CN110151672B

CN110151672B - 一种植物乳杆菌gmnl-6组合物用于皮肤保养的用途

Info

Publication number: CN110151672B
Application number: CN201810147410.7A
Authority: CN
Inventors: 陈奕兴; 蔡宛桦; 周佳璇; 姜盈如
Original assignee: Genmont Biotech Inc
Current assignee: Genmont Biotech Inc
Priority date: 2018-02-12
Filing date: 2018-02-12
Publication date: 2022-04-05
Anticipated expiration: 2038-02-12
Also published as: CN110151672A

Abstract

本发明提供一种益生菌用于制备皮肤保养组合物的用途，其中该益生菌包含植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum GMNL‑6)，其寄存编号为BCRC 910777或CCTCC M 2017765。所述组合物可为外用擦药、外用医药品、外用保养品或化妆品，并可以通过促进胶原蛋白分泌或神经酰胺合成酶的表达，达到改善皮肤状况或美学外观的功效。

Description

一种植物乳杆菌GMNL-6组合物用于皮肤保养的用途

【技术领域】

本发明涉及皮肤保养技术领域，具体涉及乳杆菌分离株。

【背景技术】

目前市面上用于皮肤的益生菌产品相当有限，在参考文献中指出的益生菌影响皮肤表征的途径有二：一为直接将益生菌作用于患部，可影响局部免疫反应或直接抑制皮肤有害菌的生长；二为经由口服益生菌至肠道后，影响肠道菌群及免疫反应，进而影响远程皮肤的变化(Jeong JH et al,2016)，举例来说，口服益生菌在改善或预防异位性皮肤炎(Atopic Dermatitis AD)的应用已非常广泛。在背景研究(Baquerizo Nole KL et al,2014,Fuchs-Tarlovsky V et al,2016,Jeong JH et al,2016)中也发现，某些乳酸菌利用其产生的醋酸、乳酸、丁二酮、鞘磷脂经磷脂酶、玻尿酸或其表面物质等，可以达到促进皮肤健康的效果。整体来说，皮肤用益生菌主要有几方面的功效：例如:改善痤疮(Kim J,Ko Yet al,2010)、抗紫外线UV线伤害的能力(Ra J et al,2014)、促进伤口愈合的效果(PeralMC et al,2009)、抗黑色素形成的效果(Chan CF et al,2014)。

过去利用益生菌改善皮肤健康的临床人体试验的文献不多，且大多以口服为主，益生菌添加于皮肤外用剂型的研究相当少，其中一篇以比菲德氏龙根菌菌体萃取物调制而成的乳液，擦拭29天后，对于敏感性肌肤在保湿方面具有明显的效果(N＝66人，女性)(Gueniche A et al,2010)，但是仍然缺乏乳酸杆菌的应用的相关临床报导。

皮肤中胶原蛋白的主要功用是提供肌肤完整的水分补充、增加皮肤的弹性与表面的光泽。神经酰胺则是一种天然存在于体内皮肤角质层的细胞间隙间的脂质，是皮肤角质层脂质中最重要且比例最高的成分。主要功能为紧密接连维持角质层的脂质完整性，能防止水分的蒸发，并能抵御外来病菌与伤害。本发明主要利用体外模式筛选具有刺激人类皮肤纤维母细胞分泌及产生胶原蛋白及合成神经酰胺的能力的益生菌，并进一步利用皮肤检测仪器证实益生菌乳液对皮肤的健康促进效果。

【发明内容】

由于过去益生菌在皮肤保养领域的研究并不广泛，因此亟待寻找能有效改善皮肤的益生菌。由于胶原蛋白与神经酰胺已广泛使用于皮肤状态的探讨及作用机制上，故本实验利用胶原蛋白与神经酰胺探讨益生菌对皮肤保养改善的影响，已找出可能具有改善皮肤状态能力的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum GMNL-6))；进一步以VISIA高阶数字肤质检测仪检测受测者的皮肤参数。

本发明的目的在于提供一种益生菌用于皮肤保养组合物的用途，其中该益生菌包含植物乳杆菌((Lactobacillus plantarum GMNL-6)，其寄存编号为BCRC 910777或CCTCCM2017765。

为达成前述的发明目的，其中该植物乳杆菌GMNL-6是死菌体。

为达成前述发明目的，其中该死菌体是将含菌液体经高温高压处理而得到的。

为达成前述发明目的，其中该组合物为外用擦药、外用医药品、外用保养品或化妆品。

为达成前述发明目的，其中该组合物可进一步包含药学或化妆品学上可接受的载剂。

为达成前述发明目的，其中该外用保养品是化妆水、乳液、护肤霜、保湿液、护唇膏、美容液面膜或洗面奶。

为达成前述发明目的，其中该皮肤保养是指改善皮肤状况或美学外观。

为达成前述发明目的，其中该改善皮肤状况是通过促进胶原蛋白分泌或神经酰胺合成酶的表达来达到的。

为达成前述发明目的，其中该皮肤保养是指降低皮肤斑点、毛孔、皱纹、紫外线斑或紫质之数量。

为达成前述发明目的，其中该改善人类皮肤状况或美学外观，包含：(1)治疗、减少、和/或预防细纹或皱纹；(2)缩小皮肤毛孔大小；(3)改善皮肤厚度、饱满度、和/或紧致度；(4)改善皮肤柔软性和/或柔软度；(5)改善肤色、光泽和/或清透性；(6)增加原胶原蛋白和/或胶原蛋白产生；(7)改善弹性蛋白的维持及重塑；(8)改善皮肤纹理和/或促进重整；(9)改善皮肤障壁修复和/或功能；(10))改善皮肤轮廓外观；(11)恢复皮肤光泽和/或亮度；(12)补充皮肤中之必需营养物和/或组分；(13)改善因更年期而变差之皮肤外观；(14)改善皮肤保湿性；(15)增加皮肤弹性和/或弹力；(16)治疗、减少、和/或预防皮肤松弛；(17)减少色素斑点；(18)治疗、减少、和/或预防粉刺或痤疮；或其任何组合。

为达成前述发明目的，其中该组合物中每公克包含1×10⁷个～1×10¹¹个GMNL-6死菌体。

为达成前述发明目的，其中该组合物中每公克优选的死菌体个数为1×10⁸个～1×10¹⁰个。

【图式简单说明】

图1A胶原蛋白的蛋白质表现。

图1B神经酰胺合成酶的基因表现。

图2以VISIA高阶数字肤质检测仪分析受测者斑点数量。

图3以VISIA高阶数字肤质检测仪分析受测者毛孔数量。

图4以VISIA高阶数字肤质检测仪分析受测者皱纹数量。

图5以VISIA高阶数字肤质检测仪分析受测者紫外线斑数量。

图6以VISIA高阶数字肤质检测仪分析受测者紫质数量。

【实施方式】

本说明书中所述的所有技术性及科学术语，除非另外有所定义，皆为该所属领域技术人员可共同了解的意义。

本发明的目的在于提供一种益生菌用于皮肤保养组合物的用途，其中该益生菌包含植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum GMNL-6)，其寄存编号为BCRC 910777或CCTCCM2017765。此外，本发明还涉及该组合物或该乳杆菌用于皮肤保养的新颖用途，其作用机制为促进胶原蛋白分泌及神经酰胺的表达，以达到皮肤保养的功效。

其中该乳杆菌分离株也包含其继代培养的后代，或突变株，但仍具有与本发明相同的菌种特性、基因体(genomic)、或用途(用于抑制肠病毒)。

本文所述的组合物包括，但不限于：食品、饮品、健康食品、动物饮水添加物、动物饲料添加物、动物用及人类用医疗组合物、食品添加物、饮料添加物等适用本发明的应用形式。

术语"药学或化妆品上可接受的载剂"是指物质或组合物必须与调配物的其他成份兼容，并且对患者无害。

术语"萃取物(Cell Lysate)"可以是从特定的萃取步骤或一系列的萃取步骤获得的单一萃取物，或者萃取物也可以是从若干独立萃取步骤获得的若干萃取物的组合。这些经组合的萃取物因此也涵盖于术语(萃取物)内。

其中该药学或化妆品上可接受的载剂可包含一种或多种选自于下列的试剂：溶剂(solvent)、乳化剂(emulsifier)、悬浮剂(suspending agent)、分解剂(decomposer)、粘合剂(binding agent)、赋形剂(excipient)、稳定剂(stabilizing agent)、螯合剂(chelating agent)、稀释剂(diluent)、胶凝剂(gelling agent)、防腐剂(preservative)、润滑剂(lubricant)、表面活性剂(surfactant)，及其他类似或适用于本发明的载剂。

上述组合物中，也可以根据需要适宜地添加一种或多种以上制剂领域内通常使用的溶解补助剂、缓冲剂、保存剂、着色剂、香料、风味剂等。

此外，本发明所发现的新颖菌种，也可以与其他已知菌种一并被包含于同一组成物中。

本发明所提供之组合物及其用于皮肤保养的用途，其使用剂型，可视需求适宜调整，并未特别限定，优选为皮肤外用剂型。

本发明通过下面的实施例予以示范阐明，但本发明不受下述实施例的限制。本发明所用的药物、生物材料都是市售的易于取得的，下列取得的方式仅为示例性的。

本发明通过下面的实施例予以示范阐明，但本发明不受下述实施例的限制。

从菌种库中挑选具有皮肤保养功效的植物乳杆菌，该乳杆菌的寄存编号、寄存日期及菌株名称，如表一所示。

表一、本发明的乳杆菌在中国台湾新竹食品工业发展研究所生物资源保存及研究中心(BCRC)与中国大陆的寄存编号

实施例1 GMNL-6可促进胶原蛋白分泌及神经酰胺合成酶的表达

1-1死菌制备步骤:

冻管接种植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum；GMNL-6)1ml MRS broth，并在37℃的有氧环境下静置培养20小时。次日，取15μl隔夜培养菌液至1.5ml MRS broth(1％二次活化)，在37℃有氧环境下静置培养20小时，以PBS清洗一次，以OD600nm推估菌数，并将菌数调整为1×10¹⁰cells/ml，并进行高温高压灭菌121℃，15分钟后备用。

1-2人类皮肤纤维母细胞(human skin fibroblast；Hs68)细胞模式:

分析细胞培养液的胶原蛋白(collagen)步骤:将Hs68cells种至6well plate(2×10⁵cells/well)，隔夜后以PBS清洗两次，并换成serum free的培养液，并加入1×10⁹cells/ml的GMNL-6死菌菌液，处理24小时后，收集上清液。

将上清液稀释10倍后，利用Procollagen type I C-peptide EIA kit(TaKaRa,#MK101)进行分析。

分析细胞内神经酰胺合成酶基因(Serine palmitoyltransferase smallsubunit A,SPTSSA)的步骤:

Hs68cells种至6well plate(2×10⁵/well)，隔夜后以PBS清洗两次，并换成serumfree的培养液，并加入1×10⁹cells/ml的死菌菌液，处理24小时后，收集细胞萃取物，抽取RNA后转成cDNA，并进行神经酰胺合成酶基因(SPTSSA)及持家基因(β-actin)的定量PCR分析。

实验结果:

先前利用人类皮肤纤维细胞体外模式筛选平台，从数十只乳酸杆菌菌株中筛选出一只具有皮肤保养功效的植物乳杆菌(L.plantarum)GMNL-6，该植物乳杆菌具有促进胶原蛋白分泌的能力。更进一步地，在相同模式中，实验结果(图1)均发现GMNL-6同时具有促进胶原蛋白分泌的能力及刺激细胞内神经酰胺合成酶(SPTSSA)产生的能力，神经酰胺合成酶为体内神经酰胺合成过程中必须的必须分子，其上升也代表体内神经酰胺制造增加，神经酰胺在肌肤美容上具有强化肌肤保湿、增加肌肤防御、抑制酪胺酸酶(Tyrosinase)的生成。

实施例2:植物乳杆菌GMNL-6益生菌乳液具有改善全脸肤质的功用

2-1实验步骤：

1.试验人数：五名女性(30～40岁)。

2.评估地点:嘉南药理大学机能性化妆品开发与评估研究中心。

3.试验前，先使用洗面奶将脸部清洗干净，通过VISIA高阶数字肤质检测仪进行全脸肤质诊断，并纪录数值(day0)

4.试验期间每日早、晚洗脸后涂抹测试样品(除乳液外，左右脸其他保养条件一致)：

-左半脸使用:对照组乳液(基质)

-右半脸使用:益生菌乳液(基质+GMNL-6死菌)

5.使用四周后进行全脸肤质诊断(day 28)，先使用洗面奶将脸部清洗干净，再进行全脸肤质诊断，并纪录数值。

2-2乳液成份与益生菌浓度：

1.乳液全成分(基质)：Water、Polyglyceryl-3/Methyl glucose/Distearate、GlycerylTrioctanoin、Macadamia Ternifolia Seed Oil、Propanediol、PEG/PPG/Polybutylene Glycol-8/5/3 Glycerin、Cetyl Alcohol、MyristylMyristate、Glycerin、GlycosylTrehalose/Hydrogenated Starch Hydrolysate、Rice Ferment Filtrate(Sake)、Saccharomyces/Daylily Flower Ferment Filtrate、Bis-PEG/PPG-20/15 PEG/PPG-20/5Dimethicone/Methoxy PEG/PPG-25/4 DimethiconeCaprylic/CapricTriglyceride、Sodium Polyacrylate、Phenoxyethanol、o-Cymen-5-ol、Xanthan Gum、Potassium Hydroxide。

2.乳液中GMNL-6浓度:1×10⁹cells/g乳液

2-3评估方式：

1.利用VISIA高阶数字肤质检测仪进行肤质检测，通过1200万像素的相机和不同的三种光源(普通光、UV光、偏光)对面部进行高清晰度拍照，然后利用软件分析脸部固定范围的肤质，可以准确的得到斑点、毛孔、皱纹、纹理、紫斑及紫质等皮肤参数，以评估皮肤基底层潜在的状况。进而了解肌肤存在问题，以此评估使用乳液前后的数据变化。其测试结果根据性别、年龄得到的一个合格正常范围数据的对比，由此可作为产品的有效性评估。

2.经由全脸肤质诊断仪所测得的肤质参数(包含:斑点、毛孔、皱纹、紫斑及紫质)，来评估每个人自己的左脸(对照组乳液)与右脸(益生菌乳液)在使用前(day0)与使用后(day 28)的分值差异。分值变化(％)的计算公式如下所示:

※，百分比代表使用后与使用前的分值差异程度，并经由自己的左、右两边脸比较来判断是否有改善性，分值变化降低代表皮肤状况变好

实验结果:

五位受试者(NO.1～5)分别使用对照组乳液(左脸)及益生菌乳液(右脸)，28天后，经由VISIA高阶数字肤质检测仪，分析五位受测者皮肤参数，包含:斑点(图2)、毛孔(图3)、皱纹(图4)、紫斑(图5)及紫质(图6)，经每个人与自己左脸比较，评估使用益生菌乳液组可得到较好的肤质改善数据，每评估项至少都有三人以上获得改善，尤其是斑点及毛孔，更高达80％～100％的人是有明显改善的。因此整体而言，益生菌具有改善皮肤肤质的效果，尤其是在淡化斑点及缩小毛孔方面，功效最为显著。

皮肤中的胶原蛋白及神经酰胺随着年龄增长或不良生活习惯的影响，会出现逐渐流失的情形，因此补充及恢复皮肤中胶原蛋白及神经酰胺含量，对皮肤保养、防皱、抗UV伤害、抗衰老相当重要。本专利评估经由体外试验发现，植物乳杆菌GMNL-6可同时促进胶原蛋白分泌及神经酰胺合成酶的表达，因此GMNL-6具有皮肤方面的特殊效果。在人体临床实验中，经VISIA高阶数字肤质检测仪观察，植物乳杆菌GMNL-6益生菌乳液具有改善全脸肤质的功用，包含:斑点、毛孔、皱纹、紫斑及紫质，每项至少都有三人以上获得改善，尤其是淡化斑点及缩小毛孔，更是高达80％～100％的人是有效的；此外紫质的降低，表示痤疮杆菌的生长受到抑制，对于改善青春痘及粉刺应有所帮助。益生菌于皮肤人体临床的应用多是口服，而直接将乳酸杆菌死菌添加于乳液的临床试验研究较少，且利用同时比较自己左右脸的评估方式，可以减少其他保养品干扰及其他个体差异的变量。且五名GMNL-6益生菌乳液使用者使用四周后，并无出现任何过敏及不适症状。因此，利用植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum；GMNL-6)应用于皮肤保养品是相当安全而且无副作用的，应可作为未来促进皮肤健康及防止肤质老化的更佳选择。

【符号说明】

【生物材料寄存】

中国台湾新竹食品工业发展研究所生物资源保存及研究中心、寄存日期为2017年4月14日、寄存编号为BCRC 910777。

中国大陆、寄存日期为2017年11月3日、寄存编号为CCTCC M 2017765。

【序列表】(请换页单独记载)

Claims

1.一种益生菌用于制备皮肤保养组合物的用途，其特征在于，所述益生菌包含植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)GMNL-6，其寄存编号为BCRC 910777或CCTCC M2017765；所述皮肤保养是指改善皮肤状况或美学外观，所述改善皮肤状况是指促进胶原蛋白分泌或神经酰胺合成酶的表达，所述改善美学外观是指降低皮肤斑点、毛孔、皱纹或紫质的数量。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述植物乳杆菌GMNL-6是死菌体。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述死菌体是将含菌液体经高温高压处理而得到的。

4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组合物为外用医药品、或外用保养品。

5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组合物进一步包含药学或化妆品学上可接受的载剂。

6.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述外用保养品是化妆水、乳液、护肤霜、护唇膏、美容液面膜或洗面奶。

7.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述改善人类皮肤状况或美学外观，包含：(1)治疗、减少、和/或预防细纹；(2)缩小皮肤毛孔大小；(3)改善皮肤厚度、饱满度、和/或紧致度；(4)改善皮肤柔软性和/或柔软度；(5)改善肤色、光泽和/或清透性；(6)增加原胶原蛋白和/或胶原蛋白产生；(7)改善弹性蛋白的维持及重塑；(8)改善皮肤纹理和/或促进重整；(9)改善皮肤障壁修复和/或功能；(10)改善皮肤轮廓外观；(11)恢复皮肤光泽和/或亮度；(12)补充皮肤中的必需营养物和/或组分；(13)改善因更年期而变差的皮肤外观；(14)改善皮肤保湿性；(15)增加皮肤弹性和/或弹力；(16)治疗、减少、和/或预防皮肤松弛；(17)减少色素斑点；(18)治疗、减少、和/或预防痤疮；或其任何组合。

8.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组合物中每公克包含1×10⁷个～1×10¹¹个GMNL-6死菌体。

9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述组合物中每公克的死菌体个数为1×10⁸个～1×10¹⁰个。