CN115290783A - 油溶性软膏中依地酸盐的含量测定方法 - Google Patents
油溶性软膏中依地酸盐的含量测定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115290783A CN115290783A CN202210922300.XA CN202210922300A CN115290783A CN 115290783 A CN115290783 A CN 115290783A CN 202210922300 A CN202210922300 A CN 202210922300A CN 115290783 A CN115290783 A CN 115290783A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- edetate
- phase
- oil
- diluent
- purification
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 113
- 229940009662 edetate Drugs 0.000 title claims abstract description 86
- 239000002674 ointment Substances 0.000 title claims abstract description 74
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 43
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 112
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 101
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims abstract description 81
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 37
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 35
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims abstract description 29
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 16
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 165
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 55
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 claims description 50
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 50
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims description 29
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 26
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 claims description 25
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 25
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 24
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 24
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- VDZOOKBUILJEDG-UHFFFAOYSA-M tetrabutylammonium hydroxide Chemical compound [OH-].CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC VDZOOKBUILJEDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 18
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 15
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 claims description 13
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 claims description 13
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 12
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 12
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 claims description 12
- OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L potassium sulfate Chemical compound [K+].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 11
- 229910052939 potassium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 235000011151 potassium sulphates Nutrition 0.000 claims description 11
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 10
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 8
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 6
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 6
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 150000001879 copper Chemical class 0.000 claims description 4
- 150000002505 iron Chemical class 0.000 claims description 4
- SVWQGVBFFWJJAJ-UHFFFAOYSA-M acetonitrile tetrabutylazanium hydroxide Chemical compound [OH-].CC#N.CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC SVWQGVBFFWJJAJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 125000002347 octyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 3
- 239000008213 purified water Substances 0.000 claims description 3
- 229910000077 silane Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 3
- 238000005220 pharmaceutical analysis Methods 0.000 abstract 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 22
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 20
- 229940124274 edetate disodium Drugs 0.000 description 16
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 15
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 14
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 12
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 11
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 11
- SHWNNYZBHZIQQV-UHFFFAOYSA-J EDTA monocalcium diisodium salt Chemical compound [Na+].[Na+].[Ca+2].[O-]C(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC([O-])=O)CC([O-])=O SHWNNYZBHZIQQV-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 9
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 9
- 239000012088 reference solution Substances 0.000 description 9
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 8
- 229960001484 edetic acid Drugs 0.000 description 8
- RUTXIHLAWFEWGM-UHFFFAOYSA-H iron(3+) sulfate Chemical compound [Fe+3].[Fe+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O RUTXIHLAWFEWGM-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 7
- 229910000360 iron(III) sulfate Inorganic materials 0.000 description 7
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 6
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 6
- 229910021578 Iron(III) chloride Inorganic materials 0.000 description 5
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K iron trichloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 5
- UEAVLBXLOZNDHT-UHFFFAOYSA-K calcium;sodium;2-[2-[bis(carboxylatomethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]acetate Chemical compound [Na+].[Ca+2].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC([O-])=O)CC([O-])=O UEAVLBXLOZNDHT-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 150000001343 alkyl silanes Chemical group 0.000 description 3
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 3
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 3
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 2
- FBAFATDZDUQKNH-UHFFFAOYSA-M iron chloride Chemical compound [Cl-].[Fe] FBAFATDZDUQKNH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 229950004777 sodium calcium edetate Drugs 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000004166 Lanolin Substances 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000013871 bee wax Nutrition 0.000 description 1
- 239000012166 beeswax Substances 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- ORTQZVOHEJQUHG-UHFFFAOYSA-L copper(II) chloride Chemical compound Cl[Cu]Cl ORTQZVOHEJQUHG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 238000002845 discoloration Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 235000019388 lanolin Nutrition 0.000 description 1
- 229940039717 lanolin Drugs 0.000 description 1
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940056211 paraffin Drugs 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 239000013074 reference sample Substances 0.000 description 1
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 1
- 229920002545 silicone oil Polymers 0.000 description 1
- 229940037001 sodium edetate Drugs 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 229940099259 vaseline Drugs 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/50—Conditioning of the sorbent material or stationary liquid
- G01N30/52—Physical parameters
- G01N30/54—Temperature
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/74—Optical detectors
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明公开了油溶性软膏中依地酸盐的含量测定方法，涉及药物分析技术领域，以解决将高效液相色谱法用于检测油溶性软膏中的依地酸盐时可行性差的问题。本发明提供的油溶性软膏中依地酸盐的含量测定方法，通过选择合适的有机溶剂、第二稀释剂及提纯次数，可以将油溶性软膏中的依地酸盐与油脂性基质及其它辅料有效分离。通过对每一次离心分离后的水相中的依地酸盐进行检测，保证了对依地酸盐检测的准确度。本发明的液相色谱检测方法，能够简单、准确地检测油溶性软膏中依地酸盐的含量，具有准确度高、重复性好的特点。
Description
技术领域
本发明涉及药物分析技术领域，尤其涉及油溶性软膏中依地酸盐的含量测定方法。
背景技术
众所周知，准确进行原研药、参比制剂或对照药中辅料的含量测定对仿制品与原研药、参比制剂或对照药一致性评价方面有非常重要的意义。依地酸盐作为稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、螯合剂，可以防止药物制剂或药品中金属离子引起的变色、变质、变浊，在药物制剂或药品中应用非常多。现常用高效液相色谱法对药物制剂或药品中依地酸盐的含量进行检测。
油溶性软膏一般是药物与油脂性基质混合制成的均匀的半固体外用制剂，其中的油脂性基质为凡士林、石蜡、液状石蜡、硅油、蜂蜡、硬脂酸和羊毛脂等。由于油脂性基质的存在，往往无法完全提取油溶性软膏中的依地酸盐，或者所得的提取液中无法完全去除油脂性基质，而这些油脂性基质往往会对高效液相色谱的色谱柱造成损坏。鉴于上述原因，将高效液相色谱法用于检测油溶性软膏中的依地酸盐时，可行性差。
发明内容
本发明的目的在于提供一种油溶性软膏中依地酸盐的含量测定方法，用于克服将高效液相色谱法用于检测油溶性软膏中的依地酸盐时可行性差的问题。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
油溶性软膏中依地酸盐的含量测定方法，其特征在于，采用高效液相色谱法检测，包括：
供试品溶液的制备：
S1、提纯：取一定量的油溶性软膏；加入有机溶剂、第二稀释剂，水浴加热一段时间后取出，涡旋混合、离心，离心后的溶液静置分层，得到提纯后的水相和有机相；
S2、取最后一次提纯后的水相，加入第一稀释剂，并用第二稀释剂定容，定容后的溶液静置衍生，过滤，采用液相色谱法检测水相中依地酸盐是否低于限值，如果是，确认提纯次数N，并转步骤S4，否则转步骤S3；
S3、对所述有机相进行提纯，包括：取所述有机相，向其中加入有机溶剂、第二稀释剂后，再次水浴加热、涡旋混合、离心、静置分层，得再次提纯后的水相和有机相，重复步骤S2；
S4、重新取步骤S1中一定量的油溶性软膏，按照确认的提纯次数N，重复步骤S1对油溶性软膏进行第一次提纯，得到第一次提纯后的水相和有机相，再重复N-1(N≥2)次步骤S3，对每次提纯后的有机相进行再次提纯，得到N-1(N≥2)次提纯后的水相，将所有N次提纯后的水相合并，加入第一稀释剂，并用第二稀释剂定容；定容后的溶液静置衍生，过滤，即得供试品溶液；
对所述供试品溶液进行液相色谱法检测，获得供试品溶液中依地酸盐的含量；
其中，所述有机溶剂为正庚烷、正己烷中的一种或两种。
优选地，所述液相色谱法的检测条件如下：
色谱柱：以C18、C8烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂；
流动相：以乙腈-四丁基氢氧化铵水溶液为流动相A，以乙腈或甲醇为流动相B；
洗脱程序：0min～18min，流动相A、流动相B的体积比为80：20～100：0；18min～20min，流动相A、流动相B的体积比匀速渐变至34：66～45：55；20min～30min，流动相A、流动相B的体积比为34：66～45：55；30min～31min，流动相A、流动相B的体积比匀速渐变至初始0min时流动相A、流动相B的体积比；
流速：0.8mL/min～1.2mL/min；
柱温：25℃～35℃；
检测波长：250nm～258nm；
进样量：10μL～50μL。
优选地，所述步骤S1中有机溶剂的加入量为每克油溶性软膏中加5mL～20mL有机溶剂；所述步骤S3中有机溶剂的加入量为所述有机相的1～1.5倍。
优选地，所述第一稀释剂为铁盐、铜盐中的一种或两种的水溶液，所述第一稀释剂的浓度为0.1mg/mL～1.0mg/mL，所述步骤S2中第一稀释剂的加入量为最后一次提纯后的水相体积的1/5～1/3，所述步骤S4中第一稀释剂的加入量为将所有提纯后的水相合并后的体积的1/5～1/3；
和/或，所述第二稀释剂为硫酸钠、氯化钠、硫酸钾或氯化钾中的一种或几种的水溶液；所述第二稀释剂的浓度为5mg/mL～80mg/mL，所述步骤S1、S3中第二稀释剂的加入量分别为所述步骤S1、S3中有机溶剂加入量的1～1.5倍。
优选地，采用液相色谱法检测最后一次提纯后的水相中依地酸盐是否低于限值，包括：
采用液相色谱法检测最后一次提纯后的水相中依地酸盐是否低于0.02μg/mL。
优选地，所述水浴加热的温度均为53℃～72℃，水浴加热时间均为3min～8min；和/或，所述涡旋混合均为水浴加热取出后立即涡旋混合。
优选地，所述步骤S2中的定容为依据最后一次提纯后的水相的体积选择合适的定容量；所述步骤S4中的定容为依据合并后水相的体积选择合适的定容量。
优选地，所述离心的离心转速均为3000rpm～8000rpm，离心时间均为3min～5min。
优选地，所述过滤为用0.22μm～0.45μm的水系膜过滤。
优选地，流动相A中，所述的四丁基氢氧化铵水溶液的摩尔浓度为2mmol/L～8mmol/L、pH值为2.0～5.0，所述四丁基氢氧化铵水溶液与所述乙腈的比例为(70～90)：(30～10)。
有益技术效果：(1)本发明提供的油溶性软膏中依地酸盐的含量测定方法，通过选择合适的有机溶剂及第二稀释剂，可以将油溶性软膏中的依地酸盐，例如依地酸钙钠或依地酸二钠，与油脂性基质及其它辅料有效分离。尤其是，通过对每一次提纯后的水相中的依地酸盐进行检测，如果水相中的依地酸盐高于本发明液相色谱的检测限值，再次采用有机溶剂和第二稀释剂对有机相进行溶解和离心分离，直至将油溶性软膏中的依地酸盐完全分离到水相中，保证了依地酸盐检测的准确度。待水相中存在的依地酸盐低于本发明液相色谱的检测限值后，确定提纯次数，重新取油溶性软膏，按照确认的提纯次数进行提纯，并将分离后的水相混合，加入含衍生试剂的第一稀释剂，定容过滤后可直接进样，进行液相色谱检测，能够简单、准确地检测油溶性软膏中依地酸盐的含量，具有准确度高、重复性好的特点。
(2)本发明提供的油溶性软膏中依地酸盐的含量测定方法，进一步地，通过设置梯度洗脱的洗脱程序，在不同的时间段内，选择不同的流动相A和流动相B的体积比进行高效液相色谱检测，得到的色谱峰峰形好、无拖尾，能够简单、准确地检测油溶性软膏中依地酸盐的含量，具有准确度高、重复性好的特点。
(3)本发明选用正庚烷、正己烷为有机溶剂，不仅可将油溶性软膏中的依地酸盐与油脂性基质及其它辅料有效分离，还不会在高效液相色谱检测过程中对目标检测物依地酸盐造成干扰。
(4)本发明中通过选择第一稀释剂的种类、浓度和加入量，可以保证水相中的依地酸盐衍生完全，进而保证依地酸盐的检出率；同时，通过选择第二稀释剂的种类、浓度和加入量，既可以让依地酸盐在每次提纯过程中尽可能多的溶解进水相中，还可以减少有机相和水相的乳化作用，减少后续高效液相色谱的干扰因素。
附图说明
图1为线性实验中对照品溶液的线性曲线图。
具体实施方式
为了使本发明所要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明提供了油溶性软膏中依地酸盐的含量测定方法，采用高效液相色谱法检测，包括：
供试品溶液的制备：
S1、提纯：取一定量的油溶性软膏；加入有机溶剂、第二稀释剂，水浴加热放置一段时间后取出，涡旋混合、离心，离心后的溶液静置分层，得到提纯后的水相和有机相；
在上述实施方式中，所述有机溶剂为正庚烷、正己烷中的一种或两种；所述有机溶剂的加入量优选为每克油溶性软膏中加5mL～20mL有机溶剂，更优选为每克油溶性软膏中加10mL～15mL有机溶剂；本发明选用正庚烷、正己烷为有机溶剂，不仅可将油溶性软膏中的依地酸盐与油脂性基质及其它辅料有效分离，还不会在高效液相色谱检测过程中对目标检测物依地酸盐造成干扰。
在上述实施方式中，所述第二稀释剂为硫酸钠、氯化钠、硫酸钾或氯化钾中的一种或几种的水溶液；所述第二稀释剂的浓度优选为5mg/mL～80mg/mL，更优选为30mg/mL～50mg/mL；所述第二稀释剂的加入量优选为有机溶剂加入量的1～1.5倍，更优选为有机溶剂加入量的1.2～1.3倍；通过选择第二稀释剂的种类、浓度和加入量，既可以让依地酸盐在每次提纯过程中尽可能多的溶解进水相中，还可以减少有机相和水相的乳化作用，减少后续高效液相色谱的干扰因素。
在上述实施方式中，所述水浴加热的温度优选为53℃～72℃，更优选为60℃～65℃，水浴加热时间优选为3min～8min，更优选为5min～6min；所述涡旋混合为水浴加热取出后立即涡旋混合；所述离心的离心转速优选为3000rpm～8000rpm，更优选为4000rpm～6000rpm，离心时间优选为3min～5min，更优选为4min～5min。通过对水浴加热温度、涡旋混合时间和离心参数的设定，可提高油溶性软膏中油溶性基质与依地酸盐的分离效率，保证油溶性软膏中的依地酸盐可以充分溶入水相。
S2、取最后一次提纯后的水相，加入第一稀释剂，并用第二稀释剂定容，定容后的溶液静置衍生，过滤，采用液相色谱法检测水相中依地酸盐是否低于限值，如果是，确认提纯次数N，并转步骤S4，否则转步骤S3；
在上述实施方式中，所述第一稀释剂优选为铁盐、铜盐中的一种或两种的水溶液；所述铁盐、铜盐优选为硫酸铁、氯化铁、硫酸铜、氯化铜中的一种或几种；所述第一稀释剂的浓度优选为0.1mg/mL～1.0mg/mL，更优选为0.6mg/mL～0.8mg/mL；所述第一稀释剂的加入量优选为最后一次提纯后的水相体积的1/5～1/3；通过选择第一稀释剂的种类、浓度和加入量，可以保证水相中的依地酸盐衍生完全，进而保证依地酸盐的检出率。
在上述实施方式中，所述第二稀释剂的浓度与S1中的第二稀释剂的浓度相同；所述定容为依据最后一次提纯后的水相的体积选择合适的定容量；所述过滤优选为用0.22μm～0.45μm的水系膜过滤；所述静置衍生的时间优选为30min～4h，更优选为1h～2h。本发明将分离后的水相直接加入含衍生试剂的第一稀释剂，定容过滤后可直接进样，进行液相色谱检测，能够简单、准确地检测油溶性软膏中依地酸盐的含量，具有准确度高、重复性好的特点。
在上述实施方式中，示例性的，所述液相色谱法的检测条件可以参考如下：
色谱柱：以C18、C8烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂；
流动相：以乙腈-四丁基氢氧化铵水溶液为流动相A，以乙腈或甲醇为流动相B；其中，流动相A中，所述的四丁基氢氧化铵水溶液的摩尔浓度优选为2mmol/L～8mmol/L，更优选为5mmol/L～6mmol/L，pH值优选为2.0～5.0，更优选为3.0～4.0；所述四丁基氢氧化铵水溶液与所述乙腈的比例优选为(70～90)：(30～10)，更优选为(75～85)：(25～15)；
洗脱程序：0min～18min，流动相A、流动相B的体积比为80：20～100：0；18min～20min，流动相A、流动相B的体积比匀速渐变至34：66～45：55；20min～30min，流动相A、流动相B的体积比为34：66～45：55；30min～31min，流动相A、流动相B的体积比匀速渐变至初始0分钟时流动相A、流动相B的体积比；31min～45min，流动相A、流动相B的体积比为初始0分钟时流动相A、流动相B的体积比；通过设置梯度洗脱的洗脱程序，在不同的时间段内，选择不同的流动相A和流动相B的体积比，进行高效液相色谱检测，得到的色谱峰峰形好、无拖尾，能够简单、准确地检测油溶性软膏中依地酸盐的含量；
流速优选为0.8mL/min～1.2mL/min，更优选为1.0mL/min～1.1mL/min；
柱温优选为25℃～35℃，更优选为28℃～30℃；
检测波长优选为250nm～258nm；
进样量优选为10μL～50μL。
在上述实施方式中，所述液相色谱法还包括对液相色谱条件进行系统适用性及干扰性试验；所述系统适用性及干扰性试验要求为：对照品连续进样5次，乙二胺四醋酸峰峰面积RSD小于2.0％；所述对照品溶液理论板数按乙二胺四醋酸峰计算应不低于3000，拖尾因子应不大于2.0；阴性对照无干扰。其中，所述对照品溶液的配制方法为精密量取浓度为1.5μg/mL的依地酸盐对照品贮备液5mL，置10mL量瓶中，加入1mL第一稀释剂，用第二稀释剂稀释至刻度，摇匀，静置衍生1h，即得；所述阴性对照的溶液配制方法为：精密称取不含依地酸盐的克立硼罗软膏1.0g，与供试品溶液同法配制。
在上述实施方式中，所述采用液相色谱法检测最后一次提纯后的水相中依地酸盐是否低于限值，包括：采用液相色谱法检测最后一次提纯后的水相中依地酸盐是否低于0.02μg/mL。所述0.02μg/mL的设定，是依据本发明高效液相色谱的检出限设定，低于该限值后，高效液相色谱无法检出，证明最后一次提纯的水相中依地酸盐的含量可忽略不计。
在上述实施方式中，如果水相中存在依地酸盐高于限值，则执行步骤S3，如果水相中存在依地酸盐低于限值，则执行步骤S4。通过对每一次提纯后的水相中的依地酸盐进行检测，如果水相中的依地酸盐高于限值，就再次采用有机溶剂和第二稀释剂对有机相进行溶解和离心分离，直至将油溶性软膏中的依地酸盐完全分离到水相中，保证了检测的准确度。
S3、对所述有机相进行提纯，包括：取所述有机相，向其中加入有机溶剂、第二稀释剂后，再次水浴加热、涡旋混合、离心、静置分层，得再次提纯后的水相和有机相，重复步骤S2；
在上述实施方式中，所述提纯中的有机溶剂的加入量为所述有机相的1～1.5倍；所述第二稀释剂的加入量为步骤S3中有机溶剂加入量的1～1.5倍；所述有机溶剂的种类、第二稀释剂的种类及浓度、水浴加热、涡旋混合、离心的设置与步骤S1中的设置相同，有益效果与上述技术方案所述的有益效果也相同，此处不做赘述。
S4、重新取步骤S1中一定量的油溶性软膏，按照确认的提纯次数N，重复步骤S1对油溶性软膏进行第一次提纯，得到第一次提纯后的水相和有机相，再重复N-1(N≥2)次步骤S3，对每次提纯后的有机相进行再次提纯，得到N-1(N≥2)次提纯后的水相，将所有N次提纯后的水相合并，加入第一稀释剂，并用第二稀释剂定容；定容后的溶液静置衍生，过滤，即得供试品溶液；
在上述实施方式中，所述第一稀释剂的加入量为将所有提纯后的水相合并后的体积的1/5～1/3，所述第一稀释剂的种类和浓度、过滤、静置衍生与步骤S2中相同；所述第二稀释剂的种类及浓度与步骤S1中的第二稀释剂相同；所述定容为依据合并后水相的体积选择合适的定容量；定容过滤后可直接进样，进行液相色谱检测，能够简单、准确地检测油溶性软膏中依地酸盐的含量，具有准确度高、重复性好的特点。
对所述供试品溶液进行液相色谱法检测，获得供试品溶液中依地酸盐的含量。
在上述实施方式中，所述液相色谱法与步骤S2中的液相色谱法相同，有益效果与上述技术方案所述的有益效果也相同，此处不做赘述。
为了更好地理解本发明，下面结合实施例进一步阐明本发明的内容，但本发明的内容不仅仅局限于下面的实施例。
在本发明中，下述实施例及试验例中的克立硼罗软膏为自制制剂，分为含依地酸盐的克立硼罗软膏和不含依地酸盐的克立硼罗软膏，其中，含依地酸盐的克立硼罗软膏分为含依地酸钙钠的克立硼罗软膏和含依地酸二钠的克立硼罗软膏；其余试剂均为市售试剂，纯度为色谱纯或分析纯。
实施例1
本实施例中油溶性软膏中依地酸盐的含量测定过程包括：
(1)液相色谱条件：
色谱柱：以C18烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相：流动相A：5mmol/L四丁基氢氧化铵溶液(用20％磷酸调pH至3.0)与乙腈混合溶液。流动相B：乙腈；
洗脱程序：0～18min，流动相A、流动相B的体积比为90：10；18～20min，流动相A、流动相B的体积比匀速渐变至34：66；20～30min，流动相A、流动相B的体积比为34：66；30～31min，流动相A、流动相B的体积比匀速渐变至90：10；31～45min，流动相A、流动相B的体积比为90：10；
检测波长：254nm；
柱温：30℃；
流速：1.0mL/min；
进样量：20μL；
(2)配制第一稀释剂和第二稀释剂：
第一稀释剂：按比例称取硫酸铁，用水溶解并稀释制成0.6mg/mL的水溶液，即得。
第二稀释剂：按比例称取硫酸钠，用水溶解并稀释制成5mg/mL的水溶液，即得。
(3)供试品溶液配制过程为：
步骤1：精密称取含依地酸钙钠的克立硼罗软膏约1.0g，置50mL塑料离心管中，加正己烷10mL、硫酸钠水溶液15mL，盖紧离心管，60℃水浴加热5min后，取出离心管，立即涡旋混合1min至溶液混合均匀；4000rpm离心5min；将离心后的溶液全转移至100mL分液漏斗中，静置分层，得水相约15mL和有机相约10mL。
步骤2：取步骤1中的水相，加入5mL硫酸铁水溶液，并用硫酸钠水溶液定容至50mL，定容后的溶液静置衍生，过滤，利用液相色谱法，检测步骤1中的水相中的依地酸钙钠高于限值0.02μg/mL；
步骤3：对有机相进行第二次提纯，包括：取第一次提纯后的有机相，向其中加入正己烷15mL、硫酸钠水溶液15mL后，再次水浴加热、涡旋混合、离心、静置分层，得第二次提纯后的水相约15mL和有机相约25mL；
步骤:4：取第二次提纯后的水相，加入5mL硫酸铁水溶液，并用硫酸钠水溶液定容至50mL，定容后的溶液静置衍生，过滤，利用液相色谱法，检测第二次提纯后水相中的依地酸钙钠高于限值0.02μg/mL；
步骤5：对第二次提纯后的有机相进行第三次提纯，包括：取第二次提纯后的有机相，向其中加入正已烷25mL、硫酸钠水溶液25mL后，再次水浴加热、涡旋混合、离心、静置分层，得第三次提纯后的水相约25mL和有机相约50mL；
步骤6：取第三次提纯后的水相，加入硫酸铁水溶液5mL，并用硫酸钠水溶液定容至50mL，定容后的溶液静置衍生，过滤，利用液相色谱法，检测第三次提纯后的水相中的依地酸钙钠，未检出，低于限值0.02μg/mL；确定提纯次数为3次；
步骤7：重新取步骤1中的含依地酸钙钠的克立硼罗软膏约1.0g，按照确认的提纯次数3次，先重复步骤1中的提纯方法进行提纯，得到第一次提纯后的水相和有机相，再重复步骤3和步骤5，对每次提纯后的有机相进行再次提纯，分别得到第二次提纯后的水相和第三次提纯后的水相，将第一次提纯后的水相、第二次提纯后的水相、第三次提纯后的水相合并后，加入11mL硫酸铁水溶液，并用硫酸钠水溶液定容至100mL；定容后的溶液静置衍生1h，用水系膜(0.22μm)过滤，取续滤液即得供试品溶液。
步骤8：对供试品溶液进行液相色谱法检测，获得供试品溶液中依地酸钙钠的含量。
(4)系统适用性及干扰性试验：
对照品溶液：精密量取浓度为1.5μg/mL的依地酸钙钠对照品贮备液5mL，置10mL量瓶中，加入1mL硫酸铁水溶液，用硫酸钠水溶液稀释至刻度，摇匀，静置衍生1h，即得；
阴性对照溶液：精密称取不含依地酸盐的克立硼罗软膏1.0g，与供试品溶液同法配制；
系统适用性及干扰性试验要求：对照品溶液连续进样5次，乙二胺四醋酸峰峰面积RSD小于2.0％；供试品溶液、对照品溶液理论板数按乙二胺四醋酸峰计算应不低于3000，拖尾因子应不大于2.0；阴性对照无干扰。
结果表明：系统适用性符合要求，阴性对照无干扰。
实施例2
本实施例中油溶性软膏中依地酸盐的含量测定过程包括：
(1)液相色谱条件：
色谱柱：以C8烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相：流动相A：2mmol/L四丁基氢氧化铵溶液(用20％磷酸调pH至5.0)与乙腈混合溶液。流动相B：甲醇；
洗脱程序：0～18min，流动相A、流动相B的体积比为100：0；18～20min，流动相A、流动相B的体积比匀速渐变至45：55；20～30min，流动相A、流动相B的体积比为45：55；30～31min，流动相A、流动相B的体积比匀速渐变至100：0；31～45min，流动相A、流动相B的体积比为100：0；
检测波长：250nm；
柱温：35℃；
流速：0.8mL/min；
进样量：10μL；
(2)配制第一稀释剂和第二稀释剂：
第一稀释剂：按比例称取氯化铁，用水溶解并稀释制成0.1mg/mL的水溶液，即得。
第二稀释剂：按比例称取氯化钾，用水溶解并稀释制成20mg/mL的水溶液，即得。
(3)供试品溶液配制过程为：
步骤1：精密称取含依地酸二钠的克立硼罗软膏约1g，置50mL塑料离心管中，加正庚烷5mL、氯化钾水溶液6mL，盖紧离心管，72℃水浴加热3min后，取出离心管，立即涡旋混合1min至溶液混合均匀；3000rpm离心5min；将离心后的溶液全转移至50mL分液漏斗中，静置分层，得水相约6mL和有机相约5mL。
步骤2：取步骤1中的水相，加入氯化铁水溶液2mL，并用氯化钾水溶液定容至20mL，定容后的溶液静置衍生，过滤，利用液相色谱法，检测步骤1中的水相中的依地酸二钠高于限值0.02μg/mL；
步骤3：对有机相进行第二次提纯，包括：取第一次提纯后的有机相，向其中加入正庚烷6mL、氯化钾水溶液9mL后，再次水浴加热、涡旋混合、离心、静置分层，得第二次提纯后的水相约9mL和有机相约11mL；
步骤4：取第二次提纯后的水相，加入氯化铁水溶液3.0mL，并用氯化钾水溶液定容至20mL，定容后的溶液静置衍生，过滤，利用液相色谱法，检测第二次提纯后的水相中的依地酸二钠高于限值0.02μg/mL；
步骤5：对有机相进行第三次提纯，包括：取第二次提纯后的有机相，向其中加入正庚烷11mL、氯化钾水溶液11mL后，再次水浴加热、涡旋混合、离心、静置分层，得第三次提纯后的水相11mL和有机相22mL；
步骤6：取第三次提纯后的水相，加入氯化铁水溶液3.7mL，并用氯化钾水溶液定容至20mL，定容后的溶液静置衍生，过滤，利用液相色谱法，检测第三次提纯后的水相中的依地酸二钠，未检出，低于限值0.02μg/mL；确定提纯次数为3次
步骤7：重新取步骤1中的含依地酸钙钠的克立硼罗软膏约1g，按照确认的提纯次数3次，先重复步骤1中的提纯方法进行提纯，得到第一次提纯后的水相和有机相，再重复步骤3和步骤5，对每次提纯后的有机相进行再次提纯，分别得到第二次提纯后的水相和第三次提纯后的水相，将第一次提纯后的水相、第二次提纯后的水相、第三次提纯后的水相合并后，加入8.7mL氯化铁水溶液，并用氯化钾水溶液定容至50mL；定容后的溶液静置衍生90min，用水系膜(0.45μm)过滤，取续滤液即得供试品溶液。
步骤5：对供试品溶液进行液相色谱法检测，获得供试品溶液中依地酸二钠的含量。
(4)系统适用性及干扰性试验：
对照品溶液：精密量取浓度为1.5μg/mL的依地酸二钠对照品贮备液5mL，置10mL量瓶中，加入1.7mL氯化铁水溶液，用氯化钾水溶液稀释至刻度，摇匀，静置衍生1h，即得；
阴性对照溶液：精密称取不含依地酸盐的克立硼罗软膏1.0g，与供试品溶液同法配制；
系统适用性及干扰性试验要求：对照品溶液连续进样5次，乙二胺四醋酸峰峰面积RSD小于2.0％；供试品溶液、对照品溶液理论板数按乙二胺四醋酸峰计算应不低于3000，拖尾因子应不大于2.0；阴性对照无干扰。
结果表明：系统适用性符合要求，阴性对照无干扰。
实施例3
本实施例中油溶性软膏中依地酸盐的含量测定过程包括：
(1)液相色谱条件：
色谱柱：以C18烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相：流动相A：8mmol/L四丁基氢氧化铵溶液(用20％磷酸调pH至2.0)与乙腈混合溶液。流动相B：乙腈；
洗脱程序：0～18min，流动相A、流动相B的体积比为80：20；18～20min，流动相A、流动相B的体积比匀速渐变至34：66；20～30min，流动相A、流动相B的体积比为34：66；30～31min，流动相A、流动相B的体积比匀速渐变至80：20；31～45min，流动相A、流动相B的体积比为80：20；
检测波长：258nm；
柱温：25℃；
流速：1.2mL/min；
进样量：50μL；
(2)配制第一稀释剂和第二稀释剂：
第一稀释剂：按比例称取硫酸铜，用水溶解并稀释制成1.0mg/mL的水溶液，即得。
第二稀释剂：按比例称取硫酸钾，用水溶解并稀释制成80mg/mL的水溶液，即得。
(3)供试品溶液配制过程为：
步骤1：精密称取含依地酸二钠的克立硼罗软膏约0.5g，置50mL塑料离心管中，加正己烷10mL、硫酸钾水溶液10mL，盖紧离心管，53℃水浴加热8min后，取出离心管，立即涡旋混合1min至溶液混合均匀；8000rpm离心3min；将离心后的溶液全转移至100mL分液漏斗中，静置分层，得下层水相约10mL和有机相约10mL。
步骤2：取步骤1中的水相，加入2.5mL硫酸铜水溶液，并用硫酸钾水溶液定容至20mL，定容后的溶液静置衍生，过滤，利用液相色谱法，检测步骤1中的水相中的依地酸二钠高于限值0.02μg/mL；
步骤3：对有机相进行第二次提纯，包括：取第一次提纯后的有机相，向其中加入正己烷10mL、硫酸钾水溶液10mL后，再次水浴加热、涡旋混合、离心、静置分层，得第二次提纯后的水相约10mL和有机相约20mL；
步骤4：取第二次提纯后的水相，加入2.5mL硫酸铜水溶液，并用硫酸钾水溶液定容至20mL，定容后的溶液静置衍生，过滤，利用液相色谱法，检测第二次提纯后的水相中的依地酸二钠低于限值0.02μg/mL；确定提纯次数为2次；
步骤5：重新取步骤1中的含依地酸二钠的克立硼罗软膏约0.5g，按照确认的提纯次数2次，先重复步骤1中的提纯方法进行提纯，得到第一次提纯后的水相和有机相，再重复步骤3，对第一次提纯后的有机相进行再次提纯，得到第二次提纯后的水相，将第一次提纯后的水相、第二次提纯后的水相合并后，加入5mL硫酸铜水溶液，并用硫酸钾水溶液定容至50mL；定容后的溶液静置衍生4h，用水系膜(0.22μm)过滤，取续滤液即得供试品溶液。
步骤6：对供试品溶液进行液相色谱法检测，获得供试品溶液中依地酸二钠的含量。
(4)系统适用性及干扰性试验：
对照品溶液：精密量取浓度为1.5μg/mL的依地酸二钠对照品贮备液5mL，置10mL量瓶中，加入1mL硫酸铜水溶液，用硫酸钾水溶液稀释至刻度，摇匀，静置衍生1h，即得；
阴性对照溶液：精密称取不含依地酸盐的克立硼罗软膏1.0g，与供试品溶液同法配制；
系统适用性及干扰性试验要求：对照品溶液连续进样5次，乙二胺四醋酸峰峰面积RSD小于2.0％；供试品溶液、对照品溶液理论板数按乙二胺四醋酸峰计算应不低于3000，拖尾因子应不大于2.0；阴性对照无干扰。
结果表明：系统适用性符合要求，阴性对照无干扰。
以上试验说明：本发明检测方法可以满足油溶性软膏制剂中依地酸盐含量检测。
为了进一步验证本发明的实际应用可行性，本发明进行了线性试验、回收率试验和重复性试验进行验证。
试验例1线性试验
空白溶剂：实施例1中的第一稀释剂、第二稀释剂。
按实施例1中对照品溶液的配制方法，以100％浓度为0.75μg/mL的标准，配制线性浓度分别为20％、50％、80％、100％、150％、200％的线性溶液。
精密量取线性关系溶液各20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，以浓度(μg/mL)为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，计算回归方程及相关系数，线性曲线图见图1。
由结果可知，依地酸盐在0.16μg/mL～1.57μg/mL浓度范围内线性关系良好，线性关系方程y＝23271.0220x-3817523，相关系数R2为0.9999，Y轴截距与100％响应值百分比为2.14％，小于5％，响应因子RSD为3.31％。
试验例2回收率试验
稀释剂：实施例1中的第一稀释剂、第二稀释剂。
对照品贮备液：取依地酸钙钠对照品约15mg，精密称定，置100mL量瓶中，加第二稀释剂适量使溶解，并用第二稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。
对照品溶液：精密量取对照品贮备液1mL，置100mL量瓶中，用第二稀释剂稀释至刻度，摇匀；再精密量取5mL，置10mL容量瓶中，加入1mL第一稀释剂，用第二稀释剂稀释至刻度，摇匀，静置衍生1h，即得。
回收率-对照品贮备液1：精密量取对照品贮备液5mL，置于20mL容量瓶中，用第二稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。
回收率-对照品贮备液2：精密量取10mL回收率-对照品贮备液1，置20mL量瓶中，用第二稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。
回收率供试溶液按表1取阴性对照，加所需回收率-对照品贮备液，按实施例1所列示的制备步骤配制；按实施例1检测方法测定，并计算加样回收率，回收率结果如表2所示。
表1回收率供试溶液配制
表2回收率试验结果
由表2可以看出，加样平均回收率为95.0％，在85～110％之间；按依地酸钙钠含量为0.001％～0.01％，以严控0.01％的ChP2020四部通则9101规定，9份回收率溶液，其回收率均在85～110％之间。回收率验证符合要求。
试验例3重复性试验
按照实施例1中供试品溶液的配制方法，配制6份供试品溶液，按照实施例1的液相色谱条件，分别进样1次，如果依地酸盐检出量的RSD％值小于2.0％，则表明重复性良好。重复性试验结果见表3。
表3重复性结果
| 供试品 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 均值 | RSD％ |
| 测得量(μg/mg) | 3.01 | 3.15 | 3.01 | 3.01 | 3.03 | 3.05 | 3.04 | 1.88 |
由表3可以看出，6份平行样品检测结果的RSD为1.88％，小于2.0％，符合要求；方法的重复性好。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。
Claims (10)
1.油溶性软膏中依地酸盐的含量测定方法，其特征在于，采用高效液相色谱法检测，包括：
供试品溶液的制备：
S1、提纯：取一定量的油溶性软膏；加入有机溶剂、第二稀释剂，水浴加热一段时间后取出，涡旋混合、离心，离心后的溶液静置分层，得到提纯后的水相和有机相；
S2、取最后一次提纯后的水相，加入第一稀释剂，并用第二稀释剂定容，定容后的溶液静置衍生，过滤，采用液相色谱法检测水相中依地酸盐是否低于限值，如果是，确认提纯次数N，并转步骤S4，否则转步骤S3；
S3、对所述有机相进行提纯，包括：取所述有机相，向其中加入有机溶剂、第二稀释剂后，再次水浴加热、涡旋混合、离心、静置分层，得再次提纯后的水相和有机相，重复步骤S2；
S4、重新取步骤S1中一定量的油溶性软膏，按照确认的提纯次数N，重复步骤S1对油溶性软膏进行第一次提纯，得到第一次提纯后的水相和有机相，再重复N-1(N≥2)次步骤S3，对每次提纯后的有机相进行再次提纯，得到N-1(N≥2)次提纯后的水相，将所有N次提纯后的水相合并，加入第一稀释剂，并用第二稀释剂定容；定容后的溶液静置衍生，过滤，即得供试品溶液；
对所述供试品溶液进行液相色谱法检测，获得供试品溶液中依地酸盐的含量；
其中，所述有机溶剂为正庚烷、正己烷中的一种或两种。
2.根据权利要求1所述的油溶性软膏中依地酸盐的含量测定方法，其特征在于，所述液相色谱法的检测条件如下：
色谱柱：以C18、C8烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂；
流动相：以乙腈-四丁基氢氧化铵水溶液为流动相A，以乙腈或甲醇为流动相B；
洗脱程序：0min～18min，流动相A、流动相B的体积比为80：20～100：0；18min～20min，流动相A、流动相B的体积比匀速渐变至34：66～45：55；20min～30min，流动相A、流动相B的体积比为34：66～45：55；30min～31min，流动相A、流动相B的体积比匀速渐变至初始0min时流动相A、流动相B的体积比；
流速：0.8mL/min～1.2mL/min；
柱温：25℃～35℃；
检测波长：250nm～258nm；
进样量：10μL～50μL。
3.根据权利要求1所述的油溶性软膏中依地酸盐的含量测定方法，其特征在于，所述步骤S1中有机溶剂的加入量为每克油溶性软膏中加5mL～20mL有机溶剂；所述步骤S3中有机溶剂的加入量为所述有机相的1～1.5倍。
4.根据权利要求1或2所述的油溶性软膏中依地酸盐的含量测定方法，其特征在于，所述第一稀释剂为铁盐、铜盐中的一种或两种的水溶液，所述第一稀释剂的浓度为0.1mg/mL～1.0mg/mL，所述步骤S2中第一稀释剂的加入量为最后一次提纯后的水相体积的1/5～1/3，所述步骤S4中第一稀释剂的加入量为将所有提纯后的水相合并后的体积的1/5～1/3；
和/或，所述第二稀释剂为硫酸钠、氯化钠、硫酸钾或氯化钾中的一种或几种的水溶液；所述第二稀释剂的浓度为5mg/mL～80mg/mL，所述步骤S1、S3中第二稀释剂的加入量分别为所述步骤S1、S3中有机溶剂加入量的1～1.5倍。
5.根据权利要求1～4任一所述的油溶性软膏中依地酸盐的含量测定方法，其特征在于，采用液相色谱法检测最后一次提纯后的水相中的依地酸盐是否低于限值，包括：
采用液相色谱法检测最后一次提纯后的水相中的依地酸盐是否低于0.02μg/mL。
6.根据权利要求1～5任一所述的油溶性软膏中依地酸盐的含量测定方法，其特征在于，所述水浴加热的温度均为53℃～72℃，水浴加热时间均为3min～8min；和/或，所述涡旋混合均为水浴加热取出后立即涡旋混合。
7.根据权利要求1～6任一所述的油溶性软膏中依地酸盐的含量测定方法，其特征在于，所述步骤S2中的定容为依据最后一次提纯后的水相的体积选择合适的定容量；所述步骤S4中的定容为依据合并后水相的体积选择合适的定容量。
8.根据权利要求1～7任一所述的油溶性软膏中依地酸盐的含量测定方法，其特征在于，所述离心的离心转速均为3000rpm～8000rpm，离心时间均为3min～5min。
9.根据权利要求1～8任一所述的油溶性软膏中依地酸盐的含量测定方法，其特征在于，所述过滤为用0.22μm～0.45μm的水系膜过滤。
10.根据权利要求2～9任一所述的油溶性软膏中依地酸盐的含量测定方法，其特征在于，流动相A中，所述的四丁基氢氧化铵水溶液的摩尔浓度为2mmol/L～8mmol/L、pH值为2.0～5.0，所述四丁基氢氧化铵水溶液与所述乙腈的比例为(70～90)：(30～10)。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210922300.XA CN115290783A (zh) | 2022-08-02 | 2022-08-02 | 油溶性软膏中依地酸盐的含量测定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210922300.XA CN115290783A (zh) | 2022-08-02 | 2022-08-02 | 油溶性软膏中依地酸盐的含量测定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115290783A true CN115290783A (zh) | 2022-11-04 |
Family
ID=83825840
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210922300.XA Pending CN115290783A (zh) | 2022-08-02 | 2022-08-02 | 油溶性软膏中依地酸盐的含量测定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115290783A (zh) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106556649A (zh) * | 2015-09-30 | 2017-04-05 | 天津康鸿医药科技发展有限公司 | 丁酸氯维地平注射乳剂中依地酸二钠的检测方法 |
-
2022
- 2022-08-02 CN CN202210922300.XA patent/CN115290783A/zh active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106556649A (zh) * | 2015-09-30 | 2017-04-05 | 天津康鸿医药科技发展有限公司 | 丁酸氯维地平注射乳剂中依地酸二钠的检测方法 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| CHIH HO 等: "Stability-indicating high-performance liquid chromatographic assay methods for drugs in pharmaceutical dosage forms: Part I", JOURNAL OF FOOD AND DRUG ANALYSIS, vol. 5, no. 1, pages 1 - 24 * |
| J. M. IRACHE 等: "HPLC Determination of Antioxidant Synergists and Ascorbic Acid in some Fatty Pharmaceuticals, Cosmetics and Food", CHROMATOGRAPHIA, vol. 35, no. 3, pages 232 - 236 * |
| 建筑材料科学研究院: "安全风险物质高通量质谱检测技术", 华中科技大学出版社, pages: 256 - 14 * |
| 耿志旺 等: "HPLC法测定丙泊酚注射液中乙二胺四乙酸二钠含量", 药物分析杂志, vol. 31, no. 3, pages 586 - 588 * |
| 赵亚绘 等: "丁酸氯维地平注射乳剂中依地酸二钠的含量测定", 天津医科大学学报, vol. 22, no. 1, pages 73 - 75 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107167532A (zh) | 一种采用高效液相色谱法测试食品中食品添加剂的方法 | |
| CN109655557A (zh) | 一种布瓦西坦及其杂质的检测方法 | |
| CN111024831B (zh) | 一种高效液相色谱法分离盐酸莫西沙星及其杂质的方法 | |
| CN108445098B (zh) | 一种检测维生素a棕榈酸酯中杂质的分析方法 | |
| CN115290783A (zh) | 油溶性软膏中依地酸盐的含量测定方法 | |
| CN108181386B (zh) | 一种分离测定醋酸阿比特龙中间体中有关物质的方法 | |
| L'emeillat et al. | Quantitative gas chromatographic determination of low-molecular-weight straight-chain carboxylic acids as their p-bromophenacyl esters after extractive alkylation in acidic medium | |
| CN110687228A (zh) | 检测西甲硅油中有关物质的方法 | |
| CN109765316B (zh) | 一种从药物中检测右乙拉西坦的方法 | |
| CN114689737A (zh) | 一种s-邻氯苯甘氨酸甲酯酒石酸盐有关物质的分析方法 | |
| CN108226340B (zh) | 一种分离测定双氟米松及其6β双氟米松和16β双氟米松的方法 | |
| CN111812253A (zh) | 一种检测含有苯并咪唑结构化合物中潜在基因毒性杂质的方法 | |
| CN107941956B (zh) | 一种替诺福韦及其对映异构体的高效液相色谱分析检测方法 | |
| CN108303478B (zh) | 高效液相色谱串联质谱测蜂王浆中硝基咪唑类残留的方法 | |
| CN111983109A (zh) | 一种烟草或烟草制品中生物碱的手性分析方法 | |
| CN110988163A (zh) | 一种hplc法分离测定盐酸左西替利嗪及其基因毒性杂质e的方法 | |
| CN108872413B (zh) | 检测(s,s)-2,8-二氮杂双环[4,3,0]壬烷中对映异构体含量的方法 | |
| CN118090958A (zh) | 一种油性基质软膏中依地酸盐测定的前处理方法和含量测定方法 | |
| CN111351886A (zh) | 一种测定酚磺乙胺药物中含有的杂质及其主药含量的方法 | |
| CN114660213B (zh) | 一种复方利血平氢氯噻嗪片的成分含量测定方法 | |
| CN115327004B (zh) | 一种氧化氯吡格雷粗品的检测方法 | |
| CN110361472B (zh) | 一种米库氯铵中间体miv-g异构体的hplc检测方法 | |
| CN110530997B (zh) | 9-(2-羟丙基)腺嘌呤对映体的检测方法 | |
| CN118130662A (zh) | 一种阿瑞匹坦注射液中对映异构体定量分析方法 | |
| CN108562674B (zh) | 衍生化hplc-uv法测定甲磺酸酯的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20221104 |