CN114847162A - 杜鹃离体培养及微芽嫁接方法 - Google Patents

杜鹃离体培养及微芽嫁接方法 Download PDF

Info

Publication number
CN114847162A
CN114847162A CN202210546685.4A CN202210546685A CN114847162A CN 114847162 A CN114847162 A CN 114847162A CN 202210546685 A CN202210546685 A CN 202210546685A CN 114847162 A CN114847162 A CN 114847162A
Authority
CN
China
Prior art keywords
culture
bud
rhododendron
explant
grafting
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202210546685.4A
Other languages
English (en)
Inventor
郭梨锦
林蔚
施杰
何碧珠
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Fujian Agriculture and Forestry University
Original Assignee
Fujian Agriculture and Forestry University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Fujian Agriculture and Forestry University filed Critical Fujian Agriculture and Forestry University
Priority to CN202210546685.4A priority Critical patent/CN114847162A/zh
Publication of CN114847162A publication Critical patent/CN114847162A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01HNEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/008Methods for regeneration to complete plants
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01GHORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G17/00Cultivation of hops, vines, fruit trees, or like trees
    • A01G17/005Cultivation methods
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01GHORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G2/00Vegetative propagation
    • A01G2/30Grafting
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01GHORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G22/00Cultivation of specific crops or plants not otherwise provided for
    • A01G22/60Flowers; Ornamental plants
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01GHORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G24/00Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor
    • A01G24/10Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor based on or containing inorganic material
    • A01G24/12Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor based on or containing inorganic material containing soil minerals
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01GHORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G24/00Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor
    • A01G24/10Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor based on or containing inorganic material
    • A01G24/12Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor based on or containing inorganic material containing soil minerals
    • A01G24/15Calcined rock, e.g. perlite, vermiculite or clay aggregates
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01GHORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G24/00Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor
    • A01G24/20Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor based on or containing natural organic material
    • A01G24/28Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor based on or containing natural organic material containing peat, moss or sphagnum
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01HNEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/002Culture media for tissue culture
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02ATECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/10Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
    • Y02A40/22Improving land use; Improving water use or availability; Controlling erosion

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Soil Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Abstract

本发明公开了杜鹃离体培养及微芽嫁接方法,其包括对杜鹃植株进行外植体移取,然后对外植体进行芽诱导和增殖培养后,获得有效苗,继而将有效苗嫁接在无菌砧木苗上并进行培养定植,最终将培养获得的嫁接苗移栽入目标土壤中;本方案培养方法成本较低,成活率较高,同时产量有所提高且品质优良,有利于高山山地杜鹃的驯化引种。

Description

杜鹃离体培养及微芽嫁接方法
技术领域
本发明涉及农业生产技术领域,尤其涉及杜鹃离体培养及微芽嫁接方法。
背景技术
杜鹃是杜鹃花科杜鹃属植物的总称,品类繁多,是我国传统十大名花之一,有“花中西施”的美誉,具有极高的观赏价值、经济价值。比如原生弯蒴杜鹃(学名:RhododendronhenryiHance),常绿灌木,高可达5米,其枝细长,灰褐色,分布于中国浙江、江西、福建、台湾、广东、广西,生于海拔500~1000米高海拔的林内;以及茶绒杜鹃(Rhododendronapricum Tam)隶属杜鹃花科(Ericaceae)杜鹃花属(Rhododendron)植物,天然分布于福建西部及西南部,生于海拔300~900高海拔林缘、疏林中或路边。茶绒杜鹃花朵繁多,紫红色、淡紫色或粉红色,排成轮伞花序;以上两者都具有极高的观赏与经济价值。此外,除具有观赏与经济价值外,杜鹃还具有一定的社会价值,例如福建宁德市高海拔地区屏南县四季开花杜鹃古树,经鉴定为锦绣杜鹃(Rhododendron pulchrum Sweet)变种,具有高山杜鹃一般特征如枝粗叶少、无种子、生长周期长,通常靠扦插繁殖,一年可四季开花,当地人将其视作神树,并常开展相关祭祀活动,可见杜鹃还具备社会价值。
杜鹃常以种子,压条,扦插等方式进行繁殖,但种子繁殖无法有效保存优良的植株及目标其品质,土传病害严重,季节性限制等问题都不利于杜鹃的生产。并且对于高山山地的杜鹃,扦插生根困难,严重制约其资源的开发与园林应用。因此亟待提出一种可针对高山山地杜鹃的驯化培养方法。
发明内容
有鉴于此,本发明的目的在于提出一种操作便利、实施可靠且所嫁接植株繁殖能力佳的杜鹃离体培养及微芽嫁接方法。
为了实现上述的技术目的,本发明所采用的技术方案为:
一种杜鹃离体培养及微芽嫁接方法,其包括对杜鹃植株进行外植体移取,然后对外植体进行芽诱导和增殖培养后,获得有效苗,继而将有效苗嫁接在无菌砧木苗上并进行培养定植,最终将培养获得的嫁接苗移栽入目标土壤中。
作为一种可能的实施方式,进一步,本方案杜鹃离体培养及微芽嫁接方法具体包括:
S1、选取杜鹃植株,对其取当年生长饱满的茎段作为外植体,然后对外植体进行清洁、消毒;
S2、将步骤S1处理后的外植体接种在芽诱导培养基中,然后以预设条件进行培养处理,使得外植体被诱导培养获得不定芽;
S3、将诱导培养得到的不定芽的芽分切成预设长度,再将其接种于增殖培养基中以预设条件培养,获得有效苗;
S4、将所选取杜鹃植株的种子进行预处理后,接种于芽诱导培养基中,然后在预设条件下培养,获得无菌砧木苗;
S5、利用嫁接针将有效苗嫁接在无菌砧木苗上,获得嫁接苗;
S6、按预设条件对嫁接苗进行培养,然后将培养获得的嫁接苗移栽入目标土壤中。
作为一种较优的选择实施方式,优选的,S1包括:选取杜鹃植株,然后对其取当年生长饱满茎段为外植体,用流水冲洗外植体表面尘土后,将其置于饱和漂白粉上清液中浸泡10min,再取出用自来水冲滴1~2h,双蒸水冲荡2~3次,再将其置于超净工作台内用体积分数为75%酒精消毒30s,5%次氯酸钠溶液处理10~13min,无菌水冲3~4遍,最后用消毒滤纸吸干表面水分后,作为接种备用。
作为一种较优的选择实施方式,优选的,S2包括:将步骤S1中处理后的外植体切成带腋芽长为1.5cm茎段接种于经高温高压灭菌处理后的芽诱导培养基上,使得外植体被诱导培养获得不定芽;培养条件为:调节培养室温度为23±2℃,保持光照时间12h/d,光照强度介于1000~15001x,培养时长25~30d。
作为一种较优的选择实施方式,优选的,S3包括:将S2诱导培养得到不定芽的芽分切长度为2~3cm,在将其接种于增殖培养基中培养,获得有效苗,增殖培养条件为:保持光照时间12h/d,光照强度介于1500~20001x,培养时长20~25d。
作为一种较优的选择实施方式,优选的,S4包括:将所选取杜鹃植株的种子用流水冲洗净后,置于饱和漂白粉上清液中浸泡10min,再取出用自来水冲滴0.5~1h,双蒸水冲荡2~3次,然后在超净工作台中用体积分数为75%的酒精消毒30s,5%次氯酸钠溶液处理10~13min,使用无菌水冲3~4遍,再用消毒滤纸吸干表面水分;经处理后种子被接种于已高温高压灭菌处理后的芽诱导培养基上培养,获得无菌砧木苗,培养条件为:调节培养室温度为23±2℃,保持光照时间12h/d,光照强度介于1000~15001x,培养时长25~30d。
作为一种较优的选择实施方式,优选的,S5包括:用嫁接针去除无菌砧木苗的真叶和生长点,但不挖出苗株,再持镊子轻用尖夹住固定砧木苗子叶节,使用嫁接针贴于其中一片子叶基部靠内侧处向另一片子叶下方斜插进0.5~0.8cm,保持斜插原状暂不拔出嫁接针,嫁接针尖端不宜刺破胚轴的表皮,将其下压至有压力感即可;再用刀片于目标子叶节下0.5cm处呈30°角斜向下方切割,切口长度为0.5~0.8cm,再从背面不对称处以相同方法切一刀,处理下胚轴呈楔形;最后拔出嫁接针,将修剪得当的有效苗紧密插入孔中,获得嫁接苗。
作为一种较优的选择实施方式,优选的,S6包括:在嫁接苗长出4~5片叶后移至自然光下炼苗7~10d,而后可移栽至经高压灭菌的培养土上;移栽步骤如下:先将已灭菌的培养土分装至各穴盘中,取出嫁接苗并清洗干净根部残留的培养基后,移栽入目标土壤中;为保持水分,穴盘上套有塑料袋,且按3~8d的频率进行一次浇水;在嫁接苗苗株生长稳定后除去塑料袋,培养20~30d后,在嫁接苗生长状态符合预设条件时,将其移至田间定植。
作为一种较优的选择实施方式,优选的,所述杜鹃植株为原生弯蒴杜鹃、茶绒杜鹃或福建四季开花杜鹃古树。
作为一种较优的选择实施方式,优选的,S2、S5中所述的芽诱导培养基的配方为:
ER+1.5mg/L 6-BA+0.5mg/L KT+0.3mg/LNAA+20g/L糖+6.5g/L琼脂+1.2g/L活性炭,其pH为5.6。
作为一种较优的选择实施方式,优选的,S3中,所述的增殖培养基的配方为:
ER+2.0mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.lmg/LNAA+0.015mg/LTDZ+25g/L糖+6.5g/L琼脂,其pH为5.6;
S6中,所述的培养土是由河沙:黄土:蛭石:泥炭土按质量比1:1:1:2混合而成的。
其中,S4中,所选取杜鹃植株的种子可以为可抗土传病害的杜鹃植株种子,通过选取可抗土传病害的杜鹃品种的种子,将其诱导培养以此得到无菌砧木苗;再将有效苗嫁接于无菌砧木苗上,后进行培养以得到生长良好且状态稳定的嫁接苗,采用自然光进行炼苗,随后移栽于温室穴盘培养,方可进行田间定植。该培养方法成本较低,成活率较高,同时产量有所提高且品质优良,有利于高山山地杜鹃的驯化引种。
采用上述的技术方案,本发明与现有技术相比,其具有的有益效果为:相比于传统的繁育方式,本发明方案提供一种原生弯蒴杜鹃、茶绒杜鹃、福建四季开花杜鹃古树离体培养及微芽嫁接技术方法,该技术具有以下优势:
(1)可培养出生长状况良好的嫁接苗,同时较好的节约了时间成本。
(2)采用本技术生产的杜鹃苗品质更优良,同时成活率更高,可提高产量,有效节约生产成本。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明方案的简要实施流程示意图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例,对本发明作进一步的详细描述。特别指出的是,以下实施例仅用于说明本发明,但不对本发明的范围进行限定。同样的,以下实施例仅为本发明的部分实施例而非全部实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例,都属于本发明保护的范围。
如图1所示,本方案杜鹃离体培养及微芽嫁接方法,其包括:
S1、选取杜鹃植株,对其取当年生长饱满的茎段作为外植体,然后对外植体进行清洁、消毒;
S2、将步骤S1处理后的外植体接种在芽诱导培养基中,然后以预设条件进行培养处理,使得外植体被诱导培养获得不定芽;
S3、将诱导培养得到的不定芽的芽分切成预设长度,再将其接种于增殖培养基中以预设条件培养,获得有效苗;
S4、将所选取杜鹃植株的种子进行预处理后,接种于芽诱导培养基中,然后在预设条件下培养,获得无菌砧木苗;
S5、利用嫁接针将有效苗嫁接在无菌砧木苗上,获得嫁接苗;
S6、按预设条件对嫁接苗进行培养,然后将培养获得的嫁接苗移栽入目标土壤中。
下面结合多个实施实例对本方案做进一步的阐述:
实施例1
本实施例原生弯蒴杜鹃离体培养及微芽嫁接方法,其包括:
S1、材料选取与消毒:取当年生长饱满茎段的原生弯蒴杜鹃为外植体,用流水冲洗外植体表面尘土后于饱和漂白粉上清液中浸泡10min,取出用自来水冲滴2h,双蒸水冲荡3次,然后将其置于超净工作台内,用体积分数为75%酒精消毒30s,5%次氯酸钠溶液处理10min,无菌水冲4遍,消毒滤纸吸干表面水分接种备用。
S2、芽诱导培养:诱导培养基经高温高压灭菌处理,将步骤S1中处理后的切成带腋芽长1.5cm茎段接种于其上;培养应遵循以下条件:调节培养室温度为(23℃),保持光照时间12h/d,光照强度为15001x,培养时长30d。
芽诱导培养基配方为:
ER+1.5mg/L 6-BA+0.5mg/L KT+0.3mg/LNAA+20g/L糖+6.5g/L琼脂+1.2g/L活性炭,pH5.6。
S3、增殖培养:将诱导培养得到不定芽的芽分切长度为3cm,接种于增殖培养基中培养,条件如下:保持光照时间12h/d,光照强度为20001x,培养时长25d。
增殖培养基配方为:
ER+2.0mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.lmg/LNAA+0.015mg/LTDZ+25g/L糖+6.5g/L琼脂。pH5.6
S4、无菌砧木苗的获取:将所选定的原生弯蒴杜鹃的种子用流水冲洗净后于饱和漂白粉上清液中浸泡10min,取出用自来水冲滴0.5h,双蒸水冲荡2次,在置于超净工作台中用体积分数为75%的酒精消毒30s,5%次氯酸钠溶液处理12min,使用无菌水冲3遍,消毒滤纸吸干表面水分备用;处理后的原生弯蒴杜鹃的种子接种于已高温高压灭菌处理后的芽诱导培养基上,培养应遵循以下条件:调节培养室温度为(23℃),保持光照时间12h/d,光照强度为15001x,培养时长30d,得到无菌砧木苗。
S5、嫁接操作:用嫁接针去除砧木苗真叶和生长点但不挖出苗株,左手持镊子轻用尖夹住固定砧木苗子叶节,右手使用嫁接针,贴于其中一片子叶基部靠内侧处向另一片子叶下方斜插进0.8cm,保持斜插原状暂不拔出嫁接针。嫁接针尖端不宜刺破胚轴的表皮,手指下压至有压力感即可;用刀片于目标子叶节下0.5cm处呈30°角斜向下方切割,切口长度在0.8cm为宜,再从背面不对称处以相同方法切一刀,处理下胚轴呈楔形;拔出嫁接针,将修剪得当的有效苗紧密插入孔中。
S6、培养定植:嫁接苗长出5片叶后移至自然光下炼苗10d,而后可移栽至经高压灭菌的培养土上,培养土是由河沙:黄土:蛭石:泥炭土按质量比1:1:1:2混合而成的。移栽步骤如下:先将已灭菌的培养土分装至各穴盘中,取出嫁接苗并清洗干净根部残留的培养基后,移栽入目标土壤中。为保持水分,应在穴盘上套塑料袋,并8d进行一次浇水;苗株生长稳定后可除去塑料袋。30d后,嫁接苗生长良好,可移至田间定植。
经统计,本实施例所获得嫁接苗成活率可达80%以上。
实施例2
本实施例茶绒杜鹃离体培养及微芽嫁接方法,其包括:
S1、材料选取与消毒:取当年生长饱满茎段的茶绒杜鹃为外植体,用流水冲洗外植体表面尘土后于饱和漂白粉上清液中浸泡10min,取出用自来水冲滴1h,双蒸水冲荡3次,然后将其置于超净工作台内,用体积分数为75%酒精消毒30s,5%次氯酸钠溶液处理13min,无菌水冲4遍,消毒滤纸吸干表面水分接种备用。
S2、芽诱导培养:诱导培养基经高温高压灭菌处理,将步骤S1中处理后的切成带腋芽长1.5cm茎段接种于其上;培养应遵循以下条件:调节培养室温度为(25℃),保持光照时间12h/d,光照强度为10001x,培养时长25d。
芽诱导培养基配方为:
ER+1.5mg/L 6-BA+0.5mg/L KT+0.3mg/LNAA+20g/L糖+6.5g/L琼脂+1.2g/L活性炭,pH5.6。
S3、增殖培养:将诱导培养得到不定芽的芽分切长度为2cm,接种于增殖培养基中培养,条件如下:保持光照时间12h/d,光照强度为15001x,培养时长25d。
增殖培养基配方为:
ER+2.0mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.lmg/LNAA+0.015mg/LTDZ+25g/L糖+6.5g/L琼脂。pH5.6
S4、无菌砧木苗的获取:将所选定的茶绒杜鹃的种子用流水冲洗净后于饱和漂白粉上清液中浸泡10min,取出用自来水冲滴0.5h,双蒸水冲荡2次,在超净工作台中用体积分数为75%的酒精消毒30s,5%次氯酸钠溶液处理12min,使用无菌水冲3遍,消毒滤纸吸干表面水分备用;处理后的茶绒杜鹃种子接种于已高温高压灭菌处理后的芽诱导培养基上,培养应遵循以下条件:调节培养室温度为(23±2℃),保持光照时间12h/d,光照强度为10001x,培养时长25d,得到无菌砧木苗。
S5、嫁接操作:用嫁接针去除砧木苗真叶和生长点但不挖出苗株,左手持镊子轻用尖夹住固定砧木苗子叶节,右手使用嫁接针,贴于其中一片子叶基部靠内侧处向另一片子叶下方斜插进0.5cm,保持斜插原状暂不拔出嫁接针。嫁接针尖端不宜刺破胚轴的表皮,手指下压至有压力感即可;用刀片于目标子叶节下0.5cm处呈30°角斜向下方切割,切口长度在0.5cm为宜,再从背面不对称处以相同方法切一刀,处理下胚轴呈楔形;拔出嫁接针,将修剪得当的有效苗紧密插入孔中。
S6、培养定植:嫁接苗长出4片叶后移至自然光下炼苗7d,而后可移栽至经高压灭菌的培养土上,培养土是由河沙:黄土:蛭石:泥炭土按质量比1:1:1:2混合而成的。移栽步骤如下:先将已灭菌的培养土分装至各穴盘中,取出嫁接苗并清洗干净根部残留的培养基后,移栽入目标土壤中。为保持水分,应在穴盘上套塑料袋,并5d进行一次浇水;苗株生长稳定后可除去塑料袋。20d后,嫁接苗生长良好,可移至田间定植。
经统计,本实施例所获得嫁接苗成活率可达80%以上。
实施例3
本实施例福建四季开花杜鹃古树离体培养及微芽嫁接方法,其包括:
S1、材料选取与消毒:取当年生长饱满茎段的福建四季开花杜鹃古树为外植体,用流水冲洗外植体表面尘土后于饱和漂白粉上清液中浸泡10min,取出用自来水冲滴2h,双蒸水冲荡3次,然后将其置超净工作台内,用体积分数为75%酒精消毒30s,5%次氯酸钠溶液处理13min,无菌水冲4遍,消毒滤纸吸干表面水分接种备用。
S2、芽诱导培养:诱导培养基经高温高压灭菌处理,将步骤S1中处理后的切成带腋芽长1.5cm茎段接种于其上;培养应遵循以下条件:调节培养室温度为(25℃),保持光照时间12h/d,光照强度为15001x,培养时长30d。
芽诱导培养基配方为:
ER+1.5mg/L 6-BA+0.5mg/L KT+0.3mg/LNAA+20g/L糖+6.5g/L琼脂+1.2g/L活性炭,pH5.6。
S3、增殖培养:将诱导培养得到不定芽的芽分切长度为3cm,接种于增殖培养基中培养,条件如下:保持光照时间12h/d,光照强度为20001x,培养时长25d。
增殖培养基配方为:
ER+2.0mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.lmg/LNAA+0.015mg/LTDZ+25g/L糖+6.5g/L琼脂,pH5.6。
S4、无菌砧木苗的获取:所选定的原生杜鹃用流水冲洗净后于饱和漂白粉上清液中浸泡10min,取出用自来水冲滴1h,双蒸水冲荡3次,超净工作台中用体积分数为75%的酒精消毒30s,5%次氯酸钠溶液处理13min,使用无菌水冲4遍,消毒滤纸吸干表面水分备用,处理后外植体接种于已高温高压灭菌处理后的芽诱导培养基上,培养应遵循以下条件:调节培养室温度为(25℃),保持光照时间12h/d,光照强度为15001x,培养时长30d,得到无菌砧木苗。
S5、嫁接操作:用嫁接针去除砧木苗真叶和生长点但不挖出苗株,左手持镊子轻用尖夹住固定砧木苗子叶节,右手使用嫁接针,贴于其中一片子叶基部靠内侧处向另一片子叶下方斜插进0.8cm,保持斜插原状暂不拔出嫁接针。嫁接针尖端不宜刺破胚轴的表皮,手指下压至有压力感即可;用刀片于目标子叶节下0.5cm处呈30°角斜向下方切割,切口长度在0.8cm为宜,再从背面不对称处以相同方法切一刀,处理下胚轴呈楔形;拔出嫁接针,将修剪得当的有效苗紧密插入孔中。
S6、培养定植:嫁接苗长出5片叶后移至自然光下炼苗10d,而后可移栽至经高压灭菌的培养土上,培养土是由河沙:黄土:蛭石:泥炭土按质量比1:1:1:2混合而成的。移栽步骤如下:先将已灭菌的培养土分装至各穴盘中,取出嫁接苗并清洗干净根部残留的培养基后,移栽入目标土壤中。为保持水分,应在穴盘上套塑料袋,并8d进行一次浇水;苗株生长稳定后可除去塑料袋。30d后,嫁接苗生长良好,可移至田间定植。
经统计,本实施例所获得嫁接苗成活率可达70%以上。
以上所述仅为本发明的部分实施例,并非因此限制本发明的保护范围,凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等效装置或等效流程变换,或直接或间接运用在其他相关的技术领域,均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (10)

1.一种杜鹃离体培养及微芽嫁接方法,其特征在于,其包括对杜鹃植株进行外植体移取,然后对外植体进行芽诱导和增殖培养后,获得有效苗,继而将有效苗嫁接在无菌砧木苗上并进行培养定植,最终将培养获得的嫁接苗移栽入目标土壤中。
2.如权利要求1所述的杜鹃离体培养及微芽嫁接方法,其特征在于,其包括:
S1、选取杜鹃植株,对其取当年生长饱满的茎段作为外植体,然后对外植体进行清洁、消毒;
S2、将步骤S1处理后的外植体接种在芽诱导培养基中,然后以预设条件进行培养处理,使得外植体被诱导培养获得不定芽;
S3、将诱导培养得到的不定芽的芽分切成预设长度,再将其接种于增殖培养基中以预设条件培养,获得有效苗;
S4、将所选取杜鹃植株的种子进行预处理后,接种于芽诱导培养基中,然后在预设条件下培养,获得无菌砧木苗;
S5、利用嫁接针将有效苗嫁接在无菌砧木苗上,获得嫁接苗;
S6、按预设条件对嫁接苗进行培养,然后将培养获得的嫁接苗移栽入目标土壤中。
3.如权利要求2所述的杜鹃离体培养及微芽嫁接方法,其特征在于,S1包括:选取杜鹃植株,然后对其取当年生长饱满茎段为外植体,用流水冲洗外植体表面尘土后,将其置于饱和漂白粉上清液中浸泡10min,再取出用自来水冲滴1~2h,双蒸水冲荡2~3次,再将其置于超净工作台内用体积分数为75%酒精消毒30s,5%次氯酸钠溶液处理10~13min,无菌水冲3~4遍,最后用消毒滤纸吸干表面水分后,作为接种备用。
4.如权利要求3所述的杜鹃离体培养及微芽嫁接方法,其特征在于,S2包括:将步骤S1中处理后的外植体切成带腋芽长为1.5cm茎段接种于经高温高压灭菌处理后的芽诱导培养基上,使得外植体被诱导培养获得不定芽;培养条件为:调节培养室温度为23±2℃,保持光照时间12h/d,光照强度介于1000~15001x,培养时长25~30d。
5.如权利要求4所述的杜鹃离体培养及微芽嫁接方法,其特征在于,S3包括:将S2诱导培养得到不定芽的芽分切长度为2~3cm,在将其接种于增殖培养基中培养,获得有效苗,增殖培养条件为:保持光照时间12h/d,光照强度介于1500~20001x,培养时长20~25d。
6.如权利要求5所述的杜鹃离体培养及微芽嫁接方法,其特征在于,S4包括:将所选取杜鹃植株的种子用流水冲洗净后,置于饱和漂白粉上清液中浸泡10min,再取出用自来水冲滴0.5~1h,双蒸水冲荡2~3次,然后在超净工作台中用体积分数为75%的酒精消毒30s,5%次氯酸钠溶液处理10~13min,使用无菌水冲3~4遍,再用消毒滤纸吸干表面水分;经处理后种子被接种于已高温高压灭菌处理后的芽诱导培养基上培养,获得无菌砧木苗,培养条件为:调节培养室温度为23±2℃,保持光照时间12h/d,光照强度介于1000~15001x,培养时长25~30d。
7.如权利要求6所述的杜鹃离体培养及微芽嫁接方法,其特征在于,S5包括:用嫁接针去除无菌砧木苗的真叶和生长点,但不挖出苗株,再持镊子轻用尖夹住固定砧木苗子叶节,使用嫁接针贴于其中一片子叶基部靠内侧处向另一片子叶下方斜插进0.5~0.8cm,保持斜插原状暂不拔出嫁接针,嫁接针尖端不宜刺破胚轴的表皮,将其下压至有压力感即可;再用刀片于目标子叶节下0.5cm处呈30°角斜向下方切割,切口长度为0.5~0.8cm,再从背面不对称处以相同方法切一刀,处理下胚轴呈楔形;最后拔出嫁接针,将修剪得当的有效苗紧密插入孔中,获得嫁接苗。
8.如权利要求7所述的杜鹃离体培养及微芽嫁接方法,其特征在于,S6包括:在嫁接苗长出4~5片叶后移至自然光下炼苗7~10d,而后可移栽至经高压灭菌的培养土上;移栽步骤如下:先将已灭菌的培养土分装至各穴盘中,取出嫁接苗并清洗干净根部残留的培养基后,移栽入目标土壤中;为保持水分,穴盘上套有塑料袋,且按3~8d的频率进行一次浇水;在嫁接苗苗株生长稳定后除去塑料袋,培养20~30d后,在嫁接苗生长状态符合预设条件时,将其移至田间定植。
9.如权利要求1至8之一所述的杜鹃离体培养及微芽嫁接方法,其特征在于,所述杜鹃植株为原生弯蒴杜鹃、茶绒杜鹃或福建四季开花杜鹃古树。
10.如权利要求9所述的杜鹃离体培养及微芽嫁接方法,其特征在于,
S2、S5中所述的芽诱导培养基的配方为:
ER+1.5mg/L 6-BA+0.5mg/L KT+0.3mg/LNAA+20g/L糖+6.5g/L琼脂+1.2g/L活性炭,其pH为5.6;
S3中,所述的增殖培养基的配方为:
ER+2.0mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.lmg/LNAA+0.015mg/LTDZ+25g/L糖+6.5g/L琼脂,其pH为5.6;
S6中,所述的培养土是由河沙:黄土:蛭石:泥炭土按质量比1:1:1:2混合而成的。
CN202210546685.4A 2022-05-19 2022-05-19 杜鹃离体培养及微芽嫁接方法 Pending CN114847162A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210546685.4A CN114847162A (zh) 2022-05-19 2022-05-19 杜鹃离体培养及微芽嫁接方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210546685.4A CN114847162A (zh) 2022-05-19 2022-05-19 杜鹃离体培养及微芽嫁接方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN114847162A true CN114847162A (zh) 2022-08-05

Family

ID=82639795

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210546685.4A Pending CN114847162A (zh) 2022-05-19 2022-05-19 杜鹃离体培养及微芽嫁接方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114847162A (zh)

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101292628A (zh) * 2008-06-11 2008-10-29 国家林业局泡桐研究开发中心 一种北美杜鹃花的组织培养方法
CN103371103A (zh) * 2013-07-30 2013-10-30 杭州植物园 一种马缨杜鹃组织培养快速繁殖方法
CN104054577A (zh) * 2014-07-04 2014-09-24 芜湖欧标农业发展有限公司 一种白花杜鹃组织培养的方法
CN104285819A (zh) * 2014-11-04 2015-01-21 中国科学院昆明植物研究所 一种滇南杜鹃的组培繁殖方法
CN104885942A (zh) * 2015-05-26 2015-09-09 福建农林大学 一种杜鹃花化学消毒组培方法
CN108739398A (zh) * 2018-06-22 2018-11-06 福建农林大学 一种优良番茄品种离体培养及微芽嫁接方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101292628A (zh) * 2008-06-11 2008-10-29 国家林业局泡桐研究开发中心 一种北美杜鹃花的组织培养方法
CN103371103A (zh) * 2013-07-30 2013-10-30 杭州植物园 一种马缨杜鹃组织培养快速繁殖方法
CN104054577A (zh) * 2014-07-04 2014-09-24 芜湖欧标农业发展有限公司 一种白花杜鹃组织培养的方法
CN104285819A (zh) * 2014-11-04 2015-01-21 中国科学院昆明植物研究所 一种滇南杜鹃的组培繁殖方法
CN104885942A (zh) * 2015-05-26 2015-09-09 福建农林大学 一种杜鹃花化学消毒组培方法
CN108739398A (zh) * 2018-06-22 2018-11-06 福建农林大学 一种优良番茄品种离体培养及微芽嫁接方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105475130A (zh) 一种红锥高效离体培养植株再生方法
CN103444552A (zh) 一种诱导茄子花药再生单倍体植株的方法
CN109220793B (zh) 一种蝴蝶兰新品种的选育方法
CN103461143B (zh) 一种油茶组织培养快速繁殖方法
CN102986535B (zh) 无籽刺梨种苗快速扩繁的方法
CN105613287A (zh) 一种法斗木莲组织快繁育苗方法
CN107568056A (zh) 一种快速选育苹果早花早果砧木的方法
CN113080063B (zh) 一种粗糠树组织培养快速生根的方法
CN105532467B (zh) 一种濒危羊踯躅离体组织培养繁殖与保存的方法
CN112715367B (zh) 一种利用硝酸镧进行毛梾组培继代增殖的方法
CN103477988A (zh) 轮叶蒲桃离体培养和快速繁殖的方法
CN108782247A (zh) 一种日本晚樱“御衣黄”品种的组织培养方法
CN112655553A (zh) 一种猫须草无菌短枝快速繁殖的方法
CN104221860A (zh) 一种紫珠的组织培养快速繁殖方法
CN101743908A (zh) 红花银桦组培快繁及栽培方法
CN103283504A (zh) 用于梨树多倍体试管苗试管外嫁接成苗的方法
CN105379621A (zh) 一种大岛樱成年优良单株“小乔”樱的高效离体植株再生方法
CN100391333C (zh) 安祖花无菌苗组织培养和试管苗炼苗移栽方法
CN105409779A (zh) 牛樟树组织培养快速繁殖的方法
CN103299902B (zh) 一种用于组织培养楝树幼苗的方法
CN108668898A (zh) 一种猴樟的组织培养方法
CN111202002B (zh) 一种赪桐的组培快繁方法
CN114847162A (zh) 杜鹃离体培养及微芽嫁接方法
CN103609442A (zh) 柳杉茎段组织培养获得再生植株的方法
CN109258463B (zh) 一种杏黄兜兰的无性繁殖方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20220805