CN114903839A - 一种包含乳双歧杆菌发酵产物的面部精华 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种面部精华，包括乳双歧杆菌发酵产物，所述的乳双歧杆菌保藏号为CGMCC NO.24307。本发明提供的面部精华具有抗衰、锁水、修护、舒缓的功效。经检测，本发明的面部精华中具有显著免疫学活性的生物活性物质，具有透皮吸收快、生物利用度高等优势，可广泛用于各类护肤品、化妆品、日化及相关产品。

Description

一种包含乳双歧杆菌发酵产物的面部精华

技术领域

本发明属于化妆品生产技术领域，具体涉及一种包含乳双歧杆菌发酵产物的面部精华。

背景技术

现有常规的护肤品绝大部分成分为各种化学制剂，其一功效上比较单一，其二易造成皮肤易敏感。当前护肤品的发展多以天然为核心，旨在提供更为温和但同时具有较好疗效的产品。

益生菌及其发酵制品多应用于调节消化系统菌群平衡。益生菌产生的有益代谢物经研究也可用于日用品中。研究表明益生菌代谢物含有丰富的活性物质，可解决多种皮肤问题。

中国专利202010540484.4公开了一种利用枯草芽孢杆菌nk1发酵制备活性发酵液的方法及用发酵液和烟酰胺作为主要功效成分的美白修复面膜。枯草芽孢杆菌nk1培养基中加入牛樟芝提取物，可以进一步增强美白作用，并且大幅度增加其修复活性，和烟酰胺具有协同提高枯草芽孢杆菌nk1发酵上清液功效的作用。

中国专利201810015415.4中公开了一种益生菌组合物，使用该益生菌组合物制备的护肤精华液以及面膜，并公开了所述护肤精华液的制备方法。所述益生菌组合物包括植物乳杆菌C2，植物乳杆菌LP3和植物乳杆菌LP4。所述益生菌组合物是通过生物发酵技术获得的含有改善面部皮肤的有益微生物和活性因子的菌剂，从而减少在皮肤上化学性药物的使用，所述护肤精华液以及面膜由所述益生菌组合物制备，富含活性益生因子，具有补水、抗氧化、美白和紧肤的作用，能够实现有效提升皮肤水润、亮丽和紧肤状态的效果。

中国专利202110228770.1中公开了一种具有护肤功能的发酵代谢物及其制备方法与应用。该产品由植物乳杆菌、干酪乳杆菌、乳双歧杆菌、动物双歧杆菌和鼠李糖乳杆菌为发酵菌株，以蔗糖、海藻粉、大豆粉和乳粉为发酵原料，混合发酵制备获得。该产品含有丙二酰染料木苷、染料木黄酮、透明质酸、鸢尾酮、 Preaustinoid A和黄豆苷元等特有发酵代谢产物有助于护肤功效的提升；发酵产生的酒石酸、苹果酸、琥珀酸、水杨酸、香草酸和苯丙酸等有机酸能够控制病原菌及腐败微生物菌群，有利于维持皮肤菌群平衡，并起到天然防腐的作用。通过功效测试，表明其具有去皱，增加皮肤弹性，抗炎症和修护皮肤屏障等功效，且效果显著。但其设计的菌种较为复杂，制备方法要求较高。

对于乳双歧杆菌在护肤品中的应用，有待进一步开发。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种包含乳双歧杆菌发酵产物的面部精华。通过制备乳双歧杆菌的发酵产物，并与其他成分复配，提供了一种具有抗衰、锁水、修护、舒缓的功效的面部精华。

一方面，本发明提供了一种面部精华。

具体地，所述的面部精华中包括乳双歧杆菌发酵产物，所述的乳双歧杆菌（Bifidobacteriumlactis）保藏号为CGMCC NO.24307，于2022年1月14日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心。

优选地，所述的面部精华中包括以下组分：

水	80-95％
		银耳提取物	1.00-2.00％
甘油	0.50-1.50％
		水解胶原	1.00-2.00％
乳双歧杆菌发酵产物	2.00-3.00％
		芽孢杆菌/谷氨酸发酵产物滤液	0.50-1.50％
1,2-戊二醇	0.10-1.00％
		1,2-己二醇	0.10-1.00％
对羟基苯乙酮	0.10-1.00％

进一步优选地，所述的面部精华中包括以下组分：

更进一步地，所述的面部精华中包括以下组分：

水	91％
		银耳提取物	1.50％
甘油	1.00％
		水解胶原	1.50％
乳双歧杆菌发酵产物	2.50％
		芽孢杆菌/谷氨酸发酵产物滤液	1.00％
1,2-戊二醇	0.50％
		1,2-己二醇	0.50％
对羟基苯乙酮	0.50％

所述的乳双歧杆菌发酵产物的制备方法为：将乳双歧杆菌发酵后采用碟式离心机去除菌体、悬浮颗粒等固态杂质，继而微滤去除可能导致发酵液变性的可溶性杂质，得发酵上清液。

所述的乳双歧杆菌的发酵条件为37±1℃，厌氧，培养72±3h。

另一方面，本发明提供了一种面部精华的制备方法。

所述的制备方法中包括乳双歧杆菌发酵产物的制备，所述的乳双歧杆菌保藏号为CGMCC NO.24307，于2022年1月14日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心。

所述的乳双歧杆菌的培养条件为：37±1℃，厌氧，培养72±3h。

所述的乳双歧杆菌的培养基为莫匹罗星锂盐和半胱氨酸盐酸盐改良MRS琼脂培养基。

所述的制备方法中还包括，按照前述的配方进行复配。

本发明中，水解胶原至少具有以下功效：

1、小分子胶原参与纤维细胞的信号传导，大大促进纤维母细胞的分裂与增殖，提升细胞分化的速度与数量，最终实现新生细胞取代老细胞这一更替过程；

2、通过靶向结合，有效牢固并稳定三螺旋结构，胶原蛋白只有在三螺旋结构下才可以承托肌肤，令肌肤持久水嫩有光泽；

3、拥有大量的氨基酸小序列对纤维母细胞具有更强的粘附性，可有效修复纤维母细胞的损伤，从而提升其活性。

本发明中，芽孢杆菌/谷氨酸发酵产物滤液至少具有以下功效：

1、富含优越的水溶性、1000倍以上的吸附性和生物可降解性，易交联形成后期拥有卓越性能的水凝胶，完全适用于所有的皮肤状况，并提供优于HA(透明质酸)和胶原的持久的保湿效果，具有良好的强度，透明度和弹性。

本发明中，银耳(TREMELLA FUCIFORMIS)提取物至少具有以下功效：

1、蕴含银耳多糖，具备强大的保湿锁水功效，可强化皮肤屏障；

2、蕴含大量维生素族群，可赋予肌肤重组营养；

3、蕴含麦角甾醇，是激活巨噬细胞的主要物质，激活巨噬细胞后，巨噬细胞拥有强大的吞噬能力，能够对皮肤下炎症细胞以及皮肤老化细胞进行吞食，促进皮肤的修复；

4、富含岩藻糖，岩藻糖属于小分子保湿剂，与膜蛋白有很好的亲和性，可增加皮肤对营养成分的吸收，增加细胞的水化功能，有良好的保湿性能；

5、丰富天然植物性胶质，强化肌肤表层细胞。

本发明中，乳双歧杆菌发酵产物至少具有以下功效：

1、产物中包含氨基酸、小肽、多糖、B族维生素等有益护肤的成分，可加强角质层代谢，去除细胞自由基，抑制脂质的过氧化，激活机体修复性能，抑制细胞酪氨酸酶活性，具有修复、美白、抗氧化的功能；

2、乳酸菌发酵产物使各种介质的比例恢复平衡，利于免疫系统的调控，缓解皮肤炎症，具有抗菌、抗炎的作用；

3、产物中富含乳酸和乳酸钠，是人体天然保湿因子(NMF)中主要的水溶性酸类，吸湿性强，有效增强角质层的水合作用，防止皮肤水分流失；乳酸和乳酸钠组成缓冲溶液，对皮肤具有良好的亲和性，可调节皮肤酸碱值。

本发明的有益效果：

本发明提供的面部精华具有抗衰、锁水、修护、舒缓的功效。经检测，本发明的面部精华中具有显著免疫学活性的生物活性物质，采用最先进基因工程、生物发酵等技术，高效提取核心功能活性物质，与多种功能性佐剂科学复配而成，可刺激各种表皮和上皮细胞增殖、分化和生存，促进角质形成细胞的生长和迁移，及成纤维细胞和胚胎细胞的增殖等，继而显著增强皮肤弹性、除皱、延缓衰老，具有明显的疤痕、创伤修复功能，还原无损肌肤，并可形成360°护盾，全面增强皮肤耐受性等，具有透皮吸收快、生物利用度高等优势，可广泛用于各类护肤品、化妆品、日化及相关产品。

附图说明

图1为面部精华活性成分分析Western Blotting结果图。

具体实施方式

下面结合具体实施例，对本发明作进一步详细的阐述，下述实施例不用于限制本发明，仅用于说明本发明。以下实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1乳双歧杆菌发酵产物

乳双歧杆菌CGMCC NO.24307进行发酵，发酵培养基选择莫匹罗星锂盐和半胱氨酸盐酸盐改良MRS琼脂培养基(青岛海博生物)，发酵条件为37℃，厌氧，培养72h，并对发酵产物进行检测。

结果表明：产物中包含氨基酸(14.26mg/g)、小肽(3.29mg/g)、多糖 (13.24mg/g)、B族维生素(0.15mg/g)等有益护肤的成分，可加强角质层代谢，去除细胞自由基，抑制脂质的过氧化，激活机体修复性能，抑制细胞酪氨酸酶活性，具有修复、美白、抗氧化的功能。

产物中富含乳酸(12.74mg/g)和乳酸钠(9.86mg/g)，是人体天然保湿因子(NMF)中主要的水溶性酸类，吸湿性强，有效增强角质层的水合作用，防止皮肤水分流失；乳酸和乳酸钠组成缓冲溶液，对皮肤具有良好的亲和性，可调节皮肤酸碱值。

在化妆品领域，乳双歧杆菌发酵产物也可以归为乳酸杆菌发酵产物大类。

实施例2一种护肤品活性成分的制备方法

对实施例1中的发酵产物进行处理制备乳双歧杆菌发酵产物活性成分，具体步骤如下：发酵结束后，采用碟式离心机去除菌体、悬浮颗粒等固态杂质，继而微滤去除可能导致发酵液变性的可溶性杂质等，得发酵上清液。

对产物进行检测结果如下：氨基酸(13.83mg/g)、小肽(3.15mg/g)、多糖(12.38mg/g)、B族维生素(0.15mg/g)、乳酸(11.84mg/g)和乳酸钠(9.23mg/g)。

各类活性成分检测分析方法如下：

(1)氨基酸

氨基酸标准曲线的绘制：氨基酸称取0.5g，用水溶解后，定容至100mL配成5g/L的氨基酸标准溶液，HPLC测定不同浓度的氨基酸标准溶液对应的峰面积，绘制标准曲线。发酵上清液中氨基酸含量测定：吸取发酵上清液2μL，使用特定衍生缓冲液稀释及定容，采用HPLC测定方法，根据氨基酸的保留时间和紫外吸收谱进行定性分析；外标峰面积法进行氨基酸定量测定，计算氨基酸的含量。

(2)小肽

定量取样，采用三氯乙酸TCA沉淀法，离心分离高分子蛋白，得到小肽和氨基酸的混合液体，再用凯氏定氮法测定总氮含量，得到小肽和氨基酸混合液中的氮含量，折算成绝对量，除以取样样品量，乘以6.25，即可得到发酵上清液中的小肽和氨基酸总含量，扣除氨基酸的含量，即为小肽的含量。

(3)多糖

蒽酮-硫酸比色法，葡萄糖标准曲线的绘制：定量称取葡萄糖标准品，配制浓度为0.5mg/mL的对照品溶液，并稀释成不同浓度，按照葡萄糖：0.1％蒽酮- 硫酸溶液体积比1:4的比例，混匀，煮沸10min，迅速放冷，黑暗中房放置10min，显色后采用紫外分光光度法测定其在特定波下的吸光度，绘制标准曲线。定量量取发酵上清液上清液，经过浓缩干燥等后处理，得粗多糖。定量称取粗多糖，配制成特定浓度的溶液，照标准曲线制备项下的方法，显色后采用紫外分光光度法测定其吸光度，计算含量。

(4)B族维生素

B族维生素标准曲线的绘制：定量称取并溶解定容，然后稀释至不同的浓度，采用HPLC测定不同浓度的维生素标准溶液对应的峰面积，绘制标准曲线。发酵上清液中B族维生素含量测定：定量吸取发酵上清液，并溶解定容，采用HPLC 测定方法，根据不同维生素的保留时间和紫外吸收谱进行定性分析；外标峰面积法进行维生素定量测定，计算B族维生素的含量。

(5)乳酸

L-乳酸标准曲线的绘制：定量量取L-乳酸标准品，配制成一定浓度对照品母液，并稀释成不同浓度，采用HPLC测定在210nm下的峰面积，绘制标准曲线。发酵上清液中乳酸含量测定：定量吸取发酵上清液，稀释并定容，采用HPLC 测定方法，根据乳酸的保留时间和紫外吸收谱进行定性分析；外标峰面积法进行定量测定，计算乳酸的含量。

(6)乳酸钠

乳酸钠标准曲线的绘制：定量称取乳酸钠标准品100mg，稀释定容至100mL，摇匀，配制对照品母液，并稀释成不同浓度，采用HPLC测定峰面积，绘制标准曲线。发酵上清液中乳酸钠含量测定：定量吸取发酵上清液，稀释并定容，采用 HPLC测定方法，根据乳酸钠的保留时间和紫外吸收谱进行定性分析；外标峰面积法进行定量测定，计算乳酸钠的含量。

实施例3一种生物发酵面部精华

包括以下重量份的成分：

银耳提取物购自西安优硕生物技术有限公司；

水解胶原购自武汉百瑞森生物医药有限公司；

芽孢杆菌/谷氨酸发酵产物滤液为以谷氨酸为原料，通过芽孢杆菌常规条件发酵，然后过滤，得到发酵产物过滤液，本实施例中选用的芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌CGMCC1.3358。

实施例4一种生物发酵面部精华

包括以下重量份的成分：

水	93％
		银耳提取物	1.30％
甘油	0.80％
		水解胶原	1.30％
乳双歧杆菌发酵产物	2.10％
		芽孢杆菌/谷氨酸发酵产物滤液	0.80％
1,2-戊二醇	0.30％
		1,2-己二醇	0.30％
对羟基苯乙酮	0.30％

实施例5包含乳双歧杆菌发酵产物的面部精华生物活性物质检测

将实施例3-4中提供的面部精华送至深圳大学医学部药学院进行活性成分检测，检测步骤如下：

收集公司委托样品，提取、浓缩，BCA定量，准备进行监测分析。

选择Anti-EGF antibody[EPR19899](ab206423)为主要抗体，以WesternBlotting检测样品中活性成分，结果显示：样品含有具有显著免疫学活性的生物活性物质。如下图所示，参见第4、5道，1道为对照品，2、3道为市售其他产品。

结论，面部精华富含活性成分。

实施例6包含乳双歧杆菌发酵产物的面部精华活性成分透皮能力检测

将实施例1中提供的面部精华送至深圳大学医学部药学院进行活性物质透皮能力检测，检测以《化学品皮肤吸收体外试验方法》(GB/T 27818-2011)为参考，选用Franz扩散池试验方案对样品活性物质透皮能力进行检测分析。结果显示：样品0.5h的渗透水平达到23％，1h渗透水平为37％，2h渗透水平为46％，接近峰值水平，4、12h渗透水平稳定48％。

结论：包含乳双歧杆菌发酵产物的面部精华活性成分具有显著透皮能力。

实施例7乳双歧杆菌发酵产物抗氧化能力检测

称取DPPH 4mg溶于100mL无水乙醇。

取不同稀释倍数(蒸馏水稀释)的实施例1制备的乳双歧杆菌发酵产物各 1mL，加入3mL DPPH溶液，室温避光反应，6h后测定OD₅₁₇(三组平行计算平均值，记为A值)。对照组1：1mL样品+3mL无水乙醇(三组平行计算平均值，测OD₅₁₇记为B值)；对照组2：1mL水+3mL DPPH溶液(三组平行计算平均值测OD₅₁₇记为C值)；DPPH自由基清除率计算公式如下：

C-(A-B)/C×100％；

最终测得本申请乳双歧杆菌发酵产物DPPH自由基清除率为42.7％。

实施例8面部精华人群实验

征集80名志愿者(女性，年龄25-35)，分为2组，每组40人，使用不包括乳双歧杆菌发酵产物的面部精华的为对照组，其他为实验组，实验季节冬季，初次检测时间早上8：00，检测部位脸部，分别在使用面部精华前和使用面部精华后0h、6h、12h、24h进行皮肤含水量测试，对测试结果进行平均数计算，结果如下：

对比例

乳双歧杆菌发酵产物对比：

Claims (10)

1.一种面部精华，其特征在于，包括乳双歧杆菌发酵产物，所述的乳双歧杆菌保藏号为CGMCC NO.24307。

2.根据权利要求1所述的面部精华，其特征在于，包括以下组分：

水 80-95％ 银耳提取物 1.00-2.00％ 甘油 0.50-1.50％ 水解胶原 1.00-2.00％ 乳双歧杆菌发酵产物 2.00-3.00％ 芽孢杆菌/谷氨酸发酵产物滤液 0.50-1.50％ 1,2-戊二醇 0.10-1.00％ 1,2-己二醇 0.10-1.00％ 对羟基苯乙酮 0.10-1.00％

。

3.根据权利要求2所述的面部精华，其特征在于，包括以下组分：

水 90-95％ 银耳提取物 1.30-1.80％ 甘油 0.80-1.20％ 水解胶原 1.30-1.80％ 乳双歧杆菌发酵产物 2.30-2.80％ 芽孢杆菌/谷氨酸发酵产物滤液 0.80-1.30％ 1,2-戊二醇 0.30-0.80％ 1,2-己二醇 0.30-0.80％ 对羟基苯乙酮 0.30-0.80％

。

4.根据权利要求3所述的面部精华，其特征在于，包括以下组分：

5.根据权利要求1所述的面部精华，其特征在于，所述的乳双歧杆菌发酵产物的制备方法为：将乳双歧杆菌发酵后采用碟式离心机去除菌体、悬浮颗粒等固态杂质，继而微滤去除可能导致发酵液变性的可溶性杂质，得发酵上清液。

6.根据权利要求2所述的面部精华，其特征在于，所述的乳双歧杆菌的发酵条件为37±1℃，厌氧，培养72±3h。

7.一种面部精华的制备方法，其特征在于，包括乳双歧杆菌发酵产物的制备，所述的乳双歧杆菌保藏号为CGMCC NO.24307。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述的乳双歧杆菌的培养条件为：37±1℃，厌氧，培养72±3h。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述的乳双歧杆菌的培养基为莫匹罗星锂盐和半胱氨酸盐酸盐改良MRS琼脂培养基。

10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，包括按照权利要求2-4任一项所述的面部精华的配方进行复配。

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