CN114890870A - 大苞荆芥提取物中松香烷二萜及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及大苞荆芥地上部分分离纯化技术领域，是一种大苞荆芥提取物中松香烷二萜及其制备方法和应用。本发明首次公开了Nepetabrate H，本发明Nepetabrate H对乙酰氨基酚(APAP)诱导人肝癌细胞(HepG‑2)损伤具有明显的保护作用，从而使得本发明Nepetabrate H能够作为制备防治肝脏损伤药物的应用。
Description
技术领域
本发明涉及大苞荆芥地上部分分离纯化技术领域，是一种大苞荆芥提取物中松香烷二萜及其制备方法和应用，其中，大苞荆芥提取物中松香烷二萜为所述Nepetabrate H的简称。
背景技术
大苞荆芥Nepeta bracteata Benth.为唇形科(Labiatae)荆芥属Nepeta植物，英文名为Zoofa(或Zopha)，是一种国内外传统民族医常用药材。以干燥的全草为入药，主要用于湿寒性和黏液性呼吸器官疾病治疗，如寒性哮喘、气管炎、肺炎、胸膜炎等。大苞荆芥的活性物质基础为二萜类化合物。特别其所含松香烷二萜类成分在防治肝脏损伤方面具有较好的抗肝损伤活性,且不良反应小、从而得到广大中外科研工作者的重视。因此，开发和利用大苞荆芥的的松香烷二萜类单体化合物，进一步挖掘其潜在的药用价值，并对其单体化合物的结构和理化性质进行确定和表征，对于开发利用大苞荆芥植物具有重要意义。
发明内容
本发明提供了一种大苞荆芥提取物中松香烷二萜及其制备方法和应用，克服了上述现有技术之不足，本发明首次公开了Nepetabrate H，本发明Nepetabrate H对APAP诱导HepG-2细胞损伤具有明显的保护作用，从而使得Nepetabrate H能够作为制备预防肝脏损伤药物的应用。
本发明的技术方案之一是通过以下措施来实现的：一种Nepetabrate H，化学结构式为：
下面是对上述发明技术方案之一的进一步优化或/和改进：
上述Nepetabrate H按照下述方法得到：第一步，将大苞荆芥地上部分粉碎过筛并加入乙醇，在室温下浸泡3小时至4小时后，在50℃至60℃条件下加热回流提取3次，每次1小时至3小时，合并每次回流提取液并减压回收、浓缩，得大苞荆芥总浸膏；第二步，将大苞荆芥总浸膏用水分散成混悬液后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯进行萃取将萃取液浓缩得到各部位浸膏；第三步，取石油醚部位浸膏用硅胶柱色谱梯度洗脱分离后得到8个馏分，其中，硅胶柱色谱梯度洗脱液包括石油醚和乙酸乙酯，石油醚和乙酸乙酯的体积比依次为1:0、100:1、50:1、25:1、8:1、5:1、1:1、0:1；第四步，将第3个馏分用硅胶柱色谱梯度洗脱分离后得到3个馏分，其中，硅胶柱色谱梯度洗脱液包括石油醚和乙酸乙酯，石油醚和乙酸乙酯的体积比依次为10:1、5:1、3:1；第五步，将第四步得到的第1个馏分经高效液相色谱梯度洗脱后纯化分离，并收集洗脱物，在第50.5分钟处得到Nepetabrate H。
上述第一步中，每1g大苞荆芥地上部分加入8mL至12mL乙醇。
上述第五步中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇和水的混合液，其中，甲醇和水的体积比为85：15。
本发明的技术方案之二是通过以下措施来实现的：一种Nepetabrate H的制备方法，其特征在于按照下述步骤进行：第一步，将大苞荆芥地上部分粉碎过筛并加入乙醇，在室温下浸泡3小时至4小时后，在50℃至60℃条件下加热回流提取3次，每次1小时至3小时，合并每次回流提取液并减压回收、浓缩，得大苞荆芥总浸膏；第二步，将大苞荆芥总浸膏用水分散成混悬液后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯进行萃取将萃取液浓缩得到各部位浸膏；第三步，取石油醚部位浸膏用硅胶柱色谱梯度洗脱分离后得到8个馏分，其中，硅胶柱色谱梯度洗脱液包括石油醚和乙酸乙酯，石油醚和乙酸乙酯的体积比依次为1:0、100:1、50:1、25:1、8:1、5:1、1:1、0:1；第四步，将第3个馏分用硅胶柱色谱梯度洗脱分离后得到3个馏分，其中，硅胶柱色谱梯度洗脱液包括石油醚和乙酸乙酯，石油醚和乙酸乙酯的体积比依次为10:1、5:1、3:1；第五步，将第四步得到的第1个馏分经高效液相色谱梯度洗脱后纯化分离，并收集洗脱物，在第50.5分钟处得到Nepetabrate H。
下面是对上述发明技术方案之二的进一步优化或/和改进：
上述第一步中，每1g大苞荆芥地上部分加入8mL至12mL乙醇。
上述第五步中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇和水的混合液，其中，甲醇和水的体积比为85：15。
本发明的技术方案之三是通过以下措施来实现的：一种Nepetabrate H在制备防治人肝癌细胞药物中的应用。
本发明的技术方案之四是通过以下措施来实现的：一种Nepetabrate H在制备预防人肝癌细胞药物中的应用。
本发明的技术方案之五是通过以下措施来实现的：一种Nepetabrate H在制备预防人肝癌细胞保健品中的应用。
本发明首次公开了Nepetabrate H，本发明Nepetabrate H对乙酰氨基酚(APAP)诱导人肝癌细胞(HepG-2)损伤具有明显的保护作用，从而使得本发明Nepetabrate H能够作为制备防治肝脏损伤药物的应用。
附图说明
附图1为本发明Nepetabrate H的化学结构图。
附图2为本发明Nepetabrate H的HR-MS图谱。
附图3为本发明Nepetabrate H的1H-NMR谱图。
附图4为本发明Nepetabrate H的13C-APT谱图。
附图5为本发明Nepetabrate H的H1-H1 COSY谱图。
附图6为本发明Nepetabrate H的HSQC谱图。
附图7为本发明Nepetabrate H的HMBC谱图。
附图8为本发明Nepetabrate H的NOESY谱图。
具体实施方式
本发明不受下述实施例的限制，可根据本发明的技术方案与实际情况来确定具体的实施方式。本发明中所提到各种化学试剂和化学用品如无特殊说明，均为现有技术中公知公用的化学试剂和化学用品；本发明中的百分数如没有特殊说明，均为质量重量百分数；本发明中的溶液若没有特殊说明，均为溶剂为水的水溶液，例如，盐酸溶液即为盐酸水溶液；本发明中的常温、室温一般指15℃到25℃的温度，一般定义为25℃。
下面结合实施例对本发明作进一步描述：
实施例1：该Nepetabrate H，化学结构式为：
实施例2：作为上述实施例的优化，按照下述方法得到：第一步，将大苞荆芥地上部分粉碎过筛并加入乙醇，在室温下浸泡3小时至4小时后，在50℃至60℃条件下加热回流提取3次，每次1小时至3小时，合并每次回流提取液并减压回收、浓缩，得大苞荆芥总浸膏；第二步，将大苞荆芥总浸膏用水分散成混悬液后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯进行萃取将萃取液浓缩得到各部位浸膏；第三步，取石油醚部位浸膏用硅胶柱色谱梯度洗脱分离后得到8个馏分，其中，硅胶柱色谱梯度洗脱液包括石油醚和乙酸乙酯，石油醚和乙酸乙酯的体积比依次为1:0、100:1、50:1、25:1、8:1、5:1、1:1、0:1；第四步，将第3个馏分用硅胶柱色谱梯度洗脱分离后得到3个馏分，其中，硅胶柱色谱梯度洗脱液包括石油醚和乙酸乙酯，石油醚和乙酸乙酯的体积比依次为10:1、5:1、3:1；第五步，将第四步得到的第1个馏分经高效液相色谱梯度洗脱后纯化分离，并收集洗脱物，在第50.5分钟处得到Nepetabrate H。
实施例3：作为上述实施例的优化，第一步中，每1g大苞荆芥地上部分加入8mL至12mL乙醇。
实施例4：作为上述实施例的优化，第五步中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇和水的混合液，其中，甲醇和水的体积比为85：15。
实施例5：该Nepetabrate H的制备方法按照下述方法进行：第一步，将大苞荆芥地上部分粉碎过筛并加入乙醇，在室温下浸泡3小时至4小时后，在50℃至60℃条件下加热回流提取3次，每次1小时至3小时，合并每次回流提取液并减压回收、浓缩，得大苞荆芥总浸膏；第二步，将大苞荆芥总浸膏用水分散成混悬液后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯进行萃取将萃取液浓缩得到各部位浸膏；第三步，取石油醚部位浸膏用硅胶柱色谱梯度洗脱分离后得到8个馏分，其中，硅胶柱色谱梯度洗脱液包括石油醚和乙酸乙酯，石油醚和乙酸乙酯的体积比依次为1:0、100:1、50:1、25:1、8:1、5:1、1:1、0:1；第四步，将第3个馏分用硅胶柱色谱梯度洗脱分离后得到3个馏分，其中，硅胶柱色谱梯度洗脱液包括石油醚和乙酸乙酯，石油醚和乙酸乙酯的体积比依次为10:1、5:1、3:1；第五步，将第四步得到的第1个馏分经高效液相色谱梯度洗脱后纯化分离，并收集洗脱物，在第50.5分钟处得到Nepetabrate H。
实施例6：该Nepetabrate H在制备防治人肝癌细胞药物中的应用。
实施例7：该Nepetabrate H在制备预防人肝癌细胞药物中的应用。
实施例8：该Nepetabrate H在制备预防人肝癌细胞保健品中的应用。
实施例9：该Nepetabrate H按照下述方法得到：第一步，将6kg大苞荆芥地上部分粉碎过筛并加入40L乙醇，在室温下浸泡3小时后，在50℃条件下加热回流提取3次，每次2小时，合并每次回流提取液并减压回收、浓缩，得大苞荆芥总浸膏；第二步，将437.0g大苞荆芥总浸膏用水分散成混悬液后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯进行萃取将萃取液浓缩得到各部位浸膏；第三步，取石油醚部位浸膏用硅胶柱色谱梯度洗脱分离后得到8个馏分，其中，硅胶柱色谱梯度洗脱液包括石油醚和乙酸乙酯，石油醚和乙酸乙酯的体积比依次为1:0、100:1、50:1、25:1、8:1、5:1、1:1、0:1；第四步，将第3个馏分用硅胶柱色谱梯度洗脱分离后得到3个馏分，其中，硅胶柱色谱梯度洗脱液包括石油醚和乙酸乙酯，石油醚和乙酸乙酯的体积比依次为10:1、5:1、3:1；第五步，将第四步得到的第1个馏分经高效液相色谱梯度洗脱后纯化分离，并收集洗脱物，在第50.5分钟处得到Nepetabrate H。
将本发明实施例9得到的Nepetabrate H进行核磁共振氢谱(1H-NMR)和核磁共振碳谱(13C-APT)分析。HR-MS图谱、1H-NMR谱图、13C-APT谱图、H1-H1 COSY谱图、HSQC谱图、HMBC谱图、NOESY谱图如图2至图3所示。
结合图2、图5、图6、图7、图8对图3和图4进行图谱解析，将图3和图4各峰进行归属，图3和图4的峰归属如表1所示。通过图3、图4和表1的数据可知，本发明Nepetabrate H的化学结构式如图1所示，本发明Nepetabrate H为无定形粉末，易溶于氯仿、甲醇。
将本发明Nepetabrate H进行体外细胞毒性实验，体外细胞毒性实验利用MTT比色法。
以Nepetabrate H为实验组，以联苯双酯(保肝药物)为对照组，同时设立模型组，实验组、对照组和模型组选取HepG-2(人肝癌细胞)细胞为实验对象，培养基稀释后，以6×104/ml的密度接种于96孔板，每孔100μl，培养箱中正常培养24小时后，各组加入相对应的药物，使各组药物的最终浓度分别为25μg/ml，50μg/ml，100μg/ml，共设3个浓度，每个浓度3个复孔；孵育24小时后，各组加入相应的APAP，终浓度为25mM；培养24小时后，于每孔加MTT10μl染色；继续培养四小时后，吸弃原培养液，每孔加入DMSO 150μl，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解，并于酶联免疫检测仪570nm波长处检测光密度值，根据光密度值计算细胞存活率，光密度值计算细胞存活率的计算方法为现有公知技术。实验组对HepG-2细胞的存活率如表2所示。表2数据可以看出，本发明Nepetabrate H对APAP诱导HepG-2细胞损伤具有明显的保护作用，且在低、中浓度时效果优于联苯双酯(与对照组相比，P<0.05)，高浓度时与联苯双酯效果相当。
综上所述，本发明首次公开了Nepetabrate H，本发明Nepetabrate H对HepG-2细胞无毒性作用，对APAP诱导的HepG-2细胞损伤具有明显的保护作用，从而使得本发明Nepetabrate H能够作为制备保肝药物的应用。
以上技术特征构成了本发明的实施例，其具有较强的适应性和实施效果，可根据实际需要增减非必要的技术特征，来满足不同情况的需求。
表1
表2
Claims (10)
1.一种Nepetabrate H，其特征在于化学结构式为：
2.根据权利要求1所述的Nepetabrate H，其特征在于按照下述方法得到：第一步，将大苞荆芥地上部分粉碎过筛并加入乙醇，在室温下浸泡3小时至4小时后，在50℃至60℃条件下加热回流提取3次，每次1小时至3小时，合并每次回流提取液并减压回收、浓缩，得大苞荆芥总浸膏；第二步，将大苞荆芥总浸膏用水分散成混悬液后，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯进行萃取将萃取液浓缩得到各部位浸膏；第三步，取石油醚部位浸膏用硅胶柱色谱梯度洗脱分离后得到8个馏分，其中，硅胶柱色谱梯度洗脱液包括石油醚和乙酸乙酯，石油醚和乙酸乙酯的体积比依次为1:0、100:1、50:1、25:1、8:1、5:1、1:1、0:1；第四步，将第3个馏分用硅胶柱色谱梯度洗脱分离后得到3个馏分，其中，硅胶柱色谱梯度洗脱液包括石油醚和乙酸乙酯，石油醚和乙酸乙酯的体积比依次为10:1、5:1、3:1；第五步，将第四步得到的第1个馏分经高效液相色谱梯度洗脱后纯化分离，并收集洗脱物，在第50.5分钟处得到Nepetabrate H。
3.根据权利要求2所述的，其特征在于第一步中，每1g大苞荆芥地上部分加入8mL至12mL乙醇。
4.根据权利要求2或3所述的Nepetabrate H，其特征在于第五步中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇和水的混合液，其中，甲醇和水的体积比为85:15。
5.一种根据权利要求1所述的Nepetabrate H的制备方法，其特征在于按照下述步骤进行：第一步，将大苞荆芥地上部分粉碎过筛并加入乙醇，在室温下浸泡3小时至4小时后，在50℃至60℃条件下加热回流提取3次，每次1小时至3小时，合并每次回流提取液并减压回收、浓缩，得大苞荆芥总浸膏；第二步，将大苞荆芥总浸膏用水分散成混悬液后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯进行萃取将萃取液浓缩得到各部位浸膏；第三步，取石油醚部位浸膏用硅胶柱色谱梯度洗脱分离后得到8个馏分，其中，硅胶柱色谱梯度洗脱液包括石油醚和乙酸乙酯，石油醚和乙酸乙酯的体积比依次为1:0、100:1、50:1、25:1、8:1、5:1、1:1、0:1；第四步，将第3个馏分用硅胶柱色谱梯度洗脱分离后得到3个馏分，其中，硅胶柱色谱梯度洗脱液包括石油醚和乙酸乙酯，石油醚和乙酸乙酯的体积比依次为10:1、5:1、3:1；第五步，将第四步得到的第1个馏分经高效液相色谱梯度洗脱后纯化分离，并收集洗脱物，在第50.5分钟处得到Nepetabrate H。
6.根据权利要求5所述的Nepetabrate H的制备方法，其特征在于第一步中，每1g大苞荆芥地上部分加入8mL至12mL乙醇。
7.根据权利要求5或6所述的Nepetabrate H的制备方法，其特征在于第五步中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇和水的混合液，其中，甲醇和水的体积比为85：15。
8.一种根据权利要求1或2或3或4所述的Nepetabrate H在制备防治人肝癌细胞药物中的应用。
9.一种根据权利要求1或2或3或4所述的Nepetabrate H在制备预防人肝癌细胞药物中的应用。
10.一种根据权利要求1或2或3或4所述的Nepetabrate H在制备预防人肝癌细胞保健品中的应用。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115448827A (zh) * | 2022-10-20 | 2022-12-09 | 杭州师范大学 | 一种含末端双键的松香烷型二萜化合物及其制备方法和应用 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102295545A (zh) * | 2010-06-23 | 2011-12-28 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 利用三尖杉培养细胞生物合成松香烷二萜类化合物的方法 |
| WO2017215676A1 (zh) * | 2016-06-13 | 2017-12-21 | 赵吉永 | 卡比多巴的药物组合物及其治疗肝癌的医药用途 |
| RU2665975C1 (ru) * | 2017-08-24 | 2018-09-05 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Сибирский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО СибГМУ Минздрава России) | Способ выделения 3-оксо-8-гидрокси-1,5,7а,4,8в(н)-гвай-10(14),11(13)-диен-12,6-олида |
| CN113336634A (zh) * | 2021-04-26 | 2021-09-03 | 杭州师范大学 | 一种17(15→16)-移-松香烷型二萜化合物、制备方法及药物组合物和应用 |
| CN113831245A (zh) * | 2021-09-08 | 2021-12-24 | 新疆维吾尔自治区中药民族药研究所 | 大苞荆芥提取物中的二萜及其制备方法和应用 |
| CN113861008A (zh) * | 2021-09-08 | 2021-12-31 | 新疆维吾尔自治区中药民族药研究所 | 大苞松香二萜及其制备方法和作为制备预防或/和治疗炎症的抗炎、抗菌药物中的应用 |
| CN114044734A (zh) * | 2021-09-08 | 2022-02-15 | 新疆维吾尔自治区中药民族药研究所 | 松香烷二萜及其制备方法和应用 |
-
2022
- 2022-06-07 CN CN202210637062.8A patent/CN114890870A/zh active Pending
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102295545A (zh) * | 2010-06-23 | 2011-12-28 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 利用三尖杉培养细胞生物合成松香烷二萜类化合物的方法 |
| WO2017215676A1 (zh) * | 2016-06-13 | 2017-12-21 | 赵吉永 | 卡比多巴的药物组合物及其治疗肝癌的医药用途 |
| RU2665975C1 (ru) * | 2017-08-24 | 2018-09-05 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Сибирский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО СибГМУ Минздрава России) | Способ выделения 3-оксо-8-гидрокси-1,5,7а,4,8в(н)-гвай-10(14),11(13)-диен-12,6-олида |
| CN113336634A (zh) * | 2021-04-26 | 2021-09-03 | 杭州师范大学 | 一种17(15→16)-移-松香烷型二萜化合物、制备方法及药物组合物和应用 |
| CN113831245A (zh) * | 2021-09-08 | 2021-12-24 | 新疆维吾尔自治区中药民族药研究所 | 大苞荆芥提取物中的二萜及其制备方法和应用 |
| CN113861008A (zh) * | 2021-09-08 | 2021-12-31 | 新疆维吾尔自治区中药民族药研究所 | 大苞松香二萜及其制备方法和作为制备预防或/和治疗炎症的抗炎、抗菌药物中的应用 |
| CN114044734A (zh) * | 2021-09-08 | 2022-02-15 | 新疆维吾尔自治区中药民族药研究所 | 松香烷二萜及其制备方法和应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 张大永;施连勇;吴晓明;: "松香烷内酯型大戟二萜化合物的研究进展", 有机化学, no. 02, pages 188 - 196 * |
| 董婧婧;闫志慧;赵敏;向华;李玉山;朱仝飞;王大成;邓旭明;: "蓝萼香茶菜根中的1个新松香烷二萜苷类化合物", 中草药, no. 19, pages 2647 - 2649 * |
| 阿提坎木·瓦合甫等: "神香草与大苞荆芥体外抗氧化活性研究", 《中国实验方剂学杂志》, vol. 20, no. 5, pages 106 - 109 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115448827A (zh) * | 2022-10-20 | 2022-12-09 | 杭州师范大学 | 一种含末端双键的松香烷型二萜化合物及其制备方法和应用 |
| CN115448827B (zh) * | 2022-10-20 | 2024-01-30 | 杭州师范大学 | 一种含末端双键的松香烷型二萜化合物及其制备方法和应用 |
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