CN115746154A - 一种具有替抗作用的麦冬须根多糖的提取方法及应用 - Google Patents
一种具有替抗作用的麦冬须根多糖的提取方法及应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115746154A CN115746154A CN202211470137.4A CN202211470137A CN115746154A CN 115746154 A CN115746154 A CN 115746154A CN 202211470137 A CN202211470137 A CN 202211470137A CN 115746154 A CN115746154 A CN 115746154A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- polysaccharide
- fibril
- ophiopogon japonicus
- distilled water
- enzyme
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 title claims abstract description 198
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims abstract description 180
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 title claims abstract description 180
- 244000248557 Ophiopogon japonicus Species 0.000 title claims abstract description 172
- 238000000605 extraction Methods 0.000 title abstract description 102
- 230000000694 effects Effects 0.000 title abstract description 20
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 title description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims abstract description 96
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 95
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 95
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims abstract description 70
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims abstract description 47
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 45
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 40
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 33
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 27
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 claims abstract description 24
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 claims abstract description 24
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 claims abstract description 23
- 108010059820 Polygalacturonase Proteins 0.000 claims abstract description 23
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims abstract description 23
- 108010093305 exopolygalacturonase Proteins 0.000 claims abstract description 23
- 229940055729 papain Drugs 0.000 claims abstract description 23
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 claims abstract description 23
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 claims abstract description 22
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims abstract description 13
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims abstract description 8
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims abstract description 7
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000002386 leaching Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 36
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 11
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 10
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 6
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 claims description 6
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 6
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 4
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 abstract description 19
- 230000034994 death Effects 0.000 abstract description 9
- 231100000517 death Toxicity 0.000 abstract description 9
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 abstract description 9
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 abstract description 8
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 abstract description 8
- 230000036039 immunity Effects 0.000 abstract description 6
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 abstract description 5
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 abstract description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 abstract description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 24
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 22
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 22
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 22
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 22
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 19
- 229940051921 muramidase Drugs 0.000 description 18
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 18
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 17
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 16
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 14
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 14
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 13
- 230000004044 response Effects 0.000 description 13
- 239000000463 material Substances 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 11
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 description 10
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 9
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 9
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 8
- 238000011160 research Methods 0.000 description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 8
- 238000011161 development Methods 0.000 description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 7
- 210000003405 ileum Anatomy 0.000 description 7
- 210000001630 jejunum Anatomy 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- 229930195210 Ophiopogon Natural products 0.000 description 6
- 241001591005 Siga Species 0.000 description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 6
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 6
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 6
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 6
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 6
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 6
- 238000013461 design Methods 0.000 description 5
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 5
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 5
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 5
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 5
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 108010082495 Dietary Plant Proteins Proteins 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 4
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 4
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 235000021050 feed intake Nutrition 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 4
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 4
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid Substances OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- SPFYMRJSYKOXGV-UHFFFAOYSA-N Baytril Chemical compound C1CN(CC)CCN1C(C(=C1)F)=CC2=C1C(=O)C(C(O)=O)=CN2C1CC1 SPFYMRJSYKOXGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 3
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 3
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 3
- 229960000740 enrofloxacin Drugs 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 3
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 3
- 230000003870 intestinal permeability Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 3
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 3
- 230000036632 reaction speed Effects 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002488 Hemicellulose Polymers 0.000 description 2
- 241001521474 Liriope <hydrozoan> Species 0.000 description 2
- 240000004658 Medicago sativa Species 0.000 description 2
- 235000017587 Medicago sativa ssp. sativa Nutrition 0.000 description 2
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 2
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 2
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010064851 Plant Proteins Proteins 0.000 description 2
- GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N Thermopsosid Natural products O(C)c1c(O)ccc(C=2Oc3c(c(O)cc(O[C@H]4[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O4)c3)C(=O)C=2)c1 GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 2
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 2
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 2
- 229930003944 flavone Natural products 0.000 description 2
- 150000002212 flavone derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 235000011949 flavones Nutrition 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 229920005610 lignin Polymers 0.000 description 2
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 2
- 235000021118 plant-derived protein Nutrition 0.000 description 2
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 2
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 2
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 2
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 2
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 2
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 2
- VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N vitamin p Natural products O1C2=CC=CC=C2C(=O)C=C1C1=CC=CC=C1 VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 2
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 description 2
- 208000031295 Animal disease Diseases 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 208000001431 Psychomotor Agitation Diseases 0.000 description 1
- 206010038743 Restlessness Diseases 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- 108010002321 Tight Junction Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000003975 animal breeding Methods 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 1
- 238000009412 basement excavation Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 210000004534 cecum Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 235000021316 daily nutritional intake Nutrition 0.000 description 1
- 230000013872 defecation Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 235000008216 herbs Nutrition 0.000 description 1
- 244000144980 herd Species 0.000 description 1
- 230000007365 immunoregulation Effects 0.000 description 1
- 230000008946 inflammatory intestinal reaction Effects 0.000 description 1
- 238000013383 initial experiment Methods 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008944 intestinal immunity Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000003020 moisturizing effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 238000007781 pre-processing Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000000611 regression analysis Methods 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000005211 surface analysis Methods 0.000 description 1
- 229940126680 traditional chinese medicines Drugs 0.000 description 1
- 239000000341 volatile oil Substances 0.000 description 1
- 238000003809 water extraction Methods 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P60/00—Technologies relating to agriculture, livestock or agroalimentary industries
- Y02P60/80—Food processing, e.g. use of renewable energies or variable speed drives in handling, conveying or stacking
- Y02P60/87—Re-use of by-products of food processing for fodder production
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明涉及一种具有替抗作用的麦冬须根多糖的提取方法及应用，包括（1）在麦冬须根中加入复合酶、蒸馏水，水浴锅中酶解，过滤，滤液煮沸灭活后备用，复合酶由中性纤维素酶、中性果胶酶、木瓜蛋白酶组成；（2）将滤渣回收并加入蒸馏水，冷凝回流浸提，合并提取液和酶解滤液，浓缩、离心，取上清液，得麦冬须根粗提液；（3）将麦冬须根粗提液中加入无水乙醇，静置，离心，除去上清液，取沉淀加蒸馏水溶解，得麦冬须根多糖粗提液。本发明提高了麦冬须根多糖的提取率。在仔兔日粮中添加麦冬须根多糖干粉，可以提高断奶仔兔的生长性能，降低断奶仔兔的腹泻率和死亡率、增加断奶仔兔的免疫能力、提高肠道抗氧化能力、降低肠道炎症反应。
Description
技术领域
本发明涉及一种多糖的提取及应用，具体涉及一种具有替抗作用的麦冬须根多糖的提取方法及应用。
背景技术
麦冬为百合科沿阶草属植物麦冬Ophiopogon japonicus（L.f）Ker-Gawl.的干燥的块根，主要分布于四川、浙江、湖北等地，其中四川的产量最大。川产麦冬主要集中在绵阳市三台县，产量占全国70%以上、出口量占全国80%以上。麦冬味甘，微苦，微寒，归心、肺、胃经，具有滋阴润肺，益胃生津，清心除烦之功效。麦冬多糖作为麦冬主要活性成分之一，具有保护消化系统、抗炎、抗氧化、免疫调节、降血糖、调节肠道菌群等药理作用。
麦冬须根作为麦冬的非药用部位，2019年由四川省卫生健康委员会、四川省市场监督管理局联合发布将其载入四川省地方食品标准。课题组前期研究结果表明，麦冬须根与块根干重比为1.16:1，须根的产量大于块根。但麦冬须根仅用于食品开发，受到受众范围和产品品种的限制，造成了资源的浪费和环境的污染。麦冬须根市场需求量远远不及其产量，致使大量麦冬须根因得不到有效利用而废弃。四川省启动了“麦冬大品种培育工作”，要求按照“大中药、全产业链”模式，加快川麦冬集成种植、二次开发和新产品研究。麦冬须根的综合利用开发将为麦冬资源的二次开发和新产品研究提供支持。研究表明，麦冬须根主要含有多糖、皂苷、黄酮等活性成分，与块根比，麦冬须根黄酮及挥发油成分和含量均和块根较为相似，须根总皂苷成分含量高于块根，多糖成分含量略低于块根。现代药理学实验表明麦冬多糖具有保护消化系统、抗炎、抗氧化、免疫调节等药理作用。根据课题组前期研究发现，麦冬须根多糖在动物疾病中同样具有较好的免疫调节、抗氧化应激、抗炎等药理活性。但目前对于麦冬须根的研究主要集中在主要成分及含量研究上，对于麦冬须根多糖的提取、分离、纯化，以及药理活性和综合利用开发研究较少。孙思秦等人采用传统水提法对麦冬须根多糖进行提取，其多糖提取率为14.3%；马守军等人采用水浴浸提法对麦冬须根多糖进行提取，其多糖提取率为20.12%。由于动物养殖中抗生素的滥用带来很多不良后果，根据国家农业农村部颁布的一系列管理规定，自2020年7月1日起，饲料生产企业停止生产含有促生长类药物饲料添加剂（中药类除外）的商品饲料。全国养殖业迎来了全面“禁抗”和“减抗”的时代，农户控制畜禽发病率、死亡率将大量依赖“替抗”产品。深入挖掘中医药资源，开发具有替抗作用的中兽药和饲料添加剂将成为这类产品的主流，也是畜牧养殖业发展的重要趋势。并能充分利用中医药资源，避免资源浪费，提高产品附加值，为全产业链的形成发挥积极作用。
发明内容
有鉴于此，有必要针对上述问题，提供一种具有替抗作用的麦冬须根多糖的提取方法及应用。
第一个方面，本发明提供一种具有替抗作用的麦冬须根多糖的提取方法，包括：
（1）在预处理后的麦冬须根中依次加入复合酶、蒸馏水，水浴锅中酶解，过滤，滤液煮沸灭活后备用，所述复合酶由中性纤维素酶、中性果胶酶、木瓜蛋白酶组成；
（2）将步骤（1）得到的滤渣回收并加入蒸馏水，冷凝回流浸提，合并提取液和酶解滤液，浓缩、离心，取上清液，得麦冬须根粗提液；
（3）将步骤（2）得到的麦冬须根粗提液中加入无水乙醇，静置，离心，除去上清液，取沉淀加蒸馏水溶解，得麦冬须根多糖粗提液。
进一步地，所述复合酶的质量是麦冬须根质量的1-2.6% 。
进一步地，所述中性纤维素酶、所述中性果胶酶、所述木瓜蛋白酶的重量份数比为4-6:4-6:5-7。
进一步地，酶解前所述蒸馏水的加入量是按照料液比为1:40-50（W/V）加入蒸馏水。
进一步地，所述酶解的时间是60-80min。
进一步地，所述预处理包括：将麦冬须根清洗处理，干燥后剪碎备用。
第二个方面，本发明提供一种具有替抗作用的麦冬须根多糖干粉的制备方法，将上述第一个方面所述的麦冬须根多糖粗提液，经透析膜透析后浓缩、冷冻干燥，即可。
第三个方面，本发发明提供一种由上述第二个方面所述的制备方法制备得到的麦冬须根多糖干粉。
第四个方面，本发明提供一种上述第三个方面所述的麦冬须根多糖干粉在制备仔兔饲料中的应用。
进一步地，所述麦冬须根多糖干粉在所述仔兔饲料中的添加量为0.5‰。
与现有方法相比，本发明的有益效果是：
采用本发明所述的复合酶并按照本发明所述的提取方法酶解辅助麦冬须根多糖，可以有效破坏麦冬须根的纤维素、半纤维素、木质素类细胞壁的致密结构，引起细胞壁及细胞间质结构产生局部疏松、膨胀、崩溃等变化，减小细胞壁及细胞间质等传质屏障对有效成分从胞内提取介质扩散的传质阻力。有效分解麦冬须根的果胶类细胞壁和果胶类胞间层和胞内的植物蛋白，减少植物蛋白对多糖提取的影响，有利于多糖的溶出，提高多糖提取率。
在仔兔日粮中添加采用本发明方法制备得到的麦冬须根多糖干粉后，可以提高断奶仔兔的生长性能、降低断奶仔兔的腹泻率和死亡率、增加断奶仔兔的免疫能力、提高肠道抗氧化能力、降低肠道炎症反应，可以起到替代抗生素的作用。
附图说明
图1为葡萄糖标准曲线；
图2 为单酶添加量单因素实验结果，其中：
A:中性纤维素酶添加量对麦冬须根多糖提取率的影响，B:中性果胶酶添加量对麦冬须根多糖提取率的影响，C:木瓜蛋白酶添加量对麦冬须根多糖提取率的影响；
图3 为单因素最佳参数实验结果，其中：
A:混合酶总量对麦冬须根多糖提取率的影响，B:不同胞壁酶与胞内酶比例对麦冬须根多糖提取率的影响，C:不同胞壁酶比例对麦冬须根多糖提取率的影响，D:不同酶解时间对麦冬须根多糖提取率的影响，E:不同料液比对麦冬须根多糖提取率的影响；
图4为各因素对麦冬须根多糖提取率影响，其中：
A:混合酶比例与料液比对麦冬须根多糖提取率影响 B:酶解时间与料液比对麦冬须根多糖提取率影响 C:混合酶比例与酶解时间对麦冬须根多糖提取率影响；
图5 为断奶仔兔生长性能测定结果，其中：
A:仔兔日均采食量 B:仔兔平均日增重 C:仔兔料重比，
*表示组间差异显著（P<0.05） **表示组间差异极显著（P<0.01）；
图6 为断奶仔兔免疫脏器指数统计结果，其中：
A:仔兔脾脏指数 B:仔兔胸腺指数 C:仔兔圆小囊指数，
*表示组间差异显著（P<0.05） **表示组间差异极显著（P<0.01）；
图7为血清中IgG、IgM含量检测结果，其中：
A:仔兔血清中IgG含量 B:仔兔血清中IgM含量，
*表示组间差异显著（P<0.05） **表示组间差异极显著（P<0.01）；
图8为肠道通透性指标结果，其中：
A:仔兔肠段中ZO-1基因表达量 B:仔兔血清中LPS含量，
*表示组间差异显著（P<0.05） **表示组间差极显著（P<0.01）***表示组间差异极显著（P<0.001）；
图9为小肠中T-AOC含量检测结果，
*表示组间差异显著（P<0.05） **表示组间差异极显著（P<0.01）；
图10为各小肠中GSH-PX含量检测结果，
*表示组间差异显著（P<0.05） **表示组间差异极显著（P<0.01）；
图11为肠道炎症指标测定结果，
*表示组间差异显著（P<0.05） **表示组间差异极显著（P<0.01）；
图12 为各小肠段中sIgA含量测定结果，
*表示组间差异显著（P<0.05） **表示组间差异极显著（P<0.01）。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
1 实验材料与实验动物
1.1实验场地
四川农业大学成都校区动物医学院天然药物研究中心；四川省成都市金堂县某兔场。
1.2实验材料
1.2.1药材
麦冬，采自四川省绵阳市三台县麦冬基地，经李丽霞老师鉴定为麦冬Ophiopogon japonicus (L. f.) Ker-Gawl.。采挖麦冬的须根部分清洗处理，经60℃干燥后剪碎过10目筛备用。
恩诺沙星可溶性粉，产自洛阳牧野药业有限公司，批准文号：兽药字162322526。
1.2.2主要试剂
实验主要试剂见表1。
表1 主要试剂
1.2.3主要仪器
实验主要仪器见表2。
表2 主要仪器
1.3实验动物
选取40日龄断奶新西兰肉兔120只，每个处理选取40只仔兔，平均体重为(0.750±0.050)kg。由四川省成都市金堂县某兔场提供。
2实验方法
2.1最佳复合酶酶解工艺的优化
2.1.1多糖提取率的测定方法
2.1.1.1多糖含量测定
（1）对照品溶液的制备
精密称量无水葡萄糖对照品25mg，置于25mL容量瓶中，加入蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀，得到1mg/mL的葡萄糖对照品溶液，备用。
（2）标准曲线的制备
精密移取对照品溶液0.00mL、0.10mL、0.20mL、0.30mL、0.40mL、0.50mL、0.60mL、0.70mL、0.80mL，分别置于1mL容量瓶中，加入蒸馏水并稀释至刻度，摇匀，即得不同浓度的标准溶液。然后从各容量瓶中分别移取0.2 mL标准溶液置于试管中，加入5%的苯酚溶液0.2mL，摇匀后快速加入浓硫酸1mL，静置30min，利用酶标仪，在490nm 处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标，绘制标准曲线，并计算回归方程。
2.1.1.2 供试品溶液的制备
取所得的麦冬须根多糖粗提液0.1mL于50ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度线，摇匀，即得供试品溶液。
2.1.1.3 硫酸•苯酚法测定多糖含量
精密移取供试品溶液0.2mL，置于试管中，加入5%的苯酚溶液0.2mL，摇匀后快速加入浓硫酸1mL，静置30min，测定其吸光度。平行测定三次，根据线性回归方程计算麦冬须根多糖粗品中多糖的浓度。
粗多糖溶液中多糖含量 (g) = 测定浓度(g/mL)×稀释倍数×溶液体积(mL)
2.1.1.4 多糖提取率的计算
多糖提取率(%) = 多糖含量(g)/麦冬须根质量(g)×100%
2.1.2 单因素实验
2.1.2.1单酶量的筛选
称取5±0.1g过10目筛的麦冬须根45份，胞壁酶选取中性纤维素酶与中性果胶酶，胞内酶选取木瓜蛋白酶，分为中性纤维素酶组、中性果胶酶组、木瓜蛋白酶组，每组15份。各组分别加入麦冬须根质量的0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%的中性纤维素酶或中性果胶酶或木瓜蛋白酶，每组平行3次。以料液比1:30（W/V），酶解温度55℃，酶解时间30min为条件分别进行酶解，酶解后加热至沸腾10min，使酶失活。取滤渣回收并以料液比1:30加入蒸馏水，在100℃下加热回流提取1h，提取2次，合并酶解液与提取液，浓缩定容至10mL。以3500 r/min离心10min，取上清液，得麦冬须根粗提液。麦冬须根粗提液中加入4倍体积的无水乙醇，静置24 h。以3500 r/min离心10 min，除去上清液，取沉淀加蒸馏水定容至10ml，得麦冬须根多糖粗提液。以多糖提取率为指标，选取最佳单酶量。
2.1.2.2混合酶总量的筛选
将中性果胶酶、中性纤维素酶、木瓜蛋白酶按2.1.2项下优选的各酶最佳单酶量比例进行混合，得混合酶。称取5±0.1g过10目筛的麦冬须根，分别加入设定的总酶量，即麦冬须根质量的1.0%、1.4%、1.8%、2.2%、2.6%的混合酶。每组条件分别进行3次平行实验。后续操作同2.1.2.1。以多糖提取率为指标，优选多糖提取率最高的总酶量。
2.1.2.3混合酶比例的筛选
（1）胞壁酶与胞内酶比例的筛选
称取5±0.1g过10目筛的麦冬须根，依据最佳单酶量比例保持两种胞壁酶比例为2:3，混合酶总量不变，设定胞壁酶与胞内酶的不同比例5:6、5:5、5:4、5:3、5:2，每组条件分别进行3次平行实验。后续操作同2.1.2.1。以多糖提取率为指标，选取最佳胞壁酶：胞内酶比例。
（2）胞壁酶比例的筛选
称取5±0.1g过10目筛的麦冬须根，保持混合酶总量不变，胞壁酶:胞内酶比例不变，分别加入不同比例胞壁酶，即中性纤维素酶：中性果胶酶=1:2、2:3、1:1、3:2、2:1。每组条件分别进行3次平行实验。后续操作同2.1.2.1。以多糖提取率为指标，选取最佳胞壁酶比例。
2.1.2.4酶解时间的筛选
称取5±0.1g过10目筛的麦冬须根，保持混合酶总量、两种胞壁酶比例不变，胞壁酶与胞内酶比例不变，设定酶解时间分别为20min、35min、50min、65min、80min。每组条件分别进行3次平行实验。后续操作同2.1.2.1。以多糖提取率为指标，选取最佳酶解时间。
2.1.2.5料液比的筛选
称取5±0.1g过10目筛的麦冬须根，保持酶总量、两种胞壁酶比例、胞壁酶与胞内酶比例、酶解时间不变，设定料液比分别为1:15、1:30、1:45、1:60、1:75。每组条件分别进行3次平行实验。后续操作同2.1.2.1。以多糖提取率为指标，选取最佳料液比。
2.1.3 响应面实验设计
根据单因素实验的结果，选取料液比、酶解时间、混合酶比例3个因素为A、B、C，依照Box-Behnken的中心组合实验设计原理，进行3因素3水平实验优化酶解工艺。
2.1.4 最优工艺的修正与验证
根据响应面法得到的最佳工艺，结合实际生产情况进行修正，并按照修订后的工艺重复实验3次，计算RSD值，验证工艺是否稳定、可行。
2.1.5 复合酶辅助提取与无酶提取麦冬须根多糖提取率及得率比较
称取5±0.1g过10目筛的麦冬须根6份，分为2组，分别为无酶组、复合酶组。无酶组以料液比为1:45（W/V）加入蒸馏水，在55℃水浴锅中65min，过滤，收集滤液，滤渣回收并以料液比1:30加入蒸馏水，在100℃下冷凝回流浸提1h，提取2次，合并提取液。浓缩至10mL。以3500 r/min 离心10min，取上清液，得麦冬须根粗提液。麦冬须根粗提液中加入4倍体积的无水乙醇，静置24 h。以3500 r/min离心10 min，除去上清液，取沉淀加适量蒸馏水溶解，定容至10ml，得麦冬须根多糖粗提液。复合酶组在麦冬须根中加入1.8%复合酶，复合酶比例为中性纤维素酶：中性果胶酶：木瓜蛋白酶=5:5:6，在55℃条件下以料液比为1:45（W/V）加入蒸馏水，水浴锅中酶解65min，过滤，收集滤液，后续步骤同无酶组。分别计算无酶组与复合酶组多糖提取率和得率。
2.2麦冬须根多糖对断奶仔兔生长性能和腹泻的作用研究
2.2.1麦冬须根多糖的制备
按照2.1.5项下复合酶辅助提取方法进行麦冬须根多糖提取，得麦冬须根多糖粗提液。经透析膜（3500Da）透析48小时，浓缩至适量，-80℃条件下放置过夜，于冻干机中冷冻干燥，得麦冬须根多糖干粉。
2.2.2麦冬须根多糖干粉中多糖含量测定
称取麦冬须根多糖干粉，加蒸馏水制备1mg/mL多糖溶液，以无水葡萄糖为标准品，按2.1.1.3项下方法进行多糖含量测定。
2.2.3实验组饲料制备的制备
称取玉米14kg、豆粕9.8kg、苜蓿24.5kg、麦麸14kg、砻糠7kg、钙0.35kg、磷0.35kg，均匀吸入粉碎机中打碎并制备成颗粒状粉末，分散、干燥，即得仔兔基础日粮。空白组饲料即基础日粮。
麦冬须根多糖组混饲饲料制备：添加0.5‰麦冬须根多糖干粉与待粉碎的基础日粮原料中进行同步粉碎，制备成颗粒状粉末，分散、干燥，即得麦冬须根多糖混饲饲料。
阳性组混饲饲料制备：添加1‰恩诺沙星可溶性粉与待粉碎的基础日粮原料中进行同步粉碎，制备成颗粒状粉末，分散、干燥，即得恩诺沙星混饲饲料。
2.2.4实验动物分组及饲养管理
将120只40日龄断奶新西兰肉兔分为3组，空白组、阳性组、麦冬须根多糖组均40只。实验期间，仔兔采用自由采食、饮水的方式饲养、每天08:00及20:00投料，连续给药两周。每天记录仔兔的采食量、体重、腹泻数、死亡数。
2.2.5实验动物处理
实验结束当天，每组随机选取6只仔兔称重后，心脏采血5mL后立刻屠宰。血液室温下放置2小时后，3500r/min 离心10 min，收集、分装上清液，-80℃条件下保存，备用。记录胸腺、脾脏、圆小囊的重量，用于免疫器官脏器指数计算。取部分十二指肠、空肠、回肠、盲肠内容物立即放入液氮中冻存，后转入-80℃条件下保存，备用。
2.2.6指标测定
2.2.6.1生长性能及腹泻率、死亡率的测定
平均日增重：实验开始的第一天早晨对仔兔逐只进行空腹称重，实验结束后进行空腹称重。平均日增重=（实验末重-实验初重）/实验天数。
平均采食量：记录每天饲料的投放量和剩料量，采食量=投放量-剩料量。实验结束后计算平均日采食量。
料重比：料重比＝饲养期内所耗标准饲料量(kg)/同期增重(kg)
腹泻率：观察仔兔的排粪情况，记录每天腹泻仔兔只数，并记录其腹泻天数。腹泻率=腹泻仔兔只数×腹泻天数/（总只数×饲养天数）×100%。
死亡率：观察仔兔死亡情况，记录死亡只数。死亡率=死亡数/总数×100%。
2.2.6.2对断奶仔兔免疫的影响
（1）免疫脏器指数测定
胸腺指数=胸腺质量/体重×100%
脾脏指数=脾脏质量/体重×100%
圆小囊指数=圆小囊质量/体重×100%
（2）血清中IgG、IgM含量测定
采用酶联免疫吸附实验（Elisa）试剂盒测定血清中IgG、IgM含量，参照试剂盒说明书的步骤进行。
2.2.6.3对断奶仔兔肠道的影响
（1）肠道通透性指标测定
采用定量实时聚合酶链锁反应（q-PCR）测定小肠中ZO-1基因表达量；采用酶联免疫吸附实验（Elisa）试剂盒测定血清中LPS含量，参照试剂盒说明书的步骤进行。
（2）肠道氧化应激指标测定
采用ABTS法测定十二指肠、空肠、回肠中T-AOC含量，采用酶联免疫吸附实验（Elisa）试剂盒测定十二指肠、空肠、回肠中GSH-PX含量，参照试剂盒说明书的步骤进行。
（3）肠道炎症指标测定
采用定量实时聚合酶链锁反应（q-PCR）测定小肠中IL-6、IL-1β基因表达量。
（4）对肠道粘膜免疫指标测定
采用酶联免疫吸附实验（Elisa）试剂盒测定小肠中sIgA含量，参照试剂盒说明书的步骤进行。
3数据的统计分析
用Excel2013软件进行实验数据初步整理；使用SPSS22.0软件进行显著性分析分析；使用GraphPad Prism 8.3.0软件进行绘图。
4 结果与分析
4.1最佳复合酶酶解工艺的优化结果
4.1.1标准曲线制作结果
标准曲线标准方程为y = 3.688x + 0.1099，R2 = 0.9972。如图 1所示。
4.1.2 单因素实验结果
4.1.2.1单酶量的筛选结果
（1）中性纤维素酶用量结果
当中性纤维素酶用量在0.40%时，麦冬须根粗多糖提取率最高，为25.1%，当其用量在0.40%后，多糖提取率不再随着中性纤维素酶用量的增多而增高，而是缓慢下降并趋于平稳。如图2-A所示。
（2）中性果胶酶用量结果
当中性果胶酶用量在0.60%时，麦冬须根粗多糖提取率最高，为28.9%，当其用量在0.60%后，多糖提取率不再随着中性果胶酶用量的增多而增高，而是缓慢下降并趋于平稳。与无酶的对照组相比较，可见中性果胶可显著提高麦冬多糖提取率。如图2-B所示。
（3）木瓜蛋白酶用量结果
当木瓜蛋白酶用量在0.80%时，麦冬须根粗多糖提取率最高，为20.8%，当其用量在0.80%前，麦冬多糖提取率与木瓜蛋白酶添加量呈正相关，与无酶的对照组相比较，可见木瓜蛋白酶可提高麦冬多糖提取率。如图2-C所示。
4.1.2.2混合酶总量的筛选结果
当混合酶用量在1.80%时，麦冬须根粗多糖提取率最高，为25.89%，当其用量在1.80%后，多糖提取率不再随着混合酶用量的增多而增高，而是缓慢下降并趋于平稳。如图3-A所示。
4.1.2.3混合酶比例的筛选结果
（1）胞壁酶与胞内酶比例的筛选结果
当胞壁酶：胞内酶=5:3时，麦冬须根粗多糖提取率最高，为28.95%，当其比例在胞壁酶：胞内酶=5:3前，麦冬多糖提取率与胞壁酶：胞内酶呈正相关。如图3-B所示。
（2）胞壁酶比例的筛选结果
当胞壁酶比例为1:1时，麦冬须根粗多糖提取率最高，为25.95%，当其比例在1:1前，麦冬多糖提取率与胞壁酶比例呈正相关，当其比例在1:1后，麦冬多糖提取率与胞壁酶比例呈负相关。如图3-C所示。
4.1.2.4酶解时间的筛选结果
当酶解时间在65min时，麦冬须根粗多糖提取率最高，为29.04%，当酶解时间在65min前，多糖提取率随着酶解时间的增长而增高。如图3-D所示。
4.1.2.5料液比的筛选结果
当料液比在1:45时，麦冬须根粗多糖提取率最高，为22.37%，当料液比在1:45前，多糖提取率随着酶解时间的增长而增高，当料液比在1:45后，多糖提取率逐渐下降，并趋于平衡。如图3-E所示。
4.1.3 响应面实验设计结果
利用Design-Expert.V8.0.6.1软件进行响应面实验设计，根据 Box -Benhnken的中心组合实验设计原理，综合4.1.2中单因素实验结果，以料液比、酶解时间以及混合酶比例作为影响因素，采用 3 因素 3 水平的响应面分析方法进行实验设计，影响因素与水平设计见表3。
表3 BOX-Behnken 响应面实验因素水平
注：复合酶比例为中性果胶酶：中性纤维素酶：木瓜蛋白酶
按照表3中影响因素进行响应面实验设计，得到响应面实验中心组合设计如表4所示。其中每种实验组合重复提取三次，按照2.1.1中方法对多糖提取率进行测定，取三次提取的平均值作为该提取条件下的响应值 Y，响应面具体实验设计组合与多糖提取率，结果如表4所示。
表4 响应面实验中心组合设计及麦冬须根多糖提取率
利用Design-expert8.0.6软件对表4中数据进行回归分析，将响应值与各因素进行回归拟合，得到麦冬须根多糖提取率对应三个因素的预测回归方程为:
Y=31.75＋0.37X1－0.033X2＋0.20X3－0.080X1X2＋0.088X1X3－0.023X2X3－3.49X12－1.34X22－3.80X32
注:X1=料液比；X2=酶解时间；X3=混合酶比例。
对该模型进行方差分析，见表5。结果表明该模型 R2=0.9579，P<0.001，证明模型拟合度良好。如图4所示，因变量与全体自变量之间的多元回归关系显著；模型一次项X1（料液比）极显著（P<0.01），表明麦冬须根多糖提取率最大的影响因素为料液比；二次项差异显著（P<0.01），交互项差异不显著（P>0.05）表明三个因素交互项对多糖提取率影响不大。综上所述，可知影响麦冬须根多糖提取率的主次顺序为:料液比、酶解时间、混合酶比例。通过Design-expert8.0.6软件对得到的拟合方程进行分析，料液比为 1:45，混合酶比例为中性果胶酶:中性纤维素酶:木瓜蛋白酶=5:5:6，酶解时间为65min 时，麦冬须根多糖的提取率最高，为31.58%。
表5 麦冬须根多糖提取率模型回归与方差分析结果
4.1.4 最优工艺的修正与验证结果
结合生产实际，将响应面法计算所得最优工艺修订为：料液比为1:45、酶解时间为65min、混合酶添加量为麦冬须根质量的1.8%、混合酶比例为中性果胶酶:中性纤维素酶:木瓜蛋白酶= 5:5:6。重复实验3次，测得最终多糖提取率为 31.57±0.001%，与预测值（31.58%）接近，RSD值为 0.027%，表明工艺稳定可行，能满足实验以及实际生产要求。
4.1.5 复合酶辅助提取与无酶提取麦冬须根多糖提取率及得率比较结果
采用无酶热水提提取麦冬须根多糖，其提取率为18.89%，得率为22.46%；采用复合酶助提取麦冬须根多糖，其提取率为31.57%，得率为32.35%；两种方法相比较，采用复合酶助提取麦冬须根多糖，其提取率提高了12.68%，得率提高了9.89%。
4.2麦冬须根多糖对断奶仔兔生长性能和腹泻的作用研究
4.2.1麦冬须根多糖干粉中多糖含量测定结果
麦冬须根多糖经透析、冻干后所得干粉中多糖含量为86.14%。
4.2.2指标测定结果
4.2.3.1生长性能及腹泻率、死亡率的测定结果
在仔兔日粮中添加麦冬须根多糖后，麦冬须根多糖组的日均采食量与空白组与阳性组相比未见显著差异，但相较于空白组略见降低（p>0.05），见图5-A；麦冬须根多糖组的平均日增重与空白组相比呈极显著升高（p<0.01），麦冬须根多糖组与阳性组相比未见显著差异，见图5-B；麦冬须根多糖组的料重比与空白组相比呈显著降低（p<0.05），麦冬须根多糖组与阳性组相比未见显著差异，见图5-C。提示麦冬须根多糖可以提高断奶仔兔的生长性能，显著降低断奶仔兔料重比，增加生长性能。
在仔兔日粮中添加麦冬须根多糖后，与空白组相比，麦冬须根多糖组与阳性组腹泻率均有所降低、死亡率均有所降低。与阳性组相比，麦冬多糖组的腹泻率有明显降低。与空白组相比，给药后断奶仔兔的死亡率显著下降，各给药组均无死亡现象，见表6。提示麦冬须根多糖可以降低断奶仔兔的腹泻率和死亡率。
表6 断奶仔兔腹泻率、死亡率的统计结果
| 项目（%） | 空白组 | 阳性组 | 麦冬须根多糖组 |
| 腹泻率 | 10.71 | 6.39 | 1.59 |
| 死亡率 | 16.67 | 0 | 0 |
4.2.3.2对断奶仔兔免疫的影响测定结果
（1）免疫脏器指数测定结果
在仔兔日粮中添加麦冬须根多糖后，麦冬须根多糖组的脾脏指数与空白组与阳性组相比未见显著差异，但相较于空白组略见升高（p>0.05），见图6-A；麦冬须根多糖组的胸腺指数与空白组相比略见升高（p>0.05），麦冬须根多糖组与阳性组相比呈显著降低（p<0.05），见图6-B；麦冬须根多糖组的圆小囊指数与空白组相比未见显著变化（p>0.05），但有所降低，麦冬须根多糖组与阳性组相比未见显著差异，见图6-C。提示麦冬须根多糖可以提高断奶仔兔的脾脏和胸腺两种免疫器官指数，进而增加断奶仔兔的免疫能力。
（2）血清中IgG、IgM含量测定结果
在仔兔日粮中添加麦冬须根多糖后，麦冬须根多糖组的IgG含量与空白组相比显著升高（p<0.05），与阳性组相比未呈显著变化（p>0.05），但相较于阳性组略见升高，见图7-A；麦冬须根多糖组的IgM含量与空白组相比呈极显著升高（p<0.01），与阳性组相比未呈显著变化（p>0.05），但相较于阳性组略见升高，见图7-B。提示麦冬须根多糖可以通过提高断奶仔兔IgG含量、IgM含量，维持LPS含量，进而增加断奶仔兔的免疫能力。
2.2.3.3对断奶仔兔肠道的影响测定结果
（1）肠道通透性指标测定结果
在仔兔日粮中添加麦冬须根多糖后，麦冬须根多糖组与空白组相比，肠段ZO-1基因表达量呈极显著升高（p<0.001），阳性组与空白组相比，ZO-1基因表达量呈极显著升高（p<0.01），见图8-A；麦冬须根多糖组的LPS含量与空白组和阳性组相比虽未见显著变化，但其含量有所降低（p>0.05），见图8-B。提示麦冬须根多糖可以通过提高肠道黏膜紧密连接蛋白基因表达量进而提高肠道黏膜屏障。
（2）肠道氧化应激指标测定结果
在仔兔日粮中添加麦冬须根多糖后，麦冬须根多糖组与空白组及阳性组相比，各肠段中T-AOC含量均未呈显著性变化（p>0.05），但在十二指肠、空肠组织中T-AOC含量高于空白组与阳性组，见图9。提示，麦冬须根多糖可以通过提高断奶仔兔十二指肠、空肠组织中T-AOC含量，提高肠道抗氧化能力。
在仔兔日粮中添加麦冬须根多糖后，麦冬须根多糖组与空白组相比，回肠段GSH-PX含量呈显著性升高（p<0.05）；阳性组与空白组相比，十二指肠段GSH-PX含量呈极显著性升高（p<0.01），在空肠段各组GSH-PX含量未见显著性变化，见图10。提示麦冬须根多糖可以通过提高断奶仔兔十二指肠、回肠组织中GSH-PX含量，提高肠道抗氧化能力。
（3）肠道炎症指标测定结果
在仔兔日粮中添加麦冬须根多糖后，麦冬须根多糖组与空白组相比，小肠段IL-6基因表达量未见显著降低（p>0.05）；阳性组与空白组相比，IL-6基因表达量呈显著降低（p<0.05）；麦冬须根多糖组与空白组相比，小肠段IL-1β基因表达量未见显著降低（p>0.05）；阳性组与空白组相比，IL-1β基因表达量呈显著降低（p<0.01），见图11。提示麦冬须根多糖可以通过降低断奶仔兔空肠段中IL-6、IL-1β基因表达量，降低肠道炎症反应。
（4）小肠中sIgA含量测定结果
在仔兔日粮中添加麦冬须根多糖后，麦冬须根多糖组与空白组及阳性组相比，各肠段中sIgA含量均未呈显著性变化（p>0.05），但在回肠组织中sIgA含量高于空白组与阳性组，见图12。提示麦冬须根多糖可以通过提高断奶仔兔回肠sIgA含量，提高肠道黏膜免疫水平，进而增加断奶仔兔的肠道免疫能力。
实施例2
本实施例提供一种具有替抗作用的麦冬须根多糖的提取方法，包括以下步骤：
（1）麦冬须根预处理：将麦冬须根清洗处理，经60℃干燥后剪碎过10目筛备用。
（2）称取预处理后的麦冬须根5g，加入麦冬须根质量的1.8%的复合酶，复合酶是由以下组分按下述重量份数比组成：中性纤维素酶：中性果胶酶：木瓜蛋白酶=5:5:6。在55℃条件下以料液比为1:45（W/V）加入蒸馏水，水浴锅中酶解65min，过滤，滤液煮沸10min灭活后备用。滤渣回收并以料液比1:30加入蒸馏水，在100℃下冷凝回流浸提1h，提取2次，合并提取液和酶解滤液，浓缩至10mL。以3500 r/min 离心10min，取上清液。得麦冬须根粗提液。
（3）麦冬须根粗提液中加入4倍体积的无水乙醇，静置24 h，以3500 r/min离心10min，除去上清液，取沉淀加蒸馏水定容至10ml，得麦冬须根多糖粗提液。
实施例3
本实施例提供一种具有替抗作用的麦冬须根多糖的提取方法，包括以下步骤：
（1）麦冬须根预处理：将麦冬须根清洗处理，经60℃干燥后剪碎过10目筛备用。
（2）称取预处理后的麦冬须根5g，加入麦冬须根质量的1%的复合酶，复合酶是由以下组分按下述重量份数比组成：中性纤维素酶：中性果胶酶：木瓜蛋白酶=4:4:7。在55℃条件下以料液比为1:40（W/V）加入蒸馏水，水浴锅中酶解60min，过滤，收集滤液，滤液煮沸10min灭活后备用。
（3）滤渣回收并以料液比1:30加入蒸馏水，在100℃下冷凝回流浸提1h，提取2次，合并提取液和酶解滤液，浓缩至10mL。以3500 r/min 离心10min，取上清液，得麦冬须根粗提液；
（4）麦冬须根粗提液中加入4倍体积的无水乙醇，静置24 h，以3500 r/min离心10min，除去上清液，取沉淀加蒸馏水定容至10ml，得麦冬须根多糖粗提液。
实施例4
本实施例提供一种具有替抗作用的麦冬须根多糖的提取方法，包括以下步骤：
（1）麦冬须根预处理：将麦冬须根清洗处理，经60℃干燥后剪碎过10目筛备用。
（2）称取预处理后的麦冬须根5g，加入麦冬须根质量的2.6%的复合酶，复合酶是由以下组分按下述重量份数比组成：中性纤维素酶：中性果胶酶：木瓜蛋白酶=6:6:7。在55℃条件下以料液比为1:50（W/V）加入蒸馏水，水浴锅中酶解80min，过滤，收集滤液，滤液煮沸10min灭活后备用。
（3）滤渣回收并以料液比1:30加入蒸馏水，在100℃下冷凝回流浸提1h，提取2次，合并提取液和酶解滤液，浓缩至10mL。以3500 r/min 离心10min，取上清液，得麦冬须根粗提液。
（4）麦冬须根粗提液中加入4倍体积的无水乙醇，静置24 h，以3500 r/min离心10min，除去上清液，取沉淀加蒸馏水定容至10ml，得麦冬须根多糖粗提液。
对比例1
本对比例提供一种具有替抗作用的麦冬须根多糖的提取方法，本对比例与实施例2的区别仅仅在于本对比例分别采用单一的中性纤维素酶(A)、中性果胶酶（B）、木瓜蛋白酶（C）进行酶解，其余同实施例2。
对比例2
本对比例提供一种具有替抗作用的麦冬须根多糖的提取方法，本对比例与实施例2的区别仅仅在于酶解时间不同，本对比例在水浴锅中酶解30min，其余同实施例2。
对比例3
本对比例提供一种具有替抗作用的麦冬须根多糖的提取方法，本对比例与实施例2的区别仅仅在于料液比不同，本对比例在酶解前在55℃条件下以料液比为1:30（W/V）加入蒸馏水，其余同实施例2。
对比例4
本对比例提供一种具有替抗作用的麦冬须根多糖的提取方法，本对比例与实施例2的区别仅仅在于复合酶总量不同，本对比例在称取麦冬须根后加入麦冬须根质量的0.4%的复合酶，其余同实施例2。
对比例5
本对比例提供一种具有替抗作用的麦冬须根多糖的提取方法，本对比例与实施例2的区别仅仅在于复合酶是由以下组分按下述重量份数比组成：中性纤维素酶：中性果胶酶：木瓜蛋白酶=5:5:4，其余同实施例2。
将实施例2-4、对比例1-5获得的麦冬须根多糖粗提液按照2.1.1多糖提取率的测定方法进行测定，结果见表7。
表7提取麦冬须根多糖的提取率
由表7可知：
采用实施例2-4所述的复合酶可使麦冬须根多糖的提取率提高。采用实施例2-4所述的复合酶可破坏细胞壁的致密结构，引起细胞壁及细胞间质结构产生局部疏松、膨胀、崩溃等变化，减小细胞壁及细胞间质等传质屏障对有效成分从胞内提取介质扩散的传质阻力，同时降解麦冬须根中的植物蛋白，减少植物蛋白对多糖提取的影响，有利于多糖的溶出，提高多糖提取率。比采用单一的纤维素酶进行酶解提取的麦冬须根多糖的提取率提高了6.44%。
采用实施例2-4所述的酶解时间可使麦冬须根多糖的提取率提高。麦冬须根中加入复合酶后，在酶促反应的初始，反应随酶解时间的延长，多糖浓度增加明显，一定时间后，反应达到饱和，生成的多糖量增长缓慢。且随着时间不断增加，酶解液中非糖物质不断增加，液体浑浊，进而导致多糖提取率降低，因此酶解时间过长或过短都会导致多糖提取率降低。
采用实施例2-4所述的料液比可使麦冬须根多糖的提取率提高，随着料液比的改变，酶浓度、酶促反应介质体系、多糖浓度也随着改变。料液比过高时，酶浓度增加，可以加速酶解反应，但酶促反应介质体系小、多糖浓度高，会降低整个体系的酶解效率，并不利于多糖的溶出。料液比过低，酶浓度减少，酶解反应会受酶浓度的影响而降低，但酶促反应介质体系大，多糖浓度低，有利于整个体系的酶解效率提高和多糖的溶出。当料液比最佳的时候，能最大的提高麦冬多糖的提取效率。
采用实施例2-4所述的复合酶总量可使麦冬须根多糖的提取率提高，由于复合酶酶促反应的速度与酶浓度成正比。同时酶浓度对反应速度的影响具有饱和现象，即当复合酶酶浓度较高时，反应速度并不随酶浓度的增加而增大。而当复合酶量不足时，无法充分酶解麦冬须根的木质化纤维等成分，使提取率不高。
麦冬须根组织中包含表皮、皮层、内皮层、木质部、韧皮部和髓部。不同部位的细胞壁成分不同，初生细胞壁主要是纤维素、半纤维素和果胶类细胞壁，次生细胞壁主要是木质素类细胞壁，胞内层主要含有果胶，组织中还存在很多植物蛋白。酶对于底物有专一性，因此根据麦冬须根组织和成分的特点和比例来选择不同的酶进行配比，才能更完全的破坏细胞壁，降解胞间层和植物蛋白，从而提高提取效率。
实施例5
本实施例提供一种具有替抗作用的麦冬须根多糖干粉的制备方法，包括以下步骤：
将麦冬须根多糖粗提液，经透析膜3500Da透析48小时，浓缩至适量，-80℃条件下放置过夜，于冻干机中冷冻干燥，得到麦冬须根多糖干粉。
实施例6
本实施例提供一种麦冬须根多糖混饲饲料的制备方法。
仔兔基础日粮按照重量份的组成为：玉米14份、豆粕9.8份、苜蓿24.5份、麦麸14份、砻糠7份、钙0.35份、磷0.35份。
将实施例5制备的麦冬须根多糖干粉与仔兔基础日粮原料混合后进行同步粉碎，制备成颗粒状粉末，分散、干燥，即得麦冬须根多糖混饲饲料。麦冬须根多糖干粉的添加量为仔兔基础日粮质量的0.5‰。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (10)
1.一种具有替抗作用的麦冬须根多糖的提取方法，其特征在于，包括：
（1）在预处理后的麦冬须根中依次加入复合酶、蒸馏水，水浴锅中酶解，过滤，滤液煮沸灭活后备用，所述复合酶由中性纤维素酶、中性果胶酶、木瓜蛋白酶组成；
（2）将步骤（1）得到的滤渣回收并加入蒸馏水，冷凝回流浸提，合并提取液和酶解滤液，浓缩、离心，取上清液，得麦冬须根粗提液；
（3）将步骤（2）得到的麦冬须根粗提液中加入无水乙醇，静置，离心，除去上清液，取沉淀加蒸馏水溶解，得麦冬须根多糖粗提液。
2.根据权利要求1所述的一种具有替抗作用的麦冬须根多糖的提取方法，其特征在于：所述复合酶的质量是麦冬须根质量的1-2.6% 。
3.根据权利要求1所述的一种具有替抗作用的麦冬须根多糖的提取方法，其特征在于：所述中性纤维素酶、所述中性果胶酶、所述木瓜蛋白酶的重量份数比为4-6:4-6:5-7。
4.根据权利要求1所述的一种具有替抗作用的麦冬须根多糖的提取方法，其特征在于：酶解前所述蒸馏水的加入量是按照料液比为1:40-50（W/V）加入蒸馏水。
5.根据权利要求1所述的一种具有替抗作用的麦冬须根多糖的提取方法，其特征在于：所述酶解的时间是60-80min。
6.根据权利要求1所述的一种具有替抗作用的麦冬须根多糖的提取方法，其特征在于：所述预处理包括：将麦冬须根清洗处理，干燥后剪碎备用。
7.一种具有替抗作用的麦冬须根多糖干粉的制备方法，其特征在于：将权利要求1-6任一项所述的麦冬须根多糖粗提液，经透析膜透析后浓缩、冷冻干燥，即可。
8.一种由权利要求7所述的制备方法制备得到的麦冬须根多糖干粉。
9.一种由权利要求8所述的麦冬须根多糖干粉在制备仔兔饲料中的应用。
10.根据权利要求9的应用，其特征在于所述麦冬须根多糖干粉在所述仔兔饲料中的添加量为0.5‰。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211470137.4A CN115746154A (zh) | 2022-11-22 | 2022-11-22 | 一种具有替抗作用的麦冬须根多糖的提取方法及应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211470137.4A CN115746154A (zh) | 2022-11-22 | 2022-11-22 | 一种具有替抗作用的麦冬须根多糖的提取方法及应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115746154A true CN115746154A (zh) | 2023-03-07 |
Family
ID=85335732
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211470137.4A Pending CN115746154A (zh) | 2022-11-22 | 2022-11-22 | 一种具有替抗作用的麦冬须根多糖的提取方法及应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115746154A (zh) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101093731B1 (ko) * | 2011-04-11 | 2011-12-19 | 한국폴리텍바이오대학산학협력단 | 맥문동추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 치료 및 예방용 조성물 |
| CN104031162A (zh) * | 2014-06-26 | 2014-09-10 | 河南中烟工业有限责任公司 | 麦冬多糖、提取纯化方法及其作为烟草保润剂的应用 |
| CN109645481A (zh) * | 2018-12-18 | 2019-04-19 | 四川依科制药有限公司 | 麦冬须根提取物及其制备方法和用途 |
| CN112830977A (zh) * | 2021-02-26 | 2021-05-25 | 西南科技大学 | 一种从麦冬须根残渣中提取多糖并纯化的方法 |
| CN114668075A (zh) * | 2022-04-20 | 2022-06-28 | 四川农业大学 | 一种参麦须根多糖颗粒剂及其制备方法与应用 |
-
2022
- 2022-11-22 CN CN202211470137.4A patent/CN115746154A/zh active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101093731B1 (ko) * | 2011-04-11 | 2011-12-19 | 한국폴리텍바이오대학산학협력단 | 맥문동추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 치료 및 예방용 조성물 |
| CN104031162A (zh) * | 2014-06-26 | 2014-09-10 | 河南中烟工业有限责任公司 | 麦冬多糖、提取纯化方法及其作为烟草保润剂的应用 |
| CN109645481A (zh) * | 2018-12-18 | 2019-04-19 | 四川依科制药有限公司 | 麦冬须根提取物及其制备方法和用途 |
| CN112830977A (zh) * | 2021-02-26 | 2021-05-25 | 西南科技大学 | 一种从麦冬须根残渣中提取多糖并纯化的方法 |
| CN114668075A (zh) * | 2022-04-20 | 2022-06-28 | 四川农业大学 | 一种参麦须根多糖颗粒剂及其制备方法与应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Waite et al. | The evaluation of artificially dried grass as a source of energy for sheep: I. The effect of stage of maturity on the apparent digestibility of rye-grass, cocksfoot and timothy | |
| CN104222378A (zh) | 一种保健复配茶及其制备方法 | |
| CN107746435B (zh) | 马齿苋多糖提取物及其制备方法和用途 | |
| CN105053602A (zh) | 一种桑葚果渣鸡饲料及其制备方法 | |
| CN108669348A (zh) | 一种桑杆微生物饲料及其制备方法 | |
| CN102268467A (zh) | 松乳菇菌丝多糖提取物及其应用 | |
| CN115746154A (zh) | 一种具有替抗作用的麦冬须根多糖的提取方法及应用 | |
| CN114916626B (zh) | 包含中药低聚糖和桑叶低聚糖的益生元鱼饲料及其应用 | |
| CN111264877A (zh) | 一种药食同源高纤维功能性食品的制备方法 | |
| CN116515586A (zh) | 具有抗炎、抗氧化特性的苦荞养生酒及其制备方法 | |
| CN114190489B (zh) | 一种基于杂交构树和艾草混合物的微生物发酵鸡用饲料制备方法 | |
| CN113841799B (zh) | 一种含白首乌茎叶的猪饲料及其制备方法、应用 | |
| CN115777832A (zh) | 一种黄芪茎叶混菌固态发酵物的制备方法及其应用 | |
| CN102048165B (zh) | 用于生产具有一被降低的嘌呤化合物含量的食品产品的方法及该食品产品 | |
| CN114470084A (zh) | 环保高效防治罗非鱼白便的组合物及其制备方法和应用 | |
| CN113373016A (zh) | 一种具备催奶效果的米酒及其制备方法 | |
| CN107080045A (zh) | 一种含有小球藻的养殖健康猪饲料及制备方法 | |
| CN112715351A (zh) | 一种桑黄的快速育种方法 | |
| CN106036307A (zh) | 蛹虫草多糖复方饮液及制备方法 | |
| CN110637934A (zh) | 茶籽粕多糖复合物及其在饲料和治疗猪蓝耳病中的应用 | |
| CN117322629B (zh) | 一种基于发酵酶解工艺的马蹄降脂组合物的制备方法 | |
| CN101228919A (zh) | 人参、西洋参果渣酶解制备动物饲料及保健食品和动物药物的技术 | |
| CN105505792B (zh) | 一种中国被毛孢发酵培养方法 | |
| CN107396885A (zh) | 羊的生态养殖方法 | |
| CN112088839B (zh) | 一种改善笼养蛋鸭肉质风味的饲养方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |