CN108562674B - 衍生化hplc-uv法测定甲磺酸酯的方法 - Google Patents

衍生化hplc-uv法测定甲磺酸酯的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108562674B
CN108562674B CN201810833521.3A CN201810833521A CN108562674B CN 108562674 B CN108562674 B CN 108562674B CN 201810833521 A CN201810833521 A CN 201810833521A CN 108562674 B CN108562674 B CN 108562674B
Authority
CN
China
Prior art keywords
mesylate
derivatization
hplc
acetonitrile
solution
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201810833521.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108562674A (zh
Inventor
徐洁
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zibo Vocational Institute
Original Assignee
Zibo Vocational Institute
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zibo Vocational Institute filed Critical Zibo Vocational Institute
Priority to CN201810833521.3A priority Critical patent/CN108562674B/zh
Publication of CN108562674A publication Critical patent/CN108562674A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108562674B publication Critical patent/CN108562674B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

本发明属于药品分析检测技术领域，具体涉及一种衍生化HPLC‑UV法测定甲磺酸酯的方法。使用2‑萘硫酚衍生化试剂对甲磺酸酯衍生化，生成在紫外光区252‑253nm有吸收的衍生化产物，利用HPLC反相分配色谱法在紫外光区252‑253nm测定甲磺酸酯的衍生化产物，从而实现对含甲磺酸的原料药中甲磺酸酯的定性与定量检测。采用本发明所述的测定方法测定时甲磺酸伊马替尼中甲磺酸伊马替尼和其他杂质均不会对分析造成干扰，该方法专属性良好；方法的检测限为0.03μg/ml，定量限为0.10μg/ml，线性关系良好；平均回收率在87.5‑102.1％之间，无明显的基质干扰；且衍生化产物在6h内稳定性良好。

Description

衍生化HPLC-UV法测定甲磺酸酯的方法
技术领域
本发明属于药品分析检测技术领域，具体涉及一种衍生化HPLC-UV法测定甲磺酸酯的方法。
背景技术
潜在基因毒性杂质(potential genotoxic impurities)是强致突变剂和致癌剂，能够引起DNA突变、染色体断裂或者DNA重组，还可能导致人类肿瘤的发生。近几年来，随着基因毒性杂质法规的逐步完善，美国食品和药物管理局(FDA)和欧洲药物管理局(EMEA)等部门对基因毒性杂质的监管要求越来越高。药物中基因毒性杂质如果控制不当，可能会导致临床隐患，同时也会影响新药上市时间，因此，在药物生产过程中，对于潜在基因毒性杂质的控制十分重要。
甲磺酸酯是一类常见的潜在基因毒性杂质，近年来越来越受到药品监管部门的关注。甲磺酸酯的来源主要有两个，一是甲磺酸中的残留杂质，二是甲磺酸盐药物成盐过程的副产物。
甲磺酸甲酯(MMS)和甲磺酸乙酯(EMS)是两种常见的甲磺酸酯基因毒性杂质，欧洲药典9.0收载了气相色谱-质谱(GC-MS)法用于检测甲磺酸倍他司汀中甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯的标准方法，该方法需要将待测物衍生化成可挥发性的碘代烷烃，然后顶空进样，方能进行分析。而其他常见的用于测定甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯的方法大多数也都是基于质谱方法，虽然质谱检测器是一种灵敏和通用的检测器，然而高昂的价格限制了它的广泛使用。
高效液相色谱-紫外检测(HPLC-UV)法是药物质量控制的常用手段，开发一种简单、灵敏、稳定的HPLC-UV法用于含甲磺酸的原料药中甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯具有重要意义。然而该方法的开发面临一个重要挑战，即甲磺酸酯缺乏能用于紫外检测的发色基团，因此我们希望通过液相衍生化技术，利用亲核取代反应，引入发色基团来解决这个问题。三乙胺和哌啶被报道作为衍生化试剂用于液相色谱-质谱(LC-MS)法和毛细管色谱-质谱(CE-MS)法测定甲磺酸酯的含量。然而，这些衍生化试剂的产物(季铵盐)由于硅羟基作用会造成拖尾现象，降低检测灵敏度。五氟硫酚和硫氰酸盐是强亲核试剂，被用作衍生化试剂用于气相色谱-质谱(GC-MS)法测定甲磺酸酯含量；但五氟硫酚极易氧化，用于HPLC检测，会产生干扰；而硫氰酸盐衍生化会产生多种衍生化产物，导致低灵敏度。二硫代氨基甲酸盐类被报道作为衍生化试剂用于HPLC-UV法测定甲磺酸酯含量。然而，这类试剂中的硫代酰胺/硫代烷基酯基团与酸或碱易水解，而导致衍生化效率大大降低。2-巯基吡啶被报道作为衍生化试剂用于液相色谱-质谱-质谱(LC-MS-MS)法测定甲磺酸乙酯的含量。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种衍生化HPLC-UV法测定甲磺酸酯的方法。该方法简单，专属性好，线性关系良好，平均回收率高，衍生化产物稳定性良好，检测限较低。
本发明所述的衍生化HPLC-UV法测定甲磺酸酯的方法，使用2-萘硫酚衍生化试剂对甲磺酸酯衍生化，生成在紫外光区252-253nm有吸收的衍生化产物，利用HPLC反相分配色谱法在紫外光区252-253nm测定甲磺酸酯的衍生化产物，从而实现对含甲磺酸的原料药中甲磺酸酯的定性与定量检测。
本发明所述的衍生化HPLC-UV法测定甲磺酸酯的方法，具体包括以下步骤：
(1)用氢氧化钠调节反应体系pH到7-8，在80-100℃条件下，使用2-萘硫酚衍生化试剂对甲磺酸酯衍生化反应生成在紫外光区252-253nm有较强的吸收的衍生化产物；
(2)利用HPLC-UV法，基于反相分配色谱法原理在紫外光区252-253nm测定步骤(1)中获得的甲磺酸酯衍生化产物，从而实现对含甲磺酸的原料药中甲磺酸酯的定性与定量检测。
其中：
步骤(1)中所述的甲磺酸酯为烷基取代的甲磺酸酯；反应体系为乙腈或二甲亚砜；2-萘硫酚浓度为0.1-1.2mg/ml，反应时间为0.5-5h。
甲磺酸酯是甲磺酸甲酯或甲磺酸乙酯中的任意一种；反应体系为乙腈。
所述的衍生化反应的条件：以乙腈为反应体系，以2-萘硫酚为衍生化试剂，用氢氧化钠调节反应体系pH到7-8，在80℃条件下进行衍生化反应；其中，2-萘硫酚浓度为0.1-1.2mg/ml，优选为1.0mg/ml，反应时间为0.5-5h，优选为2h。
步骤(2)中所述的HPLC-UV法具体为采用HPLC仪；采用反相分配色谱法；以非极性键合相为固定相，采用极性流动相，检测波长位于252-253nm。
所述的HPLC-UV法使用的仪器为Shimadzu LC 20AT液相色谱仪，该色谱仪配置有在线真空脱气机、二元梯度泵，自动进样器、柱温箱、DAD检测器和LC-solution色谱工作站；色谱柱采用250mm×4.6mm，5μm的Phenomenex Luna C18(2)柱；进样量20μl；流动相流速1.0ml/min；流动相梯度A相为乙腈，B相为5mmol/L乙酸铵溶液，A相与B相的体积比为80:20；等度洗脱；柱温30℃；检测器波长253nm。
本发明所述的方法用于含甲磺酸的原料药中甲磺酸酯的定性与定量检测。
本发明所述的衍生化HPLC-UV法测定甲磺酸酯的方法将其具体应用于测定甲磺酸伊马替尼中甲磺酸酯的方法，具体包括以下步骤：
(1)取甲磺酸伊马替尼样品，水：乙腈混合溶液溶解后加入反应体系中，加入2-萘硫酚衍生化试剂，用氢氧化钠调节反应体系pH到7-8，在80℃-100℃条件下，进行衍生化反应2-5h获得反应液；
(2)以步骤(1)中衍生化反应结束后的反应液作为进样样品，利用HPLC-UV法在252-253nm测定其中甲磺酸酯的衍生化产物，从而实现对甲磺酸伊马替尼中甲磺酸酯的定性或定量检测。
其中：
水和乙腈混合溶液由10:90～20:80体积比的水和乙腈混合而成；甲磺酸伊马替尼与水和乙腈混合溶液的用量比为2.5mg：0.5ml～5mg：0.5ml；甲磺酸伊马替尼在反应体系中的终浓度为0.5mg/ml～1mg/ml。
甲磺酸伊马替尼在反应体系中的终浓度是步骤(1)中获得的反应液中的甲磺酸伊马替尼的浓度。
所述的衍生化反应的条件：以乙腈为反应体系，以2-萘硫酚为衍生化试剂，用氢氧化钠调节反应体系pH到7-8，在80℃条件下进行衍生化反应；其中，2-萘硫酚浓度为1mg/ml，反应时间为2h。
所述的HPLC-UV法：采用HPLC仪；采用反相分配色谱法；以非极性键合相为固定相，采用极性流动相，检测波长位于252-253nm，优选为253nm。
所述的HPLC-UV法使用的仪器为Shimadzu LC 20AT液相色谱仪，该色谱仪配置有在线真空脱气机、二元梯度泵，自动进样器、柱温箱、DAD检测器和LC-solution色谱工作站；色谱柱采用250mm×4.6mm，5μm的Phenomenex Luna C18(2)柱；进样量20μl；流动相流速1.0ml/min；流动相梯度A相为乙腈，B相为5mmol/L乙酸铵溶液，A相与B相的体积比为80:20；等度洗脱；柱温30℃；检测波长253nm。
本发明与现有技术相比，具有以下有益效果：
本发明基于2-萘硫酚衍生化试剂的烷基衍生化产物具有紫外吸收的特征，建立了一种简单、通用的衍生化HPLC-UV测定甲磺酸酯的方法。结果显示甲磺酸伊马替尼中甲磺酸伊马替尼和其他杂质均不会对分析造成干扰，该方法专属性良好。此外，方法的检测限为0.03μg/ml，定量限为0.10μg/ml，线性关系良好(r>0.999)；平均回收率在87.5-102.1％之间(RSD<2.0％)，无明显的基质干扰；且衍生化产物在6h内稳定性良好。
附图说明
图1为以2-萘硫酚为衍生化试剂，相同衍生化反应条件下，不同甲磺酸酯衍生化产物的色谱图；
其中：a为空白溶液(含2-萘硫酚，不含甲磺酸酯)；b为甲磺酸酯混合贮备液的衍生化产物色谱图(甲磺酸酯的浓度为1μg/ml)；c为一批甲磺酸伊马替尼的衍生化产物色谱图；
图2为衍生化溶剂对衍生化效率的影响柱状图；
图3为NaOH浓度对衍生化效率的影响柱状图；
图4为衍生化反应温度对衍生化效率的影响柱状图；
图5为反应时间对衍生化效率的影响柱状图；
图6为2-萘硫酚浓度对衍生化效率的影响柱状图。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步描述。
实施例中所用的仪器、试剂、溶液和检测时的色谱条件描述如下：
1.仪器
岛津LC-20AT液相色谱仪，包括真空脱气机、二元梯度泵、全自动进样器、柱温箱、DAD检测器和LC-Solution色谱工作站。
赛多利斯BS110S型电子天平；WX-80A型涡旋混合器(上海医大仪器厂)；TGL-16G型离心机(上海安亭科学仪器厂)。
2.试剂
甲磺酸甲酯(99.0％)、甲磺酸乙酯(99.0％)、2-萘硫酚(99.0％)和N-甲基吡咯烷酮(99.0％)、N,N-二甲基甲酰胺(色谱纯)、N,N-二甲基乙酰胺(色谱纯)、二甲亚砜(色谱纯)。
水、甲醇(色谱纯)、乙腈(色谱纯)、乙酸铵(分析纯)、氢氧化钠钠(分析纯)。
3.溶液的制备
甲磺酸甲酯贮备液：取甲磺酸甲酯约10mg，精密称定，置于10ml量瓶中，用乙腈溶解稀释至刻度，摇匀，即得1mg/ml。
甲磺酸乙酯贮备液：取甲磺酸乙酯约10mg，精密称定，置于10ml量瓶中，用乙腈溶解稀释至刻度，摇匀，即得1mg/ml。
系列甲磺酸酯混合贮备液：精密量取等量的甲磺酸甲酯贮备液和甲磺酸乙酯贮备液，置于10ml量瓶中，加入乙腈稀释到刻度，稀释成含有相同浓度甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯的一系列混合贮备液(浓度为5、10、20、30、40、50μg/ml)。
2-萘硫酚衍生化溶液：取2-萘硫酚约125mg，精密称定，置于25ml量瓶中，加乙腈溶解稀释至刻度，摇匀，即得5mg/ml。
氢氧化钠溶液(NaOH溶液)：取NaOH约0.2g，精密称定，置于10ml量瓶中，加水溶解稀释至刻度，摇匀，即得0.5mol/L。
4.色谱条件
色谱柱：Phenomenex Luna C18(2)(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈(A)-5mmol/L乙酸铵溶液(B)(80:20，v/v)，等度洗脱；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；进样体积：20μl；检测波长：253nm。
实施例1
精密量取0.1ml的50μg/ml的甲磺酸酯混合贮备液，置于5ml量瓶中，依次加1.0mg/ml的2-萘硫酚衍生化溶液1.0ml和0.10mol/L的NaOH溶液0.5ml，用乙腈稀释至刻度，摇匀，于80℃反应2h，放冷至室温，经10000rpm离心5min，取上清液20μl注入HPLC-DAD分析。
HPLC-DAD条件：仪器条件同1所述；色谱条件同4所述；DAD扫描200-400nm。
甲磺酸甲酯产物最大吸收波长为252nm，甲磺酸乙酯产物最大吸收波长为253nm，选择甲磺酸乙酯产物最大吸收波长为检测波长。
实施例2
精密量取6份、每份0.10ml的系列甲磺酸酯混合贮备液，分别置于6个5ml量瓶中，加5.0mg/ml的2-萘硫酚衍生化溶液1.0ml和0.50mol/L的NaOH溶液0.5ml，用乙腈稀释至刻度，摇匀，配成甲磺酸酯分别为0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0μg/ml的溶液，于80℃反应2h，放冷至室温，经10000rpm离心5min，取上清液20μl注入HPLC-UV分析。
取甲磺酸伊马替尼约100mg，精密称定，置于10ml量瓶中，用水-乙腈溶液(10:90，v/v)溶解稀释至刻度，即得。精密量取0.5ml，置于5ml量瓶中，加5.0mg/ml的2-萘硫酚衍生化溶液1.0ml和0.50mol/L的NaOH溶液0.5ml，用乙腈稀释至刻度，摇匀，于80℃反应2h，放冷至室温，经10000rpm离心5min，取上清液20μl注入HPLC-UV分析。
测定1批甲磺酸伊马替尼中甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯，有检出，低于定量限(小于0.01％)。
实施例3-4
亲核取代反应在非质子性溶剂中速率较快，因此本实验选择了包括乙腈和二甲亚砜2种非质子性溶剂进行测试。
精密量取2份、每份0.1ml的50μg/ml甲磺酸酯混合贮备液，分别置于2个5ml量瓶中，加1.0mg/ml的2-萘硫酚衍生化溶液1.0ml和0.10mol/L的NaOH溶液0.5ml，实施例3和实施例4反应体系不同，实施例3为用乙腈释至刻度，实施例4中为用二甲亚砜稀释至刻度，摇匀，于80℃反应1h，放冷至室温，经10000rpm离心5min，取上清液20μl注入HPLC-UV分析。
对比例1-3
亲核取代反应在非质子性溶剂中速率较快，因此本实验选择了包括N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲基甲酰胺和N-甲基吡咯烷酮在内的3种非质子性溶剂进行测试。对比例1-3分别对应N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲基甲酰胺和N-甲基吡咯烷酮反应体系。
精密量取3份、每份0.1ml的50μg/ml甲磺酸酯混合贮备液，分别置于3个5ml量瓶中，加1.0mg/ml的2-萘硫酚衍生化溶液1.0ml和0.10mol/L的NaOH溶液0.5ml，对比例1-3为分别用N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲基甲酰胺或N-甲基吡咯烷酮稀释至刻度，摇匀，于80℃反应1h，放冷至室温，经10000rpm离心5min，取上清液20μl注入HPLC-UV分析。
对比实施例3-4和对比例1-3的谱图，从图2可以看出，当对甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯进行衍生化时，甲磺酸乙酯衍生化产物的生成明显受到反应溶剂的影响。当反应溶剂为乙腈和二甲亚砜时，衍生化产物峰面积较高。而乙腈的空白干扰较二甲亚砜小，所以选择乙腈作为衍生化反应溶剂进行后续研究。
实施例5-6
精密量取2份、每份0.10ml的50μg/ml甲磺酸酯混合贮备液，分别置于2个5ml量瓶中，加1.0mg/ml的2-萘硫酚衍生化溶液1.0ml，各加不同浓度的NaOH溶液0.5ml，用乙腈稀释至刻度，摇匀，配成NaOH浓度分别为0.050和0.100mol/L的溶液；实施例5中NaOH浓度为0.050mol/L，实施例6中NaOH浓度为0.100mol/L。上述溶液于80℃反应1h，放冷至室温，经10000rpm离心5min，取上清液20μl注入HPLC-UV分析。
对比例4-6
精密量取3份、每份0.10ml的50μg/ml甲磺酸酯混合贮备液，分别置于3个5ml量瓶中，加1.0mg/ml的2-萘硫酚衍生化溶液1.0ml，各加不同浓度的NaOH溶液0.5ml，用乙腈稀释至刻度，摇匀，配成NaOH浓度分别为0.000、0.005和0.010mol/L的溶液。对比例4中NaOH浓度为0.000mol/L，对比例5中NaOH浓度为0.005mol/L，对比例6中NaOH浓度为0.010mol/L。上述溶液于80℃反应1h，放冷至室温，经10000rpm离心5min，取上清液20μl注入HPLC-UV分析。
对比实施例5-6和对比例4-6的谱图，从图3可以看出，当对甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯进行衍生化时，当甲磺酸酯衍生化产物的生成受到NaOH溶液浓度的影响。当NaOH浓度由0.000增至0.005mol/L时，甲磺酸酯衍生化产物明显增加。当NaOH浓度为0.050mol/L时，衍生化产物峰面积达到平台，故选择0.050mol/L进行后续研究。
实施例7-12
精密量取6份、每份0.10ml的50μg/ml甲磺酸酯混合贮备液，分别置于6个5ml量瓶中，加1.0mg/ml的2-萘硫酚衍生化溶液1.0ml和0.50mol/L的NaOH溶液0.5ml，用乙腈稀释至刻度，摇匀，在80℃水浴分别加热0.5、1、2、3、4、5h后，实施例7-12对应的水浴时间分别为0.5、1、2、3、4、5h；放冷至室温，经10000rpm离心5min，取上清液20μl注入HPLC-UV分析。
由图5显示甲磺酸酯衍生物峰面积在2h后其上升趋势缓慢。
对比例7-9
精密量取3份、每份0.10ml的50μg/ml甲磺酸酯混合贮备液，分别置于3个5ml量瓶中，加1.0mg/ml的2-萘硫酚衍生化溶液1.0ml和0.50mol/L的NaOH溶液0.5ml，用乙腈稀释至刻度，摇匀，分别在20、40和60℃水浴加热1h，对比例7-9对应的水浴温度分别为20℃、40℃、60℃；放冷至室温，经10000rpm离心5min，取上清液20μl注入HPLC-UV分析。
对比实施例8和对比例7-9的谱图，从图4可以看出，表明甲磺酸乙酯衍生化产物峰面积在80℃温度最大；因此选择衍生化反应温度为80℃，反应时间为2h。
实施例13-18
精密量取6份、每份0.10ml的50μg/ml甲磺酸酯混合贮备液，分别置于6个5ml量瓶中，加不同体积的2-萘硫酚衍生化溶液和0.50mol/L的NaOH溶液0.5ml，用乙腈稀释至刻度，摇匀，配成2-萘硫酚分别为0.1、0.3、0.5、0.7、1.0、1.2mg/ml的溶液，实施例13-18对应的2-萘硫酚分别为0.1、0.3、0.5、0.7、1.0、1.2mg/ml的溶液；于80℃水浴加热2h后，放冷至室温，经10000rpm离心5min，取上清液20μl注入HPLC-UV分析。
图6显示，甲磺酸酯衍生化产物峰面积随着衍生化试剂浓度的增加而增加，当浓度大于1.0mg/ml后增幅平稳，因此选择衍生化试剂在衍生化溶液中的终浓度为1.0mg/ml。
对本发明所述的衍生化HPLC-UV法测定甲磺酸酯的方法进行专属性、线性与范围、检测线与定量限、进样精密度、衍生物稳定性和加样回收率进行测试，测试结果如下：
专属性
空白溶液：精密量取0.10ml的水-乙腈溶液(10:90)，置于5ml量瓶中，加1.0mg/ml的2-萘硫酚衍生化溶液1.0ml和0.50mol/L的NaOH溶液0.5ml，用乙腈稀释至刻度，摇匀，在80℃水浴加热2h后，放冷至室温，经10000rpm离心5min，取上清液20μl注入HPLC-UV分析。色谱图如图1中a。
甲磺酸酯对照品溶液：精密量取0.10ml的50μg/ml甲磺酸酯混合贮备液，置于5ml量瓶中，加1.0mg/ml的2-萘硫酚衍生化溶液1.0ml和0.50mol/L的NaOH溶液0.5ml，用乙腈稀释至刻度，摇匀，在80℃水浴加热2h后，放冷至室温，经10000rpm离心5min，取上清液20μl注入HPLC-UV分析。色谱图如图1中b。
甲磺酸伊马替尼样品溶液：取甲磺酸伊马替尼样品约100mg，精密称定，置于10ml量瓶中，用水-乙腈溶液(10:90，v/v)溶解稀释至刻度，即得。精密量取0.5ml，置于5ml量瓶中，加5.0mg/ml的2-萘硫酚衍生化溶液1.0ml和0.50mol/L的NaOH溶液0.5ml，用乙腈稀释至刻度，摇匀，于80℃反应2h，放冷至室温，经10000rpm离心5min，取上清液20μl注入HPLC-UV分析。色谱图见图1中c。
上述色谱图中衍生化产物色谱峰与衍生化试剂色谱峰、甲磺酸色谱峰分离度良好，其他杂质峰亦不干扰甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯的测定，说明方法的专属性良好。
线性与范围
分别精密量取0.10ml的系列甲磺酸酯混合贮备液，分别置于5ml量瓶中，加5.0mg/ml的2-萘硫酚衍生化溶液1.0ml和0.50mol/L的NaOH溶液0.5ml，用乙腈稀释至刻度，摇匀，配成甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯分别为0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0μg/ml的溶液，于80℃反应2h，放冷至室温，经10000rpm离心5min，取上清液20μl注入HPLC-UV分析。
以甲磺酸酯浓度C(μg/ml)为横坐标，衍生化产物峰面积(A)为纵坐标，采用最小二乘法进行线性回归分析，计算线性方程及相关系数。结果显示，甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯线性范围均为0.1～1.0μg/ml，且各待测物线性关系良好(r>0.999)。结果见表1。
检测限与定量限
以信噪比3:1为方法的检测限，以信噪比10:1为方法的定量限。结果显示，甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯的检测限为0.03μg/ml，定量限为0.1μg/ml。具体见表1。
进样精密度
配制甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯浓度为0.2μg/ml的溶液，于80℃水浴加热2h，放冷至室温，经10000rpm离心5min，取上清液20μl注入HPLC-UV分析，重复进样6次，计算衍生化产物峰面积之间的RSD作为进样精密度。结果显示，方法的进样精密度良好，RSD小于2.0％。结果见表1。
衍生物稳定性
配制甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯浓度为0.2μg/ml的溶液，于80℃水浴加热2h，放冷0、1、2、3、4、5、6h时，分别经10000rpm离心5min后，取上清液20μl注入HPLC-UV分析，以衍生化产物峰面积的变化考察衍生物的稳定性。由表1可知，衍生物室温放置0～6h内，峰面积的RSD小于4.0％，即稳定性良好。
表1衍生化方法试验结果
Figure BDA0001743977200000081
Figure BDA0001743977200000091
x-待测物浓度(μg/ml)，y-峰面积，r-回归方程的相关系数。
加样回收率
为了评价该方法的准确性，分别计算了各甲磺酸酯在甲磺酸伊马替尼中的加样回收率。
对照品溶液：配制不同浓度(0.1、0.4、1.0μg/ml)的甲磺酸酯对照品溶液，不加甲磺酸伊马替尼本底，每个浓度水平3份。上述溶液于80℃反应2h，放冷至室温，经10000rpm离心5min，取上清液20μl注入HPLC-UV分析。
回收率样品溶液：取9份甲磺酸伊马替尼约100mg，精密称定，分别置于5ml量瓶中，再精密量取0.10ml不同浓度的甲磺酸酯混合贮备液配成含甲磺酸酯浓度为0.1、0.4、1.0μg/ml的3组回收率样品溶液，每组样品3份；每份样品加5.0mg/ml的2-萘硫酚衍生化溶液1.0ml和0.50mol/L的NaOH溶液0.5ml，用乙腈稀释至刻度，摇匀，于80℃反应2h，放冷至室温，经10000rpm离心5min，取上清液20μl注入HPLC-UV分析。
空白样品溶液：取甲磺酸伊马替尼约100mg，精密称定，置于10ml量瓶中，用水-乙腈溶液(10:90，v/v)溶解稀释至刻度，即得。精密量取0.5ml，置于5ml量瓶中，加5.0mg/ml的2-萘硫酚衍生化溶液1.0ml和0.50mol/L的NaOH溶液0.5ml，用乙腈稀释至刻度，摇匀，于80℃反应2h，放冷至室温，经10000rpm离心5min，取上清液20μl注入HPLC-UV分析。
加样回收率＝(回收率样品溶液峰面积-空白样品溶液峰面积)/对照品溶液峰面积×100％。
由表2可知，甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯的加样回收率在87.5～102.1％之间，且RSD均小于2.0％。
表2甲磺酸酯加样回收率试验结果
Figure BDA0001743977200000092

Claims (4)

1.一种衍生化HPLC-UV法测定甲磺酸酯的方法，其特征在于：具体包括以下步骤：
（1）用氢氧化钠调节反应体系pH到7-8，在80-100℃条件下，使用2-萘硫酚衍生化试剂对甲磺酸酯衍生化反应生成在紫外光区252-253nm有吸收的衍生化产物；
（2）利用HPLC-UV法，基于反相分配色谱法原理在紫外光区252-253nm测定步骤（1）中获得的甲磺酸酯衍生化产物，从而实现对含甲磺酸的原料药中甲磺酸酯的定性与定量检测；
步骤（1）中所述的甲磺酸酯为甲磺酸甲酯或甲磺酸乙酯中的任意一种；反应体系为乙腈或二甲亚砜；2-萘硫酚浓度为0.1-1.2mg/ml，反应时间为0.5-5h；
步骤（2）中所述的HPLC-UV法使用的仪器为Shimadzu LC 20AT液相色谱仪，该色谱仪配置有在线真空脱气机、二元梯度泵，自动进样器、柱温箱、DAD检测器和LC-solution色谱工作站；色谱柱采用250mm×4.6mm，5μm的Phenomenex Luna C18柱；进样量20μl；流动相流速1.0ml/min；流动相梯度A相为乙腈，B相为5 mmol/L乙酸铵溶液，A相与B相的体积比为80:20，等度洗脱；柱温30℃；检测器波长253nm。
2.根据权利要求1所述的衍生化HPLC-UV法测定甲磺酸酯的方法，其特征在于：反应体系为乙腈。
3.根据权利要求1所述的衍生化HPLC-UV法测定甲磺酸酯的方法，其特征在于：将其具体应用于测定甲磺酸伊马替尼中甲磺酸酯的方法，具体包括以下步骤：
（1）取甲磺酸伊马替尼样品，水：乙腈混合溶液溶解后加入反应体系中，加入2-萘硫酚衍生化试剂，用氢氧化钠调节反应体系pH到7-8，在80℃-100℃条件下，进行衍生化反应2-5h获得反应液；
（2）以步骤（1）中衍生化反应结束后的反应液作为进样样品，利用HPLC-UV法在252-253nm测定其中甲磺酸酯的衍生化产物，从而实现对甲磺酸伊马替尼中甲磺酸酯的定性与定量检测。
4.根据权利要求3所述的衍生化HPLC-UV法测定甲磺酸酯的方法，其特征在于：水和乙腈混合溶液由10:90~20:80体积比的水和乙腈混合而成；甲磺酸伊马替尼与水和乙腈混合溶液的用量比为2.5mg：0.5ml~5mg：0.5ml；甲磺酸伊马替尼在反应体系中的终浓度为0.5mg/ml~1mg/ml。
CN201810833521.3A 2018-07-26 2018-07-26 衍生化hplc-uv法测定甲磺酸酯的方法 Active CN108562674B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810833521.3A CN108562674B (zh) 2018-07-26 2018-07-26 衍生化hplc-uv法测定甲磺酸酯的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810833521.3A CN108562674B (zh) 2018-07-26 2018-07-26 衍生化hplc-uv法测定甲磺酸酯的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108562674A CN108562674A (zh) 2018-09-21
CN108562674B true CN108562674B (zh) 2021-06-15

Family

ID=63555992

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810833521.3A Active CN108562674B (zh) 2018-07-26 2018-07-26 衍生化hplc-uv法测定甲磺酸酯的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108562674B (zh)

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101133322A (zh) * 2005-03-04 2008-02-27 陶氏环球技术公司 分析活化聚乙二醇化合物的方法
CN101308121A (zh) * 2007-05-14 2008-11-19 袁慧娟 磺酸类阴离子表面活性剂的快速检测方法
CN104198603A (zh) * 2014-09-01 2014-12-10 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 巯基类亲核取代衍生化试剂的分析用途及方法
CN104359998A (zh) * 2014-10-22 2015-02-18 江苏中谱检测有限公司 一种气相色谱-串联质谱检测甲磺酸甲酯的方法
CN107515257A (zh) * 2017-06-27 2017-12-26 中国药科大学 衍生化hplc‑uv法测定甲磺酸中甲磺酸酯的方法
CN107632078A (zh) * 2017-08-14 2018-01-26 中国科学院上海药物研究所 一种测定药物中对甲苯磺酸甲酯的方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101133322A (zh) * 2005-03-04 2008-02-27 陶氏环球技术公司 分析活化聚乙二醇化合物的方法
CN101308121A (zh) * 2007-05-14 2008-11-19 袁慧娟 磺酸类阴离子表面活性剂的快速检测方法
CN104198603A (zh) * 2014-09-01 2014-12-10 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 巯基类亲核取代衍生化试剂的分析用途及方法
CN104359998A (zh) * 2014-10-22 2015-02-18 江苏中谱检测有限公司 一种气相色谱-串联质谱检测甲磺酸甲酯的方法
CN107515257A (zh) * 2017-06-27 2017-12-26 中国药科大学 衍生化hplc‑uv法测定甲磺酸中甲磺酸酯的方法
CN107632078A (zh) * 2017-08-14 2018-01-26 中国科学院上海药物研究所 一种测定药物中对甲苯磺酸甲酯的方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
A generic approach for the determination of residues of alkylating agents in active pharmaceutical ingredients by in situ derivatization-headspace-gas chromatography–mass spectrometry;Roberto Alzaga 等;《Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis》;20070720;第45卷;第472-479页 *
A practical derivatization LC/MS approach for determination of trace level alkyl sulfonates and dialkyl sulfates genotoxic impurities in drug substances;Jianguo An 等;《Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis》;20080706;第48卷(第3期);第1006-1010页 *
Determination of methyl methanesulfonate and ethyl methanesulfonate in methanesulfonic acid by derivatization followed by high-performance liquid chromatography with ultraviolet detection;Jie Zhou 等;《Journal of Separation Science》;20170704;第40卷(第17期);第3369-3564页 *
液相色谱-质谱-衍生化测定伊马替尼中甲磺酸乙酯基因毒性杂质;王康林 等;《广东化工》;20171030;第44卷(第20期);第210-211页 *
衍生化GC-MS法测定甲磺酸萘莫司他原料药中甲磺酸甲酯与甲磺酸乙酯;刘晓强 等;《西北药学杂志》;20180110;第33卷(第1期);第40-42页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN108562674A (zh) 2018-09-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN113447592A (zh) 一种甲硝唑凝胶中乙二胺四乙酸二钠的检测方法
CN108562674B (zh) 衍生化hplc-uv法测定甲磺酸酯的方法
CN107515257B (zh) 衍生化hplc-uv法测定甲磺酸中甲磺酸酯的方法
CN109374791B (zh) 一种用高效液相色谱法测定盐酸瑞芬太尼原料中酸残留的方法
CN108445098B (zh) 一种检测维生素a棕榈酸酯中杂质的分析方法
CN114354801B (zh) （R）-3-Boc-氨基哌啶中三种氨基吡啶异构体含量的分析方法
CN113866318B (zh) 一种(6-氨基吡啶-2-基)(1-甲基哌啶-4-基)甲酮双盐酸盐的检测方法
CN111044640B (zh) 一种利用GC法测定饲料添加剂中γ-氨基丁酸含量的方法
CN113933424A (zh) 阿哌沙班起始物料中杂质的检测方法
CN114441688A (zh) 一种原料药中叔丁胺残留量的分析方法
CN113311087A (zh) 一种共聚聚酯塑料中对苯二甲酸含量测定方法
CN109738556B (zh) 一种烟碱标准物质的制备方法及其制备的烟碱标准物质
CN113504317A (zh) 阿哌沙班中基因毒性杂质的检测方法和应用
CN113030323A (zh) 一种尼洛替尼原料药中残留溶剂的检测方法
CN111077255A (zh) 一种ppsu奶瓶中4,4′-联苯二酚和4,4′-二氯二苯砜迁移量的检测方法
CN108956809B (zh) 一种检测1-(1-氯乙基)-2,3-二甲苯有关物质的方法
CN115436541B (zh) 一种水合氯醛的含量检测方法
CN107091895B (zh) 采用hplc分离测定利奥西呱原料药中有关物质的方法
CN113702536B (zh) 6-氯甲基-2-吡啶甲醇的检测方法和应用
CN111122742B (zh) 一种待测样品中二巯基聚乙二醇残留量的检测方法
CN115327004B (zh) 一种氧化氯吡格雷粗品的检测方法
CN112630349B (zh) 一种Cangrelor中间体杂质的HPLC检测方法
CN109521120B (zh) Gc-aed的无关校正曲线法（cic法）定量测定dntf含量
CN109507327B (zh) Gc-aed的无关校正曲线法（cic法）定量测定tnt含量
CN109580809B (zh) 一种tgic闭环反应液的定量分析检测方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant