CN104359998A - 一种气相色谱-串联质谱检测甲磺酸甲酯的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种气相色谱-串联质谱检测甲磺酸甲酯的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)取待测品置于容量瓶中，加入乙腈定容到10-25ml，涡旋混合1-5min,超声提取10-15min，过0.22μm滤膜，进样对样品中甲磺酸甲酯进行测定；(2)检测条件：采用气相色谱-串联质谱联用仪GC-MS/MS作为检测仪器对甲磺酸甲酯进行测定。在步骤(1)中，取待测品为0.05-0.50g，精确到0.1mg，置于空容量瓶中，加入乙腈定容到10-25ml，涡旋混合1-5min，超声提取10-15min。本发明通过使用GC-MS/MS能够简单、快捷高效的对药品原料、化学试剂以及食品MMS进行定性和定量的检测。

Description

一种气相色谱-串联质谱检测甲磺酸甲酯的方法

技术领域

本发明涉及甲磺酸甲酯MMS的检测方法，具体涉及一种气相色谱-串联质谱检测甲磺酸甲酯的方法。

背景技术

进入21世纪以来，随着科学技术的进步和经济的飞速发展，人类社会的生活也变得越来越便利；与此同时人们在生活中遇到的挑战和存在的隐患也越来越多。快速的生活节奏使得人们更容易受到病魔的侵害；药物治疗是一种快速方便的治疗方式，也是目前最为常见的治疗方式。因此，医药行业是整个社会最为重要领域之一；但受限于技术能力和原料质量等方面的原因，药物试剂中很可能会含有有害物质，这也是医药行业面临的挑战。因而药物试剂的检测分析，对于药物的安全性和商业价值具有非常重要的现实意义。

仪器检测作为现代化学、药物以及食品检测分析主要手段，能够通过测量物质的一些物理和物理化学性质、参数及其变化来确定物质的组成、成分含量及化学结构。仪器检测分析具有试样用量少，分析速度快，易于操作；检测灵敏度高，重现性好，误差小；复杂基质易于分离等优点。随着仪器分析学科和科学技术的进步，检测分析所使用仪器的种类也越来越多，其中使用最为广泛质谱检测器。质谱是使试样中各组分在离子源中发生电离，生成不同荷质比的带正电荷的离子，经加速电场的作用，形成离子束，进入质量分析器。质谱一般与色谱联用，即色谱-质谱联用；根据色谱流动相的不同，色谱-质谱联用又可以分为液相色谱-质谱联用LC-MS和气相色谱-质谱联用GC-MS；其中气相色谱具有分离选择性好、柱效高、速度快等优点。本发明中所使用的气相色谱-串联质谱联用仪GC-MS/MS，是使用串联质谱仪作为MMS的检测器，它是由三级质谱串联而成，能够有效的对目标离子进行分离/修饰，从而进一步的提高信噪比，降低检出限。由于GC-MS/MS的分离选择性能更好，现已广泛的应用于药物、化学、化工以及食品科学等领域。

甲磺酸甲酯MMS是一种基因毒害物质，引起DNA损伤的烷化剂。它能使嘌呤碱基环上的氮原子和氧原子发生甲基化，导致DNA双链断裂点突变，有潜在损伤端粒DNA结构和致细胞凋亡作用。刘永萍等以卵巢癌细胞CAOV3为靶细胞，用MMS对其进行毒性实验，结果表明MMS对肿瘤细胞有凋亡诱导作用；郑履康等以小鼠精细胞为靶细胞，用MMS分别在小鼠体内和体外进行基因毒性实验，结果表明MMS体内及体外处理小鼠精子后，精子染色体畸变率明显升高，当MMS体内处理浓度达到100mg/kg时，精子染色体畸变率高达94.4％，精子染色体虽然受到严重损伤，有的达粉碎程度。通过以上两个案例的分析我们可以知道，甲磺酸甲酯对生物体内基因具有很大的毒害性。

目前对磺酸酯类基因毒性杂质的检测方法主要有液相色谱-质谱法、液相色谱-串联质谱法、衍生化顶空气相色谱法、衍生化顶空气相色谱-质谱法、气相色谱-质谱法等，其中液相色谱-质谱法和液相色谱-串联质谱法因为其载样量大，灵敏度高，专属性强，重现性好被广泛用于难挥发磺酸酯类杂质的检测，如苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯等。但是其在应用于小分子量易挥发的磺酸酯类杂质时存在基质干扰大，检测线高等缺陷。衍生化顶空气相色谱法和衍生化顶空气相色谱-质谱法是目前使用最广泛的磺酸酯类杂质的检测方法。该方法准确度高，重现性好，可有效避免样品中难挥发物质对检测的影响，但是前处理较复杂，检出限较高。气相色谱法和气相色谱-质谱法，因为操作简单，重现性好，但是该方法，基质干扰较强，检测线高，很难达到检测要求。

目前，缺乏一种检测灵敏度高，方法简单易于操作的一种气相色谱-串联质谱检测甲磺酸甲酯的方法。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种检测灵敏度高，方法简单易于操作的一种气相色谱-串联质谱检测甲磺酸甲酯的方法。

本发明的技术方案为：本发明提供了一种气相色谱-串联质谱检测甲磺酸甲酯的方法，包括如下步骤：

(1)加入乙腈定容到10-25ml，涡旋混合1-5min,超声提取10-15min，过0.22μm滤膜，进样对样品中甲磺酸甲酯进行测定；

(2)检测条件：采用气相色谱-串联质谱联用仪GC-MS/MS作为检测仪器对甲磺酸甲酯进行测定。

进一步地，在步骤(1)中，取待测品为0.05-0.50g，精确到0.1mg，置于空容量瓶中，加入乙腈定容到10-25ml，涡旋混合1-5min，超声提取10-15min。

进一步地，在步骤(2)中，气相色谱-串联质谱联用仪的数据采集方式为多反应监测MRM，选择质荷比M/Z＝79→65作为定量离子对；M/Z＝80→65、M/Z＝79→48、M/Z＝80→48、M/Z＝79→48作为定性离子对；溶剂切除时间3.5min。

更进一步地，在步骤(2)中，气相色谱-串联质谱联用仪的色谱柱是以(35％-苯基)-甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管色谱柱：DB-35MS柱长30m，柱径0.25mm，膜厚0.25μm。

进一步地，在步骤(2)中，气相色谱-串联质谱联用仪的进样口温度为150-300℃，进样方式为不分流，载气为氦气，柱流速为1.50ml/min。

进一步地，在步骤(2)中，气相色谱-串联质谱联用仪的升温程序为初始温度85℃，维持时间为3.5min，以20℃/min的速率升温至200℃。

更进一步地，在步骤(2)中，气相色谱-串联质谱联用仪的质谱条件为EI离子源，电压为70eV，离子源温度为230℃；传输线温度为220℃。

有益效果：本发明的检测方法具有灵敏度高、简单、快速等优点。在本发明中通过使用GC-MS/MS能够简单、快捷、高效的对药品原料、化学试剂以及食品MMS进行定性和定量的检测；能够有效的提高甲磺酸甲酯的检测灵敏度且检测方法简单易于操作，有效的避免了基质干扰，使MMS分离效果好，降低了MMS的检测限，最低检出限为6ng/ml；定量限为12ng/ml在12ng/ml-300ng/ml表现出良好的线性，线性相关系数为0.999。

附图说明

图1是本发明的甲磺酸甲酯标准品的总离子流色谱图；

图2是本发明的甲磺酸甲酯标准品的定量离子色谱图；

图3是本发明的甲磺酸甲酯标准品的定性离子色谱图；

图4是本发明的甲磺酸甲酯标准品的质谱图；

图5是本发明的空白溶剂的总离子流色谱图；

图6是本发明的空白溶剂的定量离子色谱图；

图7是本发明的空白溶剂的定性离子色谱图；

图8是本发明的空白溶剂的质谱图；

图9是本发明的空白样品提取液的总离子流色谱图；

图10是本发明的空白样品提取液的定量离子色谱图；

图11是本发明的空白样品提取液的定性离子色谱图；

图12是本发明的空白样品提取液的质谱图；

图13是本发明的样品加标的总离子流色谱图；

图14是本发明的样品加标的定量离子色谱图；

图15是本发明的样品加标的定性离子色谱图；

图16是本发明的样品加标的质谱图；

图17是本发明的线性实验的标准曲线图；

图18是本发明的6ng/ml甲磺酸甲酯标准品的总离子流色谱图；

图19是本发明的6ng/ml甲磺酸甲酯标准品的定量离子色谱图；

图20是本发明的6ng/ml甲磺酸甲酯标准品的定性离子色谱图；

图21是本发明的6ng/ml甲磺酸甲酯标准品的质谱图。

具体实施方式

本发明结合附图和具体实施例作进一步说明。应该理解，这些实施例仅用于说明目的，而不用于限制本发明范围。

实施例1

本发明的一种气相色谱-串联质谱检测甲磺酸甲酯的方法，包括如下步骤：

(1)加入乙腈定容到10ml，涡旋混合1min,超声提取10min，过0.22μm滤膜，进样对样品中甲磺酸甲酯进行测定；

(2)检测条件：采用气相色谱-串联质谱联用仪GC-MS/MS作为检测仪器对甲磺酸甲酯进行测定。

在步骤(1)中，取待测品为0.05g，精确到0.1mg，置于空容量瓶中，加入乙腈定容到10ml，涡旋混合1min，超声提取10min。

在步骤(2)中，气相色谱-串联质谱联用仪的数据采集方式为多反应监测MRM，选择质荷比M/Z＝79→65作为定量离子对；M/Z＝80→65、M/Z＝79→48、M/Z＝80→48、M/Z＝79→48作为定性离子对；溶剂切除时间3.5min。气相色谱-串联质谱联用仪的色谱柱是以(35％-苯基)-甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管色谱柱：DB-35MS柱长30m，柱径0.25mm，膜厚0.25μm。气相色谱-串联质谱联用仪的进样口温度为150-300℃，进样方式为不分流，载气为氦气，柱流速为1.50ml/min。气相色谱-串联质谱联用仪的升温程序为初始温度85℃，维持时间为3.5min，以20℃/min的速率升温至200℃。气相色谱-串联质谱联用仪的质谱条件为EI离子源，电压为70eV，离子源温度为230℃；传输线温度为220℃。

以下测试样品由南京恩泰医药科技有限公司提供。

空白试验和专属性实验：

如图1至图4所示，称取10-15mg甲磺酸甲酯标准品于10ml容量瓶中，用乙腈定容至刻度，稀释1000倍后，取1ml标准品溶液进样分析，甲磺酸甲酯标准品色谱图。如图5至图8所示，为乙腈溶剂的色谱图。取1ml乙腈溶剂进样分析。

如图9至图12所示，分别称取0.200g甲苯磺酸依度沙班固体粉末9份于10ml容量瓶中(精确到1mg)，加适量乙腈，涡旋混合1min，超声10min。用乙腈定容至刻度，涡旋混匀，取1ml过滤进样分析。根据保留时间，离子丰度比定性，根据峰面积采用外标法定量。得到的数据见下表1，表1为九次平行测定实验数据：

表1

通过将空白溶剂色谱图、空白样品色谱图与甲磺酸甲酯标准品色谱图进行比较可以看出，乙腈空白溶剂和样品空白基质在3.7min处峰面积很小，并且离子丰度比与标准品不一致；因此，可以认为溶剂和样品基质对甲磺酸甲酯检测不存在干扰。

线性实验：

如图1至图4所示，分别取适量甲磺酸甲酯标准品用乙腈配制成一系列标准溶液，进样分析，根据保留时间和离子丰度比定性，根据峰面积定量。得到的实验数据见下表2，表2为标准序列实验测定数据：

表2

如图17所示，为线性实验的标准曲线图。甲磺酸甲酯仪器响应值在12ng/ml-300ng/ml内表现出良好的线性关系，线性相关系数为：0.999，满足检测的要求。

检出限和定量限如图18至图21所示，6ng/ml甲磺酸甲酯标准品色谱图及质谱图；其在3.7min处峰面积为2439达到S/N>3的检出限要求。12ng/ml甲磺酸甲酯标准品色谱图在3.7min处峰面积为4607达到S/N>10的定量限要求。

精密度：

选取一个甲磺酸甲酯浓度点进行十次重复实验，试验中选取30ng/ml作为精密度实验用甲磺酸甲酯标准溶液浓度。具体数据见下表3，表3为甲磺酸甲酯精密度实验数据：

表3

如表3所示数据可看出，实验的精密度可达到检测要求。

加标回收实验：

试验中选取了三个加标浓度分别进行了三次平行实验，加标浓度分别为：1mg/kg，2mg/kg，10mg/kg即20ng/ml，40ng/ml，200ng/ml。实验数据见下表4，表4为甲磺酸甲酯加标回收实验数据。

表4

如表4为甲磺酸甲酯加标回收试验数据，可以看出回收率都在80-120％之间，满足试验要求。

实施例2

实施例2与实施例1的区别在于：在步骤(1)中，加入乙腈定容到15ml，涡旋混合4min,超声提取13min，过0.22μm滤膜，进样对样品中甲磺酸甲酯进行测定；取待测品为0.30g，精确到0.1mg，置于空容量瓶中，加入乙腈定容到15ml，涡旋混合4min，超声提取13min。

实施例3

实施例3与实施例1的区别在于：在步骤(1)中，加入乙腈定容到25ml，涡旋混合5min,超声提取15min，过0.22μm滤膜，进样对样品中甲磺酸甲酯进行测定；取待测品为0.50g，精确到0.1mg，置于空容量瓶中，加入乙腈定容到25ml，涡旋混合5min，超声提取15min。

以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，本发明要求保护范围由所附的权利要求书、说明书及其等效物界定。

Claims (7)

1.一种气相色谱-串联质谱检测甲磺酸甲酯的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)取待测品置于容量瓶中，加入乙腈定容到10-25ml，涡旋混合1-5min,超声提取10-15min，过0.22μm滤膜，进样对样品中甲磺酸甲酯进行测定；

(2)检测条件：采用气相色谱-串联质谱联用仪GC-MS/MS作为检测仪器对甲磺酸甲酯进行测定。

2.根据权利要求1所述的气相色谱-串联质谱检测甲磺酸甲酯的方法，其特征在于：在步骤(1)中，取待测品为0.05-0.50g，精确到0.1mg，置于空容量瓶中，加入乙腈定容到10-25ml，涡旋混合1-5min，超声提取10-15min。

3.根据权利要求1所述的气相色谱-串联质谱检测甲磺酸甲酯的方法，其特征在于：在步骤(2)中，气相色谱-串联质谱联用仪的数据采集方式为多反应监测MRM，选择质荷比M/Z＝79→65作为定量离子对；M/Z＝80→65、M/Z＝79→48、M/Z＝80→48、M/Z＝79→48作为定性离子对；溶剂切除时间3.5min。

4.根据权利要求3所述的气相色谱-串联质谱检测甲磺酸甲酯的方法，其特征在于：在步骤(2)中，气相色谱-串联质谱联用仪的色谱柱是以(35％-苯基)-甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管色谱柱：DB-35MS柱长30m，柱径0.25mm，膜厚0.25μm。

5.根据权利要求4所述的气相色谱-串联质谱检测甲磺酸甲酯的方法，其特征在于：在步骤(2)中，气相色谱-串联质谱联用仪的进样口温度为150-300℃，进样方式为不分流，载气为氦气，柱流速为1.50ml/min。

6.根据权利要求5所述的气相色谱-串联质谱检测甲磺酸甲酯的方法，其特征在于：在步骤(2)中，气相色谱-串联质谱联用仪的升温程序为初始温度85℃，维持时间为3.5min，以20℃/min的速率升温至200℃。

7.根据权利要求6所述的气相色谱-串联质谱检测甲磺酸甲酯的方法，其特征在于：在步骤(2)中，气相色谱-串联质谱联用仪的质谱条件为EI离子源，电压为70eV，离子源温度为230℃；传输线温度为220℃。