CN115920010A - 一种鲑降钙素组合物喷雾剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种鲑降钙素组合物喷雾剂及其制备方法,该鲑降钙素组合物包括如下组分:改性鲑降钙素、氯化钠、枸橼酸、枸橼酸钠、聚维酮K30、依地酸二钠、苯扎氯铵、纯化水;本发明通过对鲑降钙素进行改性,再采用科学的配比和制备方法制备了鲑降钙素组合物喷雾剂。与现有技术相比,本发明制备的鲑降钙素组合物喷雾剂可以有效治疗骨质疏松症患者,还能有效调节骨密度及骨转化标志物(BTMs)的表达水平,并促进骨密度升高,且不增加不良反应的发生。
Description
技术领域
本发明涉及药物制剂技术领域,尤其涉及一种鲑降钙素组合物喷雾剂及其制备方法。
背景技术
老年性骨质疏松症是常见的老年疾病,对老年人的身体健康也有着明显的威胁。目前,治疗骨质疏松症的主要方法是控制骨量流失、维持和增加骨密度。降钙素是用于治疗该疾病的主要药物之一。
降钙素是一种氨基酸单链多肽,属于一种骨代谢的调节剂,是由甲状腺滤泡旁细胞分泌的激素。降钙素主要来源于鲑鱼、鳗鱼、牛、羊、猪、人等群体,而不同的来源,其降钙素中的骨代谢水平和活性并不一致。鲑降钙素是其中活性最高的一种,氨基酸排列与人体的排列结构高度相似,在抑制破骨细胞活性方面有着非常直接的抑制作用,能促进骨的新生。鲑降钙素与骨细胞上的降钙素的亲和力很高,结合度也非常高,能抑制破骨细胞的活性、控制钙磷过度代谢,从而能抑制骨量的流失,并且还具有很强的镇痛效果,对中枢神经产生良好的刺激作用。
中国发明专利CN103110933A公开了一种依降钙素药物组合物及其制备方法,该依降钙素注射液包括依降钙素、枸橼酸钠、枸橼酸和氯化钠,通过将枸橼酸钠用0.9%氯化钠注射液溶解得枸橼酸钠溶液,将枸橼酸用注射水溶解得枸橼酸溶液,用枸橼酸溶液调节枸橼酸钠溶液pH至5.0~6.5,用0.9%氯化钠注射液定容,加入依降钙素,过滤,灌装,轧盖即得。该依降钙素注射液,不仅处方和工艺简单,降低成本并适合工业化生产,而且能在有效期内保持pH值稳定和活性成分含量的稳定。但是该发明制备的依降钙素药物组合物降钙效果差,疗效不显著。
中国发明专利CN108969754A公开了一种鲑降钙素鼻喷雾剂及其制备方法。该发明的鲑降钙素鼻喷雾剂由鲑降钙素、氯化钠、枸橼酸、枸橼酸钠、依地酸二钠、聚维酮K30、植物甾醇、防腐剂和纯化水组成。该发明的鲑降钙素鼻喷雾剂中的聚维酮K30,可使鲑降钙素溶液分布均匀,与植物甾醇和依地酸二钠协同作用,增加鲑降钙素的稳定性;该发明的鲑降钙素鼻喷雾剂中的植物甾醇和聚维酮K30联合,同主要成分鲑降钙素形成特殊的刚性聚集体,该聚集体与鼻粘膜充分接触,使鲑降钙素在鼻腔中的滞留时间延长,降低鲑降钙素鼻喷雾剂的不良反应,提高鲑降钙素的生物利用度。但是,该发明制备的鲑降钙素鼻喷雾剂中鲑降钙素的生物利用度依然较低,调节骨密度及骨转化标志物的表达能力有限。
发明内容
有鉴于现有技术中鲑降钙素组合物生物利用度低、调节骨密度及骨转化标志物的表达能力有限的缺点,本发明所要解决的技术问题是提供一种具有较好生物利用度和调节骨密度及骨转化标志物的表达能力的一种鲑降钙素组合物喷雾剂及其制备方法。
为了实现上述发明目的,本发明采用了如下的技术方案:
一种鲑降钙素组合物喷雾剂,包括如下组分:改性鲑降钙素、氯化钠、枸橼酸、枸橼酸钠、聚维酮K30、依地酸二钠、苯扎氯铵、纯化水。
优选的,所述鲑降钙素组合物喷雾剂,包括如下重量份组分:1.25份改性鲑降钙素、20~40份氯化钠、90~100份枸橼酸、100~120份枸橼酸钠、90~110份聚维酮K30、8~9份依地酸二钠、0.5~1.0份苯扎氯铵、纯化水补至10000份。
优选的,所述鲑降钙素组合物喷雾剂的制备方法如下:按配方称取各物质,将改性鲑降钙素、氯化钠、依地酸二钠、聚维酮K30和苯扎氯铵加入800~1200重量份纯化水中,室温溶解完全,加入枸橼酸和枸橼酸钠,纯化水定容至10000重量份,得混合溶液;将混合溶液过0.2~0.3μm滤膜,即得鲑降钙素组合物喷雾剂。
优选的,所述纯化水为纯化水为去离子水或蒸馏水中的一种。
所述改性鲑降钙素,制备方法如下:
S1、将甲氧基聚乙二醇溶解在甲苯中,并在100~300rpm搅拌下在油浴中回流0.5~2h,回流温度为120~150℃,然后减压去除溶剂,得到反应物,然后将反应物、磺酰氯和三乙胺加到二氯甲烷中,然后保存在冰水浴中,搅拌20~30h,搅拌速度为100~500rpm,得到反应混合物;随后将反应混合物倒入水中,收集有机相,减压去除溶剂,得到功能剂;
S2、将步骤S1制备的功能剂和叠氮化钠加入二甲基甲酰胺中,在50~80℃的油浴中搅拌20~30h,200~500目筛网过滤去除溶剂,残渣加入到二氯甲烷中,收集有机相,然后加入二乙二醇丁醚中,200~500目筛网过滤,收集沉淀,得到改性产物;
S3、将步骤S2制备的改性产物在混合溶剂中溶解,加入Pd/C加氢催化剂反应20~30h,加入二乙二醇丁醚中,200~500目筛网过滤,收集沉淀,真空干燥1~3h,真空度为0.01~0.08MPa,干燥温度为40~80℃,得到白色固体;
S4、在水中溶解海藻酸,然后加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐,在室温下搅拌反应,搅拌速度为100~300rpm,反应1~3h后,得到改性海藻酸溶液,将步骤S3制备的白色固体加入改性海藻酸溶液中,常温反应20~30h,然后采用透析膜透析,将透析液冻干,得到接枝化合物;
S5、将乙酸和乙酸钠加入水中混合均匀,制备成流动相A;将氯化钠和磷酸二氢钠加入水中混合均匀,采用0.5~2wt%NaOH水溶液调节pH为7~8,得到流动相B;将鲑降钙素和流动相A加入流动相B中,在室温下搅拌20~50min,搅拌速度为100~500rpm,得到前处理鲑鱼降钙素溶液;
S6、将步骤S4制备的接枝化合物溶解在水中配置成0.2~0.3mg/mL接枝化合物水溶液,室温下滴加等体积的步骤S5制备的前处理鲑鱼降钙素溶液,然后在室温下持续搅拌30min,搅拌速度为100~300rpm,得到改性鲑降钙素。
优选的,所述改性鲑降钙素,以重量份计,制备方法如下:
S1、将10~20份甲氧基聚乙二醇溶解在80~150份甲苯中,并在100~300rpm搅拌下在油浴中回流0.5~2h,回流温度为120~150℃,然后减压去除溶剂,得到反应物,然后将反应物、0.5~1份磺酰氯和1~1.5份三乙胺加到50~100份二氯甲烷中,然后保存在冰水浴中,搅拌20~30h,搅拌速度为100~500rpm,得到反应混合物;随后将反应混合物倒入50~100份水中,收集有机相,减压去除溶剂,得到功能剂;
S2、将步骤S1制备的功能剂和0.1~0.8份叠氮化钠加入40~80份二甲基甲酰胺中,在50~80℃的油浴中搅拌20~30h,200~500目筛网过滤去除溶剂,残渣加入到50~100份二氯甲烷中,收集有机相,然后加入80~150份二乙二醇丁醚中,200~500目筛网过滤,收集沉淀,得到改性产物;
S3、将步骤S2制备的改性产物在混合溶剂中溶解,加入0.1~0.3份Pd/C加氢催化剂反应20~30h,加入80~150份二乙二醇丁醚中,200~500目筛网过滤,收集沉淀,真空干燥1~3h,真空度为0.01~0.08MPa,干燥温度为40~80℃,得到白色固体;
S4、在8~15份水中溶解0.1~0.5份海藻酸,然后加入0.05~0.2份1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐,在室温下搅拌反应,搅拌速度为100~300rpm,反应1~3h后,得到改性海藻酸溶液,将步骤S3制备的白色固体加入改性海藻酸溶液中,常温反应20~30h,然后采用透析膜透析,将透析液冻干,得到接枝化合物;
S5、将3~4份乙酸和1~3份乙酸钠加入10~30份水中混合均匀,制备成流动相A;将1~3份氯化钠和0.05~0.2份磷酸二氢钠加入10~30份水中混合均匀,采用0.5~2wt%NaOH水溶液调节pH为7~8,得到流动相B;将1~2份鲑降钙素和流动相A加入流动相B中,在室温下搅拌20~50min,搅拌速度为100~500rpm,得到前处理鲑鱼降钙素溶液;
S6、将步骤S4制备的接枝化合物溶解在水中配置成20~40份0.2~0.3mg/mL接枝化合物水溶液,室温下滴加等体积的步骤S5制备的前处理鲑鱼降钙素溶液,然后在室温下持续搅拌30min,搅拌速度为100~300rpm,得到改性鲑降钙素。
优选的,所述混合溶剂为甲醇和二氯甲烷按质量比20~30:2~6组成的混合物。
优选的,所述透析时间为5~10天,透析膜截留分子量为8000~12000。
优选的,所述步骤S4中白色固体与改性海藻酸溶液以质量比1:4~6进行混合。
本发明将甲氧基聚乙二醇与甲苯混合,在与磺酰氯和三乙胺在二氯甲烷中反应得到功能剂,功能剂在与叠氮化钠复合得到改性产物,在Pd/C加氢催化剂的促进下得到白色固体,接枝海藻酸后与前处理鲑降钙素溶液复合得到改性鲑降钙素。改性鲑降钙素与辅料混和加工制备成喷雾剂。其中三乙胺和磺酰氯可以将甲氧基聚乙二醇的末端羟基活化,叠氮化钠在加氢催化剂作用下处理后生成氨基,海藻酸的共价连接是通过白色固体上的氨基与海藻酸的羧基形成酰胺键实现的。由于鲑降钙素带净正电荷,流动相A和流动相B分子与鲑降钙素结合,两流动相具有更高的电荷密度和更高的强度,可以形成更致密的结构,生成稳定的复合纳米粒子。复合纳米粒子中存在的盐可以降低离子化,从而降低聚合物的电荷密度,减少了游离聚合物的数量,防止系统的电荷不稳定,从而获得稳定的纳米颗粒分散体,提高负载能力,延长鲑降钙素的释放。与接枝海藻酸进行复合后,形成改性鲑降钙素,该改性鲑降钙素具有良好的结合性能,由于普通鲑降钙素粘附于粘膜上皮需要较长时间才能被吸收。细胞的通透性是影响鲑降钙素吸收的一个重要因素,改性鲑降钙素可以明显增强表皮细胞的通透性,因为改性鲑降钙素可以保护药物免受酶解和酸性降解,以及改性鲑降钙素表面的活性基团可能大大增强渗透,主要原因可能是通过胞吞作用进入细胞,然后通过胞吞作用在基底外侧离开细胞。而且改性鲑降钙素具有细胞毒性低、生物相容性高、载药量高、生物降解性好、无毒、非免疫原性强的优点。
与现有技术相比,本发明的有益效果:
1)本发明将甲氧基聚乙二醇与甲苯混合,在与磺酰氯和三乙胺在二氯甲烷中反应得到功能剂,功能剂在与叠氮化钠复合得到改性产物,在Pd/C加氢催化剂的促进下得到白色固体,接枝海藻酸后与前处理鲑降钙素溶液复合得到改性鲑降钙素。具有细胞毒性低、生物相容性高、载药量高、生物降解性好、无毒、非免疫原性强的优点;
2)本发明采用科学的配比和制备方法将改性鲑降钙素与辅料混和加工制备成喷雾剂,可以治疗骨质疏松症患者,还能有效调节骨密度及骨转化标志物的表达水平,并促进骨密度升高,且不增加不良反应的发生。
具体实施方式
下面,通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明,但是应该明确提出这些实施例用于举例说明,但是不解释为限制本发明的范围。
本发明实施例中部分原料的参数如下:
甲氧基聚乙二醇,江苏省海安石油化工厂,货号:MPEG-1000,CAS:9004-74-4,产品等级:优级品;
磺酰氯,上海阿拉丁生化科技股份有限公司,分子量:134.97,CAS:7791-25-5;
三乙胺,上海网化化工科技有限公司,CAS号:121-44-8,分子量:101.19;
叠氮化钠,山东艺鸿化工有限公司,CAS:26628-22-8;
二乙二醇丁醚,广州嘉晟化工有限公司,货号:DGBE,CAS:112-34-5;
Pd/C加氢催化剂,陕西开达化工有限责任公司,货号:102A,CAS:7440-05-3;
1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐,武汉拉那白医药化工有限公司,含量:99%,CAS:25952-53-8;
鲑降钙素,西安顺亿生化科技有限公司,货号:6759810,含量:98%,CAS:47931-85-1;
依地酸二钠,前衍化学科技(武汉)有限公司,CAS:139-33-3;
聚维酮K30,河南益多元生物科技有限公司,货号:AL623362660525,有效物质含量:99%,级别:食品级;
苯扎氯铵,河北亮能生物科技有限公司,型号:LN-BKC,CAS:8001-54-5;
枸橼酸,苏州奥荣化工科技有限公司,货号:AR-004,含量≥99%,CAS:77-92-9;
枸橼酸钠,天津市鼎盛鑫化工有限公司,货号:123,含量≥99.5%,CAS:6132-04-33。
实施例1
一种鲑降钙素组合物喷雾剂,制备方法如下:
按配方称取各物质,将1.25g改性鲑降钙素、30g氯化钠、8.5kg依地酸二钠、100g聚维酮K30和0.8g苯扎氯铵加入1kg去离子水中,室温搅拌溶解完全,加入95g枸橼酸和110g枸橼酸钠,去离子水定容至10kg,得混合溶液;将混合溶液采用0.22μm滤膜过滤,即得鲑降钙素组合物喷雾剂。
所述改性鲑降钙素,制备方法如下:
S1、将16g甲氧基聚乙二醇溶解在100g甲苯中,并在200rpm搅拌下在油浴中回流1h,回流温度为140℃,然后减压去除溶剂,得到反应物,然后将反应物、0.7g磺酰氯和1.2g三乙胺加到80g二氯甲烷中,然后保存在冰水浴中,搅拌24h,搅拌速度为300rpm,得到反应混合物;随后将反应混合物倒入80g去离子水中,收集有机相,减压去除溶剂,得到功能剂;
S2、将步骤S1制备的功能剂和0.4g叠氮化钠加入60g二甲基甲酰胺中,在65℃的油浴中搅拌24h,400目筛网过滤去除溶剂,残渣加入到80g二氯甲烷中,收集有机相,然后加入100g二乙二醇丁醚中,400目筛网过滤,收集沉淀,得到改性产物;
S3、将步骤S2制备的改性产物在24g甲醇和4g二氯甲烷组成的混合物中溶解,加入0.2g Pd/C加氢催化剂反应24h,加入100g二乙二醇丁醚中,400目筛网过滤,收集沉淀,真空干燥2h,真空度为0.05MPa,干燥温度为60℃,得到白色固体;
S4、在11g去离子水中溶解0.22g海藻酸,然后加入0.08g 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐,在室温下搅拌反应,搅拌速度为200rpm,反应2h后,得到改性海藻酸溶液,将步骤S3制备的白色固体以1:5的质量比加入改性海藻酸溶液中,常温反应24h,然后用透析膜透析7天,透析膜截留分子量为9000,然后将透析液冻干,得到接枝化合物;
S5、将3.3g乙酸和2g乙酸钠加入20g去离子水中混合均匀,制备成流动相A;将2g氯化钠和0.1g磷酸二氢钠加入20g去离子水中混合均匀,采用1wt%NaOH水溶液调节pH为7.4,得到流动相B;将1.5g鲑降钙素和流动相A加入流动相B中,在室温下搅拌30min,搅拌速度为300rpm,得到前处理鲑降钙素溶液;
S6、将步骤S4制备的接枝化合物溶解在去离子水中配置成30g浓度为0.25mg/mL接枝化合物水溶液,室温下滴加等体积的步骤S5制备的前处理鲑降钙素溶液,然后在室温下持续搅拌30min,搅拌速度为200rpm,得到改性鲑降钙素。
实施例2
一种鲑降钙素组合物喷雾剂的制备方法与实施例1基本相同,唯一区别仅仅在于:所述改性鲑降钙素的制备方法不同。
所述改性鲑降钙素,制备方法如下:
S1、将16g甲氧基聚乙二醇溶解在100g甲苯中,并在200rpm搅拌下在油浴中回流1h,回流温度为140℃,然后减压去除溶剂,得到反应物,然后将反应物、0.7g磺酰氯和1.2g三乙胺加到80g二氯甲烷中,然后保存在冰水浴中,搅拌24h,搅拌速度为300rpm,得到反应混合物;随后将反应混合物倒入80g去离子水中,收集有机相,减压去除溶剂,得到功能剂;
S2、在11g去离子水中溶解0.22g海藻酸,然后加入0.08g 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐,在室温下搅拌反应,搅拌速度为200rpm,反应2h后,得到改性海藻酸溶液,将步骤S1制备的功能剂以1:5的质量比加入改性海藻酸溶液中,常温反应24h,然后用透析膜透析7天,透析膜截留分子量为9000,然后将透析液冻干,得到化合物;
S3、将3.3g乙酸和2g乙酸钠加入20g去离子水中混合均匀,制备成流动相A;将2g氯化钠和0.1g磷酸二氢钠加入20g去离子水中混合均匀,采用1wt%NaOH水溶液调节pH为7.4,得到流动相B;将1.5g鲑降钙素和流动相A加入流动相B中,在室温下搅拌30min,搅拌速度为300rpm,得到前处理鲑降钙素溶液;
S4、将步骤S2制备的化合物溶解在去离子水中配置成30g浓度为0.25mg/mL化合物水溶液,室温下滴加等体积的步骤S3制备的前处理鲑降钙素溶液,然后在室温下持续搅拌30min,搅拌速度为200rpm,得到改性鲑降钙素。
实施例3
一种鲑降钙素组合物喷雾剂的制备方法与实施例1基本相同,唯一区别仅仅在于:所述改性鲑降钙素的制备方法不同。
所述改性鲑降钙素,制备方法如下:
S1、将16g甲氧基聚乙二醇溶解在100g甲苯中,并在200rpm搅拌下在油浴中回流1h,回流温度为140℃,然后减压去除溶剂,得到反应物,然后将反应物、0.7g磺酰氯和1.2g三乙胺加到80g二氯甲烷中,然后保存在冰水浴中,搅拌24h,搅拌速度为300rpm,得到反应混合物;随后将反应混合物倒入80g去离子水中,收集有机相,减压去除溶剂,得到功能剂;
S2、将步骤S1制备的功能剂和0.4g叠氮化钠加入60g二甲基甲酰胺中,在65℃的油浴中搅拌24h,400目筛网过滤去除溶剂,残渣加入到80g二氯甲烷中,收集有机相,然后加入100g二乙二醇丁醚中,400目筛网过滤,收集沉淀,得到改性产物;
S3、将步骤S2制备的改性产物在24g甲醇和4g二氯甲烷组成的混合物中溶解,加入0.2g Pd/C加氢催化剂反应24h,加入100g二乙二醇丁醚中,400目筛网过滤,收集沉淀,真空干燥2h,真空度为0.05MPa,干燥温度为60℃,得到白色固体;
S4、在11g去离子水中加入0.08g 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐,得到盐溶液,将步骤S3制备的白色固体以1:5的质量比加入盐溶液中,常温反应24h,然后用透析膜透析7天,透析膜截留分子量为9000,然后将透析液冻干,得到复合物;
S5、将3.3g乙酸和2g乙酸钠加入20g去离子水中混合均匀,制备成流动相A;将2g氯化钠和0.1g磷酸二氢钠加入20g去离子水中混合均匀,采用1wt%NaOH水溶液调节pH为7.4,得到流动相B;将1.5g鲑降钙素和流动相A加入流动相B中,在室温下搅拌30min,搅拌速度为300rpm,得到前处理鲑降钙素溶液;
S6、将步骤S4制备的复合物溶解在去离子水中配置成30g浓度为0.25mg/mL复合物水溶液,室温下滴加等体积的步骤S5制备的前处理鲑降钙素溶液,然后在室温下持续搅拌30min,搅拌速度为200rpm,得到改性鲑降钙素。
实施例4
一种鲑降钙素组合物喷雾剂的制备方法与实施例1基本相同,唯一区别仅仅在于:所述改性鲑降钙素的制备方法不同。
所述改性鲑降钙素,制备方法如下:
S1、将16g甲氧基聚乙二醇溶解在100g甲苯中,并在200rpm搅拌下在油浴中回流1h,回流温度为140℃,然后减压去除溶剂,得到反应物,然后将反应物、0.7g磺酰氯和1.2g三乙胺加到80g二氯甲烷中,然后保存在冰水浴中,搅拌24h,搅拌速度为300rpm,得到反应混合物;随后将反应混合物倒入80g去离子水中,收集有机相,减压去除溶剂,得到功能剂;
S2、将步骤S1制备的功能剂和0.4g叠氮化钠加入60g二甲基甲酰胺中,在65℃的油浴中搅拌24h,400目筛网过滤去除溶剂,残渣加入到80g二氯甲烷中,收集有机相,然后加入100g二乙二醇丁醚中,400目筛网过滤,收集沉淀,得到改性产物;
S3、将步骤S2制备的改性产物在24g甲醇和4g二氯甲烷组成的混合物中溶解,加入0.2gPd/C加氢催化剂反应24h,加入100g二乙二醇丁醚中,400目筛网过滤,收集沉淀,真空干燥2h,真空度为0.05MPa,干燥温度为60℃,得到白色固体;
S4、在11g水中溶解0.22g海藻酸,然后加入0.08g 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐,在室温下搅拌反应,搅拌速度为200rpm,反应2h后,得到改性海藻酸溶液,将步骤S3制备的白色固体以1:5的质量比加入改性海藻酸溶液中,常温反应24h,然后用透析膜透析7天,透析膜截留分子量为9000,然后将透析液冻干,得到接枝化合物;
S5、将步骤S4制备的接枝化合物溶解在去离子水中配置成30g浓度为0.25mg/mL接枝化合物水溶液,室温下滴加等体积的0.03mg/mL鲑降钙素水溶液,然后在室温下持续搅拌30min,搅拌速度为200rpm,得到改性鲑降钙素。
对比例1
一种鲑降钙素组合物喷雾剂的制备方法与实施例1基本相同,唯一区别仅仅在于:所述改性鲑降钙素的制备方法不同。
所述改性鲑降钙素,制备方法如下:
S1、将16g甲氧基聚乙二醇溶解在100g甲苯中,并在200rpm搅拌下在油浴中回流1h,回流温度为140℃,然后减压去除溶剂,得到反应物,然后将反应物、0.7g磺酰氯和1.2g三乙胺加到80g二氯甲烷中,然后保存在冰水浴中,搅拌24h,搅拌速度为300rpm,得到反应混合物;随后将反应混合物倒入80g去离子水中,收集有机相,减压去除溶剂,得到功能剂;
S2、在11g水中加入0.08g 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐,得到盐溶液,将步骤S1制备的功能剂以1:5的质量比加入盐溶液中,常温反应24h,然后用透析膜透析7天,透析膜截留分子量为9000,然后将透析液冻干,得到化合物;
S3、将步骤S2制备的化合物溶解在去离子水中配置成30g浓度为0.25mg/mL化合物水溶液,室温下滴加等体积的0.03mg/mL鲑降钙素水溶液,然后在室温下持续搅拌30min,搅拌速度为200rpm,得到改性鲑降钙素。
对比例2
一种鲑降钙素组合物喷雾剂的制备方法与实施例1基本相同,唯一区别仅仅在于:所述鲑降钙素组合物喷雾剂的制备方法中将改性鲑降钙素替换为等量的鲑降钙素。
测试例1
治疗效果测试
测试对象选取2019年6月至2021年6月骨科医院收治的骨质疏松症患者120例。纳入标准:①符合《中国老年骨质疏松症诊疗指南(2018)》中相关诊断标准,骨密度低于2.5个正常标准差,伴明显骨骼疼痛;②年龄60~80岁患者;③无药物应用禁忌证。排除标准:合并感染性疾病;患有精神疾病;患有心肝肾等器官疾病;合并恶性肿瘤;有药物禁忌证;不稳定性骨折。患者入组前均签署了知情同意书。
研究方法,将测试对象平均分为6组,每组20人,将本发明实施例和对比例制备的鲑降钙素组合物喷雾剂早晚各1次鼻腔喷入治疗,每次喷入量为100IU。严格连续用药6个月,期间不额外使用其他治疗本病的药物。
评价指标:(1)治疗4个月后参考《骨科临床疗效评价标准》评价疗效,显效:椎体基本恢复,骨折愈合,疼痛消失;有效:骨折愈合,胸腰段外形与疼痛症状改善;无效:未达上述标准。总有效率(%)=(显效例数+有效例数)/总例数×100%。测试结果见表1。
(2)分别于治疗前1d与治疗4个月后,采用UBD2002A型超声骨密度仪(北京泽澳医疗科技)测定L1~4和股骨颈的骨密度(BMD)。测试结果见表2。
(3)治疗前后采集患者静脉血5mL,分离出血清,通过酶联免疫吸附法测定骨钙素(BGP)。测试结果见表3。
表1:疗效测试结果
表2:骨密度测试结果
表3:骨钙素测试结果
从表1、表2和表3的测试结果可以看出,实施例1的疗效最好,能增加骨密度,降低骨钙素。可能原因在于本发明将甲氧基聚乙二醇与甲苯混合,在与磺酰氯和三乙胺在二氯甲烷中反应得到功能剂,功能剂在与叠氮化钠复合得到改性产物,在Pd/C加氢催化剂的促进下得到白色固体,接枝海藻酸后与前处理鲑降钙素溶液复合得到改性鲑降钙素。改性鲑降钙素与辅料混和加工制备成喷雾剂。其中三乙胺和磺酰氯可以将甲氧基聚乙二醇的末端羟基活化,叠氮化钠在加氢催化剂作用下处理后生成氨基,海藻酸的共价连接是通过白色固体上的氨基与海藻酸的羧基形成酰胺键实现的。由于鲑降钙素带净正电荷,流动相A和流动相B分子与鲑降钙素结合,两流动相具有更高的电荷密度和更高的强度,可以形成更致密的结构,生成稳定的复合纳米粒子。复合纳米粒子中存在的盐可以降低离子化,从而降低聚合物的电荷密度,减少了游离聚合物的数量,防止系统的电荷不稳定,获得稳定的纳米颗粒分散体,提高负载能力,延长鲑降钙素的释放。与接枝海藻酸进行复合后,形成改性鲑降钙素,该改性鲑降钙素具有良好的结合性能,由于鲑降钙素粘附于粘膜上皮需要较长时间才能被吸收。细胞的通透性是影响鲑降钙素吸收的一个重要因素,改性鲑降钙素可以明显增强表皮细胞的通透性,因为改性鲑降钙素可以保护药物免受酶解和酸性降解,以及改性鲑降钙素表面的活性基团可能大大增强渗透,主要原因可能是通过胞吞作用进入细胞,然后通过胞吞作用在基底外侧离开细胞。而且改性鲑降钙素具有细胞毒性低、生物相容性高、载药量高、生物降解性好、无毒、非免疫原性强的优点。因此,实施例1的以上测试指标显著优于其他实施例和对比例。
Claims (9)
1.一种鲑降钙素组合物喷雾剂,其特征在于,包括如下组分:改性鲑降钙素、氯化钠、枸橼酸、枸橼酸钠、聚维酮K30、依地酸二钠、苯扎氯铵、纯化水。
2.如权利要求1所述的一种鲑降钙素组合物喷雾剂,其特征在于,包括如下重量份组分:1.25份改性鲑降钙素、20~40份氯化钠、90~100份枸橼酸、100~120份枸橼酸钠、90~110份聚维酮K30、8~9份依地酸二钠、0.5~1.0份苯扎氯铵、纯化水补至10000份。
3.一种制备如权利要求1或2所述的鲑降钙素组合物喷雾剂的方法,其特征在于,包括如下步骤:按配方称取各物质,将改性鲑降钙素、氯化钠、依地酸二钠、聚维酮K30和苯扎氯铵加入800~1200重量份纯化水中,室温溶解完全,加入枸橼酸和枸橼酸钠,纯化水定容至10000重量份,得混合溶液;将混合溶液过0.2~0.3μm滤膜,即得鲑降钙素组合物喷雾剂。
4.如权利要求3所述的方法,其特征在于:所述纯化水为去离子水或蒸馏水中的一种。
5.如权利要求3所述的方法,其特征在于,所述改性鲑降钙素,制备方法如下:
S1、将甲氧基聚乙二醇溶解在甲苯中,并在100~300rpm搅拌下在油浴中回流0.5~2h,回流温度为120~150℃,然后减压去除溶剂,得到反应物,然后将反应物、磺酰氯和三乙胺加到二氯甲烷中,然后保存在冰水浴中,搅拌20~30h,搅拌速度为100~500rpm,得到反应混合物;随后将反应混合物倒入水中,收集有机相,减压去除溶剂,得到功能剂;
S2、将步骤S1制备的功能剂和叠氮化钠加入二甲基甲酰胺中,在50~80℃的油浴中搅拌20~30h,200~500目筛网过滤去除溶剂,残渣加入到二氯甲烷中,收集有机相,然后加入二乙二醇丁醚中,200~500目筛网过滤,收集沉淀,得到改性产物;
S3、将步骤S2制备的改性产物在混合溶剂中溶解,加入Pd/C加氢催化剂反应20~30h,加入二乙二醇丁醚中,200~500目筛网过滤,收集沉淀,真空干燥1~3h,真空度为0.01~0.08MPa,干燥温度为40~80℃,得到白色固体;
S4、在水中溶解海藻酸,然后加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐,在室温下搅拌反应,搅拌速度为100~300rpm,反应1~3h后,得到改性海藻酸溶液,将步骤S3制备的白色固体加入改性海藻酸溶液中,常温反应20~30h,然后采用透析膜透析,将透析液冻干,得到接枝化合物;
S5、将乙酸和乙酸钠加入水中混合均匀,制备成流动相A;将氯化钠和磷酸二氢钠加入水中混合均匀,采用0.5~2wt%NaOH水溶液调节pH为7~8,得到流动相B;将鲑降钙素和流动相A加入流动相B中,在室温下搅拌20~50min,搅拌速度为100~500rpm,得到前处理鲑鱼降钙素溶液;
S6、将步骤S4制备的接枝化合物溶解在水中配置成0.2~0.3mg/mL接枝化合物水溶液,室温下滴加等体积的步骤S5制备的前处理鲑鱼降钙素溶液,然后在室温下持续搅拌30min,搅拌速度为100~300rpm,得到改性鲑降钙素。
6.如权利要求5所述的方法,其特征在于,所述改性鲑降钙素,以重量份计,制备方法如下:
S1、将10~20份甲氧基聚乙二醇溶解在80~150份甲苯中,并在100~300rpm搅拌下在油浴中回流0.5~2h,回流温度为120~150℃,然后减压去除溶剂,得到反应物,然后将反应物、0.5~1份磺酰氯和1~1.5份三乙胺加到50~100份二氯甲烷中,然后保存在冰水浴中,搅拌20~30h,搅拌速度为100~500rpm,得到反应混合物;随后将反应混合物倒入50~100份水中,收集有机相,减压去除溶剂,得到功能剂;
S2、将步骤S1制备的功能剂和0.1~0.8份叠氮化钠加入40~80份二甲基甲酰胺中,在50~80℃的油浴中搅拌20~30h,200~500目筛网过滤去除溶剂,残渣加入到50~100份二氯甲烷中,收集有机相,然后加入80~150份二乙二醇丁醚中,200~500目筛网过滤,收集沉淀,得到改性产物;
S3、将步骤S2制备的改性产物在混合溶剂中溶解,加入0.1~0.3份Pd/C加氢催化剂反应20~30h,加入80~150份二乙二醇丁醚中,200~500目筛网过滤,收集沉淀,真空干燥1~3h,真空度为0.01~0.08MPa,干燥温度为40~80℃,得到白色固体;
S4、在8~15份水中溶解0.1~0.5份海藻酸,然后加入0.05~0.2份1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐,在室温下搅拌反应,搅拌速度为100~300rpm,反应1~3h后,得到改性海藻酸溶液,将步骤S3制备的白色固体加入改性海藻酸溶液中,常温反应20~30h,然后采用透析膜透析,将透析液冻干,得到接枝化合物;
S5、将3~4份乙酸和1~3份乙酸钠加入10~30份水中混合均匀,制备成流动相A;将1~3份氯化钠和0.05~0.2份磷酸二氢钠加入10~30份水中混合均匀,采用0.5~2wt%NaOH水溶液调节pH为7~8,得到流动相B;将1~2份鲑降钙素和流动相A加入流动相B中,在室温下搅拌20~50min,搅拌速度为100~500rpm,得到前处理鲑鱼降钙素溶液;
S6、将步骤S4制备的接枝化合物溶解在水中配置成20~40份0.2~0.3mg/mL接枝化合物水溶液,室温下滴加等体积的步骤S5制备的前处理鲑鱼降钙素溶液,然后在室温下持续搅拌30min,搅拌速度为100~300rpm,得到改性鲑降钙素。
7.如权利要求5或6所述的方法,其特征在于:所述混合溶剂为甲醇和二氯甲烷按质量比20~30:2~6组成的混合物。
8.如权利要求5或6所述的方法,其特征在于:所述透析时间为5~10天,透析膜截留分子量为8000~12000。
9.如权利要求5或6所述的方法,其特征在于:所述步骤S4中白色固体与改性海藻酸溶液以质量比1:4~6进行混合。
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