CN111896649A - 一种成熟蜂蜜和未成熟蜂蜜的鉴别方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种成熟蜂蜜和未成熟蜂蜜的鉴别方法。该方法包括以下步骤:1)测定成熟蜂蜜和未成熟蜂蜜中的癸二酸和癸烯二酸;2)计算蜂蜜的R值;3)根据R值鉴别成熟蜂蜜与未成熟蜂蜜。本发明具有鉴别结果准确,方法用时短,技术简单可靠,重复性强的特点。
Description
技术领域
本发明属于食品检测领域,具体涉及一种成熟蜂蜜和未成熟蜂蜜的鉴别方法。
背景技术
蜂蜜的质量问题一直受到国内外业界的高度关注。近年来,我国养蜂生产存在“先取稀蜜后浓缩”的生产方式,这种方式生产的蜂蜜水分含量高、易发酵、花香味淡,属于未成熟蜂蜜。国际上把我国生产的未成熟蜂蜜称为水蜂蜜和假蜂蜜,是劣质蜂蜜和廉价蜂蜜的代名词,出口价格与其他国家差距较大,严重影响我国蜂产品的国际声誉和产业发展。因此,成熟蜂蜜的生产是提升蜂蜜质量水平的必由之路。
蜂蜜的成熟过程是由蜜蜂采集植物花蜜并结合自身分泌物进行转化、发酵最终成熟的复杂生物转化过程。已有研究表明,经过充分酿造的天然封盖成熟蜂蜜的营养品质和功能均优于未经充分酿造的非成熟蜂蜜。在蜂蜜成熟过程中,水分和蔗糖等物质含量降低,果糖和蛋白质含量升高。但已发现蜂蜜中至少存在180多种物质,因此仅研究某几个常规的理化指标难以有效区分成熟蜂蜜与非成熟蜂蜜,因而有必要建立蜂蜜真实性鉴别的新方法,保证蜂蜜质量和可追溯性。
目前,现代蜂蜜鉴别检测技术主要有色谱、质谱、色谱质谱联用、核磁共振波谱技术等,但大多用于蜂蜜的植物源和地理源鉴别,尚无有效方法鉴别成熟蜂蜜和未成熟蜂蜜。我们在前期调查研究中发现,一些蜂源性游离脂肪酸在蜂蜜成熟过程中发生显著变化,因此提出了一种成熟蜂蜜和未成熟蜂蜜的鉴别方法。
发明内容
为解决背景技术中存在的上述技术问题,本发明提供了一种鉴别结果准确的成熟蜂蜜和未成熟蜂蜜的鉴别方法。
本发明的技术解决方案是:本发明为一种成熟蜂蜜和未成熟蜂蜜的鉴别方法,其特殊之处在于:该方法包括以下步骤:
1)测定成熟蜂蜜和未成熟蜂蜜中的癸二酸和癸烯二酸;
2)计算蜂蜜的R值;
3)根据R值鉴别成熟蜂蜜与未成熟蜂蜜。
优选的,步骤1)中的具体步骤如下:
1.1)分别将成熟蜂蜜和未成熟蜂蜜加蒸馏水溶解得蜂蜜水溶液,用正己烷-乙醚溶液萃取该蜂蜜水溶液;
1.2)混匀、静置、分层后,收集上层有机相进行减压浓缩,得提取物;
1.3)用硫酸甲醇溶液溶解所得提取物,在恒温水浴中进行甲酯化;
1.4)向甲酯化物中加入饱和氯化钠溶液和正己烷,充分混匀、静置、分层后,收集上层液体并经氮气吹干;
1.5)随后加入正己烷溶解,经微孔滤膜过滤后通过GC-MS检测。
优选的,步骤1)中的具体步骤如下:
1.1)将10.0g成熟蜂蜜和未成熟蜂蜜分别放入装有200mL蒸馏水的烧杯中,并在室温下进行超声处理,将所得混合物转移到分液漏斗中,用80ml正己烷-乙醚混合溶液(v/v,2:1)萃取;
1.2)然后将溶液混匀,静置10min,将上层有机相收集到圆底烧瓶中;重复提取三次;收集的溶液在25℃的旋转蒸发器中减压浓缩,直到获得提取物;
1.3)用5mL 1%H2SO4-CH3OH溶液完全溶解提取物并转移至20mL小瓶中,然后用薄膜密封并在50℃恒温水浴中甲酯化40min;
1.4)甲酯化后,向小瓶中添加3mL饱和NaCl溶液和5mL正己烷,然后涡旋振荡混匀并停留10分钟,收集上层并在25℃下用氮气流干燥;
1.5)所得固体用200μL正己烷(HPLC级)溶解,然后以12000r/min的速度离心20min;收集上部正己烷层,经微孔滤膜过滤后密封在样品瓶中,并在0℃下储存备用,通过GC-MS检测。
优选的,步骤1.5)中GC-MS检测是采用安捷伦7890B/5977B GC-MS仪并配备安捷伦DB-FFAP毛细管柱(60m×0.25mm×0.25μm),载气为氦气(纯度99.99%),流速为1.7mL/min,气相色谱条件为:初始温度为100℃(保持13min),以10℃/min的速率升至180℃(保持6min),然后以1℃/min的速率达到200℃(保持20分钟),最后以5℃/min至230℃(保持10分钟);进样器温度为270℃;在无分流模式下,进样体积为1.0μL;电离能为70ev,离子源和检测器温度分别为230℃和150℃;溶剂延迟时间为1.5min,扫描范围为100-450m/z。
优选的,步骤2)的具体步骤如下:
由以下公式计算蜂蜜的R值:
其中各项代表对应成分含量,上式由下式推导所得:
优选的,步骤3)中的具体步骤如下:R值大小与蜂蜜成熟度成正比,R值越大,蜂蜜成熟度越高;R值越小,蜂蜜不成熟。
优选的,步骤3)规定当R>1.5,判定是成熟蜂蜜;1.0≤R≤1.5,判定蜂蜜未完全成熟;R<1.0,判定是未成熟蜂蜜;当癸二酸或癸烯二酸未检出时,R<1。
蜂蜜成熟的过程是蜜蜂采集花蜜并结合自身分泌物发酵酿造的过程,在该过程的开始,花蜜中的植物源性成分多,蜂源性成分少。随着蜂蜜逐渐成熟,植物源性成分分解变少,蜂源性成分即蜜蜂分泌的物质增多。癸二酸和癸烯二酸作为蜜蜂腺体分泌的成分之一(王浆酸成分之一),在蜂蜜成熟过程中逐渐升高。研究发现,成熟蜂蜜和未成熟蜂蜜中癸二酸和癸烯二酸的相对含量比值与蜂蜜成熟度线性相关(本发明定义比值为R)。因此,本发明提供一种通过癸二酸和癸烯二酸含量区分成熟蜂蜜和未成熟蜂蜜的方法,该方法用时短,技术简单可靠,重复性强,可以有效鉴别成熟蜂蜜和未成熟蜂蜜。
本发明具有如下优点:
1、蜂蜜成熟度能在R值大小上表现出差异,根据R值可有效鉴别成熟蜂蜜与未成熟蜂蜜,从而确定蜂蜜品质,以及判断是否存在人为的掺假等;
2、在不同品种蜂蜜中具有相似地变化规律,方法重复性强;
3、该方法用时较短,技术简单可靠。
附图说明
图1为中长链脂肪酸的GC-MS总离子流色谱图;
图2为癸二酸(a)和癸烯二酸(b)的产物离子质谱图;
图3为成熟蜂蜜(a)和未成熟蜂蜜(b)中癸二酸的总离子流色谱图;
图4为成熟蜂蜜(a)和未成熟蜂蜜(b)中癸烯二酸的总离子流色谱图。
具体实施方式
本发明具体实施例的方法如下:
将10.0g成熟蜂蜜和未成熟蜂蜜(酿造1天)分别放入装有200mL蒸馏水的烧杯中,并在室温下进行超声处理。将所得混合物转移到分液漏斗中,用80ml正己烷-乙醚混合溶液(v/v,2:1)萃取。然后将溶液混匀,静置10min,将上层有机相收集到圆底烧瓶中。重复提取三次。收集的溶液在25℃的旋转蒸发器中减压浓缩,直到获得提取物。
用5mL 1%H2SO4-CH3OH溶液完全溶解提取物并转移至20mL小瓶中,然后用薄膜密封并在50℃恒温水浴中甲酯化40min。甲酯化后,向小瓶中添加3mL饱和NaCl溶液和5mL正己烷。然后涡旋振荡混匀并停留10分钟,收集上层并在25℃下用氮气流干燥。所得固体用200μL正己烷(HPLC级)溶解,然后以12000r/min的速度离心20min。收集上部正己烷层,经微孔滤头过滤后密封在样品瓶中,并在0℃下储存备用。
采用安捷伦7890B/5977B GC-MS仪并配备安捷伦DB-FFAP毛细管柱(60m×0.25mm×0.25μm),载气为氦气(纯度99.99%),流速为1.7mL/min,气相色谱条件为:初始温度为100℃(保持13min),以10℃/min的速率升至180℃(保持6min)然后以1℃/min的速率达到200℃(保持20分钟),最后以5℃/min至230℃(保持10分钟)。进样器温度为270℃。在无分流模式下,进样体积为1.0μL。电离能为70ev,离子源和检测器温度分别为230℃和150℃。溶剂延迟时间为1.5min,扫描范围为100-450m/z。
根据上述检测方法,测定酿造1天、酿造4天和酿造9天(自然成熟)的油菜蜂蜜样品,并得到酿造1天蜂蜜中癸二酸和癸烯二酸相对含量分别为:148554.0、19139.78;酿造4天蜂蜜中癸二酸和癸烯二酸相对含量分别为:171216.9、38775.82;酿造9天(自然成熟)蜂蜜中癸二酸和癸烯二酸相对含量分别为:292789.2、57214.63。通过以下公式计算蜂蜜的R值:
R(酿造1天)=(19139.78×292789.2+57214.63×148554.0)/(1.2×292789.2×57214.63)=0.70
R(酿造4天)=(38775.82×292789.2+57214.63×171216.9)/(1.2×292789.2×57214.63)=1.05
R(酿造9天)=(57214.63×292789.2+57214.63×292789.2)/(1.2×292789.2×57214.63)=1.67
对蜂蜜样品的R值进一步分析,酿造1天蜂蜜的R值为0.70,R值小于1.0,判定是未成熟蜂蜜;酿造4天蜂蜜的R值为1.05,R值介于1.0和1.5之间,判定该蜂蜜未完全成熟;酿造9天蜂蜜的R值为1.67,R值大于1.5,判定并验证是成熟蜂蜜。该结果与实际相符。因此,本发明提供了一种成熟蜂蜜和未成熟蜂蜜的鉴别方法。
参见图1,其中编号1和2的特征峰分别是癸二酸和癸烯二酸。参见图2,(a)和(b)所显示的产物离子质谱可分别对癸二酸和癸烯二酸进行定性;参见图3,(a)和(b)可确定成熟蜂蜜和未成熟蜂蜜中的癸二酸含量;参见图4,(a)和(b)可确定成熟蜂蜜和未成熟蜂蜜中的癸烯二酸含量。
以上,仅为本发明公开的具体实施方式,但本发明公开的保护范围并不局限于此,本发明公开的保护范围应以权利要求的保护范围为准。
Claims (7)
1.一种成熟蜂蜜和未成熟蜂蜜的鉴别方法,其特征在于:该方法包括以下步骤:
1)测定成熟蜂蜜和未成熟蜂蜜中的癸二酸和癸烯二酸;
2)计算蜂蜜的R值;
3)根据R值鉴别成熟蜂蜜与未成熟蜂蜜。
2.根据权利要求1所述的成熟蜂蜜和未成熟蜂蜜的鉴别方法,其特征在于:所述步骤1)中的具体步骤如下:
1.1)分别将成熟蜂蜜和未成熟蜂蜜加蒸馏水溶解得蜂蜜水溶液,用正己烷-乙醚溶液萃取该蜂蜜水溶液;
1.2)混匀、静置、分层后,收集上层有机相进行减压浓缩,得提取物;
1.3)用硫酸甲醇溶液溶解所得提取物,在恒温水浴中进行甲酯化;
1.4)向甲酯化物中加入饱和氯化钠溶液和正己烷,充分混匀、静置、分层后,收集上层液体并经氮气吹干;
1.5)随后加入正己烷溶解,经微孔滤膜过滤后通过GC-MS检测。
3.根据权利要求2所述的成熟蜂蜜和未成熟蜂蜜的鉴别方法,其特征在于:所述步骤1)中的具体步骤如下:
1.1)将10.0g成熟蜂蜜和未成熟蜂蜜分别放入装有200mL蒸馏水的烧杯中,并在室温下进行超声处理,将所得混合物转移到分液漏斗中,用80ml正己烷-乙醚混合溶液(v/v,2:1)萃取;
1.2)然后将溶液混匀,静置10min,将上层有机相收集到圆底烧瓶中;重复提取三次;收集的溶液在25℃的旋转蒸发器中减压浓缩,直到获得提取物;
1.3)用5mL 1%H2SO4-CH3OH溶液完全溶解提取物并转移至20mL小瓶中,然后用薄膜密封并在50℃恒温水浴中甲酯化40min;
1.4)甲酯化后,向小瓶中添加3mL饱和NaCl溶液和5mL正己烷,然后涡旋振荡混匀并停留10分钟,收集上层并在25℃下用氮气流干燥;
1.5)所得固体用200μL正己烷(HPLC级)溶解,然后以12000r/min的速度离心20min;收集上部正己烷层,经微孔滤膜过滤后密封在样品瓶中,并在0℃下储存备用,通过GC-MS检测。
4.根据权利要求3所述的成熟蜂蜜和未成熟蜂蜜的鉴别方法,其特征在于:所述步骤1.5)中GC-MS检测是采用安捷伦7890B/5977B GC-MS仪并配备安捷伦DB-FFAP毛细管柱(60m×0.25mm×0.25μm),载气为氦气(纯度99.99%),流速为1.7mL/min,气相色谱条件为:初始温度为100℃(保持13min),以10℃/min的速率升至180℃(保持6min),然后以1℃/min的速率达到200℃(保持20分钟),最后以5℃/min至230℃(保持10分钟);进样器温度为270℃;在无分流模式下,进样体积为1.0μL;电离能为70ev,离子源和检测器温度分别为230℃和150℃;溶剂延迟时间为1.5min,扫描范围为100-450m/z。
6.根据权利要求5所述的成熟蜂蜜和未成熟蜂蜜的鉴别方法,其特征在于:所述步骤3)中的具体步骤如下:R值大小与蜂蜜成熟度成正比,R值越大,蜂蜜成熟度越高;R值越小,蜂蜜不成熟。
7.根据权利要求6所述的成熟蜂蜜和未成熟蜂蜜的鉴别方法,其特征在于:所述步骤3)规定当R>1.5,判定是成熟蜂蜜;1.0≤R≤1.5,判定蜂蜜未完全成熟;R<1.0,判定是未成熟蜂蜜;当癸二酸或癸烯二酸未检出时,R<1。
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Matei et al. | Chlorogenic Acids |
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Date | Code | Title | Description |
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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