CN101692079A - 一种氟喹诺酮类抗生素的快速检测方法和快速检测试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种药品、保健品或食品中添加氟喹诺酮类抗生素的快速检测方法和快速检测试剂盒，该方法用酸溶液对药品、保健品或食品进行提取处理，将提取液经过滤以及高锰酸钾溶液退色处理后，加入三氯化铁溶液显色，通过显色结果即可进行判断。本发明的试剂盒包含酸溶液、高锰酸钾溶液、三氯化铁溶液、滤头、注射器和阳性对照。本发明的方法其分析成本低、抗共存物质干扰能力强、无需专门设备、灵敏度高、显色结果明显易于观察判断、检验结论正确率高、适用于现场对药品、保健品或食品中是否添加氟喹诺酮类抗生素进行快速检测。根据本发明的快速检测方法，制备快速检测试剂盒，能满足农村地区开展相关的食品药品监督检验的需要。

Description

一种氟喹诺酮类抗生素的快速检测方法和快速检测试剂盒

技术领域

本发明涉及药物检测领域，具体涉及药品、保健品或食品中非法添加抗生素的检测领域，尤其涉及一种药品、保健品或食品中添加氟喹诺酮类抗生素的快速检测方法和快速检测试剂盒。

背景技术

中医药是我国的伟大宝库，具有纯天然、毒副作用少甚至无毒副作用的巨大优势，中成药及其保健食品是由中草药直接加工而成，方便病人服用，在规定的剂量内中药毒副作用少。但是，近年来，有些不法企业或药商利用中成药、保健食品目前缺乏严格的质量标准控制的空子，在中成药、保健食品中暗中擅自掺入化学药成分，虽然具有暂时速效、高效及特效的作用，但也产生了不可预知的严重不良反应，而且因为中药自身的复杂性，所以这种掺有化学药成分的中成药、保健食品其中药成分与处方无异，导致有关部门在市场上对其进行抽检，按照现行标准检验均符合规定，具有很好欺骗性和隐蔽性，因此要加快中医药的现代化进程，除了要不断提高中药的质量标准，还必须加强对中成药的质量监督管理，特别是对非法添加的药品及保健食品中建立完善、快速、准确的鉴别方法，利用安全快速检测新方法不断促进中医药现代化的健康发展。

现在市面上流通的某些治疗前列腺疾病的中成药及保健食品，均声称起效快，能根治前列腺疾病，夸大宣传疗效，高价销售，经过一系列的市场调查，怀疑是这一类中成药及保健食品中非法添加了氟喹诺酮类抗生素。通过查阅文献资料及调查表明，目前针对治疗前列腺疾病的中成药及保健食品中非法添加化学药的检测方法研究还无相关的文献报道，无正式检验标准颁布。

氟喹诺酮类药物是20世纪80年代之后发展并得到广泛应用的一类人工合成抗生素类药物，它们是在第一代萘啶酸和第二代吡哌酸的基础上引入氟原子开发出的第三代喹诺酮药物，具有良好的组织渗透性。氟喹诺酮类药物对革兰阳性和阴性杆菌、葡萄球菌和肺类球菌均有强的抗菌活性，主要用于尿路感染、淋病、呼吸道感染、皮肤感染、胃肠道感染、伤寒和败血症及慢性阻塞性呼吸道疾病急性发作的治疗，其中一些药物还有抗结核作用。由于它们具有抗菌谱广、抗菌活性强，低毒、高效、副作用少，安全价廉，多数品种可以口服等许多优点，因此在临床中得到了广泛应用，常用的氟喹诺酮类药物有诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、左氧氟沙星、加替沙星、洛美沙星等。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种分析成本低、专属性强、灵敏度高、抗共存物质干扰能力强、试验现象明显、检验结论正确率高、操作简便且不需要使用贵重分析仪器，可实现现场对药品、保健品或食品中添加氟喹诺酮类抗生素进行快速检测的方法。

本发明的另一个目的在于提供一种利用上述方法对药品、保健品或食品中添加氟喹诺酮类抗生素进行快速检测的试剂盒。

本发明的上述目的是通过如下方案予以实现的：

本发明的快速检测方法是利用氟喹诺酮类抗生素能与三氯化铁(Fe⁺³)反应生成红色的络合物，从而对药品、保健品或食品中是否含有氟喹诺酮类抗生素进行快速检测，具体包括如下步骤：

(1)酸提取：

向待测样品(药品、保健品或食品)中加入酸溶液，取上层提取液，进行过滤处理，收集滤液；如滤液颜色干扰显色，加入高锰酸钾溶液处理、退色；

(2)显色反应。

向上述滤液中加入三氯化铁溶液进行显色反应，根据显色结果即可判断出待测样品中是否添加有氟喹诺酮类抗生素。

上述步骤(1)中，采用酸溶液将待测样品(药品、保健品或食品)中的待检测物质提取出来，所述酸溶液可选择任意一种本领域技术人员常用的酸溶液，如乙酸、磷酸、盐酸、硫酸、硝酸或盐酸乙醇等，优选盐酸或硫酸。

上述步骤(1)中，酸溶液的浓度为1～20体积％，优选2体积％。

上述步骤(1)中，待测样品的检测量为1粒(片)即可，片剂、丸剂在检测前需要先研匀。

上述步骤(1)中，对上层提取液进行过滤处理时，可采用本领域技术人员常用的过滤方法，如滤膜过滤、滤纸过滤、离心过滤等；若遇到较难过滤的凝胶剂，可不用过滤。

上述步骤(1)中，过滤所得滤液，如果颜色较深干扰显色，可向滤液中加入高锰酸钾溶液至3～5秒内不退色，或使滤液呈淡黄色，以除去颜色干扰；高锰酸钾的作用主要是氧化滤液中的干扰物质，使溶液退色；高锰酸钾的浓度选择0.01～0.4mol/L，优选0.04mol/L。

上述步骤(1)中，若滴加了高锰酸钾后滤液的颜色还是比较深，则可以加少量前述的酸溶液将过滤液稍稀释，然后再滴加高锰酸钾溶液至3～5秒内不退色。

上述步骤(2)中，向步骤(1)中经过处理的滤液中滴加三氯化铁溶液进行显色反应，三氯化铁溶液的浓度可选择1质量％～20质量％，优选浓度为9质量％。

上述步骤(2)中，若显色反应的颜色为红色，则说明待测样品中可能添加有氟喹诺酮类抗生素，若显色反应的颜色为淡黄色或棕黄色或其他(只要不是红色)，则说明待测样品中肯定没有添加氟喹诺酮类抗生素；本发明的显色反应可以作为药品、保健品、食品中是否非法添加有氟喹诺酮类抗生素的初筛程序，将所有经显色反应鉴别出的样品再进行薄层色谱或高效液相色谱等操作，即可进一步确认待测样品中是否添加有氟喹诺酮类抗生素。

本发明的快速检测方法，在进行操作时可同时进行一个阳性样品对照组，最后显色反应结果判断时，只要和阳性显色结果一样则为阳性样品，若和阳性显色结果不一样则为阴性样品。

本发明还提供一种基于上述快速检测方法的快速检测试剂盒，该试剂盒包含酸溶液、高锰酸钾溶液、三氯化铁溶液、滤头、注射器和阳性对照；该试剂盒采用酸溶液对待测样品进行提取后，将提取液经注射器和滤头过滤后，采用高锰酸钾溶液进行退色处理，然后用三氯化铁溶液进行显色反应，对比阳性对照的显色结果，即可对待测样品中是否含有氟喹诺酮类抗生素进行判断。

上述快速检测试剂盒中，还含有反应瓶和滴管。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

1.本发明的方法其分析成本低、不需要专门设备、专属性强、灵敏度高，适用于现场对药品、保健品、食品中添加氟喹诺酮类抗生素进行快速检测，克服了现有技术存在的缺点，满足药品、保健品、食品监督检验的需要；

2.本发明的方法对作为提取剂的酸溶液进行了一系列的试验研究，结果发现盐酸和硫酸作为提取剂，提取效果最好，同时本发明还对高锰酸钾溶液的浓度进行了优化处理，从而解决了提取液中干扰色的问题，使得显色判断清晰、准确；

3.本发明的方法具有抗共存物质干扰能力强、显色结果明显易于观察判断、检验结论正确率高、操作简便快速，无需对检测人员进行培训，所需检测仪器简单等特点；

4.本发明的方法可以从大批量的待建样品中，将可能非法添加有氟喹诺酮类抗生素的样品初筛出来，然后再结合后续的色谱鉴定即可准确地获得非法添加有氟喹诺酮类抗生素的药品或保健食品，因此本发明的方法使得整个检测成本大大降低，而且提高了检测效率；

5.根据本发明的方法制备的快速检测试剂盒，将能满足农村地区开展相关的食品监督检验的需要。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步地描述，但具体实施例并不对本发明做任何限定。

实施例1

本实施例中对金列保雄健胶囊中添加氟喹诺酮类抗生素进行快速检测，具体包括如下步骤：

(1)酸提取：

取金列保雄健胶囊一粒，研匀后加2ml 2体积％盐酸溶液，振摇提取30秒，放置，取上层提取液，滤膜过滤，收集滤液；由于滤液颜色较深，显棕黄色，所以向该滤液中滴加0.04mol/l高锰酸钾溶液，边滴加边摇匀，直到滤液呈淡黄色即可；

(2)显色反应

向上述处理好的滤液中滴加1～2滴9质量％三氯化铁溶液进行显色反应，显色反应时间为立即显色，观察显色结果。

本实施例中当向滤液中滴加了三氯化铁溶液后，溶液立刻呈现红色，由此说明本实施例的金列保雄健胶囊样品中可能含有氟喹诺酮类抗生素，对该样品继续进行高效液相色谱法确认，结果证实本实施例的金列保雄健胶囊样品中确实含有氟喹诺酮类抗生素。

实施例2

本实施例中对前列回春片中添加氟喹诺酮类抗生素进行快速检测，具体包括如下步骤：

(1)酸提取：

取前列回春片一片，研匀后加2ml 2体积％盐酸溶液，振摇提取30秒，放置，取上层提取液，滤膜过滤，收集滤液；由于滤液颜色较深，显棕黄色，所以向该滤液中滴加0.04mol/l高锰酸钾溶液，边滴加边摇匀，直到滤液呈淡黄色即可；

(2)显色反应

向上述处理好的滤液中滴加1～2滴9质量％三氯化铁溶液进行显色反应，显色反应时间为立即显色，观察显色结果。

本实施例中当向滤液中滴加了三氯化铁溶液后，溶液立刻呈现淡棕黄色，由此说明本实施例的前列回春片样品中肯定不含有氟喹诺酮类抗生素，对该样品继续进行高效液相色谱法确认，结果证实本实施例的前列回春片样品中确实不含有氟喹诺酮类抗生素。

实施例3专一性检测

本实施例选择阿莫西林、罗红霉素、头孢氨苄、青霉素V钾、克霉唑素、麦白霉素、四环素、土霉素、盐酸异丙嗪、盐酸氯丙嗪、诺氟沙星和氧氟沙星这些抗生素药品，采用实施例1所述的快速检测方法，对该方法的专一性进行检测。

各抗生素的显色结果如下：

1.阿莫西林、罗红霉素、头孢氨苄、青霉素V钾、克霉唑素和麦白霉素的显色结果均为微黄色，无干扰，为阴性结果；

2.四环素、土霉素的显色结果为棕褐色，存在干扰，但通过稀释后，和阳性管比较即可排除干扰，为阴性结果；

3.盐酸异丙嗪、盐酸氯丙嗪显桃红色干扰，但滴加高锰酸钾溶液颜色即退；

4诺氟沙星和氧氟沙星滴加高锰酸钾溶液红色颜色不会退，可区分、排除干扰。

由上述结果可以看出，本发明的快速检测方法可以专一性地检测氟喹诺酮类抗生素。

本实施例所用检测药品均为市售。

实施例4灵敏度试验

采用实施例1的检测方法，对左氧氟沙星、诺氟沙星、氧氟沙星和环丙沙星这四个常用的氟喹诺酮类抗生素进行灵敏度试验。

各取100mg左氧氟沙星、诺氟沙星、氧氟沙星和环丙沙星对照品，加2％盐酸溶液10ml，制成10mg/ml的溶液，然后将上述溶液分别稀释成10、5、2.5、1mg/ml的溶液后，取各浓度的溶液1ml，分别加入1滴9质量％三氯化铁溶液。

实验结果：左氧氟沙星的显色最低检出含量为5mg/ml，诺氟沙星、氧氟沙星和环丙沙星的显色最低检出含量均为1mg/ml。

实施例5酸溶液浓度的优化

分别配制一系列浓度的盐酸溶液和硫酸溶液，系列浓度为1体积％、2体积％、5％体积、10体积％和20体积％，各取左氧氟沙星、诺氟沙星、氧氟沙星和环丙沙星对照品10mg 5份，分别加入2ml上述系列酸溶液中，再加入1滴9质量％三氯化铁溶液。

实验结果：左氧氟沙星、诺氟沙星、氧氟沙星和环丙沙星在不同浓度的酸溶液中反应结果均一致，均立即显红色，无明显差异，由此说明酸溶液的浓度从1体积％～20体积％均可作为提取剂实现本发明，考虑到酸溶液浓度越高，腐蚀性越强，优选2体积％的酸溶液。

实施例6酸溶液的选择

根据实施例5的试验结果，本实施例选择2体积％乙酸、2体积％磷酸、2体积％盐酸乙醇溶液、2体积％硝酸、2体积％硫酸溶液和2体积％盐酸溶液，进行快速检测。

结果表明：

1.当酸溶液为2体积％乙酸溶液时，阳性结果显色反应为红色，阴性结果显色反应为淡黄色或棕黄色或其他(非红色)，但是阴性样品产生絮状沉淀；

2.当酸溶液为2体积％磷酸时，阳性样品反应速度较慢，且显色结果颜色比较浅；

3.当酸溶液为2％体积盐酸乙醇溶液时，所得提取液颜色较深，需要加入的高锰酸钾较多，且阳性样品结果颜色较浅；

4.当酸溶液为2体积％硫酸溶液时，显色速度快，阳性结果显色反应为红色，阴性结果显色反应为淡黄色或棕黄色或其他(非红色)，显色结果易判断；

5.当酸溶液为2体积％盐酸溶液时，显色速度快，阳性结果显色反应为红色，阴性结果显色反应为淡黄色或棕黄色或其他(非红色)，显色结果易判断；

6.当酸溶液为2体积％硝酸溶液时，显色速度快，阳性结果显色反应为红色，阴性结果显色反应为淡黄色或棕黄色或其他(非红色)，显色结果易判断；

根据上述实验结果，乙酸、磷酸、盐酸、硫酸、硝酸或盐酸乙醇均可作为提取剂实现本发明，其中优选硫酸和盐酸。

实施例7氧化剂的选择

本实施例选择常用的氧化剂双氧水和高锰酸钾溶液，进行快速检测反应。

实验结果：采用双氧水对酸溶液提取液进行退色处理，退色能力比高锰酸钾溶液差，而且需要加入的量也比高锰酸钾溶液多，且双氧水本身为无色的，因此很难判断双氧水的加入量会不会过量，而高锰酸钾溶液本身是有颜色的，因此利于判断加入量，此外，双氧水容易产生气泡，也不利于对结果的判断。

根据上述实验结果，本发明的快速检测方法选择高锰酸钾溶液对提取液进行退色处理。

实施例8高锰酸钾溶液浓度的优化

配制一系列浓度的高锰酸钾溶液(0.01mol/L、0.02mol/L、0.04mol/L、0.08mol/L和0.4mol/L)进行快速检测反应。

实验结果：0.01mol/L～0.4mol/L饱和溶液的高锰酸钾溶液均可作为氧化剂实现本发明，其中优选0.04mol/L的高锰酸钾溶液。

实施例9三氯化铁溶液浓度的优化

配制了20质量％、13.5质量％、9.0质量％、4.5质量％、1质量％五种不同浓度的三氯化铁溶液，取2mg/ml诺氟沙星盐酸溶液1ml，分别滴加上述五种浓度的三氯化铁溶液1滴，溶液均立即变成红棕色，无明显差异。

实验结果：1质量％～20质量％的三氯化铁溶液均可作为显色剂实现本发明，其中优选9质量％的三氯化铁溶液。

实施例10快速检测试剂盒

本实施例的快速检测试剂盒内备有A、B、C溶液各1瓶；反应瓶10个；试管10支；滤头20个；注射器10支；2ml一次性滴管10支；1ml一次性滴管10支；使用说明书一份；所述A溶液为2体积％盐酸溶液；所述B溶液为0.04mol/l高锰酸钾溶液；所述C溶液为9质量％三氯化铁溶液。

待测样品为市售的治疗前列腺疾病的中成药及保健食品一共31个厂家40批样品，其中有片剂(9)、胶囊剂(26)、丸剂(2)、颗粒剂(1)、软胶囊剂(1)、凝胶剂(1)共6种剂型的样品。

采用本实施例试剂盒对待测的40个样品进行快速检测，共筛查出一批阳性样品，接着用薄层色谱法、高效液相色谱法(DAD检测器)对检出的阳性样品进行了确认，证实了检出的阳性样品中确实非法添加了诺氟沙星、氧氟沙星两种抗生素药品。

同时对另外快速检测方法检出为阴性的样品也进行薄层色谱法、高效液相色谱法检测，结果发现阴性样品中均没有非法添加氟喹诺酮类抗生素。

采用本发明的快速检测试剂盒和快速检测方法，对40批样品进行筛选，准确率为100％，未发现有假阳性和假阴性的样品。

Claims (10)

1.一种药品、保健品或食品中添加氟喹诺酮类抗生素的快速检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

(1)酸提取：

向药品、保健品或食品中加入酸溶液，取上层提取液，进行过滤处理，收集滤液；

(2)显色反应：

向上述滤液中加入三氯化铁溶液进行显色反应，根据显色结果即可判断出药品、保健品或食品中是否添加有氟喹诺酮类抗生素。

2.根据权利要求1所述快速检测方法，其特征在于步骤(1)中所述酸溶液为乙酸、磷酸、盐酸、硫酸、硝酸或盐酸乙醇。

3.根据权利要求2所述快速检测方法，其特征在于所述酸溶液为盐酸或硫酸。

4.根据权利要求1所述快速检测方法，其特征在于步骤(1)中所述酸溶液的浓度为1～20体积％。

5.根据权利要求4所述快速检测方法，其特征在于所述酸溶液的浓度为2体积％。

6.根据权利要求1所述快速检测方法，其特征在于所述步骤(1)中，收集滤液后先采用高锰酸钾溶液对滤液进行退色处理。

7.根据权利要求6所述快速检测方法，其特征在于所述高锰酸钾溶液的浓度为0.01～0.4mol/L。

8.根据权利要求7所述快速检测方法，其特征在于所述高锰酸钾溶液的浓度为0.04mol/L。

9.根据权利要求1所述快速检测方法，其特征在于所述三氯化铁溶液的浓度为1质量％～20质量％。

10.一种利用权利要求1所述方法对药品、保健品或食品中添加氟喹诺酮类抗生素进行快速检测的快速检测试剂盒，其特征在于该试剂盒包含酸溶液、三氯化铁溶液、高锰酸钾溶液、滤头、注射器和阳性对照。