CN111458421A - 一种成熟油菜蜂蜜的鉴别方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种成熟油菜蜂蜜的鉴别方法，该方法采用液相色谱‑四极杆‑飞行时间质谱对待测蜂蜜进行检测，以207.07±0.01质量数准分子离子峰为特征峰，当飞行时间质谱中含有所述特征峰，则判定所述待测蜂蜜为成熟油菜蜂蜜。本发明确定了207.07±0.01质量数准分子离子峰可以作为鉴别成熟油菜蜂蜜的特征峰，只有成熟油菜蜂蜜中才含有该特征峰，而非成熟油菜蜂蜜中是没有该特征峰的。以此方法来鉴别成熟油菜蜂蜜既快速又准确，对于成熟油菜蜂蜜的鉴别具有重要意义，为控制蜂蜜质量和维持市场秩序提供保障。

Description

一种成熟油菜蜂蜜的鉴别方法
技术领域
本发明属于蜂蜜鉴别领域，具体涉及一种成熟油菜蜂蜜的鉴别方法。
背景技术
蜂蜜是蜜蜂采集植物花蜜或分泌物，与自身分泌物混合后经充分酿造而成的天然甜味物质。气味清香浓郁，味道纯真甜美。
蜂蜜有成熟蜂蜜和非成熟蜂蜜之分。成熟蜂蜜是指经过蜜蜂充分酿造后的蜂蜜。蜜蜂把蜜酿造好后会集中储藏在蜂房中，并用蜂蜡封盖。此时取蜜必须用割蜜刀割除蜜盖，非常费工费事。这样的蜂蜜久放后会结晶(蜂蜜整体的凝结)，无需经过任何加工，并可长期保存而不变质。而非成熟蜂蜜没有经过充分的酿造，酿造时间短，蜂蜜中水分含量多，高分子糖没有完全分解，蜂酶含量低，蜜较稀，其营养价值远不如成熟蜂蜜。
但由于蜂蜜没有成熟时蜜蜂没有把蜜封盖储藏，蜂农取蜜比较省事，所以大都不等到蜜成熟就取出。这样成本低、产量高，加上目前成熟蜂蜜的鉴别繁琐，用户不宜识别。因此，现在市场上的蜂蜜绝大多数不是成熟蜂蜜，而是非成熟蜂蜜经过加工浓缩得到的，严重扰乱市场秩序和损害消费者利益。而油菜蜂蜜占了蜂蜜市场的四成左右，因此本发明旨在提供一种较为方便准确的鉴别成熟油菜蜂蜜的方法。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供一种成熟油菜蜂蜜的鉴别方法。
本发明提供一种成熟油菜蜂蜜的鉴别方法，采用液相色谱-四极杆-飞行时间质谱对待测蜂蜜进行检测，以207.07±0.01质量数准分子离子峰为特征峰，当飞行时间质谱中含有所述特征峰，则判定所述待测蜂蜜为成熟油菜蜂蜜。
采用上述方法可快速准确地鉴别出待测蜂蜜是否为成熟蜂蜜，为控制蜂蜜质量和维持市场秩序提供保障。
进一步地，所述液相色谱-四极杆-飞行时间质谱中液相色谱的检测条件为：
色谱柱为C18色谱柱；流动相A为0.1％甲酸水溶液，流动相B为甲醇；梯度洗脱的程序为：0-1min流动相B的体积分数增加至5％，1-6min流动相B的体积分数由5％增加至55％，6-20min流动相B的体积分数由55％增加到95％，20-26min流动相B的体积分数维持在95％，26-27min流动相B的体积分数下降至5％。
进一步优选地，所述色谱柱为Proshell 120EC-C18色谱柱，其规格为2.1mm×100mm，2.7μm，流动相的流速为0.25mL/min；进样量为2μL；柱温为30±1℃。
进一步地，所述液相色谱-四极杆-飞行时间质谱中四极杆-飞行时间质谱的检测条件为：
ESI，负离子模式；干燥气温度：310～330℃；干燥气流速：7～9L/min；鞘气温度：340～360℃；鞘气流速：10～12L/min；喷雾气压力：38～42psi；毛细管电压：3400～3600V；喷嘴电压：800～1100V。
进一步优选地，所述四极杆-飞行时间质谱的检测条件为：ESI，负离子模式；干燥气温度：320℃；干燥气流速：8L/min；鞘气温度：350℃；鞘气流速：11L/min；喷雾气压力：40psi；毛细管电压：3500V；喷嘴电压：1000V。上述条件下可提高检测的灵敏度和目标离子的响应值。
进一步地，检测前对所述待测蜂蜜进行如下预处理：
(1)将所述待测蜂蜜充分溶于纯净水中，形成蜂蜜溶液；
(2)将步骤(1)所得蜂蜜溶液通过活化后的固相萃取小柱，吸附蜂蜜中的有效成分；
(3)将步骤(2)得到的吸附有有效成分的洗脱柱，先用纯水淋洗两遍，然后用甲醇洗脱并收集洗脱液；
(4)将步骤(3)所得洗脱液进行浓缩，去除甲醇后得固形物，将所得固形物复溶于甲醇，即得进样溶液。
进行上述预处理是为了提取蜂蜜中的目标物(特征峰物质)，同时尽可能得去除蜂蜜中的糖类等杂质，以有利于目标物的检测。
优选地，步骤(1)中所述待测蜂蜜与纯净水的质量体积比为1:2。
优选地，步骤(2)中所述蜂蜜溶液以1mL/min的流速通过所述固相萃取小柱。
本发明的有益效果：
本发明确定了207.07±0.01质量数准分子离子峰可以作为鉴别成熟油菜蜂蜜的特征峰，只有成熟油菜蜂蜜中才含有该特征峰，而非成熟油菜蜂蜜中是没有该特征峰的。以此方法来鉴别成熟油菜蜂蜜既快速又准确，对于成熟油菜蜂蜜的鉴别具有重要意义，为控制蜂蜜质量和维持市场秩序提供保障。
附图说明
图1为非成熟油菜蜂蜜(A)、成熟油菜蜂蜜(B)提取物Q-TOF分析总离子图；
图2为成熟油菜蜂蜜提取物Q-TOF分析特征离子207.0663提取色谱图；
图3为非成熟油菜蜂蜜提取物Q-TOF分析特征离子207.0663提取色谱图。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购买得到的常规产品。
实施例1
本实施例提供一种成熟油菜蜂蜜的鉴别方法，包括如下步骤：
S1、从蜂场采集天然封盖的成熟油菜蜂蜜作为待测样品
S2、待测样品预处理得到蜂蜜提取物
1)称取待测油菜蜂蜜5g，将蜂蜜放入50mL离心管中，加入10mL纯水，超声溶解20min，得蜂蜜的水溶液；
2)将SPE柱安装在固相萃取装置上，分别用5mL甲醇和5mL纯水淋洗，后加入蜂蜜溶液，蜂蜜中的有效物质被吸附在SPE柱填充物上；
3)吸附有蜂蜜有效物质的SPE柱首先经10mL纯水淋洗两遍，然后用8mL甲醇洗脱，收集洗脱液；
4)将所述洗脱液用氮吹仪浓缩至固形物，所述固形物经1mL甲醇超声溶解，移至1.5mL离心管中，用0.2μm滤膜过滤，得进样溶液，即蜂蜜提取物。
S3、样品检测
采用安捷伦高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱(Agilent 1290HPLC-Q-TOF/MS6545)进行检测，数据处理采用Agilent Masshunter工作站。
HPLC条件如下：
色谱柱：Proshell 120EC-C18色谱柱(2.1mm×100mm，2.7μm)；
流速：0.25mL/min；
流动相：0.1％甲酸水溶液(A)，甲醇(B)；
梯度洗脱：0-1min 5％B，1-6min 5％-55％B，6-20min 55％-95％B，20-26min95％B；26-27min，5％B；
进样量2μL；
柱温：30℃。
Q-TOF/MS条件如下：
ESI负离子，气体温度(Gas Temp)：320℃；气体流速(Gas Flow):8L/min；喷雾气压力(Nebulizer)：40psi；毛细管电压：3500V；喷嘴电压：1000V；鞘气温度(Sheath Temp)：350℃；鞘气流速(Sheath Gas Flow)：11L/min；
扫描方式：MS scan全扫描，质量数范围100-1700，参比实时校正。
经过检测，成熟油菜蜂蜜提取物Q-TOF分析总离子图如图1中的B所示，成熟油菜蜂蜜提取物Q-TOF分析特征离子207.0663提取色谱图如图2所示。
实施例2
从蜂场采集未封盖的非成熟油菜蜂蜜作为待测样品，采用如实施1所述的方法对其进行检测，结果非成熟油菜蜂蜜提取物Q-TOF分析总离子图如图1中的A所示，非成熟油菜蜂蜜提取物Q-TOF分析特征离子207.0663提取色谱图如图3所示。
从图2与图3的比较可知，207.07±0.01质量数准分子离子峰可以作为鉴别成熟油菜蜂蜜的特征峰，只有成熟油菜蜂蜜中才含有该特征峰，而非成熟油菜蜂蜜中是没有该特征峰的。经过多次重复试验，结果依然如此。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (8)

1.一种成熟油菜蜂蜜的鉴别方法，其特征在于，采用液相色谱-四极杆-飞行时间质谱对待测蜂蜜进行检测，以207.07±0.01质量数准分子离子峰为特征峰，当飞行时间质谱中含有所述特征峰，则判定所述待测蜂蜜为成熟油菜蜂蜜。
2.根据权利要求1所述的鉴别方法，其特征在于，所述液相色谱-四极杆-飞行时间质谱中液相色谱的检测条件为：
色谱柱为C18色谱柱；流动相A为0.1％甲酸水溶液，流动相B为甲醇；梯度洗脱的程序为：0-1min流动相B的体积分数增加至5％，1-6min流动相B的体积分数由5％增加至55％，6-20min流动相B的体积分数由55％增加到95％，20-26min流动相B的体积分数维持在95％，26-27min流动相B的体积分数下降至5％。
3.根据权利要求2所述的鉴别方法，其特征在于，所述色谱柱为Proshell 120EC-C18色谱柱，其规格为2.1mm×100mm，2.7μm，流动相的流速为0.25mL/min；进样量为2μL；柱温为30±1℃。
4.根据权利要求1所述的鉴别方法，其特征在于，所述液相色谱-四极杆-飞行时间质谱中四极杆-飞行时间质谱的检测条件为：
ESI，负离子模式；干燥气温度：310～330℃；干燥气流速：7～9L/min；鞘气温度：340～360℃；鞘气流速：10～12L/min；喷雾气压力：38～42psi；毛细管电压：3400～3600V；喷嘴电压：800～1100V。
5.根据权利要求4所述的鉴别方法，其特征在于，所述四极杆-飞行时间质谱的检测条件为：
ESI，负离子模式；干燥气温度：320℃；干燥气流速：8L/min；鞘气温度：350℃；鞘气流速：11L/min；喷雾气压力：40psi；毛细管电压：3500V；喷嘴电压：1000V。
6.根据权利要求1～5任一项所述的鉴别方法，其特征在于，检测前对所述待测蜂蜜进行如下预处理：
(1)将所述待测蜂蜜充分溶于纯净水中，形成蜂蜜溶液；
(2)将步骤(1)所得蜂蜜溶液通过活化后的固相萃取小柱，吸附蜂蜜中的有效成分；
(3)将步骤(2)得到的吸附有有效成分的洗脱柱，先用纯水淋洗两遍，然后用甲醇洗脱并收集洗脱液；
(4)将步骤(3)所得洗脱液进行浓缩，去除甲醇后得固形物，将所得固形物复溶于甲醇，即得进样溶液。
7.根据权利要求6所述的鉴别方法，其特征在于，步骤(1)中所述待测蜂蜜与纯净水的质量体积比为1:2。
8.根据权利要求6所述的鉴别方法，其特征在于，步骤(2)中所述蜂蜜溶液以1mL/min的流速通过所述固相萃取小柱。
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