CN114875034A - 一种同时检测赭曲霉毒素a和玉米赤霉烯酮的三维dna纳米镊子及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种同时检测赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的三维DNA纳米镊子及其制备方法和应用，涉及生物检测技术领域。本发明所述三维DNA纳米镊子，当目标物存在时，三维DNA纳米镊子中目标物的适配体与目标物发生特异性结合，从DNA纳米镊子中脱落下来，从而产生“闭合”状态，导致荧光基团和猝灭基团的间距减小，从而使荧光强度减小，荧光信号的强弱与目标物的含量具有一定的相关性。通过三维DNA纳米镊子的的开合状态时的荧光值强度达到对目标物进行定量检测的目的，在检测真菌毒素和小分子领域具备广阔的应用前途。

Description

一种同时检测赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的三维DNA纳米镊 子及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种同时检测赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的三维DNA纳米镊子及其制备方法和应用。
背景技术
DNA不但可以承载遗传信息，还能作为基元承担纳米材料的组建，DNA具备的程序化识别和组装功能可用来精准调控纳米材料的结构。DNA纳米技术是以DNA作为主要材料以实现某种特定功能的技术，主要包括有DNA纳米结构和DNA纳米机器等，可以应用于医学、药学、化学及生物检测等多种领域。相较于有机大分子或无机分子等材料，DNA纳米结构具有结构灵活，程序化设计，生物相容性高，成本低廉等特点，在食品安全检测等方面的应用逐渐受到认可。
核酸分子因其分子尺度小、结构稳定、操作简便可行等优点，在取代传统分子来构建纳米材料方面具有巨大的应用前景。最近几年，DNA分子不但在构建多维结构方面优势显著，也在组装灵活操作的分子机器方面不断开发研究。随着DNA分子双螺旋结构的结合和解离过程的交替进行，DNA分子受到外部刺激后也会交替进行两种状态的变化。这种DNA分子机器不仅优于DNA纳米结构，同时也拥有了较为智能的工作模式，将DNA纳米技术领域发展为由特定金属离子或分子等控制的精密纳米级机器零件。在未来有希望通过组合多个DNA分子机器零件，来组建人工生物机器去执行更复杂的任务。DNA分子机器和DNA机器人等智能性的新型DNA纳米技术受到广泛关注，其特点就是可以对外界环境给予的各种刺激做出相应的反应。DNA梭子(DNA shuttle)、DNA步行者(DNA walker)和DNA镊子(DNA tweezers)等是主要的DNA分子机器，能够不受外界环境(如核酸、pH或金属离子等)的干扰来顺利开展逻辑门运算和生物传感等各种动作。2006年，DNA镊子在DNA分子机器中首次被提出并得到广泛的关注。DNA镊子是一种动态的DNA纳米装置，“打开”和“闭合”的状态能通过DNA燃料链对其进行切换。DNA镊子在参与反应时，可清晰地看到发生荧光共振时产生的能量转移，这与在DNA镊子臂上配置的荧光分子有关。DNA镊子在特异性识别目标物的问题上有较好的优势，但是DNA镊子成本较高，因此，后期需要对该方法仍然需要进一步探索与研究，以降低其成本并扩大应用范围。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种同时检测赭曲霉毒素A(OTA)和玉米赤霉烯酮(ZEN)的三维DNA纳米镊子及其制备方法和应用，通过测量荧光强度的变化实现OTA和ZEN的同时定量检测。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种同时检测赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的三维DNA纳米镊子，所述三维DNA纳米镊子包含P1～P8共8条寡核苷酸链，其中P1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，P2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，P3的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，P4的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，P5的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，P6的核苷酸序列如SEQ IDNO.6所示，P7的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，P8的核苷酸序列如SEQ ID NO.87所示；
在P5和P6的核苷酸序列中各包含一个荧光基团和一个淬灭基团。
优选的，所述荧光基团包括Cy5和Cy3；所述淬灭基团包括BHQ-3和BHQ-2。
优选的，在P5的5’端连接Cy5，3’端连接BHQ-3；在P6的5’端连接BHQ-2，3’端连接Cy3。
本发明还提供了上述三维DNA纳米镊子的制备方法，包括以下步骤：将P1～P8共8条寡核苷酸链等量混合后，依次经过95℃加热3min，65℃孵育3min，50℃孵育30min，37℃孵育30min和25℃孵育30min，得“打开”状态的三维DNA纳米镊子。
优选的，所述等量混合，包括将所述8条寡核苷酸链分别利用杂交缓冲液稀释成10μM，各取10μL进行混合。
本发明还提供了上述三维DNA纳米镊子在同时检测赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮中的应用。
本发明还提供了一种同时检测待测样品中赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的方法，包括以下步骤：(1)分别利用不同浓度的赭曲霉毒素A标准品和玉米赤霉烯酮标准品和“打开”状态的三维DNA纳米镊子在37℃孵育60min后，测量荧光强度并绘制标准曲线；
(2)将待测样品与“打开”状态的三维DNA纳米镊子在37℃孵育60min，将测量得到的荧光强度带入步骤(1)所述标准曲线，测定赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的存在和浓度。
优选的，所述赭曲霉毒素A标准品的浓度包括0.02ng/mL、0.1ng/mL、0.2ng/mL、1ng/mL、2ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、100ng/mL和200ng/mL；
所述玉米赤霉烯酮标准品的浓度包括0.05ng/mL、0.1ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL和500ng/mL。
优选的，所述待测样品包括食品。
优选的，测量荧光强度时，设定荧光分光光度计的参数如下：扫描速度为3000nm/min，激发波长、发射起始波长和终止波长分别为535、535和800nm，增益为15档。
有益效果：本发明提供了一种同时检测赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的三维DNA纳米镊子，以常规的平面镊子为标准，综合平面镊子的运作机理和空间四面体的结构特点，获得本发明包含空间结构的三维DNA纳米镊子。本发明所述三维DNA纳米镊子，用DNA双链来组建四面体的各条棱，可显著提高结构的稳定性。当目标物存在时，三维DNA纳米镊子中目标物的适配体与目标物发生特异性结合，从DNA纳米镊子中脱落下来，从而产生“闭合”状态，导致荧光基团和猝灭基团的间距减小，从而使荧光强度减小，荧光信号的强弱与目标物的含量具有一定的相关性。通过三维DNA纳米镊子的的开合状态时的荧光值强度达到对目标物进行定量检测的目的。在本发明实施例中，在三维DNA纳米镊子的四个悬臂上分别修饰荧光基团Cy5、BHQ-2、Cy3和BHQ-3，通过OTA及ZEN和核酸适配体的特异性识别，三维DNA纳米镊子由“打开”状态变为“闭合”状态会引起荧光强度的变化。经验证，所述三维DNA纳米镊子对OTA和ZEN的LOD分别为0.0323和0.0375ng/mL，且在0.2～200和0.5～50ng/mL范围内表现出良好的线性关系，并且在真实样品的加标回收率中展示出优异的性能，在检测真菌毒素和小分子领域具备广阔的应用前途。
附图说明
图1为三维DNA纳米镊子的结构和同时检测OTA和ZEN原理图；
图2为不同反应温度下的荧光强度对比；
图3为不同反应时间下的荧光强度对比；
图4为不同OTA浓度和不同ZEN浓度的三维DNA纳米镊子响应荧光光谱(a)，Cy5荧光强度值与OTA浓度之间的线性关系(b)，Cy3荧光强度值与ZEN浓度之间的线性关系(c)；
图5为同时检测OTA和ZEN的特异性验证结果。
具体实施方式
本发明提供了一种同时检测赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的三维DNA纳米镊子，所述三维DNA纳米镊子包含P1～P8共8条寡核苷酸链，其中P1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，P2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，P3的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，P4的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，P5的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，P6的核苷酸序列如SEQ IDNO.6所示，P7的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，P8的核苷酸序列如SEQ ID NO.87所示；
在P5和P6的核苷酸序列中各包含一个荧光基团和一个淬灭基团。
本发明所述荧光基团优选包括Cy5和Cy3；所述淬灭基团优选包括BHQ-3和BHQ-2，更优选在P5的5’端连接Cy5，3’端连接BHQ-3；在P6的5’端连接BHQ-2，3’端连接Cy3。在本发明实施例中，各寡核苷酸序列优选如表1所示，并委托上海生工生物有限公司进行合成。
表1三维DNA纳米镊子的寡核苷酸序列
Figure BDA0003633265890000041
Figure BDA0003633265890000051
本发明还提供了上述三维DNA纳米镊子的制备方法，包括以下步骤：将P1～P8共8条寡核苷酸链等量混合后，依次经过95℃加热3min，65℃孵育3min，50℃孵育30min，37℃孵育30min和25℃孵育30min，得“打开”状态的三维DNA纳米镊子。
本发明所述等量混合，优选包括将所述8条寡核苷酸链分别利用杂交缓冲液稀释成10μM，各取10μL进行混合。本发明对所述杂交缓冲液的成分并没有特殊限定，优选由10mMTris-盐酸、1mM EDTA和20mM氯化镁组成。
在本发明中，经所述制备方法制备后，得到的“打开”状态的三维DNA纳米镊子结果如图1所示，8条寡核苷酸链相互杂交组成所述三维DNA纳米镊子的结构：P1的部分链和P2的部分链进行杂交(简称P1+P2)组成棱1；P1的部分链和P4的部分链进行杂交(P1+P4)，结合P1的部分链和P6的部分链进行杂交(P1+P6)，共同组成棱2；P1+P5结合P1+P3共同组成棱3；P2+P4结合P2+P6共同组成棱4；P2+P3结合P2+P5共同组成棱5。本发明上述五条棱构建四面体，其中位于P5和P6中间的区域是分别是OTA和ZEN适配体的互补链，P7和P8分别为OTA和ZEN的适配体作为OTA和ZEN结合位点，而P5和P6中间部分则作为目标物结合的位点。当OTA和ZEN分别与P7和P8结合时，通过目标物与适配体的特异性识别作用，可以使原本坚固的双链结构变为松软的单链，使镊子由“打开”状态变为“闭合”状态，将荧光基团修饰于P5两端，荧光猝灭基团修饰于P6的两端，处于“打开”状态的三维DNA纳米镊子，由于荧光基团和猝灭基团两者相距较远，荧光基团处于发光状态，而当结合OTA和ZEN后，三维DNA纳米镊子处于“关闭”状态，两者相距较近，荧光信号变弱(图1种b)，所以，通过测量荧光强度的变化实现OTA和ZEN的同时定量检测。
本发明还提供了上述三维DNA纳米镊子在同时检测赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮中的应用。本发明所述应用优选与上述的同时检测OTA和ZEN的原理相同，在此不再赘述。
本发明还提供了一种同时检测待测样品中赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的方法，包括以下步骤：(1)分别利用不同浓度的赭曲霉毒素A标准品和玉米赤霉烯酮标准品和“打开”状态的三维DNA纳米镊子在37℃孵育60min后，测量荧光强度并绘制标准曲线；
(2)将待测样品与“打开”状态的三维DNA纳米镊子在37℃孵育60min，将测量得到的荧光强度带入步骤(1)所述标准曲线，测定赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的存在和浓度。
本发明分别利用不同浓度的赭曲霉毒素A标准品和玉米赤霉烯酮标准品和“打开”状态的三维DNA纳米镊子在37℃孵育60min后，测量荧光强度并绘制标准曲线。本发明对所述赭曲霉毒素A标准品和玉米赤霉烯酮标准品的来源并没有特殊限定，优选购自北京坛墨质检科技有限公司。在本发明实施例中，优选将所述赭曲霉毒素A标准品的浓度，依次设置为0.02ng/mL、0.1ng/mL、0.2ng/mL、1ng/mL、2ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、100ng/mL和200ng/mL；而后与“打开”状态的三维DNA纳米镊子在37℃孵育60min，然后测量荧光强度。本发明在测量荧光强度时，优选设定荧光分光光度计的参数如下：扫描速度为3000nm/min，激发波长、发射起始波长和终止波长分别为535、535和800nm，增益为15档(900V)。
在本发明实施例中，优选将所述玉米赤霉烯酮标准品的浓度，依次设置为：0.05ng/mL、0.1ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL和500ng/mL；而后与“打开”状态的三维DNA纳米镊子在37℃孵育60min，然后测量荧光强度。本发明所述测量荧光强度的方法优选与上述相同，在此不再赘述。
得标准曲线后，本发明将待测样品与“打开”状态的三维DNA纳米镊子在37℃孵育60min，将测量得到的荧光强度带入步骤(1)所述标准曲线，测定赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的存在和浓度。本发明对待测样品的处理方案优选与上述标准品相同，在此不再赘述。本发明所述待测样品优选包括食品。
下面结合实施例对本发明提供的一种同时检测赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的三维DNA纳米镊子及其制备方法和应用进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
1、委托上海生工生物有限公司合成表1所示的寡核苷酸。
2、三维DNA纳米镊子的制备
将组成三维DNA纳米镊子的DNA单链(P1-P8)用杂交缓冲液(由10mM Tris-盐酸、1mM EDTA和20mM氯化镁组成)稀释成浓度10μM，分别取10μL震荡混匀，总体积为80μL，在金属浴中95℃加热3min。然后降至65℃孵育3min，50℃孵育30min，37℃孵育30min，25℃孵育30min。将混合的DNA溶液退火以形成“打开”状态的三维DNA纳米镊子。孵育结束后置于4℃冰箱保存。
实施例2
对实施例1制备得到的“打开”状态的三维DNA纳米镊子进行检测条件的对比：
(1)反应温度：将80μL杂交完成的三维DNA纳米镊子各加入60μL浓度为100ng/mL的OTA和ZEN分别在4℃、25℃、37℃和55℃反应60min后通过对比不同温度下的荧光强度。
结果如图2所示，在37℃荧光值强度达到最大。
(2)反应时间：把80μL杂交完成的三维DNA纳米镊子分别加入60μL浓度为100ng/mL的OTA和ZEN在37℃分别孵育不同的时间(15～90min，间隔为15min，共选取6个时间节点)后通过对比其荧光强度的变化。
结果如图3所示，Cy3和Cy5的荧光值在15～60min内随着反应时间增加而降低，其荧光值在60min后保持恒定不变。
实施例3
对实施例1制备得到的“打开”状态的三维DNA纳米镊子进行检测
1、标准曲线的建立
不同浓度的OTA(0.02、0.1、0.2、1、2、10、20、100和200ng/mL)和ZEN(0.05、0.1、0.5、1、5、10、50、100和500ng/mL)分别和退火完成的三维DNA纳米镊子在37℃孵育60min后测量荧光强度。根据不同梯度的OTA和ZEN浓度的荧光强度值绘制标准曲线。
结果如图4所示，随着OTA和ZEN浓度的增加，Cy5和Cy3的荧光强度也随之逐渐减少。采用半对数线性模型对实验数据进行拟合。荧光基团Cy5在667nm处荧光值强度与不同对数浓度OTA的线性校准图如图4中(b)所示，OTA浓度在0.2～200ng/mL范围内时，与Cy5的荧光值强度呈现良好的线性关系。线性回归方程为Y＝-518.1871logX+2034.5472，R2为0.9875，其中X值为OTA的浓度，Y值是Cy5在667nm处的荧光值强度。
荧光基团Cy3在570nm处荧光值强度与不同对数浓度ZEN的线性校准图如图4中(c)所示，ZEN浓度在0.5～50ng/mL范围内时，与Cy3的荧光值强度呈现良好的线性关系。线性回归方程为Y＝-145.4253logX+740.8516，R2为0.9926，其中X值为ZEN的浓度，Y值是Cy3在570nm处的荧光值强度。采用IUPAC制定的计算方法计算OTA和ZEN的LOD分别为0.0323ng/mL和0.0375ng/mL。
2、特异性检测
选取UIOTA和ZEN同属于真菌毒素的AFB1(黄曲霉毒素B1，10mg/mL，购买于北京坛墨质检科技有限公司)、FB1(伏马毒素，5mg/mL，购买于北京坛墨质检科技有限公司)和T-2毒素(10mg/mL，购买于北京坛墨质检科技有限公司)作为干扰物来验证特异性。
具体过程是将退火完成的三维DNA纳米镊子分别与浓度为100ng/mL的AFB1、FB1和T-2毒素在37℃孵育60min后记录其荧光强度。每组样品做3组平行实验。
以非特异性分子(包括AFB1、FB1、T-2和相同体积空白组)为对照组，混合样品1(Mixed1)包含OTA和ZEN，混合样品2(Mixed2)不包含OTA和ZEN，结果如图5所示，只存在ZEN时，Cy3在570nm处的荧光值强度明显降低，只存在OTA时，Cy5在670nm处的荧光值强度明显降低，其他非特异性分子和空白组的荧光强度基本保持一致。
3、加标回收试验与实际样品检测
用研钵将干燥后的花生和玉米样品(1.5g)充分研磨后加入3mL的甲醇水溶液(20％,V/V)进行超声处理(30min)，并在12000rpm/min的转速下进行离心(20min)，收集上清液，随后将上清液过滤净化。分别将同浓度的OTA和ZEN标准样品加入到获得的上清液中。将获得的样品用作加标回收样品，并通过上述方法进行检测。
结果如表2所示，检测到的OTA和ZEN的浓度在加标后基本一致。相对标准偏差在2.3％～4.3％的范围，加标回收率在95.8％～110.2％之间，这满足了定量分析的要求。
为了进一步证明三维DNA纳米镊子技术可以应用于实际样品检测中，通过传统的ELISA进行验证，可以看出开发的三维DNA纳米镊子技术测得的OTA和ZEN的含量和ELISA所测得的结果基本一致，说明三维DNA纳米镊子具有较高的准确性，可用于实际样品的分析检测。
表2对实际样品进行OTA和ZEN的检测
Figure BDA0003633265890000091
Figure BDA0003633265890000101
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 军事科学院军事医学研究院环境医学与作业医学研究所
<120> 一种同时检测赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的三维DNA纳米镊子及其制备方法和应用
<160> 8
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
cgcgcacctg agagtccttc taatagcgtt tcctggtcaa gcggtgaact agaatgccct 60
ttgggctgtt ccgggtgtgg ctcgtcgg 88
<210> 2
<211> 89
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
ggccgaggac tcctgtcctg gtcaagcggt ttggcgaact ggtcctgcgt ctacttaccg 60
tttccgacga gccacacccg gaacagccc 89
<210> 3
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
tctcaggtgc gcgtttcggt aagtagacg 29
<210> 4
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
aggagtcctc ggcctttggg cattctagtt 30
<210> 5
<211> 66
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
cgctattaga aggactgtcc gatgctccct ttacgccacc cacacccgat ccaggaccag 60
ttcgcc 66
<210> 6
<211> 70
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
ccgcttgacc aggaccatat cacattacag atagtaatgt accatagata gatgacaccg 60
cttgaccagg 70
<210> 7
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
gatcgggtgt gggtggcgta aagggagcat cggaca 36
<210> 8
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
tcatctatct atggtacatt actatctgta atgtgatatg 40

Claims (10)

1.一种同时检测赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的三维DNA纳米镊子，其特征在于，所述三维DNA纳米镊子包含P1～P8共8条寡核苷酸链，其中P1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，P2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，P3的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，P4的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，P5的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，P6的核苷酸序列如SEQ IDNO.6所示，P7的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，P8的核苷酸序列如SEQ ID NO.87所示；
在P5和P6的核苷酸序列中各包含一个荧光基团和一个淬灭基团。
2.根据权利要求1所述三维DNA纳米镊子，其特征在于，所述荧光基团包括Cy5和Cy3；所述淬灭基团包括BHQ-3和BHQ-2。
3.根据权利要求1或2所述三维DNA纳米镊子，其特征在于，在P5的5’端连接Cy5，3’端连接BHQ-3；在P6的5’端连接BHQ-2，3’端连接Cy3。
4.权利要求1～3任一项所述三维DNA纳米镊子的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将P1～P8共8条寡核苷酸链等量混合后，依次经过95℃加热3min，65℃孵育3min，50℃孵育30min，37℃孵育30min和25℃孵育30min，得“打开”状态的三维DNA纳米镊子。
5.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，所述等量混合，包括将所述8条寡核苷酸链分别利用杂交缓冲液稀释成10μM，各取10μL进行混合。
6.权利要求1～3任一项所述三维DNA纳米镊子在同时检测赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮中的应用。
7.一种同时检测待测样品中赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)分别利用不同浓度的赭曲霉毒素A标准品和玉米赤霉烯酮标准品和“打开”状态的三维DNA纳米镊子在37℃孵育60min后，测量荧光强度并绘制标准曲线；
(2)将待测样品与“打开”状态的三维DNA纳米镊子在37℃孵育60min，将测量得到的荧光强度带入步骤(1)所述标准曲线，测定赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的存在和浓度。
8.根据权利要求7所述方法，其特征在于，所述赭曲霉毒素A标准品的浓度包括0.02ng/mL、0.1ng/mL、0.2ng/mL、1ng/mL、2ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、100ng/mL和200ng/mL；
所述玉米赤霉烯酮标准品的浓度包括0.05ng/mL、0.1ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL和500ng/mL。
9.根据权利要求7所述方法，其特征在于，所述待测样品包括食品。
10.根据权利要求7所述方法，其特征在于，测量荧光强度时，设定荧光分光光度计的参数如下：扫描速度为3000nm/min，激发波长、发射起始波长和终止波长分别为535、535和800nm，增益为15档。
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