundongo foi monitorada no dia 5 depois de 1) exposição ao ar, 2) fumo de tabaco (TS), 3) p[I:C] sozinho, 4) p[I:C] combinado ao fumo de tabaco no dia 4 (indução de exacerbação), 5) p[I:C] combinado ao fumo de tabaco no dia 4 mediante tratamento com IL-18BP a 10 mg/kg, 7) tratamento com dexametasona a 10 mg/kg. Análises estatísticas foram realizadas usando teste ANOVA (pós-teste de Sidak).

[00346] Figura 11: apresenta as sequências de aminoácidos da cadeia pesada variável (VH) e da cadeia leve variável (VK) dos anticorpos produzidos por diferentes clones. As regiões que determinam complementariedade CDR 1, CDR 2 e CDR 3 são identificadas sublinhando as respectivas sequências conforme determinado pelo sistema de numeração IMGT (Lefranc, M.-P. et al., Nucleic Acids Research, 27, 209-212 (1999)). Da esquerda para a direita, a primeira sequência sublinhada em cada das sequências VH e VK mostradas representa CDR1, a segunda sequência sublinhada representa CDR 2 e a terceira sequência sublinhada representa CDR 3. O domínio variável é salientado em NEGRITO. SEQUÊNCIAS SEQ ID NO 1: IL-18 Epítopo 1: Tyr-Phe-Gli-Lys-Leu-Glu- Ser-Lys-Leu-Ser-Val-Ile-Arg-Asn SEQ ID NO 2: IL-18 Epítopo 2: Phe-Ile-Ile-Ser-Met-Tyr-Lys- Asp-Ser-Gln-Pro-Arg-Gli-Met-Ala-Val-Thre-Ile-Ser-Val-Lys SEQ ID NO 3: IL-18 Epítopo 3: Glu-Met-Asn-Pro-Pro-Asp- Asn-Ile-Lys-Asp-Thr-Lys-Ser-Asp-Ile-Ile-Phe SEQ ID NO 4: IL-18 Epítopo 4: Tyr-Phe-Gli-Lys-Leu-Glu-Ser SEQ ID NO 5: IL-18 Epítopo 5: Tyr-Lys-Asp-Ser-Gln-Pro- Arg-Gli-Met-Ala SEQ ID NO 6: IL-18 Epítopo 6: Asp-Asn-Ile-Lys-Asp-Thr- Lys SEQ ID NO 7: proteína de ligação à IL-18 (IL-18BP) SEQ ID NO: 8: Sequência do ligante do aminoácido 13: Glu- Phe-Gli-Ala-Gli-Leu-Val-Leu-Gli-Gli-Gln-Phe-Met SEQ ID NO: 9: sequência 107C6 VH do anticorpo SEQ ID NO:10: sequência 107C6 VK do anticorpo SEQ ID NO: 11: sequência 108F8 VH do anticorpo SEQ ID NO: 12: sequência 108F8 VK do anticorpo SEQ ID NO: 13: sequência 109A6 VH do anticorpo SEQ ID NO: 14: sequência 109A6 VK do anticorpo SEQ ID NO: 15: sequência 111A6 VH do anticorpo SEQ ID NO: 16: sequência 1 111A6 VK do anticorpo SEQ ID NO: 17: sequência 2 111A6 VK do anticorpo SEQ ID NO: 18: sequência 131B4 VH do anticorpo SEQ ID NO: 19: sequência 131B4 VK do anticorpo SEQ ID NO: 20: sequência 1 131E8 VH do anticorpo SEQ ID NO: 21: sequência 2 131E8 VH do anticorpo SEQ ID NO: 22: sequência 131E8 VK do anticorpo SEQ ID NO: 23: sequência 132H4 VH do anticorpo SEQ ID NO: 24: sequência 132H4 VK do anticorpo SEQ ID NO: 25: sequência 133A6 VH do anticorpo SEQ ID NO: 26: sequência 133A6 VK do anticorpo SEQ ID NO: 27: CDR1 da sequência 107C6 VH do anticorpo: Gli Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gli SEQ ID NO: 28: CDR2 da sequência 107C6 VH do anticorpo; Ile Asn Thr Tyr Ser Gli Val Pro SEQ ID NO: 29: CDR3 da sequência 107C6 VH do anticorpo: Ala Arg Glu Gli Tyr Ser Thr Thr Arg Ser Met Asp Tyr SEQ ID NO: 30: CDR1 da sequência 107C6 VK do anticorpo: Gln Ser Leu Leu Asp Ser Arg Thr Arg Lys Asn Tyr_ SEQ ID NO: 31: CDR2 da sequência 107C6 VK do anticorpo: Trp Ala Ser SEQ ID NO: 32: CDR3 da sequência 107C6 VK do anticorpo: Lys Gln Ser Tyr Asn Leu Arg Thr SEQ ID NO: 33: CDR1 da sequência 108F8 VH do anticorpo: Gli Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gli SEQ ID NO: 34: CDR2 da sequência 108F8 VH do anticorpo: Ile Asn Thr Tyr Ser Gli Val Pro SEQ ID NO: 35: CDR3 da sequência 108F8 VH do anticorpo: Ala Arg Glu Gli Tyr Ser Thr Thr Arg Ser Met Asp Tyr SEQ ID NO: 36: CDR1 da sequência 108F8 VK do anticorpo: Gln Ser Leu Leu Asp Ser Arg Thr Arg Lys Asn Tyr SEQ ID NO: 37: CDR2 da sequência 108F8 VK do anticorpo: Trp Ala Ser SEQ D NO: 38: CDR3 da sequência 108F8 VK do anticorpo: Lys Gln Ser Tyr Asn Leu Arg Thr SEQ ID NO: 39: CDR1 da sequência 109A6 VH do anticorpo: Gli Phe Lys Ile Lys Asp Thr Tyr SEQ ID NO: 40: CDR2 da sequência 109A6 VH do anticorpo: Ile Asp Pro Ala Asn Gli Asn Thr SEQ ID NO: 41: CDR3 da sequência 109A6 VH do anticorpo: Ala Gli Tyr Val Trp Phe Ala Tyr SEQ ID NO: 42: CDR1 da sequência 109A6 VK do anticorpo: Gln Arg Leu Val His Ser Asn Gli Asn Thr Tyr SEQ ID NO: 43: CDR2 da sequência 109A6 VK do anticorpo: Thr Val Ser SEQ D NO: 44: CDR3 da sequência 109A6 VK do anticorpo: Ser Gln Ser Thr Leu Val Pro Trp Thr SEQ ID NO: 45: CDR1 da sequência 111A6 VH do anticorpo: Gli Phe Lys Ile Lys Asp Thr Tyr SEQ ID NO: 46 CDR2 da sequência 111A6 VH do anticorpo: Ile Asp Pro Ala Asn Gli Asn Thr SEQ ID NO: 47: CDR3 da sequência 111A6 VH do anticorpo: Ala Gli Tyr Val Trp Phe Ala Tyr SEQ ID NO: 48: CDR1 da sequência 1 anticorpo: Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr SEQ ID NO: 49: CDR2 da sequência 1 anticorpo: Ser Thr Ser SEQ ID NO 50: CDR3 da sequência 1 anticorpo: Gln Gln Tyr Ser Gli Tyr Pro Leu Thr SEQ ID NO: 51: CDR1 da sequência 2 111A6 VK do anticorpo: Gln Arg Leu Val His Ser Asn Gli Asn Thr Tyr SEQ ID NO: 52: CDR2 da sequência 2 111A6 VK do anticorpo: Thr Val Ser SEQ ID NO: 53: CDR3 da sequência 2 111A6 VK do anticorpo: Ser Gln Ser Thr Leu Val Pro Trp Thr SEQ ID NO: 54: CDR1 da sequência 131B4 VH do anticorpo: Gli Phe Lys Ile Lys Asp Thr Tyr SEQ ID NO: 55: CDR2 da sequência 131B4 VH do anticorpo: Ile Asp Pro Ala Asn Gli Asn Thr SEQ ID NO: 56: CDR3 da sequência 131B4 VH do anticorpo: Ala Gli Tyr Val Trp Phe Ala Tyr SEQ ID NO: 57: CDR1 da sequência 131B4 VK do anticorpo: Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gli Asn Thr Tyr SEQ ID NO: 58: CDR2 da sequência 131B4 VK do anticorpo: Lys Val Ser SEQ ID NO: 59: CDR3 da sequência 131B4 VK do anticorpo: Ser Gln Ser Ser Leu Val Pro Trp Thr SEQ ID NO: 60: CDR1 da sequência 1 anticorpo: Gli Phe Ser Leu Pro Asn Tyr Gli SEQ ID NO: 61: CDR2 da sequência 1 anticorpo: Ile Trp Ser Gli Gli Ser Thr SEQ ID NO: 62: CDR3 da sequência 1 anticorpo: Ala Arg Asn Phe Tyr Ser Lys Tyr Asp Tyr Ala Met Asp Tyr SEQ ID NO: 63: CDR1 da sequência 2 131E8 VH do anticorpo: Gli Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp SEQ ID NO: 64: CDR2 da sequência 2 131E8 VH do anticorpo: Ile Asn Pro Asn Ser Gli Ser Thr SEQ ID NO: 65: sequência 2 CDR3 131E8 VH do anticorpo: Ala Arg Leu Gli Asp Tyr SEQ ID NO: 66: CDR1 da sequência 131E8 VK do anticorpo: Ser Ser Val Ser Tyr SEQ ID NO: 67: CDR2 da sequência 131E8 VK do anticorpo: Asp Thr Ser SEQ ID NO: 68: CDR3 da sequência 131E8 VK do anticorpo: Phe Gln Gli Ser Gli Tyr Pro Leu Thr SEQ ID NO: 69: CDR1 da sequência 132H4 VH do anticorpo: Gli Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala SEQ ID NO: 70: CDR2 da sequência 132H4 VH do anticorpo: Ile Ser Ser Gli Gli Ala Asn Ile SEQ ID NO: 71: CDR3 da sequência 132H4 VH do anticorpo: Ala Arg Gli Asp Tyr Phe Asn His Phe Trp Phe Ala Tyr SEQ ID NO: 72: CDR1 da sequência 132H4 VK do anticorpo: Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gli Asn Thr Tyr SEQ ID NO: 73: CDR2 da sequência 132H4 VK do anticorpo: Lys Val Ser SEQ ID NO: 74: CDR3 da sequência 132H4 VK do anticorpo: Phe Gln Gli Ser His Val Pro Trp Thr SEQ ID NO: 75: CDR1 da sequência 133A6 VH do anticorpo: Gli Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala SEQ ID NO: 76: CDR2 da sequência 133A6 VH do anticorpo: Ile Ser Ser Gli Gli Gli Asn Ile SEQ ID NO: 77: CDR3 da sequência 133A6 VH do anticorpo: Ala Arg Gli Asp Tyr Ser Asn Tyr Phe Trp Phe Ala Tyr SEQ ID NO: 78: CDR1 da sequência 133A6 VK do anticorpo: Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gli Asn Thr Tyr SEQ ID NO: 79: CDR2 da sequência 133A6 VK do anticorpo: Lys Val Ser SEQ ID NO: 80: CDR3 da sequência 133A6 VK do anticorpo: Phe Gln Gli Ser His Val Pro Trp Thr SEQ ID NO: 81: sequência de DNA 107C6 VH do anticorpo SEQ ID NO: 82: sequência 107C6 VH do anticorpo SEQ ID NO: 83: sequência de DNA 107C6 VK do anticorpo SEQ ID NO: 84: sequência 107C6 VK do anticorpo SEQ ID NO: 85: sequência 108F8 VH do anticorpo SEQ ID NO: 86: sequência 108F8 VH do anticorpo SEQ ID NO: 87: sequência de DNA 108F8 VK do anticorpo SEQ ID NO: 88: sequência 108F8 VK do anticorpo SEQ ID NO: 89: sequência de DNA 109A6 do anticorpo SEQ ID NO: 90: sequência 109A6 VH do anticorpo SEQ ID NO: 91: sequência de DNA 109A6 VK do anticorpo SEQ ID NO: 92: sequência 109A6 VK do anticorpo SEQ ID NO: 93: sequência de DNA 111A6 VH do anticorpo SEQ ID NO: 94: sequência 111A6 VH do anticorpo SEQ ID NO: 95: sequência de DNA 1 111A6 VK do anticorpo SEQ ID NO: 96: sequência 1 111A6 VK do anticorpo SEQ ID NO: 97: sequência de DNA 2 111A6 do anticorpo SEQ ID NO: 98: sequência 2 111A6 VK do anticorpo SEQ ID NO: 99: sequência de DNA 1 131B4 VH do anticorpo SEQ ID NO: 100: sequência 1 131B4 VH do anticorpo SEQ ID NO: 101: sequência de DNA 2 131B4 VH do anticorpo SEQ ID NO: 102: sequência 2 131B4 VH do anticorpo SEQ ID NO: 103: sequência de domínio variável 2 131B4 VH do anticorpo SEQ ID NO: 104: CDR1 de sequência 2 131B4 VH do anticorpo SEQ ID NO: 105: CDR2 de sequência 2 131B4 VH do anticorpo SEQ ID NO: 106: CDR3 de sequência 2 131B4 VH do anticorpo SEQ ID NO: 107: sequência de DNA 3 131B4 VH do anticorpo SEQ ID NO: 108: sequência 3 131B4 VH do anticorpo SEQ ID NO: 109: sequência de domínio variável 3 131B4 VH do anticorpo SEQ ID NO: 110: CDR1 de sequência 3 131B4 VH do anticorpo SEQ ID NO: 111: CDR2 de sequência 3 131B4 VH do anticorpo SEQ ID NO: 112: CDR3 de sequência 3 131B4 VH do anticorpo SEQ ID NO: 113: sequência de DNA 131B4 VK do anticorpo SEQ ID NO: 114: sequência 131B4 VK do anticorpo SEQ ID NO: 115: sequência de DNA 1 131E8 VH do anticorpo SEQ ID NO: 116: sequência 1 131E8 VH do anticorpo SEQ ID NO: 117: sequência de DNA 2 131E8 VH do anticorpo SEQ ID NO: 118: sequência 2 131E8 VH do anticorpo SEQ ID NO: 119: sequência de DNA 3 131E8 VH do anticorpo SEQ ID NO: 120: sequência 3 131E8 VH do anticorpo SEQ ID NO: 121: sequência de domínio variável 3 131E8 VH do anticorpo SEQ ID NO: 122: CDR1 de sequência 3 131E8 VH do anticorpo SEQ ID NO: 123: CDR2 de sequência 3 131E8 VH do anticorpo SEQ ID NO: 124: CDR3 de sequência 3 131E8 VH do anticorpo SEQ ID NO: 125: sequência de DNA 131E8 do anticorpo SEQ ID NO: 126: sequência 131E8 VK do anticorpo SEQ ID NO: 127: sequência de DNA 131H1 do anticorpo SEQ ID NO: 128: sequência 131H1 VH do anticorpo SEQ ID NO: 129: sequência de domínio variável 131H1 VH do anticorpo SEQ ID NO: 130: CDR1 de sequência 131H1 VH do anticorpo SEQ ID NO: 131: CDR2 de sequência 131H1 VH do anticorpo SEQ ID NO: 132: CDR3 de sequência 131H1 VH do anticorpo SEQ ID NO: 133: sequência de DNA 1 131H1 VK do anticorpo SEQ ID NO: 134: sequência 1 131H1 VK do anticorpo SEQ ID NO: 135: sequência de domínio variável 1 131H1 VK do anticorpo SEQ ID NO: 136: CDR1 de sequência 1 131H1 VK do anticorpo SEQ ID NO: 137: CDR2 de sequência 1 131H1 VK do anticorpo SEQ ID NO: 138: CDR3 de sequência 1 131H1 VK do anticorpo SEQ ID NO: 139: sequência de DNA 2 131H1 VK do anticorpo SEQ ID NO: 140: sequência 2 131H1 VK do anticorpo SEQ ID NO: 141: sequência de domínio variável 2 131H1 VK do anticorpo SEQ ID NO: 142: CDR1 de sequência 2 131H1 VK do anticorpo SEQ ID NO: 143: CDR2 de sequência 2 131H1 VK do anticorpo SEQ ID NO: 144: CDR3 de sequência 2 131H1 VK do anticorpo SEQ ID NO: 145: sequência de DNA 132H4 VH do anticorpo SEQ ID NO: 146: sequência 132H4 VH do anticorpo SEQ ID NO: 147: sequência de DNA 132H4 VK do anticorpo SEQ ID NO: 148: sequência 132H4 VK do anticorpo SEQ ID NO: 149: sequência de DNA 133A6 VH do anticorpo SEQ ID NO: 150: sequência 133A6 VH do anticorpo SEQ ID NO: 151: sequência de DNA 133A6 VK do anticorpo SEQ ID NO: 152: sequência 133A6 VK do anticorpo EXEMPLOS A. Detecção de IL-18 livre em função do complexo IL-18/IL-18BP

1. Detecção comum de IL-18 em pacientes

[00347] Quantificação de IL-18 humana em pacientes é realizada com ensaios ELISA que detectam IL-18 total (tanto na forma livre quanto e complexo de IL-18BP). O ELISA compreende anticorpos comercialmente disponíveis (ver tabela 8 a seguir). Ensaios ELISA mais comuns são realizados com o par de anticorpos anti-IL-18 desenvolvido por Taniguchi et al 1997 e vendido por diferentes fornecedores, a saber anticorpo monoclonal de camundongo 125-2H como anticorpo primário/ de captura e rato monoclonal 159-12B como anticorpo secundário/ de desenvolvimento.

2. Estimativas dos níveis de IL-18 livre

[00348] Até hoje, não há registros de níveis de IL-18 livre medidos. Estimativas de IL-18 livre são feitas por extrapolação usando o cálculo descrito por Novick et al 2004 (ver a seguir). Os dados comparam níveis de IL-18 e IL-18BP em humano. Nestes estudos, pesquisadores usaram o par de anticorpos monoclonais comerciais anti-IL-18 125-2H e 159-12B, onde anticorpo 125-2H é usado para captura e é conhecido por se ligar ao complexo IL-18/IL-18BP (Argiradi et al 2009). Para calcular IL-18 livre nos soros do paciente eles aplicaram a Lei da Ação da Massa assumindo que a ligação de anticorpos IL-18 é reversível. O cálculo é realizado como se segue: KD = 0,4 nM = ( [IL-18] x [IL-18BP] ) / [IL-18-IL18BP] ou [IL-18] em nM = (0,4 x [IL-18-IL18BP] ) / [IL-18BP] Onde: IL-18-IL-18BP é um complexo constante de dissociação conforme calculado por Kim et al 2000, KD = 0,4 nM Estequiometria 1:1 no complexo IL-18-IL-18BP Concentração de IL-18 é determinada por eletroquimioluminescência Concentração de IL-18BP é determinada por ELISA

[00349] É importante notar que os autores encontraram grandes variações de IL-18 livre em função da IL-18 total entre pacientes que não refletem a razão de IL-18 em função de IL-18BP. Interessantemente, esta razão IL18/IL-18BP não é registrada nos pedidos de patente citados. Além do mais, anticorpos anti-IL18 não são capazes de distinguir entre IL-18 livre e a forma complexa IL-18/IL-18BP. Finalmente, conforme descrito por Novick et al 2001, os anticorpos anti-IL-18BP não detectam forma livre de IL-18BP, mas IL-18BP total, uma vez que foi registrado que eles não bloqueiam a interação entre IL-18BP e IL-18, respectivamente anticorpos monoclonais 582.10 e 657.27. Consequentemente, o cálculo de IL-18 livre usando a concentração de IL-18BP falta exatidão. Embora encorajador, a variação dos dados indica que detecção de IL-18 livre poderia ser melhorada com um ensaio mais apropriado combinando anticorpos que focam especificamente a região de IL-18 que se liga à IL-18BP.

3. Confirmação que anticorpos comumente usados não detectam IL-18 livre

[00350] Onze anticorpos monoclonais anti-IL-18 comercialmente disponíveis foram testados com relação à sua capacidade de evitar qualquer interação de IL-18 com IL-18BP. Os dados a seguir demonstram que este não é o caso e que nenhum dos anticorpos testados se liga ao sítio de interação entre IL-18 e IL-18BP. Consequentemente, a detecção de IL-18 livre em amostras humanas requer projeto específico e abordagens que visam, por exemplo, o sítio de ligação / epítopo de IL-18 à IL-18BP.

[00351] Os anticorpos 125-2H e 159-12B comumente usados foram testados tanto como anticorpos de captura quanto de desenvolvimento (ver Figura 2). Os dados indicam que ambos os anticorpos não reconhecem o epítopo de IL-18 para IL-18BP e, consequentemente, proveem somente uma quantificação de IL-18 total (tanto forma livre quanto complexo à IL-18BP).

[00352] Em paralelo aos anticorpos 125-2H e 159-12G, nove outros anticorpos monoclonais comerciais foram testados com relação ao seu potencial de detectar IL-18 livre nas mesmas condições anteriores. Conforme descrito anteriormente, tal anticorpo será valioso para detectar IL-18 livre em amostras biológicas. A lista de anticorpos comerciais testados é dada na tabela 9 a seguir.

[00353] Os dados coletados indicam que nenhum dos anticorpos comercialmente disponíveis foi capaz de distinguir a IL-18 livre de seu complexo com IL-18BP.

4. Ajuste de ELISA para detectar IL-18 livre 4.1. Captura de IL-18 livre com IL-18BP

[00354] Poços de microplaca são revestidos com um volume apropriado de solução salina de tampão de fosfato contendo IL-18 BP humana recombinante. Placas são incubadas por um período de tempo a 4°C e então estabilizadas com um tampão de bloqueio contendo albumina sérica bovina ou outros agentes de bloqueio apropriados. Uma vez que a reação é finalizada, microplacas são vedadas e armazenadas a 4°C até que usadas para detecção de IL-18 livre. Microplacas também podem ser secas em uma solução de estabilização permitindo o armazenamento a temperatura ambiente e então ser reconstituída por hidratação quando necessário para ensaio.

[00355] Como um exemplo, para um volume de reação final de 100 μL, dispensar primeiro 80 μL de conjugado biotina/anticorpo. Amostras ou fluidos biológicos contendo IL-18 livre são testados com as microplacas revestidas com IL-18BP. Depois disto, 20 μL de volume de amostra contendo fluido biológico ou padrão são dispensados por poço da microplaca. Fluido biológico não diluído ou diluído pode ser, mas não é restrito, soro, urina, lágrima, saliva, bile, suor, exalação ou expiração, catarro, fluido broncoalveolar, sebo, celular, glândula, mucosa ou secreção de tecido, biópsia, tecido homogeneizado. As concentrações padrão de IL-18 livre variam entre 4,2 pg/mL a 3.000 pg/mL. Concentrações e padrão foram preparados a partir de IL-18 humana recombinante comercialmente disponível. As placas são vedadas e então incubadas em agitação suave para captura de IL-18 livre. Um período de tempo adequado é permitido para a reação variando de minutos a horas a temperatura ambiente, 37°C ou outras temperaturas que não afetam a estabilidade das amostras e reagentes. O poço das microplacas é lavado extensivamente com o tampão apropriado e então, 100 μL de mistura de desenvolvimento de tampão são adicionados a cada poço. A mistura de desenvolvimento contém uma enzima conjugada com estreptavidina, tal como peroxidase ou fosfatase alcalina. Os poços da microplaca são vedados e a reação é deixada por um período de tempo a um período de tempo adequado que varia de minutos a horas a temperatura ambiente, 37°C ou outras temperaturas que não afetam a estabilidade das amostras e reagentes. As reações resultantes são então monitoradas com um leitor de microplaca a um comprimento de onda de nanômetro apropriado para absorbância ou fluorescência do reagente produzido.

4.2. Captura de IL-18 livre com anticorpo anti-IL-18

[00356] Poços da microplaca são revestidos com um volume apropriado de solução salina de tampão de fosfato contendo anticorpo X. Placas são incubadas por um período de tempo a 4°C e então estabilizadas com um tampão de bloqueio contendo albumina sérica bovina ou outros agentes de bloqueio apropriados. Uma vez que a reação é finalizada, microplacas são vedadas e armazenadas a 4°C até que usadas para detecção de IL-18 livre. Microplacas também podem ser secas em uma solução de estabilização permitindo o armazenamento a temperatura ambiente e então ser reconstituída por hidratação quando necessário para ensaio.

[00357] Como um exemplo, para um volume de reação final de 100 μL, dispensar primeiro 80 μL de conjugado biotina/anticorpo. Amostras ou fluidos biológicos contendo IL-18 livre são testados com as microplacas revestidas com IL-18BP. Depois disto, 20 μL de volume de amostra contendo fluido biológico ou padrão são dispensados por poço da microplaca. Fluido biológico não diluído ou diluído pode ser, mas não é restrito, soro, urina, lágrima, saliva, bile, suor, exalação ou expiração, catarro, fluido broncoalveolar, sebo, celular, glândula, mucosa ou secreção de tecido, biópsia, tecido homogeneizado. As concentrações padrão de IL-18 livre variam entre 4,2 pg/mL a 3.000 pg/mL. Concentrações e padrão foram preparados a partir de IL-18 humana recombinante comercialmente disponível. As placas são vedadas e então incubadas em agitação suave para captura de IL-18 livre. Um período de tempo adequado é permitido para a reação variando de minutos a horas a temperatura ambiente, 37°C ou outras temperaturas que não afetam a estabilidade das amostras e reagentes. Os poços da microplaca são lavados extensivamente com o tampão apropriado e então, 100 μL mistura de desenvolvimento de tampão são adicionados a cada poço. A mistura de desenvolvimento contém uma enzima conjugada com estreptavidina, tal como peroxidase ou fosfatase alcalina. Os poços da microplaca são vedados e a reação é deixada por um período de tempo a um período de tempo adequado que varia de minutos a horas a temperatura ambiente, 37°C ou outras temperaturas que não afetam a estabilidade das amostras e reagentes. As reações resultantes são então monitoradas com um leitor de microplaca a um comprimento de onda de nanômetro apropriado para absorbância ou fluorescência.

4.3. Titulação de IL-18 livre como uma função do nível de IL- 18BP

[00358] Uma quantidade constante de IL-18 recombinante foi titulada como uma função de quantidades diferentes e bem definidas de IL-18BP de maneira a entender quando IL-18 livre não é nenhum mais detectável. Uma solução de PBS de IL-18 400 pg/mL suplementada por 5% de BSA foi repicada com quantidades definidas de IL-18BP que varia de 0 a 10.000 pg/mL. As razões molares foram calculadas de acordo com o respectivo peso molecular de IL-18 e IL-18BP. A detecção de IL-18 livre foi realizada com ELISA usando IL-18BP para IL-18, conforme descrito anteriormente. Os dados coletados apresentados na figura 1 indicam que detecção de IL-18 400 pg/mL é próxima do nível de detecção de fundo, quando a concentração de IL-18BP é igual ou superior a 6.000 pg/mL, representando uma razão molar de IL-18BP/ IL-18 ~15 vezes maior IL-18BP. Ao contrário, quando a razão molar é menor que 15, IL-18 livre é facilmente detectável.

4.4. Cálculo revisado da constante de dissociação (KD) entre IL-18 humana e IL-18BP 4.4.1 Cálculo de KD por titulação

[00359] Um KD de 400 pM é reportado na literatura com base nas medições de BIAcore (Kim et al 2000). Entretanto, devido aos resultados anteriores, o KD foi revisado com o ajuste de ELISA anterior. Titulação de IL- 18 10 pM foi realizada com concentrações crescentes de IL-18BP (60 pM - 3 nM) em qualquer de a) soros de voluntários saudáveis depletados de IL-18BP endógena ou b) PBS suplementado por 5% de BSA. O ELISA de IL- 18 livre, além dos ensaios comercialmente disponíveis para IL-18 total e IL-18BP total, permite a determinação de KD em solução, que refletiria melhor a afinidade de IL-18 com sua proteína de ligação em fluidos corporais que os da dos do método BIAcore de fase sólida. Exemplo de resultados são expostos na tabela 10.

KD = [IL-18 livre] x [IL-18BP livre] / [complexo IL-18/IL- 18BP] [IL-18BP livre] = [IL-18BP total] - [IL-18 livre] [complexo IL-18/IL-18BP] = [IL-18 total] - [IL-18 livre] Resultado: KD = 50 pM (diluente do soro) ; 35 pM (5% de diluente BSA)

[00360] O resultado da titulação indica um KD de, respectivamente, 50 pM no diluente do soro e 35 pM em PBS suplementado por 5% de BSA. Ao contrário das estimativas anteriores do KD entre IL-18 BP humana e IL-18, o KD recém calculado indica que estimativas anteriores de IL-18 livre com base no KD de 400 pM reportado por Kim et al 2000 não são exatos.

4.4.2 Estimativa de KD por BIAcore

[00361] Seguindo os resultados KD obtidos por titulação, foi testada a afinidade de ligação de IL-18BP com IL-18 com um ajuste de BIAcore mais simples que consiste da ligação de IL-18BP ao chip de BIAcore e então teste de sua afinidade à IL-18. O ajuste do método é o contrário de Kim et al 2000, que ligou IL-18 ao chip de BIAcore com um anticorpo monoclonal e então testou a afinidade do complexo anticorpo-IL-18 com IL-18BP. De forma importante, o novo ajuste de BIAcore coletou dados que são alinhados completamente às descobertas de titulação anterior, isto é, um KD que varia entre 20 e 30 pM. Os dados são apresentados na tabela 11 a seguir.

4.5. Titulação de IL-18 repicada no soro ou 5% de solução de BSA contendo IL-18BP

[00362] Soro humano contém níveis significativos de IL-18 endógena, bem como complexada para IL-18BP, respectivamente em níveis de ng/mL e pg/mL. Ambos são detectáveis com anticorpos comercialmente disponíveis. Entretanto, nenhum ensaio comercialmente disponível é disponível para detectar IL-18 livre. De maneira a verificar o ajuste do ELISA anterior para a detecção de IL-18 livre, foi repicado IL-18 recombinante humana em soro humano para encontrar níveis de detecção. Para isto, nanogramas de IL-18 foram repicados tanto no soro contendo IL-18BP 35 ng/mL endógeno quanto solução de PBS suplementada por 5% de BSA e IL-18BP 35 ng/mL. IL-18 livre resultante foi monitorada com o procedimento ELISA descrito anteriormente. Resultados são apresentados na tabela 12 a seguir.

5. Detecção de IL-18 livre em pacientes 5.1. Detecção de IL-18 livre no soro e fluido sinovial de pacientes que sofrem de diferentes doenças inflamatórias

[00363] Amostras de pacientes que sofrem de diferentes doenças inflamatórias foram testadas com o ELISA descrito anteriormente. Para isto, foram selecionadas diferentes condições de doença e estresse reportadas com maiores níveis de IL-18, tais como artrite reumatoide, psoríase, lúpus eritematoso sistêmico e unidade de cuidado intensivo. Para nosso conhecimento, nenhuma IL-18 livre foi identificada nos pacientes, somente pelo cálculo com a Lei da Ação da Massa e o KD de 400 pM reportado por Kim et al 2000. De acordo com os dados anteriores, foi esperado que possíveis níveis de IL-18 livre serão difíceis de detectar devido aos níveis de IL-18 totais que variam no soro abaixo ou próximo a 1.000 pg/mL, conforme reportado nos pedidos de patente científicos. Além do mais, foram testadas amostras de controles de idade combinada saudáveis para verificar o desempenho do ajuste de ELISA. Conforme esperado e contrário às estimativas da Lei de Ação de Massa reportada, os níveis de IL-18 livre não foram detectáveis nem no soro nem fluido sinovial, enquanto que IL-18 total e IL-18BP foram (ver tabela 13).

- : não detectável, níveis comparáveis ao sinal de fundo **: Altos níveis de IL-18BP não na curva padrão

5.2. Detecção de IL-18 livre no soro de pacientes que sofrem de doença de Still com início de ação adulto

[00364] Seguindo os resultados e, ao contrário das indicações anteriores tendo níveis razoavelmente baixos de IL-18 total, foram testadas as amostras de paciente com doença de Still com início de ação adulto, que é conhecida por seus níveis elevados de IL-18 total no soro (Kawashima et al 2001 e Chen et al 2004). Conforme descrito por Kawashima et al 2001 e em outro lugar, níveis de IL-18 total no soro elevados se correlacionam com atividade da doença de Still com início de ação adulto, tais como a) pirexia, artralgia, artrite, dano na cartilagem, b) maiores níveis de Ferritina e c) enzimas hepáticas (LDH). Graças ao ajuste de ELISA anterior, foram reportados pela primeira vez níveis de IL-18 livre em pacientes com doença de Still com início de ação adulto (ver tabela 14). Como para as outras indicações testadas, níveis de IL-18 livre calculados não correspondem aos níveis de IL-18 livre detectados. Os dados coletados indicam que pelo menos 70% dos pacientes foram positivos para IL-18 livre.

* : Nível comparável ao sinal de fundo ** : Nível comparável ao limite de detecção inferior - : não detectável, nível comparável ao sinal de fundo 6. Conclusões

[00365] Os dados tanto nos pedidos de patente quanto no ajuste experimental anterior demonstram que anticorpos monoclonais comerciais detectam IL-18 total, mas não IL-18 livre. Além do mais, os anticorpos mais comumente usados para quantificar IL-18, a saber 125-2H e 159-12B, são confirmados igualmente na detecção de IL-18 total.

[00366] A estimativa de IL-18 livre usando a Lei da Ação da Massa é uma abordagem interessante. Não obstante, as barras de erro grandes obtidas não suportam seu uso no monitoramento clínico. Além do mais, os anticorpos anti-IL-18BP detectam IL-18BP total e não a forma livre. Consequentemente, o cálculo de IL-18 livre usando a concentração de IL-18BP não tem exatidão.

[00367] A abordagem proposta para quantificar IL-18 livre focando o sítio de ligação de IL-18 à IL-18BP parece mais apropriada e é demonstrada pela primeira vez como mais exata que as quantificações extrapoladas com a ei da Ação da Massa. Além do mais, a afinidade de IL-18BP é maior que a reportada por Kim et al 2000 com um KD variando de próximo a 50 pM no soro e 20 a 30 pM com um novo ajuste BIAcore.

[00368] Finalmente, pacientes que sofrem de doença de Still com início de ação adulto foram diagnosticados como positivos para IL-18 livre pela primeira vez com a abordagem ELISA e um ajuste é apresentado na presente invenção. Os dados suportam descobertas recentes em IL-18 total para doença de Still com início de ação adulto, conforme reportado por Kawashima et al 2001 e Chen et al 2004, reportando altos níveis de IL-18 total. Pela primeira vez, a nova abordagem de ELISA apresentada neste pedido de patente demonstra a presença de IL-18 livre, não complexada e pró- inflamatória biologicamente ativa em pacientes com doença de Still com início de ação adulto.

B. Eficácia de IL-18BP em modelo de camundongo com exacerbação de COPD

[00369] A reivindicação do estudo foi determinar o efeito de IL-18BP, administrada em três níveis de dose, pela via subcutânea, na exacerbação induzida por ácido poli-inosínico:policitidílico de inflamação pulmonar induzida por fumo de tabaco, em camundongos C57BL/6J. Alto nível de dexametasona, dosado oralmente, foi incluído no estudo como um agente de referência.

1. Metodologia geral: modelo de camundongo exacerbação no dia quatro/ de fumo de tabaco

[00370] Camundongos receberam tanto veículo (PBS) quanto IL-18BP. IL-18BP foi dada subcutaneamente a 3 grupos de animais, respectivamente, a 1, 3 ou 10 mg/kg 2h antes da exposição inicial ao fumo de tabaco do dia 1 ao dia 4. Camundongos receberam oralmente tanto veículo quanto dexametasona (10 mg/kg) 1h antes de cada exposição duas vezes ao dia. Camundongos receberam por administração intranasal tanto o veículo quanto ácido poli- inosínico:policitidílico (2 mg/kg) 2h antes da exposição ao ar inicial ou ao fumo de tabaco no dia 4 para induzir exacerbação da inflamação pulmonar. Exposição ao fumo de tabaco foi realizada durante a manhã e a tarde como se segue: Dia 1 por 15 min, Dia 2 por 25 min, Dia 3 por 30 min e Dia 4 por 30 min.

[00371] Grupos de animal e seus respectivos regimes de tratamento são sumarizados na tabela 1.

TS: Fumo de tabaco; Veh: Veículo; Dex: Dexametasona, p[I:C]: ácido poli-inosínico:policitidílico

[00372] Depois dos tratamentos anteriores, animais foram terminalmente anestesiados no dia 5. Depois disto, uma amostra de sangue foi retirada por meio da artéria subclávia (plasma) e os animais foram tiveram lavagem broncoalveolar com 3 X 0,4 mL de PBS para análise celular e citocina/ mediador adicional. Sobrenadantes da lavagem broncoalveolar foram armazenadas a -80oC para análise da citocina/mediador. Células recuperadas da BALF foram contadas usando o contador de célula Sysmex. Finalmente, os dados coletados foram estatisticamente analisados por teste-t de Students e ANOVA (Sidak foi usado no caso dos dados que passaram no teste de normalidade ou teste Kruskal Wallis se os dados não passaram no teste de normalidade).

2. Confirmação da ativação da via de IL-18 no modelo camundongo de exacerbação no dia quatro/ fumo de tabaco

[00373] IL-18 de camundongo foi testada na BAL usando um ELISA comercial de maneira a confirmar o modelo de camundongo para ativação da via de IL-18. Os dados coletados indicam que uma clara indução de IL-18 no espaço da via aérea do pulmão (ver Figura 5). IL-18 não é detectável no controle (ar somente). Interessantemente, IL-18 é expressa em exposição ao fumo, mas não é significativamente induzida em poli[I:C] sozinho (abaixo do limite de detecção inferior). Ao contrário e, conforme esperado, a combinação de fumo e poli[I:C] aumenta consideravelmente IL-18 a níveis muito maiores na BAL que fumo ou poli[I:C] sozinho.

3. Diminuição da inflamação exacerbada por IL-18BP em modelo de camundongo de exacerbação/ fumo de tabaco 3.1. Inibição de infiltração da célula total e inflamação exacerbada no espaço da via aérea do pulmão por IL-18BP

[00374] Camundongos tratados por IL-18BP tiveram uma diminuição significativa da infiltração da célula total no pulmão depois da indução de inflamação exacerbada. Doses tanto de 3 quanto de 10 mg/kg indicaram eficácia estatisticamente valiosa comparada ao controle positivo de dexametasona (ver Figura 5). É importante notar que dexametasona não teve sinal na eficácia a 3 mg/kg doses no modelo de camundongo (dados não mostrados), indicando que a alta dose de dexametasona de 10 mg/kg potencialmente induz apoptose em certos tipos de célula, tais como macrófagos, eosinófilos e linfócitos (dados não mostrados). Observação similar foi feita com Roflumilast [3-(ciclopropilmetoxi)-N-(3,5- dicloropiridin-4-il)-4-(difluorometoxi) benzamida] no modelo de camundongo onde nenhuma sugestão de inibição da infiltração celular foi observada com 2,5 mg/kg dose (dados não mostrados). Figura 6 apresenta eficácia clara e estatisticamente relevante de IL-18BP a 10 mg/kg na inibição da inflamação exacerbada no atual modelo de camundongo.

3.2. Inibição da infiltração de neutrófilo no espaço da via aérea do pulmão por IL-18BP

[00375] Infiltração de neutrófilo foi inibida por IL-18BP em pulmões exacerbados com fumo de tabaco. Doses tanto de 3 quanto de IL-18BP 10 mg/kg indicaram eficácia estatisticamente valiosa comparada ao controle positivo de dexametasona (ver Figura 7). Nas atuais condições do modelo de camundongo, dose de IL-18BP 10 mg/kg parece ter a melhor eficácia estatística (ver Figura 8).

3.3. Inibição da via do fator que estimula colônia de granulócito (G-CSF) no espaço da via aérea do pulmão por IL-18BP

[00376] G-CSF é bem conhecido como citocina chave que estimula a sobrevivência, proliferação, diferenciação e função dos precursores do neutrófilo e neutrófilos maduros. Consequentemente, a diminuição da via de G-CSF induzido pelo fumo-p[I:C] é um fator significativo que demonstra um efeito de IL-18BP no recrutamento de neutrófilo no espaço da via aérea do pulmão de camundongo. A presença de G-CSF na BALF foi monitorada com um kit ELISA comercialmente disponível. Figura 9 demonstra que administração de IL-18BP diminui a liberação de G-CSF nas vias aéreas do pulmão, confirmando assim a inibição da infiltração de neutrófilo. As três doses de IL-18BP testadas têm um efeito estatisticamente relevante no modelo de camundongo.

3.4. Segurança de IL-18BP: Efeito na perda de peso em modelo de camundongo de exacerbação/ fumo de tabaco

[00377] Administração de IL-18BP pareceu ser bem tolerada por modelo de camundongo de exacerbação/ fumo de tabaco. Como um exemplo, perda de peso foi diminuída por IL-18BP mesmo que as análises estatísticas tanto de teste-t de Students quanto ANOVA não fossem significativas (ver Figura 10). Uma grande maioria de camundongos que recebem 3 e IL-18BP 10 mg/kg perderam, respectivamente, 6 a 7% em peso, ao contrário do controle exposto ao fumo de tabaco e p[I:C], que perderam cerca de 9%. Assim, dados de alívio da perda de peso indicam que IL-18BP não está provendo estresse adicional ao modelo de animal. É interessante notar que camundongos que recebem somente p[I:C] não perderam peso, comparados aos camundongos que receberam a combinação de p[I:C] e fumo de tabaco [ver Figura 8, tratamento 3) e 4)].

C. Geração de anticorpos monoclonais anti-IL-18 1. Imunização do camundongo e seleção do anticorpo monoclonal

[00378] Camundongos foram vacinados contra interleucina-18 humana usando uma tecnologia que permite a imunização com proteínas apropriadamente dobradas. Antes da imunização, camundongos geneticamente modificados foram selecionados para complexos de histocompatibilidade principal supostamente sensíveis aos epítopos da área de superfície de IL-18 que se ligam à IL-18BP. Depois da imunização, células B foram isoladas do baço e hibridizadas depois da tecnologia de hibridoma padrão. Hibridomas foram separados nas microplacas e então testados com relação à expressão de anticorpos monoclonais anti-IL-18 que focam epítopos de IL-18 incluídos no sítio de ligação de IL-18BP. A seleção foi realizada em 3 etapas sequenciais e seletivas:

[00379] Primeira etapa. Tentativa de seleção de anticorpo positivo foi realizada com IL-18 anexada às esferas de Luminex que confirmam anticorpos monoclonais anti-IL-18 que expressam células.

[00380] Segunda etapa. Anticorpos potenciais que focam IL-18 no sítio de ligação de IL-18BP foram pré-selecionadas em competição com IL- 18BP. Para isto, anticorpos monoclonais foram ligados às esferas de Luminex que carregam IL-18. O complexo foi então exposto à IL-18BP biotinilada de maneira a identificar a interferência dos anticorpos anti-IL-18 previamente identificados (ver tabela 1, Coluna #2). A segunda seleção realizou mais que 300 candidatos de anticorpo positivo (ver tabela 1, coluna #3). O número de candidatos positivos foi surpreendente alto, sugerindo uma excelente imunização do camundongo na área do epítopo focado. Entretanto, inibições não foram suficientes, devido aos sinais de fluorescência diminuídos, mas persistentes, assim, indicando ligação de IL-18BP ao anticorpo IL-18 complexado. Não obstante e importante, tal método de seleção padrão reportado em outro lugar não leva em consideração um impedimento histérico potencial da molécula de anticorpo grande (cerca de 160 kDa) contra a IL- 18BP muito menor (cerca de 18 kDa, peptídeo somente).

[00381] Terceira etapa. Um terceiro programa de seleção foi realizado com esferas de Luminex ligadas à IL-18BP e então complexadas à interleucina-18, garantindo a apresentação da IL-18 recombinante apropriadamente dobrada aos candidatos de anticorpo positivos. A seleção resultante foi consideravelmente mais seletiva em virtude de a maioria dos anticorpos anteriores ainda se ligarem às esferas de Luminex-IL-18, indicando que seu efeito inibidor anterior à IL-18BP foi devido ao impedimento histérico. Finalmente, um total de 12 anticorpos foi finalmente considerado como focando IL-18 na proteína IL-18BP devido ao seu sinal de fluorescência muito baixo depois da ligação de IL-18 na presença de IL-18BP, a saber clone # 107C6, 108F8, 109A6, 111A6, 129C3, 131B4, 131E8, 131H1, 132C12, 132H4, 133A6 e 134B2 (ver tabela 16, coluna #4, clones selecionados representando meios de inibição de mais que 500 vezes, comparado à coluna #2). Os anticorpos positivos em função de um conjunto de negativos são apresentados na tabela 16 a seguir.

[00382] Os dados coletados na terceira etapa de seleção (Tabela 16, coluna #4) promoveram adicionalmente trabalho de sequenciamento de RNAm e diluição do clone para enriquecer as células monoclonais positivas fora de # 107C6, 108F8, 109A6, 111A6, 129C3, 131B4, 131E8, 131H1, 132C12, 132H4, 133A6 e 134B2. Foi confirmado que todos estes anticorpos monoclonais se ligam à IL-18 no sítio de ligação IL-18BP.

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O inibidor de IL-18 para uso em qualquer uma das modalidades anteriores, em que o indivíduo a ser tratado pertence a um grupo de indivíduos que foi determinado como tendo níveis elevados de IL-18 livre e/ou uma razão anormal de IL-18 livre/IL-18BP (IL-18BP) nos fluidos corporais, particularmente soro, catarro, fluido de lavagem broncoalveolar (BALF), fluido sinovial e/ou circulação comparado aos níveis nos fluidos corporais de um indivíduo saudável. 4. O inibidor de IL-18 para uso em modalidades 2 ou 3, em que os ditos níveis elevados de IL-18 livre no soro são na faixa de 5 a 10.000 pg/mL, enquanto que a quantidade de IL-18 livre no soro de indivíduo saudável, particularmente um humano saudável, é <4 pg/mL. 5. O inibidor de IL-18 para uso de acordo com qualquer uma das modalidades anteriores, em que a dita doença ou distúrbio associada à IL- 18 é uma selecionada do grupo que consiste em doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), lesão do pulmão relacionada à transfusão, displasia broncopulmonar (BPD), síndrome do desconforto respiratório agudo (ARDS), doença de Still adulto, doença de Still juvenil, doença pulmonar intersticial (ILD), fibrose pulmonar idiopática, fibrose cística, hipertensão arterial pulmonar, asma, bronquiectasia, falha cardíaca, esclerose lateral amiotrófica (ALS), doença do olho seco (DED), queratite, úlcera e abrasão da córnea, neovascularização da córnea, neovascularização intraocular patológica, irite, glaucoma, degeneração macular, síndrome de Sjogren, uveíte autoimune, doença de Behçet, conjuntivite, conjuntivite alérgica, dermatite da pálpebra, diabetes tipo 2, doença do fígado gordo não alcoólica (NAFLD), esteato- hepatite, transplante de órgão sólido e hematológico, lesão de reperfusão de isquemia, febre do mediterrâneo familiar, síndromes periódicas associadas ao receptor do fator de necrose tumoral 1, síndromes de febre periódica associada a criopirina, síndromes de hiper-IgD, gota, síndrome de Schnitzler, granulomatose de Wegener também chamada granulomatose com poliangite (GPA), tireoidite de Hashimoto, doença de Crohn, colite ulcerativa, doenças relacionadas à imunoglobulina-4 (IgG4) e terapias com célula tronco. 6. O inibidor de IL-18 para uso de acordo com qualquer uma das modalidades anteriores, em que a dita doença ou distúrbio associada à IL- 18 é induzida por tabagismo ou exposição passiva ao fumo, em particular exposição ao fumo de tabaco. 7. O inibidor de IL-18 para uso de acordo com qualquer uma das modalidades anteriores, em que a dita doença ou distúrbio associada à IL- 18 é induzida por infecção viral. 8. O inibidor de IL-18 para uso de acordo com qualquer uma das modalidades anteriores, em que a dita doença ou distúrbio associada à IL- 18 é uma manifestação sistêmica induzida por IL-18 da inflamação e comorbidades associadas selecionadas do grupo que consiste em enfisema, inflamação do tecido, destruição do tecido, excisão pulmonar, desaparecimento da vasculatura, apoptose das células endoteliais, metaplasia do muco, hipertrofia cardíaca, diminuição de VEGF no tecido pulmonar, perda do vaso pulmonar, muscularização do vaso, remodelamento vascular, deposição de colágeno, camadas de elastina aberrantes no pulmão, remodelamento da via aérea fibrótica, alargamento do espaço da via aérea, remodelamento crônico das vias aéreas e vasos pulmonares e menor função pulmonar. 9. O inibidor de IL-18 para uso em qualquer uma das modalidades anteriores, em que tratamento compreende prevenção, interrupção, alívio ou reversão dos sintomas associados com a dita doença ou distúrbio. 10. O inibidor de IL-18 para uso em qualquer uma das modalidades anteriores, em que ligação à IL-18 é restrita ou inibida, particularmente ligação de IL-18 livre à IL-18R, mas especialmente ligação de IL-18 livre à IL-18Rα. 11. O inibidor de IL-18 para uso em qualquer uma das modalidades anteriores, em que vias de sinalização a jusante dependentes de IL-18 são modificadas, particularmente inibidas. 12. O inibidor de IL-18 para uso em qualquer uma das modalidades anteriores, em que maior expressão de IFNy, IL-13 ou IL-17A é modificada, particularmente inibida, comparada aos indivíduos não tratados que sofrem da dita doença ou distúrbio. 13. O inibidor de IL-18 para uso em qualquer uma das modalidades anteriores, em que o inibidor de IL-18 compensa o desequilíbrio de IL-18/IL-18BP captando e neutralizando o excesso de IL-18 livre no tecido e circulação. 14. Um anticorpo específico para IL-18 incluindo qualquer anticorpo ou partes funcionalmente equivalentes dos mesmos, que o anticorpo ou parte do mesmo se liga à IL-18 no sítio de ligação de IL-18BP ou na proximidade do sítio de ligação de IL-18BP. 15. O anticorpo específico para IL-18 incluindo qualquer anticorpo ou partes funcionalmente equivalentes dos mesmos de acordo com modalidade 14, cujo anticorpo da parte do mesmo se liga à proteína de IL-18 livre, mas não aos complexos IL-18/IL-18BP. 16. O anticorpo específico para IL-18 incluindo qualquer anticorpo ou partes funcionalmente equivalentes dos mesmos de acordo com modalidade 14 ou modalidade 15, em que o dito anticorpo ou parte do mesmo estericamente impede ou evita a ligação de IL-18BP à IL-18. 17. O anticorpo específico para IL-18 incluindo qualquer anticorpo ou partes funcionalmente equivalentes dos mesmos de acordo com modalidades 14 a 16, em que o dito anticorpo ou parte do mesmo especificamente se liga a um único epítopo, uma combinação de dois epítopos ou uma combinação de 3 epítopos compreendidos em uma sequência selecionada de um grupo de sequências apresentadas em SEQ ID NO:1, SEQ ID NO: 2 e SEQ ID NO: 3. 18. O anticorpo específico para IL-18 incluindo qualquer anticorpo ou partes funcionalmente equivalentes dos mesmos de acordo com modalidade 17, em que o dito epítopo tem uma sequência que tem 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100% de identidade de sequência para uma sequência selecionada de um grupo de sequências apresentadas em SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 e SEQ ID NO: 6. 19. O anticorpo específico para IL-18 incluindo qualquer anticorpo ou partes funcionalmente equivalentes dos mesmos de acordo com modalidade 18, em que o dito epítopo é selecionado do grupo que consiste em SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 e SEQ ID NO: 6. 20. O anticorpo específico para IL-18 incluindo qualquer anticorpo ou partes funcionalmente equivalentes dos mesmos de acordo com qualquer uma das modalidades anteriores, em que o dito anticorpo ou parte do mesmo é um anticorpo monoclonal ou um anticorpo policlonal. 21. O anticorpo específico para IL-18 incluindo qualquer anticorpo ou partes funcionalmente equivalentes dos mesmos de acordo com qualquer uma das modalidades anteriores, em que o dito anticorpo ou parte do mesmo é um anticorpo quimérico, de cadeia simples, biespecífico, simianizado, humano e humanizado. 22. O anticorpo específico para IL-18 incluindo qualquer anticorpo ou partes funcionalmente equivalentes dos mesmos de acordo com qualquer uma das modalidades anteriores, em que o dito anticorpo ou parte do mesmo se liga à IL-18 humana. 23. O anticorpo específico para IL-18 incluindo qualquer anticorpo ou partes funcionalmente equivalentes dos mesmos de acordo com qualquer uma das modalidades anteriores, em que ligação de IL-18 ao receptor de IL-18, particularmente que se liga à IL-18Rα é reduzida em pelo menos 5%, particularmente em pelo menos 10%, particularmente em pelo menos 15%, particularmente em pelo menos 20%, particularmente em pelo menos 25%, particularmente em pelo menos 30%, particularmente em pelo menos 40%, particularmente em pelo menos 45%, particularmente em pelo menos 50%, particularmente em pelo menos 55%, particularmente em pelo menos 60%, particularmente em pelo menos 65%, particularmente em pelo menos 70, particularmente em pelo menos 75, particularmente em pelo menos 80, particularmente em pelo menos 85%, particularmente em pelo menos 90%, particularmente em pelo menos 95%, particularmente em 100%. 24. O anticorpo específico para IL-18 incluindo qualquer anticorpo ou partes funcionalmente equivalentes dos mesmos de acordo com qualquer uma das modalidades anteriores, em que o dito anticorpo ou parte do mesmo neutraliza IL-18 livre restringindo ou prevenindo a ligação de IL-18 ao receptor de IL-18 (IL-18R), especialmente IL-18 livre que se liga à IL- 18Rα. 25. O anticorpo específico para IL-18 incluindo qualquer anticorpo ou partes funcionalmente equivalentes dos mesmos de acordo com qualquer uma das modalidades anteriores, em que o dito anticorpo ou partes do mesmo a) especificamente se liga a um único epítopo, uma combinação de dois epítopos ou uma combinação de 3 epítopos compreendidos em uma sequência selecionada de um grupo de sequências apresentadas em SEQ ID NO:1, SEQ ID NO: 2 e SEQ ID NO: 3; e/ou b) especificamente se liga a um epítopo, que tem uma identidade de sequência de 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% para a sequência apresentada em SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO:5 ou SEQ ID NO: 6; e c) especificamente se liga à IL-18 no sítio de ligação de IL- 18BP ou na proximidade do sítio de ligação de IL-18BP; e d) especificamente se liga à proteína de IL-18 livre, mas não aos complexos IL-18/IL-18BP; e e) estericamente impede a ligação de IL-18BP à IL-18; e f) reduz a ligação de IL-18 ao receptor de IL-18, particularmente que se liga à IL-18Rα em pelo menos 5%, particularmente em pelo menos 10%, particularmente em pelo menos 15%, particularmente em pelo menos 20%, particularmente em pelo menos 25%, particularmente em pelo menos 30%, particularmente em pelo menos 40%, particularmente em pelo menos 45%, particularmente em pelo menos 50%, particularmente em pelo menos 55%, particularmente em pelo menos 60%, particularmente em pelo menos 65%, particularmente em pelo menos 70, particularmente em pelo menos 75, particularmente em pelo menos 80, particularmente em pelo menos 85%, particularmente em pelo menos 90%, particularmente em pelo menos 95%, particularmente em 100%. 26. O inibidor de IL-18 para uso de acordo com qualquer uma as modalidades 1 a 13, em que o inibidor é um anticorpo, particularmente um anticorpo específico para IL-18 livre, particularmente um anticorpo antagonístico, que previne ligação de IL-18 livre ao receptor de IL-18, especialmente IL-18 livre que se liga à IL-18Rα. 27. O inibidor de IL-18 para uso de acordo com modalidade 26, em que o dito anticorpo é o anticorpo de qualquer uma das modalidades 14 a 25. 28. O inibidor de IL-18 para uso de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 13, em que os ditos níveis de IL-18 livre anormais nos fluidos corporais foram determinados pelo uso de um anticorpo de acordo com qualquer uma das modalidades 14 a 25. 29. O inibidor de IL-18 para uso de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 13, em que o inibidor é IL-18BP, particularmente IL-18 BP humana (hIL-18BP), particularmente IL-18BP incluindo quaisquer equivalentes ou partes funcionalmente do mesmo, particularmente uma IL- 18BP conforme mostrado em SEQ ID NO: 7. 30. O inibidor de IL-18 para uso em de acordo com modalidades 26 a 29, que é uma proteína de comprimento total ou uma muteína, derivado funcional, fragmento funcional, peptídeo biologicamente ativo, fração, derivado circularmente permutado, proteína fundida, isoforma ou um sal dos mesmos. 31. IL-18BP para uso no tratamento de doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), doença cardíaca, doença do olho seco e/ou diabetes tipo II. 32. O IL-18BP para uso de acordo com modalidade 31 para o tratamento de doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD). 33. O IL-18BP para uso de acordo com modalidade 31 para o tratamento de doença cardíaca. 34. O IL-18BP para uso de acordo com modalidade 31 para o tratamento de doença do olho seco. 35. O IL-18BP para uso de acordo com modalidade 31 para o tratamento de diabetes tipo II. 36. O IL-18BP para uso de acordo com modalidades 31 a 35, em que a dita doença ou distúrbio é induzida por tabagismo ou exposição passiva ao fumo, em particular exposição ao fumo de tabaco. 37. O IL-18BP para uso de acordo com qualquer uma das modalidades anteriores, em que a dita doença ou distúrbio é induzida por infecção viral. 38. O IL-18BP para uso de acordo com qualquer uma das modalidades anteriores, em que a dita doença ou distúrbio é uma manifestação sistêmica induzida por IL-18 da inflamação e comorbidades associadas selecionadas do grupo que consiste em enfisema, inflamação do tecido, destruição do tecido, excisão pulmonar, desaparecimento da vasculatura, metaplasia do muco, hipertrofia cardíaca, diminuição de VEGF no tecido pulmonar, perda do vaso pulmonar, muscularização do vaso, deposição de colágeno, camadas de elastina aberrantes no pulmão, remodelamento da via aérea fibrótica, alargamento do espaço da via aérea, remodelamento crônico das vias aéreas e vasos pulmonares e menor função pulmonar. 39. O IL-18BP para uso de acordo com qualquer uma das modalidades anteriores, em que ligação à IL-18 é restrita ou inibida, particularmente ligação de IL-18 livre à IL-18R, mas especialmente IL-18 livre que se liga à IL-18Rα. 40. O IL-18BP para uso de acordo com qualquer uma das modalidades anteriores, em que vias de sinalização a jusante dependentes de IL-18 são modificadas, particularmente inibidas. 41. O IL-18BP para uso de acordo com qualquer uma das modalidades anteriores, em que maior expressão de IFNy, IL-13 ou IL-17A é modificada, particularmente inibida, comparada aos indivíduos não tratados que sofrem da dita doença ou distúrbio. 42. O IL-18BP para uso de acordo com qualquer uma das modalidades anteriores, em que o inibidor de IL-18 compensa o desequilíbrio de IL-18/IL-18BP captando o excesso de IL-18 livre em tecido e circulação. 43. O IL-18BP para uso de acordo com qualquer uma das modalidades anteriores, em que tratamento compreende prevenção, interrupção, alívio ou reversão dos sintomas associados com a dita doença ou distúrbio. 44. Uma composição farmacêutica para uso no tratamento da doença ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades 1 a 13 em um indivíduo que sofre de uma doença ou distúrbio como esta ou tem uma predisposição para desenvolver uma doença ou distúrbio como esta, conforme definido em qualquer uma das modalidades 1 a 13, em que a dita composição compreendo inibidor de IL-18 de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 13 e 26 a 30, particularmente em uma quantidade profilática e/ou terapeuticamente efetiva. 45. A composição farmacêutica da modalidade 44, em que a dita composição opcionalmente ainda provê um outro inibidor de uma citocina pró-inflamatória ou fragmento funcional do mesmo, ou um fator regulatório, que induz expressão in situ do dito inibidor de citocina pró- inflamatória ou fragmento funcional do mesmo, agentes coterapêuticos, tais como substâncias de medicamento anti-inflamatório, broncodilatador, anti- histamina, descongestionante ou antitussígeno. 46. A composição farmacêutica da modalidade 44 ou 45, compreendendo um carreador e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável. 47. Uma composição farmacêutica para uso no tratamento da doença ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades 31 a 43 em um indivíduo que sofre de uma doença ou distúrbio como esta ou tem uma predisposição para desenvolver uma doença ou distúrbio como esta, conforme definido em qualquer uma das modalidades 31 a 43, em que a dita composição compreende a IL-18BP de acordo com modalidades 31 a 43, particularmente em uma quantidade profilática e/ou terapeuticamente efetiva. 48. A composição farmacêutica da modalidade 47, em que a dita composição opcionalmente ainda provê um outro inibidor de uma citocina pró-inflamatória ou fragmento funcional do mesmo, ou um fator regulatório, que induz expressão in situ do dito inibidor de citocina pró- inflamatória ou fragmento funcional do mesmo, agentes coterapêuticos, tais como substâncias de medicamento anti-inflamatório, broncodilatador, anti- histamina, descongestionante ou antitussígeno. 49. A composição farmacêutica da modalidade 47 ou 48, compreendendo um carreador e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável. 50. Um vetor de expressão compreendendo uma sequência de codificação do inibidor de IL-18 de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 13 e 26 a 30 que mediante administração a um indivíduo que sofre de uma doença ou distúrbio ou tem uma predisposição para desenvolver uma doença ou distúrbio como esta, conforme definido nas modalidade anteriores, leva à expressão in situ de inibidor de IL-18 para uso no tratamento da doença ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades 1 a 13. 51. Um vetor de expressão compreendendo um vetor de expressão antessentido IL-18 que mediante administração a um indivíduo que sofre de uma doença ou distúrbio ou tem uma predisposição para desenvolver uma doença ou distúrbio, conforme definido nas modalidades 1 a 13, leva à inibição in situ da expressão de IL-18 para uso no tratamento da doença ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades 1 a 13. 52. O vetor de expressão da modalidade 50 ou 51 para uso no tratamento da doença ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades 1 a 13 e 26 a 43, em que o dito vetor de expressão é administrado a um indivíduo que sofre de uma doença ou distúrbio como esta, ou tem uma predisposição para desenvolver uma doença ou distúrbio como esta, sozinho ou em combinação com o inibidor de IL-18 de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 13 e 26 a 30, a IL-18BP de acordo com modalidades 31 a 43 ou a composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das modalidades 44 a 49. 53. Um vetor de expressão compreendendo a sequência de codificação de IL-18BP de acordo com modalidades 31 a 43 que mediante administração a um indivíduo que sofre de uma doença ou distúrbio ou tem uma predisposição para desenvolver uma doença ou distúrbio como esta, conforme definido nas modalidades anteriores, leva à expressão in situ de IL- 18BP para uso no tratamento da doença ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades 31 a 43. 54. O vetor de expressão da modalidade 53 para uso no tratamento da doença ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades 1 a 13 e 26 a 43, em que o dito vetor de expressão é administrado a um indivíduo que sofre de uma doença ou distúrbio como esta, ou tem uma predisposição para desenvolver uma doença ou distúrbio como esta, sozinho ou em combinação com o inibidor de IL-18 de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 13 e 26 a 30, a IL-18BP de acordo com modalidades 31 a 43 ou a composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das modalidades 44 a 49. 55. O inibidor de IL-18 para uso de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 13 e 26 a 30, a IL-18BP para uso de acordo com qualquer uma das modalidades 31 a 43, a composição farmacêutica para uso de acordo com qualquer uma das modalidades 44 a 49 ou o vetor de expressão para uso de acordo com qualquer uma das modalidades 50 a 54, compreendendo administrar a um indivíduo em necessidade do mesmo uma quantidade profilática e/ou terapeuticamente efetiva do dito inibidor de IL-18, IL-18BP, composição farmacêutica, ou vetor de expressão, particularmente em administração sistêmica, intranasal, bucal, oral, transmucosal, intratraqueal, intravenosa, subcutânea, trato intraurinário, intravaginal, sublingual, intrabronquial, intrapulmonar, transdérmica ou intramuscular administração, em particular broncopulmonar. 56. O inibidor de IL-18, o IL-18BP, a composição farmacêutica ou o vetor de expressão para uso de acordo com modalidade 55, em que o dito indivíduo é um mamífero, particularmente o dito indivíduo é um humano. 57. Um método para tratar a doença ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades 1 a 13 e 26 a 43 em um indivíduo que sofre de uma doença ou distúrbio como esta, ou tem uma predisposição para desenvolver uma doença ou distúrbio como esta, compreendendo administrar ao dito indivíduo uma quantidade terapêutica ou profilaticamente efetiva do inibidor de IL-18 de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 13 e 26 a 30, a IL-18BP de acordo com modalidades 31 a 43 ou a composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das modalidades 44 a 49 e/ou o vetor de expressão de acordo com qualquer uma das modalidades 50 a 54, particularmente em administração sistêmica, intranasal, bucal, oral, transmucosal, intratraqueal, intravenosa, subcutânea, trato intraurinário, intravaginal, sublingual, intrabronquial, intrapulmonar, transdérmica ou intramuscular administração, em particular broncopulmonar. 58. Um método para o diagnóstico da doenças ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades 1 a 13 e 26 a 43, para diagnosticar uma predisposição à doença ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades 1 a 13 e 26 a 43, para monitorar doença residual mínima em um indivíduo, ou para prever capacidade de resposta de um indivíduo a um tratamento com inibidor de IL-18 de acordo com modalidades 1 a 13 e 26 a 30, a IL-18BP de acordo com modalidades 31 a 43 ou a composição farmacêutica compreendendo inibidor de IL-18 de acordo com modalidades 44 a 49, compreendendo as etapas: a) obter uma amostra de fluido corporal, particularmente soro de um indivíduo; b) testar a dita amostra com relação à presença de IL-18 livre usando o anticorpo IL-18 de qualquer uma das modalidades 14 a 25 ou a IL- 18BP de qualquer uma das modalidades ,.,como molécula de captura e/ou testar a dita amostra com relação à presença de IL-18BP livre usando um primeiro anticorpo monoclonal de captura específico de IL-18BP e um anticorpo de detecção específico de IL-18BP, que se liga a um diferente sítio de IL-18BP que o anticorpo de captura, particularmente um dos ditos anticorpos se liga ao sítio de ligação IL-18 de IL-18BP; c) determinar a quantidade de IL-18 livre e/ou IL-18BP livre ligada à molécula de captura na amostra; d) comparar a quantidade de IL-18 livre e/ou IL-18BP livre na amostra do indivíduo que sofre de uma doença como esta à quantidade na amostra de um indivíduo saudável. 59. Um método para o diagnóstico da doenças ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades 1 a 13 e 26 a 43, para diagnosticar uma predisposição à doença ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades 1 a 13 e 26 a 43, para monitorar doença residual mínima em um indivíduo, ou para prever capacidade de resposta de um indivíduo a um tratamento com inibidor de IL-18 de acordo com modalidades 1 a 13 e 26 a 30, a IL-18BP de acordo com modalidades 31 a 43 ou a composição farmacêutica compreendendo inibidor de IL-18 de acordo com modalidades 44 a 49 e um carreador e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável de acordo com qualquer uma das modalidades anteriores, compreendendo as etapas: a) obter uma amostra de fluido corporal, particularmente catarro e soro de um indivíduo; b) testar a dita amostra com relação à presença de IL-18 livre usando anticorpo de o IL-18 das modalidades 14 a 25 ou a IL-18BP como molécula de captura e/ou testar a dita amostra com relação à presença de IL- 18BP livre usando um primeiro anticorpo monoclonal de captura específico de IL-18BP e uma anticorpo de detecção específico de IL-18BP, que se liga a um diferente sítio de IL-18BP que o anticorpo de captura, particularmente um dos ditos anticorpos específicos de IL-18BP se liga ao sítio de ligação IL-18 de IL-18BP; c) testar a dita amostra com relação à presença de IL-18 total e/ou IL-18BP total usando um primeiro anticorpo monoclonal específico de IL-18BP que não se liga ao sítio de ligação IL-18 de IL-18BP e um segundo anticorpo específico para IL-18, que não se liga ao sítio de ligação IL-18BP de IL-18; d) determinar a quantidade de IL-18 livre e total e/ou IL-18BP livre e total ligada à molécula de captura na amostra; e) comparar a quantidade de IL-18 livre e/ou total e/ou IL- 18BP livre e/ou total na amostra do indivíduo que sofre de uma doença como esta à quantidade na amostra de um indivíduo saudável. 60. O método para o diagnóstico de qualquer uma das modalidades anteriores, em que a quantidade de IL-18 livre em soro isolado de um indivíduo, particularmente um humano, que sofre da dita doença varia de 5 a 10.000 pg/mL, enquanto que a quantidade de IL-18 livre no soro de indivíduo saudável, particularmente um humano saudável, é <4 pg/mL. 61. Um conjunto de biomarcadores para uso no diagnóstico das doenças ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades 1 a 13 e 26 a 43, para uso no diagnóstico de uma predisposição à doença ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades 1 a 13 e 26 a 43 ou para uso no monitoramento da doença residual mínima em um indivíduo, ou para prever capacidade de resposta de um indivíduo a um tratamento com inibidor de IL-18 de acordo com modalidades 1 a 13 e 26 a 30, a IL-18BP de acordo com modalidades 31 a 43 ou a composição farmacêutica compreendendo inibidor de IL-18 de acordo com modalidades 44 a 49. 62. Um método para o diagnóstico da doenças ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades 1 a 13 e 26 a 43, para diagnosticar uma predisposição à doença ou distúrbio, conforme definido em qualquer uma das modalidades 1 a 13 e 26 a 43 ou para monitorar doença residual mínima em um indivíduo, ou para prever capacidade de resposta de um indivíduo a um tratamento com inibidor de IL-18 de acordo com modalidades 1 a 13 e 26 a 30, o IL-18BP de acordo com modalidades 31 a 43 ou a composição farmacêutica compreendendo inibidor de IL-18 de acordo com modalidades 44 a 49, compreendendo as etapas: a) obter um perfil de biomarcador de um indivíduo a ser testado retirando uma amostra de um fluido corporal do dito indivíduo; b) obter um perfil de biomarcador de uma população de referência saudável; c) obter um perfil de biomarcador de uma população que sofre da dita doença ou distúrbio e d) comparar o perfil de biomarcador obtido na etapa a) com o perfil obtido na etapa b) e etapa c). 63. Um kit farmacêutico compreendendo inibidor de IL-18 de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 13 e 26 a 30, IL-18BP de acordo com modalidades 31 a 43 ou uma composição farmacêutica compreendendo inibidor de IL-18 de acordo com modalidades 44 a 49 e um carreador e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável de acordo com a invenção nas formas de dosagem unitárias separadas, as ditas formas sendo adequadas para administração em quantidades efetivas. 64. Um kit de diagnóstico para detectar IL-18 livre, compreendendo uma anticorpo específico de IL-18 de acordo com qualquer uma das modalidades 14 a 25 como anticorpo de captura ou o IL-18BP como anticorpo de captura alternativa e um segundo anticorpo de detecção específico de IL-18 ou uma anticorpo específico de IL-18 de acordo com qualquer uma das modalidades 14 a 25 as anticorpo de detecção e um segundo anticorpo de captura específico de IL-18, em que o anticorpo de detecção se liga aos diferentes sítios de IL-18 que a molécula de captura. 65. Um kit de diagnóstico para detectar IL-18 total ou IL-18BP total, compreendendo um primeiro anticorpo monoclonal específico de IL- 18BP que não se liga ao sítio de ligação IL-18 de IL-18BP e um segundo anticorpo específico para IL-18, que não se liga ao sítio de ligação IL-18BP de IL-18. 66. Um kit de diagnóstico para detectar IL-18BP livre, compreendendo um primeiro anticorpo monoclonal específico de IL-18BP de captura e um anticorpo de detecção específico de IL-18BP que se liga a um diferente sítio de IL-18BP que o anticorpo de captura. 67. Um kit de diagnóstico, que compreende todos os kits de diagnóstico das modalidades 64 a 66.

Claims (18)

1. Método para determinação da quantidade de IL-18 livre em uma amostra ou in situ, compreendendo detectar a ligação específica de uma proteína que se liga a IL-18 (IL-18BP) à proteína IL-18 livre em uma amostra ou in situ, o método caracterizado pelo fato de que: a) uma amostra ou uma parte do corpo específica ou área do corpo suspeita de conter IL-18 livre é colocada em contato com a proteína que se liga a IL-18 (IL-18BP), que especificamente se liga à IL-18 livre, mas não à IL-18 ligada em um complexo IL-18/IL-18BP e funciona como a molécula de captura para IL-18 livre; b) a proteína que se liga a IL-18 (IL-18BP) é permitida que se ligue à IL-18 livre; c) a ligação de IL-18 à proteína que se liga a IL-18 (IL-18BP) é detectada usando um imunoensaio, e a quantidade de IL-18 livre na amostra é determinada usando uma curva padrão linear, a qual é calculada para concentrações predefinidas de IL-18.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a proteína de ligação a IL-18 é uma IL-18BP humana (hIL- 18BP) ou um equivalente funcional ou fragmento desta.

3. Método, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que a proteína que se liga a IL-18 é uma IL-18BP, que tem a sequência representada na SEQ ID NO: 7, ou um equivalente funcional ou fragmento da mesma.

4. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a amostra é um fluido corporal selecionado do grupo que consiste em fluido de lavagem bronco a alveolar (BALF) fluidos de circulação, fluidos de secreção, biópsia, e tecido homogeneizado, particularmente soro, plasma, urina, lágrima, saliva, bile, suor, exalação, expiração, escarro, fluido broncoalveolar, sebo, secreção celular, glândular, mucosa e tecidual.

5. Uso de uma proteína que se liga a IL-18 (IL-18BP), caracterizado pelo fato de que é para a manufatura de uma composição para o tratamento de uma doença ou um distúrbio associada(o) à IL-8 em uma população de indivíduos diagnosticados com níveis anormais de IL-18 livre e/ou uma razão anormal de IL-18 livre/IL-18BP em amostras corporais, particularmente em fluidos corporais, comparado aos níveis em fluidos corporais de um indivíduo de controle saudável, em que dito nível anormal de IL-18 livre nos fluidos corporais: 1. excede o nível em fluidos corporais de um indivíduo de controle saudável em 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, ou mais que 100%; e 2. são >5 pg/mL e, particularmente, até 10.000 pg/mL, enquanto a quantidade de IL-18 livre no soro do indivíduo saudável, particularmente um humano saudável é <4 pg/mL, em que a população de indivíduos diagnosticada como tendo níveis anormais de IL-18 livre e/ou uma razão anormal de razão de IL-18/IL- 18BP em amostras corporais, particularmente em fluidos corporais, comparada com os níveis nos fluidos corporais de um indivíduo controle saudável foi determinado utilizando o método como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4.

6. Uso de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a proteína que se liga a IL-18 (IL-18BP) é IL-18BP humana (hIL- 18BP) ou um equivalente funcional ou fragmento do mesmo.

7. Uso, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que a proteína que se liga a IL-18 é uma IL-18BP, que tem a sequência representada na SEQ ID NO: 7, ou um equivalente funcional ou fragmento da mesma.

8. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 a 7, caracterizado pelo fato de que dita doença ou distúrbio associado a IL-18 é: a) um selecionado do grupo que consiste de doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), lesão do pulmão relacionada à transfusão, displasia broncopulmonar (BPD), síndrome de desconforto respiratório adulto (ARDS), doença de Still adulto, doença de Still juvenil, doença pulmonar intersticial (ILD), fibrose pulmonar idiopática, fibrose cística, hipertensão arterial pulmonar, asma, bronquiectasia, falha cardíaca, esclerose lateral amiotrófica (ALS), doença do olho seco (DED), queratite, úlcera e abrasão da córnea, neovascularização da córnea, neovascularização intraocular patológica, irite, glaucoma, degeneração macular, síndrome de Sjogren, uveíte autoimune, doença de Behçet, conjuntivite, conjuntivite alérgica, dermatite da pálpebra, diabetes tipo 2, doença do fígado gordo não alcoólica (NAFLD), esteato-hepatite, transplante de órgão sólido e hematológico, lesão de reperfusão de isquemia, febre do mediterrâneo familiar, síndromes periódicas associadas ao receptor do fator de necrose tumoral 1, síndromes de febre periódica associada a criopirina, síndromes de hiper-IgD, gota, síndrome de Schnitzler, granulomatose de Wegener também chamada granulomatose com poliangite (GPA), tireoidite de Hashimoto, doença de Crohn, colite ulcerativa, doenças relacionadas à imunoglobulina-4 (IgG4) e terapias com célula tronco; e/ou b) induzido por infecção viral; e/ou c) uma manifestação sistêmica induzida por IL-8 da inflamação e comorbidades associadas selecionadas do grupo que consiste em enfisema, inflamação do tecido, destruição do tecido, excisão do pulmão, desaparecimento da vasculatura, apoptose de células endoteliais, metaplasia do muco, hipertrofia cardíaca, diminuição de VEGF no tecido do pulmão, perda do vaso pulmonar, muscularização dos vasos, remodelação vascular, deposição de colágeno, camadas de elastina aberrantes no pulmão, remodelamento das vias aéreas fibróticas, alargamento do espaço aéreo, remodelamento crônico das vias aéreas e vasos pulmonares e função pulmonar diminuída, e em que o tratamento compreende prevenção, interrupção, alívio ou reversão dos sintomas associados com a dita doença ou distúrbio.

9. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 a 8, caracterizado pelo fato de que a proteína que se liga a IL-18 (IL-18BP) reduz a ligação de IL-18 ao receptor de IL-18 (IL-18R), particularmente se ligando tanto a IL-18Rα, IL-18Rβ ou a ambos em pelo menos 5%, particularmente em pelo menos 65%, particularmente em pelo menos 70, particularmente em pelo menos 75, particularmente em pelo menos 80, particularmente em pelo menos 85%, particularmente em pelo menos 90%, particularmente em pelo menos 95%, particularmente em 100%.

10. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 5-9, caracterizado pelo fato de que a dita composição é uma composição farmacêutica compreendendo a proteína que se liga a IL-18 (IL-18BP) como definida em qualquer uma das reivindicações 5 a 9, em uma quantidade profilática e/ou terapeuticamente efetiva junto com um excipiente ou carreador farmaceuticamente aceitável.

11. Uso, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que a dita composição ainda provê um outro inibidor de uma citocina pró-inflamatória ou fragmento funcional da mesma, ou um fator regulatório que induz a expressão in situ do dito inibidor de citocina pró-inflamatória ou fragmento funcional da mesma, agentes coterapêuticos, tais como substâncias de medicamento anti-inflamatório, broncodilatador, anti-histamina, descongestionante ou antitussígeno.

12. Kit de diagnóstico para detectar IL-18 livre, caracterizado pelo fato de que compreende a proteína que se liga a IL-18 (IL-18BP) como a molécula de captura, e uma segunda molécula de ligação específica para IL- 18 como a molécula de detecção, em que a molécula de detecção é um reagente secundário, anticorpo, ou antígeno marcado para detecção, que se liga a diferentes sítios de IL-18 que a molécula de captura.

13. Kit de diagnóstico, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que a IL-18BP é IL-18BP humana (hIL-18BP) ou um fragmento funcional da mesma.

14. Kit de diagnóstico, de acordo com a reivindicação 12 ou 13, caracterizado pelo fato de que a IL-18BP é uma IL-18BP, que possui a sequência representada na SEQ ID NO: 7, ou um fragmento funcional da mesma.

15. Kit de diagnóstico de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de ser para uso em um método como definido na reivindicação 1.

16. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que é para o diagnóstico de uma doença ou distúrbio associado a IL-18, ou de uma predisposição a uma doença ou distúrbio associado a IL-18, em que a quantidade de IL-18 livre na amostra de um sujeito que sofre das doenças ou distúrbios é comparada com a quantidade de IL-18 livre na amostra de um sujeito saudável, em que um aumento na quantidade da referida IL-18 livre na amostra em comparação com um valor de controle normal obtido de um paciente saudável indica que o referido sujeito sofre ou corre o risco de desenvolver uma doença ou distúrbio.

17. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que é para o monitoramento de doença residual mínima em um paciente após o tratamento com o inibidor de IL-18, em que a quantidade de IL-18 livre na amostra do paciente que sofre de uma doença ou distúrbio associado a IL- 18 é comparada com a quantidade de IL-18 livre na amostra de um sujeito saudável, em que um aumento na quantidade da referida IL-18 livre na amostra em comparação com um valor de controle normal obtido de um paciente saudável indica que o referido sujeito ainda sofre de uma doença residual mínima.

18. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que é para prever a responsividade de um paciente que sofre de uma doença ou distúrbio associado à IL-18 a um tratamento com o inibidor de IL-18, em que a quantidade de IL-18 livre na amostra do paciente que sofre de uma doença ou distúrbio associado à IL-18 é comparada com a quantidade de IL-18 livre na amostra de um sujeito saudável; em que uma diminuição na quantidade da referida IL-18 livre na amostra do sujeito tratado indica que o referido paciente tem um alto potencial de responder ao tratamento.

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