CN114805030B - 大苞荆芥提取物中二萜类成分及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及大苞荆芥地上部分分离纯化技术领域，是一种NepetabrateF及其制备方法和作为制备预防肿瘤和抗肿瘤药物的应用，前者是将大苞荆芥地上部分经乙醇加热回流提取得大苞荆芥总浸膏，用石油醚、氯仿、乙酸乙酯进行萃取得到石油醚部位浸膏，再用硅胶柱色谱梯度洗脱分离，将第3个馏分经高效液相色谱梯度洗脱后纯化分离得到。本发明首次公开了NepetabrateF，本发明所述的NepetabrateF对HepG‑2细胞和HeLa细胞具有较强的抑制作用，从而使得NepetabrateF能够作为制备预防肿瘤药物和抗肿瘤药物的应用。
Description
技术领域
本发明涉及大苞荆芥地上部分分离纯化技术领域，是一种大苞荆芥提取物中二萜类成分及其制备方法和应用，其中，大苞荆芥提取物中二萜类成分为所述Nepetabrate F的简称。
背景技术
萜类化合物是天然产物中的一大类，也是结构种类最为复杂、生物活性最为多样的天然产物类别之一。大苞荆芥Nepeta bracteata Benth.为唇形科(Labiatae)荆芥属Nepeta植物，维吾尔名为“祖发印地”，为一种进口药材，现代药理学研究表明其所含的萜类化合物成分具有包括中枢神经系统作用、心血管系统作用、抗肿瘤、抗病毒等在内的广泛的药理活性。因此，开发和利用大苞荆芥的萜类体化合物，进一步挖掘其潜在的药用价值，并对其单体化合物的结构和理化性质进行确定和表征，系统评价萜类化合物抗肿瘤的能力对于开发利用大苞荆芥植物具有重要意义。
发明内容
本发明提供了一种大苞荆芥提取物中二萜类成分及其制备方法和应用，克服了上述现有技术之不足，本发明首次公开了Nepetabrate F，本发明所述的Nepetabrate F对HepG-2 细胞和HeLa细胞具有较强的抑制作用，从而使得Nepetabrate F能够作为制备预防肿瘤药物和抗肿瘤药物的应用。
本发明的技术方案之一是通过以下措施来实现的：一种Nepetabrate F，化学结构式为
下面是对上述发明技术方案之一的进一步优化或/和改进：
上述Nepetabrate F按照下述方法得到：第一步，将大苞荆芥地上部分粉碎过筛并加入乙醇，在室温下浸泡3小时至4小时后，在50℃至60℃条件下加热回流提取3次，每次1小时至3小时，合并每次回流提取液并减压回收、浓缩，得大苞荆芥总浸膏；第二步，将大苞荆芥总浸膏用水分散成混悬液后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯进行萃取，将萃取液浓缩得到各部位浸膏；第三步，取石油醚部位浸膏用硅胶柱色谱梯度洗脱分离后得到8个馏分，其中，硅胶柱色谱梯度洗脱液包括氯仿和甲醇，氯仿和甲醇的体积比依次为1:0、100:1、80:1、50:1、40:1、30:1、10:1、4:1；第四步，将第3个馏分经高效液相色谱梯度洗脱后纯化分离，并收集洗脱物，在第18.5分钟处得到Nepetabrate F。
上述第一步中，每1g大苞荆芥地上部分加入8mL至12mL乙醇。
上述第四步中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇和水的混合液，其中，甲醇和水的体积比为85：15。
本发明的技术方案之二是通过以下措施来实现的：一种Nepetabrate F的制备方法，其特征在于按照下述步骤进行：第一步，将大苞荆芥地上部分粉碎过筛并加入乙醇，在室温下浸泡3小时至4小时后，在50℃至60℃条件下加热回流提取3次，每次1小时至3 小时，合并每次回流提取液并减压回收、浓缩，得大苞荆芥总浸膏；第二步，将大苞荆芥总浸膏用水分散成混悬液后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯进行萃取，将萃取液浓缩得到各部位浸膏；第三步，取石油醚部位浸膏用硅胶柱色谱梯度洗脱分离后得到8个馏分，其中，硅胶柱色谱梯度洗脱液包括氯仿和甲醇，氯仿和甲醇的体积比依次为1:0、100:1、 80:1、50:1、40:1、30:1、10:1、4:1；第四步，将第3个馏分经高效液相色谱梯度洗脱后纯化分离，并收集洗脱物，在第18.5分钟处得到Nepetabrate F。
下面是对上述发明技术方案之二的进一步优化或/和改进：
上述第一步中，每1g大苞荆芥地上部分加入8mL至12mL乙醇。
上述第四步中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇和水的混合液，其中，甲醇和水的体积比为85：15。
本发明的技术方案之三是通过以下措施来实现的：一种Nepetabrate F作为制备预防肿瘤药物的应用。
本发明的技术方案之四是通过以下措施来实现的：一种Nepetabrate F作为制备抗肿瘤药物的应用。
本发明的技术方案之五是通过以下措施来实现的：一种Nepetabrate F作为制备防治肿瘤保健品的应用。
本发明首次公开了Nepetabrate F，本发明所述的Nepetabrate F对HepG-2细胞和HeLa细胞具有较强的抑制作用，从而使得Nepetabrate F能够作为制备预防肿瘤药物和抗肿瘤药物的应用。
附图说明
附图1为本发明Nepetabrate F的化学结构图。
附图2为本发明Nepetabrate F的HR-MS图谱。
附图3为本发明Nepetabrate F的1H-NMR谱图。
附图4为本发明Nepetabrate F的13C-APT谱图。
附图5为本发明Nepetabrate F的H1-H1 COSY谱图。
附图6为本发明Nepetabrate F的HSQC谱图。
附图7为本发明Nepetabrate F的HMBC谱图。
附图8为本发明Nepetabrate F的NOESY谱图。。
具体实施方式
本发明不受下述实施例的限制，可根据本发明的技术方案与实际情况来确定具体的实施方式。本发明中所提到各种化学试剂和化学用品如无特殊说明，均为现有技术中公知公用的化学试剂和化学用品；本发明中的百分数如没有特殊说明，均为质量重量百分数；本发明中的溶液若没有特殊说明，均为溶剂为水的水溶液，例如，盐酸溶液即为盐酸水溶液；本发明中的常温、室温一般指15℃到25℃的温度，一般定义为25℃。
下面结合实施例对本发明作进一步描述：
实施例1：该Nepetabrate F，化学结构式为
将本实施例所述的Nepetabrate F进行核磁共振氢谱(1H-NMR)和核磁共振碳谱(13C-APT)分析，本实施例所述的Nepetabrate F的1H-NMR谱图如图3所示，实施例所述的Nepetabrate F的13C-APT谱图如图4所示，结合图2、图5、图6、图7、图8对图 3和图4进行图谱解析，将图3和图4各峰进行归属，图3和图4的峰归属如表1所示。通过图3、图4和表1的数据可知，本实施例所述的Nepetabrate F的化学结构式如图1 所示，本实施例所述的Nepetabrate F为无定形粉末，易溶于氯仿、甲醇。
实施例2：作为上述实施例的优化，该Nepetabrate F按照下述方法得到：第一步，将大苞荆芥地上部分粉碎过筛并加入乙醇，在室温下浸泡3小时至4小时后，在50℃至 60℃条件下加热回流提取3次，每次1小时至3小时，合并每次回流提取液并减压回收、浓缩，得大苞荆芥总浸膏；第二步，将大苞荆芥总浸膏用水分散成混悬液后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯进行萃取，将萃取液浓缩得到各部位浸膏；第三步，取石油醚部位浸膏用硅胶柱色谱梯度洗脱分离后得到8个馏分，其中，硅胶柱色谱梯度洗脱液包括氯仿和甲醇，氯仿和甲醇的体积比依次为1:0、100:1、80:1、50:1、40:1、30:1、10:1、4:1；第四步，将第3个馏分经高效液相色谱梯度洗脱后纯化分离，并收集洗脱物，在第18.5 分钟处得到Nepetabrate F。
实施例3：作为上述实施例的优化，第一步中，每1g大苞荆芥地上部分加入8mL 至12mL乙醇。
实施例4：作为上述实施例的优化，第四步中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇和水的混合液，其中，甲醇和水的体积比为85：15。
实施例5：该Nepetabrate F的制备方法，按照下述步骤进行：第一步，将大苞荆芥地上部分粉碎过筛并加入乙醇，在室温下浸泡3小时至4小时后，在50℃至60℃条件下加热回流提取3次，每次1小时至3小时，合并每次回流提取液并减压回收、浓缩，得大苞荆芥总浸膏；第二步，将大苞荆芥总浸膏用水分散成混悬液后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯进行萃取，将萃取液浓缩得到各部位浸膏；第三步，取石油醚部位浸膏用硅胶柱色谱梯度洗脱分离后得到8个馏分，其中，硅胶柱色谱梯度洗脱液包括氯仿和甲醇，氯仿和甲醇的体积比依次为1:0、100:1、80:1、50:1、40:1、30:1、10:1、4:1；第四步，将第3个馏分经高效液相色谱梯度洗脱后纯化分离，并收集洗脱物，在第18.5分钟处得到 Nepetabrate F。
实施例6：该Nepetabrate F作为制备预防肿瘤药物的应用。
实施例7：该Nepetabrate F作为制备抗肿瘤药物的应用。
实施例8：该Nepetabrate F作为制备防治肿瘤保健品的应用。
实施例9：该Nepetabrate F按照下述方法得到：第一步，将6kg大苞荆芥地上部分粉碎过筛并加入40L乙醇，在室温下浸泡3小时后，在50℃条件下加热回流提取3次，每次2小时，合并每次回流提取液并减压回收、浓缩，得大苞荆芥总浸膏；第二步，将 437.0g大苞荆芥总浸膏用水分散成混悬液后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯进行萃取，将萃取液浓缩得到各部位浸膏；第三步，取134.8g石油醚部位浸膏用硅胶柱色谱梯度洗脱分离后得到8个馏分，氯仿和甲醇的体积比依次为1:0、100:1、80:1、50:1、40:1、 30:1、10:1、4:1；第四步，将第3个馏分经高效液相色谱梯度洗脱后纯化分离，并收集洗脱物，在第18.5分钟处得到Nepetabrate F。
将本发明实施例9得到的Nepetabrate F进行核磁共振氢谱(1H-NMR)和核磁共振碳谱(13C-APT)分析。HR-MS图谱、1H-NMR谱图、13C-APT谱图、H1-H1 COSY谱图、HSQC 谱图、HMBC谱图、NOESY谱图如图2至图8所示。
结合图2、图5、图6、图7、图8对图3和图4进行图谱解析，将图3和图4各峰进行归属，图3和图4的峰归属如表1所示。通过图3、图4和表1的数据可知，本发明 Nepetabrate F的化学结构式如图1所示，本发明Nepetabrate F为无定形粉末，易溶于氯仿、甲醇。
将本发明所述的Nepetabrate F进行体外抗肿瘤药效学实验，体外抗肿瘤药效学实验利用MTT比色法。
以Nepetabrate F为实验组，以Paclitaxel(紫杉醇，抗肿瘤药物)为对照组，同时设立空白组，实验组、对照组和空白组选取HepG-2(人肝癌细胞)细胞和HeLa(人宫颈癌)细胞为实验对象，培养基稀释后，以6×104/mL的密度接种于96孔板，每孔100 μl，培养箱中正常培养24小时后，各组加入相对应的药物，使各组药物的最终浓度分别为2.5μg/mL(1组)，5μg/mL(2组)，10μg/mL(3组)，20μg/mL(4组)，40μ g/mL(5组)，共设5个浓度，每个浓度3个复孔；培养48小时后，于每孔加MTT 10μl 染色；继续培养四小时后，吸弃原培养液，每孔加入DMSO 150μl，置摇床上低速振荡10 min，使结晶物充分溶解，并于酶联免疫检测仪570nm波长处检测光密度值，根据光密度值计算50％抑制浓度(IC50，μg/mL)，光密度值计算IC50的计算方法为现有公知技术。实验组、对照组对HepG-2细胞和HeLa细胞的IC50如表2所示。表2数据可以看出，本发明所述的Nepetabrate F对HepG-2细胞和HeLa细胞均具有一定的抑制作用。
综上所述，本发明首次公开了Nepetabrate F，本发明所述的Nepetabrate F对HepG-2 细胞和HeLa细胞具有较强的抑制作用，从而使得Nepetabrate F能够作为制备预防肿瘤药物和抗肿瘤药物的应用。
以上技术特征构成了本发明的实施例，其具有较强的适应性和实施效果，可根据实际需要增减非必要的技术特征，来满足不同情况的需求。
表1
表2
Claims (6)
1.一种化合物，其特征在于其化学结构式为
2.一种根据权利要求1所述的化合物的制备方法，其特征在于按照下述步骤进行：第一步，将大苞荆芥地上部分粉碎过筛并加入乙醇，在室温下浸泡3小时至4小时后，在50℃至60℃条件下加热回流提取3次，每次1小时至3小时，合并每次回流提取液并减压回收、浓缩，得大苞荆芥总浸膏；第二步，将大苞荆芥总浸膏用水分散成混悬液后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯进行萃取，将萃取液浓缩得到各部位浸膏；第三步，取石油醚部位浸膏用硅胶柱色谱梯度洗脱分离后得到8个馏分，其中，硅胶柱色谱梯度洗脱液包括氯仿和甲醇，氯仿和甲醇的体积比依次为1:0、100:1、80:1、50:1、40:1、30:1、10:1、4:1；第四步，将第3个馏分经高效液相色谱梯度洗脱后纯化分离，并收集洗脱物，在第18.5分钟处得到化合物。
3.根据权利要求2所述的化合物的制备方法，其特征在于第一步中，每1g大苞荆芥地上部分加入8mL至12mL乙醇。
4.根据权利要求2或3所述的化合物的制备方法，其特征在于第四步中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇和水的混合液，其中，甲醇和水的体积比为85：15。
5.一种根据权利要求1所述的化合物作为制备预防宫颈癌肿瘤药物和预防肝癌肿瘤药物的应用。
6.一种根据权利要求1所述的化合物作为制备抗宫颈癌肿瘤药物和抗肝癌肿瘤药物的应用。
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