CN115015143A - 一种透皮吸收制剂中卡波姆均聚物的分析方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及药物分析技术领域,具体涉及一种透皮吸收制剂中卡波姆均聚物的分析方法,采用氢氧化钠溶液将卡波姆均聚物的游离羧基解离成羧酸根离子,通过钙离子与羧酸根离子结合生成络合物对卡波姆进行提取、分离;采用火焰原子吸收分光光度分析法对未络合钙含量进行检测,进一步通过络合钙含量计算得到卡波姆均聚物含量。有效实现了透皮吸收制剂中高分子聚合物的定量分析,对利丙双卡因乳膏的质量控制及用药安全具有重要意义,同时为其它含有复杂基质的透皮吸收制剂中卡波姆均聚物的定量分析提供了参考。
Description
技术领域
本发明涉及药物分析技术领域,具体涉及一种高分子聚合物的火焰原子吸收分光光度分析法,用于透皮吸收制剂利丙双卡因乳膏中高分子聚合物卡波姆均聚物的分析检测。
背景技术
利丙双卡因乳膏是一种以酰胺类局部麻醉药利多卡因和丙胺卡因为活性成分的复方外用局部麻醉镇痛制剂,通过阻滞神经冲动产生和传导所需的离子流而稳定神经细胞膜,从而产生局部麻醉效应,临床通过透皮吸收机制用于各类针穿刺和皮肤,粘膜浅层的外科手术麻醉。
卡波姆均聚物,作为透皮吸收制剂的常用基质,是一种由丙烯酸与丙烯基蔗糖或丙烯基季戊四醇交联而成的高分子聚合物,具有良好的凝胶性、粘合性、增稠性、乳化性、助悬性和成膜性,能够使药物制剂具有适宜的涂展性和易涂性,同时对药物的经皮渗透吸收具有显著促进作用。因此,卡波姆均聚物是影响利丙双卡因乳膏生物利用度的关键因素,对其含量进行定量控制至关重要。
目前,现有技术关于卡波姆均聚物单一成分或作为药物制剂中主成分的含量测定多为滴定法,但该法操作繁琐、灵敏度低;而且对于利丙双卡因乳膏这种基质成分比较复杂的透皮吸收制剂,干扰因素较多,无法对药物质量进行有效控制。因此,建立一种专属性强、灵敏度高、准确可靠,且适用于基质成分复杂的透皮吸收制剂中卡波姆均聚物含量的分析方法,是当前此类药物检测技术领域急需解决的问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种专属性强,具有较高灵敏度和准确度的分析方法,用于透皮吸收制剂利丙双卡因乳膏中高分子聚合物卡波姆均聚物的含量测定。采用氢氧化钠溶液将卡波姆均聚物的游离羧基解离成羧酸根离子,通过钙离子与羧酸根离子结合生成络合物对卡波姆进行提取、分离;采用火焰原子吸收分光光度分析法对未络合钙含量进行检测,进一步通过络合钙含量计算得到卡波姆均聚物含量。有效实现了透皮吸收制剂中高分子聚合物的定量分析,对利丙双卡因乳膏的质量控制及用药安全具有重要意义,同时为其它含有复杂基质的透皮吸收制剂中卡波姆均聚物的定量分析提供了参考。
本发明的技术方案如下:
一种透皮吸收制剂中卡波姆均聚物的分析方法,采用氢氧化钠溶液将卡波姆的游离羧基解离成羧酸根离子;其次加入过量的氯化钙溶液,通过钙离子与羧酸根离子结合生成络合物对卡波姆均聚物进行提取、分离;然后采用原子吸收分光光度计测定未络合钙含量,进一步通过络合钙含量计算得到卡波姆均聚物含量。
上述透皮吸收制剂中卡波姆均聚物的分析方法,包括以下步骤:
(1)供试品溶液的制备:透皮吸收制剂加入氢氧化钠溶液,将透皮吸收制剂中卡波姆均聚物的游离羧基解离成羧酸根离子;加入氯化钙溶液,置水浴中加热振摇,得到卡波姆均聚物与钙的络合物,用去离子水转移并定容,离心,滤过,取滤液,作为供试品溶液;
(2)绘制标准曲线溶液;
(3)检测:取供试品溶液和标准曲线溶液,加入增感剂适量,注入原子吸收分光光度计;按标准曲线法以吸光度计算供试品溶液中未络合钙含量,进一步按照下式通过络合钙含量计算透皮吸收制剂中卡波姆含量:
含量(%)=(C氯化钙V氯化钙-C钙V/1000/40)×2×72/W/1000×100
式中:C氯化钙为氯化钙的浓度,mol/L;
V氯化钙为氯化钙加入体积,ml;
C钙为供试品溶液中未络合钙含量,mg/L;
W为供试品称样量,g;
V为供试品的稀释倍数;
40为钙原子摩尔质量数,g/mol;
72为卡波姆均聚物的摩尔质量数,g/mol;
2为卡波姆均聚物羧基与钙离子的反应摩尔比;
所述的透皮吸收制剂为利丙双卡因乳膏。
优选地,步骤(1)中,所述萃取液与透皮吸收制剂的体积质量比为5 ml:1 g;所述氢氧化钠溶液浓度为1mol/L,调节pH值至7.0±0.5;所述氯化钙溶液浓度为0.5mol/L,与透皮吸收制剂的体积质量比为1 ml:5 g。
优选地,步骤(1)中,反应温度25-35℃;反应时间大于等于2h。
优选地,步骤(3)中,所述增感剂为二甲基甲酰胺;所述增感剂与待测溶液的体积比为1:25;步骤(3)中,采用原子分光光度计进行分析检测时,采用火焰原子化器。
进一步地,所述火焰原子化器的燃烧火焰为乙炔-空气火焰,燃气流量为1.0~1.4L/min,雾化器提升时间为3~5s,燃烧器高度为10.0~12.0 mm。
优选地,采用标准曲线法以吸光度计算未络合钙含量,标准曲线的浓度为:6 mg/L、12 mg/L、16 mg/L、20 mg/L、24 mg/L。
钙含量的准确定量是利丙双卡因乳膏中卡波姆均聚物含量测定的关键。首先根据处方中活性成分利多卡因、丙胺卡因以及乳化剂聚氧乙烯氢化蓖麻油的溶解性,采用去离子水作为萃取液,既能够减少供试品溶液中其他离子的存在,又可以降低钙含量测定的物理干扰;其次,在待测溶液中加入二甲基甲酰胺作为增感剂,稀硝酸作为改进剂,既能够保证火焰稳定性、提高测定灵敏度,又可以降低钙含量测定的化学干扰,并且对增感剂的种类、燃气流量以及燃烧器的高度进行了筛选,最终确定了最优的检测条件。
本发明提供了一种火焰原子吸收分光光度分析法,用于透皮吸收制剂中高分子聚合物的分离及准确定量分析。实现了利丙双卡因乳膏中高分子聚合物卡波姆均聚物的有效控制,一定程度上保证了产品的生物利用度以及患者用药安全。
本发明的有益效果在于:
1. 本发明所述提取分离方法操作简单、快速、回收率高,所用萃取液去离子水经济易得、无毒无害,且不干扰利丙双卡因乳膏中乳化剂聚氧乙烯氢化蓖麻油的检测,因此本发明检测方法的供试品溶液可用于检测聚氧乙烯氢化蓖麻油,很大程度上提高了工作效率、节约了工作成本。
2. 本发明所述检测方法采用二甲基甲酰胺作为增感剂,稀硝酸作为改进剂,能够消除复杂基质对于钙含量检测的干扰,专属性强,灵敏度高,可准确有效检出供试品溶液中未络合钙含量,从而保证了卡波姆定量的准确性。方法检测限浓度为41.1 ng/ml,定量限浓度为137 ng/ml。
3. 本发明检测方法准确快捷、稳定性好,卡波姆的平均回收率为97.4%;重复性RSD为4.5%;溶液稳定性RSD为3.5%。
4. 本发明检测方法已成功应用于仿制制剂与原研制剂的处方解析研究中,经检测,原研制剂与仿制制剂中卡波姆均聚物含量基本一致,分别为1.01%,1.03%。
5. 本发明检测方法设计合理,操作简便,检测成本低廉、经济适用。
6. 本发明方法经过方法学验证,结果均符合要求,证明本发明可用于透皮吸收制剂利丙双卡因乳膏中高分子聚合物卡波姆均聚物的分离和定量分析。
附图说明
图1为实施例6中不同钙离子浓度对吸光度的标准曲线图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述,所举实施例是为了更好地对本发明的内容进行说明,而不是对本发明进行限制。实施例中所用实验方法如无特殊说明,均为常规方法;所使用的材料、试剂等如无特殊说明,均可以从商业途径得到。因此熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容进行非本质的改进和调整,仍属于本发明的保护范围。
实施例1 反应温度的考察
1. 样品前处理
参比制剂供试品溶液(卡波姆均聚物含量已知):
取利丙双卡因乳膏10g,精密称定,置250ml锥形瓶中,加去离子水50ml,用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.0±0.5,再精密加入0.5mol/L氯化钙溶液2ml,混匀。同法制备3份,分别于30℃、40℃、50℃水浴,振摇4h,用去离子水转移并定容置100ml量瓶中,离心,滤过,即得。
2. 光谱条件
仪器:原子吸收分光光度计,火焰原子化器,燃烧火焰为乙炔-空气火焰,燃气流量为1.2L/min,雾化器提升时间4秒,燃烧器高度为11.0 mm。
3. 样品测定
精密量取供试品溶液3ml,置50ml量瓶中,精密加入增感剂二甲基甲酰胺2ml,用2%硝酸溶液稀释至刻度,摇匀,注入原子吸收分光光度计。
4. 结果与结论
表1 反应温度考察结果
结论:由表1可知,反应温度在30–50℃之间,卡波姆均聚物含量无明显差异,考虑到环境温度对反应温度的影响,最终选择40℃作为提取温度。
实施例2 反应时间的考察
1. 样品前处理
参比制剂供试品溶液(卡波姆均聚物含量已知):
取利丙双卡因乳膏10g,精密称定,置250ml锥形瓶中,加去离子水50ml,用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.0±0.5,再精密加入0.5mol/L氯化钙溶液2ml,混匀。同法制备3份,于40℃水浴,分别振摇1h、2h、3h,用去离子水转移并定容置100ml量瓶中,离心,滤过,即得。
按照实施例1中设定的光谱条件及检测方法进行测定。
2. 结果与结论
表2 反应时间考察结果
结论:由表2可知,反应时间越长,反应越彻底,卡波姆均聚物含量越大,但反应时间为2小时卡波姆均聚物含量较反应时间为3小时无明显差异,故选择2小时作为最终反应时间。
实施例3 氯化钙溶液与样品体积质量比的考察
1. 样品前处理
参比制剂供试品溶液(卡波姆均聚物含量已知):
取利丙双卡因乳膏10g,精密称定,置250ml锥形瓶中,加去离子水50ml,用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.0±0.5,再分别精密加入0.5mol/L氯化钙溶液1ml、2ml、3ml,混匀。于40℃水浴振摇2h,用去离子水转移并定容置100ml量瓶中,离心,滤过,即得。
按照实施例1中确定的光谱条件及检测方法进行测定。
2. 结果与结论
表3 氯化钙溶液与样品体积质量比考察结果
结论:由表3可知,当体积质量比为1ml:10g时,反应不完全,当体积质量比为2ml:10g时卡波姆均聚物的含量较体积质量比为3ml:10g无明显差异,认为钙离子与卡波姆均聚物的羧基已基本反应完全。此外,因本发明建立的火焰原子吸收分光光度分析法灵敏度非常高,故选择2ml:10g作为最终氯化钙溶液与利丙双卡因乳膏的体积质量比。
实施例4 萃取液与样品体积质量比的考察
1. 样品前处理
参比制剂供试品溶液(卡波姆均聚物含量已知):
取利丙双卡因乳膏10g,精密称定,置250ml锥形瓶中,分别加去离子水25ml、50ml、75ml,用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.0±0.5,再精密加入0.5mol/L氯化钙溶液2ml,混匀。于40℃水浴振摇2h,用去离子水转移并定容置100ml量瓶中,离心,滤过,即得。
按照实施例1中确定的光谱条件及检测方法进行测定。
2. 结果与结论
表4 萃取液与样品体积质量比考察结果
结论:由表4可知,体积质量比在2.5ml:1g~7.5ml:1g之间,卡波姆均聚物含量无明显差异,考虑到萃取液体积对于乳膏分散性的影响,最终选择5ml:1g作为最终萃取液与利丙双卡因乳膏的体积质量比。
实施例5 增感剂的选择
1. 样品前处理
按照确定的步骤进行样品前处理,制备参比制剂供试品溶液。
2. 光谱条件
按照实施例1中确定的光谱条件。
3. 检品检测
精密量取供试品溶液3ml,置50ml量瓶中,选择三种不同的增感剂,精密加入2ml,用2%硝酸溶液稀释至刻度,摇匀,注入原子吸收分光光度计,重复进样6次,计算钙含量的RSD%。
4. 结果与结论
表5 增感剂考察结果
结论:由表5可知,同一份供试品溶液,在不加增感剂的情况下,钙含量测定结果的波动非常大,加入2%氯化锶或2%氧化镧后,波动稍有改善但仍较大,而加入2%二甲基甲酰胺后,钙含量测定结果的稳定性得到了极大的改善。故选择二甲基甲酰胺作为钙含量测定的增感剂。
实施例6 方法学考察
专属性考察:空白溶剂、空白辅料均不干扰检测。
检出限/定量限考察:取试样空白,按照确定的光谱条件进行分析检测,连续测定11次,计算响应值的SD。3SD作为检出限浓度,11SD作为定量限浓度。
线性考察:分别精密量取钙标准溶液(1000 μg/ml)0.3ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml,置50ml量瓶中,精密加入2%二甲基甲酰胺2ml,用2%硝酸溶液稀释至刻度,摇匀,以浓度对吸光度绘制标准曲线。见图1。
重复性考察:按照确定的步骤制备供试品溶液6份,按照确定的光谱条件进行分析检测,计算卡波姆均聚物含量的RSD。
方法准确度考察:按照确定的步骤制备标准曲线溶液。另取样品约10g,精密称定,置250ml锥形瓶中,分别精密加入卡波姆均聚物对照品0.05g(50%限度浓度)、0.1g(100%限度浓度)、0.15g(150%限度浓度),加去离子水50ml,用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.0±0.5,分别精密加入0.5mol/L氯化钙溶液3ml、4ml、5ml,于40℃水浴振摇2h,用去离子水转移并定容至100ml量瓶中,离心,滤过,作为方法准确度供试品溶液,每种浓度制备3份。按照确定的光谱条件分析检测,计算卡波姆均聚物的回收率。
溶液稳定性考察:取“方法准确度”项下100%准确度溶液,室温条件下(25℃)分别于0、4、8、12小时,按照确定的光谱条件进行分析检测,计算卡波姆均聚物含量的RSD。
方法耐用性考察:取“重复性考察”项下供试品溶液,分别改变燃气流速(±0.2 L/min)、雾化器提升时间(±1秒)、燃烧器高度为(±1.0 mm)进行分析检测,其他光谱条件不变。结果表明,燃气流速、雾化器提升时间以及燃烧器高度微调后,钙含量无显著变化,不影响卡波姆均聚物含量测定。
表6 方法学考察结果
实施例7 双唑泰阴道凝胶中卡波姆含量测定
1. 工艺处方为:
2. 供试品溶液制备:
取双唑泰阴道凝胶10g,精密称定,置250ml锥形瓶中,加去离子水50ml,用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.0±0.5,再精密加入0.5mol/L氯化钙溶液2ml,于40℃水浴加热振摇2h,用去离子水转移并定容置100ml量瓶中,离心,滤过,精密量取3ml,置50ml量瓶中,精密加入增感剂2%二甲基甲酰胺2ml,用2%硝酸溶液稀释至刻度,摇匀。同法制备6份。
3. 标准曲线溶液制备:
分别精密量取钙标准溶液(1000 μg/ml)0.3ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml,置50ml量瓶中,精密加入增感剂2%二甲基甲酰胺2ml,用2%硝酸溶液稀释至刻度,摇匀。
4. 样品测定
取标准曲线溶液和供试品溶液,分别注入原子吸收分光光度计。采用火焰原子化器,燃烧火焰为乙炔-空气火焰,燃气流量为1.2L/min,雾化器提升时间为4秒,燃烧器高度为11.0 mm。按标准曲线法以吸光度计算供试品溶液中未络合钙含量,通过络合钙含量计算得到供试品中卡波姆均聚物的含量。
5. 结果与结论
表7 检测结果
结论:由表7可知,6分供试品卡波姆含量检测结果的RSD为1.7%,说明本发明检测方法重复性好,可以应用于双唑泰阴道凝胶中卡波姆均聚物的含量检测。
实施效果例 仿制制剂与原研制剂处方解析对比研究
1. 供试品溶液制备:
取利丙双卡因乳膏10g,精密称定,置250ml锥形瓶中,加去离子水50ml,用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.0±0.5,再精密加入0.5mol/L氯化钙溶液2ml,于40℃水浴加热振摇2h,用去离子水转移并定容置100ml量瓶中,离心,滤过,精密量取3ml,置50ml量瓶中,精密加入增感剂2%二甲基甲酰胺2ml,用2%硝酸溶液稀释至刻度,摇匀。
2. 标准曲线溶液制备:
分别精密量取钙标准溶液(1000 μg/ml)0.3ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml,置50ml量瓶中,精密加入增感剂2%二甲基甲酰胺2ml,用2%硝酸溶液稀释至刻度,摇匀。
3. 样品测定
取标准曲线溶液和供试品溶液,分别注入原子吸收分光光度计。采用火焰原子化器,燃烧火焰为乙炔-空气火焰,燃气流量为1.2L/min,雾化器提升时间为4秒,燃烧器高度为11.0 mm。按标准曲线法以吸光度计算供试品溶液中未络合钙含量,通过络合钙含量计算得到供试品中卡波姆均聚物的含量。
4. 结果与结论
表8 仿制制剂与原研制剂处方解析对比研究结果
结论:由表8可知,采用本发明检测方法,利丙双卡因乳膏仿制制剂中卡波姆均聚物的含量与原研制剂基本一致。
以上实施例仅用以详细说明本发明的技术方案而非限制,本领域的专业技术人员可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围,均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (4)
1.一种透皮吸收制剂中卡波姆均聚物的分析方法,其特征在于,采用氢氧化钠溶液将卡波姆的游离羧基解离成羧酸根离子;其次加入过量的氯化钙溶液,通过钙离子与羧酸根离子结合生成络合物对卡波姆均聚物进行提取、分离;然后采用原子吸收分光光度计测定未络合钙含量,进一步通过络合钙含量计算得到卡波姆均聚物含量;
具体包括以下步骤:
(1)供试品溶液的制备:透皮吸收制剂加入氢氧化钠溶液,将透皮吸收制剂中卡波姆均聚物的游离羧基解离成羧酸根离子;加入氯化钙溶液,置水浴中加热振摇,得到卡波姆均聚物与钙的络合物,用去离子水转移并定容,离心,滤过,取滤液,作为供试品溶液;
(2)绘制标准曲线溶液;
(3)检测:取供试品溶液和标准曲线溶液,加入增感剂适量,注入原子吸收分光光度计;按标准曲线法以吸光度计算供试品溶液中未络合钙含量,进一步按照下式通过络合钙含量计算透皮吸收制剂中卡波姆含量:
含量(%)=(C氯化钙V氯化钙-C钙V/1000/40)×2×72/W/1000×100
式中:C氯化钙为氯化钙的浓度,mol/L;
V氯化钙为氯化钙加入体积,ml;
C钙为供试品溶液中未络合钙含量,mg/L;
W为供试品称样量,g;
V为供试品的稀释倍数;
40为钙原子摩尔质量数,g/mol;
72为卡波姆均聚物的摩尔质量数,g/mol;
2为卡波姆均聚物羧基与钙离子的反应摩尔比;
所述增感剂为二甲基甲酰胺;所述增感剂与待测溶液的体积比为1:25;采用原子分光光度计进行分析检测时,采用火焰原子化器;所述火焰原子化器的燃烧火焰为乙炔-空气火焰,燃气流量为1.0~1.4L/min,雾化器提升时间为3~5s,燃烧器高度为10.0~12.0 mm;
所述的透皮吸收制剂为利丙双卡因乳膏。
2.根据权利要求1所述的透皮吸收制剂中卡波姆均聚物的分析方法,其特征在于,步骤(1)中,所述萃取液与透皮吸收制剂的体积质量比为5 ml:1 g;所述氢氧化钠溶液浓度为1mol/L,调节pH值至7.0±0.5;所述氯化钙溶液浓度为0.5mol/L,与透皮吸收制剂的体积质量比为1 ml:5 g。
3.根据权利要求1所述的透皮吸收制剂中卡波姆均聚物的分析方法,其特征在于,步骤(1)中,反应温度25-35℃;反应时间大于等于2h。
4.根据权利要求1所述的透皮吸收制剂中卡波姆均聚物的分析方法,其特征在于,采用标准曲线法以吸光度计算未络合钙含量,标准曲线的浓度为:6 mg/L、12 mg/L、16 mg/L、20mg/L、24 mg/L。
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