CN111458422B - 一种成熟油菜蜂蜜的鉴别方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种成熟油菜蜂蜜的鉴别方法，采用液相色谱‑四极杆‑飞行时间质谱对待测蜂蜜进行检测，以保留时间8.99±0.10min，285.04±0.01质量数准分子离子峰为特征峰，当检测图谱中含有所述特征峰，判定所述待测蜂蜜为成熟油菜蜂蜜；液相色谱检测条件：C18色谱柱；流动相A为0.1％甲酸水溶液，流动相B为甲醇；0‑1min流动相B体积分数增加至5％，1‑6min流动相B体积分数由5％增加至55％，6‑20min流动相B体积分数由55％增加到95％，20‑26min流动相B体积分数维持在95％，26‑27min流动相B的体积分数下降至5％。本发明的方法鉴别成熟油菜蜂蜜既快速又准确。

Description

一种成熟油菜蜂蜜的鉴别方法
技术领域
本发明属于蜂蜜鉴别领域，具体涉及一种成熟油菜蜂蜜的鉴别方法。
背景技术
蜂蜜由于丰富的活性物质及较高的营养价值，长久以来受到消费者的青睐，却也遭受着蜂蜜掺假行为的威胁。典型的蜂蜜掺假行为是糖浆勾兑，此外还有使用离子交换树脂对蜂蜜脱色以次充好、混淆蜂蜜蜜源种类、在采集期人工饲喂蔗糖及收获未成熟蜂蜜以提高产量等欺诈行为。
收集未成熟蜂蜜来提高蜂蜜产量，来获得更高收益的行为在近年来也变得愈发常见。成熟蜂蜜是指经过蜜蜂充分酿造后的蜂蜜。蜜蜂把蜜酿造好后会集中储藏在蜂房中，并用蜂蜡封盖。此时取蜜必须用割蜜刀割除蜜盖，非常费工费事。这样的蜂蜜久放后会结晶(蜂蜜整体的凝结)，无需经过任何加工，并可长期保存而不变质。而未成熟蜂蜜没有经过充分的酿造，酿造时间短，蜂蜜中水分含量多，高分子糖没有完全分解，蜂酶含量低，蜜较稀，其营养价值远不如成熟蜂蜜。不良商家受利益驱使收集未成熟蜂蜜，并为了使蜂蜜达到标准规定的要求，对蜂蜜进行高温加热脱水处理，在这个过程中蜂蜜的水分、总糖含量等基本指标保持在标准规定的范围内，但是加热过程破坏了蜂蜜中的活性物质，特别是多酚类物质等，同时产生了美拉德反应的产物，严重影响蜂蜜的营养价值。
目前成熟蜂蜜的鉴别繁琐，用户不宜识别。其中油菜蜂蜜是最大宗、稳产的蜜种，全年约占蜂蜜总产量40％以上，而现在市场上的油菜蜂蜜绝大多数是由未成熟蜂蜜经过加工浓缩得到的，严重扰乱市场秩序和损害消费者利益。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供一种成熟油菜蜂蜜的鉴别方法。
本发明提供一种成熟油菜蜂蜜的鉴别方法，采用液相色谱-四极杆-飞行时间质谱对待测蜂蜜进行检测，以保留时间8.99±0.10min，285.04±0.01质量数准分子离子峰为特征峰，当检测图谱中含有所述特征峰，则判定所述待测蜂蜜为成熟油菜蜂蜜；
其中液相色谱的检测条件为：
色谱柱为C18色谱柱；流动相A为0.1％甲酸水溶液，流动相B为甲醇；梯度洗脱的程序为：0-1min流动相B的体积分数增加至5％，1-6min流动相B的体积分数由5％增加至55％，6-20min流动相B的体积分数由55％增加到95％，20-26min流动相B的体积分数维持在95％，26-27min流动相B的体积分数下降至5％。
采用上述方法可快速准确地鉴别出待测蜂蜜是否为成熟油菜蜂蜜，为控制蜂蜜质量和维持市场秩序提供保障。
进一步地，所述色谱柱为Proshell 120EC-C18色谱柱，其规格为2.1mm×100mm，2.7μm，流动相的流速为0.25mL/min；进样量为2μL；柱温为30±1℃。
进一步地，所述液相色谱-四极杆-飞行时间质谱中四极杆-飞行时间质谱的检测条件为：
ESI，负离子模式；干燥气温度：310～330℃；干燥气流速：7～9L/min；鞘气温度：340～360℃；鞘气流速：10～12L/min；喷雾气压力：38～42psi；毛细管电压：3400～3600V；喷嘴电压：800～1100V。
进一步优选地，所述四极杆-飞行时间质谱的检测条件为：ESI，负离子模式；干燥气温度：320℃；干燥气流速：8L/min；鞘气温度：350℃；鞘气流速：11L/min；喷雾气压力：40psi；毛细管电压：3500V；喷嘴电压：1000V。上述条件下可提高检测的灵敏度和目标离子的响应值。
进一步地，检测前对所述待测蜂蜜进行如下预处理：
(1)将所述待测蜂蜜充分溶于纯净水中，形成蜂蜜溶液；
(2)将步骤(1)所得蜂蜜溶液通过活化后的固相萃取小柱，吸附蜂蜜中的有效成分；
(3)将步骤(2)得到的吸附有有效成分的洗脱柱，先用纯水淋洗两遍，然后用甲醇洗脱并收集洗脱液；
(4)将步骤(3)所得洗脱液进行浓缩，去除甲醇后得固形物，将所得固形物复溶于甲醇，即得进样溶液。
进行上述预处理是为了提取蜂蜜中的目标物(特征峰物质)，同时尽可能地去除蜂蜜中的糖类等杂质，以有利于目标物的检测。
优选地，步骤(1)中所述待测蜂蜜与纯净水的质量体积比为1:2。
优选地，步骤(2)中所述蜂蜜溶液以1mL/min的流速通过所述固相萃取小柱。
本发明的有益效果：
本发明确定了保留时间8.99±0.10min，285.04±0.01质量数准分子离子峰可以作为鉴别成熟油菜蜂蜜的特征峰，只有成熟油菜蜂蜜中才含有该特征峰，而未成熟油菜蜂蜜中是没有该特征峰的。以此方法来鉴别成熟油菜蜂蜜既快速又准确，对于成熟油菜蜂蜜的鉴别具有重要意义，为控制蜂蜜质量和维持市场秩序提供保障。
附图说明
图1为未成熟油菜蜂蜜(A)、成熟油菜蜂蜜(B)提取物Q-TOF分析总离子图；
图2为成熟油菜蜂蜜提取物Q-TOF分析特征离子285.0405提取色谱图；
图3为未成熟油菜蜂蜜提取物Q-TOF分析特征离子285.0405提取色谱图。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购买得到的常规产品。
实施例1
本实施例提供一种成熟油菜蜂蜜的鉴别方法，包括如下步骤：
S1、从蜂场采集天然封盖的成熟油菜蜂蜜作为待测样品
S2、待测样品预处理得到蜂蜜提取物
1)称取待测油菜蜂蜜5g，将蜂蜜放入50mL离心管中，加入10mL纯水，超声溶解20min，得蜂蜜的水溶液；
2)将SPE柱安装在固相萃取装置上，分别用5mL甲醇和5mL纯水淋洗，后加入蜂蜜溶液，蜂蜜中的有效物质被吸附在SPE柱填充物上；
3)吸附有蜂蜜有效物质的SPE柱首先经10mL纯水淋洗两遍，然后用8mL甲醇洗脱，收集洗脱液；
4)将所述洗脱液用氮吹仪浓缩至固形物，所述固形物经1mL甲醇超声溶解，移至1.5mL离心管中，用0.2μm滤膜过滤，得进样溶液，即蜂蜜提取物。
S3、样品检测
采用安捷伦高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱(Agilent1290HPLC-Q-TOF/MS6545)进行检测，数据处理采用Agilent Masshunter工作站。
HPLC条件如下：
色谱柱：Proshell 120EC-C18色谱柱(2.1mm×100mm，2.7μm)；
流速：0.25mL/min；
流动相：0.1％甲酸水溶液(A)，甲醇(B)；
梯度洗脱：0-1min 5％B，1-6min 5％-55％B，6-20min 55％-95％B，20-26min95％B；26-27min，5％B；
进样量2μL；
柱温：30℃。
Q-TOF/MS条件如下：
ESI负离子，气体温度(Gas Temp)：320℃；气体流速(Gas Flow):8L/min；喷雾气压力(Nebulizer)：40psi；毛细管电压：3500V；喷嘴电压：1000V；鞘气温度(Sheath Temp)：350℃；鞘气流速(Sheath Gas Flow)：11L/min；
扫描方式：MS scan全扫描，质量数范围100-1700，参比实时校正。
经过检测，成熟油菜蜂蜜提取物Q-TOF分析总离子图如图1中的B所示，成熟油菜蜂蜜提取物Q-TOF分析特征离子285.0405提取色谱图如图2所示。
实施例2
从蜂场采集未封盖的未成熟油菜蜂蜜作为待测样品，采用如实施1所述的方法对其进行检测，结果未成熟油菜蜂蜜提取物Q-TOF分析总离子图如图1中的A所示，未成熟油菜蜂蜜提取物Q-TOF分析特征离子285.0405提取色谱图如图3所示。
从图2与图3的比较可知，保留时间为8.99±0.10min，285.04±0.01质量数准分子离子峰可以作为鉴别成熟油菜蜂蜜的特征峰，只有成熟油菜蜂蜜中才含有该特征峰，而未成熟油菜蜂蜜中是没有该特征峰的。经过多次重复试验，结果依然如此。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (5)

1.一种成熟油菜蜂蜜的鉴别方法，其特征在于，采用液相色谱-四极杆-飞行时间质谱对待测蜂蜜进行检测，以保留时间8.99±0.10min，285.04±0.01质量数准分子离子峰为特征峰，当检测图谱中含有所述特征峰，则判定所述待测蜂蜜为成熟油菜蜂蜜；
其中液相色谱的检测条件为：
色谱柱为Proshell 120 EC-C18色谱柱，其规格为2.1mm×100mm，2.7μm；流动相A为0.1%甲酸水溶液，流动相B为甲醇；流动相的流速为0.25mL/min；进样量为2μL；柱温为30±1℃；梯度洗脱的程序为：0-1min 5% B，1-6min 5%-55%B，6-20min 55%-95%B，20-26min 95%B；26-27 min，5%B；
其中四极杆-飞行时间质谱的检测条件为：
ESI，负离子模式；干燥气温度：310~330℃；干燥气流速：7~9 L/min；鞘气温度：340~360℃；鞘气流速：10~12L/min；喷雾气压力：38~42psi；毛细管电压：3400~3600 V；喷嘴电压：800~1100 V。
2.根据权利要求1所述的鉴别方法，其特征在于，所述四极杆-飞行时间质谱的检测条件为：
ESI，负离子模式；干燥气温度：320℃；干燥气流速：8L/min；鞘气温度：350℃；鞘气流速：11L/min；喷雾气压力：40psi；毛细管电压：3500 V；喷嘴电压：1000V。
3.根据权利要求1或2所述的鉴别方法，其特征在于，检测前对所述待测蜂蜜进行如下预处理：
（1）将所述待测蜂蜜充分溶于纯净水中，形成蜂蜜溶液；
（2）将步骤（1）所得蜂蜜溶液通过活化后的固相萃取小柱，吸附蜂蜜中的有效成分；
（3）将步骤（2）得到的吸附有有效成分的洗脱柱，先用纯水淋洗两遍，然后用甲醇洗脱并收集洗脱液；
（4）将步骤（3）所得洗脱液进行浓缩，去除甲醇后得固形物，将所得固形物复溶于甲醇，即得进样溶液。
4.根据权利要求3所述的鉴别方法，其特征在于，步骤（1）中所述待测蜂蜜与纯净水的质量体积比为1:2。
5.根据权利要求3所述的鉴别方法，其特征在于，步骤（2）中所述蜂蜜溶液以1mL/min的流速通过所述固相萃取小柱。
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