CN114891109A - 一种用于曲妥珠单链抗体及与其序列同源的单链抗体的变复性方法 - Google Patents
一种用于曲妥珠单链抗体及与其序列同源的单链抗体的变复性方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114891109A CN114891109A CN202210550377.9A CN202210550377A CN114891109A CN 114891109 A CN114891109 A CN 114891109A CN 202210550377 A CN202210550377 A CN 202210550377A CN 114891109 A CN114891109 A CN 114891109A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- protein
- chain antibody
- renaturation
- solution
- ser
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000004153 renaturation Methods 0.000 title claims abstract description 103
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 47
- 229960000575 trastuzumab Drugs 0.000 title claims abstract description 31
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 111
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 110
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 claims abstract description 46
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 40
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 40
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 17
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 claims abstract description 13
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims abstract description 8
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 33
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 30
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 claims description 29
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 29
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 28
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 22
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 20
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 16
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 15
- 239000003398 denaturant Substances 0.000 claims description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 13
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 claims description 11
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 10
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 claims description 10
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 8
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 8
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 claims description 8
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 7
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 108010053070 Glutathione Disulfide Proteins 0.000 claims description 6
- YPZRWBKMTBYPTK-BJDJZHNGSA-N glutathione disulfide Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CSSC[C@@H](C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)CC[C@H](N)C(O)=O YPZRWBKMTBYPTK-BJDJZHNGSA-N 0.000 claims description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 6
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 5
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 5
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 5
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 5
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 5
- 239000012467 final product Substances 0.000 abstract description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 6
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 6
- 230000001064 anti-interferon Effects 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 5
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 5
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 5
- XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N glycyl-glycyl-glycine Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 3
- QOIKZODVIPOPDD-AVGNSLFASA-N Tyr-Cys-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O QOIKZODVIPOPDD-AVGNSLFASA-N 0.000 description 3
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 3
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 3
- 108010069020 alanyl-prolyl-glycine Proteins 0.000 description 3
- 108010086434 alanyl-seryl-glycine Proteins 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 3
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 3
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 3
- 108010067216 glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 3
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 3
- 239000012474 protein marker Substances 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N Ala-Ala-Ser Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- BUDNAJYVCUHLSV-ZLUOBGJFSA-N Ala-Asp-Ser Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BUDNAJYVCUHLSV-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- AOHKLEBWKMKITA-IHRRRGAJSA-N Arg-Phe-Ser Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N AOHKLEBWKMKITA-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- UGXYFDQFLVCDFC-CIUDSAMLSA-N Asn-Ser-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O UGXYFDQFLVCDFC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- JBDLMLZNDRLDIX-HJGDQZAQSA-N Asn-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O JBDLMLZNDRLDIX-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 2
- SZQCDCKIGWQAQN-FXQIFTODSA-N Cys-Arg-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O SZQCDCKIGWQAQN-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- OYTPNWYZORARHL-XHNCKOQMSA-N Gln-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N OYTPNWYZORARHL-XHNCKOQMSA-N 0.000 description 2
- FQCILXROGNOZON-YUMQZZPRSA-N Gln-Pro-Gly Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O FQCILXROGNOZON-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- MIWJDJAMMKHUAR-ZVZYQTTQSA-N Glu-Trp-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N MIWJDJAMMKHUAR-ZVZYQTTQSA-N 0.000 description 2
- BYYNJRSNDARRBX-YFKPBYRVSA-N Gly-Gln-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O BYYNJRSNDARRBX-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- PDUHNKAFQXQNLH-ZETCQYMHSA-N Gly-Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)NCC(O)=O PDUHNKAFQXQNLH-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 2
- WNZOCXUOGVYYBJ-CDMKHQONSA-N Gly-Phe-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)NC(=O)CN)O WNZOCXUOGVYYBJ-CDMKHQONSA-N 0.000 description 2
- ZZWUYQXMIFTIIY-WEDXCCLWSA-N Gly-Thr-Leu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ZZWUYQXMIFTIIY-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 2
- PMGDADKJMCOXHX-UHFFFAOYSA-N L-Arginyl-L-glutamin-acetat Natural products NC(=N)NCCCC(N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(O)=O PMGDADKJMCOXHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LHSGPCFBGJHPCY-UHFFFAOYSA-N L-leucine-L-tyrosine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 LHSGPCFBGJHPCY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FEHQLKKBVJHSEC-SZMVWBNQSA-N Leu-Glu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 FEHQLKKBVJHSEC-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 2
- KIZIOFNVSOSKJI-CIUDSAMLSA-N Leu-Ser-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N KIZIOFNVSOSKJI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- AIMGJYMCTAABEN-GVXVVHGQSA-N Leu-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O AIMGJYMCTAABEN-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 2
- AIRZWUMAHCDDHR-KKUMJFAQSA-N Lys-Leu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O AIRZWUMAHCDDHR-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- MCIXMYKSPQUMJG-SRVKXCTJSA-N Phe-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O MCIXMYKSPQUMJG-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- FGWUALWGCZJQDJ-URLPEUOOSA-N Phe-Thr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O FGWUALWGCZJQDJ-URLPEUOOSA-N 0.000 description 2
- QEDMOZUJTGEIBF-FXQIFTODSA-N Ser-Arg-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O QEDMOZUJTGEIBF-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- YMTLKLXDFCSCNX-BYPYZUCNSA-N Ser-Gly-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O YMTLKLXDFCSCNX-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- QYSFWUIXDFJUDW-DCAQKATOSA-N Ser-Leu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O QYSFWUIXDFJUDW-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- FQPDRTDDEZXCEC-SVSWQMSJSA-N Thr-Ile-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FQPDRTDDEZXCEC-SVSWQMSJSA-N 0.000 description 2
- YOOAQCZYZHGUAZ-KATARQTJSA-N Thr-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YOOAQCZYZHGUAZ-KATARQTJSA-N 0.000 description 2
- MNYNCKZAEIAONY-XGEHTFHBSA-N Thr-Val-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O MNYNCKZAEIAONY-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 2
- SVGAWGVHFIYAEE-JSGCOSHPSA-N Trp-Gly-Gln Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 SVGAWGVHFIYAEE-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 2
- MBLJBGZWLHTJBH-SZMVWBNQSA-N Trp-Val-Arg Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)=CNC2=C1 MBLJBGZWLHTJBH-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 2
- QUILOGWWLXMSAT-IHRRRGAJSA-N Tyr-Gln-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O QUILOGWWLXMSAT-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- NKUGCYDFQKFVOJ-JYJNAYRXSA-N Tyr-Leu-Gln Chemical compound NC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 NKUGCYDFQKFVOJ-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 2
- DIOSYUIWOQCXNR-ONGXEEELSA-N Val-Lys-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O DIOSYUIWOQCXNR-ONGXEEELSA-N 0.000 description 2
- 108010008685 alanyl-glutamyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 2
- 108010008355 arginyl-glutamine Proteins 0.000 description 2
- 108010069205 aspartyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 2
- 108010078144 glutaminyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 108010037850 glycylvaline Proteins 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 108010012058 leucyltyrosine Proteins 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 108010020755 prolyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 108010077112 prolyl-proline Proteins 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 108010038745 tryptophylglycine Proteins 0.000 description 2
- 108010044292 tryptophyltyrosine Proteins 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SKHCUBQVZJHOFM-NAKRPEOUSA-N Ala-Arg-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O SKHCUBQVZJHOFM-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- BTYTYHBSJKQBQA-GCJQMDKQSA-N Ala-Asp-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N)O BTYTYHBSJKQBQA-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 1
- KUDREHRZRIVKHS-UWJYBYFXSA-N Ala-Asp-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O KUDREHRZRIVKHS-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- KXEVYGKATAMXJJ-ACZMJKKPSA-N Ala-Glu-Asp Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O KXEVYGKATAMXJJ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- LXAARTARZJJCMB-CIQUZCHMSA-N Ala-Ile-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LXAARTARZJJCMB-CIQUZCHMSA-N 0.000 description 1
- REAQAWSENITKJL-DDWPSWQVSA-N Ala-Met-Asp-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O REAQAWSENITKJL-DDWPSWQVSA-N 0.000 description 1
- YCRAFFCYWOUEOF-DLOVCJGASA-N Ala-Phe-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CC1=CC=CC=C1 YCRAFFCYWOUEOF-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- RTZCUEHYUQZIDE-WHFBIAKZSA-N Ala-Ser-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O RTZCUEHYUQZIDE-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- HOVPGJUNRLMIOZ-CIUDSAMLSA-N Ala-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](C)N HOVPGJUNRLMIOZ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- ARHJJAAWNWOACN-FXQIFTODSA-N Ala-Ser-Val Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O ARHJJAAWNWOACN-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- CREYEAPXISDKSB-FQPOAREZSA-N Ala-Thr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O CREYEAPXISDKSB-FQPOAREZSA-N 0.000 description 1
- ZDILXFDENZVOTL-BPNCWPANSA-N Ala-Val-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ZDILXFDENZVOTL-BPNCWPANSA-N 0.000 description 1
- VKKYFICVTYKFIO-CIUDSAMLSA-N Arg-Ala-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N VKKYFICVTYKFIO-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- OTOXOKCIIQLMFH-KZVJFYERSA-N Arg-Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N OTOXOKCIIQLMFH-KZVJFYERSA-N 0.000 description 1
- PQWTZSNVWSOFFK-FXQIFTODSA-N Arg-Asp-Asn Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N)CN=C(N)N PQWTZSNVWSOFFK-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- LMPKCSXZJSXBBL-NHCYSSNCSA-N Arg-Gln-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O LMPKCSXZJSXBBL-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- KMFPQTITXUKJOV-DCAQKATOSA-N Arg-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KMFPQTITXUKJOV-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- NVPHRWNWTKYIST-BPNCWPANSA-N Arg-Tyr-Ala Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 NVPHRWNWTKYIST-BPNCWPANSA-N 0.000 description 1
- XWFPGQVLOVGSLU-CIUDSAMLSA-N Asn-Gln-Arg Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N XWFPGQVLOVGSLU-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- XVAPVJNJGLWGCS-ACZMJKKPSA-N Asn-Glu-Asn Chemical compound C(CC(=O)O)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N XVAPVJNJGLWGCS-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- MKJBPDLENBUHQU-CIUDSAMLSA-N Asn-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MKJBPDLENBUHQU-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- MRQQMVZUHXUPEV-IHRRRGAJSA-N Asp-Arg-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O MRQQMVZUHXUPEV-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- XYBJLTKSGFBLCS-QXEWZRGKSA-N Asp-Arg-Val Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O XYBJLTKSGFBLCS-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- QNFRBNZGVVKBNJ-PEFMBERDSA-N Asp-Ile-Gln Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N QNFRBNZGVVKBNJ-PEFMBERDSA-N 0.000 description 1
- USNJAPJZSGTTPX-XVSYOHENSA-N Asp-Phe-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O USNJAPJZSGTTPX-XVSYOHENSA-N 0.000 description 1
- JSHWXQIZOCVWIA-ZKWXMUAHSA-N Asp-Ser-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O JSHWXQIZOCVWIA-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- MNQMTYSEKZHIDF-GCJQMDKQSA-N Asp-Thr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O MNQMTYSEKZHIDF-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 1
- HTSSXFASOUSJQG-IHPCNDPISA-N Asp-Tyr-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O HTSSXFASOUSJQG-IHPCNDPISA-N 0.000 description 1
- JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N Cu2+ Chemical compound [Cu+2] JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AMRLSQGGERHDHJ-FXQIFTODSA-N Cys-Ala-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O AMRLSQGGERHDHJ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 108010090461 DFG peptide Proteins 0.000 description 1
- JXFLPKSDLDEOQK-JHEQGTHGSA-N Gln-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O JXFLPKSDLDEOQK-JHEQGTHGSA-N 0.000 description 1
- OOLCSQQPSLIETN-JYJNAYRXSA-N Gln-His-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)O OOLCSQQPSLIETN-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- XZLLTYBONVKGLO-SDDRHHMPSA-N Gln-Lys-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)C(=O)O XZLLTYBONVKGLO-SDDRHHMPSA-N 0.000 description 1
- SGVGIVDZLSHSEN-RYUDHWBXSA-N Gln-Tyr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)NCC(O)=O SGVGIVDZLSHSEN-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- AVZHGSCDKIQZPQ-CIUDSAMLSA-N Glu-Arg-Ala Chemical compound C[C@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C(O)=O AVZHGSCDKIQZPQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- XXCDTYBVGMPIOA-FXQIFTODSA-N Glu-Asp-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O XXCDTYBVGMPIOA-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- PAQUJCSYVIBPLC-AVGNSLFASA-N Glu-Asp-Phe Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PAQUJCSYVIBPLC-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- XTZDZAXYPDISRR-MNXVOIDGSA-N Glu-Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N XTZDZAXYPDISRR-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 1
- INGJLBQKTRJLFO-UKJIMTQDSA-N Glu-Ile-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O INGJLBQKTRJLFO-UKJIMTQDSA-N 0.000 description 1
- YQPFCZVKMUVZIN-AUTRQRHGSA-N Glu-Val-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O YQPFCZVKMUVZIN-AUTRQRHGSA-N 0.000 description 1
- CIMULJZTTOBOPN-WHFBIAKZSA-N Gly-Asn-Asn Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O CIMULJZTTOBOPN-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- LLXVQPKEQQCISF-YUMQZZPRSA-N Gly-Asp-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)CN LLXVQPKEQQCISF-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- CQZDZKRHFWJXDF-WDSKDSINSA-N Gly-Gln-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CN CQZDZKRHFWJXDF-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- YWAQATDNEKZFFK-BYPYZUCNSA-N Gly-Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YWAQATDNEKZFFK-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- BHPQOIPBLYJNAW-NGZCFLSTSA-N Gly-Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)CN BHPQOIPBLYJNAW-NGZCFLSTSA-N 0.000 description 1
- TWTPDFFBLQEBOE-IUCAKERBSA-N Gly-Leu-Gln Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O TWTPDFFBLQEBOE-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- MIIVFRCYJABHTQ-ONGXEEELSA-N Gly-Leu-Val Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O MIIVFRCYJABHTQ-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- QAMMIGULQSIRCD-IRXDYDNUSA-N Gly-Phe-Tyr Chemical compound C([C@H](NC(=O)C[NH3+])C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C([O-])=O)C1=CC=CC=C1 QAMMIGULQSIRCD-IRXDYDNUSA-N 0.000 description 1
- IXHQLZIWBCQBLQ-STQMWFEESA-N Gly-Pro-Phe Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 IXHQLZIWBCQBLQ-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- IALQAMYQJBZNSK-WHFBIAKZSA-N Gly-Ser-Asn Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O IALQAMYQJBZNSK-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- SOEGEPHNZOISMT-BYPYZUCNSA-N Gly-Ser-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SOEGEPHNZOISMT-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- WNGHUXFWEWTKAO-YUMQZZPRSA-N Gly-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN WNGHUXFWEWTKAO-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- WCORRBXVISTKQL-WHFBIAKZSA-N Gly-Ser-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WCORRBXVISTKQL-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- NVTPVQLIZCOJFK-FOHZUACHSA-N Gly-Thr-Asp Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O NVTPVQLIZCOJFK-FOHZUACHSA-N 0.000 description 1
- XHVONGZZVUUORG-WEDXCCLWSA-N Gly-Thr-Lys Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN XHVONGZZVUUORG-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- FFALDIDGPLUDKV-ZDLURKLDSA-N Gly-Thr-Ser Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FFALDIDGPLUDKV-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 1
- SFOXOSKVTLDEDM-HOTGVXAUSA-N Gly-Trp-Leu Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)CN)=CNC2=C1 SFOXOSKVTLDEDM-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- GBYYQVBXFVDJPJ-WLTAIBSBSA-N Gly-Tyr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)CN)O GBYYQVBXFVDJPJ-WLTAIBSBSA-N 0.000 description 1
- KSOBNUBCYHGUKH-UWVGGRQHSA-N Gly-Val-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CN KSOBNUBCYHGUKH-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N H-Gly-Phe-OH Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HGNUKGZQASSBKQ-PCBIJLKTSA-N Ile-Asp-Phe Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)N HGNUKGZQASSBKQ-PCBIJLKTSA-N 0.000 description 1
- NZGTYCMLUGYMCV-XUXIUFHCSA-N Ile-Lys-Arg Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N NZGTYCMLUGYMCV-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- PRTZQMBYUZFSFA-XEGUGMAKSA-N Ile-Tyr-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)NCC(=O)O)N PRTZQMBYUZFSFA-XEGUGMAKSA-N 0.000 description 1
- NXRNRBOKDBIVKQ-CXTHYWKRSA-N Ile-Tyr-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)O)N NXRNRBOKDBIVKQ-CXTHYWKRSA-N 0.000 description 1
- UYODHPPSCXBNCS-XUXIUFHCSA-N Ile-Val-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C UYODHPPSCXBNCS-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- UGTHTQWIQKEDEH-BQBZGAKWSA-N L-alanyl-L-prolylglycine zwitterion Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O UGTHTQWIQKEDEH-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- TYYLDKGBCJGJGW-UHFFFAOYSA-N L-tryptophan-L-tyrosine Natural products C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 TYYLDKGBCJGJGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AXZGZMGRBDQTEY-SRVKXCTJSA-N Leu-Gln-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O AXZGZMGRBDQTEY-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- CQGSYZCULZMEDE-UHFFFAOYSA-N Leu-Gln-Pro Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)N1CCCC1C(O)=O CQGSYZCULZMEDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HVJVUYQWFYMGJS-GVXVVHGQSA-N Leu-Glu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O HVJVUYQWFYMGJS-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- UCBPDSYUVAAHCD-UWVGGRQHSA-N Leu-Pro-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O UCBPDSYUVAAHCD-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- SBANPBVRHYIMRR-GARJFASQSA-N Leu-Ser-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N SBANPBVRHYIMRR-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- SBANPBVRHYIMRR-UHFFFAOYSA-N Leu-Ser-Pro Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CO)C(=O)N1CCCC1C(O)=O SBANPBVRHYIMRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LCNASHSOFMRYFO-WDCWCFNPSA-N Leu-Thr-Gln Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O LCNASHSOFMRYFO-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 1
- LJBVRCDPWOJOEK-PPCPHDFISA-N Leu-Thr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O LJBVRCDPWOJOEK-PPCPHDFISA-N 0.000 description 1
- AIQWYVFNBNNOLU-RHYQMDGZSA-N Leu-Thr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O AIQWYVFNBNNOLU-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- MVJRBCJCRYGCKV-GVXVVHGQSA-N Leu-Val-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O MVJRBCJCRYGCKV-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- IXHKPDJKKCUKHS-GARJFASQSA-N Lys-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N IXHKPDJKKCUKHS-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- KWUKZRFFKPLUPE-HJGDQZAQSA-N Lys-Asp-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KWUKZRFFKPLUPE-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- GQZMPWBZQALKJO-UWVGGRQHSA-N Lys-Gly-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O GQZMPWBZQALKJO-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- GQFDWEDHOQRNLC-QWRGUYRKSA-N Lys-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN GQFDWEDHOQRNLC-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- PDIDTSZKKFEDMB-UWVGGRQHSA-N Lys-Pro-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O PDIDTSZKKFEDMB-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- FPQMQEOVSKMVMA-ACRUOGEOSA-N Lys-Tyr-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)O FPQMQEOVSKMVMA-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- UGCIQUYEJIEHKX-GVXVVHGQSA-N Lys-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O UGCIQUYEJIEHKX-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- XOMXAVJBLRROMC-IHRRRGAJSA-N Met-Asp-Phe Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XOMXAVJBLRROMC-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- SPSSJSICDYYTQN-HJGDQZAQSA-N Met-Thr-Gln Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O SPSSJSICDYYTQN-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N N-L-alanyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- KIEPQOIQHFKQLK-PCBIJLKTSA-N Phe-Asn-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O KIEPQOIQHFKQLK-PCBIJLKTSA-N 0.000 description 1
- NAXPHWZXEXNDIW-JTQLQIEISA-N Phe-Gly-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 NAXPHWZXEXNDIW-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- KLYYKKGCPOGDPE-OEAJRASXSA-N Phe-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KLYYKKGCPOGDPE-OEAJRASXSA-N 0.000 description 1
- VCYJKOLZYPYGJV-AVGNSLFASA-N Pro-Arg-Leu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O VCYJKOLZYPYGJV-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- MGDFPGCFVJFITQ-CIUDSAMLSA-N Pro-Glu-Asp Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O MGDFPGCFVJFITQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- JMVQDLDPDBXAAX-YUMQZZPRSA-N Pro-Gly-Gln Chemical compound NC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1 JMVQDLDPDBXAAX-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- HAAQQNHQZBOWFO-LURJTMIESA-N Pro-Gly-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1 HAAQQNHQZBOWFO-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- BGWKULMLUIUPKY-BQBZGAKWSA-N Pro-Ser-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 BGWKULMLUIUPKY-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- PRKWBYCXBBSLSK-GUBZILKMSA-N Pro-Ser-Val Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O PRKWBYCXBBSLSK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- WVXQQUWOKUZIEG-VEVYYDQMSA-N Pro-Thr-Asn Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O WVXQQUWOKUZIEG-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 1
- WDXYVIIVDIDOSX-DCAQKATOSA-N Ser-Arg-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)CCCN=C(N)N WDXYVIIVDIDOSX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- QVOGDCQNGLBNCR-FXQIFTODSA-N Ser-Arg-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O QVOGDCQNGLBNCR-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- HZWAHWQZPSXNCB-BPUTZDHNSA-N Ser-Arg-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O HZWAHWQZPSXNCB-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 1
- YMEXHZTVKDAKIY-GHCJXIJMSA-N Ser-Asn-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO)C(O)=O YMEXHZTVKDAKIY-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 1
- KCFKKAQKRZBWJB-ZLUOBGJFSA-N Ser-Cys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O KCFKKAQKRZBWJB-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- MOVJSUIKUNCVMG-ZLUOBGJFSA-N Ser-Cys-Ser Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N)O MOVJSUIKUNCVMG-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- ULVMNZOKDBHKKI-ACZMJKKPSA-N Ser-Gln-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O ULVMNZOKDBHKKI-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- FMDHKPRACUXATF-ACZMJKKPSA-N Ser-Gln-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FMDHKPRACUXATF-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- UQFYNFTYDHUIMI-WHFBIAKZSA-N Ser-Gly-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CO UQFYNFTYDHUIMI-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- UIGMAMGZOJVTDN-WHFBIAKZSA-N Ser-Gly-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UIGMAMGZOJVTDN-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- SFTZWNJFZYOLBD-ZDLURKLDSA-N Ser-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CO SFTZWNJFZYOLBD-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 1
- GJFYFGOEWLDQGW-GUBZILKMSA-N Ser-Leu-Gln Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N GJFYFGOEWLDQGW-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- YUJLIIRMIAGMCQ-CIUDSAMLSA-N Ser-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YUJLIIRMIAGMCQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- HDBOEVPDIDDEPC-CIUDSAMLSA-N Ser-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O HDBOEVPDIDDEPC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- FPCGZYMRFFIYIH-CIUDSAMLSA-N Ser-Lys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FPCGZYMRFFIYIH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- UPLYXVPQLJVWMM-KKUMJFAQSA-N Ser-Phe-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O UPLYXVPQLJVWMM-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- RHAPJNVNWDBFQI-BQBZGAKWSA-N Ser-Pro-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O RHAPJNVNWDBFQI-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- AZWNCEBQZXELEZ-FXQIFTODSA-N Ser-Pro-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O AZWNCEBQZXELEZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- CUXJENOFJXOSOZ-BIIVOSGPSA-N Ser-Ser-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)O CUXJENOFJXOSOZ-BIIVOSGPSA-N 0.000 description 1
- GSCVDSBEYVGMJQ-SRVKXCTJSA-N Ser-Tyr-Asp Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)O GSCVDSBEYVGMJQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- LVHHEVGYAZGXDE-KDXUFGMBSA-N Thr-Ala-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N)O LVHHEVGYAZGXDE-KDXUFGMBSA-N 0.000 description 1
- DGDCHPCRMWEOJR-FQPOAREZSA-N Thr-Ala-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 DGDCHPCRMWEOJR-FQPOAREZSA-N 0.000 description 1
- XSLXHSYIVPGEER-KZVJFYERSA-N Thr-Ala-Val Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O XSLXHSYIVPGEER-KZVJFYERSA-N 0.000 description 1
- DIPIPFHFLPTCLK-LOKLDPHHSA-N Thr-Gln-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N)O DIPIPFHFLPTCLK-LOKLDPHHSA-N 0.000 description 1
- GXUWHVZYDAHFSV-FLBSBUHZSA-N Thr-Ile-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O GXUWHVZYDAHFSV-FLBSBUHZSA-N 0.000 description 1
- KZSYAEWQMJEGRZ-RHYQMDGZSA-N Thr-Leu-Val Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O KZSYAEWQMJEGRZ-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- DXPURPNJDFCKKO-RHYQMDGZSA-N Thr-Lys-Val Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O)C(O)=O DXPURPNJDFCKKO-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- BIBYEFRASCNLAA-CDMKHQONSA-N Thr-Phe-Gly Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CC1=CC=CC=C1 BIBYEFRASCNLAA-CDMKHQONSA-N 0.000 description 1
- ZESGVALRVJIVLZ-VFCFLDTKSA-N Thr-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N)O ZESGVALRVJIVLZ-VFCFLDTKSA-N 0.000 description 1
- YOPQYBJJNSIQGZ-JNPHEJMOSA-N Thr-Tyr-Tyr Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](N)[C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 YOPQYBJJNSIQGZ-JNPHEJMOSA-N 0.000 description 1
- YXSSXUIBUJGHJY-SFJXLCSZSA-N Trp-Thr-Phe Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)[C@H](O)C)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 YXSSXUIBUJGHJY-SFJXLCSZSA-N 0.000 description 1
- PKZIWSHDJYIPRH-JBACZVJFSA-N Trp-Tyr-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O PKZIWSHDJYIPRH-JBACZVJFSA-N 0.000 description 1
- CDRYEAWHKJSGAF-BPNCWPANSA-N Tyr-Ala-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O CDRYEAWHKJSGAF-BPNCWPANSA-N 0.000 description 1
- DANHCMVVXDXOHN-SRVKXCTJSA-N Tyr-Asp-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 DANHCMVVXDXOHN-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- DZKFGCNKEVMXFA-JUKXBJQTSA-N Tyr-Ile-His Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)[C@@H](N)Cc1ccc(O)cc1)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(O)=O DZKFGCNKEVMXFA-JUKXBJQTSA-N 0.000 description 1
- GULIUBBXCYPDJU-CQDKDKBSSA-N Tyr-Leu-Ala Chemical compound [O-]C(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]([NH3+])CC1=CC=C(O)C=C1 GULIUBBXCYPDJU-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 1
- VYQQQIRHIFALGE-UWJYBYFXSA-N Tyr-Ser-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 VYQQQIRHIFALGE-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- ZPFLBLFITJCBTP-QWRGUYRKSA-N Tyr-Ser-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O ZPFLBLFITJCBTP-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- XFEMMSGONWQACR-KJEVXHAQSA-N Tyr-Thr-Met Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N)O XFEMMSGONWQACR-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 1
- ANHVRCNNGJMJNG-BZSNNMDCSA-N Tyr-Tyr-Cys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O ANHVRCNNGJMJNG-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- VJOWWOGRNXRQMF-UVBJJODRSA-N Val-Ala-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 VJOWWOGRNXRQMF-UVBJJODRSA-N 0.000 description 1
- JIODCDXKCJRMEH-NHCYSSNCSA-N Val-Arg-Gln Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N JIODCDXKCJRMEH-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- PVPAOIGJYHVWBT-KKHAAJSZSA-N Val-Asn-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O PVPAOIGJYHVWBT-KKHAAJSZSA-N 0.000 description 1
- OQWNEUXPKHIEJO-NRPADANISA-N Val-Glu-Ser Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N OQWNEUXPKHIEJO-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- LAYSXAOGWHKNED-XPUUQOCRSA-N Val-Gly-Ser Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O LAYSXAOGWHKNED-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- ZXYPHBKIZLAQTL-QXEWZRGKSA-N Val-Pro-Asp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N ZXYPHBKIZLAQTL-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- SSYBNWFXCFNRFN-GUBZILKMSA-N Val-Pro-Ser Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SSYBNWFXCFNRFN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- DEGUERSKQBRZMZ-FXQIFTODSA-N Val-Ser-Ala Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DEGUERSKQBRZMZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- PZTZYZUTCPZWJH-FXQIFTODSA-N Val-Ser-Ser Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N PZTZYZUTCPZWJH-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- SDHZOOIGIUEPDY-JYJNAYRXSA-N Val-Ser-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 SDHZOOIGIUEPDY-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- WUFHZIRMAZZWRS-OSUNSFLBSA-N Val-Thr-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N WUFHZIRMAZZWRS-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 1
- PDDJTOSAVNRJRH-UNQGMJICSA-N Val-Thr-Phe Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O PDDJTOSAVNRJRH-UNQGMJICSA-N 0.000 description 1
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 description 1
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 description 1
- 108010038850 arginyl-isoleucyl-tyrosine Proteins 0.000 description 1
- 108010060035 arginylproline Proteins 0.000 description 1
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229910001431 copper ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 239000000385 dialysis solution Substances 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010075431 glycyl-alanyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010072405 glycyl-aspartyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010010147 glycylglutamine Proteins 0.000 description 1
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 1
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 1
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N iron Substances [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 iron ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 108010070409 phenylalanyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 108010072986 threonyl-seryl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 230000005748 tumor development Effects 0.000 description 1
- 108010035534 tyrosyl-leucyl-alanine Proteins 0.000 description 1
- 108010003137 tyrosyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 1
- 108010009962 valyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 108010027345 wheylin-1 peptide Proteins 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明提供了一种用于曲妥珠单链抗体及与其序列同源的单链抗体的变复性方法，采用本发明方法制得的复性单链抗体重组蛋白溶液，该单链抗体重组蛋白所处的溶剂即为使用者后续实验所需的缓冲液，无需再进行缓冲液的置换，同时最终产物中单链抗体蛋白的浓度能达到30mg/mL以上，单链抗体复性率达到20％以上，最终置换蛋白与复性单链抗体蛋白的比例达到30％以上。本发明变复性方法适用于大肠杆菌表达得到的曲妥珠单链抗体蛋白，同时也适用于与曲妥珠单链抗体蛋白序列同源性达到60％以上的单链抗体蛋白。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及用于曲妥珠单链抗体和其它序列同源于曲妥珠单链抗体的单链抗体的变复性方法。
背景技术
外源蛋白在大肠杆菌中高效表达导致不溶性的聚集形成高密度的包涵体。蛋白变性主要是蛋白质分子内部的结构被破坏。天然蛋白质的空间结构是通过氢键等次级键维持，而变性后次级键被破坏，蛋白质分子从原来有序的卷曲的紧密结构变为无序的松散的伸展状结构。原本位于分子内部的疏水基团大量暴露于分子表面，而亲水基团在表面分布相对较少，使得蛋白颗粒不能与水相溶而失去水膜，引起分子间的碰撞而聚集沉淀。
单链抗体(ScFv)具有可去除非特异性反应的竞争性表面蛋白，肿瘤显象背景更加清晰性，易渗透肿瘤组织中增加药物治疗浓度等多个显著的优点，大肠杆菌表达再通过变复性获得的抗体蛋白，具有生长迅速，生产成本低，产率高以及相对容易的基因操作等优点，成为制备单链抗体(ScFv)常用方法之一。但在利用这种高表达系统时存在的挑战在于蛋白体外折叠时会产生大量的错误折叠和聚集。在去除变性剂使得目标蛋白从完全伸展的变性状态恢复至正差的折叠结构、去除还原剂确保二硫键正常形成的复性过程中，回收正确折叠的蛋白效率低。
传统的复性方法有稀释法和透析法。稀释复性法对样品几十倍甚至上百倍的稀释会使样品的体积急剧增大，给后续的分离纯化带来很大的困难。透析法耗时较长，而且要多次更换透析溶液。这两种方法的共同缺点在于蛋白质在复性过程中会发生聚集而产生大量沉淀，使得复性效率低，通常蛋白质的活性回收率只有5～20％，而且复性后的蛋白质溶液中含有大量的杂蛋白，需要进行进一步的分离纯化。复性后的蛋白所存在的缓冲液中一般含有精氨酸等杂质与下游的步骤不兼容，且无法长时间储存蛋白溶液。缓冲液的置换是生物样品制备过程中必不可少的步骤，既能为下游应用制备样品，也能支持后续的长期储存。缓冲液置换的常用方法有透析、脱盐柱等。透析置换依赖于被动扩散，可能需要长达24小时的时间才能完成置换。脱盐柱是在高分子量和低分子量物质之间进行基团分离，从盐和其他小分子中分离出来的蛋白质，样品被脱盐转移到一个新的缓冲液中。并且置换缓冲液过程中由于浓度、pH、环境温度等变化会对蛋白量进行二次损伤。
通过大肠杆菌表达得到的曲妥珠单链抗体蛋白，其变复性过程中也存在以上问题：如使用透析复性时，将6M的盐酸胍蛋白变性剂加入750mL复性液中，从6M降至1M盐酸胍时，蛋白浓度为1.8mg/mL；但当1M盐酸胍降至0M时，蛋白几乎全部析出。
所以，生产高质量的，副产物和杂质少的单链抗体是关键挑战，即使用蛋白质变复性方法回收获得蛋白过程充满复杂性。
因此，如何实现在获得高浓度曲妥珠单链抗体蛋白的同时还能通过变复性处理后直接置换到所需缓冲液中是本领域技术人员致力于研发的方向之一。
发明内容
本发明的目的，就是为了解决上述问题而提供了一种用于曲妥珠单链抗体及与其序列同源的单链抗体的变复性方法，能将单链抗体蛋白直接置换到所需缓冲液中，并且可以获得高浓度单链抗体蛋白。
本发明的目的是这样实现的：
本发明提供了一种用于曲妥珠单链抗体及与其序列同源的单链抗体的变复性方法，所述曲妥珠单链抗体或与其序列同源的单链抗体蛋白通过大肠杆菌表达系统诱导表达，经细胞破碎、离心后制备得到单链抗体重组蛋白包涵体，所述变复性方法包括以下步骤：
步骤S1：将单链抗体重组蛋白包涵体用洗涤液进行洗涤并离心，得到的沉淀再用细胞破碎液洗涤、离心重复三次，得到沉淀为纯化的单链抗体重组蛋白包涵体；
步骤S2：将步骤S1得到的纯化的单链抗体重组蛋白包涵体用变性剂彻底溶解，按照1克包涵体加入5mL变性剂的比例，对变性的重组蛋白溶液进行搅拌，搅拌速度为100-150rpm，搅拌温度为4℃，搅拌时间为12小时，搅拌后离心取上清液，得到变性蛋白液，并将其蛋白浓度调整为30mg/mL；传统认为复性时加入蛋白浓度控制在0.1-1.0mg/mL，过快会形成絮状沉淀。但通过实验发现传统的蛋白添加浓度回收效率极低。本发明通过多次实验将蛋白浓度提至30mg/mL，同时缓慢搅拌，最后成功复性。
步骤S3：取9mL变性蛋白液平均分为三剂，每剂之间间隔两小时，缓慢滴入1L的复性液中，滴加完毕后在100-150rpm、4℃条件下搅拌24小时，得到复性蛋白液；
步骤S4：将步骤S3制得的复性蛋白液离心，上清液经4℃冰浴后抽滤去除沉淀，得到的蛋白溶液通过超滤膜包浓缩至20mL，再次离心后取上清得到浓缩复性蛋白溶液；
步骤S5：将步骤S4制得的浓缩复性蛋白溶液按照1：6的体积比缓慢倒入蛋白复性后实验所需的缓冲液中，4℃环境下搅拌12小时，经过离心和抽滤去除沉淀后，得到置换后的蛋白溶液；
步骤S6：将步骤S5制得的置换后的蛋白溶液的蛋白浓度浓缩至8mg/mL，通过分子筛进行纯化分离，最后得到复性蛋白成品。
上述的用于曲妥珠单链抗体及与其序列同源的单链抗体的变复性方法，其中，步骤S1中，所述洗涤液包括50mM Tris、100mM NaCl、1mM EDTA、2％Triton-100和2M尿素，且pH为8.0，所述细胞破碎液包括20mM磷酸盐和500mM NaCl，且pH为7.4。
上述的用于曲妥珠单链抗体及与其序列同源的单链抗体的变复性方法，其中，步骤S2中，所述变性剂包括6M盐酸胍、50mM Tris、100mM NaCl、10mM EDTA、10mM DTT和10％甘油，且pH为8.0。变性剂的主要成分6M盐酸胍结合DTT二硫苏糖醇还原剂以溶解包涵体，本发明使用6M盐酸胍使得蛋白中的氢键断裂，增加非极性分子包括氨基酸侧链的溶解度。加入10mM DTT二硫苏糖醇还原剂，彻底使得破坏二硫键，使得变性更彻底。并加入10％甘油稳定蛋白结构，促进正确结构的生成。
上述的用于曲妥珠单链抗体及与其序列同源的单链抗体的变复性方法，其中，步骤S3中，所述复性液包括100mM Tris、400mM精氨酸、2mM EDTA、5mM GSH和0.5mM GSSG，且pH为8.0。为提高复性效率，本发明通过实验采用GSH:GSSG氧化交换系统的浓度比例控制在10：1。同时在复性液中加入100mM Tris提高包涵体蛋白的折叠效率；加入400mM精氨酸增加复性中间产物溶解度；加入2mM EDTA金属螯合剂，螯合铜离子和铁离子防止已还原的巯基发生氧化反应。
复性的最佳时间为24-36小时，本发明经过多重实验，复性时间定为24h。
通常复性液中含有盐酸胍，蛋白难以长期储存，本发明提出将复性后的蛋白置换到所需的环境之中。而将复性蛋白置换又是变复性的另一大挑战，蛋白极易损失，本发明经过优化将蛋白得率控制在30％以上。
本发明变复性方法适用于大肠杆菌表达得到的曲妥珠单链抗体蛋白，同时也适用于与曲妥珠单链抗体蛋白序列同源性达到60％以上的单链抗体蛋白。本发明考虑到蛋白复性的复杂性，且考虑到复性液并非最后蛋白的环境，提出了一种最佳置换方法，即本发明方法制得的复性单链抗体重组蛋白溶液，该单链抗体重组蛋白所处的溶剂即为使用者后续实验所需的缓冲液，无需再进行缓冲液的置换，同时最终产物中单链抗体蛋白的浓度能达到30mg/mL以上，单链抗体复性率达到20％以上，最终置换蛋白与复性单链抗体蛋白的比例达到30％以上。
附图说明
图1是实施例1中曲妥珠单链抗体4HKZ重组蛋白先变复性再置换过程中蛋白的非还原SDS-PAGE检测结果；
图2是实施例2中人类抗干扰素单抗3UX9重组蛋白先变复性再置换过程中蛋白的非还原SDS-PAGE检测结果；
图3是实施例3中易普利姆玛单抗5XJ3重组蛋白先变复性再置换过程中蛋白的非还原SDS-PAGE检测结果。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。下述实施例中所述试剂原料除非注明来源外，均为市售的常见原料，试剂的配制采用常规方法。实施例中未详述的方法均为本领域常规操作。
本实施例中所采用的曲妥珠单链抗体，在PDB蛋白质结构数据库中名称为4HKZ，其氨基酸序列如SEQ.NO.1所示，同时以4HKZ序列为模板按照同源性60％以上在PDB蛋白质结构数据库进行单链抗体的搜索，搜索得到人类抗干扰素单链抗体3UX9，氨基酸序列如SEQ.NO.2所示，以及易普利姆玛单链抗体5XJ3，氨基酸序列如SEQ.NO.3所示。
将曲妥珠单链抗体4HKZ(以下称为单链抗体4HKZ)、人类抗干扰素单链抗体3UX9(以下称为单链抗体3UX9)以及易普利姆玛单链抗体5XJ3(以下称为单链抗体5XJ3)分别通过大肠杆菌表达系统诱导表达，经细胞破碎、离心后制备得到单链抗体重组蛋白包涵体。
实施例1
将湿菌重量为6g的单链抗体4HKZ破碎、离心，得到单链抗体4HKZ重组蛋白包涵体，该重组蛋白包涵体的变复性方法包括以下步骤：
步骤S1：将单链抗体4HKZ重组蛋白包涵体用洗涤液进行洗涤并离心，得到的沉淀再用细胞破碎液洗涤、离心重复三次，得到沉淀为纯化的单链抗体4HKZ重组蛋白包涵体；其中，洗涤液包括50mM Tris、100mM NaCl、1mM EDTA、2％Triton-100和2M尿素，且pH为8.0，所述细胞破碎液包括20mM磷酸盐和500mM NaCl，且pH为7.4；
步骤S2：将步骤S1得到3.8g的纯化的单链抗体4HKZ重组蛋白包涵体用19mL变性剂彻底溶解，对变性的重组蛋白溶液进行搅拌，搅拌速度为100-150rpm，搅拌温度为4℃，搅拌时间为12小时，搅拌后离心取上清液，得到变性蛋白液，并将其蛋白浓度调整为30mg/mL，经检测得变性后的蛋白含量为570mg；其中，变性剂包括6M盐酸胍、50mM Tris、100mM NaCl、10mM EDTA、10mM DTT和10％甘油，且pH为8.0。
步骤S3：取9mL变性蛋白液平均分为三剂，每剂之间间隔两小时，缓慢滴入1L的复性液中，滴加完毕后在100-150rpm、4℃条件下搅拌24小时，得到复性蛋白液；其中，复性液包括100mM Tris、400mM精氨酸、2mM EDTA、5mM GSH和0.5mM GSSG，且pH为8.0。
步骤S4：将步骤S3制得的复性蛋白液离心，上清液经4℃冰浴后抽滤去除沉淀，得到的蛋白溶液通过超滤膜包浓缩至20mL，再次离心后取上清得到浓缩复性蛋白溶液，经检测，蛋白含量为128mg；
步骤S5：将步骤S4制得的浓缩复性蛋白溶液按照1：6的体积比缓慢倒入蛋白复性后实验所需的缓冲液中，4℃环境下搅拌12小时，经过离心和抽滤去除沉淀后，得到置换后的蛋白溶液,经检测，蛋白含量为48mg；
步骤S6：将步骤S5制得的置换后的蛋白溶液的蛋白浓度浓缩至8mg/mL，通过分子筛进行纯化分离，最后得到复性蛋白成品。
本实施例变复性方法的蛋白复性率为22.4％，置换缓冲液后的蛋白含量占复性后蛋白含量的占比为37.5％。
图1为本实施例中曲妥珠单链抗体4HKZ重组蛋白先变复性再置换过程中蛋白的非还原SDS-PAGE检测结果。如图1所示，M为蛋白Marker,13为步骤S6中复性置换后得到的浓缩蛋白，从图上可以看到仍存在部分杂质，而1-12为13泳道的蛋白溶液经过分子筛纯化后的蛋白结果。
实施例2
将湿菌重量为9.2g的单链抗体3UX9破碎、离心，得到单链抗体3UX9重组蛋白包涵体，该重组蛋白包涵体的变复性方法包括以下步骤：
步骤S1：将单链抗体3UX9重组蛋白包涵体用洗涤液进行洗涤并离心，得到的沉淀再用细胞破碎液洗涤、离心重复三次，得到沉淀为纯化的单链抗体3UX9重组蛋白包涵体；其中，洗涤液包括50mM Tris、100mM NaCl、1mM EDTA、2％Triton-100和2M尿素，且pH为8.0，所述细胞破碎液包括20mM磷酸盐和500mM NaCl，且pH为7.4；
步骤S2：将步骤S1得到4g的纯化的单链抗体3UX9重组蛋白包涵体用20mL变性剂彻底溶解，对变性的重组蛋白溶液进行搅拌，搅拌速度为100-150rpm，搅拌温度为4℃，搅拌时间为12小时，搅拌后离心取上清液，得到变性蛋白液，并将其蛋白浓度调整为30mg/mL，经检测得变性后的蛋白含量为608mg；其中，变性剂包括6M盐酸胍、50mM Tris、100mM NaCl、10mMEDTA、10mM DTT和10％甘油，且pH为8.0。
步骤S3：取9mL变性蛋白液平均分为三剂，每剂之间间隔两小时，缓慢滴入1L的复性液中，滴加完毕后在100-150rpm、4℃条件下搅拌24小时，得到复性蛋白液；其中，复性液包括100mM Tris、400mM精氨酸、2mM EDTA、5mM GSH和0.5mM GSSG，且pH为8.0。
步骤S4：将步骤S3制得的复性蛋白液离心，上清液经4℃冰浴后抽滤去除沉淀，得到的蛋白溶液通过超滤膜包浓缩至20mL，再次离心后取上清得到浓缩复性蛋白溶液，经检测，蛋白含量为144mg；
步骤S5：将步骤S4制得的浓缩复性蛋白溶液按照1：6的体积比缓慢倒入蛋白复性后实验所需的缓冲液中，4℃环境下搅拌12小时，经过离心和抽滤去除沉淀后，得到置换后的蛋白溶液,经检测，蛋白含量为47mg；
步骤S6：将步骤S5制得的置换后的蛋白溶液的蛋白浓度浓缩至8mg/mL，通过分子筛进行纯化分离，最后得到复性蛋白成品。
本实施例变复性方法的蛋白复性率为23.7％，置换缓冲液后的蛋白含量占复性后蛋白含量的占比为32.6％。
图2为本实施例中人类抗干扰素单链抗体3UX9重组蛋白先变复性再置换过程中蛋白的非还原SDS-PAGE检测结果。如图2所示，M为蛋白Marker,13为步骤S6中复性置换后得到的浓缩蛋白，从图上可以看到仍存在部分杂质，而1-12为13泳道的蛋白溶液经过分子筛纯化后的蛋白结果。
实施例3
将湿菌重量为13.2g的单链抗体5XJ3破碎、离心，得到单链抗体5XJ3重组蛋白包涵体，该重组蛋白包涵体的变复性方法包括以下步骤：
步骤S1：将单链抗体5XJ3重组蛋白包涵体用洗涤液进行洗涤并离心，得到的沉淀再用细胞破碎液洗涤、离心重复三次，得到沉淀为纯化的单链抗体5XJ3重组蛋白包涵体；其中，洗涤液包括50mM Tris、100mM NaCl、1mM EDTA、2％Triton-100和2M尿素，且pH为8.0，所述细胞破碎液包括20mM磷酸盐和500mM NaCl，且pH为7.4；
步骤S2：将步骤S1得到4g的纯化的单链抗体5XJ3重组蛋白包涵体用20mL变性剂彻底溶解，对变性的重组蛋白溶液进行搅拌，搅拌速度为100-150rpm，搅拌温度为4℃，搅拌时间为12小时，搅拌后离心取上清液，得到变性蛋白液，并将其蛋白浓度调整为30mg/mL，经检测得变性后的蛋白含量为466mg；其中，变性剂包括6M盐酸胍、50mM Tris、100mM NaCl、10mMEDTA、10mM DTT和10％甘油，且pH为8.0。
步骤S3：取9mL变性蛋白液平均分为三剂，每剂之间间隔两小时，缓慢滴入1L的复性液中，滴加完毕后在100-150rpm、4℃条件下搅拌24小时，得到复性蛋白液；其中，复性液包括100mM Tris、400mM精氨酸、2mM EDTA、5mM GSH和0.5mM GSSG，且pH为8.0。
步骤S4：将步骤S3制得的复性蛋白液离心，上清液经4℃冰浴后抽滤去除沉淀，得到的蛋白溶液通过超滤膜包浓缩至20mL，再次离心后取上清得到浓缩复性蛋白溶液，经检测，蛋白含量为99mg；
步骤S5：将步骤S4制得的浓缩复性蛋白溶液按照1：6的体积比缓慢倒入蛋白复性后实验所需的缓冲液中，4℃环境下搅拌12小时，经过离心和抽滤去除沉淀后，得到置换后的蛋白溶液,经检测，蛋白含量为34mg；
步骤S6：将步骤S5制得的置换后的蛋白溶液的蛋白浓度浓缩至8mg/mL，通过分子筛进行纯化分离，最后得到复性蛋白成品。
本实施例变复性方法的蛋白复性率为21.2％，置换缓冲液后的蛋白含量占复性后蛋白含量的占比为34.3％。
图3为本实施例中易普利姆玛单链抗体5XJ3重组蛋白先变复性再置换过程中蛋白的非还原SDS-PAGE检测结果。如图3所示，M为蛋白Marker,1为复性置换后的蛋白经过分子筛纯化后的蛋白结果。
通过实施例1至3的实验结果可见：本发明变复性方法适用于大肠杆菌表达得到的曲妥珠单链抗体4HKZ，同时也适用于与曲妥珠单链抗体同源性达到60％以上的单链抗体，即人类抗干扰素单链抗体3UX9和易普利姆玛单链抗体5XJ3。
本发明考虑到蛋白复性的复杂性，且考虑到复性液并非最后蛋白的环境，提出了一种最佳置换方法，即本发明方法制得的复性单链抗体重组蛋白溶液，该单链抗体重组蛋白所处的溶剂即为使用者后续实验所需的缓冲液，无需再进行缓冲液的置换，同时最终产物中单链抗体蛋白的浓度能达到30mg/mL以上，单链抗体复性率达到20％以上，最终置换蛋白与复性单链抗体蛋白的比例达到30％以上。
以上实施例仅供说明本发明之用，而非对本发明的限制，有关技术领域的技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，还可以作出各种变换或变型，因此所有等同的技术方案也应该属于本发明的范畴，应由各权利要求所限定。
SEQUENCE LISTING
<110> 华东师范大学
<120> 一种用于曲妥珠单链抗体及与其序列同源的单链抗体的变复性方法
<130> 1
<160> 3
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 228
<212> PRT
<213> 人工合成
<400> 1
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Glu Val Gln Leu
100 105 110
Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu
115 120 125
Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp
130 135 140
Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Tyr
145 150 155 160
Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe
165 170 175
Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn
180 185 190
Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg Trp Gly
195 200 205
Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
210 215 220
Thr Val Ser Ser
225
<210> 2
<211> 228
<212> PRT
<213> 人工合成
<400> 2
Ile Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln Arg
1 5 10 15
Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr
20 25 30
Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Arg Asp Asn Asn Glu Asn
85 90 95
Glu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Glu Val Gln
100 105 110
Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg
115 120 125
Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser
130 135 140
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile
145 150 155 160
Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg
165 170 175
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met
180 185 190
Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr
195 200 205
Ile Asp Phe Gly Asp His Met Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
210 215 220
Thr Val Ser Ser
225
<210> 3
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工合成
<400> 3
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Phe Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Gln Val Gln
100 105 110
Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg
115 120 125
Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Thr Met His
130 135 140
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Thr Phe Ile
145 150 155 160
Ser Tyr Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg
165 170 175
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met
180 185 190
Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Arg Thr
195 200 205
Gly Trp Leu Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
210 215 220
Val Ser Ser
225
Claims (4)
1.一种用于曲妥珠单链抗体及与其序列同源的单链抗体的变复性方法，所述曲妥珠单链抗体或与其序列同源的单链抗体蛋白通过大肠杆菌表达系统诱导表达，经细胞破碎、离心后制备得到单链抗体重组蛋白包涵体，其特征在于，所述变复性方法包括以下步骤：
步骤S1：将单链抗体重组蛋白包涵体用洗涤液进行洗涤并离心，得到的沉淀再用细胞破碎液洗涤、离心重复三次，得到沉淀为纯化的单链抗体重组蛋白包涵体；
步骤S2：将步骤S1得到的纯化的单链抗体重组蛋白包涵体用变性剂彻底溶解，按照1克包涵体加入5mL变性剂的比例，对变性的重组蛋白溶液进行搅拌，搅拌速度为100-150rpm，搅拌温度为4℃，搅拌时间为12小时，搅拌后离心取上清液，得到变性蛋白液，并将其蛋白浓度调整为30mg/mL；
步骤S3：取9mL变性蛋白液平均分为三剂，每剂之间间隔两小时，缓慢滴入1L的复性液中，滴加完毕后在100-150rpm、4℃条件下搅拌24小时，得到复性蛋白液；
步骤S4：将步骤S3制得的复性蛋白液离心，上清液经4℃冰浴后抽滤去除沉淀，得到的蛋白溶液通过超滤膜包浓缩至20mL，再次离心后取上清得到浓缩复性蛋白溶液；
步骤S5：将步骤S4制得的浓缩复性蛋白溶液按照1：6的体积比缓慢倒入蛋白复性后实验所需的缓冲液中，4℃环境下搅拌12小时，经过离心和抽滤去除沉淀后，得到置换后的蛋白溶液；
步骤S6：将步骤S5制得的置换后的蛋白溶液的蛋白浓度浓缩至8mg/mL，通过分子筛进行纯化分离，最后得到复性蛋白成品。
2.如权利要求1所述的用于曲妥珠单链抗体及与其序列同源的单链抗体的变复性方法，其特征在于，步骤S1中，所述洗涤液包括50mM Tris、100mM NaCl、1mM EDTA、2％Triton-100和2M尿素，且pH为8.0，所述细胞破碎液包括20mM磷酸盐和500mM NaCl，且pH为7.4。
3.如权利要求1所述的用于曲妥珠单链抗体及与其序列同源的单链抗体的变复性方法，其特征在于，步骤S2中，所述变性剂包括6M盐酸胍、50mM Tris、100mM NaCl、10mM EDTA、10mM DTT和10％甘油，且pH为8.0。
4.如权利要求1所述的用于曲妥珠单链抗体及与其序列同源的单链抗体的变复性方法，其特征在于，步骤S3中，所述复性液包括100mM Tris、400mM精氨酸、2mM EDTA、5mM GSH和0.5mM GSSG，且pH为8.0。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210550377.9A CN114891109A (zh) | 2022-05-20 | 2022-05-20 | 一种用于曲妥珠单链抗体及与其序列同源的单链抗体的变复性方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210550377.9A CN114891109A (zh) | 2022-05-20 | 2022-05-20 | 一种用于曲妥珠单链抗体及与其序列同源的单链抗体的变复性方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114891109A true CN114891109A (zh) | 2022-08-12 |
Family
ID=82724649
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210550377.9A Pending CN114891109A (zh) | 2022-05-20 | 2022-05-20 | 一种用于曲妥珠单链抗体及与其序列同源的单链抗体的变复性方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114891109A (zh) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101475643A (zh) * | 2009-01-16 | 2009-07-08 | 中国医学科学院医药生物技术研究所 | 一种双单链抗体强化融合蛋白dFv-LDP-AE及其制备方法和应用 |
| CN101967192A (zh) * | 2009-07-28 | 2011-02-09 | 中国医学科学院医药生物技术研究所 | 抗cd20抗体片段与力达霉素的融合蛋白、制备方法及其用途 |
| CN101983970A (zh) * | 2010-01-28 | 2011-03-09 | 江苏省农业科学院 | 抗呕吐毒素DON单链抗体ScFv及其制备方法与应用 |
| CN109251244A (zh) * | 2017-07-13 | 2019-01-22 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 | 一种识别源自于ebv膜蛋白lmp1抗原的tcr |
| CN111454368A (zh) * | 2020-04-09 | 2020-07-28 | 武汉原生药谷生物医药科技有限公司 | 一种小分子抗TNF-α治疗性抗体的构建方法和应用 |
-
2022
- 2022-05-20 CN CN202210550377.9A patent/CN114891109A/zh active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101475643A (zh) * | 2009-01-16 | 2009-07-08 | 中国医学科学院医药生物技术研究所 | 一种双单链抗体强化融合蛋白dFv-LDP-AE及其制备方法和应用 |
| CN101967192A (zh) * | 2009-07-28 | 2011-02-09 | 中国医学科学院医药生物技术研究所 | 抗cd20抗体片段与力达霉素的融合蛋白、制备方法及其用途 |
| CN101983970A (zh) * | 2010-01-28 | 2011-03-09 | 江苏省农业科学院 | 抗呕吐毒素DON单链抗体ScFv及其制备方法与应用 |
| CN109251244A (zh) * | 2017-07-13 | 2019-01-22 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 | 一种识别源自于ebv膜蛋白lmp1抗原的tcr |
| CN111454368A (zh) * | 2020-04-09 | 2020-07-28 | 武汉原生药谷生物医药科技有限公司 | 一种小分子抗TNF-α治疗性抗体的构建方法和应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| ANIMESH SARKER等: "Evaluation of scFv protein recovery from E. coli by in vitro refolding and mild solubilization process", MICROBIAL CELL FACTORIES, vol. 18, pages 5 * |
| BU DW等: "Expression and purification of a novel therapeutic single-chain variable fragment antibody against BNP from inclusion bodies of Escherichia coli", PROTEIN EXPRESSION AND PURIFICATION, vol. 92, no. 2, pages 203 - 207 * |
| 高正平等: "正交试验设计筛选scFv 包涵体变性和复性工艺", 中国医药工业杂志, vol. 48, no. 9, pages 1302 - 1308 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3648242B2 (ja) | 組み換えインスリン様成長因子ｉｇｆ−ｉ様ポリペプチドの再折りたたみ | |
| JP2575604B2 (ja) | 沈澱異種蛋白質の精製及び活性化法 | |
| AU735480B2 (en) | A process for preparing human proinsulin | |
| JPH09501931A (ja) | ポリペプチドの水性多相単離 | |
| Beld et al. | Diselenides as universal oxidative folding catalysts of diverse proteins | |
| JPH06102034B2 (ja) | タンパク質の生産方法 | |
| Chen et al. | Biopurification of monoclonal antibody (mAb) through crystallisation | |
| JPH05503511A (ja) | 生物分子の濃縮もしくは精製のための方法 | |
| CN114891109A (zh) | 一种用于曲妥珠单链抗体及与其序列同源的单链抗体的变复性方法 | |
| CN111575250A (zh) | Butelase1酶的提取方法及其环化多肽的环化方法 | |
| CN102309764A (zh) | 有机溶剂辅助peg修饰蛋白质药物的方法 | |
| JP3930051B2 (ja) | 正しく折畳まれた生物学的に活性の組換えタンパク質の製造方法 | |
| CN102628058A (zh) | 制备重组人源神经生长因子蛋白质的方法及复性液 | |
| CN100387614C (zh) | 包涵体蛋白复性并同时纯化的方法 | |
| JPS63123395A (ja) | 抗ｐｃｉモノクローナル抗体、これを用いた抗ｐｃｉの精製法及び免疫学的測定法 | |
| CN111333718A (zh) | 用于沉淀血浆中免疫球蛋白的方法及从血浆中分离免疫球蛋白的方法 | |
| CN114891086B (zh) | 一种生物素标记的gdf15的复性方法 | |
| CN114716534B (zh) | 一种鲜味受体重组蛋白包涵体的复性方法 | |
| CN111434676A (zh) | 一种乙型肝炎病毒HBV来源HBx蛋白的制备方法 | |
| JPH09291A (ja) | 無細胞蛋白質合成系における活性型蛋白質の合成方法 | |
| CN101054405B (zh) | 一种高效复性膜蛋白的方法 | |
| Pessoa Jr et al. | 6 Protein Precipitation | |
| CN107400169A (zh) | 一种肿瘤血管阻断剂融合蛋白的纯化方法 | |
| JP2004081042A (ja) | タンパク質溶液の調製方法、当該タンパク質溶液、当該タンパク質溶液を利用したモノクローナル抗体の作製方法及び当該モノクローナル抗体 | |
| CA2462232C (en) | Method for reconstituting a recombinant protein to its biologically active form |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |