CN115060829B - 一种鉴别中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及气相色谱‑质谱联用技术领域，尤其涉及一种鉴别中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜的方法。本发明提供一种鉴别中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜的方法，包括：(1)称取待检测样品和内标，对其进行硅烷化衍生；(2)使用气相色谱‑质谱联用仪对待检测样品中的3,10‑二羟基癸酸进行检测，得到3,10‑二羟基癸酸在中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜中的含量；(3)根据3,10‑二羟基癸酸在中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜中含量的差异，可有效鉴别中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜。本发明可以实现简单、快速、准确的鉴定中蜂蜂蜜、西蜂蜂蜜。
Description
技术领域
本发明涉及气相色谱-质谱联用技术领域，尤其涉及一种鉴别中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜的方法。
背景技术
蜂蜜是由蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露，与自身分泌物混合后，经充分酿造而成的天然甜物质，深受消费者的喜爱。
中国的蜂蜜主要由中蜂和西蜂生产，中蜂(Apis cerana cerana) 是中华蜜蜂的简称，它是东方蜜蜂Apis cerana的亚种，为中国特有的蜜蜂品种，主要集中在山区及边远地带，采集零星蜜源植物，多生产百花蜜；西峰(Apis mellifera)属于西方蜜蜂，20世纪30年代被大量引入中国开始饲养，由于其产蜜能力强，成为中国蜂蜜饲养的主要品种，多生产单花蜜。因中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜生产模式的差异，西蜂蜂蜜的产量远高于中蜂蜂蜜，但是中蜂蜂蜜营养价值更高，保健功能更好。从市场价格来看，中蜂蜂蜜的价格远高于西蜂蜂蜜。近年来，受经济利益的驱使，存在用西蜂蜂蜜掺假或冒充中蜂蜂蜜的现象，例如用价格较低的西蜂蜂蜜冒充价格较高的中蜂蜂蜜，甚至将过度热加工的深色伪劣蜜冒充中蜂蜂蜜以次充好，刻意掩盖蜂蜜的真实属性，消费者无法分辨。
现有技术中，陈兰珍等人的《中红外光谱结合线性判别分析快速鉴别蜂蜜品种》中，利用中红外光谱结合线性判别分析，可以将椴树、槐花、葵花、苕子、油菜、枣花6种蜜源蜂蜜样品区别开。李水芳等人的《拉曼光谱法快速鉴别蜂蜜中掺入甜菜糖浆的可行性研究》中，利用拉曼光谱结合化学计量学方法可以鉴别蜂蜜中掺入的甜菜糖浆。但是尚未有简单、快速、准确鉴别中蜂蜂蜜的方法，因此，建立一种简单、快速、准确的蜂蜜真实性鉴别新方法是十分必要的。
发明内容
本发明提供一种鉴别中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜的方法，用以解决现有技术中没有一种鉴定中蜂蜂蜜的缺陷，实现简单、快速、准确地鉴定中蜂蜂蜜、西蜂蜂蜜。
本发明提供一种鉴别中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜的方法，检测待测样品中3,10-二羟基癸酸的含量，当3,10-二羟基癸酸的含量在蜂蜜样品中介于1.96-6.56mg/kg时，判断所述待测样品为中蜂蜂蜜，当含量介于 0.10-0.35mg/kg时，判断所述待测样品为西蜂蜂蜜。
根据本发明提供的一种鉴别中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜的方法，包括：
(1)称取待检测样品和内标，对其进行硅烷化衍生；
(2)使用气相色谱-质谱联用仪对待检测样品中的3,10-二羟基癸酸进行检测，得到3,10-二羟基癸酸在中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜中的含量；
(3)根据3,10-二羟基癸酸在中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜中含量的差异，可有效鉴别中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜。
根据本发明提供的一种鉴别中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜的方法，步骤(1) 中，在硅烷化衍生之前，以乙醚为萃取溶剂，对待检测蜂蜜样品进行萃取。
根据本发明提供的一种鉴别中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜的方法，内标为对羟基苯甲酸甲酯。
根据本发明提供的一种鉴别中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜的方法，利用超声辅助萃取；
优选的，在室温下进行超声辅助萃取。
优选的，超声功率为75-85W；进一步优选为80W。
根据本发明提供的一种鉴别中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜的方法，利用超声辅助萃取2-4次；
优选的，利用超声辅助萃取萃取3次。
根据本发明提供的一种鉴别中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜的方法，将萃取后得到的萃取液进行浓缩得到提取物，利用乙醚将提取物洗出，利用气相色谱-质谱联用仪检测3,10-二羟基癸酸含量；
优选的，使用旋转蒸发器减压浓缩，直至获得提取物。
根据本发明提供的一种鉴别中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜的方法，步骤(2) 中，根据3,10-二羟基癸酸与内标的峰面积比值，对其进行相对定量。
根据本发明提供的一种鉴别中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜的方法，步骤(3) 中，样本检测条件如下：色谱柱为HP-5MS(30m×0.25mm，0.25μ m)，载气采用纯度为99.99％的氦气，流速为1.7-2.0mL/min。
优选流速为1.7mL/min。
根据本发明提供的一种鉴别中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜的方法，步骤(3) 中，气相色谱升温条件如下：初始值85℃，以5℃/min升至140℃；再以2℃/min升至180℃；最后以0.8℃/min升至190℃，共43.5min。
根据本发明提供的一种鉴别中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜的方法，步骤(3) 中，在无分流模式下，进样体积为1μL；质谱电离能70eV，溶剂延迟为7.5min，全扫描模式，扫描范围为41-600m/z。
本发明的有益效果在于：
(1)本发明提供的鉴别中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜的方法，可以实现简单、快速、准确的鉴定中蜂蜂蜜、西蜂蜂蜜。
(2)本发明中，将待测样品测定一次，即可判断出是中蜂蜂蜜还是西蜂蜂蜜，或者即非中蜂蜂蜜也非西蜂蜂蜜。
附图说明
为了更清楚地说明本发明或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明加入内标的典型中蜂蜂蜜(a)和西蜂蜂蜜(b)的总离子流色谱图；
图2为本发明对羟基苯甲酸甲酯的化学结构式；
图3为本发明3,10-二羟基癸酸的质谱图；
图4为中蜂蜂蜜(a)中西蜂蜂蜜(b)3,10-二羟基癸酸的典型提取离子流图；
图5为本发明3,10-二羟基癸酸的化学结构式。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明中的附图，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
准确称取10.00g中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜分别放于装有30mL乙醚的250mL烧杯中，并在室温下进行超声辅助萃取20min，重复萃取三次，收集萃取液；然后将收集的萃取液在50℃的条件下使用旋转蒸发器中减压浓缩，直至获得提取物；用5mL乙醚将提取物洗出，转移至进样瓶中，并加入10μg/mL浓度的对羟基苯甲酸甲酯10mL，并用氮气吹干；随后加入220μL吡啶和80μL N,O-双(三甲基硅烷基) 三氟乙酰胺混合试剂(BSTFA+TMCS，VBSTFA：VTMCS＝99:1)定容，将反应混合物密封保存在2mL进样瓶中，用薄膜密封并在60℃条件下加热30min；将硅烷化后的液体转移至1.5mL离心管中，然后在 10000r/min下离心10min，取上清液，得到三甲基硅烷化衍生物，将其转移至2mL进样瓶中，在0℃下储存备用，待GC-MS检测。
GC-MS上机检测：采用Agilent 7890B/5977B气相色谱质谱联用仪，样本检测条件如下：色谱柱为HP-5MS(30m×0.25mm，0.25 μm)，载气采用纯度为99.99％的氦气，流速为1.7mL/min。
气相色谱升温条件如下：
在无分流模式下，进样体积为1μL；质谱电离能70eV，溶剂延迟为7.5min，全扫描模式，扫描范围为41-600m/z。
检测的目标物质为3,10-二羟基癸酸硅烷化衍生物，定量离子 m/z＝405.2，保留时间35.53min，保留时间在允许偏差内应小于0.5min。
根据3,10-二羟基癸酸在中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜中含量的差异鉴别中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜,当3,10-二羟基癸酸的含量在蜂蜜样品中介于 1.96-6.56mg/kg时，判断所述蜂蜜为中蜂蜂蜜，当含量介于0.10-0.35 mg/kg时，则判断为西蜂蜂蜜。
参见图1，其中(a)和(b)分别表示中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜，编号1和2的特征峰分别是对羟基苯甲酸甲酯和3,10-二羟基癸酸；参见图4，(a)和(b)分别表示中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (10)
1.一种鉴别中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜的方法，其特征在于，
检测待测样品中3,10-二羟基癸酸的含量，当3,10-二羟基癸酸的含量在蜂蜜样品中介于1.96-6.56 mg/kg时，判断所述待测样品为中蜂蜂蜜，当含量介于0.10-0.35 mg/kg时，判断所述待测样品为西蜂蜂蜜；
包括：
（1）称取待检测样品和内标，对其进行硅烷化衍生；
在硅烷化衍生之前，以乙醚为萃取溶剂，对待检测蜂蜜样品进行超声辅助萃取；
（2）使用气相色谱-质谱联用仪对待检测样品中的3,10-二羟基癸酸进行检测，得到3,10-二羟基癸酸在中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜中的含量；
（3）根据3,10-二羟基癸酸在中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜中含量的差异，鉴别中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜；
内标为对羟基苯甲酸甲酯。
2.根据权利要求1所述的鉴别中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜的方法，其特征在于，在室温下进行超声辅助萃取。
3.根据权利要求1所述的鉴别中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜的方法，其特征在于，利用超声辅助萃取2-4次。
4.根据权利要求1所述的鉴别中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜的方法，其特征在于，利用超声辅助萃取萃取3次。
5.根据权利要求1所述的鉴别中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜的方法，其特征在于，将萃取后得到的萃取液进行浓缩得到提取物，利用乙醚将提取物洗出，利用气相色谱-质谱联用仪检测3,10-二羟基癸酸含量。
6.根据权利要求5所述的鉴别中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜的方法，其特征在于，使用旋转蒸发器减压浓缩，直至获得提取物。
7.根据权利要求1所述的鉴别中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜的方法，其特征在于， 步骤（2）中，根据3,10-二羟基癸酸与内标的峰面积比值，对其进行相对定量。
8.根据权利要求1所述的鉴别中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜的方法，其特征在于，步骤（3）中，样本检测条件如下：色谱柱为 HP-5 MS 30 m×0.25 mm，0.25 μm，载气采用纯度为99.99%的氦气，流速为 1.7-2.0 mL/min。
9.根据权利要求1所述的鉴别中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜的方法，其特征在于，步骤（3）中，气相色谱升温条件如下：初始值85℃，以5℃/min升至140℃；再以2℃/min升至180℃；最后以0.8℃/min升至190℃，共43.5min。
10.根据权利要求1所述的鉴别中蜂蜂蜜和西蜂蜂蜜的方法，其特征在于，步骤（3）中，在无分流模式下，进样体积为1 µL；质谱电离能 70 eV，溶剂延迟为 7.5 min，全扫描模式，扫描范围为41-600 m/z。
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| CN115060829A (zh) | 2022-09-16 |
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