CN115327000B - 一种检测艾氟康唑中4-亚甲基哌啶的方法 - Google Patents

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Abstract

本申请属于色谱分析技术领域，尤其涉及一种检测艾氟康唑中4‑亚甲基哌啶的方法。本申请提供了检测艾氟康唑中4‑亚甲基哌啶的方法，包括：在缓冲溶液条件下，将艾氟康唑样品与FMOC‑Cl乙腈溶液发生衍生化反应，然后加入稀释剂，得到艾氟康唑衍生化产物溶液；将艾氟康唑衍生化产物溶液和4‑亚甲基哌啶溶液采用高效液相色谱进行检测，得到艾氟康唑样品中4‑亚甲基哌啶的定性定量检测结果；采用梯度洗脱的方式使流动相通过色谱柱，然后进行紫外检测。本申请提供了一种检测艾氟康唑中4‑亚甲基哌啶的方法，能够同时准确检测出艾氟康唑中4‑亚甲基哌啶杂质。

Description

一种检测艾氟康唑中4-亚甲基哌啶的方法
技术领域
本申请属于色谱分析技术领域，尤其涉及一种检测艾氟康唑中4-亚甲基哌啶的方法。
背景技术
艾氟康唑是2014年FDA批准的新型三唑类外用药物，其作用机制是抑制真菌14a-去甲基化酶，从而影响细胞膜的完整性和功能。4-亚甲基哌啶是生产艾氟康唑起始物料，为艾氟康唑的侧链结构，易于在艾氟康唑中残留。4-亚甲基哌啶的极性较大，使用常规反相色谱体系难于保留，目前其检测多为在流动相中加入强离子对试剂方法进行检测；且4-亚甲基哌啶在液相色谱中紫外吸收较弱，方法的灵敏度不足。
发明内容
鉴于此，本申请提供了一种检测艾氟康唑中4-亚甲基哌啶的方法，能够同时准确检测出艾氟康唑中4-亚甲基哌啶杂质。
本申请第一方面提供了检测艾氟康唑中4-亚甲基哌啶的方法，包括：
在缓冲溶液条件下，将艾氟康唑样品与芴甲氧羰酰氯FMOC-Cl乙腈溶液发生衍生化反应，然后加入稀释剂，得到衍生化产物溶液；
将所述衍生化产物溶液采用高效液相色谱进行检测，得到艾氟康唑样品中4-亚甲基哌啶的定性定量检测结果；
所述高效液相色谱的条件为：十八烷基为填充剂的色谱柱；以甲酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B；所述洗脱的方法为：采用梯度洗脱的方式使流动相通过色谱柱，然后进行紫外检测；
在0~5min，所述流动相A和所述流动相B进行等度洗脱，所述流动相A在流动相中的质量含量为35%~55%，所述流动相B在流动相中的质量含量为45%~65%；
在5~6min，所述流动相A在流动相中的质量含量从35%-55%下降到15%~35%，所述流动相B在流动相中的质量含量从45%~65%增加到65%~85%；
在6~15min，所述流动相A和所述流动相B进行等度洗脱，所述流动相A在流动相中的质量含量为15%~35%，所述流动相B在流动相中的质量含量为65%~85%。
具体的，采用高效液相色谱进行检测时，分别检测艾氟康唑样品衍生化产物溶液和4-亚甲基哌啶对照溶液衍生化产物溶液，即对照品与供试品的衍生产物，以计算得到艾氟康唑样品中4-亚甲基哌啶的定性定量检测结果。
具体的，所述艾氟康唑样品中4-亚甲基哌啶具有式1的结构，式1如下所示：
Figure 299435DEST_PATH_IMAGE001
式1。
具体的，所述色谱柱为3.5μm的C18键合硅胶颗粒为填充剂的色谱柱。
另一实施例中，所述缓冲溶液选自硼砂缓冲盐、磷酸缓冲盐和吡啶中的一种或多种。
另一实施例中，所述缓冲溶液为硼砂缓冲盐或磷酸缓冲盐，采用调节溶液调节所述缓冲溶液的pH至8~12。
具体的，所述缓冲溶液为吡啶、pH为8~12的硼砂缓冲盐或pH为8~12的磷酸缓冲盐，优选为吡啶、pH为10的硼砂缓冲盐或pH为10的磷酸缓冲盐。
具体的，所述调节溶液酸液，所述酸液选自盐酸或/和硫酸。
另一实施例中，所述芴甲氧羰酰氯FMOC-Cl乙腈溶液的芴甲氧羰酰氯浓度为2~8mg/mL。优选的，所述芴甲氧羰酰氯FMOC-Cl乙腈溶液的芴甲氧羰酰氯浓度为5 mg/mL。
另一实施例中，所述稀释剂为乙腈-水溶液，所述乙腈与所述水的体积比为100：0~50：50。优选的，所述乙腈-水溶液为乙腈-水（1:1）的溶液。
另一实施例中，所述流动相A的甲酸水溶液的浓度为0.1%。
另一实施例中，在0~5min，所述流动相A和所述流动相B进行等度洗脱，所述流动相A在流动相中的质量含量为45%，所述流动相B在流动相中的质量含量为55%。
另一实施例中，在5~6min，所述流动相A在流动相中的质量含量从35%-55%下降到25%，所述流动相B在流动相中的质量含量从45%~65%增加到75%。
另一实施例中，在6~15min，所述流动相A和所述流动相B进行等度洗脱，所述流动相A在流动相中的质量含量为25%，所述流动相B在流动相中的质量含量为75%。
另一实施例中，所述高效液相色谱检测过程中的流动相流速为0.8~1.2mL/min；所述色谱柱的柱温为20~40℃。
具体的，所述流速为1.0mL/min，所述柱温为30℃。
另一实施例中，所述高效液相色谱检测过程中的检测波长为200~300nm。
具体的，所述检测波长为210nm。
本申请提供一种高效液相色谱法柱前衍生检测方法，经衍生后的4-亚甲基哌啶可使用常规色谱条件进行检测，且专属性良好、灵敏度高，结果准确可靠，可用于艾氟康唑中4-亚甲基哌啶杂质的质量控制。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为本申请实施例1提供的4-亚甲基哌啶对照溶液的高效液相色谱图；
图2为本申请实施例2提供的4-亚甲基哌啶对照溶液的高效液相色谱图；
图3为本申请实施例3提供的4-亚甲基哌啶对照溶液的高效液相色谱图；
图4为本申请实对比例1提供的4-亚甲基哌啶对照溶液的高效液相色谱图；
图5为本申请对对比例2提供的4-亚甲基哌啶对照溶液的高效液相色谱图；
图6为本申请对对比例3提供的4-亚甲基哌啶对照溶液的高效液相色谱图。
具体实施方式
本申请提供了一种检测4-亚甲基哌啶对照溶液的方法，用于解决现有技术中4-亚甲基哌啶在液相色谱中紫外吸收较弱，导致检测艾氟康唑中4-亚甲基哌啶的灵敏度不足的技术缺陷。
下面将对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。
其中，以下实施例所用原料或试剂均为市售或自制。
实施例1
本申请实施例采用高效液相色谱法柱前衍生对4-亚甲基哌啶对照溶液进行检测，具体检测方法包括：
（1）4-亚甲基哌啶对照溶液的配制：精密称取4-亚甲基哌啶适量，加稀释剂（乙腈）稀释配制成每1mL含4-亚甲基哌啶10μg的溶液，摇匀，得到4-亚甲基哌啶对照溶液。精密量取0.4mL该4-亚甲基哌啶对照溶液置于EP管中，精密加入0.2mL缓冲溶液（吡啶），涡旋混合均匀；精密加入0.2mL的5mg/ml的FMOC-Cl乙腈溶液，涡旋至少15秒；加0.8mL的稀释剂（乙腈），涡旋混合，得到衍生化产物溶液。
（2）对衍生化产物溶液采用高效液相色谱进行检测，经过计算分析后得到4-亚甲基哌啶对照溶液中4-亚甲基哌啶的定性定量检测结果。
高效液相色谱的程序为：
进样量为10μL，流速为1.0mL/min，柱温为30℃。使用高效液相色谱仪紫外可见检测器，紫外检测器波长为210nm，选用粒径为3.5μm的C18键合硅胶颗粒为填充剂的色谱柱。流动相A是0.1%甲酸水溶液，流动相B是乙腈。
高效液相检测过程中采用梯度洗脱的方式使流动相通过色谱柱，梯度洗脱程序根据下表1进行设置，以流动相A/流动相B在流动相中的质量含量计算，0~5min时，流动相A45%及流动相B 55%进行等度洗脱，而后逐渐减少流动相A的比例，增加流动相B的比例。5~6min，流动相A（45%）下降到（25%），流动相B（55%）增加到（75%）；6~15min流动相A保持25%等度洗脱，流动相B保持75%等度洗脱。
表1 实施例1的梯度洗脱表
Figure 30631DEST_PATH_IMAGE002
该4-亚甲基哌啶对照溶液的衍生图谱见图1，图1可知，本申请的衍生方法可稳定衍生4-亚甲基哌啶，高效液相色谱可定性定量对齐进行检测。
实施例2
本申请实施例采用高效液相色谱法柱前衍生对4-亚甲基哌啶对照溶液进行检测，具体检测方法包括：
（1）4-亚甲基哌啶对照溶液的配制：精密称取4-亚甲基哌啶适量，加稀释剂（乙腈）稀释配制成每1mL含4-亚甲基哌啶10μg的溶液，摇匀，得到4-亚甲基哌啶对照溶液。精密量取0.4mL该4-亚甲基哌啶对照溶液置于EP管中，精密加入0.2mL缓冲溶液（为10mmol/ml的硼砂水溶液，用盐酸调节pH至10），涡旋混合均匀；精密加入0.2mL的5mg/ml的FMOC-Cl乙腈溶液，涡旋至少15秒；加0.8mL的稀释剂（乙腈-水（1:1）的溶液），涡旋混合，得到衍生化产物溶液。
（2）对衍生化产物溶液采用高效液相色谱进行检测，经过计算分析后得到4-亚甲基哌啶对照溶液中4-亚甲基哌啶的定性定量检测结果。
高效液相色谱的程序为：
进样量为10μL，流速为1.0mL/min，柱温为30℃。使用高效液相色谱仪紫外可见检测器，紫外检测器波长为210nm，选用粒径为3.5μm的C18键合硅胶颗粒为填充剂的色谱柱。流动相A是0.1%甲酸水溶液，流动相B是乙腈。
高效液相检测过程中采用梯度洗脱的方式使流动相通过色谱柱，梯度洗脱程序根据下表2进行设置，以流动相A/流动相B在流动相中的质量含量计算，0~5min时，流动相A45%及流动相B 55%进行等度洗脱，而后逐渐减少流动相A的比例，增加流动相B的比例。5~6min，流动相A（45%）下降到（25%），流动相B（55%）增加到（75%）；6~15min流动相A保持25%等度洗脱，流动相B保持75%等度洗脱。
表2 实施例2的梯度洗脱表
Figure 899361DEST_PATH_IMAGE003
该4-亚甲基哌啶对照溶液的衍生图谱见图2，图2可知，本申请的衍生方法可稳定衍生4-亚甲基哌啶，高效液相色谱可定性定量对齐进行检测。
实施例3
本申请实施例提供了艾氟康唑中4-亚甲基哌啶杂质的检测方法，采用高效液相色谱法对4-亚甲基哌啶进行检测，然后对该方法进行方法学验证，验证项目包括系统适用性、专属性、定量限、检测限、线性、精密度（包括重复性及中间精密度）、溶液稳定性和耐用性，包括：
（1）稀释剂为乙腈-水（1:1）的溶液。
（2）衍生剂为5mg/mL的FMOC-Cl乙腈溶液。
（3）缓冲溶液为10mmol/mL的磷酸氢二钠水溶液。
（5）待衍生溶液的配制：
a、供试品溶液
精密称取艾氟康唑适量，加稀释剂稀释配制成含艾氟康唑10mg/mL的溶液，摇匀。
b、对照品溶液
精密称取4-亚甲基哌啶适量，加稀释剂稀释配制成每1mL含4-亚甲基哌啶10μg的溶液，摇匀。
c、供试品加标溶液
精密取艾氟康唑与4-亚甲基哌啶适量，加稀释剂稀释配置成含艾氟康唑10mg/mL，摇匀。
（6）衍生过程
分别精密量取0.4mL的上述待衍生溶液（稀释剂、供试品溶液或对照品溶液）置于EP管中，精密加入0.2mL上述缓冲溶液，涡旋混合均匀；精密加入0.2mL上述衍生剂，涡旋至少15秒；加0.8mL上述稀释剂，涡旋混合。
（7）使用高效液相色谱仪紫外可见检测器，紫外检测器波长为210nm，选用粒径为3.5μm的C18键合硅胶颗粒为填充剂的色谱柱。流动相A是0.1%甲酸水溶液，流动相B是乙腈。高效液相检测过程中采用梯度洗脱的方式使流动相通过色谱柱，梯度洗脱程序根据下表3进行设置，以流动相A/流动相B在流动相中的质量含量计算，0-5min时，以流动相A 45%及流动相B 55%进行等度洗脱，而后逐渐减少流动相A的比例，增加流动相B的比例。5-6min，流动相A（45%）下降到（25%），流动相B（55%）增加到（75%）；6-15min流动相A保持25%等度洗脱，流动相B保持75%等度洗脱。进样量为10μL，流速为1.0mL/min，柱温为30℃。
表3 实施例3梯度洗脱表
Figure 466739DEST_PATH_IMAGE004
按上述的色谱参数对建立的4-亚甲基哌啶含量分析方法的高效液相色谱分析方法进行方法学验证。验证项目包括系统适用性、专属性、定量限、检测限、线性、精密度（包括重复性及中间精密度）、溶液稳定性和耐用性。该4-亚甲基哌啶溶液的衍生图谱见图3。
（8）方法学验证结果
通过以上方法进行方法学验证，其验证结果如下所示：
1、系统适用性，验证实验过程中，对照品溶液系统适用性项目4-亚甲基哌啶衍生峰的理论塔板数最小值88718，拖尾因子最大值1.05，峰面积RSD最大值为1.1%，保留时间RSD最大值为0.1%。
2、专属性
Figure 266068DEST_PATH_IMAGE005
3、定量限
Figure 602503DEST_PATH_IMAGE006
4、检测限
Figure 94664DEST_PATH_IMAGE007
5、线性
线性方程为Y=69.3923x+0.5563，线性相关系数为0.9999。
响应因子的RSD 为2.2%。
Y轴截距绝对值与限度浓度Y轴响应值的比值为0.1%。
6、精密度
1）重复性：
①6份供试品溶液中均未检测出4-亚甲基哌啶，不比较；
②6份100%准确度溶液4-亚甲基哌啶含量回收率为2.0%。
2）中间精密度：
①6份供试品溶液中均未检测出4-亚甲基哌啶，不比较；12份供试品溶液中均未检测出4-亚甲基哌啶，不比较。
②6份100%准确度溶液4-亚甲基哌啶含量回收率为1.1%；12份100%准确度溶液4-亚甲基哌啶含量回收率为1.7%。
7、准确度：
单个回收在88.35%~102.26之间，回收率RSD为3.8%。
8、范围：
4-亚甲基哌啶可定量检出浓度为1.696μg/ml~16.964μg/ml。相当于0.017%~0.170%的4-亚甲基哌啶可定量检出。
9、溶液稳定性：
①对照品溶液在2天内4-亚甲基哌啶含量最大变化率为9.6%；
②100%准确度溶液在2天内4-亚甲基哌啶含量最大变化率为3.6%。
③对照品溶液和100%准确度溶液在2天内稳定。
10、耐用性：
色谱条件微小变化条件下：
①对照品溶液4-亚甲基哌啶衍生峰的理论塔板数最小值为75284，拖尾因子最大值为1.07，峰面积RSD最大值为1.28%，保留时间RSD最大值为0.04%；
②流速耐用性回收率RSD为1.9%；柱温耐用性回收率RSD为1.4%；色谱柱耐用性回收率RSD为0.3%；
③各耐用性条件加标供试品溶液中4-亚甲基哌啶衍生峰与相邻峰分离度最小值为6.49。
④既定的色谱条件微小变化（不同柱温±2℃；不同流速±0.1ml/min；不同批号色谱柱）均耐用。
对比例1
本申请对比例提供了对照的检测方法，采用高效液相色谱法对衍生后的4-亚甲基哌啶对照溶液的含量进行检测，包括：
本对比例方法与实施例2相似，区别在于，缓冲溶液为三乙胺，其余步骤与实施例2一致，4-亚甲基哌啶对照溶液的衍生图谱见图4，从图4可知，三乙胺作为缓冲溶液不能衍生4-亚甲基哌啶。
对比例2
本申请对比例提供了对照的检测方法，采用高效液相色谱法对衍生后的4-亚甲基哌啶对照溶液的含量进行检测，包括：
本对比例方法与实施例2相似，区别在于，缓冲溶液为pH为9.5的硼酸钠溶液，其余步骤与实施例2一致，4-亚甲基哌啶对照溶液的衍生图谱见图5，从图5可知，pH为9.5的硼酸钠溶液作为为缓冲溶液不能衍生4-亚甲基哌啶。
对比例3
本申请对比例提供了对照的检测方法，采用高效液相色谱法对衍生后的4-亚甲基哌啶对照溶液的含量进行检测，包括：
本对比例方法与实施例1相似，区别在于，不加入缓冲溶液，其余步骤与实施例1一致，4-亚甲基哌啶对照溶液的衍生图谱见图6，从图6与图1对比可知，不加缓冲溶液进行衍生，该方法衍生的4-亚甲基哌啶衍生物峰较其他方法小，4-亚甲基哌啶衍生的衍生效率远低于加缓冲液衍生的衍生效率。
综上所述，本申请的检测方法（1）衍生剂为FOMC-Cl，缓冲溶液为吡啶、pH为8~12的磷酸盐缓冲溶液或硼砂缓冲溶液中的一种，在进入高效液相色谱前进行衍生；（2）选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；采用流动相梯度洗脱，流动相的A相为0.1%甲酸配制而成的水相，B相为乙腈；高效液相色谱法所采用的检测器为紫外检测器，在合适的梯度、流速与柱温下进行高效液相色谱检测，对样品溶液中的衍生后的4-亚甲基哌啶进行分析。该方法可有效地检出艾氟康唑中的4-亚甲基哌啶杂质，本申请的检测方法灵敏度高，专属性良好。
以上所述仅是本申请的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本申请的保护范围。

Claims (8)

1.一种检测艾氟康唑中4-亚甲基哌啶的方法，其特征在于，包括：
在缓冲溶液条件下，将艾氟康唑样品与FMOC-Cl乙腈溶液发生衍生化反应，然后加入稀释剂，得到衍生化产物溶液；
将所述衍生化产物溶液采用高效液相色谱进行检测，得到艾氟康唑样品中4-亚甲基哌啶的定性定量检测结果；
所述高效液相色谱的条件为：十八烷基为填充剂的色谱柱；以甲酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B；洗脱的方法为：采用梯度洗脱的方式使流动相通过色谱柱，然后进行紫外检测；
在0~5min，所述流动相A和所述流动相B进行等度洗脱，所述流动相A在流动相中的质量含量为45%，所述流动相B在流动相中的质量含量为55%；
在5~6min，所述流动相A在流动相中的质量含量从45%下降到25%，所述流动相B在流动相中的质量含量从55%增加到75%；
在6~15min，所述流动相A和所述流动相B进行等度洗脱，所述流动相A在流动相中的质量含量为25%，所述流动相B在流动相中的质量含量为75%。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述缓冲溶液选自硼砂缓冲盐、磷酸缓冲盐和吡啶中的一种或多种。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述缓冲溶液为硼砂缓冲盐或磷酸缓冲盐，采用调节溶液调节所述缓冲溶液的pH至8~12。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述FMOC-Cl乙腈溶液的芴甲氧羰酰氯浓度为2~8 mg/mL。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述FMOC-Cl乙腈溶液的芴甲氧羰酰氯浓度为5 mg/mL。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述稀释剂为乙腈-水溶液，所述乙腈与所述水的体积比为100：0~50：50。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测过程中的流动相流速为0.8~1.2mL/min；所述色谱柱的柱温为20~40℃。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测过程中的检测波长为200~300nm。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116298027A (zh) * 2022-12-28 2023-06-23 江苏诺泰澳赛诺生物制药股份有限公司 一种基因毒性杂质的液相色谱检测方法与用途

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6054557A (en) * 1995-04-04 2000-04-25 Advanced Bioconcept (1994) Ltd. Fluorescent peptides
KR20080085245A (ko) * 2007-03-19 2008-09-24 애니젠 주식회사 유효하고 선택적인 인간 ρ2χ3 수용체 길항제로서의스피노르핀계 유도체
CN103896802A (zh) * 2012-12-27 2014-07-02 江苏伯克生物医药股份有限公司 预防和治疗肺纤维化的药物及其生产和质量检测方法
CN106918672A (zh) * 2015-12-28 2017-07-04 中美华世通生物医药科技（武汉）有限公司 利用hplc测定艾氟康唑原料药及其制剂中有关物质的方法
CN113929660A (zh) * 2021-10-18 2022-01-14 深圳市海滨制药有限公司 一种环氧乙烷衍生物开环方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6054557A (en) * 1995-04-04 2000-04-25 Advanced Bioconcept (1994) Ltd. Fluorescent peptides
KR20080085245A (ko) * 2007-03-19 2008-09-24 애니젠 주식회사 유효하고 선택적인 인간 ρ2χ3 수용체 길항제로서의스피노르핀계 유도체
CN103896802A (zh) * 2012-12-27 2014-07-02 江苏伯克生物医药股份有限公司 预防和治疗肺纤维化的药物及其生产和质量检测方法
CN106918672A (zh) * 2015-12-28 2017-07-04 中美华世通生物医药科技（武汉）有限公司 利用hplc测定艾氟康唑原料药及其制剂中有关物质的方法
CN113929660A (zh) * 2021-10-18 2022-01-14 深圳市海滨制药有限公司 一种环氧乙烷衍生物开环方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Determination of aliphatic and alicyclic amines in water by gas and liquid chromatography after derivatization by chloroformates;J. Pietsch et al;《Fresenius J Anal Chem》;19961231;第355卷;164-173 *
Identification, synthesis, and control of efinaconazole impurities;Fuqiang Zhu et al;《Pharmazie》;20181231;第73卷;438-441 *
穿膜肽修饰胸腺五肽类似物的合成和生物活性研究;谢文林等;《华中师范大学学报(自然科学版)》;20080630;第42卷(第02期);242-246 *
胸腺五肽合成工艺的研究;任仲辉等;《黑龙江医药》;20081231(第005期);67-68 *

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